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TEORIA CROMATOGRAFA

I.

INTRODUCCION

La mayora de los mtodos de anlisis son en los casos ms favorables selectivos, pero
no especficos. Por ello, cuando se trata de muestras complejas la separacin del
analito de las posibles interferencias es una etapa esencial. An mejor sera la
posibilidad de determinar varios analitos despus de una separacin previa.
Uno de los mejores mtodos para conseguir esa separacin, y posiblemente, el ms
utilizado es la cromatografa. Este conjunto de tcnicas permite la separacin de
componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas. La cromatografa en
sus orgenes era exclusivamente una tcnica de separacin que se transform en
tcnica de anlisis cuando se acopl con un dispositivo para monitorizar las especies
qumicas que se iban separando. As, la cromatografa se ha convertido en un mtodo
analtico de primer orden para separar, identificar y cuantificar los compuestos
presentes en muestras lquidas o gaseosas (para muestras slidas se requiere una
etapa de disolucin o extraccin).
En cromatografa, los solutos se separan en base a la distinta velocidad de
desplazamiento cuando son arrastrados por una fase mvil a travs de un lecho
cromatogrfico que contiene a una fase estacionaria (slida o liquda).
La muestra se disuelve en la fase movil y se hace pasar a travs de la fase
estacionaria (inmiscible con la mvil) que se mantiene fija en una columna o sobre una
superficie plana. Las dos fases se eligen de tal modo que los componentes de la
muestra se distribuyen de modo distinto entre las dos fases. Aquellos que son
fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de
fase mvil, mientras que los que se retiene dbilmente avanzan con ms rapidez.
Existen dos modelos para explicar la cromatografa
Teora de platos viejo

Desarrollado por Martin y Singe 1941

Modelo cintico actual

II.

Desarrollado por Van Deempter 1956


Explica los procesos dinmicos de separacin

MARCO TEORICO
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Ecuacin de van deemter


Ecuacin de van deemter
Las velocidades de difusin de los gases son mucho mayores que las de los lquidos,
entre 10.000 y 100.000 veces superiores, por lo que el trmino de difusin longitudinal en
la ecuacin de van Deemt er es ms relevante:

Teora de platos
Considera que una columna cromatografa est constituida por una serie de capas
estrechas, discretas pero contiguas, denominadas platos tericos, en los cuales se
establece el equilibrio de distribucin de cada soluto entre la fase mvil y la fase
estacionaria.
Podemos definir, entonces, plato terico como la longitud de una columna en la que el
soluto experimenta un equilibrio completo entre las dos fase. El nmero de platos tericos
N de una columna de longitud L ser:

Cuantos ms platos tericos formen una columna mayor ser su eficacia (o lo que es lo
mismo, cuanto menor sea la altura de plato mayor ser la eficacia).
Como los picos cromatogrficos tienen forma de curva gaussiana, la anchura de cada
pico est directamente relacionada con la varianza () o la desviacin estndar (). Por
lo tanto, la altura de plato terico H se puede definir en funcin de dichos parmetros
como:

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Se puede deducir que el nmero de platos tericos se relaciona con parmetros que
pueden deducirse fcilmente de un cromatograma:

Siendo tR el tiempo de retencin del soluto, el ancho de la base del pico y 05 es el


ancho del pico a la mitad de su altura.
Conviene recordar que el plato terico es una construccin artifical que nos permite
explicar la forma de los picos y la velocidad de desplazamiento a travs de la columna.

Modelo cintico actual


Esta teora describe con xito los efectos de las variables que afectan el ancho de la
banda de elusin.
El ensanchamiento de banda se produce como consecuencia de la velocidad finita con la
que ocurren los diferentes procesos de transferencia de masa durante la migracin de una
especie en el interior de una columna

La teora cintica de la cromatografa ofrece una explicacin ms realista que la teora de


platos y permite razonar cuantitativamente las formas y tambin los anchos de las
bandas.
La forma gaussiana de una banda se atribuye a la combinacin aditiva de los movimientos
aleatorios de las distintas molculas a medida que descienden por la columna. Los
factores que contribuyen a la anchura de banda son:

Difusin en remolino o difusin de Eddy: las molculas en disolucin pueden


atravesar la columna siguiendo trayectorias de distinta longitud con tiempos de
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retencin diferentes; es directamente proporcional al dimetro de las partculas


que componen el relleno de la columna y no se ve afectada por la velocidad de
difusin de la fase mvil, cuando stas son suficientemente altas.
Difusin longitudinal: desde la zona central de la banda, en la que la
concentracin de solutos es mayor, hacia los extremos de la banda, donde la
concentracin es menor; es inversamente proporcional a la velocidad de flujo de la
fase mvil, por lo que cuanto mayor es la velocidad de flujo de la fase mvil ms
breve es el periodo de tiempo que el analito reside en la columna (la difusin
desde el centro de la banda hacia los extremos tiene menos tiempo para
producirse). La difusin en los lquidos es muy lenta y su efecto es mucho menor
que en los gases.
Resistencia a la transferencia de masa entre la fase mvil y la fase
estacionaria, ya que el equilibrio de distribucin no es inmediato y no tiene el
tiempo suficiente para establecerse, por lo que es proporcional a la velocidad de
flujo.

Estos tres factores se relacionan con la altura de plato mediante la ecuacin de van
Deemter

Si representamos la altura de plato frente a la velocidad de flujo de la fase mvil, vemos


que existe una velocidad de flujo ptima para la cual la altura de plato se hace mnima y la
eficacia es mayor:

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Resumimos los factores que afectan al ensanchamiento (permiten optimizar el valor de


H):

Dimetro de las partculas que constituyen el relleno de la columna: al


aumentar el dimetro aumenta la difusin en remolino
Dimetro de la columna: al disminuir el dimetro de la columna se disminuye la
contribucin de la difusin de remolino a la altura de plato terico.
Coeficiente de difusin: su influencia es detectable en el caso de los gases,
cuando la velocidad de flujo no es muy grande y el trmino de difusin longitudinal
es determinante (aumenta con la temperatura); en el caso de los lquidos su efecto
es mnimo.
Velocidad de flujo de la fase mvil, ya que las velocidades suelen ser lo
suficientemente elevadas como para que el trmino de transferencia de masar sea
el que controla la eficacia de la columna.
Otros factores, como la naturaleza de la fase mvil (su viscosidad, por ejemplo),
el tamao de la muestra o la rapidez de la inyeccin (una inyeccin lenta
conduce al ensanchamiento de banda y disminuye la eficacia).
En HPLC, se debe tener en cuenta el ensanchamiento de banda extracolumna.

Para realizar la representacin de van Deemter, es necesario calcular primero el valor del
nmero de platos tericos (N) y el de HETP (H) en cada condicin de flujo de fase mvil
y, para ello, triangular el pico. La triangulacin del pico se hace prolongando la lnea base
y despus trazando las tangentes al punto de inflexin, segn el esquema que se
presenta en la Fig. 3. El tringulo formado tiene una base que es la porcin de la lnea
base intersectada por las tangentes dibujadas en el pico y una altura desde esta base
hasta el punto de corte con las tangentes. De esta manera se obtiene el valor de la
anchura en la base ( b=4 ) y a media altura ( 1/2=2,35 ). Mediante esta representacin,
tambin se calcula la altura del pico (h), desde el punto de corte de las tangentes hasta la
anchura en la base. La altura a media anchura (h1/2) es justo la mitad del valor de h.

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ENSANCHAMIENTO DE BANDA EXTRACOLUMNA EN HPLC


El ensanchamiento de banda extracolumna (no provocado por la propia columna o su
relleno) tiene lugar cuando se transporta la muestra a travs de tubos como los que se
utilizan en los sistemas de inyeccin, en los detectores y en los tubos que conectan
los distintos componentes de cualquier sistema instrumental empleado en la
cromatografa HPLC.
El ensanchamiento tiene su origen en las diferencias en las velocidades en el interior
del fluido, ya que la parte central de una banda se mueve ms rpidamente que las
capas de lquido adyacentes a las paredes del tubo. En cromatografa de gases, este
hecho se ve compensado por la elevada difusin de los propios gases. Sin embargo, en
los lquidos la difusin es mucho menor y el ensanchamiento se hace ms evidente.
La contribucin a la altura total de los platos viene dada por:

Segn esto, en tubos de dimetro muy pequeo el ensanchamiento de banda


extracolumna puede ser muy importante, por lo que la longitud del tubo fuera de la
columna se hace tan pequea como sea posible.

III.

BIBLIOGRAFIA
https://lidiaconlaquimica.wordpress.com/2015/08/10/ensanchamiento-de-bandaextracolumna-en-hplc/
http://pendientedemigracion.ucm.es/info/cvicente/reduca/5.pdf

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