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SET DE EXPERIMENTOS DE COLORACIÓN PARA BACILOSCOPIA

Integrantes:

Mirko Párraga
Rodrigo Loza

Tema: Tinción Ziehl Neelsen
Fecha de Realización: 22/06/2016

Introducción
La tinción de Ziehl Neelsen fue desarrollada inicialmente por Paul Ehrlich para poner
de manifiesto la presencia de los bacilos causantes de la tuberculosis en muestras
clínicas de pacientes.
Esta técnica es capaz de diferenciar los bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).

La técnica de ZN fuerza la penetración de la fucsina básica en la pared celular
mediante la acción combinada del fenol y el calor, que aumentan la fluidez de la
capa de ácidos micólicos: el calor “derrite” el componente ceroso y el fenol actúa a
modo de disolvente, permitiendo el paso del colorante básico que se une a los
ácidos micólicos con carga negativa. Cuando cesa la aplicación de calor y/o se
elimina el exceso de fenol mediante un lavado con agua, la pared recupera su
consistencia cerosa, pero las moléculas de fucsina quedan atrapadas en su espesor.
Con la coloración de Ziehl Neelsen se observan como bastoncitos delgados,
ligeramente curvos, rojo fucsia, destacándose claramente contra el fondo azul.
Contextualización del problema
El problema a tratar en esta guía es el siguiente: una vez realizada la tinción ZN en
una placa se presenta la dificultad de tener un fondo de imagen (al ser observada la
placa en el microscopio) que varía en aspecto de acuerdo a diferentes factores
como ser el grosor de la muestra de esputo, la concentración de los reactivos al
realizar la tinción, etc. Esto se considera un problema, especialmente para el
diagnóstico computarizado de estas imágenes, ya que crea cierta dispersión o

.En caso de derrame del colorante.incertidumbre con respecto a la claridad que se puede obtener como producto de esta técnica y tiene incidencia en la efectividad del resultado del diagnóstico si es que la imagen es muy distorsionada. . reponer la fucsina. permanganato de potasio y rojo de tiazina) con el fin de encontrar qué combinación o magnitud de estos permite tener una imagen clara y de mínima distorsión para un mejor procesamiento computarizado de la misma.Colocar sobre el soporte las láminas fijadas conservando el orden numérico con el extendido hacia arriba y manteniendo una separación de al menos 1cm entre ellas. Objetivos El objetivo principal de esta guía es realizar la tinción de Ziehl Neelsen haciendo variar parámetros como ser pH de la muestra de esputo. concentración de reactivos. no dejar secar el preparado.Cubrir totalmente la superficie del extendido con fucsina básica fenicada recién filtrada. Dispensar el colorante con suavidad. Desarrollo A continuación se detalla el procedimiento original para realizar la tinción Ziehl Neelsen: · Coloración: . hasta que observe que se desprenden los primeros vapores blancos. colorante secundario o de fondo (azul de metileno.Con la llama de un hisopo embebido en alcohol calentar suavemente por debajo de los extendidos. No calentar con mechero. Si el número de baciloscopia a colorear es pequeño. . . sin salpicar y sin tocar con el gotero o con el embudo los extendidos. .Filtrar la cantidad de fucsina necesaria para las tinciones a realizar en la jornada.En el término de aproximadamente cinco minutos calentar tres veces hasta emisión de vapores. esto es suficiente para que la fucsina penetre adecuadamente en el bacilo y se fije a sus lípidos.Disponer dos varillas de vidrio en forma paralela. . se puede filtrar la fucsina directamente cuando se la deposita sobre el extendido a través de un pequeño embudo con papel de filtro. con movimientos de vaivén. procedencia de reactivos. . No hervir la fucsina porque la pared de los bacilos puede destruirse y colorearse mal. una sobre un soporte dentro del lavabo/pileta de coloración. a una distancia de aproximadamente 5 cm entre una y otra.

dejarla actuar entre uno y tres minutos y enjuagar nuevamente. levantar cuidadosamente la lámina portaobjetos desde el extremo más cercano al operador. Si no es así volver a numerarlas. con un frasco o un grifo. · Decoloración: .Cubrir la totalidad del extendido con solución decolorante y dejar actuar aproximadamente 3 minutos. Girar el extendido y lavar con cuidado también la parte posterior.Verificar que el extendido se ha decolorado (las partes más gruesas del extendido a lo sumo conservan un leve tinte rosado). apoyándolas en posición vertical en un soporte sobre un papel absorbente. Lavar muy suave y cuidadosamente la superficie eliminando totalmente la solución de fucsina.Dejar actuar durante un minuto. .Observar si las láminas conservan la numeración clara y visible.Eliminar el exceso de agua inclinando el portaobjetos · Coloración de fondo: .Inclinar el portaobjetos para eliminar el exceso de agua y así evitar diluir los reactivos que se utilizarán a continuación.Dejar secar las láminas a temperatura ambiente. Si se observan cúmulos rojos o coloración rosada intensa. . Enjuagar con abundante agua a baja presión. No apoyar papel absorbente sobre el extendido. .Cubrir todo el extendido con solución de azul de metileno. . .. . .Con una pinza.Enjuagar con abundante agua a baja presión.Enjuagar las láminas en ambas caras con agua a baja presión y limpiar parte inferior con un algodón si ha quedado coloreada. Para la experimentación se harán variar los parámetros de este procedimiento mencionados en la sección de objetivos por medio de diferentes pruebas . . volver a cubrir con solución decolorante.

Resultados pH de la muestra: Concentración de reactivos: Procedencia de reactivos: Colorantes secundarios: .

com/2011/06/metodo-de-coloracionde-ziehl-neelsen_03.pdf .elitechgroup.html http://www.com/wpcontent/uploads/2015/01/aerospray_tb_series_21.Bibliografía http://demostraciondelbacilodekoch.blogspot.