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AUTOMATIZACIN

EN HEMATOLOGA

AUTOMATIZACION
Mecanizar todo o la mayora de los
pasos manuales en un proceso o en
todo el procedimiento
Es una solucin que combina varios procesos en un solo
sistema eficiente que elimina el riesgo de error asociado a la
operatividad humana. Las tareas intensivas en trabajo :
etiquetado, manejo, preparacin y almacenamiento de las
muestras, que se realizan utilizando numeroso personal, cada
uno de los cuales pueden introducir errores u otros
problemas, pueden ser fcilmente automatizables 1

JAMES,David Selecting appropiate automation for the lab IDVT Sep. 2007

PROCESO
Es un conjunto de actividades
que utiliza recursos para
transformar elementos de
entrada en bienes o servicios
capaces de satisfacer las
expectativas de distintas partes
interesadas: clientes externos,
clientes internos, accionistas,
comunidad, etctera.

PROCESO
PRINCIPALES RECURSOS
MANO DE OBRA: Protagonista de todo
proceso, por lo tanto sus actividades y
aptitudes influyen directamente en los
resultados o salidas del proceso.
MTODOS: Polticas, procedimientos,
normas e instrucciones que se emplean para
ejecutar un determinado trabajo.
MAQUINARIA O EQUIPO: Viene a ser el
elemento que complementa el esfuerzo del
personal en la agregacin de valor. Su
adecuada calibracin, correcto
mantenimiento y oportuno reemplazo
definirn apropiados niveles de precisin y
exactitud.

PROCESO
PRINCIPALES RECURSOS
MATERIALES O SUMINISTROS:
Entradas que sern
transformadas por un proceso
(materiales, partes en proceso y
la informacin).
MEDIO AMBIENTE: Condiciones
en las cuales se desarrolla un
trabajo: espacio, ventilacin,
seguridad, iluminacin, etctera.
MEDIOS DE CONTROL:
Instrumentos o recursos utilizados
para evaluar el cumplimiento de
los requisitos establecidos.

ENFOQUE BASADO EN PROCESOS

DIVISIONES DEL PROCESO


DE ANALISIS
ORDEN DE
ANALISIS

TOMA DE
MUESTRA

TRANSPORTE
DE LA
MUESTRA

RECEPCION
POR EL
LABORATORIO

MUESTRA PARA
ANALISIS
CONTROL DE
CALIDAD
ANALISIS

PREPARACION
DE LA
MUESTRA

EVALUACION DE
LOS RESULTADOS

EMISION
DE RESULTADOS

MANTENIMIENTO
Y/O REPARACION
DEL ANALIZADOR

FASE
PREANALITICA

MUESTRA PARA
ALMACENAMIENTO

FASE
ANALITICA

FASE
POSTANALITICA

CRITERIOS PARA EVALUAR LA


AUTOMATIZACIN
Complejidad del nivel hospitalario
Volumen de trabajo ( Rutina y Especiales )
Visin de futuro ( Perspectivas )
Infraestructura
Recursos Econmicos
Soporte Tcnico Garantizado

PORQU AUTOMATIZAR?
Reducir costos operativos
Obtener mayor eficiencia
Aumentar la productividad
Competir en un ambiente globalizado
Sobrevivir en el mercado

QU BUSCAN LOS
LABORATORIOS HOY?
Mejor productividad y mejor calidad
Flujo de muestras mas rpido y eficiente
Reduccin de costos

AUTOMATIZACIN
VENTAJAS
Incremento del nmero de pruebas realizado por
una persona en un perodo de tiempo
Minimiza las variaciones en los resultados
Minimiza errores de la parte manual (e.g.
pipeteo)
Usa menos muestra y reactivo por cada prueba

AUTOMATIZACIN
LIMITACIONES
Metodologa vara con el tipo de instrumento
Costo del equipo, mantenimiento, CC
Personal debe conocer operatividad y
cuidados de rutina

OBTENCIN DE LA MUESTRA
Sangre total con anticoagulante EDTA K2 (K3)en
tubo al vaco

ELEMENTOS CELULARES

PRINCIPIOS BSICOS
Impedancia electrnica
Radiofrecuencia
Dispersin ptica

IMPEDANCIA ELECTRNICA
(PRINCIPIO COULTER)
Electrodo interno
Vaco regulado

Cubeta
de conteo

Electrodo
externo

1 pulso =

Micro orificio

1 partcula
Flujo del diluyente

Dimetro apertura aprox. 4mm

DISCRIMINACION DE PULSOS
Seal clulas grandes

a = Ruido Elctrico
c
b = Discriminador bajo

c = Separacin de
clulas grandes y
pequeas

b
a
Seal clulas
pequeas

HISTOGRAMAS
Pilas: Clulas son
agrupadas con similar tamao
de pulso.

La Pila con el mayor nmero


de clulas es el 100% de altura
relativa.

Eje X = tamao celular

Eje Y= nmero de clulas


60 70 80 90 100 110 120

fl

RADIOFRECUENCIA
Conductividad (RF) proporcional
a la densidad interior de la clula
(grnulos y ncleo)

( impedance)

DISPERSIN PTICA

Desva la luz
Cel. en solucin corren a travs de una
celda de cuarzo
Enfoque hidrodinmico (lquido
envolvente, flujo laminar)
Enfoque del lser
Anlisis por computadora de los grupos
(citogramas)

ABBOTT - MAPSS
(MULTI ANGLE POLARIZED SCATTER
SEPARATION)
Lser ARGON

Granulaciones PMT1
Eosinfilos

90 ,Depolarizado
90, Polarizado
PMT2

Complejidad
del citoplasma

7
0

Complejidad del ncleo


Numeracin
Tamao

VLVULA DE
SEGMENTACIN
Parte sup.
(fija)

Parte Int.
(movible)

Parte Inf.
(fija)

Pipeta

VLVULA DE
SEGMENTACIN
Parte sup.
(fija)

Parte Int.
(movible)

Parte Inf.
(fija)

Pipeta

VLVULA DE
SEGMENTACIN
Parte sup.
(fija)

Parte Int.
(movible)

Parte Inf.
(fija)

Pipeta

SEPARACIN DE LA
MUESTRA
12l (WBC)

6 l (Hb)
4 l (RBC)

DILUCIN - RBC

Cmara de mezcla
4 l (RBC)

Bomba del diluyente

DILUCIN WBC - HGB


Celda HGB
Canal WBC

6 l (HGB)
12l (WBC)

Bomba de HGB
Bomba del Diluyente

2,0 ml

Cellpack

Mixing- 40 l
Chamber
1:500
Stromatolyser-3WP
Sample Rotor Valve
(SRV)

Sulfolyser

RBC Channel
1:25.000

Cellpack
MixingChamber
1:500
1,0 ml

Stromatolyser-3WP

0,5 ml

Sample Rotor Valve


(SRV)

Sulfolyser

6 l

WBC Channel
1:250

Cellpack
MixingChamber
1:500
Stromatolyser-3WP
Sample Rotor Valve
(SRV)
3 l
1,0 ml

Sulfolyser

0,5 ml

Hgb Photometer
1:500

HISTOGRAMA WBC

Clulas clasificadas
como: Neutrofilos,
Linfocitos y Mixtas
(M, E y B)

LD

T1

T2

UD

Clulas mixtas
(Monos, Eos y
Basos)

Altura relativa

Discriminadores
posicionados en el
pico y valle para
separar las clulas

Clulas grandes
(neutrfilos)

Clulas pequeas
(linfocitos)

MEDICIN DE LA HEMOGLOBINA
RBC son lisados (amonio cuaternario, ferricianuro, etc.), permite la
liberacin de Hb
CianMetHb
Una parte de la dilucin de los WBC pasa a una cubeta
espectrofotomtrica para la medicin a 540 nm
Existen otros mtodos libres de cianuro, donde ocurre lsis de los
RBCs seguido de la formacin de un complejo imidazol-hemoglobina
que posee un pico de absorcin a 540 nm.

Foto-detector

Fuente luminosa LED

C. de
medicin

Filtro

FUENTES DE ERROR
Aglutininas fras:
Bajos contajes de RBC y altos MCV pueden ser causados
por las aglutininas de los hemates. Si estn presentes,
tambin el hematocrito y los MCHCs pueden ser tambin
incorrectos.
Pueden presentarse en la mononucleosis infecciosas y en las
infecciones por mycoplasma (neumona).
Si se observan RBC aglutinados en el frotis de sangre
perifricas, calentar la muestra a 37C, mezclarla y analizarla
mientras est caliente.

RBC fragmentados o microcticos:


Pueden causar conteos bajos de RBC y pueden dar
un aviso en el conteo de las plaquetas puesto que se
vuelven muy cercanas al tamao de las plaquetas y
pueden originar un histograma plaquetario anormal.

Acmulo de plaquetas y satelitosis:


Esto causa un conteo falsamente disminuido de las
plaquetas y se puede confirmar revisando el frotis.
Siempre tratar de examinar el borde del frotis cuand
se tienen contajes bajos de plaquetas.

Plaquetas gigantes:
Se aproximan al tamao de un hemate.
Pueden causar que la cola derecha del
histograma permanezca elevada y pueda
verse a la izquierda del histograma de los
RBC.

RBC Nucleados:
Estos pueden interferir con los WBC en
algunos instrumentos y ser contados como
leucocitos(linfocitos)

FUENTES DE ERROR EN LA MEDICIN DE


LA HEMOGLOBINA
Cualquier elemento que pueda causar turbidez
e interferir con el mtodo espectrofotomtrico.
Como ejemplos: Alto contaje de WBC, lipemia y
hemoglobinas resistentes a la lisis (Hb S y C)

HISTOGRAMA RBC
Histograma normal de 36- 360 fl

(24- 36 fl ) Aviso puede deberse:


1- RBC fragmentos
2- WBC fragmentos
3- Plaquetas gigantes
4- Microcitos
Desviacin a la derecha:
- Leucemia
- Anemia Macroctica
- A. Megaloblastica
Desviacin a la izquierda:
- Anemia microctica
Bimodal
- Aglutininas fras
- Anemia Megaloblstica con transfusin.
- A. Sideroblstica.
Trimodal
- Anemia con transfusin.

HISTOGRAMA PLAQUETAS
Histograma normal de 2-20 fl.

0-2 fL
Burbujas de aire
Polvo
Ruido elctrico
> 20 fL
Microcitos
Scishtocitos
Fragmentos WBC
Plaquetas gigantes
Aglutinacin

Canal WBC/Baso

Canal Diff

Baso
WBC

RBC ghost
Side scatter

Lymph
Fluorescence

Forward scatter

Mono
Neut + Baso

RBC ghost

Side scatter

Luz dispersada frontal


( Volumen Celular )

Luz dispersada lateral


(Estructura celular interna)

Eo

(informacin del RNA/ DNA)

FLUORESCENCIA

Canal DIFF

DISPERSIN LATERAL
(Estructura Celular Interna)

LINFOCITOS
MARCAJE DE CD4/CD8

BECKMAN COULTER

Principios de Medicin
Medicin directa:
RBC Impedancia
WBC - Impedancia, enfoque
hidrodinmico
Plaq. Impedancia (2-20 fl)
Hb Cianometamoglobina modificado
(525 nm)
MCV media del volumen de RBC
(histograma)
Medicin indirecta:
Hct, MCHC, y MCH (calculados)
RDW y MPV (CV de sus respectivos
histogramas)
WBC Diferencial
VCS volumen, conductividad,
dispersin
Reticulocitos
Coloracin Supravital (nuevo azul de
metileno)
VCS

SYSMEX

Principios de Medicin

Medicin directa:
RBC Impedancia, enfoque
hidrodinmico
WBC Impedancia, enfoque
hidrodinamico
Platelets Impedancia, enfoque
hidrodinamico
Hb SLS-Hb (555 nm)
(oxihemoglobina + sodio lauril sulfato)
Ht Deteccin de pulsos acumulativos

Medicin indirecta:
MCV, MCHC y MCH (calculados)
RDW y MPV(CV de sus respectivos
histogramas)
WBC Diferencial
Deteccin con DC/RF
Emplea lsis diferencial
Reticulocitos
Colorante Supravital (Aramina O)
Deteccin Fluorescente

ABBOTT

Principios de Medicin

Medicin directa:
RBC Impedancia
WBC Dispersin ptica (primaria),
Impedancia (secondaria)
Plaquetas Impedancia (2-30 fl)
Hb Cianomethemoglobina
modificada (540 nm)
MCV volumen medio de RBC
(histograma)

Medicin Indirecta:
Hct, MCHC y MCH (calculados)
RDW (valor relativo equivalente al CV)
WBC Diferencial
MAPSS

Reticulocitos
Coloracin proprietaria
Dispersin Multingulo
Deteccin Fluorescente

SIEMENS

Principios de Medicin

Medicin directa:
RBC Enfoque hjdrodinmico, lser de bajo
y alto ngulo
WBC - Enfoque hjdrodinmico, dispersin
ptica y absorpcin
Platequetas Enfoque hidrodinmico, lser
de ngulo bajo y alto(1-60 fL)
Hb Cianomethemoglobina modificada
(546 nm)
MCV volumen medio de RBC (histograma)
Medicin indirecta:
Ht, MCHC y MCH (calculados)
RDW y MPV (CV de sus respectivos
histogramas)
WBC Diferential
VCS volumen, conductividad, dispersin
Reticulocitos
Coloracin Supravital (Oxazina 750)
Dispersin ptica de bajo y alto ngulo

Sysmex XT-4100i

Pentra 120 Retic Horiba-ABX


ADVIA 2120
SIEMENS
CELL-DYN 3700
CELL-DYN RUBY
Abbott Laboratories

LH 780
Beckman Coulter

LH 1500 Series Automation Beckman Coulter

CELL-DYN WorkCell Abbott Laboratories

MANTENIMIENTO

Limpieza diaria
Conteo del lecturas de fondo
Chequeos electrnicos
Comparar los modos abierto y cerrado
(usando muestra normal)
Correr controles (dentro de lo lmites
especificados)

ASEGURAR FUNCIONAMIENTO
ADECUADO
1. Chequear los contenedores de reactivo:
Verificar cantidad suficiente
Verificar fecha de vencimiento
No deben visualizarse precipitados, ni
turbidez ni mostrar un color inusual
Conecciones adecuadas entre el
instrumento y los contendedores

ASEGURAR FUNCIONAMIENTO
ADECUADO
2. Chequear contenedor de desecho:
Capacidad suficiente
Conecciones adecuadas
3. Realizar inicio diario
4. Verificar que exista una aceptable:
Reproducibilidad
Arrastre
Resultados de control

AUTOMATIZACIN
EN HEMOSTASIA

HEMOSTASIA = BALANCE
plaquetas
Coagulacin

Fibrinlisis

Organismo

Trombosis

Hemorragia

FASES DE LA HEMOSTASIA
Hemostasia primaria
formacin de un trombo plaquetario

Coagulacin o hemostasia secundaria


formacin de un trombo de fibrina

Fibrinlisis
rotura del coagulo de fibrina

CASCADA DE LA COAGULACIN
FXI
Factores procoagulantes
I
FXI
FXIIa

Factores anticoagulantes

FXIa

AT

FIX
FIXa
FIXa
FVIIIa
FX
FT
FVIIa

PCa
PS

FXa
FVa
TFPI
FII

TROMBINA
Fibringeno

Fibrina

Si hay dficit, HEMORRAGIA

Si hay dficit, TROMBOSIS

OBTENCIN DE LA MUESTRA
Plasma con anticoagulante citrato trisdico
Na3C6H5O7 . 2H20 al 0.109 mol/L (3.2%)
Sangre venosa recolectada en un tubo
con citrato de sodio a una proporcin de 1:10
( 1 parte de citrato y 9 partes de sangre).
Tiempo de compresin no mayor a 60 seg. Un
tiempo mayor puede elevar los valores de
fibringeno.

ALMACENAMIENTO DE LAS
MUESTRAS
Las muestras deben mantenerse a temperatura
ambiente (18 25C). El almacenamiento en hielo
o en la nevera puede provocar la activacin de los
factores VII y XII.
Estabilidad de las muestras (18 25C) :

TP : 8 horas
APTT : 4 horas (terapia con heparina 2 horas)
Factores : 4 a 8 horas

CONGELAMIENTO DE LAS
MUESTRAS
Los plasmas libres de plaquetas se pueden
alicuotar y congelar.
El congelamiento se debe realizar tan pronto
como sea posible, de preferencia a 80C;
es suficiente a 20C si es por un perodo
corto ( 6 meses PT y APTT; 3 meses TT y
Factores).
Las muestras se deben descongelar a 37 C
por 15 minutos y slo una vez.

PRUEBAS DE LABORATORIO
RUTINA

ESPECIALES

PT
APTT
T. TROMBINA
FIBRINGENO

FACTORES
TROMBOSIS
LA AC. ANTICARDIOLIPINA
PROTENA C
PROTENA S
APC R
ANTITROMBINA
FIBRINLISIS
DMERO D
PLASMINGENO
TPA (Activ.Plasm.Tisular)
PAI 1 (Inhib.Act. Plasm.)

MTODOS DE DETECCIN

MTODO MANUAL

Deteccin por aparicin del cogulo

MTODO MECNICO

Mtodo del garfio de Koller

MTODO MECNICO

Mtodo KC Amelung
Billa de metal estacionaria

MTODO
FOTOMTRICO

SISTEMA DE DETECCIN BASADO


EN LA VISCOSIDAD

La deteccin est basada en el incremento de la viscosidad del


plasma analizado.
El incremento de la viscosidad es medido a travs del movimiento
de la billa de metal

Cuando se aade el reactivo,


inmediatamente se inicia la deteccin.

El cronmetro inicia la medicin cuando la


billa inicia la oscilacin de derecha a izquierda.

Cuando el cogulo aparece, la viscosidad se incrementa


y la amplitud disminuye.

MTODO
Coagulomtrico: formacin de fibrina
Fibringeno ----------------> Fibrina
TROMBINA

Tiempo de Coagulacin : Tiempo empleado


para detectar la formacin de fibrina.

turbidimetra

ANLISIS CENTRFUGO
Pipeteo automtico de
muestra + reactivo.
Mezcla por centrifugacin
Nefelometra hasta 1200
lecturas por cada
determinacin (ej. TP)

Sistema Centrfugo

Rotor

Muestra
Reactivo

MTODO
Cromognico: incremento de color
ENZIMA

Peptido-pNa ---------------> Peptido + pNa


(Sust. Cromognico)

Color

Sustratos Cromognicos

Luz transmitida

180
Fuente de luz
405 nm

Cubeta de reaccin

Detector

MTODO
Inmunolgico: incremento de la turbidez
Plasma + reactivo de ltex--> aglutinacin
Reaccin del antgeno presente en el plasma
con anticuerpo (unido a las partculas de
ltex) especfico al analito a estudiar.

turbidimetra

Reaccin inmunolgica
Luz transmitida

180
Fuente de luz
671/405 nm

Cubeta de reaccin

Detector

INMUNOTURBIDIMETRIA
INMUNOENSAYO TURBIDIMTRICO
Partculas de Latex con
anticuerpo sensible al
Dmero-D

Las partculas de ltex se aglutinan, la


suspensin tiene mas absorbancia

Dmero-D

Dmero-D +

CURVA DE REACCIN
INMUNOTURBIDIMTRICA
Turbidez
(mAbs)
Final
Delta
Inicial
Tiempo
Medida de la turbidez inicial y de la turbidez final
producida por la aglutinacin de las partculas de
latex

SIEMENS BCS XP

STA COMPACT

STA COMPACT

STA COMPACT

ACL ELITE PRO

Fludrica
Botella de 1 L de solucin de
lavado/referencia con sensor nivel y
medicin de lquido en tiempo real.
2 dilutores de pistn para dispensado
y aspiracin de muestras/reactivos.

Conexiones

Stockyard

Hematologa

T- Line
Inlet

Destapador
Centrifuga
Outlet

MUCHAS GRACIAS !
jcaceres1@terra.com.pe
jcacerestorres@yahoo.com