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Diagnostico

La toxoplasmosis es una enfermedad de difcil diagnstico parasitolgico, pues no es


fcil de mostrar el agente etiolgico y establecer la relacin entre infeccin y
enfermedad. Clnicamente se debe diferenciar de varias entidades, de acuerdo a la
localizacin de las lesiones predominantes.
En la toxoplasmosis aguda se requiere hacer un diagnstico diferencial con cualquier
sndrome febril con o sin exantema, especialmente con aquellos que presentan
adenopatas, como mononucleosis infecciosa, por tener cuadros clnicos que se
confunden. Tambin se pueden comportar como una fiebre tifoidea o una brucelosis. La
forma ganglionar semeja con frecuencia linfomas incipientes. En los casos severos que
presentan encefalitis, hepatitis, neumonitis o miocarditis, se deben descartar otras
etiologas que tengan estos mismos cuadros clnicos. Cuando existe compromiso ocular,
es necesario considerar todas las causas de uvetis endgena, en especial tuberculosis,
histoplasmosis, sfilis y citomegalovirus.

La toxoplasmosis congnita presenta una amplia gama de manifestaciones clnicas,


segn la intensidad de la infeccin, el momento de su aparicin y las secuelas. En el
recin nacido se deben descartar enfermedades como sfilis, sepsis, eritroblastosis fetal,
infecciones por virus de inclusin citomeglica y otras entidades. En todo nio con
encefalitis es necesario pensar en toxoplasmosis.

El laboratorio es bsico para definir la etiologa de la enfermedad. El diagnstico


de infeccin se puede establecer mediante las pruebas serolgicas; para
comprobar la enfermedad se requiere, adems, el criterio clnico.
Muchas veces es difcil separar lo que es infeccin por Toxoplasma y presencia
de enfermedad. Existen varios procedimientos para demostrar el parsito en
forma directa y otros de tipo indirecto para la bsqueda de anticuerpos.

Demostracin directa del parsito


Aunque la observacin del parsito es lo ideal, slo es posible hacerlo en un reducido
nmero de casos. Este puede encontrarse en LCR, ganglios linfticos, mdula sea y
ocasionalmente en otros tejidos.

Cuando se obtiene material por puncin, se busca el parsito en fresco o coloreado. En


los tejidos, las caractersticas morfolgicas son difciles de precisar, pues el estudio
histopatolgico muestra formas redondeadas o partes del parsito, segn sea su posicin
y se requiere mucho tiempo, experiencia y cortes seriados para poder identificarlo; por
este motivo ocurren errores de diagnstico en favor o en contra del parsito.
Se confunden sus estructuras con otros protozoos, hongos, plenes, etc. En los ganglios
se parecen a las clulas reticulares con inclusiones. Los quistes son de reconocimiento
ms difcil, se requiere diferenciarlos de pseudoquistes de T. cruzi, nidos de Leishmania,
quistes de Sarcocystis, formas de Encephalitozoon, acmulos de hongos del gnero
Candida e Histoplasma, etc. La coloracin con Giemsa o hematoxilina-eosina ayuda a la
diferenciacin en cortes histolgicos, as como la inmunofluorescencia directa y la
inmunoperoxidasa.
Inoculaciones
El parsito se puede aislar de sangre, LCR, espulo y de los tejidos infectados, tales
como ganglios linfticos, msculos, placenta, ojos enucleados y visceras. El
procedimiento indicado para el aislamiento es la inoculacin al ratn.

Los tejidos se pueden homogeneizar o digerir mediante tripsina al 1%. Este


material se lava con solucin salina isotnica antes de ser inyectado al animal.
Los lquidos, especialmente LCR, se inoculan directamente. La cantidad de
material es de 0.5 ml para introducir por va intraperitoneal.
Despus de la primera semana se estudia el exudado perifoneal para buscar el
parsito, generalmente intracelular. Algunas veces se requieren pases ciegos con
el exudado, para posteriormente encontrar Toxoplasma. Se recomienda tratar el
material para inocular, con penicilina y estreptomicina, para evitar peritonitis
bacteriana y muerte del animal, antes de cumplir el tiempo de reproduccin de
los parsitos. Previamente a las inoculaciones, es importante asegurarse
serolgicamente que los animales de laboratorio estn libres de esta infeccin.

Mtodos inmunolgicos
La demostracin indirecta de T. gondii se hace por la bsqueda de anticuerpos. Su
presencia indica que hay infeccin, pero no necesariamente enfermedad. Los
anticuerpos detectados son principalmente IgM e IgG, os primeros indican infeccin
reciente. Algunos autores afirman que la presencia de anticuerpos IgA pueden indicar
una infeccin reciente o aguda. La interpretacin de los ttulos de anticuerpos se debe
hacer frente al cuadro clnico y la historia del paciente.

El solo hecho de tener un resultado positivo de su serologa, no indica que el


paciente tenga la enferme-dad y el hecho de tener anticuerpos, no es criterio
suficiente para hacer un tratamiento. Muchas veces los ttulos de las reacciones
no guardan relacin con la gravedad de la enfermedad y el estudio serolgico
indica nicamente que la persona ha tenido o tiene el parsito.

Cuando clnicamente se sospecha una toxoplasmosis, el seguimiento serolgico puede


ayudar a la aclaracin del diagnstico. Si inicialmente existe sospecha clnica de
enfermedad y se encuentran ttulos bajos, la reaccin se debe repetir con intervalos de 2
a 4 semanas, para observar las modificaciones en los ttulos. Cuan-do los ttulos estn
muy elevados, existe mayor sospecha de una infeccin activa o de enferme-dad y se
deben tener criterios clnicos para su evaluacin y tratamiento. Las pruebas serolgicas
ms utilizadas son las siguientes:
a) Inmunofluorescencia indirecta (IFI).
Esta prueba se comporta en forma similar a la de Sabin y Feldman, con alta
concordancia en cuanto a su sensibilidad y especificidad. En la prctica se prefiere por
su fcil ejecucin, porque no requiere trabajar con parsitos vivos, ni con factor
accesorio que es difcil de conseguir. Para la inmunofluorescencia se utilizan taquizotos
muertos por formol o liofilizados. Los anticuerpos de la clase IgG presentes en el suero
del paciente se adhieren a la pared del parsito, donde se detectan por medio de
gammaglobulina anti-humana conjugada con isotiocianato de fluorescena.
Esta reaccin se emplea para el seguimiento de los pacientes y detecta anticuerpos
despus de 8 a 10 das de haberse iniciado la infeccin, se elevan rpidamente y
decrecen despus de 8 a 12 meses, pero queda positiva permanentemente y es frecuente
encontrar ttulos estables por mucho tiempo, adems existen infecciones que
evolucionan con ttulos bajos.
Un ttulo de 1:64 se interpreta como infeccin pasada o muy reciente. Reacciones
alrededor de 1:256 se consideran como ttulos intermedios y pueden indicar infecciones
estabilizadas o recientes. Los ttulos de 1:1.024 o mayores, sugieren infeccin activa.
Esta prueba serolgica confirma la actividad de la infeccin cuando aumentan en 2 a 4
semanas de intervalo. Se consideran modificaciones significativas cuando el ttulo se
eleva 4 veces o ms por encima del anterior. Un mismo suero en distintas
determinaciones, con la misma prueba, puede presentar oscilaciones en su ttulo, pero
stas no deben exceder en ms de una dilucin. Despus del tratamiento de un paciente
los ttulos bajan muy lentamente; en algunos casos pueden subir despus del
tratamiento, pero luego descienden. La eficacia del tratamiento no se puede medir
serolgicamente sino por la clnica.

En la coriorretinitis se tienen los mismos criterios serolgicos ya mencionados; sin


embargo, pueden existir lesiones con ttulos bajos. Algunos autores le asignan gran
importancia a la determinacin simultnea de los ttulos de anti-cuerpos en el LCR o en
el humor acuoso y en el suero. En los casos de toxoplasmosis ocular, la concentracin
de anticuerpos es mayor en el humor acuoso que en la sangre.
b) Prueba de ELISA.
(Enzyme-linked immunosorbent-assay). Es una prueba muy sensible y requiere una
buena estandarizacin. En algunos casos los anticuerpos IgG se correlacionan con los
detectados por IFI, S abin y Feldman y la hemaglutinacin indirecta, pero en otros no se
tiene buena correlacin. Se considera que una prueba de ELISA con menos de 10
unidades internacionales (UI) por ml es negativa; de 10 a 300 Ul/ml indica infeccin
pasada o en evolucin, y ms de 300 Ul/ml se refiere a enfermedad activa o reciente.

La prueba de ELISA-IgM es positiva en los casos de infeccin reciente. El mtodo de


captura de IgM o del doble anticuerpo es ms sensible y especfico. Este procedimiento
es un anticuerpo anti-IgM humano que recubre los pozos del microplato, para capturar
la IgM del suero del paciente. La cantidad de antgeno toxoplsmico se mide
inmunoqumicamente, lo cual constitu-ye el mtodo IgM-ELISA de doble capa o IgMELISA reversa. Si se usa aglutinacin de los parsitos se llama ISAGA. La prueba IgMISAGA es ms sensible y detecta anticuerpos IgM especficos ms precozmente que
IgM-ELISA. Estas pruebas de captura tienen menos reacciones falsas positivas o
negativas. La captura de IgM da positiva por ms tiempo que los otros mtodos y
detecta este tipo de anticuerpos hasta por 2 5 aos.
Utilizando la prueba de ELISA se hace la deteccin de IgA especfica. La DS- IgAELISA es ms sensible que la IgM-ELISA para detectar infeccin congnita en el feto,
c) Prueba de hemaglutinacin indirecta (HIA).
Mediante un antgeno soluble ligado a eritrocitos de carnero tanizados, se detectan
anticuerpos circulantes evidenciados por la aglutinacin de los eritrocitos preparados.
La prueba es muy sensible y da ttulos elevados; se considera tambin especfica aunque

puede dar algunas reacciones cruzadas, especialmente cuando se estudian sueros de


animales
Prueba de Sabin y Feldman (S-F). Se llama tambin prueba del colorante. Es un mtodo
clsico y especfico, pero tiene dificultades tcnicas, por lo cual se ha limitado su uso.
Como antgeno se utilizan parsitos vivos obtenidos de exudado peritoneal de ratones,
con 2 a 3 das de inoculacin. El suero del paciente se diluye progresivamente para
poder determinar el ttulo de anticuerpos.

La reaccin antgeno-anticuerpo se lleva a cabo en unin del complemento srico


humano, lo que se ha llamado factor accesorio, que se obtiene de personas sin
anticuerpos para Toxoplasma. Al hacer las pruebas y cuando no hay anticuerpos, los
parsitos se tien con azul de metileno, los cuales se observan al microscopio corriente
o con contraste de fase. Los toxoplasmas alterados por la accin de los anticuerpos no
toman el colorante; si el 50% o ms parsitos se encuentran sin teir, la reaccin se
considera positiva. Se informa como ttulo, la ltima dilucin del suero en la cual se
encuentra la reaccin positiva. En infecciones activas los ttulos estn por encima de
1:1.024 y pueden llegar hasta 1:64.000 o mayores.
La prueba aparece positiva desde los prime-ros das de iniciada la infeccin, mide
principal-mente anticuerpos IgG y permanece as durante toda la vida del paciente, con
oscilaciones en su ttulo que decrece lentamente despus del trata-miento. No se
encuentran reacciones cruzadas con otros protozoos o agentes infecciosos, por lo cual se
considera de alta especificidad.
e) Reaccin de fijacin del complemento.
Esta prueba es especfica pero poco sensible. Se utiliza un antgeno soluble, los ttulos
de anticuerpos son generalmente bajos y pocas ve-ces se elevan por encima de 1:256.
La reaccin tiene un valor limitado y se hace positiva ms tardamente que las pruebas
anteriores, general-mente aparece de 3 a 4 semanas despus de
iniciada la infeccin. Se vuelve negativa precoz-mente, entre 6 y 9 meses. Se pueden
encontrar reacciones falsas positivas en algunos casos.