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INTRODUCCIN:

Las protenas son sustancias complejas formadas necesariamente por los elementos: C, H,
O, N, S y en algunos casos fsforo. Son de alto peso molecular, forman dispersiones
coloidales y estn compuestas por L-alfa-aminocidos en enlace peptdico, arreglados en
secuencia lineal que se arrolla despus para constituir cuatro niveles estructurales.
Las protenas se encuentran presentes en todas las estructuras de la clula y son las
molculas ms activas en la vida celular.
Una de las funciones ms relevantes de las protenas es constituir la parte fundamental de
las enzimas, los principales catalizadores de las clulas.
As como las protenas forman parte de todas las estructuras celulares participan tambin
como agentes activos en todas las funciones de la clula y del organismo.
As por ejemplo las protenas funcionan en los diferentes tipos de trabajo de las clulas:
qumico, mecnico, osmtico y elctrico. Las protenas funcionan tambin como
hormonas.
A nivel del organismo las protenas tienen tambin una importante funcin nutricional,
formando el principal ingreso nitrogenado del organismo.
Las protenas membranales se ocupan adems de servir como marcadores de la
individualidad celular, se ocupan de realizar los principales tipos de transporte activo y
pasivo de la clula.
Las protenas funcionan prominentemente como acarreadores de diferentes tipos de
sustancias. Tambin participan en los sistemas de defensa del organismo funcionando
como anticuerpos.
OBJETIVO:
Precipitar protenas mediante solventes orgnicos, formacin de sales, Biuret y salting out.
FUNDAMENTOS:
La solubilidad de las protenas es variable. La mayora de las protenas globulares son
solubles en agua, sea total o coloidalmente soluble, cuando estn en su estado nativo.
Cuando estn desnaturalizadas, las protenas pierden parte de su solubilidad. Cuando se
dice que una protena es coloidalmente soluble, se quiere indicar, que las molculas
proteicas son de tamao tan grande, que incluso, dispersas en solucin tienen el tamao y
superficie que caracteriza a las partculas coloidales, hay alguna fuerza que las hace formar
agregados de tamao coloidal.

De las protenas globulares, las albminas son solubles en agua pura, pero tambin
solubles en soluciones salinas. Las globulinas son insolubles en agua pura, pero se
disuelven en soluciones neutras de sales como el cloruro de sodio, y para permanecer en
solucin las globulinas necesitan cierta concentracin de sal, precipitando cuando el
contenido de sal disminuye. Las protenas coaguladas son insolubles en agua, soluciones
salinas, cidos y lcalis diluidos. Se disuelven en los cidos minerales y lcalis fuertes, los
que las hidrolizan, desdoblndolas a su correspondiente aminocido.
La protena es una molcula cargada tanto positiva como negativamente, y por
consiguiente, pueden reaccionar entre s o con iones de cargas opuestas o agua. Hay tres
tipos de interacciones de una protena en solucin: Protena-protena, protena-agua,
protena-iones pequeos.
Si las interacciones protena-protena es grande y la interaccin protena-agua es pequea,
la protena tender a ser insoluble. Si la situacin es la contrario, entonces las protenas
tienden a ser solubles. Cualquier cosa que aumente o favorezca la interaccin protena,
protena o disminuya la interaccin protena-agua, disminuir la solubilidad de la
protena, favoreciendo su precipitado y cualquier cosa que disminuya la interaccin
protena-protena y aumente la protena-agua, aumentar la solubilidad de la protena.
RESULTADOS:

Precipitacin por Salting Out.

Total de mL de filtrado obtenido: 9 mL.


Cantidad de Sulfato de Amonio slido agregado al filtrado de la solucin
ovoalbmina: 9.750 g.

Precipitacin por solventes orgnicos.


TUBO
1
2
3
4

TURBIDEZ
+
++
++++
Negativo.

Precipitacin por formacin de sales.


TUBO
1
2
3
4
5
6

TURBIDEZ
+++
++++
+
+++
-

Biuret.
TUBO
1
2
3

COLOR
Azul claro.
Azul claro.
Morado.

TIEMPO
10 min.
10 min. (ovoalbmina)
1o min. (ovoglobulina)

DISCUSIN DE RESULTADOS:
Precipitacin por solventes orgnicos: Al aadir solventes orgnicos a una solucin acuosa
de protenas, se baja la constante dielctrica del agua disminuyendo, la interaccin
protena-agua, y aumentando la interaccin protena-protena, favoreciendo as la
precipitacin. Se debe tener en cuenta factores como el pH, electrolitos, presencia de
metales pesados, tc.
Precipitacin por formacin de sales: Las protenas precipitan de sus soluciones por
algunas sales de metales pesados. La protena en el lado alcalino de su punto isoelctrico,
existe como ion negativo, y as, al combinarse con el in del metal o catin formara
proteinatos. Los reactivos alcaloides, precipitan la protena al combinarse el radical cido
del reactivo, con forma catinica de la protena que predomina en el lado cido de su punto
isoelctrico. Se forma entonces el precipitado. La mayora de las globulinas animales se
precipitan con sulfato de amonio al 50%. Las albminas con soluciones de sulfato de
amonio al 100%.
Reaccin de Biuret: La prueba da positiva con todos los componentes que tengan 2 o ms
uniones peptdicas, por lo cual es propia para protenas y pptidos. La intensidad de color
de la reaccin es proporcional a la cantidad de protena en la muestra. El color azul morado
de la reaccin positiva se debe a un complejo de coordinacin entre el catin divalente de
cobre y cuatro tomos de nitrgeno.
Precipitacin por salacin (Salting Out): Si disminuye la concentracin efectiva del agua,
en una solucin proteica aadiendo una sal muy soluble, se aumentar la interaccin
protena-protena, favorecindose la precipitacin de la protena. La gran cantidad de sal
estar robndole a la protena las molculas de agua que la solubilizan. Como las protenas
varan en la proporcin de cargas superficiales, las distintas protenas precipitarn a
distintas concentracin es de sal, proporcionando esto un mtodo para lo que se llama la
precipitacin diferencial de las protenas.
CONCLUSIN:

Las protenas pueden ser muy parecidas en su composicin, pero hay una variedad infinita
conforme a su conformacin y debido a estas diferencias es que la solubilidad intervine,
tomando en cuenta toda la composicin de la protena.

CUESTIONARIO:
1. Cul es, en general, la solubilidad de las protenas globulares y a que
se debe esta solubilidad?
La mayora de las protenas globulares son solubles en agua, sea total o
coloidalmente soluble, cuando estn en su estado nativo. Cuando estn
desnaturalizadas, las protenas pierden parte de su solubilidad. Cuando se dice que
una protena es coloidalmente soluble, se quiere indicar, que las molculas
proteicas son de tamao tan grande, que incluso, dispersas en solucin tienen el
tamao y superficie que caracteriza a las partculas coloidales, hay alguna fuerza
que las hace formar agregados de tamao coloidal.
2. Conociendo lo que es el salting out, Qu significar el procedimiento
de salting in?
A baja concentraciones de sal, la solubilidad de las protenas usualmente incrementa
ligeramente (salting in).

3. Por qu el sulfato de amonio es la sal ms empleada en la


precipitacin de protenas?
Es muy soluble y el in sulfato divalente permite alcanzar altas fuerzas inicas.
4. Qu protenas precipitan al 50% de saturacin del sulfato de amonio, y
que protenas precipitan al 100% de saturacin?
La mayora de las globulinas animales se precipitan con sulfato de amonio al 50%.
Las albminas con soluciones de sulfato de amonio al 100%.
5. Le conviene investigar qu es una dilisis, como se lleva a cabo y para
que sirve.
La dilisis es un proceso de separacin que depende del transporte diferencial de
los solutos de diferentes tamaos a travs de una barrera porosa, que separa a dos
lquidos, dnde la nica fuerza reguladora del proceso es un gradiente de
concentracin. Se usa generalmente para separar solutos demasiado grandes para
difundir a travs de la barrera, de los que son suficientemente pequeos para
difundir a travs de ella.
BIBLIOGRAFA:
http://www.ultracare-dialysis.com/es-ES/Treatment/WhatIsDialysis.aspx
http://laguna.fmedic.unam.mx/~3dmolvis/proteina/
Prcticas de Bioqumica Descriptiva, Eva Irma Vjar Rivera- Hermosillo, Sonora:
Editorial Unison. [2015].