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UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

EFECTO INHIBITORIO DE ALLIUM CEPA Y ALLIUM


SATIVUM SOBRE CEPAS DE Escherichia coli Y
Salmonella enteritidis

TRABAJO RECEPCIONAL EN LA MODALIDAD DE:

TESIS

COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL TTULO DE

MDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA


PRESENTA:
MARA ANTONIA SNCHEZ AGUILAR

ASESORES:
MVZ. Mc. ALFREDO ARROYO LARA
MVZ. AMALIO ALONSO BUSTAMANTE

VERACRUZ, VER.

ENERO 2013

NDICE GENERAL
Pgina
NDICE DE CUADROS

iii

NDICE DE FIGUR AS

iv

DEDICATORIAS

AGRADECIMIENTOS

vi

RESUMEN

vii

1.

INTRODUCCIN

2.

ANTECEDENTES

3.

JUSTIFICACIN

15

4.

HIPTESIS

17

5.

OBJETIVO GENERAL

17

6.

OBJETIVOS ESPECFICOS

17

7. MATERIAL Y MTODOS

18

7.1 LOCALIZACIN

18

7.2 MATERIAL BIOLGICO:

18

7.3 DISEO DE LA INVESTIGACIN PARA LA CONCENTRACIN MNIMA


INHIBITORIA

18

7.4 INGREDIENTES FRESCOS

19

7.5 DISEO DE INVESTIGACIN PARA DETERMINACIN DE


PORCENTAJE DE ELIMINACIN

20

7.6 ESTANDARIZACIN DE LA MUESTRA

21

8.

RESULTADOS Y DISCUSIN

23

9.

CONCLUSIONES

41

10. LITERATURA CITADA

42

ii

NDICE DE CUADROS
Pgina
Cuadro 1. Patrn de sensibilidad de Salmonella enteritidis y Escherichia coli a una
suspensin de cebolla (Allium cepa) blanca al 10%

33

Cuadro 2. Patrn de sensibilidad de Salmonella enteritidis y Escherichia coli a una


suspensin de cebolla (Allium cepa) morada al 10%

33

Cuadro 3. Patrn de sensibilidad de Salmonella enteritidis y Escherichia coli a una


suspensin de cebolla (Allium cepa) cambray al 10%

34

Cuadro 4. Patrn de sensibilidad de Salmonella enteritidis y Escherichia coli a una


suspensin de ajo (Allium sativum) al 10%

35

Cuadro 5.- CMI del ajo necesaria contra las bacterias de la investigacin

36

Cuadro 6. Relacin de UFC observadas en las placas de Escherichia coli y


Salmonella enteritidis, despus de realizar la tcnica para la tasa (%) de
eliminacin

39

Cuadro 7.- Tasa (%) de eliminacin de los extractos de ajo y cebolla sobre las
bacterias de Escherichia coli y Salmonella enteritidis

40

iii

NDICE DE FIGUR AS
Pgina
Figura 1. Compuestos sulfurados del ajo (Ganado, 2001)

Figura 2. Suspensiones de ajo deshidratado.

22

Figura 3. Absorbancia en nm del ajo deshidratado filtrado el mismo da

23

Figura 4: Absorbancia en nm del ajo deshidratado filtrado a las 24 horas

24

Figura 5. Absorbancia en nm del ajo deshidratado filtrado a las 48 horas

24

Figura 6. Absorbancia en nm de la cebolla deshidratada leda mismo da

25

Figura 7. Absorbancia en nm de la cebolla deshidratada leda a las 24 horas

26

Figura 8. Absorbancia en nm de la cebolla deshidratada leda a las 48 horas

26

Figura 9. Absorbancia en nm del ajo fresco filtrado mismo da

27

Figura 10. Absorbancia en nm del Ajo fresco filtrado 24 horas

28

Figura 11. Absorbancia en nm del Ajo fresco filtrado 48 horas

28

Figura 12. Absorbancia en nm de la Cebolla fresca filtrada el mismo da

29

Figura 13. Absorbancia en nm de la cebolla fresca filtrada a las 24 horas

30

Figura 14. Absorbancia en nm de la Cebolla fresca filtrada a las 48 horas

30

Figura 15. Pozos de una microplaca utilizada para observar la CMI, la cual fue
determinada mediante la presencia o ausencia de turbidez

32

Figura 16. Control positivo de diluciones seriadas del uno al tres, donde puede
observarse crecimiento de cepas de Escherichia coli en Agar McConkey

37

Figura 17. Control positivo de diluciones seriadas del uno al tres donde puede
observarse crecimiento de colonias de Salmonella enteritidis en Agar Verde
Brillante

37
iv

DEDICATORIAS

A mis padres:
Jaime Snchez Gutirrez
Leonor Aguilar Betanzos
Porque gracias a su gua y apoyo incondicional he logrado completar esta nueva
etapa. Los quiero demasiado, a ustedes les debo la vida y espero algn da
recompensarles todo el esfuerzo y la confianza que depositaron en m.

A mi hermana:
Gabriela Abigail Snchez Aguilar
Por las veces en que me brind apoyo y por haberme dado la oportunidad de
conocer a mi sobrina, la pequea Atzin, que lleg a darle otra visin a la vida.

A mi abuela:
Celia Betanzos Lpez
Por ser una mujer admirable de gran entereza, gracias por el cario brindado en
cada momento de mi vida. Eres un ejemplo a seguir.

A mi tutora:
MVZ. Rosa Mara Cordero Pulido
Por ser como una madre durante mi carrera. Agradezco su comprensin y apoyo
en los momentos en que ms los requer.

A mis queridos amigos:


Por ser como mis hermanos. Gracias por los momentos gratos que viv al lado de
ustedes, siempre supieron animarme y apoyarme en los momentos en que ms
los necesit.

AGRADECIMIENTOS

A la Universidad Veracruzana, por ser una gran institucin, formadora de


grandes profesionistas.

Al Laboratorio Cordobs de Diagnstico Pecuario, por abrirme las puertas y


permitirme realizar este trabajo. Agradezco a su personal, quienes siempre
mostraron gran preparacin y me brindaron amistad y confianza durante mi
estancia ah. Gracias a todos por su apoyo y enseanzas.

A mis asesores:
MVZ. Mc. Alfredo Arroyo Lara
MVZ Amalio Alonso Bustamante
Por su apoyo, gua y enseanzas para la realizacin de esta tesis. Les estar
eternamente agradecida.

Al MA. Jos Alfredo Villagmez Corts


Por su asesora y consejos brindados en la elaboracin de este trabajo.

A mi jurado:
Dr. David I. Martnez Herrera
MC. Luis A. Landin Grandvallet
Dra. Violeta T. Pardo Sedas
Por sus consejos y observaciones para la redaccin y correccin de este trabajo.

A Claudia y Sol, por haberme brindado un lugar cuando ms lo necesit. Gracias


por permitirme conocerlas y pasar un tiempo junto a ustedes, siempre sern un
ejemplo para salir adelante.

vi

Snchez Aguilar Mara Antonia, 2013. Efecto inhibitorio de Allium cepa y Allium
sativum sobre cepas de Escherichia coli y Salmonella enteritidis. Tesis. Facultad
de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Veracruzana. Veracruz,
Veracruz. Mxico

RESUMEN
La herbolaria tradicional tiene una amplia gama de productos que son
utilizados para tratar enfermedades de diversa ndole y que son de fcil acceso
para productores de traspatio, quienes muchas veces no cuentan con los recursos
necesarios para aplicar buenas prcticas de bioseguridad. Se ha comprobado que
los principios activos de muchos productos naturales tienen efecto sobre
diferentes tipos de bacterias, es por ello que se realiz un estudio del efecto
inhibitorio que tienen los extractos de Allium cepa (cebolla) y Allium sativum (ajo)
sobre cepas de Escherichia coli y Salmonella enteritidis, las cuales son bacterias
asociadas a trastornos entricos de muchos animales y que tambin pueden
afectar al hombre. Mediante un anlisis en microplaca se determin que se
requieren cantidades de por lo menos 12.5 mg/ml de ajo para inhibir el crecimiento
de las bacterias mencionadas. La cebolla no present resultados favorables en el
anlisis en microplaca, pero mediante la determinacin de la tasa porcentual de
eliminacin se observ que ejerce un efecto bactericida sobre las bacterias,
concluyendo que se requieren al menos concentraciones mayores al 10% de su
extracto para tener resultados favorables. A dicha concentracin, tanto la cebolla
como el ajo demostraron tener un efecto sobre Escherichia coli y Salmonella
enteritidis, por lo que puede utilizarse como una opcin de desinfectantes
biodegradables y econmicos.
Palabras clave: Escherichia coli, Salmonella enteritidis, inhibicin, ajo, cebolla.

vii

1. INTRODUCCIN
En la actualidad, las producciones pecuarias en general

tienen en claro la

importancia de la bioseguridad para evitar la introduccin y diseminacin de


enfermedades que pueden derivar en fuertes prdidas econmicas. Dentro de la
bioseguridad se incluyen las prcticas eficaces de desinfeccin para reducir los
problemas sanitarios y se realiza con productos cuya eficacia ha sido comprobada,
porque es la forma ms econmica de proteccin con la que se cuenta (Woodger
y Grezzi, S/F).

Desde la poca prehispnica, diversas culturas han hecho uso de los


remedios de origen vegetal para emplearlos como medicamentos y mejorar su
calidad de vida. Existen reportes de que las plantas y sus derivados eran
utilizados en China, Egipto y Babilonia (Orams y Rodriguez, 1999). De igual
modo, los griegos y romanos comenzaron a hacer uso de las plantas para curar
padecimientos. Por ejemplo, Hipcrates de Cos (460-377 aC) utilizaba vegetales y
algunas sales minerales como medicinas, para despus clasificarlas en
purgantes, narcticos y febrfugos (Barquero, 2007).

Aunque siempre se ha requerido el uso de los antimicrobianos para controlar


las infecciones, el uso indiscriminado de ellos puede derivar en cambios en las
proporciones bacterianas en el individuo que presenta la enfermedad y en el
medio en el que ste se desenvuelve (Ruz et al., 2001). Los organismos
patgenos que se vuelven resistentes a estas drogas han ido en aumento y por el
1

contrario, el desarrollo de nuevos productos se vuelve ms lento debido a los


altos costos y a la velocidad en la que los microorganismos desarrollan la
resistencia (Sussman et al., S/F).

La herbolaria nativa en Mxico an se utiliza en regiones donde por diversos


motivos no llegan los alcances de la medicina moderna. La pobreza, la poca
seguridad y la falta de profesionales mdicos limitan mucho los tratamientos
eficaces (Madaleno, 2007). La naturaleza tiene una amplia gama de productos
vegetales que brinda opciones para cubrir las necesidades bsicas para
alimentarnos, vestirnos e incluso, para combatir las enfermedades que aquejan a
la humanidad. El ser humano ha investigado las plantas de su regin y as ha
descubierto las capacidades medicinales de muchas de ellas (Annimo, 1998).

Algunas de las especies pertenecientes a la familia Allium (cebolla, ajo,


cebollines, entre otros) son utilizadas como condimentos, vegetales y plantas
medicinales, aunque el ajo y la cebolla son los ms comunes. Los beneficios de
las especies Allium se deben a sus componentes sulfurados. Si la concentracin
de stos es baja, las especies dejan un sabor caracterstico al ser utilizadas en la
preparacin de alimentos. Sin embargo, si las concentraciones de sulfuro son
altas, como en el ajo, son usadas

casi siempre como condimentos,

antimicrobianos y para combatir enfermedades. Adems de los componentes


sulfurados, tambin pueden encontrarse otros compuestos como las saponinas y
azcares como la fructosa, las cuales le dan un caracterstico sabor dulce a
especies Allium, como la cebolla (Keusgen et al., 2006).
2

2. ANTECEDENTES
Por lo general, existe un equilibrio entre los seres vivos y los microbios, lo que
permite que casi todo se encuentre en buen estado de salud, el cual puede llegar
a romperse si los microbios se vuelven grmenes patgenos capaces de producir
enfermedades (Marcn, 2000).

A pesar de los avances de la medicina, todava no existen vacunas que


permitan contrarrestar muchas enfermedades de gran importancia en la
produccin animal, por lo que las medidas de higiene y desinfeccin son los
principios bsicos de la bioseguridad (Paez y Ocampo, 2005). La desinfeccin es
el mejor proceso contra la lucha de las enfermedades que se contraen por el
contacto con secreciones u otros materiales portadores de agentes infecciosos.
Consiste en la eliminacin de microorganismos con el uso de agentes qumicos o
fsicos y su campo de estudio atae tanto al sector humano como a la sanidad
animal, ya que forma parte de programas de Medicina preventiva, planes de
produccin animal, transporte y sacrificio de animales, as como de higiene y
produccin de alimentos, entre otros (Rodrguez, 2005).

La historia de los antimicrobianos y la desinfeccin data desde hace muchos


aos. En la antigedad se crea que ciertas sustancias naturales reducan el
contagio de las enfermedades. Su uso se remonta a hace 60,000 aos atrs,
desde que los hombres de Neandertal observaban las costumbres de los animales

y que por azar descubrieron poco a poco que ciertas plantas les eran beneficiosas
y otras txicas (Barquero, 2007).

Hace 4000 aos, en Mesopotamia, se utilizaban mezclas de vino, enebro,


ciruelas y se comenzaba a usar el jabn. En el antiguo Egipto, los
embalsamadores utilizaban las sales de natrn y resinas aromticas como
antispticos, y la cebolla como bactericida para el tratamiento de sus momias
(Marcn, 2000), adems de utilizar vino de palma y vinagre para enjuagar las
cavidades abdominales al momento de embalsamar para que se pudieran
conservar los cuerpos. Tambin empleaban la tcnica de filtracin en tela para
purificar el jugo de uva (Rodrguez, 2005).

Los chinos, por su parte, usaban el queso de soja enmohecido para


tratamiento de sus heridas y despus implementaron la infusin de t verde para
combatir las diarreas (Marcn, 2000). Tambin utilizaban derivados de mercurio y
azufre como desinfectantes y revestimiento protectores (Rodrguez, 2005).
Despus, los rabes retoman la prctica del t verde, agregndole hierbabuena
para proveerle de un mejor efecto antimicrobiano. En la India, eran comunes los
vendajes con miel y mantequilla para el tratamiento de heridas, adems de que
fermentaban el t verde para obtener el t negro (Marcn, 2000).

Los griegos y romanos tambin hacen sus primeros aportes en medicina.


Hipcrates haca uso de la miel y sal para el tratamiento de heridas, as como el
del tomillo y el vinagre como antispticos; y el vino y canela como antimicrobianos
4

(Marcn,

2000). En el ao 429 a.C., se recomend la fumigacin al quemar

maderas y hierbas para alejar a los insectos que por aquel entonces se crea eran
los causantes de las enfermedades. Esta tcnica fue utilizada en el combate
contra las epidemias. En el siglo XVII, con el surgimiento de la peste bovina, los
establos se desinfectaban quemando madera de enebro y vapores de vinagre.
Despus, se desinfectaban con mezclas de plvora de can, tabaco y plantas
aromticas (Rodrguez, 2005). Debido a esa necesidad de destruir aquellas
causas de enfermedades y evitar su proliferacin, el trmino desinfectante fue
utilizado por primera vez como trmino mdico en el mismo siglo (Paez y Ocampo,
2005).

Durante la Edad Media, el estudio de las propiedades medicinales de las


plantas era realizado por los monjes cristianos (Barquero, 2007). Luego, este tipo
de investigaciones dieron realce a toda Europa. Con la diseminacin de las
pestes, se recomendaba limpiar con sosa los lugares que albergaban animales y
el repintado de los mismos con cal viva. Adems, las ropas de las personas que
hubieran tenido contacto con los animales infectados deban airarse y someterse a
una exposicin a llamas. Si los propietarios se negaban, el castigo eran latigazos y
trabajos forzados (Rodrguez, 2005).

La idea de extraer un compuesto puro de alguna planta para poder utilizarlo


como medicamento surge en 1803, con el aislamiento de los alcaloides por
Friedrich Sertuner. A partir de ah se desarrollan varias investigaciones a manos
de Pelletier y Caventou (1819), quienes aslan dos alcaloides de corteza, Merck
5

(1826) obtiene la morfina a partir del opio y en 1831 se consigue la atropina de la


Atropa belladona L. (Barquero, 2007).

Durante el transcurso de la historia, se ha logrado obtener informacin


valiosa de las propiedades teraputicas de diversas especies de plantas y, en la
actualidad, se cuenta con tcnicas de purificacin e identificacin de compuestos
qumicos, as como de tcnicas in vitro que permiten la bsqueda de nuevas
drogas (Barquero, 2007). Sin embargo, el mal uso de stas tanto en humanos
como en animales, la mala dosificacin y el total desconocimiento de la
sensibilidad de los grmenes caractersticos a una sola regin, ha derivado en el
crecimiento de la resistencia bacteriana que conlleva a graves implicaciones
sociales y prdidas econmicas (Sussman et al., S/F).

Hoy en da, ya no se utilizan muchos de los desinfectantes que eran usados


en el pasado y, debido a la creciente conciencia ecolgica, se buscan
desinfectantes con buenos resultados germicidas que no produzcan ningn tipo de
problemas en la salud del hombre y que adems sean de bajo impacto ambiental,
razn por la que se ha optado por utilizar desinfectantes biodegradables, muchos
de los cuales son obtenidos de productos naturales (Paez y Ocampo, 2005).

Es por ello que a la par del conocimiento de los frmacos obtenidos de


plantas que se comercializan con la farmacutica, se sabe de un mercado alterno
que se

dedica a la difusin y venta de hierbas como medicina natural o

suplemento diettico (Barquero, 2007). Aunque el uso de stas se realiza de forma


6

comn en zonas donde no se cuentan con suficientes recursos, la poblacin cada


vez se muestra ms interesada en este tipo de terapias alternativas, en especial
para los padecimientos que an no tienen un tratamiento definitivo (Domingo y
Lpez, 2003).

La sabidura popular menciona la existencia de diversas sustancias, plantas


y alimentos que poseen propiedades desinfectantes y antispticas, tales como el
agua, la sal, los alimentos naturales transformados (lcteos, encurtidos, oleceas,
etc.) y no transformados (ajo, cebolla, puerro, zanahorias, ctricos, entre otros),
condimentos, especias, plantas aromticas, rboles y arbustos (Marcn, 2000).
Aunque se conoce poco sobre la composicin qumica de las sustancias
antimicrobianas de las plantas y especies, se sabe que las propiedades contra los
microorganismos se encuentran en sus aceites esenciales que resultan de la
mezcla de diferentes compuesto voltiles (Garca y Herrera, 2007).

El ajo es una planta que se conoce desde hace 3,000 aos y cuyo cultivo se
remonta a los tiempos babilnicos (Domingo y Lpez, 2003). Su nombre cientfico
es Allium sativum y es una planta originaria de Asia, desde donde pas al resto
de Europa y a Amrica (Cap, 2005). Su trmino en ingls garlic deriva de
races anglosajonas que significan de manera literal planta lanza, refirindose a
la forma de sus hojas (Ganado, 2001). Es una raz bulbosa conformada por varios
segmentos denominados dientes. Su cultivo es rpido y sencillo en clima templado
y florece en primavera y verano (Cap, 2005).

Entre sus constituyentes pueden encontrarse carbohidratos, aminocidos y


protenas, al igual que fsforo, potasio, azufre y zinc en niveles altos; y selenio,
vitamina C, vitamina D, calcio, magnesio, sodio y hierro en niveles ms bajos
(Florencia, 2011). El ajo contiene 33 compuestos sulfurados como la aliina, alicina,
alixina, ajoene, entre otros (Ganado, 2001) (Figura 1), que son los que forma la
planta al reducir y asimilar el azufre que capta por medio de sus races, dndole su
sabor y olor caracterstico (Florencia, 2011). La alicina es una sustancia que se
forma al machacar el ajo, debido a la accin de la enzima alinasa (localizada en la
membrana celular) sobre la aliina (Domingo y Lpez, 2003).

Figura 1. Compuestos sulfurados del ajo (Ganado, 2001)

Las propiedades medicinales del ajo se conocen desde la antigedad. Los


chinos lo utilizaban como condimento y lo consuman para combatir infecciones de
diversa ndole (Florencia, 2011). Los egipcios tambin lo incluan en su
alimentacin porque crean que les aportaba energa para la construccin de sus
templos y pirmides. Ellos consideraban que el ajo era como una deidad y
recomendaban su consumo para el tratamiento de dolores de cabeza, parsitos e
infecciones (Ganado, 2001); as como elemento de trueque y en el proceso de
momificacin de sus muertos (Florencia, 2011). Ms tarde, en Roma y Grecia,
comenz a utilizarse como alimento energetizante y para contrarrestar la fiebre y
desnutricin, adems de ser considerado un afrodisaco. Su uso tambin se
remonta a la poca medieval donde era utilizado con fines esotricos para la
proteccin contra brujas, vampiros y fantasmas (Ganado, 2001), razn por la cual
su cultivo se realizaba incluso en los monasterios (Florencia, 2011).

Durante el renacimiento, se tena consciencia de los efectos medicinales del


ajo y se promovi su cultivo en diferentes ciudades de Italia. En Inglaterra se us
como analgsico para el dolor dental y para atender infecciones respiratorias. De
igual modo, durante la II Guerra Mundial, los soldados contaban con raciones de
ajo para el tratamiento de sus heridas y la gangrena (Florencia, 2011).

Fue en el ao de 1858 cuando Pasteur comenz a hablar de las


propiedades antibacterianas del ajo. Su aceite voltil protege al intestino del riesgo
de infecciones y contra la formacin de bacterias, debido a que el extracto altera el
perfil lipdico de la membrana celular bacteriana (Ganado, 2001). Se ha reportado
9

que tiene actividad inhibitoria sobre varias bacterias gram positivas y gram
negativas, entre las que se incluyen Micrococcus spp, Enterobacter spp,
Escherichia coli , Lactobacillus spp, Pseudomona spp, Klebsiellas spp, Shigella y
Proteus spp (Fani et al., 2007) y hace muy poco, se estudi el efecto bactericida
que tiene sobre Campylobacter jejuni, el cual incrementa conforme se agrega ms
cantidad de concentrado (Xiaonan et al., 2011), as como la eficacia que posee
para reducir la presencia de bacterias salivales causantes de infecciones orales
(Borjan et al., 2012). Tambin se ha comprobado que tiene actividad contra virus,
hongos y parsitos (Garca y Herrera, 2007), reduce los niveles de azcar,
colesterol y triglicridos de la sangre, favorece la coagulacin sangunea, protege
al hgado de dao heptico y reduce la incidencia de cncer (Ganado, 2001)

Por su parte, la cebolla, cuyo nombre cientfico es Allium cepa es una planta
con hojas cuya longitud puede llegar a medir hasta un metro, est conformada por
un solo bulbo subterrneo que posee races poco profundas (Annimo, 2007).
Contiene protenas, calcio y flavonoides (Sampath Kumar et al., 2010), as como
compuestos sulfurados, principalmente el disulfuro de alilpropilo, que le confiere
sus propiedades medicinales (Sun- Ho et al., 2011). El olor penetrante que la
caracteriza se debe a estos compuestos y puede percibirse cuando la cebolla es
cortada, debido a la accin que ejercen las enzimas sobre los aminocidos
(Sampath Kumar et al., 2010).

En la antigua China, era utilizada para controlar la fiebre, los dolores de


cabeza

padecimientos

comunes

como

diarreas

clera.

Diversas
10

investigaciones han revelado que, al igual que el ajo, reduce los niveles de
colesterol y azcar en la sangre (Morales, 1999). Tambin, se usa para reducir
infecciones orales, combatir las infecciones urinarias, anemias y trastornos
cardiovasculares, tratamiento para el acn, impulsar el deseo sexual y prevenir el
cncer (Sampath Kumar et al., 2010).

Sin embargo, se tienen pocos reportes sobre la actividad bactericida de la


cebolla (Garca y Herrera, 2007). Se han realizaron estudios sobre el efecto que
posee frente a bacterias que causan descomposicin en alimentos como
Pseudomonas fragis y Lactobacillus pentosus y los resultados mostraron una
capacidad inhibitoria mucho menor a comparacin con el ajo (Morales, 1999). A
pesar de ello, existen autores que dicen haber comprobado por medio de tcnicas
in vitro que la cebolla tiene resultados contra Escherichia coli, Bacillus cereus,
Salmonella spp, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus y que incluso,
tienen mayor efecto inhibitorio que el ajo, por lo que la proponen como una
importante fuente microbicida (Garca y Herrera, 2007).

Bajo los lineamientos de la Food and Drug Administration (FDA), el ajo y la


cebolla, as como sus derivados, aceites y extractos, son considerados alimentos
GRAS (General Recognized as safe) siempre y cuando no excedan con los
niveles estipulados (GPO, 2013). Lo que determina la GRAS es que cualquier
sustancia que se agrega a los alimentos es considerada un aditivo, y que stos
deben pasar por la aprobacin de los expertos mediante tcnicas de laboratorio
para ser considerados seguros para el consumo (FDA, S/F)
11

Las enfermedades causadas por enterobacterias tienen una distribucin


mundial y producen prdidas econmicas a los sistemas de produccin pecuaria.
Algunos microorganismos como la Escherichia coli forma parte de la flora intestinal
normal de muchos animales, incluido el hombre, pero si se disemina a otros
tejidos, adopta un carcter patgeno y produce serias infecciones (Brooks et al,
2005). En las aves, Escherichia coli es una bacteria que puede asociarse a otras
enfermedades al agravar su cuadro clnico, pero si se presentan condiciones de
tensin o inmunodepresin, es un agente capaz de producir enfermedades como
infeccin del saco vitelino, aerosaculitis, salpingitis, colisepticemia o diseminacin
por medio de la irrigacin sangunea que conlleva a secuelas de artritis e
inflamacin del ojo (Mosqueda y Lucio, 1985).

En cambio otras, como la Salmonella spp, no son consideradas parte de la


flora normal y produce graves infecciones sistmicas en la mayora de los
animales domsticos, pues es una de las principales causas de trastornos
entricos en el hombre (Flores, S/F). Las infecciones por Salmonella spp son
transmitidas de manera horizontal, pero algunas tambin pueden transmitirse de
forma vertical a travs de los huevos y producir enfermedades persistentes
(Dufour-Zavala et al., 2008).

Salmonella entrica tiene cerca de 2500 serotipos y diferentes hospederos,


por lo que tiene un alto rango de colonizacin y causa enfermedades sistmicas
graves. Uno de los serotipos mas predominantes capaz de causar enfermedades
gastrointestinales en humanos es la Salmonella enteritidis, la cual puede infectar a
12

ratones, aves y al hombre (Blondel et al., 2010). En la produccin avcola, la


paratifoidea causada por Salmonella enteritidis deriva en forma ocasional en alta
mortalidad de las aves jvenes (Dufour-Zavala et al., 2008). Produce infecciones
subclnicas en las parvadas y las gallinas que quedan como portadoras y que
pueden producir huevos contaminados con la bacteria (Blondel et al, 2010).

Los animales enfermos excretan las bacterias en

heces y orina,

propiciando su diseminacin y los animales susceptibles se contagian al ingerir


agua o alimentos contaminados. La infeccin en el hombre ocurre por ingestin de
alimentos contaminados o al ingerir carne mal cocida de animales contagiados
(Flores S/F). Adems, las especies de Salmonella spp y Escherichia coli pueden
llegar a sobrevivir semanas enteras en superficies y en ropa contaminada (Paez y
Ocampo, 2005).

La actividad que presentan los extractos de la cebolla y el ajo sobre la


Escherichia coli y la Salmonella spp son an objeto de investigacin. Algunos
estudios han evaluado los efectos antibacteriales del ajo y la cebolla, para
determinar la Concentracin Mnima Inhibitoria requerida para estas bacterias en
condiciones in vitro. En un estudio donde se utilizaron concentraciones al 0.5, 1,
2.5, 5, 10 y 20% de extractos de ajo y cebolla que se agregaron a cultivos en
placas, se determin que la concentracin mnima de ajo requerido para inhibir el
crecimiento de la Eschericha coli es del 5% y que, por el contrario, estas
concentraciones son ineficaces en el caso de la cebolla (Ziarlarimi et al., 2011). En
otra prueba donde se utiliz el extracto de cebolla para determinar su efecto
13

antimicrobiano frente a microorganismos resistentes, se observ que el jugo de


cebolla en concentraciones del 100 y 50% era capaz de evitar el crecimiento de la
Escherichia coli y que en cambio, una concentracin del 20 y 10% inhiba
dbilmente el crecimiento de la bacteria, al compararla con las placas control (Al
Masaudi y Al Bureikan, 2012).

Otro aporte cientfico informa que se necesitan concentraciones de al


menos 500mg/0.5 ml de ajo para mostrar efectos inhibitorios sobra la Salmonella
spp y la Escherichia coli, mientras que la cebolla no demuestra tener resultados
significativos (Alwazni y Drwesh, s/f).

En otra investigacin, se evaluaron los

efectos antimicrobianos que poseen los extractos de cebolla y de ajo frente a


bacterias aisladas en la industria alimentaria, entre las que tambin se encuentran
la Escherichia coli y la Salmonella spp, dando como resultados que el extracto de
cebolla posee una mayor actividad antimicrobiana y que presenta un mayor halo
de inhibicin en el anlisis en placa, lo que contrasta con los otros aportes que
avalan el mejor efecto bactericida del ajo (Garca y Herrera, 2007).

14

3. JUSTIFICACIN
Segn la OMS, un desinfectante es aquel agente que es capaz de inhibir el
crecimiento de un microorganismo o de destruirlo, siempre que no se trate de una
bacteria en su fase esporulada; sin embargo, la accin de un desinfectante no
conlleva la total destruccin de los microorganismos de una superficie, aunque s
los reduce a cantidades mnimas que no daen la salud (OMS, 2004).

La resistencia adquirida a los antibiticos que presentan algunas bacterias,


es un problema tanto en la medicina veterinaria como en la salud humana. Aunque
muchas Gram positivas son an susceptibles a los antimicrobianos, varias
enterobacterias han desarrollado resistencia (Biberstein y Zee, 1994). Algunas
bacterias como Escherichia coli han llegado a causar enfermedades que luego no
se pueden controlar en las comunidades, por lo que es necesario probar nuevos
agentes bacterianos cuyo efecto de duracin sea el ptimo. Es por ello que se
comenz a hacer uso de productos herbales que proporcionaran una respuesta a
la resistencia bacteriana (Rahman et al., 2011).

El uso de la herbolaria brinda varias ventajas en el mbito de los


antimicrobianos, al tener acceso a productos naturales que por lo regular se
encuentran en el mercado y significa un ahorro para muchos productores, como
los del traspatio, quienes no cuentan con los recursos necesarios para invertir en
grandes cantidades de antimicrobianos y desinfectantes que garanticen la sanidad

15

de su explotacin y que incluso, muchas veces se encuentran en zonas


marginadas de difcil acceso.

Por lo anterior, se plante el siguiente trabajo de investigacin para evaluar


la capacidad antimicrobiana de dos especies de la familia de las liliceas que
pueden encontrarse con facilidad en el mercado y que pueden ser buenos
elementos para una desinfeccin ms viable y econmica de reas insalubres.

16

4. HIPTESIS
Las diferentes concentraciones de ajo y cebolla determinan el efecto
antimicrobiano que poseen stos frente a la Escherichia coli y Salmonella
enteritidis.

5. OBJETIVO GENERAL

Determinar las concentraciones en las que el ajo y la cebolla presentan


efecto antimicrobiano ante Escherichia coli y Salmonella enteritidis.

6. OBJETIVOS ESPECFICOS

Determinar la Concentracin Mnima Inhibitoria de distintas suspensiones


de ajo y cebolla.

Determinar si los extractos de ajo y cebolla ejercen un efecto bactericida


frente a la Escherichia coli y Salmonella enteritidis.

17

7. MATERIAL Y MTODOS
7.1 LOCALIZACIN
El presente trabajo se realiz en las instalaciones del Laboratorio Cordobs de
Diagnstico Pecuario que se encuentra en la ciudad de Crdoba, Veracruz con
domicilio en Av. Las Quintas S/N Fraccionamiento las Quintas.

7.2 MATERIAL BIOLGICO:


-

Cultivos de Escherichia coli

Cultivos de Salmonella enteritidis

7.3 DISEO DE LA INVESTIGACIN PARA LA CONCENTRACIN MNIMA


INHIBITORIA
Los productos naturales que se evaluaron fueron el ajo y la cebolla, los cuales se
obtuvieron en el mercado de la ciudad de Crdoba, Veracruz en presentaciones
en fresco y deshidratado. Se obtuvo una muestra de ajo en fresco y otra
deshidratada en presentacin comercial. stas fueron identificadas como: Ajo
fresco (Af) y Ajo deshidratado (Ad)

En el caso de la cebolla, se obtuvieron muestras en fresco y una


deshidratada en presentacin comercial. stas fueron identificadas como cebolla
blanca (Cb), cebolla cambray (Cc), cebolla morada (Cm) y cebolla deshidratada
(Cd).

18

7.4 INGREDIENTES FRESCOS


Para el extracto acuoso:

Los ingredientes frescos se pelaron y despus se pesaron 20 g en una


balanza granataria.

Se macer la muestra en un mortero con pistilo

Se adicionaron 180 ml de agua destilada para hacer una suspensin al 10%


En un embudo se coloc una gasa extendida y se filtr para eliminar
impurezas.

Todas las soluciones fueron colocadas en un recipiente estril y luego se


conservaron a 5C + 1C para evitar el crecimiento de otras bacterias que
pudieran influir en los resultados.

A partir de cada una de las soluciones obtenidas, se hicieron 23 diluciones


decuples seriadas en micro placas de 96 pozos con fondo en U en un volumen
de 50l de caldo soya Tripticaseina (TSB por sus siglas en ingles). A continuacin,
se agreg a cada uno de los 50l de TSB a una concentracin de 5x10 -2- de la
escala de Macfarland de una cepa de Salmonella enteritidis, tipificada por el
Instituto de Diagnstico y Referencia Epidemiolgicos (INDRE).

El mismo

procedimiento anterior se realiz con cepas control de Escherichia coli.

Mediante la tcnica se comprob la Concentracin mnima Inhibitoria (CMI)


del extracto de ajo y cebolla contra Salmonella enteritidis y Escherichia coli. La

19

CMI es la cantidad ms baja que impide el crecimiento de los microorganismos


(Ryan y Ray, 2005). Los datos se agruparon en una tabla para realizar un anlisis
cualitativo, al considerar las variables positivo y negativo en dependencia de la
presencia de turbidez en los pozos. Se interpret como CMI aquella que
corresponda a la dilucin con menor concentracin de la solucin de ajo donde no
existe turbidez por falta de crecimiento bacteriano.

7.5 DISEO DE INVESTIGACIN PARA DETERMINACIN DE PORCENTAJE


DE ELIMINACIN
Se prepararon las suspensiones de ajo y cebolla del mismo modo en que se
realizaron para la investigacin anterior, pero se realizan tres diferentes tipos de
diluciones en frascos estriles, al utilizar para ello una que se encuentre al 20%
(2x), otra al 10% (1x) y otra al 5% (0.5x).

Se realizaron los inculos de las bacterias a utilizar, al tomar asadas de las


mismas de las placas de cultivo correspondientes y colocndolas en tubos con 10
ml de Infusin Cerebro Corazn (ICC) e incubadas a 37 C durante 24 horas.
Despus se nivelaron a una cuenta viable 1X10-8 UFC/ml. Posteriormente, se
tomaron una serie de tres tubos para cada uno de los microorganismos a utilizar y
se agregaron 9 ml de las tres diferentes concentraciones de la suspensin para
adicionarles 1 ml de la suspensin microbiana. Se agitaron y se dejaron en reposo
durante 5 minutos en el caso de las bacterias y 15 minutos en el caso de hongos.

20

Una vez transcurrido el tiempo, se depositaron 0.1 ml y 0.01 ml en cajas de


petri y se les agreg el medio de cultivo correspondiente. En caso de Salmonella
enteritidis se agreg verde brillante y para Escherichia coli se utiliz agar
McConkey. Despus de agregar el medio, se homogeniz con movimientos
circulares y se incub a 37oC durante 24 horas.

El crecimiento en las placas y el conteo de UFC se determin a partir de las


placas de control positivo que se realizaron mediante diluciones seriadas en 10
tubos con 9 ml de agua destilada y 1 ml de inculo inicial. Se contaron las colonias
desarrolladas y se realizaron las conversiones pertinentes al utilizar la siguiente
frmula:
% Eliminacin =100 - Log 10 UFC sobrevivientes X 100
Log 10 UFC control (+)

7.6 ESTANDARIZACIN DE LA MUESTRA

Para el trabajo con los productos deshidratados, se realizaron tcnicas de


estandarizacin de la concentracin idnea para la investigacin. Se utilizaron
muestras de ajo y cebolla deshidratados al 1%, 2%, 5%, 7%, 10%, 15% y 30% en
10 ml de agua. Se realizaron 3 juegos de los 7 tubos para cada producto (Figura
2), para ser medidos mediante espectrofotmetro en diferentes lapsos de tiempo,
comprendidos hasta las 48 horas como mximo.

21

Figura 2. Suspensiones de ajo deshidratado.

En el caso de los productos frescos, se maceraron los trozos en un mortero


con pistilo y se trabaj con concentraciones del 1%, 2%, 5%, 7%, 10%, 15% y
30% en 10 ml de agua destilada, los cuales se dividieron en tres grupos para filtrar
en diferentes tiempos. Al igual que los productos deshidratados, se utiliz el
espectrofotmetro para medir el nivel de Absorbancia (ABS).

Las lecturas con el espectrofotmetro se realizaron para tener una mejor


relacin del producto y el agua para las diferentes suspensiones que se utilizaron
en el estudio. Los rangos manejados para la lectura convergen entre los 500 y 625
nm, debido a que el nivel de absorcin del color amarillo se encuentra entre estos
valores. Con la absorbancia se puede conocer la concentracin de luz que es
absorbida en una muestra (Abril et al., S/F).

22

8. RESULTADOS Y DISCUSIN
Se filtraron los primeros 7 tubos con ajo deshidratado en diferentes
concentraciones para medir las Absorbancias (ABS) que tienen las muestras el
mismo da de su preparacin. Las medidas fluctan entre 550 y 625 nm, que estn
representadas con las lneas de colores. En la figura 3, se puede observar que la
ABS tiene un aumento lineal conforme se incrementa la concentracin de ajo
deshidratado, donde la concentracin del 10% es la que posee los niveles ms
altos en los cuatro valores de medidas de nm utilizados.
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0

ABS

550
575
600
625

0%

2%

4%

6%

8%

10%

12%
Concentracin

Figura 3. Absorbancia en nm del ajo deshidratado filtrado el mismo da

Pasadas 24 horas, se filtraron y midieron las ABS del otro grupo de


muestras de ajo deshidratado. En la figura 4 se observa que las grficas
comenzaron a presentar variaciones, al comenzar a disminuir la ABS en todas las
concentraciones, al ser ms evidente en aquellas menores al 7%. Al observar la
muestra, se pudo percibir un ligero cambio de turbidez, as como disminucin del
olor a ajo que la caracterizaba.

23

1.6

ABS

1.4
1.2
1

550

0.8

575

0.6

600

0.4

625

0.2
0
0%

2%

4%

6%

8%

10% Concentracin
12%

Figura 4: Absorbancia en nm del ajo deshidratado filtrado a las 24 horas

Despus de 48 horas, se filtr el ltimo grupo de muestras de ajo


deshidratado. En esta ocasin puede observarse que los niveles de ABS
continuaron en disminucin en aquellas muestras que posean concentraciones
inferiores al 7 %. El aroma caracterstico a ajo poda percibirse en forma leve y la
muestra se vea ms turbia que las anteriores debido a la degradacin de
compuestos (Figura 5).
1.8

ABS

1.6
1.4
1.2

550

575

0.8
0.6

600

0.4

625

0.2
0
0%

2%

4%

6%

8%

10%

12%
Concentracin

Figura 5. Absorbancia en nm del ajo deshidratado filtrado a las 48 horas

24

Los mismos criterios fueron utilizados en los tubos con las diferentes
concentraciones de cebolla deshidratada. Se midi la ABS del grupo de muestras
filtradas el mismo da de su preparacin y se pudo observar que, al contrario que
el ajo, los valores de ABS de la cebolla aumentaban de manera lineal en las
concentraciones del 1 al 5 %, pero present disminucin en aquellas
concentraciones mayores a stas. El mejor nivel de ABS se obtuvo a una
concentracin del 5% (Figura 6).
0.7

ABS

0.6
0.5
550

0.4

575

0.3

600

0.2

625

0.1
0
0%

2%

4%

6%

8%

10%

Concentracin
12%

Figura 6. Absorbancia en nm de la cebolla deshidratada leda mismo da

Pasadas las 24 horas, se filtr el otro grupo de muestras. Los valores


disminuyeron en todas las concentraciones; sin embargo, se mantuvo el 5% como
aquella en la que se presentaban los mejores niveles de ABS (Figura 7).

25

0.5

ABS

0.45

0.4
0.35
0.3

550

0.25

575

0.2

600

0.15

625

0.1
0.05
0
0%

2%

4%

6%

8%

10%

12%
Concentracin

Figura 7. Absorbancia en nm de la cebolla deshidratada leda a las 24 horas

Al cabo de las 48 horas se filtr el ltimo grupo de muestras. En la figura 8,


se observa que los niveles de ABS presentan un decremento lineal, donde la
concentracin al 10% fue la que present los mejores niveles de ABS de la luz. Al
igual que lo sucedido con las suspensiones de ajo deshidratado, se fue perdiendo
el olor a cebolla que se percibi al inicio de la preparacin de la muestra, as como
pudo observarse inicio de turbidez debido a la degradacin del producto.
0.4

ABS

0.35
0.3
0.25

550

0.2

575

0.15

600

0.1

625

0.05
0
0%

2%

4%

6%

8%

10%

Concentracin
12%

Figura 8. Absorbancia en nm de la cebolla deshidratada leda a las 48 horas

26

Tras filtrar las suspensiones con ajo fresco el mismo da en que se


prepararon y someterlas al espectrofotmetro, se pudo observar que los niveles de
ABS tenan un aumento lineal conforme aumentaba la concentracin del producto,
donde la concentracin de 10% fue la que present los mejores resultados de ABS
(Figura 9).
0.4

ABS

0.35
0.3
0.25

550

0.2

575

0.15

600

0.1

625

0.05
0
0%

2%

4%

6%

8%

10%

Concentracin
12%

Figura 9. Absorbancia en nm del ajo fresco filtrado mismo da

Tras esperar 24 horas se filtr el otro grupo de suspensiones con el


producto fresco y se tomaron las medidas de la ABS de las diferentes
concentraciones. En esta ocasin se pudo observar que los niveles de ABS
aumentaban con el tiempo de reposo, al mantener la concentracin al 10% como
la que presentaba an la mejor ABS. El olor a ajo poda percibirse todava y las
suspensiones no presentaban turbidez (Figura 10).

27

0.4

ABS

0.35
0.3
0.25

550

0.2

575

0.15

600

0.1

625

0.05
0
0%

2%

4%

6%

8%

10%

12%
Concentracin

Figura 10. Absorbancia en nm del Ajo fresco filtrado 24 horas

Transcurridas 48 horas se filtr el otro grupo de suspensiones de ajo fresco


y las medidas de ABS revelaron que stas mantienen un crecimiento lineal, donde
la concentracin al 10% fue la que tena los mejores resultados. Sin embargo,
poda observarse que en las concentraciones menores al 5% hubo decremento en
los niveles de ABS. An si se poda percibir el olor caracterstico del ajo, los tubos
presentaron una ligera turbidez (Figura 11).
0.4

ABS

0.35
0.3
0.25

550

0.2

575

0.15

600

0.1

625

0.05
0
0%

2%

4%

6%

8%

10%

Concentracin
12%

Figura 11. Absorbancia en nm del Ajo fresco filtrado 48 horas

28

Al igual que con el ajo, se procedi a realizar suspensiones con cebolla


fresca y se clasificaron los tubos por grupos. El primer grupo fue filtrado el mismo
da de su preparacin y despus de someti a la lectura por espectrofotmetro.
Los resultados revelaron que la ABS aumentaba conforme incrementaba la
concentracin de cebolla en el agua, aunque no lo haca de una manera lineal. La
concentracin al 10% fue la que arroj los mejores niveles de ABS, mientras que
las de 5% y 7% tenan resultados parecidos (Figura 12).
0.2

ABS

0.18
0.16
0.14
0.12

550

0.1

575

0.08

600

0.06

625

0.04
0.02
0
0%

2%

4%

6%

8%

10%

12%
Concentracin

Figura 12. Absorbancia en nm de la Cebolla fresca filtrada el mismo da

Al cabo de 24 horas, se filtr el siguiente grupo de muestras y tras medirse


con el espectrofotmetro, se pudo observar que la ABS decreca en las
suspensiones con concentraciones menores o iguales al 5%, mientras que en las
mayores al 7% comenzaban a aumentar los niveles (Figura 13).

29

0.25

ABS

0.2
0.15

550
575

0.1

600
625

0.05
0
0%

2%

4%

6%

8%

10%

Concentracin
12%

Figura 13. Absorbancia en nm de la cebolla fresca filtrada a las 24 horas

Sin embargo, tras realizar la filtracin y la lectura a las 48 horas, se pudo


observar que la ABS comenzaba a variar de nueva cuenta, al descender en todos
los niveles medidos. An si las concentraciones del 7% y 10% mantenan niveles
ms altos que los dems, las concentraciones menores al 5 % presentaban
degradacin, hecho que tambin pudo constatarse en el cambio de olor de la
suspensin (Figura 14).
0.14

ABS

0.12
0.1
550

0.08

575
0.06

600

0.04

625

0.02

0
0%

2%

4%

6%

8%

10%

Concentracin
12%

Figura 14. Absorbancia en nm de la Cebolla fresca filtrada a las 48 horas

30

Se

observ que si se realiza la suspensin con los productos

deshidratados y se deja reposar por ms de 48 horas, el olor caracterstico de los


compuestos sulfurados se pierde y comienza a presentarse turbidez en la
suspensin. Con el anlisis en el espectrofotmetro tambin se pudo observar que
los lmites de ABS de la luz decrecen de manera gradual con el paso del tiempo, lo
que sugiere que hay degradacin de los compuestos que conforman el producto.
Esto representa un problema para aquellas personas que piensen utilizar este tipo
de suspensiones como desinfectantes, ya que significara que no se puede
almacenar por ms de 48 horas y que su uso tendra que hacerse dentro de las
primeras 24 horas de elaboracin, razn por la cual se descart para fines de la
investigacin. Con los datos ledos mediante espectrofotmetro se determin
trabajar con concentraciones del 10% debido a que stas mostraron menor
variacin en los grficos, a comparacin de aquellas con concentraciones
menores en los que decreca su ABS.

Para el anlisis en microplaca (Figura 15) se realizaron suspensiones de


Af, Cb, Cc y Cm. Se decidi trabajar con Cc y Cm para comprobar si exista
alguna variacin de los resultados en diferentes variedades de cebollas.

31

Figura 15. Pozos de una microplaca utilizada para observar la CMI, la


cual fue determinada mediante la presencia o ausencia de turbidez

En contraste con los resultados que obtuvieron Garca y Herrera (2001) en


su investigacin de la inhibicin que poseen tres especies Allium sobre cinco
diferentes cepas bacterianas, en donde tambin se incluyen Escherichia coli y
Salmonella spp., los resultados observados en este estudio indican que la cebolla
no fue efectiva en ninguna de las tres muestras evaluadas, ya que todos los pozos
presentaban turbidez a las 24 hrs .

Para la representacin en tablas se tomaron en consideracin los primeros


diez pozos debido a que son los que se encuentran dentro de los rangos de
inhibicin. El resto de los pozos del total de 96 que conforman la microplaca,
fueron positivos y presentaban turbidez. Fueron marcados como negativos
aquellos pocillos con ausencia de turbidez (Cuadros 1 a 3).

32

Cuadro 1. Patrn de sensibilidad de Salmonella enteritidis y Escherichia


coli a una suspensin de cebolla (Allium cepa) blanca al 10%

POCILLOS
CEPAS

Salmonella enteritidis

Escherichia coli

10

Cuadro 2. Patrn de sensibilidad de Salmonella enteritidis y Escherichia


coli a una suspensin de cebolla (Allium cepa) morada al 10%
POCILLOS
CEPAS

Salmonella enteritidis

Escherichia coli

10

33

Cuadro 3. Patrn de sensibilidad de Salmonella enteritidis y Escherichia


coli a una suspensin de cebolla (Allium cepa) cambray al 10%
POCILLOS
CEPAS

Salmonella enteritidis

Escherichia coli

10

Contrario a lo obtenido en este estudio, Garca y Herrera (2001) mencionan


que el ajo no present resultados tan favorables en su investigacin, debido a que
no tuvo efecto alguno sobre las cepas de Salmonella spp y que adems, la
capacidad inhibitoria que tiene sobre Escherichia coli es menor que la que
presenta la cebolla.

En el Cuadro 4, se puede observar que el ajo present inhibicin en los


primeros pozos de la microplaca de todas las bacterias estudiadas, donde
Escherichia coli demostr los mejores resultados. Los datos obtenidos sobre
Escherichia coli coinciden con los resultados citados por Morales (1999), en donde
menciona que las suspensiones con concentraciones iguales o superiores al 3%
de ajo presentan efecto inhibitorio sobre esta bacteria.

34

Cuadro 4. Patrn de sensibilidad de Salmonella enteritidis y Escherichia coli a una


suspensin de ajo (Allium sativum) al 10%
POCILLOS
CEPAS

Salmonella enteritidis

Escherichia coli

10

Debido a que el ajo demostr resultados positivos de inhibicin en la


microplaca, se calcularon las cantidades mnimas del producto necesarias para
obtener un efecto inhibitorio sobre las bacterias utilizadas. En el cuadro 5, se
observa que la cantidad de ajo necesaria para inhibir el crecimiento

de

Escherichia coli fue de 12.5 mg/ml, en tanto que para Salmonella enteritidis fue de
25 mg/ml. Estos datos distan de los proporcionados por Alwazni y Drewsh (s/f),
quienes concluyeron que la CMI inhibitoria del ajo sobre las bacterias antes
mencionadas es de al menos 500 mg/0.5 ml.

35

Cuadro 5.- CMI del ajo necesaria contra las bacterias de la investigacin
BACTERIA

Cantidad de ajo requerida para inhibir


crecimiento de microorganismos

Salmonella enteritidis

Escherichia coli

25 mg/ml

12.5 mg/ml

Despus de obtener la CMI de los extractos de ajo y cebolla, se procedi a


determinar la tasa (%) de eliminacin que tienen dichas suspensiones sobre
placas con medio enriquecido para cada bacteria. Para esta nueva etapa del
trabajo, slo se utilizaron muestras de ajo fresco y cebolla blanca para tener un
rango comparativo. La razn por la que se continu con el trabajo de la cebolla
blanca y se descartaron las variedades cambray y morada fue porque no
presentaron ningn efecto de inhibicin en la microplaca..

Para realizar las pruebas de tasa (%) de eliminacin se prepararon las


placas que sirvieron como control positivo para comprobar que existiera efecto
bactericida sobre las cepas bacterianas. (Figura 16 y 17)

36

Figura 16. Control positivo de diluciones seriadas del


uno al tres, donde puede observarse crecimiento de
cepas de Escherichia coli en Agar McConkey

Figura 17. Control positivo de diluciones seriadas del uno


al tres donde puede observarse crecimiento de colonias
de Salmonella enteritidis en Agar Verde Brillante

El control positivo dio como datos que los inculos bacterianos tenan
12,000 Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de Escherichia coli y 270,000
UFC de Salmonella enteritidis. Al obtener el conteo de las placas de control
positivo, se compararon los resultados obtenidos de la prueba de determinacin
37

de porcentaje de eliminacin. Para ello, se prepararon suspensiones de ajo y


cebolla al 20% (2x), 10% (1x) y 5% (0.5 X) y se agregaron alcuotas en cajas de
petri a las que se despus se les agreg un medio de enriquecimiento que
favoreciera el crecimiento de las bacterias. Las placas se dejaron incubar durante
24 horas a una temperatura de 37oC y luego se realiz el conteo de UFC para
compararlas con el control positivo.

En el cuadro 6 se mencionan la cantidad de UFC de las tres diferentes


cepas bacterianas observadas en las placas. La suspensin con ajo al 20%
permiti el crecimiento de 130 UFC de Escherichia coli, mientras que en las placas
de Salmonella enteritidis evit el crecimiento de la bacteria. Por su parte, la cebolla
al 20% permiti el crecimiento de 30 UFC de Escherichia coli y Salmonella
enteritidis. Al compararlos con las placas del control positivo, los resultados
tambin son similares a lo que expresan Zirlarimi et al. (2011), quienes aseguran
que la CMI del ajo es del 5% y que la cebolla requiere concentraciones del 10 y
20% para ejercer un efecto inhibitorio sobre las bacterias.

38

Cuadro 6. Relacin de UFC observadas en las placas de Escherichia coli y


Salmonella enteritidis, despus de realizar la tcnica para la tasa (%) de
eliminacin

Escherichia

Salmonella

coli

enteritidis

UFC

UFC

Ajo 2x

130

Ajo 1X

740

Ajo 0.5 X

2,000

Cebolla 2x

30

30

Cebolla 1X

110

100

Cebolla 0.5 X

640

2,810

Control positivo

12,000

270,000

En el cuadro 7 se observa que las mayores concentraciones de ajo eliminan


Escherichia coli en 48.7% y la Salmonella enteritidis en 100%, en tanto que la
mayores concentraciones de cebolla, observaron tener efecto de eliminacin de
63.78% para Escherichia coli y menor eliminacin para Salmonella enteritidis
(72.80%) en relacin con el ajo. Esta etapa de la investigacin corrobora lo
descrito por Herrera y Garca (2001) de que la cebolla tiene mejor efecto
bactericida sobre la Escherichia coli.

39

Cuadro 7.- Tasa (%) de eliminacin de los extractos de ajo y cebolla sobre
las bacterias de Escherichia coli y Salmonella enteritidis

% sobre

% sobre

Escherichia

Salmonella

coli

enteritidis

Ajo 2x

48.17

100

Ajo 1x

29.66

100

Ajo 0.5 x

19.07

100

Cebolla 2x

63.78

72.80

Cebolla 1x

49.95

63.17

Cebolla 0.5 x

31.20

36.50

40

9. CONCLUSIONES
Los resultados obtenidos durante este estudio demuestran que los principios
activos del ajo a niveles de 10% pueden ser usados como desinfectante natural
para la inhibicin de Escherichia coli y Salmonella enteritidis. En el caso de la
cebolla, es posible que los efectos obtenidos para la inhibicin en el crecimiento
de los microorganismos en las microplacas, no hayan sido los adecuados por las
concentraciones utilizadas, como pudo comprobarse con la tcnica de tasa (%) de
eliminacin. Es probable que se requieran concentraciones de al menos el 20%
para observar el efecto antimicrobiano deseado. Se sugiere una evaluacin en
aves de traspatio con la finalidad de observar el efecto en los parmetros
productivos que tienen este tipo de aves bajo manejos rustico, ya que el efecto
mostrado puede ser una buena alternativa tecnolgica para mejorar la viabilidad
de las aves.

41

10. LITERATURA CITADA


1.- Abril N, Brcena J, Fernndez E, Galvn A, Jorrn J, Peinado J, Melndez F,
Tnez I

s/f. Espectrofometra:

colorimtrica

de

Espectros de

Absorcin y cuantificacin

biomolculas.

Disponible

en

http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biolmol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA.pdf consultada el 15 de octubre


del 2012

2.- AL Masaudi S and AlBureikan M 2012. Antimicrobial Activity of Onion Juice


(Allium cepa), Honey, And Onion-Honey Mixture on Some Sensitive and MultiResistant Microorganisms. Life Science Journal 9(2): 775-780

3.- Alwazni WD y Drwesh MF s/f. Comparative study of effect garlic and anion
extract on the growth of some gram negative bacteria. Disponible en
http://www.iasj.net/iasj?func=fulltext&aId=36460 , consultada el 26 de enero del
2013.

4.- Annimo 1998. Antiguo manual de herbolaria indgena. 14 edicin, Ediciones


Aguilar, Mxico. 96 p.

5- Annimo 2007. Plantas medicinales para cuidar y mejorar su salud, Editorial


Delfn, Mxico. 95p

6.- Barquero A 2007. Plantas sanadoras: Pasado, presente y futuro. Qumica


Viva, 2, 19-35.

7.- Biberstein E, Zee Y 1994. Tratado de Microbiologa Veterinaria, Editorial


Acribia, Espaa, 673p.

42

8. - Borjan-Mojabi K, Sharifi M, Karagah T, Karimi H 2012. Eficacy of Different


Concentrations of Garlic Extract in Reduction of Oral Salivary Microorganisms.
Archives of Iran Medicine 15(2): 99 - 101.

9. - Brooks G, Butel J, Morse S 2005. Microbiologa Mdica. 18a edicin. Editorial


El Manual Moderno, Mxico. 790 p.

10.- Cap N 2005. Curacin por el ajo, Editorial poca S.A de C.V, Mxico. 94p.

11.- Domingo D, Lpez-Brea M 2003. Plantas con accin antimicrobiana. Revista


Espaola de Quimioterapia 16(4): 385-393.

12.- Dufor-Zavala L, Swayne D, Glisoon J, Pearson J, Reed W, Jackwood M,


Woolcock P 2008. Isolation, identification and characterization of avian pathogens,
5th edition, American Association of Avian Pathologists, 250 p

13.- FDA (U.S. Food and Drug Administration) s/f. Generally Recognized as Safe
(GRAS).

Disponible

en

http://www.fda.gov/Food/FoodIngredientsPackaging/GenerallyRecognizedasSafeG
RAS/default.htm , consultada el 22 de enero del 2013

14 .- Fani MM, Kohanteb J, Dayaghi M 2007. Inhibitory activity of garlic (Allium


sativum) extract on multidrug-resistant Streptococcus mutans. Disponible en
http://www.jisppd.com/article.asp?issn=09704388;year=2007;volume=25;issue=4;spage=164;epage=168;aulast=Fani,
consultada el 12 de septiembre del 2012

15.- Florencia G 2011. Estudio de procesos de deshidratacin industrial del ajo


con la finalidad de preservar alicina como principio bioactivo. Disponible en
http://bdigital.uncu.edu.ar/objetos_digitales/4202/tesis-florenciagreco.pdf,
consultada el 8 de enero del 2013.
43

16.- Flores R S/F. Epizootiologa de la Salmonelosis en Bovinos, Porcinos y aves.


Disponible

en

http://www.fmvz.unam.mx/fmvz/cienciavet/revistas/CVvol3/CVv3c05.pdf
consultada el 26 de noviembre del 2012

17.- Ganado O 2001. Estudios de diferentes fracciones y extractos de Allium


Sativum sobre la reactividad vascular, niveles de colesterol y cultivos celulares.
Disponible en http://eprints.ucm.es/tesis/far/ucm-t25548.pdf, consultada el 7 de
enero del 2013.

18.- Garca R y Herrera A 2007. Evaluacin de la inhibicin del crecimiento de


cinco cepas bacterianas patgenas por extractos acuosos de Allium sativum,
Allium fistulosum y Allium cepa: estudio preliminar in vitro. Disponible en
http://www.redalyc.org/redalyc/pdf/903/90350207.pdf , consultada el 15 de enero
del 2013

19.- GPO (Government Printing Office), 2013. Part 184- direct food substances
affirmed as generally recognized as safe. Disponible en http://www.ecfr.gov/cgibin/retrieveECFR?gp=1&SID=4a316ec8bbb34b066fd432bbf09d3c3c&ty=HTML&h
=L&n=21y3.0.1.1.14&r=PART , consultada el 23 de enero del 2013

20.- Keusgen M, Fritsch RM, Hisoriev H, Kurbonova P, Khassanov FO 2006. Wild


Allium species (Alliaceae) used in folk medicine of Tajikistan and Uzbekistan.
Disponible en http://www.ethnobiomed.com/content/2/1/18 , consultada el 9 de
septiembre del 2012

21.- Madaleno IM 2007: Etno-farmacologa en Iberoamrica: Una alternativa a la


globalizacin de las prcticas de cura. Cuadernos Geogrficos 41: 67-95.

22.- Marcn JJ 2000. Antimicrobianos naturales. Medicina Naturista 2: 104-108.


44

23.- Morales L 1999. Efecto bacteriosttico de aceites esenciales de ajo (Allium


sativum) y cebolla (Allium cepa) sobre dos microorganismos presentes en carnes.
Disponible en http://148.206.53.231/UAM3500.PDF , consultada el 13 de enero del
2013

24.- Mosqueda A

y Lucio B 1985. Enfermedades Comunes de las Aves

Domsticas. Departamento de Produccin Animal: Aves FMVZ. UNAM. SUA. 452


pp.

25.-OMS 2004. Formulario Modelo de la OMS: 2004 Seccin 15: Desinfectantes y


Antispticos, disponible en http://apps.who.int/medicinedocs/en/d/Js5422s/19.html
consultado el 10 de septiembre del 2012

26.- Orams DJ y Rodrguez LI 1999. La informacin cientfica y la medicina


tradicional

natural.

Disponible

http://bvs.sld.cu/revistas/res/vol12_1_99/res06199.pdf

consultada

en
el

de

septiembre del 2012

27.- Paez D y Ocampo L 2005. Teraputica Avcola. UNAM. Mxico, 358 pp.

28.- Rahman S, Khasru A, Islam R, Hossain M 2011. Antibacterial activity of


natural spices on multiple drug resistant Escherichia coli isolated from drinking
water, Bangladesh. Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials. Disponible
en http://www.ann-clinmicrob.com/content/10/1/10 , consultada el 6 de septiembre
del 2012

29.- Rodrguez EF 2005. La desinfeccin como prctica til en la lucha contra las
infecciones

animales.

http://www.adiveter.com/ftp/articles/articulo1646.pdf

Disponible
consultado

en
el

13

de

septiembre del 2012


45

30.- Ruz JD, Ramrez NF, Arroyave O 2001. Determinacin de concentraciones


inhibitorias mnimas a algunos antibiticos de las bacterias aisladas de glndula
mamaria bovina en San Pedro de los Milagros, Antioquia. Revista Colombiana de
Ciencias Pecuarias14 (2):143-154

31.- Ryan KJ y Ray CG 2004. Microbiologa Mdica. 14 edicin, Editorial McGraw


Hill, Mxico. 1060 p.

32.- Sampath Kumar K.P, Bhowmik D, Chiranjib, Biswajit and Tiwari P 2010. Allium
cepa: A traditional medicinal herb and its health benefits. Journal of Chemical and
Pharmaceutical Research 2(1): 283-291

33.- Sun-Ho K, Sung-Hoon J, Young-In K, Jae-Kwan H 2011. Effects of Onion


(Allium cepa L.) Extract Administration on Intestinal -Glucosidases Activities and
Spikes in Postprandial Blood Glucose Levels in SD Rats Model. International
Journal of Molecular Sciences 12: 3757-3769.

34.- Sussmann OA, Mattos L, Restrepo A S/F. Resistencia bacteriana. Disponible


en
http://www.edu365.cat/aulanet/comsoc/treballsrecerca/treballs_04_05/suggeriment
s_04_05/suggeriments_bacteries/documents/resistencia_javeria.pdf , consultado
el 7 de septiembre del 2012

35.- Woodger GJA, Grezzi, G s/f. La bioseguridad y la desinfeccin en el control


de

enfermedades.

Disponible

en

http://www.adiveter.com/ftp/articles/A3180408.pdf, consultada el 9 de septiembre


del 2012

46

36.- Xiaonan L, Rasco BA, Jabal JMF, Aston DE, Mengshi L, Konkel ME 2011.
Investigating Antibacterial Effects of Garlic (Allium sativum) Concentrate and
Garlic-Derived Organosulfur Compounds on Campylobacter jejuni by Using Fourier
Transform Infrared Spectroscopy, Raman Spectroscopy, and Electron Microscopy.
Applied and environmental microbiology 77(15): 52575269

37.- Ziarlarimi A, Irani M, Gharahveysi S and Rahmani Z, 2011. Investigation of


antibacterial effects of garlic (Allium sativum), mint (Menthe spp.) and onion (Allium
cepa) herbal extracts on Escherichia coli isolated from broiler chickensAfrican.
Journal of Biotechnology Vol. 10(50), pp. 10320-10322

47