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MICROORGANISMOS

CMO MONTAR UNA COLUMNA DE WINOGRADSKY?


Los trabajos de Louis Pasteur y Robert Koch en la segunda mitad del siglo XIX se basaron
tcnicamente en la obtencin de cultivos bacterianos puros. Ms all de ser
fundamentales desde el punto de vista conceptual, esos trabajos posibilitaron grandes
avances en las reas de medicina e industria. En otra lnea de investigacin, Martinus
Willen Beijerinck y Sergei Winogradsky estudiaron las comunidades microbianas en sus
ambientes naturales. Los estudios ecolgicos permitieron comprender las caractersticas
metablicas de esas comunidades y esclarecer las etapas del ciclo de algunos elementos
(carbono, nitrgeno, azufre).
La construccin de una columna de Winogradsky es un mtodo simple de estudio de la
diversidad microbiana mediante la seleccin de microorganismos con determinadas
caractersticas metablicas. Consiste en enriquecer una muestra de suelo con nutrientes,
de modo de favorecer el crecimiento de algunas comunidades.
Existen numerosas variaciones y combinaciones posibles en la eleccin de las fuentes de
enriquecimiento:

1. Fuentes de carbono:

Materiales que liberan carbono rpidamente tales como carbonato de sodio,


bicarbonato de sodio o carbonato de calcio (tiza molida).

Materiales de origen vegetal que liberan carbono ms lentamente, tales como


csped, heno, agujas de pino, papel de peridico, papel higinico, almidn de
maz, avena, aserrn, etc.

2. Fuentes de azufre: Azufre, sulfato de calcio, sulfato de magnesio, huevos cocidos,


queso, etc.
3. Fuentes de hierro: Limadura de hierro, cualquier comprimido que contenga hierro.
4. Fuentes de fsforo y potasio: Oro verde o cualquier otro fertilizante para plantas con
K2HPO4 (Proporcin: media cucharada de t/l).
5. Fuentes de vitaminas: cualquier producto multivitamnico.

Una modificacin parcial o total del modo de enriquecimiento o del tratamiento permite
seleccionar microorganismos con caractersticas especficas: bacterias del hierro (hierro),
bacterias del ciclo del nitrgeno (fertilizante en exceso), bacterias termfilas (incubacin
a temperatura elevada), bacterias halfilas (sal), bacterias acidfilas (vinagre), bacterias
basfilas (fermento qumico), etc.

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Mara Antonia Malajovich / Guas de actividades


Biotecnologa: enseanza y divulgacin
http://www.bteduc.bio.br

MICROORGANISMOS / MONTAJE DE UMA COLUMNA DE WINOGRADSKY

Las variaciones parecen ser infinitas. Hay quien coloca coca-cola en el medio y quien
agrega un trozo de cscara de fruta para identificar los microorganismos capaces de
colonizarlas.
Dnde est la dimensin tecnolgica? El mtodo se aplica en la bsqueda de bacterias
capaces de degradar algn contaminante. En muestras de suelo enriquecidas con dicha
sustancia, slo crecern aquellas que son capaces de metabolizarla. En un contexto
biotecnolgico del mtodo, estaremos en el camino de la biorremediacin.

BIBLIOGRAFA

MADIGAN, M.T. et al. Microbiologia de Brock. So Paulo, Pearson Education do Brasil, 2004. Existen
innumerables y buenos protocolos en Internet, siendo mis preferidos:
Building a Winogradsky Column. An Educator Guide with Activities in Astrobiology.
http://quest.nasa.gov/projects/astrobiology/fieldwork/lessons/Winogradsky_5_8.pdf
Deacon, J. The Microbial World: Winogradsky column: perpetual life in a tube.
http://www.biology.ed.ac.uk/research/groups/jdeacon/microbes/winograd.htm
La colonne de Winogradsky. Illustration de la photosynthse microbienne et du cycle du soufre.
http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/Winogradsky.html

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ACTIVIDAD PRCTICA
La columna de Winogradsky es una forma simple de seleccionar y estudiar los microorganismos
existentes en cualquier ambiente. La columna puede ser construida a partir de lodo o suelo de
cualquier origen, con agua proveniente de la misma fuente o de una fuente diferente.

OBJETIVO
Construir una columna de Winogradsky para observar los microorganismos del ambiente.

MATERIALES
1 vasija, botellas de plstico transparentes de 2 l, 1 embudo, 1 vaso de plstico, lodo o muestra de
tierra del lugar analizado, agua del mismo lugar, una fuente de celulosa (10 g de papel higinico),
una fuente de fsforo y potasio (1 cucharada tamao t de fertilizante para plantas por litro), una
fuente de CO2 (5 g de tiza molida), una fuente de azufre (5 g de yema de huevo cocido) y,
eventualmente, una fuente de hierro, trozos de tela para cubrir las botellas, elsticos.

PROCEDIMENTO
1. Colocar en un recipiente cinco vasos de lodo, arena o tierra; retirar todas las piedras, ramas u
hojas.
2. Diluir una cucharada tamao t de fertilizante en un volumen equivalente de agua del mismo
sitio.
3. Preparar con ambas partes una mezcla de consistencia cremosa, suficientemente fluida para
pasar por el embudo.
4. Colocar en el fondo de la garrafa 10 g de la fuente de celulosa, 5 g de la fuente de CO 2, 5 g de
la fuente de azufre y, eventualmente, la fuente de hierro.
5. Agregar un poco de la mezcla. Eliminar el aire, batiendo con fuerza para asentar la mezcla.
6. Colocar otras capas de lodo, asentndolas como antes, hasta que la botella est 90% llena. Si
fuera necesario, eliminar las burbujas existentes revolviendo con una varilla.
7. Esperar 30 minutos. La capa de agua en la parte superior deber medir por lo menos dos cm de
altura. Agregar agua, si fuera necesario. Considere que la proporcin de las capas inferior de
lodo y superior de agua pueden variar.
8. Cubrir la botella con un pao y cerrar con un elstico.
9. Incubar en un lugar donde reciba suficiente luz, pero no sol directo.
10. Observar semanalmente las variaciones, y agregar agua cuando sea necesario para que la
columna no se seque.

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NUESTRO COMENTARIO
La seleccin de diferentes tipos de microorganismos se consigue mediante el agregado de algunos
compuestos (orgnicos e inorgnicos) y el ajuste del pH. La iluminacin estimula el crecimiento de
fottrofos (aerobios y anaerobios), que se desarrollan formando un biofilm, entre la pared de la
botella y el medio. Cerca del tope de la columna crecen los organismos aerobios y microaerfilos,
en el fondo se multiplican los anaerobios (Clostridium, bacterias metanognicas).
Los materiales y el procedimiento descriptos en el protocolo permiten estudiar los organismos
involucrados en el ciclo del azufre (medio enriquecido con celulosa, azufre y calcio), como se
observa en la figura siguiente.
Figura. Columnas de Winogradsky montadas con suelo rico en hierro del NEDEA-ORT (Petrpolis) y
con arena de las playas de Urca (Ro de Janeiro) y de Angra dos Reis (RJ).

Columnas de
Winogradsky

Dos muestras del NEDEA/ORT (Petrpolis)

Dos muestras de playa (RJ)

CMO MONTAR UN PROYECTO?


Comparar el desarrollo de las comunidades bacterianas de una muestra en columnas enriquecidas
con diferentes cantidades de sulfato de calcio.
Comparar el desarrollo de las comunidades bacterianas de varias muestras en columnas
enriquecidas del mismo modo.
Comparar el desarrollo de las comunidades bacterianas de una muestra en columnas enriquecidas
del mismo modo, incubadas en diferentes condiciones de iluminacin (o de temperatura).

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