You are on page 1of 149

TBC extra-pulmonar: Utilidad

Clnica de las pruebas de


sensibilidad
Juan Carlos Gmez de la Torre Pretell
Medicina de Enfermedades Infecciosas y Tropicales
Patologa Clnica-Biologa Molecular
Master of Buissnes Administration
HCFAP-Laboratorios ROE
jgomez@labroe.com

Caso Clnico
Mujer de 41 aos
Enfermera de profesin
Derrame pleural
Toracentesis (12/7/15)

Caso Clnico
Biopsia Pleural (16/7/205)

Caso Clnico
BAAR Esputo Negativos
Dx: TBC Pleural BAAR(-) PCR en Tejido Positivo y con mutaciones de
resistencia a RIFAMPICINA

MDR?????

Caso Clnico
Nueva Biopsia Pleural para SEEGENE y Genexpert
SEEGENE

: NEGATIVO

GENEXPERT: NEGATIVO

NO ES TBC PLEURAL????
FALSO POSITIVO DEL PRIMERO????

Caso Clnico
Cultivo de colonia crece a los 40 das, se realizan pruebas de
sensibilidad y se confirma TBC

Pleural MDR

Ya haba empezado Tto para MDR antes de


las pruebas de sensibilidad.

Diagnostico de TBC Extrapulmonar

Mtodos Directos
Cultivo convencional-PPP
MGIT
Mtodos Moleculares

Diagnostico de TBC Extrapulmonar

Mtodos Directos
Cultivo convencional
MGIT
Sistema Genexpert
Sistema Genotype
Sistema TOCE

Mtodos Moleculares

Que se necesita?
Mtodo rpido
Sencillo
Sensible
Reproducible
Sin Falsos Positivos/negativos
Costo-Rentable
Que aporte en las decisiones mdicas.

Genoma de Mycobacterium tuberculosis

1 Cromosoma

4,419,977 pares de bases

4 084 genes

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db
=genome&Cmd=ShowDetailView&TermToSea
rch=21081&window=12310&begin=3811097

87 Mutaciones
27 Aminoacidos

Regin determinante de la resistencia a Rifampicina del gen rpoB


de Mycobacterium tuberculosis

Abebe G; Tuberculosis drug resistance testing by molecular methods: Opportunities and challenges in resource limited settings; Journal of Microbiological Methods 84 (2011) 155160

INDIA 149 CEPAS

516(11.5%)+526(22%)+531(59%)=92,5%

Turkia 174 cepas

68,8%
Zhenhua
Yanga,T, Riza
Durmazb, Dong
Yanga, Selami
Gunalb, Lixin
Zhanga,
Betsy Foxmana,
Ahmet Sanicc,
Carl F. Marrsa,
Article in press

41,2%

87,5%

PERU 29 CEPAS

Escalante, Ramaswamy, Sanabria et al. Genotypic characterization of drug-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates from Peru Tubercle and Lung Disease (1998) 79(2), 111118

Mtodos Moleculares Diagnsticos

WHO. Global Tuberculosis Report 2015; 20th Edition, 2015

Kits Comerciales
Roche COBAS Amplicor MTB test
GenProbe Amplified M. tuberculosis Direct test (AMTD)
BD ProbeTec-ET
Hain GenoType
Mycobacteria Direct assay (GTMD)
Roche COBAS TaqMan MTB (CTM) test
Cepheid Xpert MTB test
SEEGENE

Stephen D Lawn; Advances in tuberculosis diagnostics: the Xpert MTB/RIF assay and future prospects for a point-of-care test; Lancet Infect Dis 2013; 13: 34961

PCR

Karan K. Sra, MD,a Gisela Torres, MD, Molecular diagnosis of infectious diseases in dermatology, Journal of American Academy of Dermatology NOVEMBER 2005-749:765

Real Time PCR

GeneXpert MTB/RIF:
-Sistema completamente automatizado basado en cartuchos
Montaje de la prueba: 15 minutos
-Extraccin, Amplificacin y Deteccin del gen de inters
Duracin mxima: 1.30 horas
Interpretacin de resultados
-Un cartucho = una prueba/paciente
-Sistema modular de 1 a 16 posiciones: hasta 16 pruebas
distintas simultneas

PAGE | 18

Genetica de Resistencia a Rifampicina; M. tuberculosis

Xpert MTB/RIF; ensayo de Molecular Beacon

A
53-

D
-3
-5

rpoB gene

5 Sondas para M TB
Las sondas no hibridizan con secuencias
mutantes

Molecular
Beacon

1 Sonda para Control de proceso (B. globigii)


Deteccion simultnea de 6 fluorocromos

gen
Hybrid

PAGE | 20

Versiones Genexpert
G1: Umbral Delta Ciclo <3.5
G2: Umbral Delta Ciclo >3.5
G3 : Umbral Delta Ciclo >3.5
G4: Cambio de Probe B

SENSIBILIDAD

ESPECIFICIDAD

Revision of Automated real-time nucleic acid amplification technology for rapid and simultaneous detection of tuberculosis and rifampicin resistance: Xpert MTB/RIF system. Policy statement.
Geneva, World Health Organization, 2011

Deteccion de todas las Mutaciones Comunes en rpoB

MOTTs y Xpert MTB/RIF

Caso Clnico
85 year old woman with severe, necrotizing acute pneumonia, with suspected
TBC with 2 Acid-Alcohol resistant bacilus in 100 fields at microscopy. They
request a MTB/RIF GeneXpert in my laboratory and we saw an amplification of
one of the probes.

Results reported as negative by the software for not meeting criteria, but
we perform real time with light cycler for atypical mycobacterium and we
detect genome of atypical mycobacterium

CT: 36

Sistema GeneXpert
Infecciosas
Mycobacterium tuberculosis +
Resistencia a Rifampicina
Clostridium difficile
MRSA
Influenza A, H1N1,B
Streptococco Grupo B

No Infecciosas
Factor V-Factor II
BCR/ABL

Curva de Amplificacin

MTB Positivo Mediano, Rif Resistencia NO DETECTADA


PAGE | 29

MTB Positivo Bajo, Rif Resistencia DETECTADA

Curva de Amplificacin TB positivo/Rif resistente


C

D
-3
-5

53PAGE | 30

Curva de Amplificacin TB no detectado

PAGE | 31

Caso Clnico

D
-3
-5

53B

http://www.who.int/tb/laboratory/en/-15/3/16

2014

Summary of WHOs 2013 policy


recommendations
Xpert MTB/RIF should be used rather than conventional microscopy, culture
and DST as the initial diagnostic test in adults suspected of having MDR-TB or
HIV-associated TB (strong recommendation, high-quality evidence).
Xpert MTB/RIF should be used rather than conventional microscopy, culture
and DST as the initial diagnostic test in children suspected of having MDR-TB
or HIV-associated TB (strong recommendation, very low-quality evidence).
Xpert MTB/RIF may be used rather than conventional microscopy and culture
as the initial diagnostic test in all adults suspected of having TB (conditional
recommendation acknowledging resource implications, high-quality
evidence).
Xpert MTB/RIF implementation manual; Technical and operational how-to: practical considerations; WHO 2014

Summary of WHOs 2013 policy


recommendations
Xpert MTB/RIF may be used rather than conventional microscopy and culture as
the initial diagnostic test in all children suspected of having TB (conditional
recommendation acknowledging resource implications, very low-quality
evidence).
Xpert MTB/RIF may be used as a follow-on test to microscopy in adults
suspected of having TB who are not at risk of MDR-TB or HIV-associated TB,
especially when further testing of smear-negative specimens is necessary
(conditional recommendation acknowledging resource implications, high-quality
evidence).

Xpert MTB/RIF implementation manual; Technical and operational how-to: practical considerations; WHO 2014

Situacin Clnica

Nro. de
Pacientes(Nro de
Estudios)

Sensibilidad

Especificidad

Gold Std.

Cultivo

Ref

Boehme C et al;
NEJM:2010

Sospecha de TBCTBC-MDR

1730

72.5%: (1)ZN(-) C(+)


90.2%:2) ZN(-) C(+)
92.2%:C(+)

Sospecha de TBC

6673

99%: ZN(+)
80%: ZN(-)
91%:(1) C(+)

98.4% (RDR)

Boehme C et al.
Lancet;2011

Diagnostico Inicial

9008 (22)

88%(IC:84-92)

99%(IC:98-99)

Expert Group
Meeting report

ZN(-)

7151(23)

68% (IC:61-74%),

99% (IC:98-99%)

Expert Group Meeting


report

ZN(+)

1952 (23)

98% (IC:97-99%)

HIV(+)

1789(7)

79% (CI:70-86%)

79% (IC:70-86%)

Expert Group Meeting


report

RIF Resist

555/2624(17)
2414 (24)

95% (IC:90-97%)

98% (IC:97-99%)

Expert Group Meeting


report

TBC vs NTM

2626 (14)(180)

Expert Group Meeting


report

Expert Group Meeting


report

Situacin Clnica
TBC Extrapulmonar
en Adultos y Nios

Nro. de Pacientes

Sensibilidad

Especificidad

5922 (22)

Tejido de Ndulos linfticos o Aspirados(849(14)) 84.9% (IC,72.1-92.4%)

Gold Std.

Ref

Cultivo

Expert Group
Meeting report

98.7%

Cultivo

Expert Group
Meeting report

Jugo Gastrico (1258(12))

83.8% (IC, 65.9-93.2%)

98.7%

Cultivo

Expert Group
Meeting report

Otros Tejidos (699(12))

81.2% (IC67.7-89.9%)

98.7%

Cultivo

Expert Group
Meeting report

CSF (709 (16))

79.5% (IC, 62.0-90.2%)

98.7%

Cultivo

Expert Group
Meeting report

Liquido Pleural (1385(17))

43.7% (IC, 24.8-64.7%)

98.7%

Cultivo

Expert Group
Meeting report

98%

Cultivo

Expert Group
Meeting report

TBC Infantil

(esputo inducido
Lavado Gastrico

2603(13)

66% (IC, 52-77%)


66% (IC, 51-81%)

2009-2011

Muestras Procesadas para deteccin de Mycobacterium


tuberculosis por GeneXpert en Laboratorios ROE (N=2,466)

Pulmonar
45%

Extrapulmonar
55%

Gmez de la Torre JC, Anlisis descriptivo y valor diagnstico de GeneXpert MTB7RIF en muestras procesadas en Laboratorios ROE-Lima 2012-2016;(Artculo en prensa)

Frecuencia de Positividad en las muestras procesadas


(N=2,464)

7%

17%
93%

83%
NEGATIVO
POSITIVO

Sangre
6%

jugo gastrico
1%
mama
2%

cerebro
biopsia
0%
3%

ojo
2%

liquido pericardico
1%

liquido seminal
1%

Mdula Osea
0%
ganglio
LCR

absceso

ganglio
1%

liquido Ascitico
orina
Sangre

orina
13%

absceso
abseso

absceso paravertebral
mama
absceso
1%

liquido Ascitico
3%

jugo gastrico
abseso
0%

biopsia
Extrapulmonar
LCR
854
64%

Extrapulmonar

cerebro
ojo
liquido pericardico
liquido seminal
Mdula Osea

TIPO DE MUESTRA
TOTAL GENERAL
JUGO GASTRICO
GANGLIO
ABSCESO PARAVERTEBRAL
ESPUTO
ABSCESO
BIOPSIA
BAL
ASPIRADO BRONQUIAL
(EN BLANCO)
DESCONOCIDO
LIQUIDO PERICARDICO
LQUIDO PLEURAL
LCR
LIQUIDO ASCITICO
ORINA

NEGATIVO

POSITIVO

Total general

% Positivos

2272
6
8
4
318
8
33
296
108
102
21
11
111
800
42
170

289
4
5
2
87
2
8
71
20
10
2
1
10
53
2
8

2561
10
13
6
405
10
41
367
128
112
23
12
121
853
44
178

11%
40%
38%
33%
21%
20%
20%
19%
16%
9%
9%
8%
8%
6%
5%
4%

FRECUENCIA ABSOLUTA DE MUESTRAS CON PRESENCIA DE


MUTACIONES EN RPOB
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0

Gmez de la Torre JC, Anlisis descriptivo y valor diagnstico de GeneXpert MTB7RIF en muestras procesadas en Laboratorios ROE-Lima 2012-2016;(Artculo en prensa)

Genexpert

Pulmonares(n=232)
Cultivo
Positivo
Negativo
Positivo
36
6
Negativo
1
189
Total
37
195

Total
42
190
232

Sensibilidad
Especificidad
VPP
VPN

97%
97%
86%
99%

Sensibilidad
Especificidad
VPP
VPN

100%
96%
75%
100%

* 01 Mycobacterium no tuberculoso

Extra Pulmonares(n=78)

Genexpert

Positivo
Negativo
Total

Cultivo
Positivo
Negativo
9
3
0
66
9
69

Total
12
66
78

Gmez de la Torre JC, Anlisis descriptivo y valor diagnstico de GeneXpert MTB7RIF en muestras procesadas en Laboratorios ROE-Lima 2012-2016;(Artculo en prensa)

Pulmonares(n=229)
GeneXpert
Positivo
BAAR

Negativo

Total

Sensibilidad

56%

Especificidad

100%

Positivo

20

20

VPP

100%

Negativo
Total

16
36

193
193

209
229

VPN

92%

Sensibilidad

50%

Especificidad

100%

Extra Pulmonares(n=45)
GeneXpert
Positivo Negativo
BAAR

Total

Positivo

VPP

100%

Negativo
Total

3
6

39
39

42
45

VPN

93%

Gmez de la Torre JC, Anlisis descriptivo y valor diagnstico de GeneXpert MTB7RIF en muestras procesadas en Laboratorios ROE-Lima 2012-2016;(Artculo en prensa)

RIF RESISTENTE

Ao

TOTAL

% POSITIVIDAD

% DEL TOTAL

% DE LOS
POSITIVOS

2012

193

12%

2%

13%

2013

754

10%

1%

15%

2014

655

9%

2%

18%

2015

785

9%

2%

16%

2016

175

14%

4%

29%

TOTAL

2562

10%

2%

17%

Porcentaje de Resistencia a Rifampicina en muestras Positivas


para Mycobactyerium tuberculosis 2012-2016
35%
30%
25%
20%
15%
10%
5%

2012

2013

2014

2015

0%
2016

DISTRITO DE PROCEDENCIA DE PACIENTES PARA ESTUDIO MOLECULAR


DE MYCOBACYTERIUM TUBERCULOSIS 2012-2016
CERRO
JOSE
CARMEN
MARIANO
YANAHUARA
COLORADO
LUIS
CAYMA
BUSTAMANTE
DEMELGAR
LA LEGUA Y
LA
AREQUIPA
PERLA
INDEPENDENCIA
SAN
LUIS
BREA
BELLAVISTA
NULL
0%
0%
REYNOSO
0%
RIVERO
0%
1%
RIMAC 1%1%
1%1%
SURQUILLO
1%1%
0%
0%
EL CARABAYLLO
AGUSTINO
1%
LINCE 1%1%
1%
VENTANILLA
1%
SANTA ANITA
1%
CHORRILLOS
1%
VILLA MARIA DEL
1% TRIUNFO
1%
VILLA EL SALVADOR
1%
MAGDALENA DEL MAR
LA VICTORIA2%
COMAS2%
LOS2%
OLIVOS

LIMA
33%

2% LIBRE
PUEBLO
2% DE MIRAFLORES
SAN JUAN
2%
ATE
2%
SAN MIGUEL
2%
SAN ISIDRO
2%
JESUS MARIA
3%
SAN JUAN DE LURIGANCHO
3%
SAN BORJA
4%

SANTIAGO DE SURCO
7%

CALLAO
4%

LA MOLINA
4%
SAN MARTIN DE PORRES
MIRAFLORES
4%
4%

Gmez de la Torre JC, Anlisis descriptivo y valor diagnstico de GeneXpert MTB7RIF en muestras procesadas en Laboratorios ROE-Lima 2012-2016;(Artculo en prensa)

DISTRITO DE PROCEDENCIA DE PACIENTES POSITIVOS PARA


MYCOBACYTERIUM TUBERCULOSIS 2012-2016
CHORRILLOS
BARRANCO
INDEPENDENCIA
JACOBO
CUSCO
HUARAZ
ICA
JULIACA
HUNTER
ALTO
AREQUIPA
ANCON
ALEGRE
SANSELVA
ISIDRO
SACHACA
CAYMA
VENTANILLA
RIMAC
BELLAVISTA
VILLA MARIA
DEL TRIUNFO
PUEBLO LIBRE
LINCE
EL AGUSTINO
BREA
LOS OLIVOS
ATE

LIMA

VILLA EL SALVADOR
LA VICTORIA
CARABAYLLO
SANTA ANITA
COMAS
MIRAFLORES
JESUS MARIA
SANTIAGO DE SURCO

SAN JUAN DE MIRAFLORES


MAGDALENA DEL MAR
SAN MIGUEL

CALLAO

SAN MARTIN DE PORRES


SAN BORJA
LA MOLINA
SAN JUAN DE LURIGANCHO

Gmez de la Torre JC, Anlisis descriptivo y valor diagnstico de GeneXpert MTB7RIF en muestras procesadas en Laboratorios ROE-Lima 2012-2016;(Artculo en prensa)

DISTRITO DE PROCEDENCIA DE PACIENTES POSITIVOS A MUTACIONES


EN GEN RPOB PARA MYCOBACYTERIUM TUBERCULOSIS 2012-2016
VILLA MARIA
DEL TRIUNFO
SAN
DE PORRES
SAN JUAN
DEMARTIN
LURIGANCHO
SAN BORJA
RIMAC
MARIANO MELGAR

LIMA

INDEPENDENCIA
CAYMA
ANCON
SAN MIGUEL

SAN JUAN DE MIRAFLORES

SANTIAGO DE SURCO

PUEBLO LIBRE

LOS OLIVOS

ATE

LA MOLINA

BREA
EL AGUSTINO

CALLAO
COMAS

CARABAYLLO

Gmez de la Torre JC, Anlisis descriptivo y valor diagnstico de GeneXpert MTB7RIF en muestras procesadas en Laboratorios ROE-Lima 2012-2016;(Artculo en prensa)

GeneXpert MTB/RIF para seguimiento

Friedrich; Assessment of the sensitivity and specifi city of Xpert MTB/RIF assay as an early sputum biomarker of response to tuberculosis treatment; Lancet Respir Med 2013; 1: 46270

Sensibilidad = 160 bacterias/ml

GenoType MTBDRplus

GenoType MTBDRsl

GenoType Mycobacterium CM/AS

GenoType MTBC


GenoType

Mycobacteria Direct

GenoType LepraeDR

GenotypeMTBDRplus en el Per

LUIS ASENCIOS; PRUEBA MOLECULAR GENOTYPE MTBDRplus, UNA ALTERNATIVA PARA LA DETECCIN RPIDA DE TUBERCULOSIS MULTIDROGORRESISTENTE; REV PERU MED EXP SALUD PUBLICA. 2012;29(1):92-98

Meta anlisis - 2003

Olga L. Sarmiento, Assessment by Meta-Analysis of PCR for Diagnosis of Smear-Negative Pulmonary TuberculosisJOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, July 2003, p. 32333240 Vol. 41, No. 7

GENOTYPE MTBDR
RIFAMPICINA

Bwanga ; Direct susceptibility testing for multi drug resistant tuberculosis: a meta-analysis.; BMC Infect Dis. 2009 May 20;9:67

ISONIACIDA

GENOTYPE MTBDRplus
RIFAMPICINA

Bwanga ; Direct susceptibility testing for multi drug resistant tuberculosis: a meta-analysis.; BMC Infect Dis. 2009 May 20;9:67

ISONIACIDA

Yunting Gu; Xpert MTB/RIF and GenoType MTBDRplus assays for the rapid diagnosis of bone and joint tuberculosis; International Journal of Infectious Diseases 36 (2015) 2730

Genotype MTDR en muestras extrapulmonares

Sputum
Tracheal secretion
bronchoalveolar
lavage fluid (n=66)
pleural fluid (n=4),
Lymph node (n= 12), gastric
lavage fluid (n=11),
cerebrospinal/synovial
fluid/urine (n= 6), and
tissue biopsy samples
(n=7).

Bang D; Rapid genotypic detection of rifampin- and isoniazid-resistant Mycobacterium tuberculosis directly in clinical specimens. J Clin Microbiol. 2006 Jul;44(7):2605-8.

BK(+)

BK(-)

Genotype MDR

GenXpert

Genotype
negativo a MTB

Genotype
Tipificacion de
Mycobacterias
atipicas

Tratamiento de
monoresistencia

Mono
resistente

Genotype MDR
(+)

GenXpert

GenXpert
(-)

(+)

Genotype
XDR

Tratamiento MDR hasta que la


prueba convencianal confirme
monoresistencia o MDR

Genotype

I(Resistente)
R(Resitente)

Genotype
XDR

I(Resistente)
R(Sensible)

I(Sensible)
R(Sensible)

I(Sensible)
R(Resistente)

Caso Clinico
Paciente Varon de 23 aos
Inicia Tto Esquema I por TBC pulmonar
2do mes de tto persiste BAAR + con evolucin radiolgica trpida
Se decide hacer mtodos moleculares

Geno Type MTBDRlus Ver2


BK(-)

TECNOLOGA SEEGENE

Principales Caractersticas de
la Tecnologa de Seegene
1. Ms de 50plex en PCR convencional o de punto final.

DPOTM
TOCETM
mTOCETM

2. Se amplifica de manera eficiente y equitativa todos los targets.

1.

Ms de 20plex en PCR en tiempo real.

2.

Tan sensible como una simple PCR en tiempo real (Uniplex).

1.

Detecta ms de 20 mutaciones en un PCR en tiempo real.

2.

Lo suficientemente sensible para detectar un target que se


encuentre en menos de ~0,1%.

Principio de la Tecnologa DPOTM


DPO es un nuevo concepto en el diseo de primers que es estructural y
funcionalmente diferente de los primers convencionales para PCR.

Unin de
Polideoxiinosina

ADN molde

DPO (Primer Dual de


Oligonucletidos)

Sitio Target

Principio de la Tecnologa DPOTM


Primer Primer Dual
El brazo 5, que es el ms largo, preferentemente se une al ADN molde
y se inicia la hibridacin estable.

Segundo Primer Dual


El brazo 3, que es el ms corto, se une selectivamente al sitio objetivo y
permite que se produzca la elongacin.

Aumenta la especificidad para la secuencia de inters

Principio de la Tecnologa DPOTM

Aunque el largo brazo 5' se una un sitio no objetivo, debido a la termodinmica,


la porcin 3' se resiste a la unin no especfica bloqueando efectivamente la
elongacin.

Debido a las limitaciones termodinmicas, el brazo 3 por s solo no puede


unirse al target a la temperatura de hibridacin del ensayo.

Eliminacin de primers no especficos

Principio de la Tecnologa TOCETM


Porcin marcada
ADN molde

(Molde artificial)

Duplex Catcher es independiente del target amplicon,


conduciendo a una consistente Tm.

Beneficios de TOCETM
Porcin marcada
ADN molde

Un Tm pre-determinado (o controlada) permite la deteccin de


mltiples targets en un solo canal

mTOCETM Discriminacin a partir de una


base
Pitcher especfico
para el mutante

Target
mutante

Catcher

Target
silvestre

Pitcher especfico
para el mutante

Catcher

Sitio de
mutacin

Resumen de
la
Tecnologa
TOCE

DPOTM permite una alta PCR Multiplex.


TOCETM permite una alta deteccin de
mltiples targets en PCR en tiempo real.
qTOCETM permite una alta cuantificacin
mltiple en una PCR en tiempo real.
mTOCETM permite una alta deteccin de
mutaciones puntuales en una PCR en
tiempo real.

ANYPLEX II MTB/MDR/XDR

SEEGENE

ANLISIS DEL VISUALIZADOR SEEGENE

Matabane MM; Performance evaluation of three commercial molecular assays for the detection of Mycobacterium tuberculosis from clinical specimens in a high TB-HIV-burden setting; BMC Infect Dis. 2015 Nov 9;15:508

Matabane MM; Performance evaluation of three commercial molecular assays for the detection of Mycobacterium tuberculosis from clinical specimens in a high TB-HIV-burden setting; BMC Infect Dis. 2015 Nov 9;15:508

CASO CLINICO-IPBM
DETECCION DE REGIONES IS6110 PARA EL DIAGNOSTICO DE COMPLEJO
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

200 pb
163 pb

Lader

Control -

Paciente BK-

Control +

100 pb

.
Christian Baldeviano V1; Neyda Quispe T1; Csar Bonilla A2; Dauma Gastiaburu3; Jos Pro C3; Luis F. LlanosZavalaga1. Perfiles genticos (RFLP-IS6110) y resistencia a
drogas en aislamientos de M. tuberculosis de pacientes internados en un hospital referencial del Callao, Per, Rev. per. med. exp. salud
publica v.20 n.2 Lima abr./jun. 2003

Diagnstico Molecular en tejidos embebidos


en parafina

PCR en Tejidos
Granulomas:
Sarcoidosis
Sifilis
Lepra
Enf. Crohn
Artritis Reumatoidea
LES
Pneumoconiosis

Kiran Chawla,PCR for M. tuberculosis in tissue samples, J Infect Developing Countries 2009; 3(2)83-87.

Factor de Inhibidores

Sabine Hofmann-Thiel, Evaluation of the hyplex TBC PCR test for detection of Mycobacterium tuberculosis complex in clinical samples, BMC Microbiology 2010, 10:95

Laboratorio ROE-IPBM

Deteccin Molecular de SI IS6110


Procedimiento

Nro. de pasos

Nro. de Reactivos

Extraccin de DNA

16

Preparacin del Mster


Mix

10

Amplificacin y deteccin

Electroforesis

17

52

17

TOTAL

Fuente: BM-ME-05 Deteccin Molecular del Complejo Mycobacterium tuberculosis por amplificacin de la secuencia
IS6110 Rev 00

Deteccin Molecular de SI IS6110


Preparacin del Mster Mix

Amplificacin y deteccin
Extraccin de DNA

Electroforesis

Deteccin Molecular de SI IS6110


CV Personal:
Licenciada en Biologa
Magister en Biologa Molecular
Magister en Gentica Humana
Doctora en Ciencias
Astronauta

Caso Clnico
10 aos de edad
Hermana de Pte de 14 aos con
TBC Pulmonar con mala
evolucin al tto
Bx:Tejido Insuficiente

Instituto Peruano de Biologa Molecular

Caso Clnico
Decisin Clnica
Inicio de Tratamiento TBC MDR
5 Frmacos
1 Inyectable por 6-9 meses

Caso Clnico
Cuestionamiento
Iniciar Tto sin evidencia
Histolgica-bacteriologica ????
Nueva Biopsia: Todo el ganglio

Instituto Peruano de Biologa Molecular

Biologia Molecular
PCR Convencional

Negativo para Mycobacterium


tuberculsois

PCR en Tiempo Real

-------

Control Interno

-------

Muestra Problema

-------

Control Negativo

-------

Control Positivo

Negativo para Mycobacterium


tuberculsois

Patologa Quirrgica

BK Positivo

Caso Clinico
Mujer 54 aos
Antec. de Inyeccin de colgeno
por Cirujano plstico hace 3
meses
Recibi Antibioticoterapia
multiple

Caso Clnico
PCR 16SRNA-rv0577

Decisin Teraputica

Inicio de tatamiento con


Moxifloxacina + Claritromicina

Caso Clinico
Cultivo

Que Paso????????????

Coinfeccin
Contaminacin del PCR
Contaminacin del
Cultivo

Actinomises israeli

Caso Clnico
Cultivo

Decisin Teraputica

Continuar con tratamiento


instaurado
Biopsia?????????????

Curva de Amplificacin TB no detectado

PAGE | 31

Caso Clnico
Paciente Varn
35 aos
Nacido en Trujillo
Procedente de Lima
Profesin: Supervisor de productos odontolgicos
Antecedentes: Espondilitis Anquilosante. Dx Hace 8 aos sin
tratamiento. Osteoporosis Dx. hace 2 aos, sin tratamiento. Atrosis de
cadera bilateral operada hace 6 aos sin complicaciones

Caso Clnico
Tiempo de Enfermedad: 5 meses, Forma de inicio: Insidiosos, Curso:
Progresivo
Sntomas principales: Paciente refiere que observa aparicin de lesin
tumoral en pared torcica izquierda, blanda, no dolorosa, de 2 cm de
dimetro, mvil, de bordes definidos. Un mes despus del hallazgo
observa aumento de volumen de tumoracin, no asociado a otras
molestias. Evaluacin por medico particular y en ecografa indican
sospecha de tumor dependiente de pulmn. Referido a Oncologa
Mdica para estudio de lesin torcica

08/09/2014Ecografa de partes blandas

17/09/2014TAC Trax

Lesin Expansiva con coleccin a nivel pericostal anterolateral con proyeccin intercostal supra yacente a D/C
Neurofibroma necrosado vs Osteosarcoma
Lesin neoformativa pulmonar en segmentos 7 y 10 izquierdos. Ndulos hipodensos hepticos con calcificacin central.
Aparente engrosamiento gstrico.

01/11/2014Ex Torax

Lesin tumoral de 4cm de dimetro sobre pared torxica inferior izquierda, movil, no adherida a planos profundos, no
dolorosa, de consistencia blanda. No visceromegalias

04/11/2014Ingreso al Hospital
07/11/2014Ecografa doppler de hgado
08/11/2014TAC Abdominal
08/11/2014TAC Torax

Consultorio externo
Cuatro formaciones de aspecto metastsico
Imgenes compatibles con Colecciones Hepticas
Infiltrado Basal izquierdo. Ndulos Pulmonares

10/11/2014Biopsia de Piel

Material Nercrtico, Macrfagos, Infiltrado Inflamatorio agudo compatible con contenido de quiste abscedado.

10/11/2014Broncofibroscopa

Negativo a lesiones pulmonares bronquiales

10/11/2014Biopsia de pulmn

Parnquima pulmonar con ligero engrosamiento septal y antracosis periseptal.

11/11/2014Biopsia Percutnea Heptica de lbulo derecho

No neoplasia Maligna. Biopsia hepatica que muestra severa distorsion de la arquitectura con extensas areas de fibrosis,
acompaado de inflamacin crnica con formacin de ndulos linfticos, tendencia a formacin granulomatosa y
necrosis con destruccin de hepatocitos y parenquima con caracteristicas de nodulos regenerativos con metamorfosis
grasa a gota grande 40%. No se encuantra neoplasia maligna en las biopsias revisadas.

12/12/2014Transferencia a Neumologa

Niega Baja de Peso, Niega Alza trmica

22/12/2014Exceresis de tumor de piel en torax

Proceso inflamatorio crnico granulomatoso severo de tejidos blandos, subcutneo, con numerosas clulas gigantes de
tipo Langhans y cuerpo extrao. La investigacin en luz polarizada no determina presencia de scolex o ganchos. Se
recomienda estudios complmentarios serolgicos para descarte de hidatidosis y cultivo de bacilo tuberculosos. BK:
Negativo

13/01/2015

Biopsia Aspiracin Aguja Gruesa de Torax-Estudio


Citolgico

Negativo para clulas tumorales. Material Necrtico asociado a infiltrado inflamatorio mixto y abundantes macrfagos
compatible con contenido qustico de proceso inflamatorio crnico.

TAC Torax

Cortesa: Dr Pecho-HNERM

TAC Torax

Cortesa: Dr Pecho-HNERM

Tac Abdomen

Cortesa: Dr Pecho-HNERM

Puncin Aspiracin TPH

Cortesa: Dr Pecho-HNERM

90 das despus y en 2 hrs


Muestra: Absceso Heptico

5/5 sondas positivas para gen rpoB de Mycobacterium tuberculosis complex

Muestra: Biopsia de Piel-Tejido Parafinado

123 pb

Conclusin
Tuberculosis drmica
Tuberculosis Heptica

Ecografia de partes blandas


TAC Torax con contraste
Ecografa doppler de hgado
TAC Abdominal con contraste
TAC Torax con contraste
Biopsia de Piel
Broncofibroscopa con Biopsia de pulmn
Biopsia Percutnea Heptica de lbulo derecho
Exceresis de tumor de piel en torax
Biopsia Aspiracin Aguja Gruesa de Torax-Estudio
Citolgico
Dias de Hopitalizacin(Del 4/11/14 al 2/2/15) 90
das hasta el diagntico.
Honorarios Mdicos promedio/dia
Dias no trabajados

Costo del Genexpert Gobierno


Costos del Genexpert Privado
Nro de pruebas Gobierno
Nro de pruebas Privado

S/.
S/.
S/.
S/.
S/.
S/.

CSF
279.00
1,320.00
695.00
2,550.00
1,320.00
897.00

S/.
S/.
S/.
S/.
S/.
S/.

ESSALUD
117.00
352.00
144.00
511.00
352.00
70.00

S/.

3,300.00

S/.

442.00

S/.
S/.

897.00
897.00

S/.
S/.

195.00
656.00

S/.

385.00

S/.

207.00

S/. 58,500.00
S/. 54,000.00
S/. 40,500.00
S/. 165,540.00

S/.
S/.
S/.
S/.

21,420.00
2,880.00
40,500.00
67,846.00

S/.
S/.

S/.
S/.

30.10
150.50

30.10
150.50
5,500
1,100

2,254
451

You might also like