Varios - Genetica

Ariel Ciencia
GENTICA
Jos Fernndez Piqueras, Antonia Mara Fernndez Peralta,

Javier Santos Hernndez y Juan Jos Gonzlez Aguilera
GENTICA
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Ariel
Diseo de la cubierta: Joan Batall

1.a edicin: noviembre 2002
2002: Jos Fernndez Piqueras, Antonia Mara Fernndez Peralta,
Javier Santos Hernndez y Juan Jos Gonzlez Aguilera
Derechos exclusivos de edicin en espaol
reservados para todo el mundo:
2002: Editorial Ariel, S.A.
Diagonal 662-664 08034 Barcelona
ISBN: 84-344-8056-5
Depsito legal: B. 41.044 2002
Impreso en Espaa
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de la cubierta, puede ser reproducida, almacenada o transmitida
en manera alguna ni por ningn medio, ya sea elctrico,
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sin permiso previo del editor.
NDICE
Autores..........................................................................................................................................
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PRIMERA PARTE
INTRODUCCIN
CAPTULO 1. Introduccin..........................................................................................................
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(Concepto de gentica, evolucin histrica, cuerpo de doctrina, perspectivas actuales, lecturas

recomendadas)..............................................................................................................................
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SEGUNDA PARTE
FUNDAMENTOS DEL ANLISIS GENTICO

CAPTULO 2. Principios bsicos de la herencia.........................................................................
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1. Las leyes de Mendel.................................................................................................................

1.1. Los experimentos de Mendel.............................................................................................
1.2. Plantas que se diferencian en un solo carcter (cruzamientos monohbridos)...................
1.3. Plantas que se diferencias en dos o ms caracteres (cruzamientos dihbridos y
polihbridos).......................................................................................................................
2. Teora cromosmica de la herencia...........................................................................................
2.1. Los genes estn en los cromosomas...................................................................................
2.2. Primeras evidencias a favor de la teora cromosmica de la herencia...............................
3. Las leyes de Mendel en organismos haploides..........................................................................
4. Ejemplos de caracteres mendelianos en la especie humana......................................................
4.1. Enfermedades autosmicas recesivas................................................................................
4.2. Enfermedades autosmicas dominantes.............................................................................
4.3. Enfermedades recesivas ligadas al X..................................................................................
4.4. Enfermedades dominantes ligadas al X.............................................................................
5. El problema de la compensacin de la dosis gnica.................................................................
5.1. Herencia ligada al Y...........................................................................................................
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Lecturas recomendadas.................................................................................................................
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CAPTULO 3. Naturaleza y estructura del material gentico...................................................

1. Demostracin de la naturaleza del material gentico en bacterias y virus...............................
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GENTICA
1.1. El principio transformante en las bacterias.....................................................................

1.2. Demostracin de la naturaleza del material gentico en bacterifagos..............................
2. El RNA puede ser el material gentico de algunos virus..........................................................
3. Los priones................................................................................................................................
4. La estructura del material gentico............................................................................................
5. Secuencias de DNA en los genomas de procariotas y eucariotas.............................................
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Lecturas recomendadas................................................................................................................
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CAPTULO 4. Organizacin del material gentico.....................................................................

1. Organizacin del material gentico en virus y bacterias...........................................................
1.1. Organizacin del material gentico en los virus.................................................................
1.2. Organizacin del material gentico en bacterias................................................................
2. Organizacin de la cromatina en organismos eucariticos.......................................................
2.1. La cromatina nuclear..........................................................................................................
2.2. Material gentico nuclear y extranuclear...........................................................................
2.3. Organizacin de la cromatina nuclear................................................................................
2.4. Eucromatina y heterocromatina..........................................................................................
3. Elementos diferenciados en la estructura cromosmica y tcnicas de bandeado......................
3.1. Elementos diferenciados.....................................................................................................
3.2. Tcnicas de bandeado.........................................................................................................
4. Cromosomas especiales.............................................................................................................
5. Nmero de cromosomas y cantidad de ADN............................................................................
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CAPTULO 5. Interacciones gnicas............................................................................................

1. Relacin entre genotipo y fenotipo...........................................................................................
2. Prueba de alelismo: anlisis de complementacin....................................................................
3. Alelismo mltiple y polimorfismos genticos..........................................................................
4. Interacciones entre los alelos de un mismo gen.......................................................................
5. Interacciones entre genes no allicos........................................................................................
5.1. Interaccin entre gen regulador y su regulado...................................................................
5.2. Interaccin entre genes implicados en una misma ruta metablica...................................
5.3. Supresin gnica................................................................................................................
5.4. Genes modificadores..........................................................................................................
5.5. Sistemas de letales equilibrados.........................................................................................
6. Penetrancia y expresividad .......................................................................................................
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CAPTULO 6. La herencia de los caracteres complejos.............................................................

1. Caracteres mendelianos versus complejos o multifactoriales...................................................
1.1. La herencia triallica..........................................................................................................
1.2. El caso de la coloracin de la piel en los mamferos: ms dedos pares gnicos................
1.3. Heterogeneidad gentica en la enfermedad de Alzheimer.................................................
1.4. La base gentica en la diabetes...........................................................................................
1.5. Los fundamentos genticos del cncer...............................................................................
2. Caracteres cuantitativos: genotipos y distribuciones fenotpicas..............................................
2.1. Las lneas puras de Johannsen............................................................................................
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2.2. Teora de los factores polmeros.........................................................................................

3. Heredabilidad y norma de reaccin de un carcter cuantitativo................................................
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CAPTULO 7. Patrones de herencia extranuclear......................................................................

1. Patrones de herencia uniparental...............................................................................................
2. Fundamentos moleculares: el material gentico de los orgnulos celulares y la segregacin
citoplasmtica..........................................................................................................................
3. Las mitocondrias humanas en las enfermedades de origen materno, el envejecimiento y la
muerte celular..........................................................................................................................
4. Plsmidos extragenmicos........................................................................................................
5. Herencia infectiva y efectos maternos......................................................................................
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CAPTULO 8. Ligamiento y recombinacin...............................................................................
1. Los fenmenos del ligamiento y la recombinacin gentica....................................................

2. Mapas de ligamiento.................................................................................................................
3. Mapas de tres puntos: interferencia y coincidencia..................................................................
4. Ligamiento absoluto..................................................................................................................
5. Mapa de ligamiento en la especie humana...............................................................................
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CAPTULO 9. Tcnicas especiales de cartografiado en cromosomas eucariticos..................
1. Anlisis de productos meiticos individuales...........................................................................

2. Clculo de distancias genticas mediante anlisis de ttradas..................................................
3. Segregacin y recombinacin somticas..................................................................................
4. Cartografiado mediante hibridacin celular somtica...............................................................
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CAPTULO 10. Transferencias de genes en bacterias y bacterifagos.....................................
1. Conjugacin bacteriana.............................................................................................................
1.1. El factor de fertilidad epismico F....................................................................................
1.2. Cartografa por apareamiento interrumpido.......................................................................
1.3. Factores F portadores de genes bacterianos: sexduccin...................................................
2. Transformacin bacteriana........................................................................................................
3. Transduccin.............................................................................................................................
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TERCERA PARTE
GENTICA MOLECULAR
CAPTULO 11. Replicacin del material gentico......................................................................
1. Demostracin del modelo semiconservativo.............................................................................
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GENTICA
2. Origen nico, bidireccionalidad y carcter semidiscontinuo.....................................................

3. Caractersticas diferenciales de la replicacin del material gentico en eucariotas..................
4. Telmeros y replicacin............................................................................................................
4.1. El problema de la replicacin terminal y el acortamiento de los telmeros......................
4.2. La telomerasa y el mantenimiento telomrico....................................................................
4.3. Alteraciones de la actividad telomerasa.............................................................................
5. Replicacin del material gentico en organismos celulares......................................................
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CAPTULO 12. Naturaleza del gen...............................................................................................

1. La accin gnica primaria: hiptesis un gen-una enzim...........................................................
2. Relacin entre genes y protenas...............................................................................................
3. Colinealidad..............................................................................................................................
4. El gen eucariota........................................................................................................................
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CAPTULO 13. La estructura fina del gen.................................................................................

1. El locus rll del fago T4............................................................................................................
2. Cartografa gentica fina.........................................................................................................
3. Compiementacin y el concepto de gen...................................................................................
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CAPTULO 14. Biologa molecular de la funcin gnica...........................................................

1. Evidencias genticas de la existencia del ARN mensajero......................................................
2. La transcripcin y la ARN polimerasa.....................................................................................
3. La transcripcin en eucariotas...................................................................................................
4. Procesamiento de los ARN eucariotas......................................................................................
4.1. Proceso de adicin de una caperuza (capping) en el extremo 5'........................................
4.2. Adicin de una cola de poliadenina en el extremo 3'........................................................
4.3. Proceso de poda de secuencias intrnicas (splicing).........................................................
4.4. Editado del ARN198..........................................................................................................
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CAPTULO 15. Cdigo gentico....................................................................................................
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1. Caractersticas esenciales del cdigo........................................................................................

2. Desciframiento de la clave gentica..........................................................................................
2.1. Utilizacin de homopolmeros...........................................................................................
2.2. Utilizacin de copolmeros con proporciones nucletidas fijadas....................................
2.3. Utilizacin de polmeros de secuencia conocida (copolmeros con repeticin)................
2.4. Afinidad entre complejos de transferencia (aminoacil-ARNt) y tripletas especficas.......
3. La traduccin.............................................................................................................................
3.1. El ARN transferente...........................................................................................................
3.2. El ribosoma.........................................................................................................................
NDICE
11
3.3. Fases del proceso de la traduccin.....................................................................................

4. Universalidad del cdigo gentico............................................................................................
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CAPTULO 16. Regulacin de la expresin gentica en procariotas.........................................

1. Nociones generales acerca de la regulacin gentica...............................................................
2. El opern lac de E. Coli............................................................................................................
2.1. Metabolismo de la lactosa y anlisis gentico de los genes estructurales.........................
2.2. El gen regulador del opern lac (lac 1): control negativo.................................................
2.3. Represin catablica del opern lac: control positivo.......................................................
3. El opern trp: modelo de atenuacin........................................................................................
3.1. Atenuacin.........................................................................................................................
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CAPTULO 17. Regulacin de la expresin gentica en eucariotas...........................................

1. Caractersticas generales y niveles de regulacin.....................................................................
2. Elementos reguladores en el ADN............................................................................................
2.1. El promotor.........................................................................................................................
2.2. Intensificadores..................................................................................................................
2.3. Aislantes (Insulators)..........................................................................................................
3. Los factores de transcripcin....................................................................................................
3.1. Dominios de unin al ADN................................................................................................
3.2. Dominios de activacin en Trans.......................................................................................
4. Regulacin postranscripcional...................................................................................................
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Lecturas recomendadas...............................................................................................................
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CAPTULO 18. Epigentica...........................................................................................................
1. Concepto de epigentica...........................................................................................................
2. Fundamentos moleculares........................................................................................................
2.1. Modificaciones del ADN y las histonas.............................................................................
2.2. Patrones de metilacin del genoma de mamferos.............................................................
3. Inactivacin de un cromosoma X en la lnea somtica de las hembras de mamfero..............
4. Los fenmenos de imprinting o marcado..................................................................................
5. Alteraciones de los procesos epigenticos y enfermedades humanas......................................
6. Silenciamiento gentico mediado por ARN..............................................................................
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CAPTULO 19. La tecnologa del ADN recombinante...............................................................
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1. Contruccin de molculas de ADN recombinante...................................................................

2. Enzimas de restriccin...............................................................................................................
3. Vectores de clonaje...................................................................................................................
4. Estrategias de clonaje................................................................................................................
5. Genotecas o libreras de ADN..................................................................................................
6. Utilizacin del ADN donado: Southern y Northern blots.....................................................
7. Deteccin de genes donados.....................................................................................................
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GENTICA
8. Secuenciacin............................................................................................................................
9. Amplificacin en cadena de la polimerasa................................................................................
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CAPTULO 20. Aplicaciones de la tecnologa del ADN recombinante.....................................

1. Mutagnesis in vitro.
2. Identificacin gentica.............................................................................................................
3. Gentica inversa........................................................................................................................
4. Organismos transgnicos..........................................................................................................
4.1. Animales transgnicos......................................................................................................
4.2. Plantas transgnicas...........................................................................................................
5. Modificacin de secuencias gnicas mediante recombinacin homloga: ratones knockout y
knockin..........................................................................................................................................
6. Expresin de genes eucariticos en bacterias...........................................................................
7. Diagnstico gentico y terapia gnica......................................................................................
7.1. Diagnstico gentico..........................................................................................................
7.2. Terapia gnica....................................................................................................................
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CAPTULO 21. Genmica.............................................................................................................

1. Genmica estructural: secuenciacin de genomas....................................................................
1.1. Automatizacin del proceso de secuenciacin de genomas...............................................
2. Genmica funcional: micro-arrays de ADN.........................................................................
2.1. Micro-arrays de clones de ADNc...................................................................................
2.2. Micro-arrays de secuencias oligonucleotdicas..............................................................
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CUARTA PARTE
VARIACIN GENTICA
CAPTULO 22. Fundamentos moleculares y citogenticos de la variacin gentica...............
1. Tipos de mutaciones gnicas.....................................................................................................
2. Mutaciones germinales y somticas.........................................................................................
3. Sistemas de deteccin y seleccin en procariotas y eucariotas.................................................
3.1. Reversin de auxtrofos.....................................................................................................
3.2. Enriquecimiento por filtracin...........................................................................................
3.3. Enriquecimiento por penicilina (y otros antibiticos)......................................................
3.4. Seleccin de resistencias a agentes no tolerados por las cepas salvajes............................
4. Carcter preadaptativo de la mutacin......................................................................................
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CAPTULO 23. Bases moleculares de las mutaciones gnicas...................................................
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1. Mecanismos de origen de las mutaciones gnicas espontneas e inducidas............................
NDICE
13
1.1. Mecanismos de origen de las mutaciones espontneas......................................................

1.2. Mecanismos de origen de las mutaciones inducidas..........................................................
2. Relacin entre mutgenos y carcingenos: el test de Ames......................................................
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CAPTULO 24. Reparacin del dao gentico.............................................................................
1. Mecanismos de reparacin........................................................................................................
1.1. Sistemas preventivos.........................................................................................................
1.2. Sistemas de reparacin directa...........................................................................................
1.3. Sistemas de reparacin por escisin..................................................................................
1.4. Sistemas de reparacin posreplicativa: reparacin de emparejamientos errneos (MMR)
1.5. Reparacin recombinatoria (HR).......................................................................................
1.6. Reparacin inducida ante un dao generalizado: respuesta SOS......................................
1.7. Reparacin inducida en clulas eucariotas.........................................................................
2. Enfermedades humanas debidas a fallos en los sistemas de reparacin...................................
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CAPTULO 25. Mutaciones cromosmicas estructurales...........................................................

1. Origen de los cambios estructurales..........................................................................................
2. Deleciones.................................................................................................................................
3. Duplicaciones............................................................................................................................
4. Inversiones................................................................................................................................
5. Translocaciones.........................................................................................................................
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CAPTULO 26. Mutaciones cromosmicas numricas...............................................................
1. Euploida: monoploida y poliploida.......................................................................................

1.1. Monoploida......................................................................................................................
1.2. Poliploida.........................................................................................................................
2. Aneuploida: nulismicos, monosmicos y trismicos............................................................
3. Ingeniera cromosmica en plantas..........................................................................................
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361
CAPTULO 27. Mecanismos de recombinacin..........................................................................

1. Los mecanismos de recombinacin y la conversin gnica.....................................................
2. Rotura y reunin de las molculas de ADN..............................................................................
3. Mecanismos moleculares de la recombinacin general homloga...........................................
3.1. El modelo de Holliday.......................................................................................................
3.2. El modelo de Meselson-Radding.......................................................................................
4. Recombinacin especfica de sitio............................................................................................
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CAPTULO 28. Elementos genticos transponibles.....................................................................
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1. Transposones procariticos.......................................................................................................
14
GENTICA
1.1. Transposones simples: secuencias de insercin en bacterias............................................

1.2. Transposones compuestos.................................................................................................
2. Mecanismos de transposicin en procariotas...........................................................................
2.1. Transposicin conservativa................................................................................................
2.2. Transposicin replicativa..................................................................................................
3. Transposones eucariotas...........................................................................................................
3.1. Elementos controladores en el maz..................................................................................
3.2. Elementos P de Drosophil..................................................................................................
4. Retrovirus y retrotransposones.................................................................................................
5. Efectos de los elementos genticos transponibles....................................................................
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QUINTA PARTE
GENTICA DE LA DIFERENCIACIN Y EL DESARROLLO

CAPTUO 29. Control gentico del ciclo de divisin celular.....................................................
1. Control gentico de la proliferacin y la muerte celular...........................................................
1.1. Control gentico de la proliferacin celular.......................................................................
1.2. Control gentico de la muerte celular.................................................................................
2. El cncer como descontrol gentico del ciclo celular...............................................................
2.1. Oncogenes..........................................................................................................................
2.2. Genes supresores de tumores..............................................................................................
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CAPTULO 30. Gentica del desarrollo.......................................................................................

1. Aspectos fundamentales de la gentica del desarrollo..............................................................
2. Determinacin del sexo en Drosophila y mamferos.................................................................
2.1. Determinacin del sexo en Drosophila...............................................................................
2.2. Determinacin del sexo en mamferos: el factor TDF.......................................................
3. Lnea somtica versus lnea germinal........................................................................................
4. Formacin de patrones complejos: el plan corporal bsico de Drosophila...............................
4.1. Sinopsis de la oognesis y del desarrollo embrionario de Drosophila...............................
4.2. Las asimetras citoplasmticas y la generacin de la diversidad morfolgica en el eje
antero-posterior...................................................................................................................
4.3. La sealizacin clula-clula y la generacin de la diversidad morfolgica en el eje
dorso-ventral.......................................................................................................................
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CAPTULO 31. Gentica del desarrollo en vertebrados y plantas...........................................
1. Paralelismo entre la formacin de patrones corporales en insectos y vertebrados..................

2. Inmunogentica........................................................................................................................
3. Aspectos diferenciales del desarrollo en plantas......................................................................
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NDICE
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1. Antecedentes histricos e inicio de la especialidad gentica....................................................

2. Metodologas genticas para el estudio del comportamiento....................................................
2.1. El mtodo comparativo.......................................................................................................
2.2. El mtodo de seleccin.......................................................................................................
2.3. Efectos de genes nicos sobre una pauta de comportamiento............................................
3. Gentica del comportamiento en Drosophila............................................................................
4. Gentica del comportamiento humano.....................................................................................
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CAPTULO 32. Gentica del comportamiento.............................................................................
SEXTA PARTE
LOS GENES EN LAS POBLACIONES

CAPTULO 33. Gentica de las poblaciones...............................................................................
1. La variacin gentica................................................................................................................
2. Estimaciones de la variacin gentica......................................................................................
3. Conservacin de las frecuencias gnicas: el equilibrio Hardy-Weinberg................................
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CAPTULO 34. Fuentes de variacin (1)......................................................................................
1. Fuentes de variacin..................................................................................................................
2. Procesos sistemticos................................................................................................................
2.1. Mutaciones..........................................................................................................................
2.2. Recombinacin...................................................................................................................
2.3. Migracin............................................................................................................................
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CAPTULO 35. Fuentes de variacin (2)......................................................................................
1. Seleccin....................................................................................................................................
1.1. Seleccin contra el alelo dominante...................................................................................
1.2. Seleccin contra el alelo recesivo.......................................................................................
1.3. Seleccin en contra y a favor de los heterocigotos.............................................................
1.4. Seleccin dependiente de la frecuencia..............................................................................
2. Deriva gentica..........................................................................................................................
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464
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CAPTULO 36. Gentica evolutiva...............................................................................................
1. Teoras evolutivas......................................................................................................................
2. Divergencia de las poblaciones.................................................................................................
3. El proceso de especiacin..........................................................................................................
4. La evolucin a nivel molecular.................................................................................................
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Autores
JOS FERNNDEZ PIQUERAS (1952)
Licenciado en Ciencias Biolgicas por la Universidad de Granada, Doctor por la Universidad Autnoma de Madrid y Catedrtico de Gentica en la Universidad Autnoma de Madrid. Ha
realizado estancias y mantenido relaciones de trabajo con numerosos Centros de Investigacin
nacionales e internacionales de prestigio (Max Planck, Medical School of the NY University,
CBM, CNB, CNIO, Instituto Pasteur de Pars, etc.) y ha dirigido o participado en numerosos proyectos de investigacin.
Sus lneas actuales de investigacin se centran en la caracterizacin de genes supresores y
modificadores implicados en el desarrollo de linfomas, y en la bsqueda de genes de susceptibilidad en enfermedades psiquitricas.
Autor de ms de 200 publicaciones en las revistas internacionales del mayor prestigio en sus
reas de investigacin: Cancer Research, Oncogene, American Journal of Medical Genetics,
Leukemia, Carcinogenesis, Molecular Psychiatry, Neuropsychopharmacology, Pharmagenetics,
etc.
Ha sido Director del Departamento de Gentica y del Departamento de Biologa y en la actualidad dirige el Laboratorio de Gentica Molecular Humana en la Universidad Autnoma de
Madrid.
Es miembro de numerosas Sociedades Cientficas como: la International Mammalian Genome Society, SEG, The American Association for the Advancement of Science, AEG, Asociacin
Espaola de Investigacin contra el Cncer, etc.
ANTONIA MARA FERNNDEZ PERALTA (1953)
Licenciada en Ciencias Biolgicas por la Universidad de Granada y Doctora en Ciencias
por la Universidad Autnoma de Madrid.
Sus lneas de investigacin se centran en el anlisis de alteraciones genticas implicadas en
el desarrollo del cncer (cncer colorrectal, gstrico y neoplasias hematolgicas), con especial
incidencia en las alteraciones en genes de predisposicin en sndromes de cncer hereditario.
Es autora de numerosas publicaciones en revistas internacionales de prestigio (Leukemia,
Cancer Genetics and Cytogenetics, British Journal of Cancer, Human Genetics, Annals of
Oncology, American Journal of Clinical Oncology, etc.) y ha dirigido o participado en numerosos proyectos de investigacin (CAyCYT, CICYT, FIS, Comunidad Autnoma de Madrid, Cooperacin con Iberoamrica, Unin Europea, etc.).
Colabora con diversos Centros de Investigacin y Hospitales (tanto nacionales como extranjeros) de reconocido prestigio. Ha recibido numerosos premios, entre los que destaca el Premio
Braun-Dexon, entregado por el Ministro de Sanidad en 1995, a la mejor publicacin en la revista
Ciruga Espaola.
Ha sido Vicedecana de Nuevas Titulaciones de la Facultad de Ciencias de la Universidad
Autnoma de Madrid.
Es miembro de varias Sociedades Cientficas como: The American Association for the
Advancement of Science, Sociedad Espaola de Gentica, Asociacin Espaola de Gentica
Humana, Asociacin Espaola de Investigacin contra el Cncer, etc.
FRANCISCO JAVIER SANTOS HERNNDEZ (1958)
Doctor en Ciencias Biolgicas por la Universidad Autnoma de Madrid (premio extraordinario de doctorado). Profesor Titular de Gentica de la Universidad Autnoma de Madrid.
Ha realizado estancias en Hahnemann University, Medical Center, Dpt. Neoplastic Diseases, New York University, Medical Center, Dpt. Pathology, Institut Pasteur de Paris, Unit Gntique des Mammifres.
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GENTICA
Ha participado como investigador en numerosos proyectos de investigacin. Autor de ms

de 30 artculos de investigacin en revistas cientficas internacionales: Oncogene y Cancer Research, etc.
JUAN JOS GONZLEZ AGUILERA (1953)
Licenciado en Ciencias Biolgicas por la Universidad de Granada y Doctor en Ciencias por
la Universidad Autnoma de Madrid.
Sus lneas actuales de investigacin se centran en el anlisis gentico del cncer
(colorrectal, gstrico y leucemias), colaborando con diversos Hospitales y Centros de
Investigacin espaoles y extranjeros.
Es autor de numerosas publicaciones cientficas en revistas internacionales de reconocido
prestigio (American Journal of Clinical Oncology, Annals of Oncology, British Journal of Cancer, Human Genetics, etc.).
Ha realizado diversas estancias pre y posdoctorales en Centros extranjeros y ha dirigido o
participado en numerosos proyectos de investigacin (CAyCYT, CICYT, FIS, CAM, AECI,
Unin Europea, etc.) y en contratos de I+D con empresas.
Ha recibido los siguientes premios: Premio al mejor pster presentado en el VII Congreso
Nacional de la Asociacin Espaola de Diagnstico Prenatal en noviembre de 1995. Premio
Braun-Dexon a la mejor publicacin en la revista Ciruga Espaola en 1995. Premios a la mejor
comunicacin presentada en el XXII Congreso Nacional de Ciruga, en 1996. Premio a la mejor
comunicacin presentada en el 15th World Congress of CICD, en Sel (Corea) en 1996.
Es miembro de varias Sociedades cientficas, siendo actualmente Vicepresidente de la Asociacin Espaola de Gentica Humana (AEGH).
Captulo
Introduccin
JOS FERNNDEZ PIQUERAS
(Concepto de gentica, evolucin histrica, cuerpo de doctrina,

perspectivas actuales, lecturas recomendadas)
22
GENTICA
Los mecanismos de la herencia encierran los procesos fisiolgicos posiblemente

ms complejos. Los organismos con reproduccin sexual encapsulan la informacin necesaria para crear otros miembros de su misma especie en los gametos, y las informaciones
complementarias de los dos progenitores se
unen en la clula huevo fecundada para poner
en marcha un programa gentico de desarrollo que conduce siempre a la produccin de un
organismo descendiente de la misma especie.
El estudio de la herencia fue slo un objeto de
especulacin para los filsofos hasta la invencin del primer microscopio en el siglo xvii
por Leeuwenhoek. Pero su abordaje cientfico
comenz realmente en la abada de Brno a finales del siglo xix. All naci la Gentica de
la mano de Gregor Mendel.
La Gentica se centra en el estudio del gen
como unidad funcional bsica de la herencia, y
el concepto actual de gen fue propuesto en
1865 por Mendel. Hasta entonces se pensaba
que los espermatozoides y los vulos contenan una muestra de las esencias de los organismos parentales, y estas esencias se mezclaban de alguna forma durante la fecundacin
haciendo posible el desarrollo de un nuevo organismo. Sin embargo los experimentos realizados por Mendel en el guisante le permitieron
proponer una teora particulada de la herencia. Segn Mendel, los caracteres fenotpicos
estaban determinados por unidades discretas
(los factores mendelianos, llamados despus
genes) que se heredaban intactos a lo largo de
las generaciones siguiendo unas pautas determinadas de transmisin (Leyes de Mendel).
Esta propuesta chocaba frontalmente con las
ideas existentes y los cientficos se dividieron
en dos bandos: mendelianos y bimetras.
Estos ltimos no aceptaban que la extraordinaria variacin de los caracteres observables en
los seres vivos se pudiese explicar con un nmero limitado (finito) de partculas discretas
(genes).
Gregor Mendel naci en 1822 en un
pueblecito de Heinzendorf -hoy Hynoice- en el
norte de Moravia, cuando esta regin perteneca al imperio Austro-Hngaro. Tras algunos
estudios en la Universidad de Olmutz ingres como fraile agustino en la abada de Brno.

Fracas en su intento de hacerse profesor de
Ciencias en la Universidad de Viena y volvi
a sus 31 aos a la vida monstica. Sin embargo Mendel tena grandes aptitudes para
las matemticas y el ajedrez y le apasionaba
la jardinera. A sus 34 aos inici una serie
de experimentos con los guisantes en los
huertos del monasterio plantando ms de
30.000 ejemplares en ocho aos. Tambin
trabaj con fucsias, el maz y otras plantas
obteniendo resultados similares. La interpretacin de sus resultados le llev a proponer
que los caracteres no se mezclaban en la descendencia, sino que exista algn tipo de
unidad gentica indivisible, de naturaleza
cuntica o particulada. Sus trabajos fueron
publicados en las actas de la Sociedad para
el Estudio de la Ciencia Natural de Brno, pero hastiado por la falta de reconocimiento
fue perdiendo inters por la Ciencia conforme ascenda en la jerarqua monstica hasta
convertirse en abad del monasterio.
Las leyes de Mendel permanecieron en
el olvido hasta su redescubrimiento a comienzos del siglo xx por tres investigadores
independientes (DeVries, Correns y Tschermak) que alcanzaron los mismos resultados
en diferentes materiales de estudio. En este
estado de las cosas Bateson propuso por
primera vez en 1906 el trmino Gentica
para referirse a una nueva ciencia emergente dedicada al estudio de la herencia y la
variacin de los seres vivos. Desde entonces
los trabajos de Mendel se consideran el punto de partida de la Gentica como Ciencia
moderna, y se le reconoce el mrito de haber
sabido abordar el anlisis de una realidad tan
compleja a partir de un modelo sencillo
(simplificado), utilizando escrupulosamente
el mtodo cientfico, y haciendo una correcta
interpretacin estadstica de los resultados.
Las leyes de Mendel dotaron de significado
cientfico las ideas evolucionistas surgidas a
finales del siglo xix. La teora de Darwin encontr en ellas un apoyo fundamental, porque la variabilidad de los caracteres en los
seres vivos, que era el sustrato indispensable
INTRODUCCIN
para que pudiese operar la Seleccin Natural,

se poda explicar ahora por la existencia de los
factores mendelianos y de sus cambios generados por la mutacin.
A finales del siglo xix los investigadores
estaban convencidos de que la base fsica de la
herencia radicada en el ncleo de las clulas, y
los candidatos ms atractivos para contener el
material gentico eran los cromosomas, por su
presencia en el ncleo y por su comportamiento durante las divisiones celulares y meiticas.
Naci as la Teora Cromosmica de la Herencia (o hiptesis de Sutton-Boveri) que ms tarde sera demostrada en todos sus extremos por
Thomas Hunt Morgan (Premio Nobel de 1933)
en Drosophila y Creighton y McClintock en el
maz. Los genes no slo estaban en los cromosomas, sino que adems se podan crear nuevas
combinaciones durante la meiosis mediante el
intercambio fsico entre cromosomas homlogos (recombinacin). La frecuencia de recombinacin entre los genes (o sus espacios
fsicos llamados loci) fue utilizada por Alfred Sturtevant (discpulo de Morgan) como un
criterio de distancia gentica para construir
los primeros mapas genticos de ligamiento.
Aos ms tarde, los resultados obtenidos por
Benzer sobre la recombinacin en virus obligaron a redefinir la terminologa gentica de
modo que el gen no sera ya la unidad de mutacin ni de recombinacin, pero segua siendo
la unidad funcional bsica de la herencia.
En 1909 Archivald Garrod propuso que
los factores mendelianos o genes eran en realidad recetas para fabricar protenas. Sus deducciones se basaron en la observacin de pacientes que tenan una enfermedad rara conocida como alcaptonuria. Los enfermos padecan artritis y su orina y la cera de sus odos se
volvan negras o rojizas al contacto con el aire
dependiendo de la ingesta. La profusin de
hijos enfermos a partir de padres sanos con algn grado de parentesco, hicieron pensar a Garrod que se trataba de una enfermedad heredable que se comportaba como un carcter
recesivo mendeliano. Sabedor de que la coloracin de la orina se deba a la presencia de
cido homogentsico, propuso que el gen alterado en los enfermos deba ser una protena
catalizadora de alguna reaccin metablica
que no se completaba por la mutacin de ese
gen en los enfermos. Sin embargo la demostracin de la hiptesis un gen-un enzima tuvo que
23
esperar an algunos aos hasta los trabajos

de Beadle y Tatum (Premios Nobel de 1958)
en la dcada de los cuarenta con mutantes
autotrficos de Neurospora. La caracterizacin de otras protenas complejas como la
hemoglobina, compuestas por dos cadenas
polipeptdicas diferentes, y el anlisis de
otras enfermedades como la anemia falciforme, sirvieron para confirmar y precisar la
relacin anterior aceptndose finalmente que
la accin primaria del gen era la sntesis de
un polipptido.
La demostracin de la naturaleza del
material gentico (ADN) tuvo su primer antecedente en el descubrimiento de los procesos de transformacin bacteriana por Avery, McLeod y McCarty en 1944. Ms tarde el
conocimiento del ciclo biolgico de los virus
(sobre todo los bacterifagos T de Escherichia coli) por Luria y Delbruck permitieron
que Hershey y Chase confirmasen en 1952
que el ADN era tambin el material gentico
de los virus. Delbruck, Luria y Hershey fueron galardonados con el Premio Nobel en
1969. Por aquel entonces, la incorporacin
de las bacterias y los virus al anlisis gentico, y el xito de los estudios genticos en los
microorganismos hicieron exclamar a Pasteur que el secreto del infinito sera encontrado en lo infinitamente pequeo. En 1953
Watson y Crick (Premios Nobel de 1962) establecieron el modelo de la doble hlice del
ADN, y propusieron el mecanismo semiconservativo como el ms probable para su
replicacin (fig. 1.1). Pero aunque el ADN
pareca una estructura suficientemente slida
y estable en las condiciones fisiolgicas de
la clula, Barbara McClintock pudo demostrar en el maz la capacidad de algunos
fragmentos para desplazarse dentro de un
mismo genoma. Estos fragmentos estaban
compuestos normalmente por uno o ms genes flanqueados por secuencias repetidas en
sus extremos, y se denominaron por su movilidad elementos genticos mviles o
transponibles. Barbara McClintock recibi
por este motivo el Premio Nobel en 1983.
Si los genes eran fragmentos de ADN
compuestos por cuatro bases nucleotdicas, y
las protenas estaban formadas por la combinacin de al menos veinte aminocidos
esenciales (esta cifra no fue siempre la mis
24
GENTICA
FIG. 1.1. La doble hlice de DNA y el cromosoma

ma, incluso ahora podra haber aumentado ligeramente hasta 23), haba que admitir la existencia de una clave o cdigo para traducir
el mensaje de los nucletidos en el de los aminocidos. El desciframiento del cdigo gentico fue el resultado de una extraordinaria labor
de investigacin desarrollada durante la dcada
de los sesenta. Antes se comprob que el ADN
era copiado inicialmente en una molcula
complementaria de ARN mensajero (ARNm)
(transcripcin). Despus, con la ayuda de una
molcula adaptadora (ARN transferente, o
ARNt) y el soporte de los ribosomas, se iban
aadiendo aminocidos (uno por cada tripleta
de bases o codn del ARN mensajero), que se
unan mediante enlaces peptdicos para formar
las cadenas polipeptdicas (traduccin) (fig.
1.2). Finalmente, los trabajos sobre la sntesis
in vitro de los cidos nucleicos de Severo

Ochoa y Arthur Kornberg (Premios Nobel de
1959) fueron esenciales para que Holley,
Khorana y Nirenberg (Premios Nobel de
1968) pudiesen descifrar el significado de
cada una de las tripletas de bases nucleotdicas posibles. Era un cdigo gentico de tripletas, degenerado y sin solapamientos.
Aos despus se pudo demostrar que las molculas recin sintetizadas (transcritas) de
ARN (sobre todo de los organismos eucariticos) necesitaban un periodo de maduracin
antes de alcanzar la forma madura funcional
(procesos de splicing). Sorprendentemente
una de esas etapas consista en la eliminacin de una parte sustancial del RNA (las secuencias intrnicas) de modo que el RNA
maduro o procesado estaba compuesto por la
INTRODUCCIN
25
FIG. 1.2. El dogma central d la Gentica Molecular.

.
mental para identificar o constatar la
unin de secuencias <exnicas>, consideraexistencia de una estructura o de una funblemente ms pequeas que los intrones (fig.
cin, porque slo se tiene constancia de ellas
1.3). En 1993 Roberts y Sharp ,recibieron el
cuando se pueden ver diferentes versiones
Premio Nobel por el descubrimiento de la namutacionales alternativas.
turaleza fragmentada del gen.
Se sabe que hay diferentes etapas en un
La mutacin es sin duda el paradigma
proceso metablico, o en un proceso morfode la Gentica. No slo es la fuente primaria
gentico del desarrollo, cuando se han podi
de variabilidad, sino que tambin resulta funda
FIG. 1.3. Naturaleza fragmentada del gen.
26
GENTICA
do aislar las variantes mutacionales de los genes que los controlan. Se sabe que existe un
gen cuando se encuentra alguna variante del
alelo salvaje producida por mutacin. La
prueba de alelismo o el anlisis de complementacin constituye una herramienta gentica esencial para decidir si las diferentes
mutaciones que afectan a un mismo carcter
son variantes allicas de un mismo gen o pertenecen a genes diferentes no allicos. Por este
motivo los genetistas han tenido siempre un inters primordial en el anlisis de las mutaciones, seleccionando las que ocurren de manera
espontnea, o inducindolas artificialmente. La
investigacin sobre mutagnesis tuvo sus
principales antecedentes en los trabajos de
Muller, que recibi el Premio Nobel de 1946
por el descubrimiento del efecto mutagnico
de los rayos X, y los de Stadler, quien demostr el efecto mutagnico de algunos productos
qumicos. Desde entonces la mutagnesis inducida es una prctica generalizada que se
proyecta tanto en la investigacin bsica como
en la aplicada (mejora gentica animal y vegetal).
Una vez conocida la naturaleza, la estructura y la accin primaria del gen las investigaciones se centraron en la bsqueda de los mecanismos de regulacin de la expresin gnica.
Se hizo pronto evidente que los procesos de
desarrollo eran el resultado de un programa
gentico que funcionaba creando unos patrones
de expresin gnica diferencial, porque los genes eran los mismos en todos los tipos celulares. Adems, la expresin de los genes pareca
poder cambiar (ahora de modo reversible) en
funcin de las necesidades de la clula. Una
vez ms las bacterias fueron la puerta de entrada al conocimiento de los mecanismos de
regulacin al demostrarse el modelo del opern bacteriano. Jacob, Monod y Lwoff fueron
galardonados con el Nobel de 1965 por sus
contribuciones al conocimiento del control de
la expresin gnica. Ms tarde Lewis, Nusslein-Volhard y Wieschaus recibieron el Nobel
de 1995 por sus descubrimientos sobre el control gentico del desarrollo temprano del embrin. La Gentica del Desarrollo ha tenido
otros ilustres investigadores que tuvieron el
acierto de incorporar organismos especialmen
te aptos para este tipo de estudios como Drosophila y el nematodo Caenorhabditis elegans (Brenner, Gehring, Lewis, Bellido, Morata, etc.). Matizando una frase anterior, el
material gentico puede en realidad sufrir
reordenaciones o cambios durante el
desarrollo en tejidos especficos, y uno de
los ms significativos est relacionado con la
capacidad de respuesta inmunolgica de los
organismos. En este sentido los trabajos de
Tonegawa (que recibi el Nobel de 1987)
fueron esenciales para el descubrimiento de
los mecanismos genticos responsables de la
gran diversidad de anticuerpos que puede
producir un organismo. Ms recientemente,
Hartwell, Nurse y Hunt fueron galardonados
con el Nobel de 2001 por su descubrimiento
de las protenas bsicas que controlan el ciclo celular (ciclinas y quinasas dependientes
de ciclinas). Estos hallazgos han tenido gran
trascendencia en el estudio de los mecanismos genticos que originan el cncer, puesto
que muchos de los genes implicados (oncogenes y genes supresores) actan directa o
indirectamente descontrolando el ciclo celular. Bishop y Varmus recibieron el Nobel de
1989 por sus descubrimientos sobre el origen celular de los oncogenes virales. Finalmente, los experimentos de donacin de
mamferos a partir de clulas diferenciadas
del adulto, y los mecanismos de regulacin
de naturaleza epigentica (basados en modificaciones qumicas de las histonas, y de
secuencias reguladoras especficas del
ADN), constituyen dos de los focos de mayor atencin de los genetistas en los ltimos
aos.
A mediados de los setenta tuvo lugar
una autntica revolucin tecnolgica en el
campo de la Gentica Molecular: fue el nacimiento de la llamada Ingeniera Gentica o Tecnologa del ADN recombinante.
Aprovechando la universalidad de los
procesos genticos esenciales, y la incorporacin de las endonucleasas de restriccin,
fue posible construir nuevas combinaciones de material gentico mezclando el de
organismos tan dispares como una bacteria y
el ser humano. La inclusin de un fragmento
gnico humano dentro de un plsmido bacte
INTRODUCCIN
riano (donacin molecular), en condiciones tales que era posible incluso su expresin, fue un
logro autnticamente revolucionario. Arber,
Smith y Nathans recibieron el Nobel de 1978
por el descubrimiento de las endonucleasas de
restriccin y su aplicacin en Gentica Molecular. Ms tarde Berg, Gilbert y Sanger recibieron el Nobel de 1980 por sus estudios sobre
el ADN recombinante, y el desarrollo de una
metodologa eficaz para la secuenciacin de
los cidos nucleicos. En 1993 Mullis fue galardonado con el premio Nobel de Qumica por
el desarrollo de la tcnica de amplificacin en
cadena de la polimerasa (PCR), que consiste
bsicamente en la posibilidad de replicar in
vitro cualquier fragmento de ADN de una
forma rpida y eficaz, sin necesidad de clonarlo. Las posibilidades abiertas por la Ingeniera
Gentica son extraordinarias. As, por ejemplo,
se ha hecho posible la mutagnesis dirigida,
es decir el diseo in vitro de mutaciones ad
hoc, el anlisis de la variabilidad gentica a
travs de las secuencias de nucletidos del
ADN (polimorfismos de ADN que sirven para
definir las huellas dactilares de ADN de los
organismos, y para completar la elaboracin de
los mapas genticos), la modificacin de organismos por transferencia gnica (organismos
transgnicos), la terapia gnica, y el desarrollo
de una nueva Biotecnologa que est revolucionado los planteamientos de la economa
mundial, y provocando sentimientos encontrados.
En los ltimos aos la comunidad cientfica internacional ha afrontado el reto de la secuenciacin de genomas completos para conseguir una visin integrada de la estructura y
funcin del genoma de los organismos (Genmica). El Proyecto Genoma Humano, la
aventura ms paradigmtica en este nuevo
campo, ha sido posible gracias a los notables
avances alcanzados en otras disciplinas como
la robtica y la bioinformtica. El mes de febrero de 2001 un Consorcio Internacional y la
empresa privada Celera Genomics hicieron
pblica la secuencia de bases nucleotdicas del
primer gran borrador del Genoma Humano. El
anlisis de los genomas secuenciados est
25
abriendo nuevas perspectivas para comprender el significado de los diferentes tipos de

secuencias de ADN, en la identificacin de
genes modificadores (implicados en los
caracteres complejos o multifactoriales), en
los estudios evolutivos, etc. El manejo de tan
ingente cantidad de informacin est siendo
posible gracias al desarrollo de la tecnologa de los biochips. En este nuevo contexto
se empieza a hablar de una Nueva Medicina
Genmica y de una Farmacologa Genmica, donde el diagnstico, el diseo de los
frmacos y los tratamientos, se apoyarn en
el conocimiento de la naturaleza estructural
y funcional de miles de genes analizados simultneamente en cada persona. El Centro
Nacional de Investigaciones Oncolgicas
(CNIO), ha desarrollado recientemente el
primer oncochip espaol para el estudio
del cncer.
Lecturas recomendadas
De Frutos Illn, R. (2000): Gentica y
Genmica, Universidad de Valencia.
Garrod, A. E. (1909): Inborn Errors of
Metabolism, Hodder & Stoughton, Londres.
Lacadena, J. R. (1995): Historia novelada de la Gentica, Instituto de Espaa/Real
Academia de Farmacia (pp. 1-83).
Lander, E. S. y Weinberg, R. A. (2000):
Genomics: journey to the center of biology, Science, 287, pp. 1.777-1.782.
Orel, V. (1996): Gregor Mendel. The
first geneticist, Oxford Univ. Press.
Ridley, M. (2000): Genoma, Taurus.
Watson, J. D. (1968): The double helix,
Signet, Nueva York.
Captulo
Principios bsicos de la herencia

1.
Las Leyes de Mendel

1.1. Los Experimentos de Mendel
1.2. Plantas que se Diferencian en un solo Carcter
(Cruzamientos Monohbridos)
1.3. Plantas que se Diferencian en Dos o Ms Caracteres
(Cruzamientos Dihbridos y Polihbridos)
2.
Teora Cromosmica de la Herencia

2.1. Los Genes Estn en los Cromosomas
2.2. Primeras Evidencias a Favor de la Teora Cromosmica
de la Herencia
3.
Las Leyes de Mendel en Organismos Haploides
4.
Ejemplos de Caracteres Mendelianos en la Especie Humana

4.1.
4.2.
4.3.
4.4.
5.
Enfermedades Autosmicas Recesivas

Enfermedades Autosmicas Dominantes
Enfermedades Recesivas Ligadas al X
Enfermedades Dominantes Ligadas al X
El Problema de la Compensacin de la Dosis Gnica

5.1. Herencia Ligada al Y
Lecturas Recomendadas
32
GENTICA
1. Las leyes de Mendel

1.1. LOS EXPERIMENTOS DE MENDEL
La eleccin del guisante de olor (Pisum

sativum) no fue una casualidad. Mendel conoca
muy bien sus tcnicas de cultivo (era posible
practicar la autofecundacin o la polinizacin
cruzada mediante castracin y aislamiento)
(fig. 2.1), tena un periodo corto de generacin
(se podan obtener nmeros elevados de
descendientes en relativamente poco tiempo), y
dispona de una gran variedad de semillas (con
efectos fenotpicos fcilmente distinguibles).
Finalmente Mendel tuvo el acierto de elegir
siete caracteres diferentes que se presentaban
bajo formas fenotpicas alternativas fcilmente
distinguibles (caracteres cualitativos/variacin
discontinua): semillas lisas/rugosas, cotiledones
amarillos/verdes, flores violetas/blancas, vainas
lisas/hendidas, legumbres (vainas) verdes/amari

llas, flores axiales/terminales, tallos largos/cortos, y consigui los siete pares de lneas o
razas puras (despus de sucesivas autofecundaciones durante dos aos), de tal manera
que cada una de ellas presentaba slo una de las
dos alternativas posibles del carcter en
cuestin (fig. 2.2).
1.2.
PLANTAS QUE SE DIFERENCIAN EN UN SOLO
CARCTER (CRUZAMIENTOS MONOHBRIDOS)
La realizacin de cruzamientos recprocos

(cambiando el sexo de los parentales) entre las
diferentes lneas puras (generacin parental, P)
le permiti obtener descendientes hbridos
(].'generacin filial o Ft), concluyendo (despus
de un buen planteamiento estadstico) que todos
los hbridos de un mismo cruce tenan la misma
forma del carcter, con independencia del sexo
FIG. 2.1. Tcnica de castracin y aislamiento, y los siete caracteres estudiados por Mendel en el guisante.
33
FIG. 2.2. Principios mendelianos de la uniformidad de la primera generacin filial y de la segregacin.
de los parentales, y que sta coincida con la

manifestada por uno de los parentales: era la
primera ley de Mendel o principio de la
Uniformidad de la primera generacin filial.
En estas condiciones, si se quera an aceptar
una explicacin basada en la teora de la
herencia de mezclas, haba que asumir que
uno de los dos fenotipos alternativos de cada
carcter tena que ser mucho ms fuerte que
el otro hasta el punto de enmascararlo completamente en los hbridos.
El paso siguiente fue obtener una segunda
generacin de plantas (F2) mediante autofecundacin. La mayora de los descendientes
(3/4) tenan el fenotipo de los hbridos F, pero,
sorprendentemente, 1/4 recuperaban la forma
del carcter enmascarada en la primera generacin filial. Mendel comprob mediante
nuevas autofecundaciones que los hbridos
mayoritarios de la F2 se podan subdividir en
dos subclases: 2/3 daban de nuevo una
descendencia con proporciones 3:1 (una F3
heterognea), y 1/3 parecan ser razas puras (es

decir, una F3 homognea e idntica a su
parental) (fig. 2.3). Llegado este punto ya era
imposible mantener la teora de la herencia de
mezclas, y haba que admitir que los hbridos
F, tenan que recibir de sus padres la capacidad
para expresar las dos formas alternativas de
cada carcter, y que stas podan ser transmitidas a la descendencia sin sufrir ninguna
modificacin. Mendel utiliz los trminos
dominancia y recesividad para referirse a este
fenmeno, de tal manera que el carcter que se
manifiesta en el hbrido sera el dominante, y el
enmascarado el recesivo. Con estos resultados
Mendel dedujo que:
1. Tenan que existir unos determinantes

hereditarios de naturaleza particulada que l
denomin factores mendelianos (despus
llamados genes por Johannsen en 1909).
34
GENTICA
FIG. 2.3. Principio mendeliano de la distribucin independiente.
2. Cada planta adulta habra de tener dos

genes (un par gnico) para cada carcter.
3. Los miembros de cada par gnico
tendran que segregar o separarse sin sufrir
modificaciones para formar los gametos
(segunda ley o Principio de la segregacin).
4. Cada gameto habra de tener un nico
determinante hereditario para cada carcter.
5. Los gametos parentales se deberan
combinar al azar, sin que influyan los factores
hereditarios que portan, para formar los zigotos
de la nueva progenie.
de la direccin del cruzamiento (cruzamientos

recprocos), y este fenotipo coincide con el
manifestado por uno de los parentales. Al
carcter correspondiente se le llama dominante
y al enmascarado recesivo.
2. Segunda ley de Mendel o Principio de la
segregacin. Los caracteres recesivos enmascarados en la F, heterocigtica de un cruzamiento entre dos lneas puras reaparecen en la
F2 con una proporcin especfica de 1/4, debido
a que los miembros de la correspondiente pareja
allica se separan (segregan) sin sufrir modificacin alguna para formar los gametos.
Utilizando la terminologa actual:

1. Primera ley de Mendel o Principio de la
Uniformidad de la primera generacin filial
(F,). Cuando se cruzan dos lneas o razas puras
(homocigticas) que difieren para un determinado carcter y la correspondiente pareja
allica (A,a), todos los individuos de la F,
presentan el mismo fenotipo con independencia
Los criterios para la denominacin de los

genes se basan normalmente en las caractersticas de la primera variacin mutante
encontrada del carcter, porque (como se
explic en el captulo anterior) slo se tiene
constancia de la existencia de un gen cuando
existen variaciones fenotpicas del carcter en
cuestin. La inicial en minscula del trmino

elegido constituye el smbolo para la
denominacin del alelo mutante. El alelo salvaje
o silvestre (wild type), que suele ser el
dominante y el que se encuentra con mayor
frecuencia en las poblaciones naturales, se
designa con esa misma letra en mayscula o con
la minscula seguida de un signo + como
superndice.
Adems de la fecundacin cruzada y la
autofecundacin Mendel utiliz profusamente
las tcnicas del retrocruzamiento (cruzar un
individuo con uno de sus parentales de la
generacin anterior) y el cruzamiento prueba
(cruzar cualquier individuo con el homocigtico
recesivo). Este ltimo procedimiento result
especialmente adecuado para averiguar el
carcter homocigtico o heterocigtico de los
individuos con fenotipo dominante.
1.3. PLANTAS QUE SE DIFERENCIAN EN DOS O MS

CARACTERES (CRUZAMIENTOS DIHBRIDOS Y
POLIHBRIDOS)
Hasta ahora slo se han considerado

organismos heterocigotos resultantes del
cruzamiento de dos lneas puras para un carcter
determinado (cruzamientos monohbridos), pero
que pasara con los cruzamientos entre los
dobles heterocigotos resultantes del cruce entre
lneas puras que difieren para dos caracteres
(cruzamientos dihbridos)? Mendel realiz
numerosos experimentos de este tipo utilizando
individuos de la F, resultantes del cruzamiento
entre razas puras que diferan para pares de
caracteres y, en todos los casos, la F2 se ajustaba
significativamente a las proporciones: 9/16 (con
los dos caracteres dominantes), 3/16 (con un
carcter dominante y otro recesivo), 3/16 (con el
otro carcter dominante y el otro recesivo) y
1/16 (individuos con los dos caracteres
recesivos) (fig. 2.3). A la vista de estos
resultados Mendel propuso su tercera ley o
Principio de la distribucin independiente,
que ahora se podra redactar como:
- Los miembros de parejas allicas
diferentes (A/a, B/b) se distribuyen o combinan
35
al azar, sin sufrir modificacin alguna, para formar los gametos de un individuo dihbrido para
los caracteres correspondientes.
Cuando se trata de ms de dos pares de
caracteres considerados a la vez se hablara de
polihibridismo (fig. 2.4).
2. Teora cromosmica de la herencia
2.1. LOS GENES ESTN EN LOS CROMOSOMAS
Los citlogos de finales del siglo XIX

conocan la existencia de la cromatina nuclear,
definida como una maraa de fibras con fuerte
apetencia por los colorantes bsicos que poda
visualizarse mediante microscopa ptica
(Flemming,1879). Tambin se saba que esta
maraa de fibras se transformaba en unas
estructuras individualizadas (los cromosomas)
(Waldeyer,
1898)
que
tenan
un
comportamiento caracterstico durante las
divisiones celulares y la formacin de los
gametos. En este caldo de cultivo el
redescubrimiento de las leyes de Mendel dio
sentido a estas observaciones citolgicas
naciendo la Teora Cromosmica de la
Herencia o hiptesis de Walter Sutton y
Theodore Boveri (1902). Segn esta hiptesis
los factores mendelianos tenan que estar en los
cromosomas (vehculos de la herencia), ya que
los alelos de un mismo par gnico segregaban
para formar los gametos de igual manera que lo
hacan los cromosomas homlogos de una
misma pareja de cromosomas, y los miembros
de parejas allicas diferentes (no homlogas) se
distribuan independientemente como lo hacan
tambin los cromosomas no homlogos.
2.2. PRIMERAS EVIDENCIAS A FAVOR DE
LA TEORA CROMOSMICA DE LA
HERENCIA
2.2.1 Observacin del comportamiento de los

cromosomas durante la mitosis y la meiosis
Como se ha mencionado, las primeras

evidencias a favor de la teora cromosmica de
la herencia vinieron de la observacin del com-
36
GENTICA
FIG.2.4. Polihibridismo.
portamiento de los cromosomas durante las

divisiones celulares. Llamaba poderosamente la
atencin la constancia en el nmero de
cromosomas entre las diferentes clulas de un
mismo organismo, a lo largo de las generaciones, y entre los individuos de la misma
especie. La constancia en el nmero de cromosomas se garantizaba mediante el proceso de
divisin celular que comprenda dos partes
perfectamente diferenciadas: la mitosis o cariocinesis (para el reparto equitativo del material
gentico nuclear de la clula madre entre las dos
clulas hijas) y la citocinesis (donde se produce
el reparto citoplasmtico). La constancia del
material gentico de una generacin a la siguiente se produca gracias a la meiosis, donde
se reduce la dotacin cromosmica a la mitad
para hacer posible la formacin de los gametos
durante la re-produccin sexual.
El ciclo de divisin celular (que ser objeto
de estudio en captulos posteriores) se inicia en

la interfase. Durante este periodo las clulas
duplican (replicacin) su material gentico
(periodo S entre dos gaps, GI y G2) de modo
que cada cromosoma queda constituido por dos
cromtidas hermanas. La mitosis propiamente
dicha comienza con la profase, cuando los
cromosomas inician un proceso de condensacin que les permite manifestarse como
entidades individualizadas, y se inicia la formacin del huso acromtico o mittico con la
duplicacin de los centrosomas. En la etapa
siguiente (prometafase) contina la condensacin de los cromosomas, desaparece la
membrana nuclear y el nuclolo, y los cromosomas comienzan su migracin hacia el plano ecuatorial del huso mittico. En metafase los
cromosomas han adquirido su mxima condensacin y se ordenan en la placa ecuatorial
unidos a los microtbulos del aparato mittico
37
FIG. 2.5. La divisin celular: Mitosis o cariocinesis y citocinesis.
por los cinetocoros centromricos. En anafase

se inicia la separacin (segregacin) de las
cromtidas hermanas de cada cromosoma hacia
los polos opuestos del huso. Finalmente en
telofase las cromtidas alcanzan los polos, comienzan a descondensarse, y se reorganizan la
membrana nuclear y el nuclolo. Una vez terminada la mitosis la divisin celular se completa durante la citocinesis generndose dos
clulas hijas con la misma constitucin gentica
que la clula madre (figs. 2.5 y 2.6a).
Por otro lado, las divisiones meiticas
forman parte de la gametognesis y consisten en
dos procesos diferentes de divisin celular
(meiosis I y II) que se suceden en los meiocitos
(un tipo especial de clulas diploides, 2n, de la
lnea germinal) para dar lugar a cuatro productos finales donde se ha reducido el material
gentico a la mitad (haploides, n) (fig. 2.6b).
Despus de un periodo interfsico donde se
duplica el material gentico, se inicia la meiosis
I (reduccional) que consta de las siguientes etapas: profase 1 (subdivisible en: leptotene, cigo-
tene, paquitene, diplotene y diacinesis), metafase I, anafase I y telofase I. En leptotene los cromosomas inician su con-densacin y comienzan
a visualizarse. En cigotene se inicia la formacin de los complejos sinaptonmicos que median el apareamiento de los cromosomas homlogos para formar los bivalentes (estructuras
cudruples con cuatro cromtidas). En paquitene se completa la formacin de los complejos
sinaptonmicos y se inicia el fenmeno del
crossing-over o entrecruzamiento. En diplotene desaparecen los complejos y se visualizan
con claridad los quiasmas en los lugares del
intercambio fsico entre cromtidas homlogas.
En diacinesis se inicia la co-orientacin de los
centrmeros de los bivalentes hacia la placa
ecuatorial del huso, y desaparecen la membrana
nuclear y el nuclolo. En metafase I los bivalentes estn perfectamente co-orientados en la
placa ecuatorial y se inicia la resolucin (terminalizacin) de los quiasmas. En anafase I se
produce la segregacin (reduccin cromosmica) de cromosomas homlogos quedando
38
GENTICA
FIG. 2.6. Representaciones esquemticas de los procesos mittico (a) y meitico (b).
do n cromosomas en cada polo (aunque cada

uno de ellos est duplicado con dos cromtidas).
En telofase I se recomponen el nuclolo y la
membrana nuclear formndose dos ncleos con
n cromosomas duplicados. La meiosis II
(ecuacional) parte de una segunda interfase que
no tiene periodo S de sntesis. En la profase II
se inicia de nuevo la condensacin de los
cromosomas y la desaparicin de la membrana
nuclear y el nuclolo. En metafase II los
cromosomas co-orientan sus centrmeros en la
placa ecuatorial. En anafase II los cromosomas
separan sus cromtidas hacia polos opuestos. Y,
finalmente, en telofase II se forman cuatro
productos meiticos haploides cada uno con una
cromtida y 1C pg de ADN.
En las plantas superiores (angiospermas) la
gametognesis ocurre en las anteras (microsporognesis) y los ovarios (megasporognesis),
y los productos finales de la meiosis (me-
iosporas) se transforman en los gametos (ncleos espermticos y ovoclula) despus de una

serie de divisiones mitticas dentro del grano de
polen y el saco embrionario (gametofitos). En
los mamferos y otros animales la gametognesis (espermatognesis y oognesis) tiene
lugar en las gnadas masculinas y femeninas y
existen notables diferencias entre ambos sexos.
La gametognesis se completa despus de la
meiosis con unos procesos adicionales (espermiognesis y ovognesis) que conducen a la
formacin de los gametos maduros (espermatozoides y vulos) (fig. 2.7).
2.2.2. La herencia ligada al sexo
y los fenmenos de no-disyuncin en
Drosophila
En los enunciados de Mendel, los resultados

de los cruzamientos no diferan aunque se
39
FIG. 2.7. La gametognesis en mamferos.
cambiase el sexo de los padres (cruzamientos

recprocos), pero pronto se encontraron patrones
de herencia excepcionales que se deban a la
existencia de cromosomas sexuales heterlogos
(X e Y) con regiones diferenciales, y que obligaron a realizar una primera extensin del
anlisis mendeliano. La existencia de este tipo
de cromosomas fue ya apuntada por Henking
(1891) y Wilson (1905) en hempteros, y por
Nettie Stevens en un escarabajo (tenebrio) y en
Drosophila, donde los machos tenan un par
cromosmico heteromrfico (XY).
Las primeras evidencias sobre la existencia
de unos patrones especiales de herencia ligada
al sexo se obtuvieron en 1909 en el laboratorio
de Thomas Hunt Morgan, que iniciaba entonces
sus estudios sobre la mosca del vinagre
(Drosophila melanogaster). Morgan comprob
que los cruzamientos recprocos entre individuos con ojos rojos (carcter salvaje) y ojos
blancos (mutantes white) conducan a resultados
diferentes si se cambiaba el sexo de los
parentales, y propuso una explicacin basada en
la existencia de los cromosomas X e Y (que

parecan determinar el sexo de las moscas:
hembras XX y machos XY) suponiendo que el
locus white debera estar en la regin diferencial
del cromosoma X (que no tena homologa en el
Y), es decir, los machos seran hemicigticos
(fig. 2.8). El anlisis gentico y citolgico de los
individuos resultantes de los cruzamientos recprocos permiti confirmar esas predicciones
demostrndose por primera vez el comportamiento paralelo de genes y cromosomas. Es
decir, los genes tenan que estar en los cromosomas.
Esta hiptesis se vio reforzada con el
descubrimiento posterior de los fenmenos de
no-disyuncin por Calvin Bridges (uno de los
discpulos de Morgan). Bridges observ que
algunos descendientes del cruce entre hembras
de ojos blancos y machos de ojos rojos eran
excepcionalmente machos de ojos rojos (estriles) y hembras de ojos blancos (frtiles)
(progenie excepcional primaria). Adems, cuando cruzaba una de esas hembras excepcionales
40
GENTICA
FIG. 2.8. Herencia ligada al sexo en Drosophila.
con un macho de ojos rojos normal el 4 % de la

progenie volva a estar constituida por machos
excepcionales de ojos rojos (ya frtiles) y
hembras excepcionales de ojos blancos
(progenie excepcional secundaria) (fig. 2.9).
Bridges propuso que la progenie excepcional
primaria se debi producir por un fenmeno de
no-disyuncin (no-separacin) de los dos
cromosomas X en algunas meiosis de una
hembra a la hora de formar sus gametos. De esta
forma la progenie excepcional primaria tendra
que estar formada por machos estriles XO (sin
cromosoma Y) y superhembras XXY de ojos
blancos (fig. 2.10). De nuevo el anlisis
citolgico permiti confirmar esta hiptesis,
reafirmndose an ms la idea de que los genes
tenan que estar situados dentro de los
cromosomas. Los fenmenos de no-disyuncin
pueden producirse tanto en mitosis como en

meiosis, y durante la primera o la segunda
divisin meitica (fig. 2.11).
Como consecuencia de los procesos
evolutivos muchos organismos han alcanzado
un claro dimorfismo sexual, y desarrollan unos
cromosomas sexuales diferentes a los de la
mayora autosmica. Los cromosomas sexuales
de ambos sexos suelen presentar un grado
considerable de heterologa, de modo que
mantienen regiones homlogas (necesarias para
el apareamiento en meiosis) pero tienen tambin
regiones no-homlogas que pueden contener
genes especficos de un sexo en condiciones de
hemicigosis. Este ha sido el caso de Drosophila
y el del propio ser humano (22 autosomas y un
par de cromosomas sexuales), donde el sexo
heterogamtico es el masculino y el homogam-
41
FIG. 2.9. El fenmeno de la no-disyuncin.
tico (XX) el femenino. Los genes presentes en

las regiones diferenciales no-homlogas del
cromosoma X definirn patrones de herencia
ligada al X. Los presentes exclusivamente en el
Y patrones de herencia ligada al Y. En el caso
de las mariposas y aves el sexo heterogamtico
es el femenino (WZ) y el homogamtico el
masculino (ZZ). Algunas plantas diicas, como
Melandrium album tienen tambin cromosomas
sexuales diferenciados (XY las plantas macho y
XX las hembra) (fig. 2.12).
Las caractersticas morfolgicas y el
contenido gnico de los cromosomas sexuales
(sistemas de determinismo cromosmico del
sexo) pueden ser muy diferentes de unas
especies a otras. As, por ejemplo, la presencia
de un solo cromosoma Y frente a uno o dos
cromosomas X puede ser suficiente para
determinar el sexo masculino en el hombre,

pero no en Drosophila. Por el contrario la
ausencia de cromosoma Y (XO) provoca la
aparicin del sexo femenino en el ser humano y
del masculino en Drosophila. Como se ver ms
adelante el cromosoma Y humano contiene un
gen determinante primario del sexo masculino
(SRY), mientras que la determinacin de sexo en
Drosophila depende bsicamente de un delicado
equilibrio entre las dotaciones de autosomas y
cromosomas sexuales.
3. La leyes de Mendel en organismos
haploides
Las leyes de Mendel son aplicables en todos

los organismos con reproduccin sexual incluyendo los de naturaleza diploide y haploide.
42
GENTICA
FIG. 2.10. Fundamentos cromosmicos de la no-disyuncin.
Sin embargo puede resultar especialmente

formativa la demostracin de los principios de
Mendel en organismos haploides por las
caractersticas especiales de sus ciclos de vida, y
por las diferencias en el diseo experimental.
Utilizando como ejemplo el alga unicelular
Chlamydomonas, y el par gnico arg+/arg- (un
alelo salvaje y un mutante auxotrfico incapaz
de sintetizar arginina), se pueden obtener
monohbridos (zigotos diploides) al cruzar dos
cepas haploides (mt+ y mt-) que aporten una el
alelo salvaje y la otra el mutante. Cada zigoto
(1, 2, 3, etc.) experimentar un proceso
meitico, y los cuatro productos de cada meiosis
(ttradas) se pueden sembrar (ordenados en fila)
en una placa de Petri con un medio mnimo
suplementado con arginina. Al cabo de varias
divisiones celulares mitticas (reproduccin
asexual) cada producto meitico (alga haploide)

se habr transformado en una colonia cuyo
genotipo se puede determinar en una placa
replicada con medio mnimo. La hiptesis del
principio de la segregacin exigira que slo
sobrevivieran dos de cada cuatro colonias en
cada fila (fig. 2.13).
La demostracin del principio de la distribucin
independiente se podra hacer de manera
anloga con algas dihbridas para dos marcadores o mutantes bioqumicos como los mutantes arginina (arg-) y acetato (ac-). En este
caso el recuento de los productos meiticos (que
deberan ser de cuatro tipos distintos y en
proporcin 1:1:1:1) se puede simplificar comparando directamente el nmero de ditipos
parentales (DP, ttradas que slo tienen los dos
tipos de combinaciones allicas de las algas
parentales)
43
FIG. 2.11. No-disyuncin en la primera y segunda divisiones meiticas.
y el de ditipos no-parentales (DNP, ttradas con

slo dos tipos de combinaciones pero diferentes
a las de los parentales). Los tetratipos (T,
ttradas con cuatro combinaciones diferentes)
podran ser obviados porque cada uno de ellos
contiene ya las cuatro combinaciones posibles
(fig. 2.14).
4. Ejemplos de caracteres mendelianos
en la especie humana
La imposibilidad evidente de disear

cruzamientos ad hoc hace que el anlisis
gentico en la especie humana se tenga que
limitar a la observacin de los caracteres en
familias, genealogas o pedigrs ya existentes.
Por otro lado, los caracteres hereditarios ms
fcilmente analizables son sin duda las enfermedades sencillas monognicas, llamadas
tambin mendelianas porque se ajustan a
unos patrones de transmisin mendelianos.
Normalmente se parte de un individuo
enfermo (propositus) a partir del cual se analiza
y completa toda la genealoga. En la figura 2.15
se resumen los smbolos utilizados para la

elaboracin de pedigrs, y la figura 2.16 recoge
algunos ejemplos de enfermedades hereditarias
humanas con diferentes patrones de transmisin.
4.1. ENFERMEDADES AUTOSOMICAS RECESIVAS
1. Fenilcetonuria (PKU). En el ser humano

hay nueve aminocidos esenciales que deben
figurar en la dieta porque no pueden ser
biosintetizados. Uno de ellos es la fenilalanina
que constituye la va de entrada de una compleja
red de reacciones metablicas. Los individuos
fenilcetonricos son homocigticos para una
mutacin de carcter recesivo en el gen de la
fenilalanina-hidroxilasa que impide el paso de
fenilalanina a tirosina, acumulndose la fenilalanina que se convierte en cido fenilpirvico detectable en la orina. Es una enfermedad rara (1 de cada 12.000 nacimientos)
donde las personas afectadas tienen problemas
neurolgicos (exaltacin de los reflejos, crisis
44
GENTICA
FIG. 2.12. Cromosomas sexuales heterlogos.
convulsivas y retraso mental), y suelen tener

una coloracin menos intensa de la piel y el
cabello (porque se puede ver afectada la sntesis
de melanina). Actualmente existen pruebas
sencillas de deteccin precoz con la orina del
recin nacido, y una pequea muestra de sangre
del taln. El consumo de una dieta carente en
fenilalanina evitara el retraso mental y las
lesiones del sistema nervioso, consiguindose
un desarrollo razonablemente normal del nio.
2. Albinismo. Su forma ms frecuente es el
albinismo culo-cutneo (OCA) que se caracteriza por la incapacidad de sintetizar melanina
en la piel, el pelo y los ojos. Es tambin una
enfermedad recesiva donde los afectados son
homocigticos para una mutacin en el gen de

la tirosinasa, que cataliza la oxidacin de la
tirosina a DOPA, y el paso de DOPA a DOPA
quinona (sustancias todas ellas precursoras de la
sntesis de melanina). La frecuencia de esta
enfermedad vara mucho en las diferentes
poblaciones humanas, pero oscila entre 1/200
personas (indios hopi y navajos norteamericanos) y 1/37.000 personas entre los individuos de raza blanca en USA.
3. Fibrosis qustica (FQ). En este caso el gen
mutante (CF) acta esencialmente sobre las
glndulas exocrinas (como las que producen
mucosidad, sudor o enzimas digestivas) alterando los canales de cloro de sus membranas,
45
FIG. 2.13. Principio de la segregacin en el alga Chlamydomonas.
y produciendo una liberacin excesiva de sal

que sera perceptible en el sudor. En la FQ se
producen verdaderos atascos en los conductos
pulmonares (congestiones pulmonares graves) y
pancreticos que llevan a la formacin de
quistes y la degeneracin de esta glndula que
se vuelve fibrosa. La incidencia de esta
enfermedad oscila entre 1/2.000 nacimientos y
1/150.000 segn las poblaciones humanas de
que se trate. El gen responsable fue localizado
en el cromosoma 7 (7g31), y codifica una
protena reguladora de la conductancia a travs
de la membrana (CFTR).
4.2. ENFERMEDADES AUTOSMICAS
DOMINANTES
1. Corea de Huntington (CH). Se trata de

una degeneracin del sistema nervioso central
que se traduce en sacudidas involuntarias de la
cabeza y los miembros (de ah el nombre de
corea), demencia (deterioro mental) y muerte
prematura. Es una enfermedad de manifestacin
tarda (entre los 30 y los 50 aos).
El gen afectado fue localizado en 4pl6 y
codifica para una protena fundamental (hun-
tingtina). La mutacin dominante consiste en

una expansin anormal de la secuencia CAG
(citosina-adenina-guanina) dentro de un exn
del gen.
2. Acondroplasia (A). Es un tipo de enanismo que se hereda segn un patrn
autosmico dominante, y afecta a 1/30.000
nacidos. El fenotipo de los afectados se caracteriza por el desarrollo anormal de los huesos
largos de brazos y piernas (ms cortos) y del
crneo (que en este caso es mayor de lo
normal). El tronco no se ve afectado y se puede
observar tambin un buen desarrollo muscular.
La inmensa mayora de los enfermos son
heterocigticos puesto que la homocigosis para
la mutacin dominante resulta letal. Por tanto
dos individuos afectados podran tener hijos
completamente normales con una probabilidad
de 1/a.
3 y 4. Polidactilia y braquidactilia. Son
tambin malformaciones que se ajustan a unos
patrones de herencia autosmicos dominantes, y
se caracterizan por la aparicin de dedos extra
en manos y/o pies (polidactilia), o de manos con
dedos cortos (braquidactilia).
46
GENTICA
FIG. 2.14. Principio de la distribucin independiente en el alga Chlamydomonas.

4.3. ENFERMEDADES RECESIVAS LIGADAS AL X
1. Daltonismo. Su forma ms frecuente es la

ceguera para los colores rojo-verde. La ceguera
para el color rojo (protanopia) y para el verde (y
otros colores de la regin intermedia del
espectro de la luz visible) (deuteranopia) se
deben a mutaciones recesivas en dos genes
distintos ligados al X. La tritanopia, o ceguera
para el azul, se hereda como un carcter
autosmico dominante (mutacin en un gen del
cromosoma 7). Los tres genes codifican para un
tipo especial de protenas (opsinas) que se unen
a los correspondientes pigmentos visuales en las
clulas de la retina (conos) creando complejos
visuales sensibles a la luz visible en

determinadas longitudes de onda. Se sabe que
hay un solo gen para la opsina del pigmento
rojo, pero puede haber hasta tres genes distintos
para la opsina del pigmento verde. Por tanto se
podran encontrar varias combinaciones genotpicas y fenotpicas diferentes.
2. Hemofilia. Existen varios tipos pero todos
coinciden en la existencia de defectos en los
mecanismos de coagulacin de la sangre. La
coagulacin de la sangre es un proceso fisiolgico bastante complejo que requiere del
concurso de muchas protenas. La hemofilia A
47
FIG. 2.15. Simbologia utilizada para la elaboracin de pedigrs en la especie humana.
es la forma ms frecuente (1/10.000 varones y

1/100 millones de mujeres) y se debe a la falta
del factor VIII de coagulacin. En la hemofilia
B falta el factor IX. La enfermedad se produce
por una mutacin recesiva en alguno de estos
genes ligados al X. Hay, no obstante, un tercer
tipo de hemofilia causada por la mutacin de un
gen autosmico recesivo.
3. Distrofia Muscular de Duchenne (DMD).
Es un tipo de distrofia muscular (debilidad y
atrofia progresiva del tejido muscular) ligada al
X. Afecta a 1/3.500 hombres, y suele iniciarse
entre el primero y el sexto ao de vida. El
deterioro causado suele conducir a los enfermos
a una silla de ruedas (en torno a los 12 aos), y
acaba produciendo su muerte en tomo a los
veinte. El gen alterado codifica para

la distrofna, una protena fundamental que se
une a la cara interna de la membrana celular en
las clulas musculares estabilizndolas durante
la contraccin muscular. La Distrofia Muscular
de Becker (DMB) es una forma menos grave
causada por otro tipo de mutaciones menores
(deleciones ms pequeas) en el mismo gen.
4.4. ENFERMEDADES DOMINANTES LIGADAS AL X
1.Hipofosfatemia. Es una enfermedad caracterizada por un dficit de fosfatos. Deriva en un

tipo de raquitismo que no responde al tratamiento con vitamina D.
48
GENTICA
FIG. 2.16. Genealogas caractersticas de diferentes modos de herencia.
5. EI problema de la compensacin
de la dosis gnica
Los patrones de herencia ligados al X se

pueden complicar por la existencia de un
proceso de compensacin de la dosis gnica que
conduce a la inactivacin de una fraccin
significativa de los genes de uno de los dos
cromosomas X en la lnea somtica de las
hembras de mamferos. Aunque este mecanismo
ser estudiado con detalle en el captulo de
Epigentica, se puede adelantar que la inactivacin ocurre al azar en las primeras etapas
del desarrollo embrionario, aunque una vez
tomada la decisin de inactivar a uno de los dos
X este patrn de inactivacin se hereda
clonalmente en todas las clulas descendientes. Este hecho puede generar situaciones de mosaicismo en el adulto que seran
especialmente detectables en algunas mujeres,
como las heterocigticas para una mutacin
recesiva ligada al X que determina la ausencia
de glndulas sudorparas. En estas mujeres se
pueden observar sectores de su cuerpo con o sin
glndulas dependiendo del cromosoma X que se
haya inactivado.
5.1. HERENCIA LIGADA AL Y
El mejor ejemplo podra ser el carcter

determinacin primaria del sexo que depende
del gen SRY presente en la regin diferencial del
cromosoma Y (hemicigosis). Tambin se ha
sugerido que la hipertricosis del pabelln

auricular (crecimiento de pelo en el borde de la
oreja) podra deberse a un
exclusivamente en el cromosoma Y.
gen
presente
49
McKusick, V. A. et al. (1990): Mendelian inheritance

in man, Johns Hopkins Press (9.a ed.). Versin
electrnica actualiza permanentemente (OMIN) en
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ Omin.
Stern, C. y Sherwood, E. R. (1996): The origins of

Genetics: A Mendel source book, W. H. Freeman.
Cummings, M. R. (1995): Herencia humana:

principios
y
conceptos,
InteramericanaMcGraw/Hill (3.' ed.).
Sturtevant, A. H. (1965): A history of Genetics,

Harper & Row.
Captulo
Naturaleza y estructura
del material gentico
1.
Demostracin de la Naturaleza del Material Gentico en

Bacterias y Virus.
1.1. El Principio Transformante en las Bacterias
1.2. Demostracin de la Naturaleza del Material Gentico en
Bacterifagos
2.
El ARN Puede ser el Material Gentico de algunos virus
3.
Los Priones
4.
La Estructura del Material Gentico
5.
Secuencias de ADN en los Genomas de procariotas

y eucariotas
52
1.
GENTICA
Demostracin de la naturaleza del

material gentico en bacterias y
virus
Aunque Mendel propusiera a finales del siglo

xix la teora particulada del gen, la demostracin de que el material gentico estaba compuesto por ADN tuvo que esperar ms de cuarenta aos hasta los trabajos realizados por
Avery, MacLeod y McCarty en bacterias
(1944). Sin embargo la comunidad cientfica se
neg a aceptar que la herencia y la variabilidad
estuviesen en manos de un polmero tan
montono (construido con slo cuatro bases
nucleotdicas), en lugar de las protenas (compuestas por un nmero ms elevado de unidades
bsicas, los aminocidos) que pareca lo ms
razonable. Los trabajos de Avery et al. fueron
ignorados hasta que en 1952 Hershey y Chase
demostraron que el ADN era tambin el
material gentico de unos bacterifagos de
Escherichia coli.
1.1. EL PRINCIPIO TRANSFORMANTE EN

LAS BACTERIAS
La demostracin de la naturaleza del material gentico se hizo por primera vez en la

bacteria Diploccoccus pneumoniae, que produce
la neumona neumoccica en el hombre, y
puede matar a un ratn por septicemia 24 horas
despus de su inoculacin intraperitoneal.
Existen dos formas (cepas) bsicas de la
bacteria: una no virulenta (de aspecto rugoso, R)
y otra virulenta, de aspecto liso por su cubierta
polisacardica (S, del ingls smoth). Adems,
la inocuidad/virulencia era una caracterstica
claramente heredable. Las dos cepas podan a su
vez subdividirse por criterios serolgicos (tipos
II, III, etc.) y era posible el paso de S a R por
mutacin y, con menor frecuencia, la
retromutacin (R a S), aunque mantenindose
siempre el mismo tipo serolgico.
En 1928 Griffith et al. comprobaron que la
inoculacin intraperitoneal de ratones con
bacterias R no causaba dao alguno al animal,
pero que cuando se utilizaban las bacterias S
el ratn mora de septicemia y se podan recoger
en su sangre bacterias S del mismo tipo serolgico que las utilizadas en la inyeccin (fig.
3. la y b). Como era tambin de esperar cuando
la inoculacin se realizaba con extractos de
bacterias S muertas por calor los ratones no
sufran la infeccin (fig. 3.1c) pero,
sorprendentemente, la inoculacin con extractos
de bacterias S muertas por calor y bacterias R
vivas de distinto tipo serolgico, produca la
muerte del animal y se podan recoger en su
sangre bacterias S vivas del mismo tipo
serolgico que las R (fig. 3.ld). Estos resultados
no podan explicarse por la ya obsoleta teora de
la generacin espontnea (revitalizacin de
las S muertas), ni por un fenmeno mutacional
(dada la frecuencia del evento, y el tipo
serolgico de las S que se recogan despus de
la doble infeccin). Se trataba por tanto de un
nuevo
fenmeno
que
se
denomin
transformacin bacteriana provocado por la
presencia de algn tipo de principio transformante en el extracto de las S muertas.
Adems, ese principio transformante tendra
que ser el material gentico de las bacterias,
puesto que era capaz de cambiar de forma
estable una de sus caractersticas genticas: el
carcter inocuidad/virulencia. Unos aos
despus se demostr que el fenmeno de la
transformacin bacteriana poda suceder
tambin in vitro, sustituyendo el ratn por un
tubo de ensayo que contena las soluciones con
los distintos tipos bacterianos (Dawson y Sia,
1931).
La bsqueda de la naturaleza del principio
transformante tuvo sus primeros frutos en 1933
cuando se demostr que tena que estar en el
extracto de las clulas S muertas por calor
(Alloway, 1933). Sin embargo el xito definitivo lleg con los trabajos de Avery, MacLeod y
McCarty (entre 1944 y 1946) quienes consiguieron aislar con un grado de pureza suficiente
los componentes mayoritarios del extracto de
las bacterias S muertas por calor (polisacridos,
lpidos, protenas, ARN y ADN), y lograron
demostrar que bastaba con la inoculacin de
ADN para transformar las bacterias R vivas. El
material gentico de las bacterias debera ser
por
tanto
el
ADN
(fig.
3.2).
FIG. 3.1. Experimentos
53
de Griffith et al. para la demostracin de la naturaleza del material gentico en bacterias.
1.2. DEMOSTRACIN DE LA NATURALEZA DEL

MATERIAL GENTICO EN
BACTERIFAGOS
Los antecedentes de este descubrimiento

hay que encontrarlos en los trabajos pioneros de
Delbruck y Luria y su contribucin al conocimiento de la estructura y el ciclo biolgico de
los bacterifagos de la serie T de E. coli. Los
bacterifagos T2 y T4 estaban compuestos por
tres elementos estructurales: una cubierta polidrica, un cuello y unas estructuras fibrosas
(todos de naturaleza proteica), y albergaban una
madeja de ADN en el interior de la cabeza.
Durante su ciclo de vida se adsorban especficamente a las paredes de las bacterias receptoras a travs de sus fibras, introducan alguno
de sus elementos constitutivos (ADN o protenas), y al cabo de unos minutos se podan recoger nuevas progenies de bacterifagos despus
de la lisis bacteriana. Por tanto, lo que entrase

dentro de la bacteria receptora tendra que ser el
material gentico.
En 1952 Hershey y Chase realizaron una
serie de elegantes experimentos basados en el
marcaje radiactivo diferencial de protenas y
ADN. Hicieron crecer las bacterias durante
varias generaciones en medios nutritivos con
istopos pesados del azufre o del fsforo para
marcar diferencialmente las protenas (35S) y el
ADN (32P). Cuando estas bacterias sufran el
ataque de bacterifagos T2, los fagos resultantes
de las lisis tendran igualmente marcadas sus
protenas o su ADN. En sus experimentos los
fagos marcados eran separados de la pared
bacteriana antes de la lisis pero despus de
haber inoculado su material gentico
(agitacin mecnica), y se meda la emisin de
radiactividad en la fraccin bacteriana (con el
material gentico dentro), y en las cu-
54
GENTICA
F. 3.2. Experimentos de Avery et al. para la identificacin del principio transformante.
biertas desprendidas de los fagos (gost). Los

resultados demostraron que cuando los fagos
estaban marcados con 35S la mayor parte de la
radiactividad quedaba fuera de las bacterias,
pero cuando se marcaban con 32P la radiactividad estaba sobre todo en la fraccin
bacteriana (fig. 3.3). Por tanto era el ADN el
que penetraba en las bacterias receptoras y, por
tanto, el responsable de generar las nuevas
partculas de fagos: es decir, tendra que ser el
material gentico.
2.
El ARN puede ser el material

gentico de algunos virus
Despus de los trabajos de Hershey y Chase

la comunidad cientfica acept que el ADN
debera ser el material gentico. Pero pronto
esta afirmacin hubo de hacerse extensiva a
cualquier tipo de cidos nucleicos. En algunos virus como el VMT (virus del mosaico del
tabaco), los retrovirus, reovirus, etc., el material
gentico es el ARN. La ausencia de ADN en la
composicin de este tipo de virus era ya
bastante indicativa, pero aquella afirmacin se
pudo sustentar tambin en algunos experimentos demostrativos, como los de reconstitucin

in vitro realizados a mediados de los cincuenta
por Fraenkel-Conrat, Williams y Singer en el
VMT. Estos virus se caracterizaban por su
extrema sencillez: una estructura helicoidal de
protenas que protega una espiral de ARN.
Estos dos componentes se podan separar con
suma facilidad, y al ponerlos de nuevo en contacto se produca la reconstitucin espontnea
del virus. El diseo experimental consisti en
reconstituir virus enfrentando las protenas de
un tipo de virus con el ARN de otro, y analizar
la descendencia despus de la inoculacin de los
virus reconstituidos en hojas de tabaco. El
resultado fue muy esclarecedor: los virus descendientes eran siempre del tipo marcado por el
ARN del hbrido (fig. 3.4). Gierer y Schramm
demostraron despus que el ARN purificado del
VMT era capaz de producir por s solo las mismas lesiones en la hoja del tabaco que las ocasionadas por el virus completo. Por tanto era
evidente que el ARN era en este caso el material
gentico.
FIG. 3.3. Demostracin
3.
55
de la naturaleza del material gentico en virus bacterifagos.
Los priones
El material gentico es siempre (sin excepcin) ADN o ARN, pero hay un caso realmente
singular de protenas infectivas que son responsables de la transmisin de algunas enfermedades infecciosas. Se conocen al menos tres
de estas enfermedades que afectan al sistema
nervioso en el ser humano (el kuru, la enfermedad de Creutzfeldt-Jacob y la enfermedad de
Gerstmann-Straussler-Scheinker) y algunas
que afectan a los animales (el prurigo lumbar de
ovejas y cabras, la encefalopata espongiforme
bovina, la encefalopata contagiosa del visn y
la diarrea crnica de ciervos y alces). Todas
ellas pueden transmitirse por la ingestin de una
protena alterada procedente de
un organismo infectado. El kuru se encontr en

tribus de Nueva Guinea que practicaban el canibalismo. En los ltimos aos se han encontrado evidencias de la transmisin de la encefalopata espongiforme bovina hacia el hombre
(enfermedad de las vacas locas) por la ingestin de protenas infectivas procedentes de
piensos realizados a partir de restos de animales
enfermos.
Las protenas infectivas son las versiones
mutadas de otra normal (el prin) que es absolutamente necesaria en el tejido nervioso (y otros
relacionados ontognicamente) de los organismos normales (la palabra prin viene de partcula proteica infectiva, PiP) (vase fig. 3.5).
La protena normal fue aislada por Stanley Prusiner; despus se identific el gen que la codifi-
56
GENTICA
Fig. 3.4. Demostracin de la naturaleza del material gentico en el virus del mosaico del tabaco.
Caba, y se descubri que poda mutar

producindose entonces los cambios de
configuracin que caracterizan las versiones
<<infectivas>>, extraordinariamente resistentes
a su degradacin. Por tanto este tipo de
enfermedades puede tener un componente
hereditario (cuando se hereda el gen mutado), o
pueden adquirirse por la ingestin de
<<protenas infectivas>>.
Uno de los mecanismos sugeridos para
explicar el carcter infectivo de las <<protenas
mutantes>> se basa en que, al unirse a una
protena normal, la protena infectiva cambia la
configuracin de la normal haciendo que
adquiera la <<malignizada>> de la infectiva.
Por tanto el desarrollo de la enfermedad por

ingestin de las protenas infectivas sera el
resultado de una reaccin en cadena (similar a la
que se esquematiza en la fig. 3.5) que dara al
traste con la mayora de las protenas normales.
4.
La estructura del material gentico.
Los cidos nucleicos estn compuestos por

cuatro bases nucleotdicas esenciales: dos
purinas (adenina y guanina) y dos pirimidinas
(citosina y timina), aunque en el ARN la timina
sea sustituida por el uracilo (fig. 3.6). Existen
FIG. 3.5. Los priones.
FIG. 3.6. Las bases nucleotidicas.
57
58
GENTICA
FIG. 3.7. Azcares, nuclesidos y nucletidos.
tambin algunas bases raras que aparecen de

modo excepcional en molculas de ARN transferente (di-hidro-uridina, pseudouridina, ribotimidina, etc.), en algunos bacterifagos (5-hidroxi-metil-citosina), o que son fruto de modificaciones epigenticas (5-metil-citosina) (fig.
3.8). La unin (enlace N-glucosdico) entre una
base nucleotdica y un azcar (ribosa en el ARN
y desoxirribosa en el ADN) forma los nuclesidos, y la adicin a stos de los grupos
fosfato en el carbono 5' del azcar forma los
nucletidos (fig. 3.7). Las denominaciones de
estos compuestos quedan recogidas en la figura
3.8. Finalmente los nucletidos se unen entre si
mediante enlaces 3'-5'-fosfodister para formar
los polinucletidos o cadenas polinucleotdicas
(fig. 3.9).
La estructura del material gentico fue descubierta en 1953 por James Watson y Francis
Crick que publicaron sus resultados (La es
tructura molecular de los cidos nucleicos) en

la revista Nature. El hallazgo fue de tal magnitud que James D. Watson, Francis H. Crick y
Maurice H. Wilkins fueron galardonados con el
premio Nobel de Fisiologa y Medicina en 1962.
El descubrimiento de Watson y Crick se haba
apoyado en los trabajos de Erwin Chargaff,
quien demostr la existencia de una correspondencia 1:1 entre purinas y pirimidinas
(equimolaridad) en el ADN de especies tan diversas como el ser humano, una bacteria y el
erizo de mar; y en el estudio de los patrones de
difraccin de los haces de rayos X que atraviesan el ADN realizados por Wilkins y Franklin.
Con este bagaje y con resultados propios sobre
las propiedades fsico-qumicas del ADN,
Watson y Crick propusieron que el material gentico era en realidad una doble hlice dextrgira (enrollamiento en el sentido de las agujas
del reloj), compuesta por dos cadenas antipara-
59
FIG. 3.8. Bases nucleotdicas, nuclesidos y nucletidos.
lelas (una en direccin 5'P-3'OH y la otra 3'OH5'P), con enrollamiento plectonmico (las dos
cadenas se entrelazan como los cabos de una
cuerda), unidas por puentes de hidrgeno entre
bases complementarias (dos entre A y T; tres
entre G y C). La doble hlice tendra un
dimetro de 20 A, con diez nucletidos por
vuelta de hlice (34 ), dos surcos exteriores
(mayor y menor), las bases nucleotdicas apiladas en su interior, y los grupos fosfato hacia el
exterior. La unin de las dos cadenas mediante
puentes de hidrgeno (lbiles) se complementaba con fuerzas de naturaleza hidrofbica
(mucho ms fuertes) para mantener la estabilidad de la doble hlice en un medio esencialmente acuoso como el de las condiciones fisiolgicas de una clula. Este modelo encajaba con
las dimensiones cristalogrficas, tena en cuenta
la ley de Chargaff, explicaba los cambios de
naturaleza fsico-qumica que se producan
durante los procesos de desnaturalizacinrenaturalizacin, y reuna (aparentemente) los
requisitos esenciales para ser el material
gentico: estabilidad, propuesta implcita de un
modelo de replicacin, etc. (fig. 3.10).
El modelo de Watson y Crick constituye lo

que hoy se denomina configuracin B (ADNB), pero hay otras configuraciones alternativas
posibles que pueden existir en condiciones
particulares. La configuracin A (que tiene 11
nucletidos por vuelta) podra encontrarse en
hbridos ARN-ADN. La configuracin Z (con
un armazn azcar-fosfato en zigzag) tiene una
doble hlice levgira (sentido de enrollamiento
en contra de las agujas del reloj) con 12 pares de
nucletidos por vuelta, y puede formarse
cuando el ADN est compuesto por una
alternancia de purinas y pirimidinas, estando
adems metiladas las citosinas (en secuencias
C-fsforo-G). La alternancia ADN B-Z podra
constituir un mecanismo de control de la
expresin gentica, al impedir la interaccin con
factores de regulacin que slo reconocen la
configuracin B, o por la unin de protenas
especficas al ADN-Z metilado (se ver ms
adelante en el captulo de Epigentica). Por otro
lado en la configuracin Z las posiciones N7 y
08 de la guanina quedan expuestas con mayor
facilidad al ataque de compuestos qumicos
mutagnicos
capaces
de
alquilar
60
GENTICA
FIG. 3.9. Cadena
alguna de esas posiciones (nitrosaminas, nitrosourea, etc.).

Pero no todo el ADN que existe de forma
natural es necesariamente bicatenario. El ADN
de algunos virus como los bacterifagos (pX
174 y M 13, y los segmentos terminales del
ADN telomrico en los cromosomas eucariticos, son ADN monocatenario (cadena sencilla).
Por otro lado Rich y Felsenfeld han propuesto la
existencia de hlices triples de ADN (ADN-H)
como una posibilidad in vitro, aunque podra ser
una alternativa real en las secuencias de la
regin control del ADN mitocondrial de
mamferos, o en los mecanismos de control de
la expresin mediante interferencia por ARN (se
ver despus en el captulo de Epigentica).
Finalmente las secuencias ricas en guanina de
polinucleotdica.
los extremos telomricos podran formar

tambin configuraciones de ADN cuadruplexo.
5.
Secuencias de ADN en los

genomas de procariotas y
eucariotas
La estructura bicatenaria de la doble hlice

se puede resolver en dos cadenas monocatenarias mediante su desnaturalizacin (fusin o
melting) por calor, pHs extremos (la estabilidad de los puentes de hidrgeno oscila entre
pH 4 y 11), o disminuyendo la constante dielctrica del medio (con alcoholes, cetonas, etc.).
Las consecuencias de la desnaturalizacin son la
disminucin de su viscosidad, el aumento en
FIG. 3.10.
su densidad de flotacin (el ADN de cadena

sencilla es ms pesado), y el aumento de su absorbencia lumnica a 260 nm (efecto hipercrmico). Por otro lado las cadenas dobles de ADN
pueden retenerse selectivamente en columnas de
hidroxiapatito que dejan pasar las cadenas
sencillas.
Por tanto resulta relativamente sencillo
poder estudiar las cinticas de desnaturalizacin
del ADN de cadena doble de diferentes
organismos, para determinar el punto medio de
la reaccin (Tm o temperatura de melting), y
sacar conclusiones acerca del mayor contenido
de las muestras en pares GC (Tm ms elevada)
o en pares AT (Tm inferiores) (fig. 3.lla). Si se
invierten las condiciones del tratamiento en una
solucin con cadenas monocatenarias, se puede
restaurar la mayora del ADN bicatenario. Este
proceso de renaturalizacin se ajusta a una
61
La doble hlice.
cintica de segundo orden definida por la

ecuacin C/Co = 1/(1+ kCot), donde C (moles
de nucletidos/litro) es la concentracin de
cadena sencilla en el tiempo t (segundos), Co es
la concentracin inicial en el tiempo 0 (to), y k
es la constante de segundo orden que se deduce
empricamente. Los valores Cot oscilan entre10'
y 104, y se representan en escala logartmica. Se
trata de una cintica de segundo orden porque la
velocidad de renaturalizacin en un momento
determinado es proporcional al cuadrado de la
concentracin de ADN sin renaturalizar en ese
momento.
Para que los datos resulten comparables
conviene homogeneizar primero el tamao de
los fragmentos de ADN en torno a unos 400
picogramos (pg) (mediante sonicacin, por
ejemplo). Despus, el tiempo necesario
para
que
reasocie
la
mitad
62
GENTICA
FIG. 3.11. Cinticas
de desnaturalizacin), renaturalizacin del ADN.
del ADN (Cot 1/2) debera ser proporcional al

tamao del genoma (o nmero de fragmentos
diferentes de ADN que haya en el medio). Es
decir, los genomas ms pequeos tendran tasas medias de renaturalizacin ms pequeas
y las cinticas de renaturalizacin tendran
grficas de una sola pendiente. En la figura
3.1lb se representa la cintica de renaturalizacin de un genoma bacteriano. Sin embargo
las cinticas de renaturalizacin de los genomas eucariticos son mucho ms complejas al
tener secuencias repetidas de ADN, y su representacin grfica puede llegar a tener
hasta tres pendientes (cada una en un
intervalo de 102 de Cot) (fig. 3.1 lc). En este
caso los resultados sugieren la existencia de
una fraccin del genoma con secuencias de
ADN altamente repetidas (que seran las
primeras en renaturalizar), otra consecuencias
moderadamente
repetidas
(pendiente
intermedia de la curva) y, finalmente, una
tercera compuesta por las secuencias poco o
nada repetidas que seran las ltimas en
renaturalizar. En la figura 3.12 se indican los
tipos de secuencias que caracterizan un
genoma tan complejo como el humano. Las
secuencias nicas o poco repetidas estn
constituidas por secuencias gnicas codificantes (exones), secuencias no codificantes
relacionadas con los genes (pseudogenes, intrones, regiones anteriores o posteriores a los
genes que se transcriben pero no se traducen UTRs-, etc.) y secuencias espaciadoras
intergnicas.
Las
secuencias repetidas
corresponden al ADN de familias
multignicas (globinas, histonas, genes que
codifican para los
ARN ribosmicos,
etc.),
y
a
secuencias
extragnicas
de diverso tipo. En esta ltima clase se

pueden considerar las secuencias satlites 1,
11, III, a y f , llamadas as porque se pueden
separar como una banda satlite, distinguible de la banda principal que contiene la mayora de las secuencias de ADN, mediante ultracentrifugacin en gradientes autogenerados
de sales pesadas. Este tipo de secuencias
estn formadas por unidades cortas (normalmente ricas en AT) que se repiten en tndem
cientos de miles de veces. Por otro lado estn
los minisatlites (tambin denominados
VNTR de variable number of tandem repeats), situados en las regiones prximas a
los telmeros, que son secuencias de 1 a 5
kilobases (kb) compuestas por la repeticin
en tndem de unidades bsicas de 5 a 64
nucletidos.
Los
microsatlites
son
secuencias an ms pequeas, con unidades
63
de repeticin de 1 a 4 nucletidos, que se

reparten sin ninguna restriccin por todo el
genoma. Los minisatlites y los microsatlites
estn siendo utilizados en Gentica Forense
para determinar las huellas dactilares del
ADN. Finalmente los transposones, o
secuencias de ADN capaces de moverse
dentro del genoma, que sern estudiados
especficamente en un captulo posterior. Los
mejor conocidos son los retrotransposones de
origen retroviral que se mueven a travs de
intermediarios de RNA. En el genoma
humano estn representados por los elementos LINES (long interspersed elements) y
SINES (short interspersed elements). En la figura 4.3 se indica la distribucin cromosmica de los diferentes tipos de secuencias de
ADN existentes en el genoma humano.
Fin. 3.12. Tipos de secuencias de ADN en el genoma humano.
64
GENTICA
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Captulo
Organizacin del Material Gentico

1.
Organizacin del Material gentico en Virus y Bacterias

1.1. Organizacin del Material Gentico en los Virus
1.2. Organizacin del Material Gentico en Bacterias
2.
Organizacin de la Cromatina en organismos Eucariticos

2.1.
2.2.
2.3.
2.4.
3.
La Cromatina Nuclear
Materila Gentico Nuclear y Extranuclear
Organizacin de la Cromatina Nuclear
Eurocromatina y Heterocromatina
Elementos Diferenciados en la Estructura Cromosmica y

Tcnicas de Bandeado
3.1. Elementos Diferenciados
3.2. Tcnicas de Bandeado
4.
Cromosomas especiales
5.
Nmero de Cromosomas y Cantidad de ADN
66
GENTICA
1. Organizacin del material gentico

en virus y bacterias
1 .1 . ORGANIZACIN DEL MATERIAL GENTICO EN
LOS VIRUS
El material gentico de los virus puede ser

de cualquiera de los tipos posibles: ADN o
ARN, de cadena sencilla o doble, y abierto o
cerrado (fig. 4.1). En algunos casos, como sucede con los retrovirus, la naturaleza del material gentico puede variar a lo largo de su ciclo
de vida de modo que aunque el virin contenga
ARN de cadena sencilla, este ARN se transforma en ADN de cadena doble cuando el genoma
viral se integra en el de la clula receptora. Por
otro lado, aunque lo normal es que los virus
contengan una sola molcula de ADN o ARN,
en ocasiones pueden albergar ms de una copia
(dos en el caso de un retrovirus como el virus
del sida). Hay tambin casos excepcionales de
segmentacin genmica donde la dotacin
gnica esencial se reparte entre varias molculas
independientes. Este sera el caso de los
reovirus (virus animales ARN de cadena doble),
y del virus del mosaico de la alfalfa (que
necesita, por este motivo, infecciones mltiples
para completar su genoma en el hospedador).
Los cidos nucleicos virales estn prctica-
mente desnudos dentro de la cavidad creada por

Ias protenas de la cubierta. Sin embargo, en
algunos casos se ha demostrado la existencia de
protenas estructurales que se asocian al ADN o
ARN viral ms por su implicacin en el inicio
de la replicacin que como respuesta a una
necesidad organizativa. Excepcionalmente,
como sucede en el virus SV40 (virus de simios),
el material gentico (ADN de cadena doble)
utiliza las protenas estructurales de la clula
hospedadora (histonas) para construir un
modelo organizativo similar al de Ia cromatina
de las clulas eucariticas (minicromosomas).
1 .2. ORGANIZACIN DEL MATERIAL GENTICO EN

BACTERIAS
En el caso de las bacterias (procariotas y,

por tanto, sin ncleo) el material gentico es
siempre una sola molcula de ADN de cadena
doble circular o cerrada, aunque pueden existir
varias copias por nucleoide. Slo el genoma
de Borrelia bargdorfei es, excepcionalmente,
una molcula de ADN de cadena sencilla. Pero,
adems de su genoma principal, las bacterias
suelen tener un nmero variable de genomas
Fio. 4.1. El material gentico en los virus.
menores o secundarios denominados plsmidos, constituidos tambin por ADN de cadena doble y circular, que pueden contener genes
esenciales para funciones tan importantes como
la conjugacin bacteriana, la resistencia a
drogas, etc. El genoma principal de Escherichia
coli (3,2 X 106 pb = 1,3 mm de ADN) est organizado en dominios (donde se discute el papel
estructural de unas molculas de ARN), y adquiere un superenrollamiento helicoidal gracias
a su interaccin con una serie de protenas estructurales que recuerdan a las histonas nucleares (HU, H, IHF, H1, HLPI, etc.).
2. Organizacin de la cromatina
en organismos eucariticos
2.1. LA CROMATINA NUCLEAR
A diferencia de los procariotas el material

gentico de los organismos eucariotas est empaquetado en una superestructura denominada
cromatina. La cromatina nuclear fue definida
por Flemming a finales del siglo xix como una
maraa de fibras en los ncleos interfsicos con
fuerte apetencia por los colorantes bsicos.
Como resultado de un fenmeno de condensacin progresivo esta maraa acaba individualizndose en unas estructuras discretas que fueron
denominadas cromosomas por Waldeyer en
1898. Por tanto cromatina y cromosomas son
dos aspectos morfolgicamente distintos de una
misma entidad celular.
2.2. MATERIAL GENTICO NUCLEAR Y

EXTRANUCLEAR
Cada cromosoma contiene una sola molcula de ADN de cadena doble lineal o abierta,
pero sumadas las longitudes de todas las molculas de ADN de todos los cromosomas se
pueden alcanzar cifras sorprendentes (casi 2 m
de longitud en el caso de los cromosomas
humanos). Si se tiene en cuenta que hay ms de
un trilln de clulas en un cuerpo humano
adulto, todo su ADN llegara a medir ms de 2
X 1013 m; es decir, habra suficiente ADN
67
para cubrir 50 veces un viaje de ida y vuelta entre la Tierra y el Sol.

Aunque la mayor parte del ADN est en el
ncleo, hay tambin una fraccin de ADN extranuclear, cualitativamente muy importante, en
orgnulos citoplasmticos como las mitocondrias y los cloroplastos. Se trata siempre de
molculas de ADN de cadena doble circular o
cerrada que ocupan unos espacios similares a
los nucleoides bacterianos. En las levaduras
(eucariotas unicelulares) puede haber de 1-45
mitocondrias, cada mitocondria puede tener de
10-30 nucleoides y cada nucleoide alberga 4-5
molculas de ADN. Es decir, una levadura podra tener entre 40 y 6.750 genomas mitocondriales. En el caso de un organismo complejo
con tejidos diferenciados el nmero de mitocondrias puede oscilar de manera notable segn
las necesidades energticas de las clulas. En
cuanto a los cloroplastos, un alga unicelular
como Chlamydomonas, que tiene un solo cloroplasto, puede albergar entre 500 y 1.000 molculas de ADN cloroplstico; las clulas de la
hoja de la remolacha azucarera (con 40 cloroplastos cada una) pueden llegar a tener 5.760
genomas.
2.3. ORGANIZACIN DE LA CROMATINA NUCLEAR
La cromatina est formada esencialmente

por ADN e histonas (en cantidades equimoleculares 1:1), aunque hay otros componentes
minoritarios como protenas no-histnicas (de
carcter estructural o funcional: 0,5-1,5), ARN
(0,05), lpidos, iones, etc (Stein 1975). Las histonas son protenas bsicas de bajo peso molecular con fuerte apetencia electrosttica por los
grupos fosfato del ADN. Existen cinco tipos
bsicos (H1, H2A, H2B, H3 y H4) aunque se
producen algunos cambios durante el desarrollo:
uno de los ms significativos es la sustitucin de
los tipos bsicos por las protaminas en la lnea
germinal masculina. Las histonas tienden a
agruparse formando los octmeros (2H2A,
2H2B, 2H3 y 2H4) que constituyen el elemento
central del nucleosoma (core-nucleosoma). El
ADN (doble hlice) se acopla a los nucleosomas
describiendo
algo
68
GENTICA
FIG. 4.2. La organizacin de la cromatina en los cromosomas eucaritidos.
ms de dos vueltas de hlice en torno a ellos

(aproximadamente 200 pb), como hara el hilo
de una bobina con su carrete. El resultado es la
fibra nucleosmica, que recordara a un collar
de cuentas de 10 nm de dimetro. Esta estructura fue descrita por Kornberg en base a datos
biofsicos (espectros de difraccin de rayos X),
bioqumicos (digestin enzimtica del ADN
inter-nucleosomal) y citolgicos (observacin al
microscopio electrnico de preparados cromatnicos obtenidos en concentraciones salinas
muy bajas). Al aumentar la concentracin salina
del medio la fibra nucleosmica se enrolla en
una nueva estructura de orden superior llamada
solenoide (30 nm de dimetro), que se mantiene
estable gracias a la histona H1 presente en los
puentes inter-nucleosmicos (ocupando la parte
central o interior del solenoide). Sin embargo
esta nueva estructura no salda las necesidades
de empaquetamiento de la cromatina en el
cromosoma (700 nm de dimetro). El anlisis de

preparados cromatnicos carentes de histonas
demostr la existencia de un eje central de
protenas no histnicas (llamado scaffold)
sobre el que la fibra solenoide se pliega
formando lazos de tamao variable. En los
puntos de anclaje (SARs, regiones de anclaje al
scaffold) se puede observar la interaccin
existente entre un tipo de secuencias especficas
del ADN y las topoisomerasas de tipo II
presentes en el esqueleto proteico central. Finalmente, esta nueva superestructura adopta una
configuracin helicoidal superenrollada que
estar ms o menos compactada segn se trate
de un cromosoma metafsico o de las fibras de
cromatina interfsica (fig. 4.2). El grado de
compactacin est ntimamente relacionado con
la posibilidad de expresin de los genes y se
regula a travs de cambios qumicos en las
histonas
(acetilaciones/deacetilaciones,
fosforilaciones y metilaciones) y en el propio

ADN (metilaciones/demetilaciones) como se
ver en el captulo dedicado a la Epigentica.
2.4. EUCROMATINA Y HETEROCROMATINA
La mayor parte de la cromatina (eucromatina) sigue unos ciclos de tincin-condensacin

caractersticos durante las divisiones celulares y
meiticas: descondensacin en interfase, mxima condensacin en metafase. Sin embargo
Heitz logr distinguir una fraccin minoritaria
(denominada heterocromatina) que segua un
comportamiento alocclico. Este tipo de cromatina ocupa normalmente posiciones pericentromricas, su ADN es el ltimo en replicarse durante el periodo S, no contiene genes
activos (cromatina permanentemente inactiva)
e, incluso, puede ejercer un efecto regulador
negativo sobre los genes situados en su proximidad (efectos de posicin). Desde el punto de
vista de su composicin molecular la heterocromatina contiene secuencias altamente repetidas de ADN, que adems est altamente metilado; sus histonas tienen las modificaciones especficas de la cromatina inactiva (deacetilaciones y metilaciones), y tiene protenas no
histnicas especficas (como la HP1, heterochromatin associated protein) que le permiten
consolidar su estructura densamente empaquetada e inactiva. Recientemente Maison et al. han
demostrado que la configuracin supercondensada de la heterocromatina pericentromrica del ratn necesita tambin una molcula
de ARN que forma parte del complejo Metiltransferasa de histonas/HP1.
El tipo de heterocromatina que se acaba de
describir se denomina constitutiva por su
constancia en el tiempo y el espacio celulares.
Sin embargo, existe otro tipo de heterocromatina llamada facultativa que resulta de un proceso de heterocromatinizacin en cromosomas o regiones cromosmicas inicialmente eucromticas (con secuencias gnitas y ADN norepetido). El caso ms paradigmtico podra ser
el de uno de los dos cromosomas X de las
hembras de mamferos donde una parte
considerable puede adquirir reversiblemente
las caractersticas de la heterocromatina
constitutiva (alociclia en los patrones de
69
condensacin-tincin, retraso en la replicacin

de su ADN e inactivacin gnica). Este proceso
ha sido interpretado como un mecanismo
epigentico de compensacin de la dosis
gnita entre machos y hembras. La
heterocromatina facultativa se caracteriza por la
metilacin de sus histonas (sobre todo de la
lisina 9 en la H3), y adquiere sus caractersticas
gracias a la expresin de una molcula de ARN
(Xist) (estos aspectos se vern con ms detalle
en el captulo de Epigentica).
3. Elementos diferenciados
en la estructura cromosmica
y tcnicas de bandeado
3.1. ELEMENTOS DIFERENCIADOS
La organizacin de la cromatina no es uniforme, pudindose distinguir una serie de elementos diferenciados a lo largo de la estructura
cromosmica: los centrmeros (o constricciones
primarias), los telmeros (o extremos cromosmicos), las regiones organizadoras del
nuclolo (NORs, segn la abreviatura en lengua
inglesa), los crommeros y las bandas, caracterizados todos ellos por contener secuencias
especficas de ADN (fig. 4.3).
Los
centrmeros
son
las regiones
cromosmicas donde se anclan las fibras del
huso, y se hacen visibles como unas
constricciones primarias en los estadios de
mayor condensacin de los cromosomas. Segn
la posicin de los centrmeros los cromosomas
se
denominan
metacntricos
(posicin
centrada),
submetacntricos
(un
brazo
cromosmico
mayor
que
el otro),
acrocntricos (el brazo corto es extremadamente pequeo) y telocntricos ( cromosomas que tendran tericamente un solo
brazo) (fig. 4.6a). Como se ha mencionado,
los centrmeros suelen estar rodeados de
regiones de heterocromatina constitutiva
compuestas de secuencias de ADN satlite
altamente repetidas. La presencia de

este tipo de secuencias fue demostrada
por primera vez en 1970 por Pardue y
Gall en los cromosomas del ratn me-
70
GENTICA
FIG. 4.3.
Distribucin de los diferentes tipos de secuencias de DNA en un cromosoma humano.
diante la tcnica de hibridacin in situ. Para

llevar a cabo la hibridacin, las secuencias de
ADN satlite fueron desnaturalizadas y marcadas radiactivamente, utilizndose como sondas para reconocer a las secuencias complementarias (tambin desnaturalizadas) presentes en los cromosomas. Despus de un periodo de renaturalizacin controlado, el resultado de la hibridacin in situ fue visualizado
mediante autorradiografa, al dejar que la emisin de partculas beta de la sonda radiactiva
pudiera impresionar una pelcula fotogrfica
acoplada a los preparados cromosmicos en el
portaobjetos. El revelado de las placas fotogrficas demostr la acumulacin de puntos radiactivos en torno a las regiones centromricas
de los cromosomas de ratn.
Las tcnicas actuales de hibridacin in situ
han ganado considerablemente en precisin
(para evitar ruidos de fondo), y en capacidad
de resolucin (ya se puede determinar la localizacin cromosmica de secuencias nicas de
ADN), gracias sobre todo al desarrollo de tcni
cas no isotpicas de marcado fluorescente

(hibridacin in situ fluorescente, FISH). Las
sondas se pueden marcar ahora directamente
generando copias que llevan incorporado un
precursor nucleotdico fluorescente; o indirectamente, utilizando nucletidos que llevan acoplada una molcula informadora (reporter),
como la biotina o la digoxigenina, que se identifica despus por su unin a una molcula fluorescente. Normalmente los cromosomas se tien con un fluorocromo diferente al utilizado
para la sonda, y las emisiones de ambos fluorocromos se visualizan mediante microscopa
asistida con sistemas de epifluorescencia
(vase la fig. 4.6e). Una variante especial de las
tcnicas de FISH se basa en la utilizacin de colecciones de sondas que correspondan a fragmentos cromosmicos o incluso a cromosomas
completos. En este caso las mayores dificultades estaban en la disponibilidad de un nmero
muy limitado de molculas fluorescentes, pero
recientemente se ha podido soslayar el problema
variando las concentraciones relativas de es-
tas molculas, y utilizando programas ms sofisticados de anlisis de imagen que asignan

seudocolores a las diferentes combinaciones
de molculas fluorescentes. Son las tcnicas de
pintado cromosmico (painting), que alcanzan su mxima complejidad en el FISH multicolor y el cariotipado espectral (SKY), donde
cada pareja de cromosomas aparece sealada
con un color especfico.
Las secuencias altamente repetidas de la
heterocromatina pericentromrica no son necesariamente ADN sin sentido (ADN basura).
Podran ser fundamentales para la cohesin de
los centrmeros y la correcta segregacin de los
cromosomas. Sin embargo, no contienen las
secuencias responsables de la funcin
centromrica donde se ancla el complejo
proteico denominado cinetocoro. La primera
secuencia de ADN centromrico fue caracterizada por Clarke y Carbon en el cromosoma 3
de levaduras (CEN3) (fig. 4.4a); pero no est
nada claro que tengan que existir secuencias
71
consenso especficas en los centrmeros del

resto de los organismos eucariticos. El grupo
de Huntington F. Willard ha propuesto recientemente que unas secuencias de ADN satlitealpha especficas del cromosoma X (DXZ1)
podran ser la condicin suficiente para que
exista un centrmero funcional en este cromosoma (fig. 4.4b).
Adems de las constricciones primarias, se
puede distinguir un segundo tipo de constricciones secundarias relacionadas normalmente
con la presencia de las secuencias de ADN
ribosmico, que se denominan regiones
organizadoras del nuclolo (NORs). Las secuencias de ADN ribosmico quedan englobadas dentro del nuclolo, que permanece adosado
a las NORs durante una buena parte del ciclo
celular.
La estructura telomrica est compuesta por
una regin subtelomrica altamente variable
(con diferentes tipos de secuencias repetidas:
minisatlites, transposones, etc.), y una re-
FIG. 4.4. Caractersticas de las secuencias del ADN centromrico. a) Secuencia consenso para el centrmetro
de diez cromosomas de la levadura de gemacin (segn Clarke y Carbon, Review of Genetics, 19: 29-56, 1985).
Pu, cualquier purina; Py, cualquier pirimidina; X, cualquier base nucleotdica. b) Secuencia centromrica del
cromosoma X humano, segn Schueler et al., 2001, Science, 294: 109.
72
GENTICA
FIG. 4.5. Caractersticas
de las secuencias del ADN telomrico.
gin estrictamente telomrica que contiene secuencias especficas de ADN telomrico de

unos 10-150 kb, compuestas por la repeticin de
unidades bsicas de unos pocos nucletidos
(TTAGGG, en la mayora de los vertebrados)
(fig. 4.3). Por razones que se comprendern ms
adelante, el ADN de los cromosomas eucariticos termina siempre en un extremo monocatenario de unos pocos cientos de bases llamado saliente G (fig. 4.5).
Los crommeros son engrosamientos o
regiones ms compactadas de la eucromatina,
que se distribuyen de manera ms o menos uniforme a lo largo de los cromosomas, y se pueden visualizar en las fases de menor condensacin durante las divisiones celulares y meiti
cas. Su naturaleza molecular sigue siendo controvertida, pero podran ser la consecuencia de
un cierto grado de compartimentacin en la
distribucin de las secuencias de ADN y en la
organizacin de los cromosomas. Desde hace
algn tiempo el grupo de Bernardi sostiene que
hay una distribucin compartimentada de
secuencias relativamente grandes de ADN
(llamadas iscoras) en el genoma de los vertebrados de sangre caliente, de modo que cada
iscora tiene un contenido en bases nucleotdicas (% G+C) relativamente homogneo pero
diferente al de las dems. Con la publicacin en
febrero de 2001 del primer borrador del
Proyecto Genoma Humano en la revistas
Nature y Science, parece confirmarse la exis-
tencia de cinco iscoras en el Genoma Humano:

dos de ellas ricas en pares Adenina y Timina
(L1 y L2), y tres ricas en Guanina+Citosina. La
distribucin alternante de iscoras ricas en G+C
y A+T podra ser la explicacin molecular a la
existencia de los crommeros, pero este tipo de
distribucin compartimentada no se ha
demostrado hasta la fecha en el genoma de todos los organismos cuyos cromosomas exhiben
la alternancia de crommeros y regiones
intercromomricas.
3.2. TCNICAS DE BANDEADO
Los cromosomas son normalmente estructuras que se tien uniformemente con los colorantes bsicos (con la excepcin de las constricciones primarias y secundarias). Sin embargo existen tratamientos especiales, denominados
tcnicas de bandeado, capaces de crear
unos patrones especficos de bandas (regiones
FIG. 4.6.
73
ms teidas) e interbandas (regiones intercalares

menos teidas) a lo largo incluso de los brazos
de los cromosomas metafsicos (fig. 4.6b). Este
tipo de bandeado cromosmico resulta
fundamental para la identificacin de cada uno
de los cromosomas de un complemento permitiendo la elaboracin de los cariotipos (conjuntos ordenados de los cromosomas de un complemento segn el tamao y la posicin relativa
de sus centrmeros) (fig. 4.6c), y la deteccin
de alteraciones numricas y estructurales.
La tcnica de bandeado-C consiste en el
tratamiento de los cromosomas con una solucin saturada de hidrxido brico y la tincin
posterior con el colorante Giemsa. Como consecuencia de este tratamiento las regiones de
heterocromatina constitutiva (que resisten en
mayor medida la desnaturalizacin y la extraccin de protenas) aparecen ms densamente
teidas
(CB
en
fig.
4.6b).
Tipos de cromosomas y tcnicas de bandeado. (Las figuras c, e y f han sido proporcionadas

por el Dr. Juan Cruz Cigudosa del Centro Nacional de Investigaciones Oncolgicas.)
74
GENTICA
FIG. 4.7. Cromosomas especiales.
En la tcnica de bandeado-G los cromosomas se someten a una digestin controlada con

un agente proteoltico (una solucin de tripsina)
antes de la tincin con Giemsa. El resultado
suele ser la aparicin de un patrn homogneo
de bandas (G) e interbandas (R, de reverse) como
el de los cromosomas humanos de las figuras
4.6b y 4.6c. Tambin se puede obtener un
patrn de bandas similar tiendo directamente
los cromosomas con un fluorocromo que tenga
mayor afinidad por las secuencias de ADN ricas
en Adenina-Timina. ste sera el caso de la
quinacrina, y el patrn de bandas Q que se
puede observar en los cromosomas humanos de
la figura 4.6d. Si se utilizan fluorocromos con
mayor afinidad por las secuencias de ADN ricas
en Guanina+Citosina (como la cromomicina-
A3) se obtendra un patrn de bandas' R. En

estos casos la explicacin molecular radica en el
hecho de que las bandas G contienen sobre todo
iscoras L1 y L2 (ricas en Adenina+Timina),
secuencias LINE, y una mayor densidad de
regiones SAR (regiones de anclaje al scaffold)
por lo que, segn Saito y Laemmli, la densidad
del empaquetamiento puede ser mayor. Por el
contrario, las bandas R contienen sobre todo
iscoras ricas en Guanina y Citosina, y
secuencias SINEs (como las Alu).
4. Cromosomas especiales
La organizacin de los cromosomas se parece bastante en la mayora de los organismos
eucariotas. Sin embargo hay algunos casos especiales, como los cromosomas gigantes de
Drosophila y los cromosomas plumulados de
los anfibios, que merecen ser comentados.
Los cromosomas gigantes de Drosophila
son un caso especial de cromosomas mitticos,
que se pueden encontrar sobre todo en algunos
tejidos secretores (tubos de Malpigio, epitelio
intestinal, y glndulas salivares de tercer
estadio), y se caracterizan esencialmente por su
carcter politcnico (replican su ADN
repetidas veces sin que haya una separacin
cromatdica), por el apareamiento de los cromosomas homlogos a lo largo de toda su longitud, por la unin de todos los cromosomas a
travs de las regiones de heterocromatina pericentromrica (en una estructura llamada cromocentro), y por el escaso grado de compactacin de su cromatina. Por tanto se trata de cro
FIG. 4.8. Nmeros
75
mosomas gigantes, con un grosor formidable

y una longitud extraordinaria, donde la mera
tincin con un colorante bsico sirve para
demostrar un patrn de bandas e interbandas
caracterstico de cada cromosoma (fig. 4.7a). La
observacin de regiones descondensadas
(puffs o anillos de Balbiani) est normalmente
relacionada con la actividad transcripcional de
esa zona.
Los cromosomas plumulados de anfibios
son cromosomas meiticos identificables en la
diplotene de la primera divisin meitica de las
hembras. Su estado de descondensacin
responde probablemente a las necesidades masivas de expresin gnica en las primeras etapas
del desarrollo, y su estructura deja ver el patrn
bsico de organizacin de la cromatina con un
eje central (scaffold) al que se anclan los lazos
cromatnicos (fig. 4.7b).
cromosmicos v cantidad de ADN.
76
5. Nmero de cromosomas y cantidad

de ADN
Las tendencias evolutivas de los organismos

apuntan normalmente hacia el incremento
paulatino del nmero de cromosomas, y del
contenido en ADN, respondiendo probablemente a la necesidad de aumentar el nmero de
genes y conseguir una mayor complejidad estructural y funcional (fig. 4.8). Sin embargo el
ser humano, el tericamente ms complejo, no
se encuentra en la cumbre de ninguno de estos
dos parmetros. Si se atiende al nmero de cromosomas, tiene menos que muchas plantas diploides (y por supuesto que las de naturaleza
poliploide), que el gusano de la seda (Bombix
mor), que el perro domstico (Canis familiaris)
y que numerosos peces. Y si se considera el
contenido en ADN por dotacin haploide, el
genoma de los mamferos ocupa una posicin
modesta (entre 3,5 y 6 picogramos) frente a los
ms de 50 picogramos que pueden alcanzar las
algas, los anfibios, las plantas, los crustceos,
etc. Este hecho se conoce con el nombre de
paradoja del valor C y demuestra que los aumentos cuantitativos no bastan por s solos
para conseguir los mayores grados de complejidad evolutiva.
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GENTICA
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Captulo
Interacciones Gnicas
1.
Relacin Entre Genotipo y Fenotipo
2.
Prueba de Alelismo: Anlisis de Complementacin
3.
Alelismo Mltiple y Polimorfismos Genticos
4.
Interacciones entre los Alelos de un mismo Gen
5.
Interacciones entre Genes no Allicos

5.1. Interaccin Entre Gen Regulador y su Regulado
5.2. Interaccin Entre Genes Implicados en una Misma
Ruta Metablica
5.3. Supresin Gnica
5.4. Genes Modificadores
5.5. Sistemas de Letales Equilibrados
6.
Penetrancia y Expresividad
78
GENTICA
1. Relacin entre genotipo y fenotipo
Como ya se ha comentado y se ver con

mayor detalle en los captulos posteriores, los
genes (genoma) actan transcribiendo su ADN
en molculas de ARN (transcriptoma), y una
buena parte de esos ARNs se traducen en protenas (proteoma). Pero los genes no son entidades aisladas sino que actan en un contexto
definido por el resto del genoma (background
gentico) y por factores ambientales intra y extracelulares. Por tanto, se pueden distinguir
diferentes niveles de control de la expresin
gentica que median entre el genotipo y el fenotipo de los organismos. En una revisin muy
reciente Strohman distingue cuatro niveles bsicos de regulacin, y recoge la participacin de
diferentes sistemas, incluyendo las redes
metablicas, sistemas de sealizacin hormonal,
etc., en el control de la expresin gentica (fig
5.1).
En este contexto no es de extraar que los
genes puedan ser pleiotrpicos, es decir, que la
expresin de un mismo gen pueda derivar en
efectos fenotpicos mltiples aparentemente no
relacionados. En la mayora de los casos los
efectos mltiples se abren en abanico a partir de
la sntesis de un mismo tipo de ARN y/o
FIG. 5.1.
protena (pleiotropa secundaria). ste puede ser

el caso del gen de la cadena /3 de la hemoglobina mutado en la anemia falciforme (fig.
5.2). El nombre de esta enfermedad se debe a la
forma en hoz de los glbulos rojos que, con
menor tasa de supervivencia, acaban por sufrir
hemlisis. Desde el punto de vista molecular la
alteracin gentica se reduce al cambio de una
adenina por una timina, lo que supone la sustitucin de un aminocido polar por otro de carcter neutro en la cadena /3 de la hemoglobina
(glutmico por valina). El resultado es un aumento de la adhesin intermolecular que conduce a la agregacin de la deoxihemoglobina
(sobre todo en concentraciones bajas de oxgeno), la distorsin de los glbulos rojos (que
adoptan forma de hoz y tienen un periodo ms
corto de vida, lo que explica la anemia), la
oclusin de capilares, y la produccin de isquemias e infartos en los rganos afectados por el
bloqueo (fig. 5.3). Los individuos homocigticos padecen una anemia hemoltica muy grave,
pero los heterocigticos son viables y aparecen
con gran frecuencia en las poblaciones africanas
por su resistencia al paludismo (la mayor
densidad citoplasmtica de los glbulos falciformes impide que sean parasitados por los
protozoos
del
gnero
Plasmodium).
Niveles de regulacin entre e l genotipo v el fenotipo e.vterno de los organismos

(basado en Strohrnan, 2002. Science, 296: 701-703).
FIG. 5.2. Caractersticas
moleculares de la anemia falciforme.
Adems de los casos de pleiotropa secundaria se conocen tambin muchos de pleiotropa

primaria, donde ya es de naturaleza mltiple la
expresin primaria del gen. Seran, por ejemplo,
aquellos casos donde un mismo ARN puede ser
procesado de diferentes maneras para generar
diferentes polipptidos en el mismo tejido (gen
Ikaros) o en diferentes tejidos de un mismo
FIG. 5.3. Pleiotropa
79
organismo (genes de la Tiroxina hidroxilasa,

Calcitonina, etc.).
Pero del mismo modo que un solo gen puede influir en efectos fenotpicos mltiples,
tambin hay fenotipos que dependen de la expresin de diferentes genes no allicos. Sucede
secundaria del gen de la anemia falciforme.
80
GENTICA
FIG. 5.4. Anlisis
de complementacin en organismos superiores diploides.
con el caso de la pigmentacin de los ojos de

Drosophila, que se debe a la accin de ms de
100 genes diferentes. Por tanto se hace de todo
punto imprescindible disponer de alguna herramienta gentica para poder determinar si
dos mutaciones gnicas que producen dos variantes fenotpicas alternativas de un mismo
carcter fenotpico son en realidad alelos de un
mismo par gnito (genes allicos) o de diferentes pares gnicos (genes no allicos). Es decir,
una prueba gentica que permita estimar el nmero de genes allicos y no allicos implicados
en la determinacin de un carcter.
2. Prueba de alelismo: anlisis

de complementacin
La prueba gentica mencionada es el anlisis de complementacin o prueba de alelismo.

Para llevarla a cabo sera preciso disponer del
mayor nmero posible de variantes genticas
del carcter en cuestin. Es decir, disponer de la
mayor cantidad posible de mutaciones (es
pontneas o inducidas) y, preferiblemente de

carcter recesivo, que produzcan variaciones
fenotpicas del carcter en cuestin. Despus se
deberan obtener individuos homocigticos para
cada mutacin y se habran de cruzar entre s
por parejas (en todas las combinaciones posibles) para observar el fenotipo de los hbridos
di-heterocigticos. Si se recupera el fenotipo
salvaje las dos mutaciones se complementan y
se podra afirmar (inicialmente) que pertenecen
a un par gnito diferente (seran genes no
allicos). En caso contrario no habra complementacin y la explicacin ms razonable sera
suponer que las dos mutaciones afectan al mismo par gnico (genes allicos) aunque la sede
mutacional (secuencia de ADN afectada) fuese
diferente en cada caso (fig. 5.4). Sin embargo
esta prueba es slo una primera aproximacin al
problema. Los ensayos de complementacin
tienen sus limitaciones en algunos casos, como
por ejemplo cuando se trata de genes que
codifican polipptidos de protenas multimricas.
La complementacin gentica consiste, por
tanto, en la recuperacin del fenotipo salvaje

cuando de unen dos genomas haploides portadores de diferentes mutaciones recesivas en la
misma clula o cigoto. En el caso de organismos haploides como el hongo Neurospora la
prueba de complementacin se puede basar en
el estudio del heterocarion que se forma en la
fusin de diferentes cepas mutantes. La figura
5.5 recoge un ejemplo para demostrar si dos
mutaciones que afectan a la biosntesis de la arginina (mutantes argl y 2) pertenecen o no al
mismo par gnico.
3. Alelismo mltiple y polimorfismos
genticos
El alelismo mltiple se podra definir como

la existencia de variantes allicas mltiples de
un mismo gen. Se trata por tanto de un concepto
entendible a nivel poblacional puesto que un
individuo, si fuese diploide, slo podra tener
dos alelos diferentes en un mismo locus. El color de los ojos de Drosophila vuelve a ser de
nuevo un ejemplo paradigmtico. El llamado
locus white puede estar ocupado por el alelo que
le da nombre (white) que determina el color
FIG. 5.5.
81
blanco de los ojos (ausencia de pigmento), pero

tambin por una plyade de alelos diferentes
que producen una gama amplia de variantes del
color rojo. Todos estos alelos constituyen una
serie allica (Morgan, 1914). Los genes
responsables de la determinacin de los grupos
sanguneos ABO, Rh, los alelos que codifican
para los antgenos de la histocompatibilidad
animal, los alelos de la incompatibilidad en
plantas, los que determinan los patrones
cheurn de las hojas de trbol, etc., constituyen
otros tantos ejemplos.
Una parte sustancial de las variantes allicas
de una misma serie constituye lo que se denomina un polimorfismo. El concepto de polimorfismo fue definido como la existencia de dos o
ms variantes allicas en un mismo locus, de
modo que la menos frecuente de ellas no tenga
que ser explicada mediante mutaciones
recurrentes. Se tratara, por tanto, del conjunto
de variantes allicas que no son deletreas o
letales, es decir las que no causan ninguna
merma en el valor adaptativo de los organismos,
y por tanto se pueden mantener en las
poblaciones naturales a lo largo de las
generaciones. La otra fraccin no poli-
Anlisis de complementac n mediante la generacin de un heterocarion.
82
GENTICA
FIG. 5.6.
Relaciones de dominancia entre alelos del mismo par gnito.
mrfica de una serie allica, contendra los genes deletreos o letales (por ejemplo los alelos
que causan diferentes tipos de enfermedades
humanas como la Fibrosis Qustica, la Distrofia
Muscular de Duchenne, etc.). En este caso los
alelos tienden a ser eliminados de las poblaciones por seleccin natural, y su mantenimiento
en la poblacin slo se explica por la ocurrencia
de nuevas mutaciones (mutaciones de novo). En
el argot de la Gentica Humana se suele hablar
de polimorfismos, para referirse al conjunto de
alelos no deletreos, y de mutaciones para referirse a los implicados en el desarrollo de una enfermedad, pero la fuente primaria de variacin
(y por tanto el origen esencial de todas las variantes allicas) es la mutacin, y esta costumbre debera ser rechazada.
En su acepcin clsica las variantes allicas
de los genes se deducen a travs de los cambios
en la apariencia externa de los organismos
(fenotipo externo): color de los ojos, patrn de
coloracin en la hoja de trbol, etc. Despus, el
anlisis de las protenas permiti descubrir
nuevos tipos de polimorfismos bioqumicos
basados en la reaccin antgeno-anticuerpo o en
la deteccin de variantes electroforticas de las
protenas (grupos sanguneos, antgenos de
histocompatibilidad, variantes isoenzimticas,
etc.). Finalmente la posibilidad de analizar
comparativamente las secuencias primarias de
las bases nucleotdicas de fragmentos de ADN
supuso el nacimiento de los polimorfismos de
ADN o marcadores polimrficos de ADN.
entendidos como la existencia de dos o ms
formas alternativas de un fragmento de ADN
gnico o no gnico. En este nuevo contexto se
sigue hablando de variantes allicas (en un

sentido amplio y quizs poco apropiado) porque
puede tratarse de secuencias de ADN annimas
que no corresponden a ningn gen. Lo cierto es
que con este tipo de anlisis se podra afirmar
que todos los genes seran en mayor o menor
medida polimrficos, porque siempre se
acabara encontrando alguna diferencia en la
secuencia de bases nucleotdicas al realizar
anlisis comparativos.
4. Interacciones entre los alelos

de un mismo gen
En sus trabajos pioneros Mendel slo

distingui un tipo sencillo de relacin de
dominancia entre los alelos de un mismo par
gnico. Era el tipo de dominancia simple o
completa donde la presencia del alelo
dominante impona por completo su criterio, de
modo que el fenotipo del heterocigoto era el
mismo que el del homocigoto dominante. Sin
embargo existen otros tipos de relaciones de
dominancia (fig. 5.6). En la dominancia
incompleta el fenotipo de los heterocigotos se
sita en algn punto intermedio dentro del
espectro de distribucin marcado por los
fenotipos de los dos homocigticos, ms
cerca de uno u otro dependiendo del grado
de dominancia parcial de uno de los alelos.
Sera el caso del carcter coloracin de la
flor en el dondiego de noche, donde el
cruzamiento entre plantas con flores
rojas y plantas con flores blancas produce

heterocigotos con flores de color rosa en proporciones 1:2:1. Otras veces el fenotipo del heterocigoto excede los lmites de la distribucin
fenotpica marcada por los dos homocigotos.

Esto suele ocurrir sobre todo en caracteres
cuantitativos como el tamao, la viabilidad o
la productividad de una planta (que se
explicarn con mayor detalle en captulos
posteriores). Se han descrito casos en el maz
donde el fenotipo de los heterocigotos puede
ser ms o menos precoz que el de cualquiera
de los parentales homocigticos. En estos
casos se hablara de sobredominancia y de
infradominancia. Finalmente, tambin puede
darse el caso de que se distingan con claridad
los efectos de los dos alelos en el
heterocigoto sin que exista ningn tipo de
interferencia: el fenotipo resultante sera
como la suma de los efectos observados en
los dos homocigotos. Esta situacin se
denomina codominancia y se puede observar
en muchos caracteres cualitativos como, por
ejemplo, en los grupos sanguneos. En el caso
del grupo ABO, los homocigotos AA tienen
slo el determinante antignico A en la
superficie de sus clulas sanguneas, los BB
slo el B, pero los heroterocigotos AB tienen
83
ambos.
Todo lo expuesto justifica la clasificacin de
los diferentes tipos de alelos propuesta por
Muller en 1932, que sigue an vigente sobre
todo entre los Genetistas del Desarrollo. Tomando como referencia el alelo salvaje, los
alelos mutantes podran ser: amorfos (inoperantes o ausentes), hipomorfos (funcionan imperfectamente en relacin con el salvaje), hipermorfos (determinan un exceso de producto
en relacin con el salvaje), antimorfos (accin
opuesta al salvaje) y neomorfos (accin cualitativamente diferente).
Los alelos letales constituyen una clase especial de alelos recesivos capaces de causar la
muerte en homocigosis, aunque en heterocigosis
influyan en algn aspecto fenotpico aparentemente inocuo. Este es el caso del alelo A ' del
ratn que provoca la muerte en homocigosis,
pero en heterocigosis determina coloracin de la
piel amarilla (dominante con respecto al color y
recesivo con respecto a la viabilidad); tambin
es el caso de un gen presente en los gatos Manx,
que en heterocigosis afecta el desarrollo normal
de la espina dorsal provocando la ausencia de
cola, pero en homocigosis resulta letal; o el
ejemplo del gen beaded de Drosophila que se
ilustra en la figura 5.7. En la especie humana los
Fig. 5.7. Beaded, es un gen letal recesivo en Drosophila.
84
GENTICA
FIG. 5.8.
Interaccin entre un gen regulador y el regulado.
genes responsables de enfermedades como la

Corea de Huntington, la Distrofia Muscular de
Duchenne o la Fibrosis Qustica podran encuadrarse dentro de esta categora. El conjunto de
genes deletreos o letales presentes en los individuos de una poblacin constituye lo que se denomina el lastre gentico poblacional.
5. Interacciones entre genes no
allicos
Como resultado de la prueba de alelismo se

hace evidente que la mayora de los caracteres
fenotpicos resultan de la actuacin conjunta de
ms de un par gnico. En estos casos el anlisis
de los cruzamientos demuestra que los
resultados no se ajustan a las proporciones
mendelianas, y sugieren diferentes modelos de
interaccin gnica.
5.1. INTERACCIN ENTRE GEN REGULADOR Y SU

REGULADO (FIG. 5.8)
En este caso el cruzamiento entre dihbridos

no dara las proporciones mendelianas 9:3:3:1,
porque la produccin de la protena por el gen
regulado depende de la presencia simultnea de
al menos un regulador y un gen regulado de tipo
salvaje dentro del mismo genotipo.
5.2. INTERACCIN ENTRE GENES IMPLICADOS EN

UNA MISMA RUTA METABLICA
Por ejemplo, en la biosntesis de un pigmento

que necesitara al menos dos etapas catalizadas
cada una por un enzima diferente (fig. 5.9), el
cruzamiento entre dihbridos dara
85
al gen 2 porque la homocigosis recesiva del gen

1 enmascara el efecto del alelo salvaje del gen
2, expresando su propio fenotipo (la coloracin
intermedia).
5.3. Supresin Gnica (Fig. 5.10)
FIG. 5.9. Genes implicados en la misma ruta

metablica.
unas proporciones de 9/16 (individuos con al

menos un alelo salvaje de ambos genes), 3/16
(que tendran una coloracin intermedia por la
presencia de al menos un alelo salvaje del gen
1) y 4/16 (ausencia de pigmento por la falta de
al menos una copia del alelo salvaje del gen 1).
El gen 1 sera epistattico recesivo con respecto
Un tercer tipo de interaccin gnica sera el

protagonizado por los genes supresores. Aunque
existen varios mecanismos posibles de supresin, la figura 5.10 recoge el ejemplo de dos
genes implicados en la sntesis de un complejo
proteico activo. La presencia de al menos un
alelo salvaje de ambos genes es suficiente para
la sntesis de los dos polipptidos que se uniran
para formar el complejo activo. Si uno de los
dos genes est mutado el complejo no pue
FIG. 5.10. Genes supresores.
86
GENTICA
RG. 5.11. Sistemas de letales equilibrados de Drosophila.
de formarse. Sin embargo la mutacin en el gen

a puede verse suprimida por una mutacin en
el gen s que produzca una variante del
polipptido capaz de ensamblarse de manera
efectiva con el polipptido generado por a. Otro
ejemplo de supresin intergnica podra ser el
constituido por la mutacin en un gen estructural que genera un codn sin sentido, y una
segunda mutacin supresora en un gen de un
ARNt que generase un anticodn capaz de
reconocer la tripleta sin sentido anterior.
5.4. GENES MODIFICADORES
Resulta un hecho evidente que no todos los

genes contribuyen en igual medida al fenotipo.
Hay genes mayores y otros menores, con
efectos secundarios menos notorios. Un tipo
especial de estos ltimos son los llamados
modificadores que, en sentido estricto, seran
los que modulan la expresin o actividad de otro
gen, aunque no tendran efectos notorios por s
solos. El carcter coloracin de los ptalos de la
flor de Digitalis depende de al menos tres pares
gnicos. Uno de ellos controla la sintesis de antio-
cianina (que determinara el color prpura), otro controla la

deposicin del pigmento en los ptalos, y el
tercero, que sera un modificador, modula la
cantidad de pigmento sintetizado generando una
gama que va desde el prpura claro al ms
intenso.
5.5. SISTEMAS DE LETALES EQUILIBRADOS (FIG.

5.11)
A pesar de su carcter nocivo los alelos letales recesivos persisten en las poblaciones naturales como sistemas equilibrados, posiblemente para mantener combinaciones gnicas
con valor adaptativo. En el caso de Drosophila
los sistemas formados por los genes letales recesivos Beaded-le, Curly-Plum y HairlessStubble
permiten
mantener
inalteradas
las
combinaciones allicas de los genes situados
entre cada una de estas parejas de loci, porque
de otro modo se producira la homocigosis para
alguno de los letales y la muerte del organismo.
Ms adelante se ver el caso paradigmtico de
la
planta
Oenothera
87
FIG. 5.12. Penetrancia y expresividad.
6. Penetrancia y expresividad
Como consecuencia de las interacciones

entre diferentes pares gnicos y de la influencia
de los factores ambientales en la expresin gnica, se hace necesario definir los conceptos de
penetrancia y expresividad (fig. 5.12). La penetrancia se refiere a la proporcin de genotipos
que muestran el fenotipo esperado. Si Lobe es un
alelo dominante que determina ojos lobulados
en Drosophila porque disminuye el nmero de
facetas, cabra esperar que el 100 % de los
heterocigotos manifestase el fenotipo mutante
(penetrancia completa), pero podran ser tan
slo el 25 % (penetrancia incompleta). Por otro
lado la expresividad mide el grado o fuerza con
que se manifiesta un fenotipo. En el caso
anterior, la reduccin del nmero de facetas
podra ser siempre la misma en todos los individuos heterocigticos (expresividad constante), pero podra variar de unos a otros (expresividad variable). El gen alterado en la poli
dactilia humana tiene penetrancia completa pero
expresividad variable. Finalmente conviene

recordar tambin que los factores ambientales
pueden provocarla aparicin de fenotipos que
recuerdan los producidos por genes salvajes o
mutantes. En este caso se hablara de
fenocopias. Una dieta carente en fenilalanina
hace que el fenotipo de un individuo fenilcetonrico parezca el correspondiente a una
constitucin gentica normal.
Griffiths, A. J. F. et al. (2000): An introduction to

Genetic Analysis, W. H. Freeman.
Marx, J. (2002): Unraveling the causes of diabe
tes, Science, 296: 686-689.
Molecu
lar Genetics 2, Bios. Sci., Pub. Ltd.
Strohman, R. (2002): Maneuvering in the
complex
path from genotype to phenotype, Science,
296:701-703.
Captulo
La herencia de los caracteres complejos

1.
Caracteres Mendelianos Versus Complejos o Multifactoriales

1.1. La Herencia Triallica
1.2. El Caso de la Coloracin de la Piel en los Mamferos:
Ms de Dos Pares Gnicos
1.3. Heterogeneidad Gentica en la Enfermedad de Alzheimer
1.4. La Base Gentica en la Diabetes
1.5. Los Fundamentos Genticos del Cncer
2.
Caracteres Cuantitativos: Genotipos y Distribuciones

Fenotpicas
2.1. Las Lneas Puras de Johannsen
2.2. Teora de los Factores Polmeros
3.
Heredabilidad y norma de reaccin de un carcter cuantitativo
90
GENTICA
1. Caracteres mendelianos versus

complejos o multifactoriales
Los caracteres mendelianos o sencillos se

caracterizan por estar determinados por un
solo gen con dos alternativas allicas
(dominante vs. recesiva), por ajustarse a unos
patrones de herencia sencillos de naturaleza
autosmica o ligada al sexo, y porque los
factores ambientales influyen muy poco en la
expresin fenotpica. Sin embargo esta
situacin no es, desafortunadamente, la ms
frecuente. Lo normal es que los caracteres
sean ms complejos, existiendo toda una
gradacin desde los puramente mendelianos
hasta los llamados caracteres cuantitativos,
pasando por caracteres cualitativos nomendelianos. En estos casos, el nmero de genes intervinientes y la influencia de los
factores ambientales van progresivamente en
aumento conforme avanza la complejidad del
carcter. En los llamados caracteres complejos
o multifactoriales los patrones de herencia no
se ajustan a las proporciones mendelianas, y
es ms difcil discernir sobre la constitucin
gentica del carcter a partir del anlisis de los
fenotipos. De la determinacin gentica en
los caracteres mendelianos se pasa a la

predisposicin o susceptibilidad gentica de
los caracteres. En la figura 6.1 se
esquematizan las diferencias existentes entre
un carcter mendeliano y otro complejo o
multifactorial utilizando como ejemplo dos
enfermedades humanas. En el caso de la
enfermedad mendeliana hay un gen que
contribuye decisivamente al riesgo gentico
a padecer la enfermedad; sin embargo en la
enfermedad compleja pueden intervenir
diferentes combinaciones de genes, con
diferente peso en la determinacin del
riesgo gentico en diferentes familias, y hay
una gran influencia de los factores
ambientales en la aparicin de la enfermedad
y en la gravedad de los sntomas.
1.1. LA HERENCIA TRIALLICA
El primer paso hacia la complejidad podra

ser el protagonizado por la llamada herencia
triallica descrita por Katsanis et al. en el
sndrome de Bardet-Biedl (BBS). Aunque se
han descrito seis loci (tres pares gnicos) implicados, los sntomas fenotpicos de la enfermedad aparecen cuando uno de los loci tiene
FIG. 6.1. Caracteres sencillos o mendelianos y complejos o multifactoriales.
sus dos alelos mutados y hay otra mutacin en

uno de los alelos de los cinco loci restantes.
1.2. EL CASO DE LA COLORACIN DE LA PIEL EN LOS
MAMFEROS: MS DE DOS PARES GNICOS
La coloracin de la piel en los mamferos es

un claro ejemplo de cooperacin entre al menos
cinco genes (o pares gnicos) diferentes. No se
debe olvidar que el carcter coloracin de la
piel comienza a elaborarse durante el
desarrollo embrionario, cuando un grupo de
clulas inician los procesos de diferenciacin y
migracin para ocupar los lugares apropiados en
el embrin, y alcanza su culminacin en el
tejido epitelial del adulto con la capacidad de
sintetizar melanina por los melanocitos. Esta
ltima capacidad depende a su vez de una serie
de reacciones metablicas catalizadas por
diferentes enzimas.
El gen A controla los patrones de distribucin del pigmento en el pelo. El alelo salvaje (A)
determina la aparicin de una banda amarilla
intercalada entre las zonas negras que es la
responsable del fenotipo agout (grisceo). El
alelo a controlara la distribucin uniforme del
pigmento negro en el pelo (color negro), y el
alelo dominante A' (yelow) produce coloracin
amarilla aunque es letal en homocigosis.
El gen B determina el color del pigmento, y
cuenta con dos alelos mayoritarios: el alelo B
que produce color agout en combinacin con el
alelo A (B/-;A/-) y color negro con a (BIB; ala); y
el alelo b que produce un color canela con A
(b/b;A/-), y completamente marrn con a (b/b;
a/a).
El gen C controla la expresin del color, es

decir el tipo de pigmento que se sintetiza aunque no su cantidad. El alelo C permite la expresin de color (capacidad de sintetizar melanina).
El alelo c impide la expresin de color siendo el
principal responsable del carcter albino. Por
tanto, en homocigosis cc, se comportara como
episttico sobre los otros genes implicados en la
distribucin del pigmento en el pelo. Este gen
tiene un alelo sensible a la temperatura (ch,
himalaya), y sera el responsable
de los llamados ratones y conejos himalaya o de
91
los gatos siameses, al determinar la expresin

diferencial de pigmento que aparece con mayor
intensidad en las regiones corporales con una
temperatura ms baja (extremidades, orejas,
hocico, etc.).
El gen D es un factor de dilucin que
controla la intensidad del color. El alelo D permite la expresin completa, pero el d (en homocigosis) se comporta como un gen modificador provocando una coloracin menos intensa
o ms diluida.
Finalmente, el gen S controla la distribucin
del pigmento epitelial a lo largo del cuerpo. El
alelo S garantiza la distribucin uniforme, pero
el s (ss) determina la aparicin de manchas o el
fenotipo moteado.
1.3.
HETEROGENEIDAD GENTICA
EN LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER
Existen, bsicamente, dos formas diferentes

de Alzheimer segn la manifestacin temprana
o tarda de los sntomas. El Alzheimer temprano
se comporta como una enfermedad autonmica
dominante que se puede producir por
mutaciones en los genes APP (que codifican
para la protena precursora amiloide), PSI
(presenilina 1), o PS2 (presenilina 2). Se trata
por tanto de un caso de heterogeneidad gentica porque se puede producir el mismo fenotipo mediante mutaciones en diferentes genes.
El Alzheimer tardo, sin embargo, tiene una
base gentica mucho menos importante y se
habla de la implicacin de algunas variantes
allicas de los genes APOE (APOE-r4) y a-2
macroglobulina (A2M-2) en la determinacin de
susceptibilidad.
1.4. LA BASE GENTICA EN LA DIABETES
En este caso se puede hablar tambin de dos

tipos bsicos de la enfermedad: la diabetes de
tipo I (o dependiente de insulina), y la de tipo II
(que se conoce como la forma no-dependiente
de insulina) que es una forma de expresin ms
tarda (madurez) y constituye la for-
92
GENTICA
FIG. 6.2. Genes candidatos en la diabetes de tipo 2 y MODY (J. Marx, 2002, Science, 296: 686-689).
ma ms frecuente. Existe tambin una variante

de la diabetes de tipo II llamada MODY (de
maturity- onset diabets of young). En la diabetes de tipo I el organismo es incapaz de sintetizar insulina debido a la destruccin de las clulas (3 del pncreas (enfermedad autoinmune).
Sin embargo, en la diabetes de tipo II el organismo adquiere una extraa forma de resistencia
a la insulina que le impide metabolizar la
glucosa, aunque tambin puede producirse algn trastorno en la produccin de insulina. Los
diabticos de ambos tipos pueden llegar a tener
serias complicaciones incluyendo insuficiencias
renales, ceguera, etc. Y, como en el caso del
cncer o las enfermedades cardiovasculares, se
trata de una enfermedad compleja o
multifactorial porque su desarrollo depende de
la existencia de diferentes tipos de genes de
susceptibilidad y est muy influenciada por
factores ambientales: sobre todo los relaciona-
dos con la dieta (la obesidad), y con los hbitos

de fumar o hacer ejercicio. En la figura 6.2 se
recogen los diferentes genes candidatos que se
han demostrado en el ser humano o en organismos modelo segn una revisin reciente aparecida en la revista Science.
1.5.
LOS FUNDAMENTOS GENTICOS DEL

CNCER
El cncer engloba un conjunto de enfermedades genticas, aunque no necesariamente heredables, que se caracterizan por las alteraciones
genticas y epigenticas de dos tipos fundamentales de genes mayores de predisposicin denominados pro-oncogenes y genes supresores. Los alelos normales o salvajes de
este tipo de genes contribuyen normalmente a
la homeostasis celular controlando los proce-
sos de crecimiento y divisin celular: los protooncogenes (Ras, Myc, etc.) tienden a favorecer
la ocurrencia de estos procesos, y los genes
supresores (TP53, p16INK4a, PTEN, etc.) actan como frenos naturales. Sin embargo, los
proto-oncogenes pueden sufrir mutaciones de
carcter dominante que los transforman en oncogenes capaces de impulsar la divisin celular
aunque no existan los estmulos adecuados en el
medio (factores de crecimiento, etc.), y los
genes supresores pueden sufrir mutaciones
inactivantes (de carcter recesivo) que los inhabilitaran para cumplir su funcin de vigilancia o contrapunto.
Lgicamente, el riesgo gentico a padecer
un cncer puede verse aumentado notoriamente
con la presencia de factores ambientales como
la exposicin a agentes fsicos, qumicos o
biolgicos mutagnicos, que contribuiran de
forma decisiva al desarrollo de los tumores espordicos. Pero adems, hay tambin toda una
cohorte de genes modificadores que son capaces
de modular el fenotipo tumoral inducido por los
oncogenes y genes supresores, y son los
responsables ltimos de los diferentes grados de
susceptibilidad, y de los diferentes tipos de
respuesta a los tratamientos en diferentes personas. Estos genes modificadores pueden codificar productos que no estn relacionados con
los producidos por oncogenes y los genes supresores (seran los modificadores extrnsecos
como, por ejemplo, los genes que codifican enzimas hepticas capaces de modificar sustancias
potencialmente cancergenas), o pueden ser
variantes allicas de los oncogenes o genes
supresores que expresan en mayor o menor
grado las protenas correspondientes, o producen protenas variantes con alguna diferencia
cualitativa (seran los modificadores intrnsecos)
(Santos y Fernndez Piqueras, 2002).
2. Caracteres cuantitativos: genotipos
y distribuciones fenotpicas
El xito de Mendel estuvo al menos en parte

en la eleccin de una serie de caracteres cualitativos donde las diferencias fenotpicas podan explicarse por diferencias allicas concre
93
tas. Es decir, caracteres donde la relacin fenotipo-genotipo era clara y manifiesta. Como se ha
ido viendo a lo largo de estos captulos esta
relacin deja de ser evidente cuando aparecen
nuevas formas de interacciones gnicas o
cuando hay ms de un gen implicado en la determinacin del carcter y va aumentando la
influencia de los factores ambientales. Pero el
caso de mayor complejidad es el de los llamados caracteres cuantitativos, como la talla, el
peso, etc., donde no se pueden distinguir clases
fenotpicas discretas porque los fenotipos definen variaciones continuas.
La existencia de este tipo de caracteres llam ya la atencin de los cientficos a finales del
siglo xix. Galton y Pearson defendieron el
carcter hereditario de estos caracteres y sugirieron la existencia de una variacin gentica
subyacente que sera tambin de naturaleza
continua (bimetras). Con el redescubrimiento
de las leyes de Mendel, y la aceptacin de la
naturaleza particulada o discreta del gen, se
propuso, en cambio, que la variacin fenotpica
continua se poda explicar en base a un nmero
limitado de genes mendelianos y la influencia
moduladora de los factores ambientales. Es
decir, se propona que la herencia de los
caracteres continuos estaba gobernada por los
mismos principios mendelianos que regan la
herencia de los caracteres cualitativos (mendelianos).
2.1. LAS LNEAS PURAS DE JOHANNSEN
A principios del siglo xx Johannsen demostr la base gentica de un carcter cuantitativo: el peso de la semilla del guisante Phaseolus vulgaris var. Princesa. Tomando muestras
de una poblacin original extraordinariamente
heterognea, Johannsen consigui obtener 19
lneas puras caracterizadas cada una por un peso
medio concreto que se mantena estable a lo
largo de las sucesivas rondas de autofecundacin. La constancia en el peso medio tena
una base gentica evidente porque, adems, las
descendencias obtenidas con semillas de diferentes pesos dentro del rango de distribucin de
una lnea o raza pura volvan a definir el
94
GENTICA
FIG. 6.3. Lneas puras de Johannsen.
mismo patrn de distribucin fenotpica de la

lnea en torno a su misma media (fig. 6.3). A
partir de estos experimentos se acept que la
variacin fenotpica se poda descomponer en
un componente gentico (responsable de la
constancia media) y otro ambiental (responsable
de la variacin en torno a la media) (Varianza
Fenotpica = Varianza Gentica + Varianza
Ambiental).
2.2. TEORA DE LOS FACTORES POLMEROS
Unos aos ms tarde Bateson (Bilogo) y

Yule (Matemtico) propusieron la hiptesis de
los factores polmeros segn la cual la variacin
fenotpica continua se poda explicar me
diante la existencia de una multitud de genes

cada uno con un efecto pequeo y aditivo sobre
el carcter en cuestin. Sera como una categora diferente de genes menores o poligenes
para diferenciarlos de los mayores o
mendelianos, responsables de los caracteres
cualitativos. Algo despus Nilsson-Ehle propusieron que algunos caracteres cuantitativos
como la precocidad, la resistencia al fro y el
color del grano en el trigo, se podan explicar
con un nmero limitado de genes aditivos. En la
figura 6.4 se recoge su propuesta de 5 factores
polmeros que explicaba incluso las segregaciones transgresivas (descendientes ms
precoces que el ms precoz de sus padres o menos precoces que el menos precoz). Por consiguiente el escenario ms probable de cualquier
95
FIG. 6.4. Teora de los factores polmeros.
carcter cuantitativo sera el definido por una

balanza con dos platillos que contuviesen todos
estos genes repartidos entre ambos.
Los caracteres cuantitativos suelen tener tras
de s muchos genes con efectos menores
(aunque no necesariamente equivalentes), pero
sus interacciones pueden ser tanto de carcter
aditivo, como multiplicativo o episttico. Este
tipo de genes se suelen denominar tambin
QTLs (quantitative trait loci), pero nadie ha
demostrado hasta ahora que se trate de unos genes diferentes en esencia a los mendelianos. Adems, conviene recordar que la variacin fenotpica continua puede ser compatible
con la existencia de uno o pocos genes y una
gran influencia ambiental moduladora. En la
figura 6.5 se recogen los casos hipotticos de
una carcter cualitativo y otro cuantitativo influidos por un solo par gnico con dos alternativas allicas (dominante y recesiva). En el caso
del carcter cualitativo los genotipos se
proyectan en variaciones fenotpicas discretas
no solapantes, aunque exista un cierto grado de
expresividad variable como consecuencia de la

influencia ambiental y el resto de los genes
(background gentico). Sin embargo las distribuciones fenotpicas de los caracteres cuantitativos son claramente solapantes y no es posible
atribuir un genotipo concreto a un fenotipo
dado. ste sera el caso de los fenotipos comprendidos entre las dos flechas en la F2 del carcter cuantitativo, que podran corresponder a
cualquiera de los tres genotipos posibles. En la
figura 6.6 se resumen las principales diferencias
entre la Gentica de los caracteres cuantitativos
y cualitativos.
La mayora de los caracteres deseables en
Agricultura y Ganadera son de tipo cuantitativo. En el caso de las plantas: la productividad,
la capacidad de adaptacin a diferentes ambientes, el acortamiento del periodo de desarrollo, la tolerancia al estrs abitico (sequa,
salinidad, contaminantes, etc.) y bitico (enfermedades, plagas, etc.), la calidad superior del
grano, etc., son las caractersticas de mayor
inters para los mejoradores. Por tanto, a pesar
96
GENTICA
FIG. 6.5. Caracteres cualitativos y cuantitativos.
de su mayor dificultad, resulta fundamental conocer el grado de heredabilidad de estos caracteres, e identificar al menos los genes ms
importantes que contribuyen a su varianza gentica.
3. Heredabilidad y norma de reaccin

de un carcter cuantitativo
Todos los procesos de desarrollo estn controlados bsicamente por los genes, pero hay
una parte de la varianza fenotpica que se debe
exclusivamente al medio ambiente, o al resultado de la interaccin genotipo-ambiente. La
capacidad de hablar tiene un fuerte componente

gentico, pero el tipo de idioma que se habla
depende nicamente del lugar en que se viva o
de los idiomas que se estudien. Por tanto conviene separar heredabilidad y familiaridad.
La heredabilidad de un carcter cuantitativo
se puede estimar por: 1) la similitud fenotpica
entre parientes, 2) los casos de adopcin y 3) el
anlisis de la concordancia-discordancia del
carcter en parejas de gemelos mono y
dicigticos. En los casos concordantes el
fenotipo coincide en los dos gemelos, y en la
discordancia los dos gemelos tendran un
fenotipo distinto. La mayor concordancia del
97
Fig. 6.6. Diferencias entre caracteres cualitativos y cuantitativos.
carcter en los gemelos monocigticos (idnticos o univitelinos) y la mayor discordancia (o

menor concordancia) del carcter en los dicigticos (o fraternos) seran indicativas de una
mayor heredabilidad del carcter. Los estudios
realizados hasta la fecha en la especie humana
asignan concordancias superiores al 80 % en
monocigticos e inferiores al 30 % en
dicigticos para caracteres como: el color del
pelo, el color de los ojos, la esquizofrenia, el
sndrome de Down, y la psicosis maniacodepresiva.
En los organismos de experimentacin la
heredabilidad de un carcter se puede estudiar
analizando la distribucin fenotpica de los
descendientes obtenidos a partir de los fenotipos
muy diferentes de la poblacin original heterognea, manteniendo siempre las mismas
condiciones ambientales (fig. 6.7).
La heredabilidad podra definirse tambin
como la proporcin de la varianza fenotpica
que se debe al componente gentico. Por tanto,
el cociente entre la varianza gentica y la varianza total (H = VG /VF) sera una forma sencilla de estimacin numrica, y los valores oscilaran entre 1 (heredabilidad mxima) y 0 (ausencia total de heredabilidad). Pero hay que tener en cuenta que la heredabilidad no es nunca
una propiedad inherente del carcter, y puede
variar sustancialmente dependiendo de las circunstancias ambientales. Si se estudia la talla de
unos vegetales obtenidos mediante esquejes
FIG. 6.7.
Determinacin de la heredabilidad de un
carcter cuantitativo en organismos xperimentales
98
GENTICA
sobre todo en plantas, puesto que se precisa

disponer de individuos con genotipos
idnticos para enfrentarlos a diferentes
condiciones ambientales. En la figura 6.8 se
muestra un ejemplo que recoge las respuestas
fenotpicas del carcter talla de un vegetal
ante diferentes temperaturas.
Burghes, A. H. M.; Bassein, H. E. F. y de la

Chapelle, A. (2001): The land between
mendelian and multifactorial inheritance,
Science, 293: 2.213-2.214.
FIG. 6.8. La norma de reaccin de un carcter
cuantitati no.
a partir de un mismo progenitor, pero sembrados en ambientes diferentes, las diferencias

de talla no se podran atribuir a las diferencias
genticas (porque la varianza gentica sera
0), y la heredabilidad sera falsamente 0.
Por esta razn, cuando se trata de un
carcter cuantitativo conviene conocer su
norma de reaccin, es decir, la distribucin
fenotpica de un carcter para cada genotipo
en diferentes
condiciones ambientales. Por razones obvias
la determinacin de la norma de reaccin es
ms fcil en organismos experimentales, y
Griffiths, A. J. F. et al. (2000): An

introduction to Genetic Analysis, W. H.
Freeman.
Marx, J. (2002): Unraveling the causes of
diabetes, Science, 296: 686-689.
Santos, J. y Fernndez-Piqueras, J. (2002):
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Oncologa. Strachan, T. y Read, A. P.
(1999): Human Molecular Genetics 2,
Bios. Sci., Pub. Ltd.
Strohman, R. (2002): Maneuvering in the
complex path from genotype to phenotype,
Science, 296:701-703.
Captulo
Patrones de Herencia Extranuclear

1.
Patrones de Herencia Uniparental
2.
Fundamentos Moleculares: El Material Gentico de los

Orgnulos Celulares y la Segregacin Citoplasmtica
3.
Las Mitocondrias Humanas en las Enfermedades de origen

Materno, el Envejecimiento y la Muerte Celular
4.
Plsmidos Extragenmicos
5.
Herencia Infectiva y Efetos Maternos
100
GENTICA
1. Patrones de herencia uniparental
Los primeros cincuenta aos despus del

redescubrimiento de las leyes de Mendel fueron
un periodo muy fructfero de extensin del
mendelismo: se descubrieron nuevos patrones
de herencia diferentes a los descritos por
Mendel, y se postularon nuevos mecanismos
que enriquecieron el cuerpo de doctrina de la
Gentica. En 1909 Carl Correns describi unos
sorprendentes patrones uniparentales de herencia para el carcter variegacin en la planta
Mirabilis jalapa. Haba plantas realmente singulares donde la mayora de sus hojas eran
variegadas (con sectores verdes y blancos),
pero tenan tambin ramas con hojas completamente blancas (ausencia de color) o uniformemente verdes. Cuando realiz cruzamientos recprocos utilizando las flores procedentes de los
tres tipos posibles de ramificaciones (varie
gadas, verdes y blancas) comprob que el fe-
notipo de la descendencia era siempre el mismo

que el de la ramificacin cuya flor aportaba el
gametofito femenino (saco embrionario),
aunque cuando se trataba de una ramificacin
variegada, los descendientes podan ser de cualesquiera de los tres fenotipos posibles, o incluso tan heterogneos como la planta de partida
(fig. 7.1). Es decir, se trataba de un extrao caso
de herencia uniparental marcado siempre por
el parental femenino. Estos resultados sugeran
que los factores hereditarios responsables
tendran que estar en el citoplasma que era el
nico elemento diferencial aportado exclusivamente por el parental femenino.
En la dcada de los cuarenta el equipo de
Boris Ephrusii describi un tipo muy especial
de mutaciones en las levaduras de gemacin
(Saccharomyces cerevisiae), llamadas petite,
con bajas tasas de crecimiento, que podan
FIG. 7.1. Patrones de herencia uniparental del carcter variegacin en Mirabilis jalapa.
101
FIG. 7.2. Mutantes petite en levaduras.
seguir patrones mendelianos de herencia nuclear

(petite segregacionales) o de tipo uniparental
(petite neutros y supresores), aunque en este
caso no haba ninguna diferencia apreciable
entre la contribucin citoplasmtica de las dos
cepas parentales (fig. 7.2). De manera similar
Mary Mitchel caracteriz en 1952 unos
mutantes en Neurospora denominados poky,
por la mayor lentitud de su crecimiento y su
menor tamao, que seguan tambin unos
patrones de herencia uniparental marcados
siempre por el parental que aportaba la mayor
parte del citoplasma (fig. 7.3).
En 1954 Ruth Sager encontr un nuevo caso
de herencia uniparental en Chlamydomonas
reinhardtii en relacin con el carcter sensibilidad/resistencia a la estreptomicina. Como
ya se ha mencionado en captulos anteriores, las
algas mat+ y mat- pueden generar un zigoto
diploide capaz de experimentar un proceso
meitico. En este caso tampoco haba una contribucin citoplasmtica desigual entre las dos
algas parentales, pero la progenie tena siempre

el mismo fenotipo que el parental mat+.
2. Fundamentos moleculares: el material
gentico de los orgnulos celulares y
la segregacin citoplasmtica
En todos los casos mencionados los fundamentos moleculares de la herencia uniparental

radican en la existencia de genes en los genomas de los cloroplastos o de las mitocondrias y,
excepcionalmente, en algn plsmido extragenmico. La ausencia de mecanismos de reparacin en los genomas extranucleares hace que
la incidencia de mutaciones sea considerablemente mayor que la detectada en los genomas nucleares (aproximadamente 10 veces en el
caso de las mitocondrias). Por otra parte la
mayora de las mutaciones que afectan al genoma mitocondrial producen fenotipos anormales
caracterizados por deficiencias energticas
102
GENTICA
FIG. 7.3. Mutantes poky en Neurospora.
y resistencia a drogas especficas. Las mutaciones en el genoma de los cloroplastos se pueden traducir adems en fenotipos carentes de
color por su interferencia con la sntesis de clorofila.
Los mutantes ant, mit y petite de
levaduras, los poky de Neurospora, y otras
muchas citopatas humanas, se deben a alteraciones en los genes mitocondriales. Las mitocondrias contienen unos espacios denominados
nucleoides que pueden albergar uno o ms
genomas compuestos cada uno de ellos por una
cadena doble de ADN circular o cerrado. El
genoma mitocondrial humano contiene 16.569
bp y fue secuenciado en su totalidad por el
grupo de Anderson en 1981. Contiene 37 genes
implicados en el sistema de fosforilacin
oxidativa, y en la sntesis de sus propias
protenas. Todos ellos carecen de intrones y
dos de ellos (ATPasa 6 y 8) estn solapados
(fig. 7.4). A diferencia del genoma mitocondrial
humano, que es todo un modelo de economa, el
genoma mitocondrial de las levaduras alcanza
las 78 kb, tiene secuencias espaciadoras sin
sentido aparente, y sus genes estn salpicados
de secuencias intrnicas que no se traducen a

protenas. Los genes implicados en la
fosforilacin
oxidativa
codifican
para
polipptidos que necesitan unirse a otros
codificados por los genes nucleares para
constituir las protenas funcionales multimricas. Por tanto, se podra decir que las mitocondrias son orgnulos semiautnomos que
necesitan de los genes nucleares, y han de importar sus protenas desde el citoplasma para
poder replicar su material gentico y llevar a
cabo el resto de sus funciones vitales.
El descubrimiento de la implicacin de las
mitocondrias en los casos de herencia uniparental fue posible gracias a las caractersticas
especiales de las levaduras, que pueden vivir sin
mitocondrias mediante los procesos de fermentacin anaerobia. Despus se desarrollaron
procedimientos capaces de inhibir la sntesis de
protenas exclusivamente en las mitocondrias
(tratamientos con cloranfenicol, tetraciclina o
macrlidos) o en el citoplasma (cicloheximida).
Los mutantes ant de levaduras (resistencia a
antibiticos) se deben a mutaciones en genes
que codifican para los ARN ribosmicos.
Los mutantes mit consisten en mutaciones

puntuales en genes que codifican para polipptidos de la cadena transportadora de electrones (por este motivo sufren un enlentecimiento en las tasas de divisin celular y crecen
formando colonias ms pequeas). Los mutantes petite segregacionales se deben a mutaciones en genes nucleares que codifican polipptidos que han de unirse a otros mitocondriales para formar los complejos activos de la fosforilacin oxidativa, y se ajustan por ello a unos
patrones mendelianos tpicos de la herencia
nuclear. Sin embargo los petite neutros y los
supresores afectan a genes mitocondriales.
Los neutros son deleciones considerables
del genoma mitocondrial, y por ello al cruzarlos
con las levaduras normales resulta siempre un
patrn de herencia uniparental. Los petite
supresores sufren deleciones y duplicaciones,
y se produce una exclusin competitiva de las
mitocondrias con genoma normal. Se han
descrito tambin fenmenos de recombinacin
entre genomas normales y petite supresores que
acaban por alterar a la mayora de los genomas
mitocondriales de la clula. Adems, es posible
que las duplicaciones que suceden a la delecin
103
de parte del genoma mitocondrial multipliquen

el nmero de orgenes de replicacin de los
genomas mutantes que se imponen de esta
manera a los normales. Por estos motivos el
cruce entre levaduras normales y petite
supresores acaba produciendo una progenie
esencialmente petite (fig. 7.2). Finalmente,
los mutantes poky descritos por Mitchel en
Neurospora se deben a una delecin de 4 bp en el
gen que codifica para la subunidad pequea del
ARN ribosmico mitocondrial, y los patrones
uniparentales se explican por la contribucin
citoplasmtica desigual de los hongos parentales
(fig. 7.3).
Los caracteres variegacin en Mirabilis
jalapa y la sensibilidad a la estreptomicina en
Chlamydomonas, se deben a alteraciones en los
genes del genoma de los cloroplastos.
Obviamente, el carcter variegacin fue relacionado inmediatamente con la distribucin
desigual de la clorofila que era el pigmento responsable de la coloracin verde de las ramas y
las hojas, y por tanto con la distribucin de los
cloroplastos que eran los orgnulos portadores
del pigmento. De este modo los patrones de herencia cuando el parental femenino era varie-
FIG. 7.4. El genoma mitocondrial humano. OH y OL, orgenes de replicacin de las cadenas pesada y ligera,
respectivamente. PL y PH, marcan la situacin de las regiones promotoras de ambas cadenas.
104
GENTICA
FIG. 7.5. Segregacin citoplasmtica.
gado, se podan explicar fcilmente por la coexistencia de cloroplastos con clorofila y sin
clorofila (heteroplasmia), y la ocurrencia de fenmenos de segregacin citoplasmtica (distribucin aleatoria de los cloroplastos de una
clula madre en las dos clulas hijas) como los
mostrados en la figura 7.5. Pero la razn ltima
del problema radicaba en la existencia de un
genoma propio en los cloroplastos que se poda
separar del genoma nuclear mediante ultracentrifugacin en gradientes autogenerados de
sales pesadas. El genoma de estos orgnulos
consiste tambin en una doble hlice de ADN
circular o cerrada que ocupa unos espacios denominados nucleoides similares a los comentados en el caso de las mitocondrias. Sin embargo
el genoma de un cloroplasto contiene un nmero mayor de genes, destacando los implicados en la propia maquinaria de sntesis de protenas y en la fotosntesis (fig. 7.6). El anlisis
de las alteraciones del genoma de los
cloroplastos se puede ver facilitado en plantas

capaces de vivir saprofticamente.
La explicacin de los patrones de herencia
uniparental resulta obvia en el caso de la planta
porque los cloroplastos son aportados exclusivamente por el parental femenino. Sin embargo
en el caso de la sensibilidad a la estreptomicina del alga Chlamydomonas no hay una
contribucin citoplasmtica diferencial sino una
destruccin selectiva de los genomas de los
cloroplastos del parental mat- en el cigoto.
En todos los casos mencionados, ya sean referidos a mitocondrias o cloroplastos, habra
que admitir que las mutaciones originales tuvieron que afectar inicialmente a un solo genoma,
pero el nmero de genomas totales por orgnulo
y por clula puede llegar a ser muy elevado
(hasta 6.750 genomas mitocondriales dentro de
una sola levadura, o 5.760 genomas de cloroplastos en una clula de la hoja de una remolacha). Por tanto la mutacin original debi abrirse
camino entre una mayora de genomas normales hasta imponerse como el genoma mayoritario o exclusivo. Es decir, deberan ser bastante frecuentes los casos de heteroplasmia y
la observacin de diferentes grados de expresividad marcados por el porcentaje de genomas
mutantes. En el caso de las mitocondrias humanas, hay un cuello de botella despus de la fecundacin al producirse una reduccin muy
considerable del nmero de mitocondrias en las
clulas germinales. Por tanto, si la situacin de
partida era ya heteroplstica, este cuello de
botella, y los fenmenos de segregacin citoplasmtica que se producen durante las divisiones celulares (reparto al azar de las mitocondrias de la clula madre en las clulas hijas) podran explicar una relativamente rpida imposicin del genotipo mutante.
3.
Las mitocondrias humanas

en las enfermedades de origen
materno, el envejecimiento y la muerte
celular
Las investigaciones desarrolladas en los ltimos aos han confirmado la implicacin de las
mitocondrias en los procesos de fosforilacin
oxidativa, en la produccin de radicales libres
105
altamente reactivos derivados del oxgeno

(estrs oxidativo), y la iniciacin de muchos
procesos apoptticos (muerte celular programada). Por tanto, las alteraciones del genoma
mitocondrial se pueden traducir en enfermedades neurodegenerativas, en el envejecimiento y
en el cncer.
Las enfermedades mitocondriales se caracterizan lgicamente por sus patrones de herencia
uniparental de tipo materno, ya que las mitocondrias del zigoto son aportadas casi exclusivamente por el citoplasma de los ovocitos. Las
primeras
enfermedades
mitocondriales
descritas fueron la Neuropata ptica Hereditaria de Leber (LHON) (ceguera de
aparicin
repentina que se debe a una
mutacin sin sentido) y un grupo de
enfermedades neuromusculares provocadas
por deleciones de mayor o menor tamao
en el ADN mitocondrial (Oftalmopelia
Externa Progresiva, sndrome de KeransSayre, etc.). Pero la situacin no es siempre
sencilla: cuando se produce una mutacin
puntual en el gen de la ATPasa 6 que
afecta a menos del 70 % de los genomas
mitocondriales se produce una debilidad
muscular neurognica, ataxia y retinitis
pigmentaria; pero cuando afecta a ms del
95
%
aparece
el
terrible
sn-
FIG. 7.6. El genoma de los cloroplastos.
106
GENTICA
drome de Leigh que suele ser mortal. De manera anloga, el sndrome de MELAS (una miopata mitocondrial con ataques) se debe a una
mutacin en el gen del RNAt de la leucina que
ha de afectar a ms del 85 % de los genomas
mitocondriales, pero si el porcentaje de afectacin oscila entre el 5 y el 30 % se producen un
tipo especial de sordera y diabetes.
Con respecto a la apoptosis, se sabe que las
mitocondrias contienen factores pro-apoptticos
esenciales como el citocromo C, un factor
inductor (AIF) y formas latentes de caspasas
(proteasas). Cuando se produce una prdida
excesiva de calcio, en situaciones de estrs
oxidativo, ante una merma importante en la
produccin de energa, y como respuesta
defensiva al desarrollo de muchos procesos
neoplsicos, se puede desencadenar una
respuesta apopttica a travs de un canal
mitocondrial (PTPmt). Entonces el citocromo C
activa las caspasas citoslicas producindose
una degradacin del citoplasma, y el factor AIF
se transloca hasta el ncleo donde contribuye a
la degradacin de la cromatina.
Finalmente, el estrs oxidativo es probablemente la causa principal de la acumulacin
de alteraciones en el ADN mitocondrial con la
edad. El msculo esqueltico de las personas se
mantiene esencialmente intacto hasta los 40
aos, pero a partir de los 50 se empiezan a acumular mutaciones. En el cerebro (sobre todo en
los ganglios basales y en varias regiones del
rea cortical) es bastante comn la acumulacin
de una delecin de 5 kb en las personas de edad
avanzada.
4. Plsmidos extragenmicos
Otra forma especial de herencia citoplasmtica es la protagonizada por los genes contenidos en algunos plsmidos extragenmicos.
Adems de los plsmidos bacterianos, algunos
organismos eucariotas tienen tambin plsmidos
extragenmicos repartidos por el nucleoplasma
o en el interior de las mitocondrias. Uno de los
casos mejor conocidos es el plsmido de 2,um
de las levaduras que ha sido utilizado (como se
ver ms adelante) para la construccin de
cromosomas artificiales. Pero los casos de
herencia uniparental ms relevantes se han

encontrado en el maz y en el hongo
Neurospora. Los plsmidos lineales S1 y S2 del
maz (que estn situados en las mitocondrias y
pueden llegar incluso a recombinar con el
genoma mitocondrial) estn relacionados con la
esterilidad masculina de estas plantas. Los
patrones de herencia de este carcter se explican
teniendo en cuenta la presencia o ausencia de
estos plsmidos en el citoplasma, en
combinacin con la de un gen supresor en el
genoma nuclear que es capaz (su alelo dominante) de restaurar la fertilidad masculina.
En Neurospora la senescencia y la muerte
rpida del hongo estn controladas por un plsmido lineal de 9 kb denominado kalilo que
causa los problemas cuando se integra en el
ADN mitocondrial afectando a un gen de la
subunidad grande del ARNr.
5. Herencia infectiva y efectos maternos
Todos los casos descritos hasta ahora se podran considerar verdaderos ejemplos de herencia citoplasmtica atribuibles a genes que estn presentes de manera regular en el
citoplasma, ya sea en el genoma de los
orgnulos
celulares
o
en
plsmidos
extragenmicos. Pero hay otros casos de
aparente herencia uniparental que se deben a
genes contenidos en organismos endosimbiontes
(herencia infectiva), o a los productos de la
expresin de unos genes matemos (protenas o
ARNs) que actan con efectos retardados en la
descendencia (efectos matemos).
Los casos mejor conocidos de herencia
infectiva son los del carcter matador en
paramecios (que se debe a la presencia de unas
bacterias kappa productoras de paramecina en
el citoplasma de los paramecios resistentes), la
sex-ratio en Drosophila (debida a una espiroqueta endosimbionte), y la sensibilidad al
CO2 tambin en Drosophila (que se debe al factor sigma). En el caso del paramecio los llamados mutadores o paramecios asesinos se
caracterizan por la presencia de las bacterias
kappa en el citoplasma de paramecios que
tienen un gen nuclear dominante (KK o Kk),
mientras que los sensibles tienen una consti-
107
FIG. 7.7. Herencia infectiva en los paramecios.
tucin nuclear homocigtica recesiva (kk) y no

soportan la presencia de estas bacterias en su
citoplasma (fig. 7.7).
Finalmente el ejemplo paradigmtico de los
efectos maternos es sin duda la herencia del
sentido del enrollamiento de la concha en el
caracol Limnaea peregra. En este caso el
fenotipo de cualquier caracol viene determina-
do siempre por la constitucin gentica de la

madre (fig. 7.8). Pero ste no es el nico ejemplo, los efectos maternos sern considerados
de nuevo en los captulos de Gentica del Desarrollo donde se ver que las primeras decisiones durante el desarrollo de algunos embriones,
como el de Drosophila, se toman con los
productos de expresin de los genes maternos
108
GENTICA
FIG. 7.8. Efectos maternos en el caracol Limnaea peregra.
antes de reiniciarse la sntesis de protenas propias, y en el captulo dedicado a los mecanismos

de regulacin de tipo epigentico.
Anderson, S. et al. (1981): Sequence and

organization of the human mitochondrial
genome, Nature, 290: 457-465.
Griffiths, A. J. F. et al. (2000): An introduction

toGenetic analysis (5.a ed.), Freeman.
Klug, W. S. y Cummings, M. R. (2001):
Essentials of Genetics (4.a ed.), Prentice
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molecular genetics, 2, BIOS.
Tamarin, R. H. (2001): Principles of Genetics
(7.aed.), Brown Pub.
Wallace, D. G. (1999): Mitochondrial diseases
in man and mouse, Science, 283:
1.482-1.488.
Captulo
Ligamento y Recombinacin
1.
Los Fenmenos del Ligamento y la Recobinacin gentica
2.
Mapas de Ligamento
3.
Mapas de Tres Puntos: Interferencia y Coincidencia
4.
Ligamento Absoluto
5.
Mapa de Ligamento en la Especie Humana
110
GENTICA
1. Los fenmenos del ligamiento y la

recombinacin gentica
Casi recin redescubiertas las leyes de

Mendel, Bateson y Punnet comprobaron que los
patrones de herencia de dos caracteres del
guisante (P/p: color prpura o rojo de la flor y
L/1: granos de polen alargados o redondeados)
se apartaban significativamente de las proporciones mendelianas esperables para la F2
(9:3:3:1), pero con la particularidad de que los
cuatro genotipos posibles se repartan en dos
clases fenotpicas, y las plantas con fenotipos
prpura-alargados y rojo-redondeado eran mucho ms frecuentes que las plantas con fenotipos rojo-alargado y prpura-redondeado. Pensaron que, por causas desconocidas, las plantas
F1 deberan producir ms gametos P/L y p/I de
lo esperado, posiblemente por la existencia de
algn tipo de acoplamiento fsico entre los
alelos dominantes y recesivos de ambos loci, y de
algn tipo de repulsin entre los otros alelos.
Por primera vez se hablaba de gametos en
acoplamiento y en repulsin (fig. 8.1).
Aos despus Morgan y Sturtevan confirmaron la hiptesis de Bateson y Punnet en
Drosophila. El equipo de Morgan encontr un
caso similar con los patrones de herencia de los
caracteres color de los ojos prpura/rojos
(pr/pr+) y alas normales/vestigiales (res;+/vg).
Al realizar cruzamientos prueba entre hembras
dihbridas de la Fl con machos homocigticos
recesivos obtuvieron unas proporciones que se
apartaban significativamente de las 1:1:1:1
esperadas. De nuevo las combinaciones gnicas
parentales aparecan con mayor frecuencia que
las no parentales, pero adems, las dos
combinaciones parentales y las dos no
parentales se presentaban en proporciones similares. Si cambiaban los fenotipos parentales,
las clases fenotpicas predominantes seguan
siendo las parentales aunque ahora con un
fenotipo diferente al del cruce anterior (fig. 8.2).
En vista de estos resultados Morgan sugiri que
los caracteres que presentaban estos patrones de
herencia se deban a genes localizados en el
mismo par cromosmico, es decir, estaban
unidos fsicamente en la misma estructura

cromosmica y, por tanto, tendan a transmitirse
juntos para formar los gametos. Sin embargo,
los cromosomas homlogos tendran que
experimentar algn tipo de intercambio fsico
durante la meiosis (intercambio que denomin
crossing-over o entrecruzamiento) para
explicar las clases fenotpicas menos frecuentes.
El anlisis de los cromosomas (en Drosophila y
otros organismos animales y vegetales) durante
la meiosis permiti descubrir los puntos
posibles de intercambio fsico como unas
estructuras en formas de aspa que se
denominaron quiasmas. Por tanto los
quiasmas seran la expresin citolgica del
entrecruzamiento. Finalmente se acu el
trmino ligamiento para referirse al fenmeno
mediante el cual las combinaciones allicas
parentales, que estn presentes en el mismo par
cromosmico (haplotipos parentales), tienden a
transmitirse inalteradas a la descendencia. Por
otro lado, la recombina
Fig. 8.1. La hiptesis del acoplamiento fsico y la re

pulsin de Bateson y Punnet en el guisante de olor.
Acoplamiento: combinaciones ale alelos dominantes
(PL r pl); repulsin: combinaciones de un alelo dominante y otro recesivo (Pl y PL)
111
FIG. 8.2. Morgan y Sturtevan confirmaron la hiptesis de Bateson y Punnet en Drosophila. Se favorecen
siempre las combinaciones allicas parentales (haplotipos parentales).
cin gentica sera el proceso que, sucediendo

durante la meiosis, explicara la formacin de
productos gamticos haploides diferentes a los
que existen en las clulas precursoras de la
meiosis (parentales). De acuerdo con esta definicin, y en un sentido amplio, el fenmeno de
la recombinacin se podra producir simplemente por la distribucin independiente de
los dos caracteres (fig. 8.3). Pero en un sentido
estricto, la recombinacin gentica sucedera
durante la meiosis mediante el entrecruzamiento entre genes ligados (fig. 8.4).
La relacin entre quiasmas (observables
citolgicamente), intercambios fsicos y
recombinacin gentica (detectada por los
marcadores genticos) pudo ser establecida en
organismos con parejas cromosmicas heterlogas portadoras de al menos dos loci con variantes allicas fcilmente distinguibles. Este
fue el caso del experimento de CreightonMcClintock desarrollado en una variedad de

maz con una pareja de cromosomas claramente
diferenciables al microscopio. Uno de ellos
tena un bloque terminal de heterocromatina
(Knob) y era de mayor tamao que su pareja
como consecuencia de la adicin de un segmento translocado. Entre el Knob y el segmento translocado localizaron dos loci con dos
alternativas allicas cada uno (C/c = grano coloreado/incoloro; y Wx/wx = aspecto creo o
amilceo). Cuando cruzaron una planta de maz
con esos cromosomas heterlogos y
heterocigtica para ambos caracteres con otro
con cromosomas homlogos indiferenciables y
heterocigtico para el gen wx, los descendientes
que haban intercambiado los marcadores
genticos parentales (recombinantes genticos)
haban experimentado tambin el inter-
112
GENTICA
FIG. 8.3. Recombinacin gentica por distribucin independiente.
cambio fsico consiguiente entre sus cromosomas, como se poda demostrar mediante su
anlisis al microscopio (fig. 8.5).
2. Mapas de ligamiento
La existencia de los fenmenos de ligamiento y recombinacin inspiraron a Sturtevant

(discpulo de Morgan) para idear un sistema de
cartografiado gentico donde los genes ligados
se ordenaban segn la frecuencia de recombinacin. Si, como pareca, el fenmeno de
recombinacin suceda con igual probabilidad a
lo largo de todos los cromosomas, la recombinacin sera tanto ms frecuente cuanto
ms alejados estuviesen los genes (fig. 8.6), y la
frecuencia de recombinacin se podra considerar como una medida de la distancia gen
tica existente entre dos loci. La unidad de

mapa (u.m.) se defini como la distancia entre
dos loci cuando uno de cada 100 productos
meiticos fuese recombinante, y fue denominada centiMorgan (cM) (FR = 1 % = 1 u.m. =
1 cM). Con este criterio Sturtevant realiz el
primer mapa gentico de Drosophila ordenando
seis genes ligados en el cromosoma X. En la
figura 8.7 se muestra, a modo de ejemplo, el
clculo de la distancia gentica entre dos loci
ligados implicados en la coloracin de los ojos y
en el tamao de las alas de Drosophila.
Las prcticas de cartografiado se
extendieron rpidamente a otros materiales
de inters bsico y/o aplicado, y surgieron
los primeros mapas genticos del maz, del
tomate, etc. El criterio desarrollado por
Sturtevant
sigue
siendo
ampliamente
utilizado como una primera aproximacin
para
ordenar
el
material
genti-
113
FIG. 8.4. Recombinacin gentica por entrecruzamiento durante la meiosis.
co de los organismos. Ms adelante, se comprender an ms la importancia de disponer de

un mapa ordenado de marcadores polimrficos
sobre el que apoyarse para la elaboracin de los
mapas fsicos, y poder finalmente secuenciar los
genomas (Proyectos Genoma). No obstante hoy
da se sabe que la frecuencia de recombinacin
puede variar de unas regiones cromosmicas a
otras (debido en parte a la existencia de regiones
heterocromticas); que la frecuencia de
intercambios fsicos depende de la longitud de
los complejos sinaptonmicos (al menos en
mamferos); y que pueden existir diferencias
notables entre la frecuencia de recombinacin
entre los diferentes sexos (por ejemplo, en la
especie humana).
Como se indica en la figura 8.8, la
frecuencia mxima de recombinacin que se
podra detectar entre dos loci ligados es tan slo
del 50 % (distribucin independiente). Cuando

no hay entrecruzamientos durante la meiosis,
ninguno de los cuatro productos meiticos es
recombinante (FR = 0), pero cuando hay
entrecruzamientos la frecuencia mxima de
gametos recombinantes es del 50 % con
independencia
del
nmero
de
entrecruzamientos que se produzcan entre
dos loci. Por tanto la elaboracin de un mapa
gentico ha de hacerse necesariamente sumando
las distancias parciales estimadas entre
marcadores cercanos. De esta forma la
longitud gentica de cualquier cromosoma
estar siempre muy por encima de ese
valor.
Una vez establecido el criterio para la elaboracin de los mapas genticos de ligamiento,
el problema fundamental radica en la disponibilidad de suficientes marcadores genticos
114
GENTICA
FIG. 8.5. Experimento de Creighton y McClintock para demostrar que los quiasmas son la expresin citolgica
de la recombinacin gentica.
FIG. 8.6. Fundamentos del cartografiado mediante anlisis de ligamiento: al aumentarla distancia entre a y b,
aumenta el nmero de meiosis con entrecruzamiento entre ambos loci.
115
FIG. 8.7. Clculo de la frecuencia de recombinacin en Drosophila: FR = 900/2.441 X 100 = 36,8 % = 36 cM.
polimrficos distribuidos a lo largo de todos los

cromosomas de un complemento. Pero la
desconexin existente entre el nmero de intercambios fsicos reales y la frecuencia de recombinacin (detectada por los marcadores
genticos) hace necesario definir una funcin de
mapa para corregir las diferencias. La distribucin de los diferentes tipos de meiosis (con
0,1,2, etc., intercambios fsicos entre dos loci) se
asemeja a una distribucin de Poisson, con la
siguiente frmula general: F(i) = e m m`li! De
esta forma, la frecuencia de meiosis sin entrecruzamientos sera F(0) = e m m/0! = e", y el
resto de las meiosis (con uno o ms entrecruzamientos) sera: 1 - F(0) = 1 - e. Finalmente, la
frecuencia de recombinacin sera FR ='/z (1 - e"`), porque cuando hay meiosis con entrecruzamientos slo la mitad de los gametos acaban siendo recombinantes. Por tanto habra que
utilizar esta funcin de mapa para que,
conocida la FR gentica, se pueda despejar el
valor de m y establecer una distancia gentica
ms precisa.
En la figura 8.9 se recoge una representacin

grfica de los diferentes tipos de meiosis (segn
el nmero de intercambios entre dos loci), y la
funcin de mapa necesaria para la correccin
de las distancias genticas.
3. Mapas de tres puntos: interferencia y
coincidencia
Cuando se consideran tres loci simultneamente los entrecruzamientos pueden

suceder entre los dos primeros (recombinantes
l), entre los dos segundos (recombinantes II) o
en ambos sitios a la vez (recombinantes dobles
o RD) (fig. 8.10). Al tratarse de sucesos
independientes, la frecuencia de recombinantes
dobles tendra que ser igual al producto de las
frecuencias de los dos tipos de recombinantes
sencillos. Sin embargo, normalmente la
frecuencia de recombinantes dobles observados
es menor que la esperada. Este fenme-
116
GENTICA
FIG. 8.8. La FR mxima entre genes ligados es del 50 % aunque los genes estn ligados.
no se conoce con el nombre de interferencia

(I), y se calcula como I = 1 - (frecuencia de RD
observados/frecuencia de RD esperados) = 1 - C
(coeficiente de coincidencia). La interferencia
suele ser casi siempre positiva, y se podra
interpretar admitiendo que la ocurrencia de un
entrecruzamiento impide o dificulta de alguna
manera que suceda otro en su proximidad.
4. Ligamiento absoluto
Se ha comentado que la frecuencia de recombinacin puede variar de unas regiones

cromosmicas a otras (por las diferencias exis-
tentes en la organizacin de la cromatina), que

es proporcional a la longitud del complejo sinaptonmico, y que depende (por tanto) del
grado de homologa existente entre los genomas
que se aparean durante la meiosis. Sin embargo
hay casos verdaderamente singulares de
ligamiento absoluto que se caracterizan por la
ausencia total de recombinacin. El caso mejor
conocido es el de los machos de Drosophila,
donde los resultados de los cruzamientos
recprocos demuestran que slo hay recombinacin en las hembras. Las evidencias citolgicas demuestran que los machos de Drosophila
son aquiasmticos, es decir, no se observa la
FIG. 8.9.
117
Funcin de mapa para ajustarla frecuencia de recombinacin observada al nmero real

de intercambios f sicos.
formacin de ningn quiasma entre los cromosomas homlogos durante la meiosis. Tambin se han descrito otros casos de ligamiento
absoluto en las hembras del gusano de seda
(Bombix mor). Finalmente, hay algunos ejemplos
de ligamiento absoluto de carcter regional en
las regiones diferenciales de los cromosomas
sexuales heterlogos. Recurdese el caso
paradigmtico de los cromosomas X e Y
humanos que slo tienen dos regiones pequeas
(sobre todo una) de homologa.
5. Mapa de ligamiento en la especie

humana
La elaboracin del mapa gentico de la especie humana contaba desde el principio con
dos grandes hndicaps: la disponibilidad de pocos marcadores polimrficos y el tamao reducido de los ncleos familiares. El primer problema se fue resolviendo poco a poco con la incorporacin de nuevas tcnicas y metodologas, de
modo que a los polimorfismos iniciales basados
118
GENTICA
Fig. 8.10. Mapas de tres puntos. En este caso b es el marcador central; y las distancias genticas entre
los loci son: a-b = 1,56 cM y b-c = 4,06 cM.
en la observacin del fenotipo externo de los organismos, siguieron los basados en el anlisis de
las protenas y, finalmente, los polimorfismos
de ADN (basados en el anlisis comparativo de
las secuencias de ADN (fig. 8.11), que se detectan mediante las tcnicas que se describen en los
captulos dedicados a la Tecnologa del ADN
Recombinante. En cualquier caso, la utilidad
de cualquier tipo de polimorfismo depende de
su grado de informatividad, es decir, del grado de variabilidad que presente en las poblaciones naturales. La informatividad se podra estimar a travs del ndice de heterocigosidad
(porcentaje de organismos heterocigticos),
pero sera ms adecuado hacerlo a partir del parmetro estadstico PIC (ndice de polimorfismo), puesto que este ndice recoge todas las
variantes allicas posibles distinguiendo los organismos heterocigotos que tengan combinaciones allicas diferentes
El segundo problema se resolvi con el

clculo del valor lod (del ingls log of the
odds) introducido por Haldane y Smith en
1947, y mejorado despus por Morton en 1955.
El valor lod (Z) representa el logaritmo del
cociente entre la probabilidad de una secuencia
de nacimientos suponiendo que los dos marcadores genticos estn ligados (utilizando diferentes frecuencias de recombinacin o valores
9), y la probabilidad de que no estn ligados. En
el ejemplo de la figura 8.12 se considera una
pequea genealoga o familia nuclear con
individuos pertenecientes a tres generaciones (I,
II y III). Los individuos cuyos smbolos
aparecen en negro padecen una enfermedad
autosmica dominante debida a la presencia del
alelo E. Adems todos los individuos han
sido analizados para determinar las variantes
allicas de un marcador gentico de tipo microsatlite del cromosoma 1 humano denominado A. Si los loci de ambos marcadores estuviesen ligados la frecuencia de recombinacin
(9) sera de 1/8 (es decir 12,5 cM o u.M.) o
119
FIG. 8.11. Evolucin histrica de los polimorfismos de ADN.
0,125 (en tanto por uno), puesto que slo hay un

recombinante entre los 8 individuos informativos de la generacin III (1114). En este
caso la probabilidad de que aparezca un descendiente no recombinante sera (1 - 0,125)/2 =
0,4375, y la probabilidad de que surja un individuo recombinante como el 1114 sera 0,125/2
= 0,0625 (en ambos casos se divide por dos
porque tanto los recombinantes como las combinaciones parentales constituyen siempre parejas recprocas). Por tanto el valor Z se calculara como el logaritmo de la probabilidad de la
secuencia de nacimientos suponiendo que hay
ligamiento y una fraccin de recombinacin de
0,125, partido por la probabilidad de la secuencia de nacimientos suponiendo que no hay ligamiento (los clculos se indican en la fig. 8.12).
Despus se repetiran los mismos clculos su
poniendo distintos valores de 9 hasta deducir el

valor mximo que sera el ms fiable. Los valores de lod por encima de 3 (probabilidad de
ligamiento mil veces superior al supuesto contrario) equivalen a una probabilidad del 0,05
que es el umbral aceptado normalmente en este
tipo de anlisis. Por otro lado, los valores iguales o inferiores a -2 seran considerados como
negativos (planteamientos descartables). En el
ejemplo de la figura 8.12 el valor de lod ms
alto (1,099) indica la posible existencia de ligamiento con una fraccin de recombinacin de
0,125, pero al ser inferior a 3 no se puede aceptar definitivamente esta posibilidad. La solucin
sera analizar esta misma pareja de marcadores
en otros ncleos familiares y determinar la
probabilidad conjunta de ligamiento. Como se
trata de sucesos independientes, la probabi-
120
GENTICA
FIG. 8.12. Clculo del valor lod para la estimacin de ligamiento en la especie humana.
lidad conjunta sera el producto de las probabilidades individuales, pero puesto que el valor
lod es de naturaleza logartmica en realidad
se iran sumando los resultados hasta conseguir
significacin estadstica. Lgicamente la realizacin de todos estos clculos puede llegar a ser
extraordinariamente complicada conforme se
aaden nuevos grupos familiares y, sobre todo,
cuando aparecen individuos no informativos,
es decir, individuos donde no es posible
establecer con claridad la ubicacin cromosmica (fase) de los alelos de ambos marcadores. En estos casos el clculo manual ha de
sustituirse por el empleo de un paquete estadstico, como el Linkage, que contiene los programas adecuados para solventar estos problemas
(LINKMAP). Finalmente el problema de las
diferencias existentes entre la frecuencia de recombinacin en el genoma de los hombres y el
de las mujeres, obliga a presentar dos mapas de
ligamiento por separado o a promediar los datos
obtenidos en ambos sexos.
Creighton, H. B. y McClintock, B. (1931): A

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Captulo
Tcnicas Especiales de Cartografiado

en Cromosomas Eucariticos
1.
Anlisis de Productos Meiticos Individuales
2.
Clculo de Distancias Genticas Mediante Anlisis de Ttradas
3.
Segregacin y Recombinacin Somticas
4.
Cartografiado Mediante Hibridacin Celular Somtica
122
GENTICA
1. Anlisis de productos meiticos

individuales
A diferencia de lo comentado en el captulo

anterior existen algunos casos excepcionales
donde los cuatro productos de cada meiosis
permanecen juntos agrupados en ttradas. Se
trata de algas, como Chlamydomonas, levaduras
como Saccharomyces cerevisiae, y hongos
como Aspergillus nidulans, aunque en este
ltimo caso los productos de la meiosis sufren
una divisin mittica con posterioridad generando un octete. En todos estos ejemplos los
productos meiticos (ascosporas) se agrupan
desordenadamente dentro de las aseas, pero
se pueden encontrar tambin algunos casos de
ttradas ordenadas, como en el hongo Neurospora crassa, donde la posicin de las ascosporas (que aqu son tambin ocho) dentro
del asca refleja los acontecimientos acaecidos
durante la meiosis (fig. 9.1).

Esta circunstancia tan especial, junto al
carcter haploide y las altas tasas reproductivas
hacen que estos organismos constituyan un
material excepcional para los estudios de
ligamiento/recombinacin y la elaboracin de
mapas genticos. Su naturaleza haploide evita
las dificultades debidas a las interacciones entre
los alelos de un mismo loci, y obvia la
necesidad de discernir entre los procesos
meiticos de los dos parentales. Por otro lado, la
identificacin de los productos recombinantes y
no recombinantes no hay que hacerla
necesariamente a travs del anlisis de
cruzamientos, puesto que (en muchos casos)
se puede inferir la constitucin gentica de las
ascosporas a travs de la observacin de su
fenotipo externo. Finalmente, el clculo de las
distancias genticas se puede realizar directamen-
FIG. 9.1. Anlisis de productos meiticos individuales: tipos de ttradas u octetos.
te mediante el recuento de los diferentes tipos

de ttradas.
2. Clculo de distancias genticas

mediante anlisis de ttradas
El anlisis de las ttradas ordenadas permite deducir con facilidad los patrones de segregacin de un marcador gentico durante la
meiosis. En la figura 9.2 se recoge el ejemplo
terico de una ttrada ordenada y lineal (que podra corresponder a Neurospora crassa) procedente de un cruce entre dos parentales con diferencias fenotpicas atribuibles a dos alelos (A y
a) del mismo gen. Cuando las cuatro ascosporas
superiores presentan fenotipos indicativos de la
presencia del alelo A, y las cuatro inferiores fenotipos correspondientes al alelo a se puede in
123
terpretar que la segregacin tuvo lugar en la primera divisin meitica (ttrada de tipo M-I), sin
que haya habido recombinacin entre el locus y
el centrmero. Por el contrario, en la figura 9.3
la disposicin de las ascosporas se aparta de la
proporcin 4:4 anterior. Ahora se trata de una
distribucin alternante 2:2:2:2 que slo se puede
explicar si los alelos segregaron en la segunda
divisin meitica (ttradas de tipo M-II) como
consecuencia de un fenmeno de entrecruzamiento entre el locus y el centrmero. Por
tanto la distancia gentica entre un locus y el
centrmero se puede calcular fcilmente mediante el cociente entre el nmero de astas recombinantes (M-II) dividido por dos y el nmero total de astas (M-I + M-II). La razn para dividir por la mitad el nmero de aseas M-II estriba en el hecho de que cada fenmeno de entrecruzamiento afecta slo a dos de las cuatro cro-
FIC. 9.2. Segregacin en la primera divisin meitica. Ttradas de tipo M-I.
124
GENTICA
FIG. 9.3. Segregacin
en la segunda divisin meitica. Ttradas de tipo M-II.
mticas, y por tanto slo cuatro de las ocho ascosporas contienen en realidad material gentico recombinado. Como se puede ver se trata de
un procedimiento muy sencillo donde el anlisis
de los productos meiticos se hace directamente
mediante el recuento del nmero de ascas de los
dos tipos.
La determinacin de la distancia gentica
existente entre dos loci cualesquiera (A y B), se
puede ver beneficiada igualmente por la singularidad de este tipo de organismos. En la figura
9.4 se presenta el esquema de las cuatro cromtidas que integran un bivalente meitico, y seis
tipos diferentes de meiosis. En la meiosis de la
parte superior izquierda no hay entrecruzamiento y, por tanto, resultan cuatro productos
meiticos (o ascosporas) iguales dos a dos y a
sus parentales: por ello el asca se denomina
ditipo parental (DP). Como ya se explic en
el captulo anterior, los intercambios fsicos

reales no se traducen siempre en el intercambio
de los marcadores flanqueantes (recombinacin
gentica) y, como prueba de ello, la meiosis
central de la izquierda ha sufrido dos entrecruzamientos consecutivos que afectan a las
dos cromtidas interiores pero no hay intercambio de los marcadores genticos (vuelve a
producirse un ditipo parental). En todas las dems meiosis hay diferentes tipos de combinaciones de entrecruzamientos que pueden generar ditipos no-parentales (cuando los cuatro productos son recombinantes, iguales dos a
dos y diferentes de los parentales), y tetratipos (cuando los cuatro productos meiosis son
diferentes entre s: uno de cada tipo parental y
los dos recombinates recprocos). Por tanto la
distancia gentica entre los loci a y b se puede
calcular como la suma de la mitad de tetratipos
125
FIG. 9.4. Distancia entre dos loci mediante anlisis de ttradas.
y todos los ditipos no-parentales dividida por el

nmero total de ttradas. En cualquier caso
estos clculos representan siempre una infraestimacin de la frecuencia real de intercambios
fsicos y debera ser corregida mediante una
funcin de mapa.
3. Segregacin y recombinacin
somticas
Los fenmenos de segregacin y recombinacin han aparecido hasta ahora ligados a la

meiosis, pero pueden suceder tambin, aunque
con menos frecuencia, durante las divisiones
celulares o mitticas. Si se considera una pareja
de cromosomas homlogos como los de la
figura 9.5, y un locus ocupado, alternativamen-
te, por los alelos A o a, lo normal sera que despus de la mitosis resultasen dos clulas hijas
idnticas a la clula madre, sin que se haya producido la segregacin de esas variantes allicas.
Sin embargo, ocasionalmente se pueden
producir fenmenos de no-disyuncin como los
mencionados en captulos anteriores para
demostrar que los genes estaban en los cromosomas. En este caso los dos alelos a podran
quedar en una de las clulas hijas producindose
un fenmeno de segregacin mittica. De
igual modo, la eliminacin de un cromosoma
durante la meiosis podra provocar tambin la
ausencia de este alelo en una de las dos clulas
hijas. Cuando estos fenmenos se producen
durante el desarrollo de los organismos se generan fenotipos variegados (porque coexisten
sectores de tejidos somticos con diferentes
126
GENTICA
FIG. 9.5. 1) Mitosis normal; 2) segregacin somtica mediante no-disyuncin, y 3) eliminacin cromosmica.
fenotipos), o mosaicos, es decir organismos

compuestos por tejidos o sectores con dos o ms
genotipos diferentes que podran reconocerse
por las diferencias fenotpicas que producen. El
trmino quimera suele aplicarse para designar
al organismo que resulta de la fusin o
intercambio de clulas diferentes. Por ejemplo
la fusin de clulas embrionarias procedentes de
diferentes zigotos generara una quimera. En
cambio los casos de mosaicismo se producen
durante el desarrollo de un organismo que se
origin a partir de un solo zigoto.
El mosaicismo se puede producir tambin
por mutacin somtica y por recombinacin
somtica. El origen del mosaicismo por una
causa mutacional puede resultar obvio, pero la
implicacin de la recombinacin somtica fue
toda una sorpresa descubierta gracias a los
trabajos de Stern en Drosophila y Pontecorvo en
Aspergillus. En el caso de Drosophila el
descubrimiento vino al intentar explicar la
existencia de sectores del cuerpo con fenotipos
diferentes al esperado. Las observaciones se

realizaron en moscas di-heterocigticas para dos
marcadores: singed, donde el alelo mutante (sn)
era recesivo y determinante de quetas cortas y
curvas, y yellow (amarillo) donde el alelo
mutante era igualmente recesivo y determinante
de coloracin amarilla del cuerpo. Ambos loci
estaban ligados al cromosoma X, y los datos
disponibles sobre el mapa gentico de este
cromosoma indicaban que la distancia gentica
entre sn e y era ms pequea que la existente
entre sn y el centrmero. La mayora de las
hembras di-heterocigticas que se obtenan al
cruzar hembras XX (sn/sn; +/+) con machos XY
(+; y) tenan un fenotipo externo salvaje, pero
algunas presentaban sectores amarillos,
sectores con quetas cortas y curvas, o sectores
gemelos (con los dos tipos anteriores
adyacentes). Curiosamente los sectores ms
frecuentes eran los gemelos seguidos de los
amarillos y finalmente los de quetas cortas y
curvas (que eran los menos frecuentes).
Estos resultados no podan explicarse mediante

mutacin somtica durante el desarrollo, porque
la mutacin sucede con una frecuencia
extraordinariamente baja, y sera altamente
improbable que se produjeran dos mutaciones
distintas ocurriendo simultneamente en dos
clulas adyacentes para explicar los sectores
gemelos. Adems estaba el hecho de la distribucin de las frecuencias de los diferentes tipos
de sectores. Sin embargo, los resultados podan
explicarse si se admita la ocurrencia de
recombinacin mittica (fig. 9.6). Si fuese as,
la recombinacin tendra que suceder con mayor
frecuencia entre el locus sn y el centrmero (por
la mayor distancia gentica), y esto concordara
con la mayor frecuencia de los sectores
gemelos. Por el contrario, el evento menos
frecuente tendra que ser la aparicin de dobles
recombinantes, y esto coincidira tambin con la
menor frecuencia de los sectores con quetas
cortas y romas. La coincidencia de las
127
observaciones reales y del supuesto terico de la

recombinacin somtica hizo que finalmente se
aceptara la validez de la hiptesis. Desde entonces, la recombinacin mittica ha sido
aprovechada para la elaboracin de mapas genticos, y su induccin mediante tratamiento de
los embriones de Drosophila con radiaciones
ionizantes ha resultado crucial para el esclarecimiento de los procesos de desarrollo en
este organismo.
Con respecto a los hongos, Pontecorvo fue
el primer investigador que descubri la existencia de recombinacin mittica en Aspergillus
nidulans, definiendo los sistemas parasexuales como aquellos capaces de experimentar
procesos de recombinacin somtica. Hoy se
podra decir que todos los sistemas genticos
son en mayor o menor medida parasexuales.
Los hongos como Aspergillus ofrecen extraordinarias ventajas para el anlisis gentico.
Fig. 9.6. Recombinacin mittica en Drosophila.
128
GENTICA
La fusin entre dos hifas haploides parentales

conduce primero a la inclusin de los dos tipos
de ncleos en un mismo citoplasma (heterocarion), y despus a la fusin de los ncleos (sincarion). Tras una serie de divisiones mitticas
posteriores se acaban generando sectores diploides de los que se desprenden conidias diploides. Finalmente, estas conidias germinan y
producen hifas diploides estables reconocibles por su mayor tamao, o con el uso de
marcadores genticos adecuados. As, por
ejemplo, las variantes de color se deben normalmente a diferentes alelos de uno o dos pares
gnicos, cuyas combinaciones generan gamas
intermedias de color al interrumpirse en diferentes etapas la secuencia de las reacciones
qumicas que determinan el color verde oscuro
(fenotipo salvaje). Otros marcadores de gran
utilidad son los llamados mutantes auxotrficos, caracterizados por su incapacidad para
vivir en medios mnimos de cultivo que no estn
suplementados con el metabolito que no pueden
sintetizar. A pesar de su estabilidad las hifas
diploides pueden experimentar fenmenos de
haploidizacin
mediante
eliminacin
cromosmica.
La demostracin de que este tipo de hongos
podan experimentar procesos de recombinacin
mittica parti de una observacin similar a la
comentada en Drosophila. Sobre un csped
(cultivo en placa) de fenotipo salvaje (verde
oscuro) integrado por hifas diploides diheterocigticas para los marcadores de color w
(blanco) e y (amarillo), se observ la aparicin
de sectores amarillos y/o blancos (con una
frecuencia reducida), y el anlisis de estos
sectores (atendiendo al tamao de las hifas y
con el uso de algunos mutantes auxotrficos
dependientes
de
prolina,
adenina,
paraaminobenzoico, etc.) demostr que los
sectores excepcionales podan estar ocupados
tanto por hifas haploides como diploides (fig.
9.7). La existencia de hifas amarillas o blancas
haploides poda deberse a los fenmenos
aludidos de haploidizacin, pero cmo
explicar las hifas excepcionales diploides?
Utilizando la misma lnea argumental que antes,
la nica posibilidad era admitir que hubieran
sucedido fenmenos de recombinacin
somtica. En el ejemplo de la figura 9.7 se

muestra la existencia de los dos loci en diferentes cromosomas homlogos, y la aparicin
de sectores con hifas diploides de color amarillo
como consecuencia de la recombinacin entre
los loci pro y paba.
4. Cartografiado mediante hibridacin
celular somtica
Los cultivos primarios de las clulas de

un mamfero se caracterizan por su crecimiento
en una sola capa (inhibicin por contacto) y por
la capacidad limitada de sus clulas para
dividirse antes de llegar a un estado de senescencia. Este tipo de clulas pueden ser inmortalizadas (normalmente mediante tratamientos
virales) consiguindose as lneas celulares de
crecimiento indefinido. Aunque las clulas en
cultivo mantienen su individualidad, se
pueden producir fusiones celulares de forma
espontnea o con mayor frecuencia si realizan
tratamientos con polietilenglicol o con virus
Senda. Las clulas humanas y las de un roedor
pueden experimentar este tipo de fusiones y, de
manera anloga a lo mencionado en los hongos,
cada fusin genera en principio un heterocarion
y despus un sincarion (fusin de los ncleos
humano y de roedor). Pero a partir de este
momento se produce un fenmeno de
eliminacin selectiva de la mayora de los genes
humanos permaneciendo intactos los del roedor.
Es decir, se podran obtener colonias hbridas
estables con uno o pocos cromosomas humanos
adems de los cromosomas del roedor (fig. 9.8).
Una vez conseguidas unas tasas altas de fusin el objetivo primordial sera la seleccin de
las clulas hbridas, y esto se puede conseguir
mediante la utilizacin de clulas humanas y de
roedor con deficiencias genticas complementarias y un medio selectivo. Las clulas humanas podran ser fibroblastos capaces de sintetizar timidina quinasa (TK+) pero deficientes en
hipoxantina-fosfo-ribosil-transferasa (HPRT-), y
las clulas del roedor podran ser fibroblastos de
ratn capaces de sintetizar HPRT pero no TK.
La sntesis de las bases nucleotdicas tiene
129
FIG. 9.7. Recombinacin mittica en Aspergillus.
una ruta principal a partir de un azcar y aminocidos, que puede ser bloqueada selectivamente con Aminopterina (o metotrexato), y una
ruta de emergencia a partir de bases preexistentes y nuclesidos donde la HPRT catalizara el
paso de hipoxantina a purinas, y la TK el paso
de timina a pirimidinas. En estas condiciones el
medio HAT (H, de hipoxantina; A, de aminopterina; y T de timina) bloqueara la ruta principal de sntesis de nucletidos (por la aminopterina) de modo que slo podran crecer las clulas hbridas al ser las nicas que tienen la capacidad de sintetizar las dos enzimas. Con el sistema G418 el criterio de seleccin se basa en la
utilizacin del antibitico neomicina, porque
slo seran resistentes los hbridos que contuviesen un segmento cromosmico humano que
lleva incorporado un gen de resistencia a la neomicina (neoR).
La disponibilidad de bateras completas
de este tipo de colonias (hbridos somticos) es
de gran utilidad para las labores de

cartografiado del genoma humano, porque
permite asignar genes humanos (detectados
mediante el anlisis directo del genoma de la
clula hbrida, o identificando los productos de
su expresin) a un cromosoma o fragmento
cromosmico humano (resuelto mediante
anlisis citogentico), resolviendo un pequeo
puzzle. Es decir, se pueden hacer mapas de
sintenias (entendiendo por genes sintnicos los
presentes en el mismo cromosoma o hebra de
ADN). En el caso de la figura 9.8 el gen a
debera estar en el cromosoma 2 humano. Esta
forma de asignar genes a cromosomas
especficos se puede completar con la aplicacin
de las tcnicas de hibridacin in situ que se
describieron en el captulo dedicado a la
Organizacin de los cromosomas. Pero con los
hbridos somticos se puede conocer el cromosoma donde est el gen, y se dispone del
130
GENTICA
FIG. 9.8. Cartografiado mediante hibridacin celular somtica.
ADN y las protenas necesarias para realizar

anlisis adicionales.
Los hbridos somticos mencionados
contienen cromosomas humanos completos,
pero se pueden obtener otros derivados que
contengan fragmentos cromosmicos especficos. Los procedimientos ms utilizados para
ello son la transferencia de fragmentos cromosmicos y la obtencin de hbridos de radiacin. La transferencia de fragmentos parte
de la fragmentacin artificial de los cromosomas en fibroblastos humanos, que son despus
purificados y transferidos a fibroblastos de ratn
donde se integran de manera estable en sus
cromosomas. En el caso de los hbridos de radiacin, las clulas donadoras humanas se someten a dosis letales de radiacin rompiendo
sus cromosomas en fragmentos de tamaos
proporcionales a las dosis de radiacin. Las clulas irradiadas se fusionan despus con las del
roedor y los fragmentos humanos se integran de
manera estable en los cromosomas del ratn.
Ms all de su aplicacin en la elaboracin
de mapas genticos, los hbridos somticos han

tenido otras provechosas utilizaciones. As,
usando
clulas
tumorales
(inmortales)
procedentes, por ejemplo, de un mieloma de
ratn, y clulas humanas de linfocitos especializados en la produccin de un determinado
anticuerpo, se pueden conseguir lneas celulares
hbridas inmortales (llamadas hibridomas)
capaces
de
producir
indefinidamente
anticuerpos monoclonales. Csar Milstein fue
galardonado, por este y otros hallazgos, con el
Premio Nobel de Fisiologa y Medicina en el
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Captulo
10
Transferencia de Genes
en Bacterias y Bacterifagos
Francisco Javier Santos Hernndez
1.
Conjugacin Bacteriana
1.1. El Factor de Fertilidad Epismico F
1.2. Cartografa por Apareamiento Interrumpido
1.3. Factores F Portadores de Genes Bacterianos: Sexduccin
2.
Transformacin Bacteriana
3.
Transduccin
134
GENTICA
Las bacterias son organismos procariticos

y por lo tanto no sufren meiosis. Sin embargo,
este tipo de organismos tienen mecanismos alternativos que permiten la recombinacin de su
material gentico. La recombinacin gentica
en bacterias es un proceso no recproco de integracin de ADN exgeno en el genoma de la
bacteria receptora. Puede ocurrir mediante diferentes mecanismos: la conjugacin, la transformacin y la transduccin. En la conjugacin,
una clula bacteriana transfiere fragmentos de
ADN a otra mediante contacto directo entre las
clulas. Una bacteria puede tomar, tambin, un
fragmento de ADN presente en el medio
externo e incorporarlo a su propio genoma
(transformacin). Por ltimo, ciertos bacterfagos pueden tomar un fragmento de ADN
de una bacteria e incorporarlo a otra clula bacteriana cuando sta sea infectada por el mencionado fago (transduccin).
1. Conjugacin bacteriana
En 1946, Lederberg y Tatum descubrieron

por primera vez un proceso parasexual en
bacterias consistente en la unin de estirpes
bacterianas diferenciadas sexualmente y la
transferencia de material gentico entre ellas.
Estos investigadores fueron galardonados en
1958, por sus descubrimientos relacionados con
la recombinacin gentica y la organizacin del
material gentico en las bacterias, con el Premio
Nobel de Fisiologa y Medicina.
Lederberg y Tatum analizaron dos estirpes
bacterianas de E. coli que mostraban diferentes
requerimientos nutritivos. Una de las estirpes
utilizadas necesitaba un medio suplementado
con metionina y biotina (met , bio) para crecer
(mutante auxotrfico), mientras que la otra estirpe auxotrfica requera leucina y treonina
(]en-, thr-). En su experimento, Lederberg y Tatum sembraron bacterias en placas que contenan medio mnimo sin suplementar. Hicieron
tres tipos de siembras: placas con bacterias de
cada una de las estirpes por separado y placas
con una mezcla de las dos estirpes (fig. 10.1).
Slo aparecieron colonias en las placas donde se
sembraron ambas estirpes conjuntamente, con
una frecuencia 1 x 10-' clulas sembradas.
Puesto que en medio mnimo slo podan crecer

estirpes que no necesitaban ningn tipo de requerimiento nutritivo (prototrficas) (fenotipo
salvaje), esta observacin sugera que deba haber ocurrido algn tipo de recombinacin entre
los genomas de las dos estirpes bacterianas.
No obstante, exista la posibilidad de que
ambas estirpes bacterianas no intercambiaran
genes sino que liberaran sustancias al medio que
las otras pudieran absorber y utilizarlas, por
tanto, para crecer. Davis (1950) descart esta
posibilidad realizando un experimento basado
en el diseo de un tubo en U en el que los dos
brazos estn separados por un filtro con un
tamao de poro pequeo, el cual no permita el
paso de bacterias pero lo suficientemente grande
para permitir el paso de sustancias en suspensin (fig. 10.2). Coloc cada una de las estirpes en extremos diferentes del tubo (relleno
con medio mnimo de cultivo). Despus de incubarlas analiz el contenido de cada brazo del
tubo para ver si recuperaba colonias y no encontr ninguna. Se demostraba, por tanto, que el
contacto fsico entre las dos estirpes era imprescindible para que se obtuvieran colonias
salvajes.
1.1. EL FACTOR DE FERTILIDAD EP/SOMICO F
La transferencia de material no es recproca,

ya que una clula acta como donadora y la otra
como receptora, siendo las primeras portadoras
de un factor de fertilidad epismico F que se
transmita con independencia del genoma
bacteriano (Hayes, 1953). Para demostrar esto,
Hayes realiz experimentos similares a los
desarrollados por Lederberg y Tatum, con la
diferencia de que l trat, justo antes de la
mezcla, cada una de las dos estirpes con estreptomicina que impide la divisin celular y, por
tanto, mata a las clulas, aunque permite que el
apareamiento contine por un cierto periodo de
tiempo. Cuando se trataba con estreptomicina la
estirpe receptora no se recuperaban ningn tipo
de colonias recombinantes, mientras que stas
aparecan cuando la estirpe tratada era la
donadora.
135
FIG. 10.1. Demostracin de la recombinacin gentica en bacterias.
Las clulas portadoras del plsmido F se denominan F', mientras que las que carecen de l
reciben el nombre de F-. Las clulas de E. coli
estn normalmente cubiertas por fimbrias (pelos). Las clulas F' tienen, adems, de dos a tres
pelos sexuales (pili) que les permiten adherirse
a las clulas F- y facilitar el proceso de conjugacin. Cuando se produce la conjugacin, el
ADN del plsmido F se replica y la molcula
circular recin sintetizada se transfiere a la clula receptora, quedando siempre una copia del
factor F en la clula donadora (fig. 10.3).
El plsmido F contiene ocasionalmente en
su genoma una o ms secuencias de insercin
(IS) (un tipo de elementos mviles procariticos). La existencia de elementos IS tanto en el
plsmido F como en el cromosoma principal es
de una gran relevancia biolgica puesto que
proporciona lugares especficos en los cuales se
puede producir recombinacin homloga,
pudiendo llevar a la integracin del plsmido F
en el cromosoma bacteriano.
El descubrimiento de una estirpe donadora

especial, que produca mayor nmero de recombinantes y que Cavalli-Sforza (1950) denomin Hfr (alta frecuencia de recombinacin)
permiti conocer el mecanismo ntimo del proceso de recombinacin bacteriana. Las estirpes
Hfr se originan a partir de un clon de clulas en
las que ha ocurrido una integracin especfica
del factor F en el cromosoma bacteriano (fig.
10.4). Una caracterstica que diferencia a los
dos tipos de clulas, donadoras, F+ y Hfr, es que
entre las clulas resultantes de un cruzamiento
F+ x F- una gran proporcin de las clulas
receptoras se convierten en F+. Sin embargo, en
los cruzamientos Hfr x F- prcticamente
ninguna de las clulas receptoras se converta en
F+ o Hfr. Esto era debido a que slo rara vez se
transfiere el factor F completo.
136
GENTICA
FIG. 10.2. Experimento del tubo en U.

1.2.
CARTOGRAFA POR APAREAMIENTO

INTERRUMPIDO
Los experimentos de apareamiento interrumpido (Wollman y Jacob, 1958) entre cepas

Hfr y cepas F- demostraron que el cromosoma
bacteriano era circular (confirmado en 1963 por
Cairns) y se transfera de un modo lineal, comenzando por un punto de origen especfico.
Este tipo de tcnica consiste bsicamente en
mezclar en una batidora una estirpe Hfr y otra
F`. Transcurrido un cierto periodo de tiempo se
conecta la batidora separando las clulas que se
encuentran conjugando, interrumpiendo el apareamiento y la correspondiente transferencia de
genes. A continuacin se procede a la determinacin del genotipo de las clulas F. Esto se
consigue, en primer lugar, seleccionando una
estirpe Hfr sensible y una estirpe F` resistente a
un determinado antibitico seleccionando y rea-
lizando, posteriormente, una rplica en placa en

un medio que contiene dicho antibitico. En los
experimentos de Jacob y Wollman se utilizaron
una cepa Hfr sensible a la estreptomicina (strs),
pero resistente a la azida (azir), a la infeccin
por el bacterifago T1 (tonAr) y prototrfica
para la leucina (leu+), la galactosa (galB+) y la
lactosa (lac+), y una estirpe F- resistente a la
estreptomicina (strs) sensible a la azida (azis), a
la infeccin por el bacterifago Tl (tonAs) y
auxotrfica para la leucina (leu-), la galactosa
(ga1B-) y la lactosa (lac-). Transcurrido un
espacio de tiempo que variaba entre 0 y 60
minutos desde el inicio de la conjugacin las
clulas se sembraron en un medio con
estreptomicina para eliminar las clulas Hfr. Las
clulas supervivientes se sembraron en un
medio mnimo con leucina para seleccionar las
colonias recombinantes F-.
137
FIG. 10.3. Propiedades del plsmido F.
Posteriormente, mediante rplica en placa y utilizando medios de cultivo especficos se cartografiaron los alelos azi, tonA, lac y galB. Los resultados obtenidos a partir de estos experimentos indicaban una entrada secuencial en las clulas F- de los genes procedentes de la estirpe Hfr
(fig. 10.5). Las unidades de mapa en este caso
son los minutos. Mediante el uso de diferentes
cepas Hfr que contenan el factor F integrado en
diferentes sitios del cromosoma bacteriano se
demostr su circularidad.
1.3. FACTORES F PORTADORES DE GENES
BACTERIANOS: SEXDUCCIN
En 1959, Adelberg y Burns encontraron un

tercer tipo de cepa donadora, con caractersticas
intermedias entre las F+ y las Hfr. Estas estirpes
se denominaron sfa (afines por el factor sexual)
y se originan cuando el factor de fertilidad se
escinde incorrectamente del cromosoma
bacteriano dejando parte del factor de fertilidad

en el mismo y llevndose consigo genes
presentes en el cromosoma bacteriano. Este
nuevo factor F se denomina F` y confiere a las
clulas bacterianas portadoras caractersticas
interesantes. En primer lugar, las estirpes F`
transfieren genes con una frecuencia muy alta
aunque no se trate de estirpes Hfr. Esto es
debido a que durante la conjugacin la
frecuencia de transferencia del factor F (F' en
este caso) es muy alta. En segundo lugar la tasa
de integracin espontnea del factor F' es mucho
mayor y a diferencia del factor F se suele
integrar en el lugar que ocupa en la estirpe Hfr.
La existencia de una regin de homologa entre
el factor F` y el cromosoma principal de la
clula receptora parece ser la razn de esta
integracin especfica.
Cuando un factor F` se transfiere mediante
conjugacin a una clula receptora F-, las clulas que reciben dicho plsmido son merocigo-
138
GENTICA
FIG. 10.4. Transferencia de genes mediada por el plsmido F.
tos (diploides parciales) que contienen un genoma bacteriano completo y fragmento concreto
contenido en el factor F. El proceso por el cual
se originan estos merocigotos se define como
sexduccin o F-duccin (fig. 10.4). Aunque no
demasiado utilizada, la sexduccin constituye
una herramienta ms que el investigador puede
usar para cartografiar genes en bacterias, cuyo
fundamento, al ser similar al de la transduccin,
se estudiar ms adelante cuando hablemos de
dicho fenmeno. La sexduccin permite
tambin el estudio de la interaccin entre alelos
(relaciones de dominancia) en un organismo
normalmente haploide.
2. Transformacin bacteriana
La conversin de un genotipo en otro por la
introduccin de un ADN exgeno se denomina

transformacin. Este proceso lo describi por
primera vez Griffith en 1928 y fue utilizado en
1944 por Avery, MacLeod y McCarty para demostrar que el principio transformante es el
ADN. Durante el proceso de transformacin un
ADN exgeno es integrado fsicamente en el
cromosoma bacteriano receptor por un proceso
de rotura e insercin. Para que este ADN extracelular se pueda transformar debe tener doble
cadena y ser relativamente grande. La clula
susceptible de ser transformada debe ser por su
parte competente, esto es, debe tener en su superficie protenas que se unan especficamente
al ADN exgeno. Cuando el ADN extracelular
entra dentro de la clula competente, una de sus
dos cadenas es hidrolizada y la restante puede
ser incorporada por recombinacin al genoma
de la clula husped.
El procedimiento bsico del cartografiado
de genes por transformacin comienza con la
139
FIG. 10.5. Cartografa por apareamiento interrumpido.
seleccin de dos estirpes bacterianas, una de las

cuales lleva mutaciones en dos loci. Por
ejemplo, la estirpe A podra ser auxotrfica para
los genes que cifran los aminocidos leucina y
treonina (leu- , thr- ). Por su parte, la estirpe B
podra llevar los correspondientes alelos
salvajes (leu+, thr+). Se asla el ADN de la estirpe A y se aade a un medio de cultivo con la estirpe B en condiciones que favorezcan la transformacin (adicin de cloruro clcico). Transcurrido el tiempo necesario para que se haya
llevado a cabo la transformacin, se analiza el
fenotipo de las clulas transformadas. Para ello,
se eliminan primero las clulas no transformadas crecindolas en un medio mnimo que
contenga un determinado antibitico (por
ejemplo estreptomicina). Los mutantes auxotrficos no crecern y sobrevivirn. Las clulas
supervivientes se pueden sembrar en un medio
completo y mediante rplica en placas con medio carente de leucina y/o treonina se puede de-
terminar el fenotipo de cada clula transformada

(fig. 10.6) A diferencia de la cartografa en
eucariotas, la distancia entre dos loci se estima a
partir de la frecuencia de recombinantes de
aquellas clulas que fueron transformadas en al
menos uno de los loci. En ambos casos, sin embargo, la probabilidad de entrecruzamiento entre
dos loci ser mayor cuanto mayor sea la distancia entre ellos.
3. Transduccin
El fenmeno de la transduccin fue descubierto por Zinder y Lederberg (1952) en Salmonella y consiste en la transferencia de material gentico entre dos bacterias por medio de un
bacterifago (un virus que infecta a una bacteria). Esto puede suceder porque antes de la lisis bacteriana, cuando el material gentico del
fago est siendo empaquetado, puede incorporarse de manera errnea ADN bacteriano dentro
de la cubierta del fago (fig. 10.7). De esta
140
GENTICA
Fig. 10.6. Estrategia para aislar transformantes bacterianos.
Fig. 10.7. Mecanismo de la transduccin.
manera en una infeccin posterior se pueden

transferir genes bacterianos a otra bacteria.
Existen dos formas de transduccin: generalizada y especializada. En la primera, puede
transducirse cualquier parte del cromosoma de
la bacteria donadora. En la segunda, slo se
pueden translucir regiones concretas del cromosoma donador. Los bacterifagos P1 y P22
son fagos de transduccin generalizada, mientras que el fago A constituye un ejemplo representativo de fago de transduccin especializada.
La transduccin generalizada puede utilizarse para el cartografiado de genes bacterianos
si stos estn lo suficientemente cercanos para
que el fago pueda incorporarlos y transducirlos
en un nico fragmento (cotransduccin). As,
por ejemplo, la cotransduccin con el fago P1
ocurre cuando los genes de E. coli estn separados por una distancia de mapa inferior a los
1,5 minutos. En este tipo de cartografa y a
diferencia de las unidades de mapa basadas en
las frecuencias de recombinacin, cuanto mayor
es la frecuencia de cotransduccin ms cercanos
estn los dos loci considerados y menor es la
distancia entre ellos en el mapa de ligamiento.
141
Adelberg, E. A. y Burns, S. N. (1959): A

variant sex factor in Escherichia coli,
Genetics, 44: 497.
Cavalli-Sforza, L. L. (1950): La sessullita nei
batteri, Boll. Ist. Sieroter. Milano, 29: 281.
Davis, B. D. (1950): Non-filterability of the
agents of genetic recombination in E. coli,
J. Bacteriol., 60: 507.
to Genetic Analysis, W. H. Freeman.
Jacob, F. y Adelberg, E. A. (1959): Transfert
de charactres gntiques par incorporation
au facteur sexuel d'Escherichia coli, Compt.
Rend. Acad. Sci., 249: 189-191.
Hayes, W. (1953): The mechanism of genetic
recombination in E. coli, Cold Spring Harb.
Symp. Quant. Biol., 18: 75.
Lederberg, J. y Tatum, E. L. (1946): Novel
genotypes in mixed cultures of biochemical
mutants of bacteria, Cold Spring Harb.
Symp. Quant. Biol., 11: 113-114.
Tamarin, R. H. (1996): Principios de Gentica,
Editorial Revert, S.A.
Wollman, E. L. y Jacob, F. (1958): Sur le
processus
de
conjugation
et
de
recombinaison chez E. coli. V. Le
mchanisme du transfer de matriel
gntique , Ann. Inst. Pasteur, 95: 641.
Captulo
11
Replicacin del Material Gentico

1.
Demostracin del Modelo Semiconservativo
2.
Origen nico, Bidireccional y Carcter Semidiscontinuo
3.
Caractersticas Diferenciales de la Replicacin del Material

Gentico en Eucariotas
4.
Telmeros y Replicacin
4.1. El Problema de la Replicacin Terminal y el Acortamiento de
los Telmeros
4.2. La Telomerasa y el Mantenimiento Telomrico
4.3. Alteraciones de la Actividad Telomerasa
5.
Replicacin del Material Gentico en Organismos Celulares
146
GENTICA
Uno de los requerimientos bsicos del material gentico es su capacidad de autoperpetuarse. El modelo de la doble hlice del ADN, propuesto por Watson y Crick (1953), llevaba ya
implcito un mecanismo para explicar un modelo de replicacin del material gentico, segn el
cual las dos cadenas se separaran y cada una de
ellas servira de molde para la sntesis de una
nueva cadena complementaria. De este modo, al
final del proceso de replicacin se obtendran
dos dobles hlices compuestas cada una de ellas
por una cadena parental y otra de nueva sntesis:
modelo semiconservativo. Pero sta no era la
nica manera por la que podra producirse la replicacin del ADN y consecuentemente se propusieron dos modelos alternativos: conservativo
y dispersivo. Segn el modelo conservativo
despus de la replicacin del ADN obtendramos dos tipos de doble hlice diferentes, una
formada totalmente por cadenas de ADN de
nueva sntesis y otra por ADN de origen paren
tal; en el modelo dispersivo las molculas de
ADN hijas contendran tanto segmentos de

ADN parental como de nueva sntesis.
1. Demostracin del modelo
semiconservative
En 1958 Meselson y Stahl crecieron bacterias de la cepa B de E. coli durante varias

generaciones en un medio que contena un
istopo pesado del nitrgeno, 15N. Al extraer el
ADN determinaron su densidad mediante la
tcnica de centrifugacin en gradientes de
cloruro de cesio (ADN pesado). A continuacin
pasaron el cultivo a un medio con 14N y fueron
tomando muestras a intervalos regulares,
extrayendo su ADN y midiendo su densidad
(fig. 11.1). En la primera generacin apareca un
ADN de densidad uniforme y menor a la del
ADN inicial. En la segunda generacin
aparecan
en
proporciones
equivalen
FIG. 11.1. Experimento de Meselson y Stahl demostrativo del carcter semiconservativo de la replicacin
del ADN en procariotas.
GENTICA MOLECULAR
tes dos tipos de ADN, uno con esta nueva densidad y otro con la densidad de un ADN marcado
con "N (ADN ligero). En la tercera generacin
el 75 % del ADN era ligero y el 25 % mostraba
una densidad intermedia. Aumentando el
nmero de generaciones se obtena un
incremento progresivo del ADN ligero y una
disminucin del ADN de densidad intermedia.
Estos resultados slo resultaban congruentes
con un modelo de replicacin del ADN
semiconservativo.
Unos resultados similares fueron obtenidos
por Taylor (1958) trabajando con cromosomas
obtenidos de clulas de races de judas y utilizando tcnicas citolgicas. Las clulas de la raz
se sumergieron en una solucin que contena
timidina tritiada (el nucletido timidina
marcado con tritio [H3], un istopo radiactivo
del hidrgeno). Dej que las clulas llevaran a
cabo la mitosis en esta solucin para permitir la
incorporacin de la timidina radiactiva. Las lav
y las transfiri a una nueva solucin que
contena timidina no radiactiva. Por ltimo,
aadi colchicina para detener las clulas en
metafase y obtener los cromosomas metafsicos. Los resultados obtenidos del anlisis autorradiogrfico durante la primera divisin en
ausencia de timidina-[H3] o durante la divisin
mittica siguiente se interpretaban de acuerdo a
un modelo semiconservativo.
2. Origen nico, bidireccionalidad

y carcter semidiscontinuo
Una prediccin del modelo de replicacin

del ADN de Watson y Crick es que debe encontrarse una horquilla en la molcula de ADN
que se est replicando. Cairns en 1963 puso a
prueba esta prediccin permitiendo que el ADN
en replicacin de E. coli incorporara timidina[H3] durante dos generaciones sucesivas. Tras
un ciclo de replicacin extrajo el ADN de una
alcuota de clulas de E. coli, lo puso en un
portaobjetos y lo autorradiografi, para su
observacin
posterior
al
microscopio
electrnico. La interpretacin de esta autorradiografa revel por un lado que el ADN de E.
coli era circular (Cairns, 1963), algo que ya se
sospechaba en aquel momento ( Jacob y Woll-
147
man, 1958), y por otro que el ADN se replica

manteniendo la integridad del crculo. Durante
el segundo ciclo de replicacin, se pudieron
observar las horquillas postuladas por el modelo
Watson y Crick o estructuras (por su parecido con la letra griega ). Adems la doble
densidad de las marcadas radiactivas en uno de
los lados de la horquilla de replicacin corroboraba el modelo semiconservativo de replicacin del ADN (fig. 11.2a). En algunos casos la
timidina-[H3] no se incorpor a los cultivos
bacterianos hasta que la replicacin del ADN ya
haba empezado. En estos casos, la marca
radiactiva apareci despus de que la estructura
ya haba empezado a formarse. Mediante el
recuento de granos de plata en las autorradiografas, Cairns dedujo que la replicacin progresa de un modo bidireccional a partir de un
origen de replicacin (Ori C) fijo (fig. 11.2b).
El Ori C de E. coli tiene una longitud de 245 pb
y comprende una serie de repeticiones casi
idnticas de una secuencia de 13 nucletidos,
adems de cuatro sitios de unin para una protena, la dnaA, que juega un papel importante en
el proceso de desenrollamiento de la doble
hlice de ADN.
El anlisis de diferentes tipos de mutantes
replicativos permiti que en 1956, Kornberg y
colaboradores identificaran y aislaran en E. coli
una enzima llamada ADN polimerasa (denominada despus ADN pol I), que era capaz de
catalizar la sntesis de ADN in vitro. Ms tarde
se pudo comprobar que la polimerasa
fundamental era la ADN pol III, y que la I jugaba un papel importante en la sntesis reparativa.
Una consecuencia importante de estos estudios
fue la demostracin de que la sntesis del ADN
transcurra siempre en direccin 5'
3' a
partir de un origen nico de replicacin. Este
hecho, junto al antiparalelismo de la doble
hlice de ADN, supona un obstculo para
explicar la hiptesis semiconservativa del ADN,
pues ello implicara una direccin de sntesis
3'
5' en la cadena complementaria.
Esta objecin dej de serlo cuando Okazaki
y colaboradores (1968) demostraron que la
sntesis de las dos cadenas de la doble hlice del
ADN no se realizaba de una manera continua y
sincrnica. Segn estos autores, una de
148
GENTICA
FIG. 11.2a. Demostracin autorradiogrfica del carcter semiconservativo de la replicacin

y de la circularidad del cromosoma de E. coli.
FIG. 11.2b. Demostracin autorradiogrfica del carcter bidireccional de la replicacin en E. coli.
GENTICA MOLECULAR
las dos cadenas de doble hlice, la que crece en

direccin 5'
3' a partir del origen de replicacin (hlice conductora o leading strand), se
replica de manera continua. Sin embargo, la
sntesis de la cadena complementaria, la que
crece en 3'
5', era discontinua y en direccin
5'
3' (hlice retrasada o lagging strand) mediante segmentos cortos (fragmentos de Okazaki) que se unan entre s por la accin enzimtica de las ligasas (modelo semidiscontinuo
de replicacin del ADN). La discontinuidad en
la sntesis de la cadena retrasada surge como
consecuencia de que su direccin de sntesis es
opuesta a la de la horquilla de replicacin.
Aunque la sntesis propiamente dicha del
ADN se lleva a cabo por las ADN polimerasas,
hay otra actividad polimerasa realizada por las
primasas (ARN polimerasas dependientes de
ADN), que sintetizan pequeos fragmentos ce-
149
badores de ARN necesarios para que se puedan

formar los fragmentos de Okazaki. Existen adems otras protenas que juegan un papel importante en la replicacin del ADN como son las ligasas que unen fragmentos de ADN de nueva
sntesis, y las protenas desenrollantes y estabilizantes (helicasas, girasas y protenas SSB) que
facilitan el desenrollamiento de la doble hlice.
Este aparato proteico complejo, encargado de
llevar a cabo la replicacin del ADN, recibe el
nombre de replisoma (fig. 11.3).
Adems
del
modelo
general
de
replicacin por bifurcacin, se han propuesto
otros modelos, como el del crculo rodante
propuesto por Gilbert y Dressler (1969) para
explicar la replicacin del genoma de algunos
fagos tales como T4, P22, ) y x 174.
FIG. 11..3. Protenas implicadas en el mecanismo de replicacin del ADN.
150
GENTICA
3. Caractersticas diferenciales
de la replicacin del material gentico
en eucariotas
A pesar de que muchos detalles de la replicacin del ADN son similares en procariotas y
eucariotas existen notables diferencias. La razn
hay que buscarla en el hecho de que las clulas
eucariticas deben resolver el problema de la
replicacin coordinada de ms de un cromosoma y duplicar la estructura compleja del
propio cromosoma.
En las clulas eucariticas, la replicacin del
ADN est confinada a una parte del ciclo celular
(ste ser estudiado ms en detalle en el captulo
29 cuando se hable del control gentico del
ciclo de divisin celular). Dentro del ciclo
celular podemos distinguir dos grandes periodos, interfase y mitosis (periodo de divisin
celular). La sntesis del ADN tiene lugar en el
periodo de interfase en lo que se conoce como
fase S del ciclo celular.
Una de las cuestiones ms importantes que
se plantean a la hora de entender el proceso de
la replicacin del ADN en eucariotas es cmo
pasa la maquinaria enzimtica de la replicacin
a travs de los nucleosomas. stos no parecen
abandonar el ADN durante el proceso de la replicacin, pero podran desmontarse in situ.
Existe todava cierta controversia sobre la forma
de disponerse los nucleosomas viejos y
nuevos sobre las dos molculas hijas del
ADN. La mayora de las pruebas favorecen un
modelo dispersivo, segn el cual cada molcula
de ADN hija lleva asociados tanto nucleosomas
viejos como nuevos.
En organismos eucariticos, la replicacin
del ADN tiene, al igual que en procariotas, un
carcter bidireccional y semiconservativo, pero
a diferencia de las bacterias la replicacin
progresa desde muchos orgenes de replicacin,
dando lugar a mltiples unidades de replicacin
o replicones. El nmero de replicones en los
eucariotas vara desde cerca de 500 en levaduras
hasta unos 60.000 en una clula diploide de
mamfero. Los orgenes de replicacin mltiples
permiten a los eucariotas replicar sus grandes
cantidades de ADN en un tiempo relativamente
corto, incluso aunque la replicacin del ADN
eucaritico sea considerablemente ms lenta por
la presencia de las protenas histnicas
asociadas al ADN para formar la cromatina.

Experimentos recientes en levaduras indican la
existencia de aproximadamente 400 orgenes de
replicacin distribuidos entre los diferentes
cromosomas.
En organismos eucariticos existen al
menos cinco ADN polimerasas, , , , y
. De stas , y parecen tener actividad
exonuclesica. Las ADN polimerasas a y d
ejercen en el ncleo un papel equivalente al de
la ADN polimerasa III procaritica en la
replicacin del ADN (la a dirige la sntesis de la
cadena retrasada, y la d la sntesis de la
adelantada). La ADN polimerasa est
implicada en la sntesis nucleotdica asociada a
los procesos de reparacin del ADN (como la
ADN polimerasa I de procariotas). En cuanto a
la ADN polimerasa se encuentra en las mitocondrias y parece estar implicada en la replicacin del ADN mitocondrial. No est claro el papel de laADNpolimerasa -, aunque parece capaz
de regular tanto la replicacin de la cadena adelantada como de la retrasada.
4. Telmeros y replicacin
Los estudios realizados por Mller (1938)

trabajando con estirpes de Drosophila tratadas
con rayos X y por Barbara McClintock en el
maz (1941) permiten concluir que los telmeros juegan un papel muy importante en la estabilidad cromosmica y viabilidad celular, ya
que aquellos cromosomas que han perdido sus
telmeros son susceptibles de sufrir reordenaciones cromosmicas. Recientemente, se ha
demostrado que los telmeros que contienen
secuencias mutadas o que tienen un tamao reducido favorecen notablemente la inestabilidad
cromosmica.
Los telmeros juegan, adems, un papel
importante como reguladores de la expresin
gentica. Esto es debido a que la cromatina telomrica, transcripcionalmente inactiva, ejerce
un efecto de posicin silenciando los genes localizados en las proximidades de los telmeros.
Consecuentemente, el acortamiento activa la
expresin
de
estos
genes.
GENTICA MOLECULAR
4.1.
EL PROBLEMA DE LA REPLICACIN TERMINAL Y

EL ACORTAMIENTO DE LOS TELOMEROS
En la cadena adelantada, la adicin de nucletidos puede extenderse siempre hasta el

extremo telomrico, ya que la reaccin viene
cebada desde atrs. Sin embargo, la cadena
retrasada alcanza un punto cerca del extremo a
partir del cual el cebador de ARN no puede
operar, quedando un tramo sin sintetizar (fig.
11.4a). Cada vez que una clula eucaritica se
divide se pierden secuencias telomricas de los
extremos debido a que las ADN polimerasas
son incapaces de sintetizar ADN en ausencia de
151
un cebador. Como consecuencia, la replicacin

del material gentico en organismos eucariticos sera incompleta si no existiera un mecanismo compensatorio.
4.2.
LA TELOMERASA Y EL MANTENIMIENTO
TELOMRICO
En organismos eucariticos, la telomerasa

es la enzima encargada de llevar cabo la replicacin de los extremos telomricos sintetizando
secuencias TTAGGG y aadindolas al sa
FIG. 11.4a. El problema de la replicacin de los extremos telomricos.
152
GENTICA
FIG. 1 1.4b. La telomerasa aade repeticiones telomricas al saliente G a partir de la secuencia molde
de su componente ARN.
liente G del telmero (fig. 11.4b). Es, por tanto,

responsable del mantenimiento de los telmeros. La telomerasa es un complejo ribonucleoproteico formado por una subunidad cataltica
de naturaleza proteica, que recibe el nombre de
Tert (del ingls Telomerase reverse transcriptase), y una molcula de ARN, denominada
Terc (del ingls Telomerase RNA component), que cataliza la sntesis de secuencias telomricas de novo en los extremos 3' de los telmeros, compensando de esta manera la prdida de secuencias nucleotdicas que ocurre en
las cadenas retrasadas. El componente de ARN
de esta enzima es esencial para su funcionamiento, ya que contiene una secuencia nucleotdica complementaria que sirve de molde para
la sntesis de las secuencias TTAGGG.
En la especie humana, los niveles de actividad telomerasa son altos en los tejidos de la lnea germinal y en los tejidos fetales, decayendo
notablemente a los pocos meses del nacimiento
en la mayora de los tejidos somticos. No
obstante, los tejidos del individuo adulto que
tienen poblaciones celulares con un alto ndice
de recambio, tales como las capas basales de la
piel y el intestino, centros germinales del bazo y
subpoblaciones del tejido linftico hematopoytico muestran niveles bajos pero detectables de actividad telomerasa. Los estudios
de ratones deficientes para la actividad telomerasa han demostrado que dicha actividad es
esencial para los tejidos con alto ndice de proliferacin. Parece claro, por tanto, que la actividad telomerasa y la estabilizacin de la longitud de los telmeros son dos hechos que van
estrechamente ligados en las clulas de tejidos
con alto ndice proliferativo.
4.3. ALTERACIONES DE LA ACTIVIDAD TE

LOMERASA
El mantenimiento de los telmeros es un

requisito necesario para sostener la tasa de divisin y la segregacin cromosmica correcta
de las clulas de los tejidos con alto ndice de
proliferacin. Por tanto, cualquier alteracin en
los niveles de actividad de la telomerasa
producira una disfuncin de los mencionados
procesos que contribuira al desarrollo de pato-
GENTICA MOLECULAR
logias asociadas tanto con el desarrollo tumoral

como con procesos relacionados con el envejecimiento y la senescencia celular.
En las fases tardas del desarrollo tumoral
parece existir un aumento significativo de la
actividad telomerasa que podra ser necesario
para el crecimiento celular al impedir la muerte
de las clulas cancerosas. En contraposicin, el
nivel de actividad telomerasa en algunos tumores puede ser insuficiente para evitar que se
produzca una disfuncin de los telmeros, favoreciendo la inestabilidad cromosmica y la
acumulacin de todo tipo de mutaciones, tales
como prdida de genes supresores, aparicin de
alteraciones cromosmicas estructurales y/o
numricas, etc.
Existen, por otro lado, una serie de enfermedades humanas, caracterizadas todas ellas
por alteraciones en genes de reparacin, que
exhiben un acortamiento telomrico muy acusado. Estos pacientes desarrollan una sintomatologa similar al proceso de envejecimiento
adems de presentar una alta predisposicin a
padecer cncer. Recientemente se han aportado
pruebas concluyentes sobre la implicacin de la
telomerasa y el acortamiento telomrico en
pacientes con disqueratoris congnita ligada al
X (DKC) que sufren de envejecimiento prematuro. Mutaciones en el gen DKC que codifica
para la disquerina, la cual juega un papel importante en los niveles de acumulacin de Terc,
producen una deficiencia en los niveles de
telomerasa.
5.
Replicacin del material

gentico en organismos
celulares
Las mitocondrias y cloroplastos tienen sus

propias molculas de ADN circular y, como
consecuencia, se replican por un mecanismo ligeramente diferente del descrito para el ADN
nuclear. El origen de replicacin est en un
punto distinto en cada una de las dos cadenas
molde parentales. La replicacin empieza en
una cadena, desplazando a la otra mientras se va
formando un lazo de desplazamiento o estructura lazo D. La replicacin contina hasta
que el proceso sobrepasa el origen de replicacin de la otra cadena. Entonces se inicia la re-
153
plicacin de la segunda cadena, en sentido

opuesto. Algunas especies tienen cloroplastos y
mitocondrias con ADN circulares en los que se
forman mltiples lazos D.
Autexier, C. y Greider, C. W. (1996):

Telomerase and cancer: revisiting the
telomerase hypothesis, Trends Biochem., 21:
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Tamarin, R. H. (1996): Principios de Gentica,

Editorial Revert, S.A.
Captulo
12 Naturaleza del Gen

Antonia Mara Fernndez Peralta
1.
La Accin Gnica Primaria: Hiptesis Un Gen-Una Enzima
2.
Relacin Entre Genes y Proteinas
3.
Colinealidad
4.
El Gen Eucariota
156
GENTICA
Desde el redescubrimiento de las leyes de

Mendel en 1900, el inters de los genticos se
centr en el anlisis de la transmisin, ampliando las leyes de Mendel, desde caracteres simples a cuantitativos, desde su transmisin individual a su transmisin en las poblaciones, etc.
Hacia 1930 la Gentica de la transmisin
haba progresado lo suficiente para plantearse la
base molecular de la Herencia y cmo se expresan los genes (constitucin qumica y funcionamiento). La constitucin qumica de los genes,
del material hereditario, ya ha sido tratada. En
este captulo debemos centrarnos en la expresin gentica y la pregunta clave cuya respuesta
se abordar es: Cmo funcionan los genes?
Para comprender el funcionamiento de los genes
fue necesario un cambio de enfoque en la investigacin gentica. Hasta la dcada de los 30,
los caracteres estudiados eran los visibles fenotpicamente, pero desde que un gen se expresa
hasta que su efecto se manifiesta en el fenotipo
transcurre una serie compleja de procesos metablicos y fisiolgicos difciles de analizar, tanto
ms complejos cuanto ms se asciende en la escala evolutiva. Por tanto, era necesario centrarse
en caracteres cuyo fenotipo se manifestara en
trminos de procesos metablicos fcilmente
medibles. A partir de esto surge toda una rama
de la Gentica: la Gentica Bioqumica.
Como siempre, resulta sorprendente pero
ciertamente existi tambin en esta especialidad
gentica un precursor, el padre de la Gentica
Bioqumica, el mdico ingls Archibald Garrod
que en 1902 fue el primero en sugerir una
conexin especfica entre genes y enzimas.
Descubri que una enfermedad metablica humana, la alcaptonuria, se heredaba de acuerdo
con las leyes de Mendel. Esa patologa era atribuible a una deficiencia en el metabolismo del
nitrgeno, produciendo entre sus sntomas una
orina coloreada de negro al exponerla al aire,
coloracin negra de cartlagos y otros tejidos
conectivos y artritis. En 1898, Garrod ya haba
indicado que la sustancia responsable era el
cido homogentsico, que se excretaba en cantidades anormalmente altas en la orina de los
pacientes. En 1908, indic que el determinismo
gentico de la enfermedad se deba a un gen
recesivo que daba lugar a un fallo en una
reaccin
metablica
catalizada
enzimticamente, precisamente en el paso de
cido homogentsico a cido maleilacetoactico.
La ruta metablica sera como sigue:
El descubrimiento de Garrod fue posible gracias

a que comprendi que la posicin de un bloqueo
metablico puede identificarse por la
acumulacin en el cuerpo de la sustancia inmediatamente anterior al paso bloqueado. A las
alteraciones enzimticas determinadas genticamente las llam errores congnitos del metabolismo.
Este principio tan simple fue extremadamente importante para toda la investigacin de
rutas metablicas. Desde entonces se han identificado numerosas enfermedades producidas
por deficiencias enzimticas, las llamadas enzimopatas (tabla 12.1). Una enzimopata
puede ser definida como toda enfermedad hereditaria que surge por la alteracin (generalmente la prdida de funcin) de un gen que
controla una actividad enzimtica. En la tabla
12.1 se citan algunos ejemplos representativos
(o ms comunes).
Como ejemplo paradigmtico de ruta metablica y enfermedades asociadas a dficit enzimticos, en la figura 12.1 se muestra el metabolismo de la Fenilalanina.
1. La accin gnica primaria: hiptesis
un gen-una enzima
Los primeros trabajos exhaustivos sobre

Gentica Bioqumica aparecen casi 30 aos
GENTICA MOLECULAR
TABLA 12.1.
157
Algunos ejemplos de enzimopatas (AR y AD = autosmica recesiva y dominante

respectivamente; RX = recesiva ligada al sexo)
despus de las observaciones de Garrod; fundamentalmente trabajos sobre el anlisis de

pigmentaciones, bien de las flores de Streptocarpus (Scott-Moncrieff; Lawrence y Price) o
del color de ojos en Drosophila (Beadle y
Ephrussi) y Ephestia kuhniella (Caspari), pero
la clarificacin de la funcin real de los genes se
llev a cabo en los aos 40, cuando se realiz
un cambio en los materiales de estudio por otros
ms sencillos que permitieran analizar ms
directamente los procesos metablicos y poder
relacionar sus alteraciones con mutaciones
gnicas. El material de eleccin fue Neurospora
crassa, el moho del pan, y las investigaciones
fueron llevadas a cabo por George Beadle y
Edward Tatum, que recibieron en 1958 el
Premio Nobel por su trabajo.
Neurospora crassa crece en medio mnimo
consistente en azcar, algunos cidos inorgnicos, sales, una fuente nitrogenada y biotina.
Beadle y Tatum indujeron mutantes irradiando

la estirpe salvaje con rayos X. Estos mutantes
auxtrofos no pueden crecer en medio mnimo a
no ser que sea suplementado con determinados
nutrientes. En la figura 12.2 se resume todo el
procedimiento empleado por Beadle y Tatum.
Los primeros mutantes nutricionales descubiertos por Beadle y Tatum lo fueron para el cido
paraamino benzoico, la piridoxina y la tiamina.
Cualquiera de estas y otras muchas mutaciones
se heredaban siguiendo un patrn mendeliano
de herencia al ser cruzadas con el tipo salvaje,
produciendo segregacin 1:1 (fig. 12.3).
Con estas premisas, analizando rutas metablicas concretas y mutantes de las mismas,
Beadle y Tatum concluyeron que haba una correspondencia entre una mutacin gentica y la
falta de una enzima especfica. Esto constituy
la hiptesis: un gen-una enzima As, por ejemplo,
como se muestra en la figura 12.4, en una ruta
158
GENTICA
FIG. 12.1. Resumen del metabolismo de la fenilalanina y enfermedades asociadas a diferentes bloqueos metablicos.
GENTICA MOLECULAR
FIG. 12.2. Experimento de Beadle y Tatum con Neurospora crasa.
159
160
GENTICA
FiG. 12.3. Herencia mendeliana resultante del cruzamiento entre un mutante nutricional y la cepa salvaje de Neurospora.
biosinttica imaginaria desde un producto

inicial A a uno final F, cada paso est catalizado
por una enzima que, a su vez, vendr
especificada por un gen. De los datos de la
figura se desprende:
1. En cada mutante, un paso metablico
conducente a la sntesis de un compuesto especfico estaba bloqueado.
2. El bloqueo de la ruta en un punto originar una acumulacin de la sustancia sobre la

que actuar la enzima. Supongamos una mutacin del gen c que inactivara a la enzima e; se
acumular la sustancia C.
3. Si se suministra al organismo el producto
inmediatamente posterior de la ruta (D en el
ejemplo),
el
organismo
la
completa
GENTICA MOLECULAR
FIG. 12.4. Posicionamiento de 5 mutantes en los dis

tintos pasos de una ruta biosinttica imaginaria, a par
tir de los resultados de restitucin del fenotipo salvaje
que se muestran.
El procedimiento para establecer los puntos

indicados consisti en aislar mutantes de la ruta
e ir reconstruyendo la funcin salvaje, viendo
mediante qu compuestos se consegua en cada
caso. Imaginemos que se aslan 5 mutantes de la
ruta, del 1 al 5, incapaces todos ellos de sintetizar el producto F (todos ellos, por tanto, F). Conociendo los compuestos intermedios de la ruta
biosinttica (aunque no se conozca el orden) es
posible establecer el punto concreto donde se
produce el bloqueo metablico en cada uno de
ellos y el orden en el que van sintetizando, partir
de los datos mostrados en la figura 12.4.
Con las premisas de la hiptesis de Beadle y
Tatum vemos que el suministro del producto
final F restituye el fenotipo salvaje en todos los
casos. De modo contrario, hay un compuesto, el
A, que al suministrarlo nunca se restituye el
salvaje, luego debe estar al inicio de la ruta.
Mediante ese razonamiento, los compuestos
ms iniciales de la ruta sern aquellos que
permitan el crecimiento de menos mutantes,
mientras que los que se encuentren en estadios
finales darn lugar al crecimiento de ms mutantes, al ser aadidos. As, B ser el segundo
compuesto (slo el mutante 1 crece), C ser el
tercero y sucesivamente D y E. Al mismo tiem
po pueden irse asignando las mutaciones a los
distintos pasos de la ruta, de acuerdo con la
161
premisa indicada en el punto 3. De este modo

para el mutante 1 se restituye la funcin salvaje
al suministrarle el producto B, pero no el A,
luego esa mutacin afectar al gen, y por tanto a
la enzima, del paso A - B. El mutante 2, por este
mismo razonamiento, afectar al paso C -+ D; el
mutante 3 impedir la conversin de B - C, etc.,
quedando posicionadas las mutaciones como se
indica en la figura 12.4.
Todas estas conclusiones generales fueron
realizadas por Beadle y Tatum estudiando diversos mutantes auxtrofos para arginina (arg
recogidos de los experimentos con Neurospora
crassa de la figura 12.1. Todos los mutantes arg
requeran para crecer que el medio se suplementase con arginina, pero algunos de ellos podan crecer si se suplementaba el medio con
otras sustancias relacionadas qumicamente con
dicho aminocido, concretamente la citrulina y
la ornitina. Los resultados obtenidos se recogen
en la tabla 12.2.
De acuerdo con los resultados se estableci
parcialmente la ruta de biosntesis de arginina
posicionndose las mutaciones sobre ella:
Los tests de complementacin entre mutantes arg demostraron que existan varios genes
controlando el proceso de sntesis de este
compuesto, puesto que era posible reconstruir el
tipo salvaje mediante cruces entre diferentes
mutantes.
TABLA 12.2. Resultados de restitucin del fenotipo
salvaje para distintos mutantes arg de Neurospora
crassa
162
GENTICA
TABLA 12.3. Resultados de restitucin del fenotipo salvaje para distintos mutantes trp
de Salmonella typhimurium
Posteriormente, en trabajos de expresin

gnica en bacterias, concretamente en Salmonella typhimurium, se corrobor la hiptesis un
gen-una enzima. Analizando la ruta metablica
de biosntesis de triptfano se encontraron una
serie de mutantes auxtrofos trp(1-11) y se
analiz la reversin al fenotipo salvaje mediante
el suplemento de compuestos intermedios de la
ruta, tal como se muestra en la tabla 12.3.
La secuencia de la ruta de su sntesis bioqumica sera, entonces, la mostrada en el esquema al final de la pgina.
Estudios posteriores ms detallados de la
ruta permitieron establecerla de un modo ms
completo, desde el cido corsmico, que era el
precursor desconocido, hasta los genes implicados en cada uno de los pasos hasta llegar al
triptfano. As, de un modo ms preciso quedara como se muestra en la figura 12.5.
De ese modo las mutaciones podan asignarse a alteraciones en los genes implicados en
la ruta: el mutante 8 al gen TrpE, los mutantes 2
y 4 a los genes TrpD o TrpC, el mutante 8 al
gen TrpA y las restantes mutaciones al gen
TrpB.
Merece destacarse que existe un paralelismo
entre la secuencia cronolgica de actuacin de
las enzimas y la ordenacin de los loci gnicos
en el cromosoma. Los genes de numerosas rutas
metablicas de procariotas presentan este tipo
de concordancia entre su posicin y su ac
tuacin dentro de secuencia de reacciones

(vase captulo de regulacin en procariotas: el
modelo del opern). Tambin en eucariotas se
encuentra este tipo de organizacin en clusters
gnicos (por ejemplo: los complejos principales
de histocompatibilidad del ratn (H-2) y del
hombre (HLA)).
2. Relacin entre genes y protenas
Por otra parte, aunque la enzimas son protenas (con la salvedad de los RNAs catalticos),
no todas las protenas son enzimas. Se plante
entonces si tambin los genes controlaban la
produccin de estas otras protenas sin funcin
enzimtica. La respuesta a esta ltima cuestin
se obtuvo de los experimentos realizados con
molculas
mutantes
de
hemoglobina
provenientes de personas afectadas de anemia
falciforme, que desemboc en una ampliacin
de la hiptesis gen-enzima para convertirla en
gen-protena.
La anemia falciforme fue descrita por primera vez en 1910 por Ernest Irons, un mdico
interno de un hospital de Chicago que descubri
eritrocitos alargados en un frotis de sangre de un
paciente aquejado de una anemia severa. Con
posterioridad se ha descubierto que los
eritrocitos de los individuos afectados, en condiciones de baja concentracin de oxgeno, adquieren una forma curvada y alargada, por po
GENTICA MOLECULAR
163
FIG. 12.5. Ruta de biosntesis de tiptfano en Salmonella typhimurium.
limerizacin de la hemoglobina; esta forma de

hoz es perfectamente distinguible de la forma
de disco bicncavo de los glbulos rojos de los
individuos normales. Los eritrocitos falciformes
se agregan con facilidad en el lado venoso de la
red capilar, donde la tensin de oxgeno es muy
baja y, en consecuencia, los tejidos se ven
privados de oxgeno y sufren daos: es la
llamada
crisis falciforme, que afecta
especialmente a los riones, msculos, cerebro,
intestino y pulmones. Los pacientes presentan,
adems, anemia debido a la destruccin ms
rpida de los eritrocitos falciformes que se
intenta compensar con una mayor produccin de
glbulos rojos en la mdula y un incremento del
ritmo cardiaco, lo que genera anomalas seas y
dilatacin del corazn.
En 1949 dos descubrimientos vinieron a
sumarse al conocimiento de la enfermedad. Por
una parte, mediante anlisis genealgicos de
familias en las que exista la patologa, J. Neel y
E. Beet demostraron que su herencia segua un
patrn mendeliano, bajo el control de dos alelos
de un gen, HbA (normal) y HbS (falciforme).
Los individuos normales presentaran el
genotipo HbA HbA; los enfermos seran HbS HbS
y finalmente los heterocigotos HbA HbS
portaban el fenotipo falciforme mucho menos
acusado en sus glbulos rojos (al tener la mitad
de su hemoglobina normal) y no padecan la
enfermedad, aunque eran portadores de la mis-
ma, transmitindola a la mitad de sus gametos y,

en la descendencia de dos heterocigotos, al 25
% de su descendencia. Por otro lado, en ese
mismo ao, Linus Pauling y colaboradores demostraron que la anemia falciforme se originaba
por un cambio en la molcula de la hemoglobina. Mediante anlisis electrofortico observaron que la velocidad de migracin de la
hemoglobina de los pacientes era ms lenta que
la de los individuos sanos, lo que indicaba que
las cargas netas de ambos tipos de hemoglobina,
aunque ambas negativas, eran diferentes (mayor
carga negativa en la forma normal Hb').
Adems, y de acuerdo con las predicciones de
Neel y Beet, en los heterocigotos coexistan las
movilidades electroforticas de ambos tipos
(fig. 12.6a). Concluyeron, pues, que haba una
diferencia bioqumica entre ambos tipos de
hemoglobinas, lo que supuso la primera
indicacin de una alteracin (estructural)
molecular de una protena no enzimtica de
acuerdo con las leyes de la herencia.
Investigaciones posteriores realizadas por
Vernon Ingram en 1957 determinaron el tipo de
cambio en la protena que originaba la mutacin
falciforme. Se conoca que la parte proteica (la
globina) de la hemoglobina estaba formada por
cuatro cadenas polipeptdicas: dos cadenas a
idnticas de 141 aminocidos cada una y dos cadenas a idnticas con 146 aminocidos cada
una. La cromatografa bidimensional de los
162
GENTICA
Fig. 12.6. Anlisis de la hemoglobina HbA y Hbs: a) Perfiles electroforticos en gel de almidn de la hemoglobina e los
individuos HbA, HbA (AA simplificadamente); HbA, HbS(AS) y HbS, HbS (SS). b) Huella molecular e la hemoglobina normal
(HbA) (izquierda) y falciforme (HbS) (derecha). c) Secuencia parcial de aminocidos el pptido diferente para ambas
hemoglobinas.
fragmentos peptdicos generados por digestin

proteoltica componen la tcnica de la huella
molecular de una protena. Mediante esta tcnica, desarrollada por Sanger unos aos antes
para descifrar la secuencia de aminocidos de
polipptidos largos, Ingran descubri que la hemoglobina A y la S se diferenciaban por la movilidad de un solo fragmento (fig. 12.6b). La
secuenciacin posterior de dicho fragmento
de ambas hemoglobinas revel que un solo
cambio aminoacdico en la posicin sexta de la

cadena , sustituyndose cido glutmico por
valina, era el responsable de la enfermedad (fig.
12.6c). De este modo se estableci que un gen
era el responsable de la informacin gentica
para una cadena polipeptdica y su alteracin se
traduca en un cambio en la estructura primaria
(secuencia de aminocidos) de la protena. La
hiptesis un gen-una enzima quedaba ampliada
a un gen-una protena.
GENTICA MOLECULAR
3. Colinealidad
A partir de todos los experimentos anteriores y la generalizacin de la relacin entre genes

y polipptidos se comenz a trabajar en cmo
era esa relacin, cmo se materializaba la
transferencia de la informacin gentica
contenida en el ADN a las protenas. Las respuestas a estas preguntas se dieron a partir de
dos fructferas lneas de investigacin que se
desarrollaron durante las dcadas de los cincuenta y sesenta y que desembocaron, por una
parte, en el descubrimiento del Cdigo Gentico
y, por otra, en el establecimiento de la colinealidad gen-polipptido.
En 1958, Crick lanz la llamada hiptesis
de la secuencia que vena a decir que existe una
relacin entre la ordenacin lineal de los
nucletidos en el cido nucleico y la de los
aminocidos en las protenas. Al tratarse de dos
polmeros lineales la colinealidad de gen y
protena pareca una inferencia lgica, sobre
todo a partir del descubrimiento de que la
informacin hereditaria estaba codificada en la
secuencia de pares de bases en el ADN y la
informacin proteica en la secuencia lineal de
aminocidos
en
los
polipptidos.
La
demostracin experimental de todas estas ideas
se debi a los trabajos de Charles Yanofsky
entre los aos 1964 y 1967 con el gen TrpA que
codifica para la subunidad A de la enzima
triptfano sintetasa de E. coli. La enzima
completa est formada por dos polipptidos, A y
B, codificados respectivamente por los genes
TrpA y TrpB. Se aislaron muchos mutantes sin
actividad triptfano sintetasa dentro del gen
TrpA que fueron ordenados en un mapa
gentico lineal, usando las tcnicas de la poca
de mapeo bacteriano. El pptido A fue
caracterizado en su ordenacin lineal de
aminocidos, tanto en cepas normales TrpA+
como en distintas lneas mutantes TrpA-. Yanofsky encontr que cada mutante del gen se
corresponda con una alteracin en algn aminocido dentro del polipptido y, adems, las
posiciones de las mutaciones se correlacionaban
con las de los aminocidos alterados. Cuanto
mayor era la distancia gentica entre dos
165
mutantes del gen exista mayor nmero de

aminocidos entre los dos alterados dentro del
polipptido. De este modo Yanofsky determin
por primera vez la colinealidad, como una
correspondencia lineal entre la secuencia de
nucletidos de un gen y la de aminocidos
dentro de la protena especificada por dicho gen.
En la figura 12.7a se muestran los resultados de
Yanofsky. Ntese que en algunas posiciones un
aminocido es alterado de diferentes maneras
(posiciones 49, 211 y 234). De acuerdo con el
cdigo gentico se tratara de mutaciones dentro
de un mismo codon pero en diferentes
posiciones dentro del mismo (fig. 12.7b). Desde
entonces se demostr la colinealidad para otros
muchos genes bacterianos y de fagos, y sus
correspondientes protenas.
4. El gen eucarota
Los intentos de demostrar colinealidad para

genes eucariotas fueron metodolgicamente
inaccesibles en una primera etapa, hasta que en
el ao 1977, P. Sharp y R. Roberts, analizando
algunos genes de virus animales, demostraron
una falta de correspondencia entre las
secuencias nucleotdicas de los mismos y las
secuencias de sus correspondientes ARN
mensajeros (aos despus recibiran el Premio
Nobel por su descubrimiento). As, la hibridacin entre el ADN genmico de un gen y su
ARNm mostr que existan enormes lazos internos en el gen que no tenan secuencias complementarias en el ARN (fig. 12.8). El desarrollo
de la tecnologa del ADN recombinante
permiti el anlisis molecular de los genes eucariotas, confirmndose las observaciones citolgicas y evidencindose que eran muy diferentes a los bacterianos. Los segmentos nucleotdicos del ADN del gen que no tenan correspondencia con su ARN mensajero se denominaron secuencias intervinientes o, ms
comnmente, intrones y las regiones codificantes del ADN, separadas entre s por los intrones, se denominaron exones (ex por expresadas). Se estableci el concepto de gen
fragmentado para definir la estructura del gen
eucariota, que ha sido demostrada en la mayora
de los genes analizados en estos organis-
166
GENTICA
FIG. 12.7. a) Colinealidad entre las mutaciones del gen TrpA y las sustituciones aminoacdicas de la subunidad A e la
enzima triptfano sintetasa. b) Explicacin de las mutaciones en la posicin 234 de acuerdo con la asignacin de posicin 234
mos. Uno de los primeros en identificarse fue el

gen de la beta-globina de ratn y de conejo. En
ambos casos se encontraron dos intrones, el
primero de unos 120 nucletidos y el segundo
de 580 nucletidos en el gen del conejo (fig.
12.9a) y de 580 nucletidos en el ratn. La estructura del gen en ambos animales era, por
tanto, muy similar y as ocurre con este gen en
todos los mamferos examinados hasta el momento. El gen de la ovoalbmina de gallina ha
sido tambin exhaustivamente caracterizado
(fig. 12.9b). Su secuencia completa contiene
ms de 7.000 pares de bases mientras su protena presenta 386 aa. El gen contiene 7 intrones
(A-G) que se eliminan, antes del transporte al
citoplasma, unindose las 7 regiones codificantes o exones (1-7) para formar el RNAm
funcional, colineal con la protena.
De hecho, en la actualidad, pocos genes eucariticos parecen no contener intrones. Un
ejemplo extremo de gran nmero de intrones en
un gen lo constituye el gen de la distrofina
humana (2.500 kb), con ms de 80 intrones en
su secuencia. En el otro extremo se encontra-
GENTICA MOLECULAR
167
Fig. 12.8. Dibujo representativo de la molcula hbrida formada por la cadena molde de ADN de un gen
eucariota y el ARNm maduro de dicho gen. Se observan 6 bucles (A-F) no apareados en el ADN (intrones),
que no tendran secuencias complementarias en el ARN.
Fig. 12.9. Representacin esquemtica de la composicin en exones (regiones claras) e intrones (regiones oscuras) del
gen de la ovoalbmina de gallina (a) y del gen de la /3-globina de conejo (b).
ran los genes que codifican para las histonas,

sin secuencias intrnicas.
Del concepto de gen fragmentado eucaritico surgi la necesidad de determinar el mecanismo mediante el cual se llegara al establecimiento de la molcula de ARNm maduro, lo
que constituye el proceso de corte (de intrones)
y empalme (de exones) realizado sobre un transcrito inicial de ARN y que ser extensamente
tratado en otro captulo de este texto.
En lo que a colinealidad se refiere, sta
puede hacerse extensible a los organismos eucariotas pero nicamente para el ARN mensajero procesado (o el sumatorio de los segmen
tos exnicos de un gen) y la protena que ste
especifica.
Beadle, G. W. y Tatum, E. L. (1941): Genetic

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Captulo
13 La Estructura Fina del Gen

1.
El Locus rll del Fago T4
2.
Cartografa Gentica Fina
3.
Complementacin y el Concepto de Gen
170
GENTICA
Los genticos de la primera mitad del siglo

xx entendan el gen como una unidad cuya
estructura poda ser alterada por mutacin y que
poda presentarse en la descendencia en
combinaciones nuevas con otros genes a travs
de la recombinacin. El gen era, pues, una
unidad de mutacin, de recombinacin y de
funcin.
Una vez establecida la hiptesis de Beadle y
Tatum, en los aos 50, mientras se trabajaba en
su ampliacin a protenas en general, Seymour
Benzer profundiz en la estructura del gen,
realizando una cartografa gentica fina
consistente en analizar los distintos mutantes de
un gen, posicionarlos en el locus y establecer la
posibilidad de recombinacin entre distintas
mutaciones. Benzer utiliz las tcnicas clsicas
de recombinacin con bacterifagos, puesto que
en la dcada de los 50 an no se disponan de
las tcnicas de secuenciacin del ADN. Los
fagos resultaron un material idneo para este
tipo de anlisis por su capacidad de resolucin,
al recombinar los genomas virales en el interior
de la bacteria, con la obtencin de millones de
fagos hijos que sera la amplsima progenie
necesaria para realizar anlisis gentico de
recombinacin
intragnica.
As
podra
detectarse un solo recombinante intragnico
entre mil millones de fagos, con lo que la
resolucin sera tericamente tan elevada que
podran diferenciarse dos mutaciones localizadas en nucletidos vecinos dentro de un
gen. En esos momentos existan muchas preguntas acerca de cmo era la estructura de un
gen, cules eran las unidades ms pequeas
dentro de l capaces de sufrir mutacin y recombinacin, etc. El resultado final del trabajo
de Benzer fue la obtencin de un mapa de un
gen, el locus rII del fago T4. Debido a lo
detallado de su anlisis, al trabajo de Benzer se
le describe como el anlisis de la estructura fina
del gen y tuvo una enorme repercusin
cientfica. Hoy da, con la tecnologa molecular
es perfectamente asequible responder a estas
preguntas, pero lo que veremos a continuacin
hay que entenderlo desde la perspectiva
histrica de su realizacin en los aos en los que
se empezaba a conocer la estructura del ADN.
1. EI locus rll del fago T4
Benzer utiliz las tcnicas clsicas de recombinacin con virus bacterianos, concretamente con el fago T4, virulento para E. coli, y
para proporcionar estimaciones de los detalles
de la estructura de un gen utiliz el locus rII.
Las caractersticas de los lagos se manifiestan
en la morfologa de las calvas que se forman
despus de la lisis de las clulas bacterianas.
Los loci r (como ya se ha visto en la recombinacin de fagos) son los responsables de la rapidez de lisis bacteriana, de tal manera que los
alelos salvajes producen una lisis lenta de E.
coli sembrada en una placa Petri, lo que origina
calvas pequeas y rodeadas de un halo difuso en
el csped bacteriano. Los mutantes r- (de ahora
en adelante los denominaremos simplemente r)
producan calvas ms grandes y de bordes ms
ntidos (ms redondeados) despus de infectar a
E. coli, por lo que se denominaron mutantes de
lisis rpida, porque aparentemente resultaban
de un ciclo biolgico del fago ms rpido y
eficiente. Hoy da se sabe que los fagos salvajes
se inhiben en su reproduccin una vez que se ha
formado una calva de un tamao dado, mientras
los mutantes r son capaces de superar esta
inhibicin, originando calvas ms grandes.
Adems, aunque el tipo salvaje y los mutantes
rII podan infectar y lisar a la cepa B de E. coli,
en otra cepa, la K12(), slo poda multiplicarse
el tipo salvaje. Esta ltima cepa est
lisogenizada por el fago y por ello los
mutantes rII no pueden lisarla. Benzer
aprovech la circunstancia para establecer su
sistema de deteccin. De ese modo, cuando la
progenie de un cruce entre dos mutaciones rII se
pona a infectar la cepa K12(), slo los escassimos recombinantes salvajes formaran
calvas (de morfologa salvaje, es decir calvas
pequeas).
2. Cartografa gentica fina
Benzer comenz a trabajar con ocho

mutantes rII (que numeraremos del 1 al 8),
utilizando
el
siguiente procedimiento
(resumido
en
la
fig.
13.1).
FiG. 13.1. Procedimiento seguido por Benzer para seleccionar los recombinantes (salvajes) entre dos mutacio
nes rll (nicamente se muestra el segmento del genoma del fago correspondiente al locus rll).
172
GENTICA
FIG. 13.2. Protocolo para el clculo de la frecuencia de recombinacin entre dos mutaciones r11.
1. Infectaba mezclados dos mutantes en

condiciones de multiplicidad de infeccin sobre
la lnea B de E. coli y recoga los lisados.
2. Sembraba estos lisados en condiciones de
unicidad de infeccin sobre la cepa K12(A).
nicamente los escassimos fagos recombinantes intragnicos podran infectar y lisar a
dicha cepa, produciendo calvas de tipo salvaje.
El porcentaje de recombinantes se puede determinar contando el nmero de calvas salvajes en
diluciones seriadas y, de modo similar a la
cartografa de eucariotas, us la frecuencia de

recombinacin como una estimacin de las
distancias (en este caso intragnicas) entre las
mutaciones (fig. 13.2), de manera que obtuvo
las posiciones relativas de los 8 mutantes sobre
la estructura lineal del locus (las distancias
marcadas no son las reales, slo lo son las posiciones):
GENTICA MOLECULAR
Benzer ampli su anlisis a cientos de mutaciones que fue posicionando dentro del locus
mediante el mismo procedimiento empleado
para las primeras. La tarea era muy laboriosa, al
tener que testar los mutantes dos a dos en
mltiples combinaciones, pero en un momento
de su investigacin descubri que algunas mutaciones rII eran deleciones de fragmentos
dentro del locus. Estas deleciones podan identificarse por su incapacidad para revertir al tipo
salvaje (la reversin s era posible para las mutaciones puntuales). Adems, cuando se reali
173
zaba una infeccin de mezcla entre un mutante

de delecin y un mutante puntual cuya mutacin
se encuentra localizada en la delecin, mediante
el procedimiento antes indicado de siembra en
la cepa B en multiplicidad de infeccin,
recogida del lisado y testado de los recombinantes salvajes en la cepa K12(. ), nunca
se podan obtener recombinantes, por imposibilidad fsica de reconstruirse un cromosoma
vrico salvaje (fig. 13.3). Una vez caracterizados
los mutantes de delecin (testndolos con las
mutaciones puntuales que ya se encontra-
FIG. 13.3. Procedimiento seguido por Benzer para la utilizac n (le mutantes de delecin en su anlisis del locus rII.
174
GENTICA
Fig. 13.4. Asignacin de tres mutaciones puntuales, M, P10 y P12, a subregiones dentro del locus r1l mediante la
utilizacin de deleciones solapantes (DI a D7). Los resultados de la produccin de descendencia recombinante de
tipo salvaje (+ o -), con el procedimiento de infecciones de mezcla entre mutante puntual y de defeccin indicado en
la figura 13.3, permite la asignacin de los mutantes a las distintas regiones. As, M se localizara en la regin V,
Pl0 se localizara en ll y P12 en VI. La utilizacin de una segunda serie de deleciones solapantes dentro de cada una
de las regiones de delecin iniciales (mostradas tres en la regin V) permite una localizacin ms precisa de las mu
taciones. En el caso que se muestra, la mutacin M se asignara a la regin 5c.
GENTICA MOLECULAR
ban posicionadas en el locus), fueron utilizados

por Benzer para ir colocando en el locus, de un
modo rpido, nuevos mutantes puntuales. En
principio utiliz siete deleciones solapantes
(detectadas por su incapacidad de recombinar
entre s) para una asignacin inicial de
mutantes puntuales a subregiones dentro del
locus. Posteriormente utiliz pequeas deleciones dentro de cada rea para cartografiar de
un modo ms preciso las distintas mutaciones
asignadas a una subregin (fig. 13.4).
Tras varios aos de investigaciones Benzer
obtuvo la topologa del locus, definida como
una secuencia de elementos capaces de mutar, y
la topografa del mismo, que vendra dada por
las diferencias en las propiedades de cada
elemento. La manera de abordar esta parcela de
su trabajo se bas en la comparacin de mutantes reversibles (puntuales) muy prximos
entre s: al cruzar dos de estos mutantes si no se
obtenan recombinantes salvajes la conclusin
era que se encontraban en el mismo lugar. De
175
este modo, determin que las casi 2.000 mutaciones analizadas por este procedimiento no se
distribuan uniformente dentro del locus, existiendo puntos en los que se acumulaban las mutaciones, a los que denomin puntos calientes
(hot spots) (fig. 13.5).
Por tanto, el gen era una secuencia lineal de
material gentico en la cual las mutaciones
pueden producirse en lugares diferentes (mutones) y recombinar entre s, de forma que se restituya el genotipo normal. A las unidades de recombinacin les llam recones. El mutn, en
ltimo extremo, sera un par nucleotdico y el
recn, la distancia entre dos pares nucleotdicos
consecutivos. Se rompa, pues, con la idea
clsica del gen como unidad mutacin y de recombinacin. La recombinacin intragnica
puede existir dentro de cualquier locus, el problema existente es que su deteccin slo es posible si se cuenta con un potente sistema de seleccin de recombinantes, tal como ofrecen los
fagos.
FIG. 13.5. Mapa de mutaciones del locus rll del fogo T4. Cada crculo representa una mutacin independiente,
en rojo para el cistrn A y en verde para el cistrn B. En algunos lugares se aislaron gran nmero
de mutaciones; son los llamados puntos calientes (en A6c y B4).
FIG. 13.6. Procedimiento de Benzer para establecer la complementacin (a) o la no complementacin (b) entre pare
jas de mutaciones. Los superndices de los mutantes (1, 6 y 7) se corresponden con mutantes posicionados por Benzer
en sus primeros estudios. nicamente se muestra el segmento del genoma del fago que corresponde al locus rII.
GENTICA MOLECULAR
3.
Complementacin y el
concepto de gen
Por otra parte, en las primeras etapas de

su investigacin Benzer descubri que,
aunque ninguno de los mutantes rII por s
solo lisaba la cepa K12(1) de E. coli, ciertos
pares de mutantes en mutiplicidad de
infeccin conducan a la lisis de dicha cepa y
adems producan calvas de tipo salvaje (fig.
13.6). Testando numerosos mutantes por
parejas constat que todas las mutaciones HI
podan reunirse en dos grupos de
complementacin, A y B, rompiendo as la
idea clsica del locus como unidad funcional.
A cada unidad funcional la llam cistrn, denominacin proveniente del nombre que dio
Benzer a la prueba completa para testar las
parejas de mutaciones (prueba cis-trans) (fig.
13.7).
El locus rII estaba constituido por dos cistrones, A y B, cuyas mutaciones se
distribuan, aproximadamente, en la primera
mitad del locus las del cistrn A y en la otra
mitad las del cistrn B. Todas las mutaciones
del cistrn A complementaban con las del
cistrn B, pero ninguna pareja de mutaciones
pertenecientes al cistrn A complementaban
entre s e igual ocurra para las mutaciones
dentro cistrn B. Despus de estos trabajos de
Benzer, la hiptesis
un gen-una enzima pas a denominarse
177
un cistrn-un polipptido.
Conviene sealar que la complementacin
y la recombinacin no son sucesos excluyentes: para dos mutaciones pertenecientes a cis~
trones distintos, que complementan sobre la
cepa K12, si se recogieran los lisados y se
utilizasen para infectar, en unicidad de
infeccin, a esa misma cepa, se obtendra un
nmero pequeo de calvas salvajes
provenientes
de
los
escasos
fagos
recombinantes salvajes que se habran
formado durante la primera infeccin. Los
procedimientos para poner de manifiesto una
u otra s son diferentes y tambin lo son las
consecuencias genticas de ambos procesos.
La complementacin es inmediata (un solo
ciclo de infeccin), en gran cantidad (gran
nmero de calvas salvajes) y no hereditaria,
mientras la recombinacin nunca es
inmediata (se observa despus de dos ciclos
de infeccin), se manifiesta en un pequeo
nmero de los fagos hijos y es hereditaria (los
fagos
recombinantes
transmiten
sus
caractersticas a sus descendientes). Durante
un tiempo se populariz el trmino cistrn
como sustituto de gen, pero en la actualidad
ha cado en desuso, mantenindose la
denominacin de gen como la unidad de
herencia, pero en los trminos de funcionalidad
que
describi
Benzer.
FIG. 13.7. La prueba cis-trans de Benzer, para determinar si dos mutaciones se encuentran en el mismo cistrn o en
cistrones diferentes. En todos los casos se utiliza como husped la cepa K12(2) de E. coli. En la prueba cis (recuadros
de la izquierda), que se utiliza como control, para la doble infeccin se usa un fago salvaje y otro con las dos mutacio
nes sobre el mismo cromosoma. Siempre se produce lisis puesto que el fago salvaje fabrica los productos necesarios
para ella. En la prueba trans (recuadros de la derecha), que es el verdadero test, las mutaciones se localizan en cromo
somas distintos (en fagos distintos). La complementacin se representa con el signo + e indica que las mutaciones se
localizan en cistrones distintos dentro del locus. La no complementacin se representa con el signo - e indica que
ambas mutaciones se localizan en el mismo cistrn.
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Captulo
14
Biologa Molecular
de la Funcin Gnica
1.
Evidencias Genticas de la Existencia del ARN Mensajero
2.
La Transcripcin y la ARN Polimerasa
3.
La Transcripcin en Eucariotas
4.
Procesamiento de los ARN Eucariotas

4.1. Proceso de Adicin de una Caperuza (Capping)
en el Extremo 5
4.2. Adicin de una Cola de Poliadenina en el Extremo 3
4.3. Proceso de Poda de Secuencias Intrnicas (Splicing)
4.4. Editado del ARN
180
La informacin gentica codificada en el

ADN puede ser copiada a ADN durante la replicacin o puede servir para la sntesis proteica.
En la dcada de los 60, mientras algunos genticos descifraban el cdigo, otros grupos de
investigacin trabajaban en cmo se expresaban
los genes o, lo que es lo mismo, cmo se llevaba
a cabo el flujo de informacin desde el ADN a
las protenas. En aquellos aos ya estaba
bastante claro que las protenas eran el producto
final de muchos genes pero haba que determinar los procesos mediante los cuales se
lleva a cabo la transferencia de informacin
desde el ADN a las protenas, lo que constituye
la funcin gnica.
En este captulo veremos cmo los genes no
realizan la sntesis de protenas directamente
sino que es necesario un proceso intermedio, la
transcripcin, mediante el cual la informacin
gentica almacenada en el ADN se trasfiere al
ARN. De ese modo se fabrican todos los tipos
de ARN que se vern involucrados, de un modo
u otro, en la sntesis de protenas o traduccin.
Por una parte se transcribirn las molculas de
ARN mensajero (ARNm) (copias de los genes
que darn protenas), que sern el sustrato de la
traduccin, pero tambin se transcriben ARNs
que no sern traducidos, y que en su inmensa
mayora formarn parte de la maquinaria
traduccional. Nos referimos fundamentalmente
a las molculas de ARN ribosmico (ARNr),
que formarn parte de los ribosomas, los
orgnulos encargados de la sntesis de las
protenas, y las molculas de ARN transferente
(ARNt), que servirn de adaptadores entre la
informacin contenida en el ARNm y los
aminocidos, para su incorporacin especfica a
un polipptido en formacin.
1. Evidencias genticas de la existencia
del ARN mensajero
Desde que se demostr que el ADN era el

material gentico y se desentra su estructura
(tratado en los captulos iniciales), numerosas
evidencias indirectas parecan sugerir la necesidad del ARN como intermediario entre el
ADN y las protenas. En eucariotas, el ADN se
GENTICA
encontraba en el ncleo y nunca se diriga al citoplasma, mientras que las protenas se sintetizaban en el citoplasma. En bacterias las protenas se sintetizaban por todo el citoplasma,
mientras el ADN se encontraba de forma ms o
menos compacta en una regin determinada, el
nucleoide. En todos los tipos celulares exista
sntesis de ARN, de vida media corta y en cantidades proporcionales a las de protenas. Gran
parte de estas observaciones se realizaron mediante la administracin de precursores radiactivos a las clulas. As, experimentos de pulso
y caza en clulas eucariotas con precursores de
ARN marcados radiactivamente (UTP marcado,
especfico del ARN) evidenciaron que, despus
del pulso, las seales radiactivas de ARN se
localizaban en el ncleo, sealando que en l se
produca la sntesis. Tras pasar a las clulas a un
medio normal y proceder a la caza de las
molculas radiactivas de ARN despus de un
cierto tiempo (que no poda dilatarse demasiado
debido a la corta vida media de las molculas de
ARN), stas aparecan por todo el citoplasma
(fig. 14.1), evidenciando su desplazamiento
despus de sintetizadas, para ejercer sus
funciones en el citoplasma celular, donde se
llevaba a cabo la sntesis de protenas. Eran,
pues, buenas candidatas para ser las molculas
intermediarias en la sntesis proteica. A partir de
todas estas evidencias indirectas, las primeras
pruebas experimentales de la existencia de un
intermediario de ARN (formado a partir de
ADN) que diriga la sntesis de protenas, se
realizaron en investigaciones con bacterias y sus
fagos. En dos artculos, publicados en Virology
en 1956 y 1958, Elliot Volkin, Lawrence
Astrachan y colaboradores analizaron el ARN
producido tras la infeccin de E. coli con los
fagos T2 y T7. Utilizando 32P observaron que el
suceso molecular ms patente, tras la infeccin,
era la sntesis de gran cantidad de ARN, cuya
composicin nucleotdica era similar a la del
ADN del fago utilizado (y diferente a la del
ARN bacteriano) (tabla 14.1). Aunque el ARN
era inestable (o tena una vida media muy
corta), su produccin siempre preceda a la
sntesis de las protenas del fago, pareciendo ser
un
paso
necesario
para
la
misma.
GENTICA MOLECULAR
181
FIG. 14.1. Experimentos de pulso y caza con precursores radiactivos de ARN. Despus del pulso, las seales
radiactivas de ARN se localizaban en el ncleo, indicando que era ah donde se sintetizaba. Tras un tiempo se
cazaba el material radiactivo en el citoplasma, evidenciando su desplazamiento, despus de sintetizado, para
ejercer sus funciones.
Unos aos despus, en 1961, Spiegelman y

colaboradores, mediante la misma tecnologa de
marcaje con 32P, aislaron ARN despus de una
infeccin de un fago a una bacteria y lo usaron
en experimentos de hibridacin molecular con
el ADN de ambos, evidenciando que el ARN
hibridaba nicamente con el ADN del fago, lo
que demostraba que sus secuencias eran
complementarias a la informacin gentica del
bacterifago y no provenan del ADN
bacteriano.
No estaba, sin embargo, esclarecido qu tipo
de ARN era el intermediario. Como se saba
que los ribosomas participaban en la sntesis de
protenas exista la posibilidad de que cada
ribosoma fuera especfico para cada protena y,
por tanto, que la informacin contenida en el
ADN pasase al ARN ribosmico. En ese
mismo ao 1961, Sydney Brenner, Franois

Jacob y Matthew Meselson demostraron que los
ribosomas eran la factora en la que se
sintetizaban las protenas, pero la informacin
para la sntesis la llevaba otro tipo de ARN.
Marcaron ribosomas de E. coli con istopos
pesados y posteriormente provocaron la infeccin por fagos en presencia de precursores radiactivos de ARN. De este modo podan seguir
cmo se sintetizaban las protenas del fago, demostrando que se producan en los ribosomas
bacterianos, los cuales no eran, por tanto, especficos y la sntesis estaba dirigida por las molculas de ARN sintetizadas despus de la infeccin, a partir de los genes fgicos. Estos resultados apoyaron firmemente la existencia de
un ARN mensajero como vehculo de la informacin gentica contenida en el ADN para di-
TABLA 14.1. Composicin de bases de los ARN producidos despus de la infeccin de E. coli con los fagos T2
y T7, comparados con la composicin de bases de los ADN de los fagos y con la del ARN de E. coli sin infeccin.
(Datos tomados de Volkin y Astrachan, 1956; Volkin et al., 1958)
182
GENTICA
Fig. 14.2. Mecanismo general de sntesis de ARN, catolizada por la enzima ARN polimerasa, utilizando como
molde una cadena de ADN. Ntese el apareamiento Adenina-Uracilo, correspondiente a la sustitucin
de Timing por Uracilo en el ARN.
rigir la sntesis de las protenas en los ribosomas. Tal propuesta fue formalmente postulada
por F. Jacob y J. Monod en 1961, en el contexto
de su modelo de regulacin de la expresin gentica (que ser tratado en otro captulo). La similitud entre el ADN y el ARN sugera que la
transcripcin, el proceso de transferencia de la
informacin contenida en el ADN al ARN, se
realizaba en base a la complementariedad de las
bases (fig. 14.2), de un modo similar a como se
realizaba la replicacin, pero fabricndose slo
una cadena de ARN y siguiendo las reglas de
apareamiento de la replicacin con la salvedad
del apareamiento Adenina-Uracilo (en vez de
Timing; vase el captulo dedicado a la
estructura del material gentico). Ello no deca
nada acerca de si el ARN se fabricaba a partir
de una o ambas cadenas del ADN, pero
mediante nuevos experimentos Marmur y
colaboradores, despus de purificar por separado las dos cadenas de ADN del fogo SP8
aprovechando sus diferentes densidades en
CsCI, aislaron transcritos de ARN de dicho fogo
y, mediante hibridacin molecular, demostraron
que cada transcrito era complementario de una
sola de las cadenas del fogo, aunque no siempre
era la misma cadena para todos ellos.
Finalmente, la confirmacin citolgica de la
transcripcin se ha llevado a cabo gracias a los
trabajos de O. Miller, B. Hamkalo y C. Thomas
en oocitos de anfibios, visualizndose la
transcripcin de enormes cantidades de ARNr a
partir de sus genes (fig. 14.3).
Por otra parte, era necesario demostrar la

existencia de una enzima que pudiera dirigir el
proceso de la transcripcin. En 1959, varios investigadores aislaron en hgado de rata una enzima, capaz de llevar a cabo la sntesis de ARN
a partir de un molde de ADN. Sus requisitos
generales de funcionamiento eran parecidos a
las polimerasas de ADN, con las excepciones de
utilizar como precursores ribonucletidos en
vez de desoxirribonucletidos y no requerir
cebador para iniciar la sntesis. Pero la ARN
polimerasa que mejor ha sido caracterizada,
conocindose en detalle su estructura y propiedades qumicas, es la de E. coli, que veremos en
la siguiente seccin.
2. La transcripcin y la ARN polimerasa
La transcripcin es el proceso de sntesis de

ARN, por complementariedad de bases, tomando como molde el ADN y bajo la accin
coordinada de la enzima ARN polimerasa y
otros cofactores. La direccin de la sntesis es 5'
- 3' (fig. 14.4), incorporndose los ribonucletidos trifosfato de forma que los nucletidos
nuevos se engarzan al extremo 3'-OH, del
mismo modo que se lleva a cabo la replicacin
del ADN. La reaccin general que resume la
sntesis puede indicarse como:
GENTICA MOLECULAR
183
FIG. 14.3. Dibujo representativo de la confirmacin citolgica del modelo de transcripcin de genes del ARN ribosmico
(ARNr), repetidos en tndem, transcribindose en el nuclolo de un anfibio. Las molculas de ARN en crecimiento aparecen
como ramas que salen de un tronco que es el ADN. El aspecto es el de un rbol de Navidad. En cada rbol (un gen en
transcripcin), las ramas ms cortas representan transcritos incipientes, mientras que las ramas ms largas seran
molculas de ARNr prcticamente formadas (copias de una de las cadenas del gen).
La ARN polimerasa, originalmente definida

como la enzima capaz de incorporar nucletidos
en el ARN bajo la direccin de un molde de
ADN, hoy en da se sabe que es, en realidad, un
complejo aparato enzimtico. La capacidad de
catalizar la sntesis de ARN define el mnimo
componente que puede describirse como ARN
polimerasa. Pero la sntesis de ARN implica
mucho ms que eso y la enzima debe realizar
todas las fases del proceso. En la inmensa
mayora de los procariotas una nica ARN
polimerasa transcribe todos los tipos de ARN.

Como ya se ha indicado la mejor estudiada es la
de E. coli: la enzima completa u holoenzima
tiene un peso molecular de 4,8 x 105 daltons y
contiene diferentes cadenas polipeptdicas
(subunidades) unidas por puentes secundarios.
En la figura 14.5 se representa la estructura de
la ARN polimerasa de E. coli, que podra
escribirse as: ( ' 2 ). Si la
holoenzima fuese una esfera
184
GENTICA
Fig. 14.4. La sntesis de ARN se realiza por complementariedad de secuencias, a partir de una de las dos cadenas
de ADN, la molde, tambin llamada cadena antisentido, ya que su secuencia es complementaria a la secuencia del
gen. La cadena de ADN que no se transcribe es la acompaante o cadena con sentido, ya que su secuencia es la del
gen, que quedar en forma de ARN (con la salvedad de la sustitucin de las Timinas por Uracilos). La direccin de la
sntesis es 5' 3' (igual que en replicacin).
Fig. 14.5. Estructura de la ARN polimerasa de E. coli (Holoenzima =
'
2
)..
GENTICA MOLECULAR
tendra un dimetro de unos 100 A, abarcando

unos 30 pares de bases, pero la disposicin espacial de sus elementos es tal que realmente cubre el doble, es decir, unos 60 pares de bases. La
unin de sigma ( ) no es muy firme, siendo
relativamente fcil encontrar agregados
( 2 ), que constituyen el ncleo (core)
de la enzima. Este ncleo es capaz de realizar la
sntesis de ARN, residiendo en l las funciones
catalticas (en las subunidades beta y beta
prima), pero para la iniciacin correcta de la
transcripcin es necesario el factor sigma ( ).
El proceso consta de tres fases (iniciacin,
elongacin y terminacin) (resumidas en la
tabla 14.2), que veremos en detalle a
continuacin. Para ello vamos a centrarnos en
un segmento cromosmico que lleva un gen
estructural a transcribir, tal como se muestra en
la figura 14.6.
Iniciacin. El primer paso implica el reconocimiento de la ARN polimerasa del comienzo de la unidad de transcripcin en el
ADN. La secuencia de ADN que sirve de seal
a la ARN polimerasa es el PROMOTOR, que se
localiza en 5', corriente arriba del punto de
inicio de la transcripcin, y la subunidad de la
enzima responsable del reconocimiento de dicha
regin de ADN es a . Qu seales tiene el
ADN del promotor para el reconocimiento por
parte de a? Una comparacin de secuencias de
ms de 100 promotores bacterianos demostr la
existencia de dos regiones de alta homologa
entre todos ellos (altamente conservadas), pudiendo establecerse dos secuencias consenso*
(fig. 14.7b). Una se localiza 10 nucletidos corriente arriba del punto de inicio de la trans
185
cripcin (punto +1) y se denomin regin -10 o

caja de Pribnow. La otra se localiza 35 nucletidos corriente arriba de ese mismo punto y
se denomin regin -35 (figs. 14.6 y 14.7a). Las
mutaciones en ambas regiones disminuyen las
tasas de transcripcin, a veces de un modo
drstico. Adems, este mismo anlisis ha servido para demostrar que las secuencias determinantes para el reconocimiento son las pertenecientes a la cadena con sentido (la de polaridad
5'
3'), aunque luego la transcripcin se produzca a partir de la cadena molde, de polaridad
3' 5' . Gracias al factor o, la ARN polimerasa
que va explorando por el ADN (fig. 14.8a) reconoce la regin promotora, anclndose a ella
de un modo laxo y formndose una estructura
que se denomina complejo del promotor cerrado (fig. 14.8b). Posteriormente se produce el
desenrollamiento de la doble hlice alrededor de
la regin -10. Aunque la enzima cubre unos 60
pares de bases, nicamente se desenrollan unos
17. La estructura en ese momento se denomina
complejo del promotor abierto (fig. 14.8c). A
diferencia de la replicacin, no se necesita
cebador y la incorporacin del primer
ribonuclesido trifosfato (que permanece como
tal), complementario al nucletido situado en la
posicin +1 (cuya base es una pirimidina, ms
frecuentemente Timina) (fig. 14.8d), marca la
transicin a la siguiente etapa.
Elongacin. Fase durante la cual se van
uniendo covalentemente nucletidos desde el
C3'-OH del ltimo nucletido ya incorporado
hasta el C5' del nucletido que se incorpora
mediante un enlace fosfodister. Despus de
Tabla 14.2. Caracteristicas principales de las fases del proceso de la transcripcin
186
GENTICA
FIG. 14.6. Segmento de ADN que contiene ungen estructural que se transcribe. Se marcan todos los elementos
ms relevantes tanto en el ADN como en el ARNm. En los procariotas, transcripcin y traduccin estn
acopladas. El segmento que posteriormente se va a traducir es menor que el ARNm transcrito, ya que ste
presenta las regiones lder (en 5', que contiene las secuencias para enganche del ribosoma) y trailer (en 3').
que se hayan unido algunos ribonucletidos al

ARN en crecimiento, la subunidad se disocia, prosiguiendo la elongacin dirigida por el
ncleo de la enzima (la polimerizacin es realizada por la subunidad ). La siguiente ecuacin resume cada uno de los pasos de los que
consta esta fase:
Como muestra la ecuacin, cada uno de los

pasos implica la adicin de un ribonucletido
(NMP) a la cadena polirribonucleotdica en
formacin (NMP)n, que pasa a tener un elemento ms ((NMP)n+1). La energa generada al
cortar el precursor trifosfatado a la forma mo
nofosfato para incorporarse al ARN en formacin impulsa la reaccin, liberndose ms

energa con la descomposicin del pirofosfato a
2Pi), mediante la
fosfatos inorgnicos (PPi
enzima pirofosfatasa. Se va formando transitoriamente un dplex hbrido ADN-ARN, desplazndose la cadena de ADN no molde. En E.
coli esta fase se realiza a una velocidad de unos
50 nucletidos/segundo a 37 C.
Terminacin. Implica el reconocimiento del
punto de terminacin de la sntesis. Dejan de
aadirse nucletidos y el dplex hbrido se disocia, restituyndose la doble hlice de ADN y
quedando el ARN libre, con la enzima tambin
liberada de la regin. La secuencia de ADN requerida para todo ello se denomina terminador y
GENTICA MOLECULAR
187
Fig. 14.7. a) Representacin esquemtica de un promotor en la que se marcan las regiones indispensables para el
inicio de la transcripcin. Ntese que dichas regiones se localizan en la cadena acompaante. b) Secuencias nucleo
tdicas de algunos promotores de E. coli y sus jugos, en la cadena de polaridad 5' - 3'. El punto +1 que se marca no
es el de inicio de la sntesis, ya que ste estar localizado en la cadena molde y contendr una pirimidina (timina,
principalmente, o citosina).
establece, tras la transcripcin, una secuencia en

el ARN denominada trailer. Se han descubierto dos tipos de terminadores, rho dependientes y rho independientes, segn necesiten o no
el concurso de un factor rho () para llevar a
cabo la terminacin de la transcripcin.
En los terminadores rho independientes la

terminacin es dirigida por la propia secuencia
del ADN (fig. 14.9). Esta presenta unos 40 pares de bases y consta de una zona rica en GC
seguida de una serie de varias Adeninas. La
transcripcin del terminador origina una hor-
Fig. 14.8. Iniciacin de la transcripcin: a) La holoenzima ARN polimerasa va explorando el ADN, buscando la se
cuencia promotora. b) Una vez localizado el promotor se ancla a l, gracias a la subunidad sigma (a). Esta primera
unin es laxa y la estructura que se forma se denomina complejo del promotor cerrado. c) La unin se incrementa y
se produce un desenrollamiento de la doble hlice alrededor de la regin -10. A esta estructura se le denomina com
plejo del promotor abierto. d) Transicin hacia la fase de elongacin con la incorporacin del primer nuclesido tri
fosfato y, sobre ste, secuencialmente varios ms mediante enlaces fosfodister. Se disocia la subunidad a.
Fig. 14.9. Terminador rho independiente.
190
quilla en el trailer, por el autoapareamiento de la

zona rica en GC, a la que sigue una serie de Us.
Aunque el mecanismo ntimo es an objeto de
conjetura, se cree que la ARN polimerasa se
ralentiza y su unin al ADN se hace ms laxa,
debido a la interferencia que ejerce la horquilla
formada. Los pares A-U son la nica fuerza
(dbil) que mantiene unidos el ADN molde y el
ARN y, como resultado de esa pausa y, probablemente, de la estructura, se disocian todos los
elementos, finalizando la transcripcin.
Los terminadores rho dependientes difieren
en su secuencia de los anteriores, no presentando las seales caractersticas de los primeros (fig. 14.10). As, el ADN carece de la serie de Adeninas y, aunque puede tener una secuencia que origine la formacin de horquillas
de autoapareamiento en el ARN, stas son pequeas y no provienen de una secuencia rica en
pares GC. De ese modo la polimerasa no puede
completar por s sola la terminacin. Se necesita
factor rho, protena hexamrica que se mueve
por el ARN (utilizando la hidrlisis de ATP),
detrs de la polimerasa, hasta encontrar un sitio
especfico llamado rut, al cual se ancla y
tira del ARN, disocindolo del molde y
facilitando la separacin de la enzima.
Es interesante sealar que, en procariotas,
grupos de genes con funciones relacionadas se
encuentran contiguos en el cromosoma (vase el
captulo dedicado a la regulacin en estos organismos), por lo que slo el ltimo de ellos
presenta estas seales de terminacin. Dicho de
otra manera, el ARN mensajero para todas las
enzimas implicadas en una funcin metablica
se sintetiza de modo continuo, denominndose
ARNm policistrnico. Puesto que los productos
de una misma ruta se necesitan todos al mismo
tiempo, esta forma de transcripcin es muy
eficiente, y se posibilita la regulacin
coordinada de la sntesis de todos ellos, que es
eminentemente transcripcional.
Finalmente, como corolario de todo lo expuesto y retomando los datos aportados en la
figura 14.6, conviene resaltar que la transcripcin no solo se establece para la secuencia codificante del gen, que ser la que sirva como
sustrato para la sntesis de protenas, sino que se
proyecta a uno y otro lado de la misma, ori
GENTICA
ginando que el ARNm presente unas secuencias

que no sern traducidas, una en 3' (corriente
abajo), ms all del codon de parada de la
traduccin, y otra en 5' (corriente arriba),
delante del codon de inicio (AUG) de la sntesis
proteica. La primera de ella se denomina trailer,
y ya nos hemos referido a ella al hablar de la
terminacin de la transcripcin, mientras que la
segunda, denominada lder, es de gran
importancia para el correcto funcionamiento y
enganche del ARN a la maquinaria traduccional. Adems, transcripcin y traduccin estn
acopladas, de tal manera que tan pronto como se
ha sintetizado la regin lder se enganchan los
ribosomas y comienza la traduccin antes de
que el mensaje haya sido transcrito. Las tasas de
transcripcin y traduccin son semejantes: a 37
C se incorporan al mensaje aproximadamente
14 codones/seg o 42 nucletidos/seg y la
sntesis de protenas se ealiza a una velocidad
de 15 aminocidos/seg. Del mismo modo, la
degradacin del ARNm comienza a realizarse
por el extremo 5' antes de que se haya traducido
el extremo 3'. Al ser el ARNm policistrnico, la
degradacin sigue al ltimo ribosoma del
convoy, efectundose a una velocidad 'h de la
de sntesis.
3. La transcripcin en eucariotas
La gran mayora del conocimiento que se

tiene sobre el proceso de la transcripcin proviene de procariotas y muchas generalidades del
proceso son similares en eucariotas. Aunque
gran parte de la transcripcin en eucariotas se
tratar en el contexto de la regulacin de la
expresin gentica, existen ciertas caractersticas generales del proceso y diferencias respecto
a la transcripcin bacteriana que deben ser
reseadas aqu.
En primer lugar la transcripcin en eucariotas se realiza en el ncleo celular. Est separada fsicamente de la traduccin (que se
realiza en el citoplasma) y esta circunstancia
establece que el ARN debe completar su transcripcin y entonces salir del ncleo para que se
lleve a cabo la sntesis de protenas. Transcripcin y traduccin no estn por tanto acopladas,
GENTICA MOLECULAR
Fig. 14.10. Terminador rho dependiente.
191
192
GENTICA
TABLA 14.3. Especializacin en la sntesis de ARN por parte de las ARN polimerasas de eucariotas
lo que establece ms oportunidades y mecanismos para llevar a cabo la regulacin de la expresin de los genes eucariotas, en asociacin
con este transporte. El transcrito primario de
ARNm debe sufrir una serie de modificaciones,
relacionadas con su transporte al citoplasma, su
proteccin en ese medio y la eliminacin de
secuencias intrnicas para convertirse en un
ARNm funcional. Este ltimo proceso tambin
lo realizan los ARNr y ARNt.
Por otra parte, en eucariotas existen tres
ARN polimerasas diferentes, ms grandes, especializadas (tabla 14.3) y complejas que la
polimerasa bacteriana, aunque mantienen ciertas
similitudes en las subunidades mayores que
constituyen el ncleo enzimtico.
El proceso de transcripcin ms analizado
en eucariotas es el realizado por la ARN polimerasa II, la encargada de transcribir los ARNm
y a l nos referiremos a partir de este momento.
Las secuencias que constituyen los promotores
eucariticos son ms extensas y complejas. En
ellos existen regiones equivalentes a las
secuencias consenso de los promotores
bacterianos. La primera de ellas es la caja
TATA o de Goldberg-Hogness, situada a -25
pares de nucletidos (corriente arriba) del punto
de inicio de la transcripcin. Sera la regin
equivalente a la regin -10 de los promotores
bacterianos. Su secuencia consenso es ms
amplia, un heptanucletido, y se encuentra en la
mayora de los promotores eucariticos, siendo
la responsable de la puesta en marcha del inicio
de la transcripcin a travs de su unin a una
protena, TBP (TATA binding protein), que
facilita su desenrollamiento. Esta protena, a su
vez, forma parte de un complejo de mltiples
subunidades denominado TFIID, responsable de
la unin inicial al ADN, necesaria para que se
ancle la ARN polimerasa, que, a diferencia de la
enzima procariota, no puede establecer
directamente su unin al ADN de la regin
promotora. Una segunda regin se localiza
tambin corriente arriba pero mucho ms lejos

del punto de inicio que la caja TATA. Es la caja
CCAAT, de posicin mucho ms variable,
pudiendo encontrarse en cualquier punto de un
segmento entre -50 y -500 nucletidos, segn
los genes, y cuyas mutaciones afectan a las tasas
de transcripcin. Existen otros elementos en el
ADN controladores de la transcripcin eucariota; son los intensificadores, los aislantes y
otras seales, que todas ellas en conjunto tienen
un papel regulador ms especfico y que sern
objeto de anlisis en el captulo 16.
4. Procesamiento de los ARN eucariotas
La existencia de genes fragmentados y la

separacin de los procesos de transcripcin y
traduccin en compartimentos celulares distintos hacen que las molculas de ARN producidas
en el ncleo deban someterse a diversas
transformaciones hasta convertirse en ARN
maduro. Como ya se ha visto, los genes eucariticos se transcriben completos (intrones y
exones) originando molculas precursoras ms
largas, que constituyen el ARN heterogneo
nuclear (ARNhn), que nunca sale como tal del
ncleo y pasa su corta vida unido a protenas, en
forma de ribonucleoprotenas (RNPhn).
El transcrito primario de ARNm debe sufrir
una serie de modificaciones para dar un ARNm
funcional. El complejo proceso de maduracin
se denomina en su conjunto procesamiento del
ARNm y comprende la adicin de una
caperuza en su extemo 5' (capping), la
adicin de una cola de poliadenina en su extremo 3' y la poda de sus secuencias intrnicas
(splicing). Los ARNr y ARNt tambin tienen
que eliminar sus intrones, al ser sus genes, en la
mayora de los casos, tambin fragmentados.
Generalmente estos procesos se dan, temporalmente, en el orden indicado aunque, en algunos
GENTICA MOLECULAR
casos, ciertos intrones pueden completar su

poda antes de la adicin de poli(A).
Finalmente, algunos ARNm sufren un proceso de editado del ARN, proceso mediante
el cual se cambian, eliminan o insertan bases
antes de su traduccin.
4.1. Proceso de Adicin de una caperuza
(capping) en el extremo 5
Este proceso consiste bsicamente en la

adicin de un residuo de 7-metil guanosina, en
el extremo 5', sobre el primer nuclesido trifosfato procedente de la transcripcin, que se
realiza por pasos. En primer lugar se produce la
adicin de un residuo nucleotdico de guanina,
con enlace 5'-5', realizada por una enzima nuclear, la guanidil transferasa. La reaccin podra
resumirse como sigue:
Este residuo de guanina adopta una orientacin inversa a la de los dems nucletidos,
bloqueando el extremo 5'. sta sera la estructura cap, sobre la cual se van a generar metilaciones que establecern distintos tipos de
cap (resumidos en la fig. 14.11).
Si sobre la guanina de este nucletido incorporado postranscripcionalmente se incorpora
un grupo metilo en N7 (reaccin catalizada por
la enzima guanina-7-metil transferasa), se
origina la caperuza bsica, denominada cap 0,
que se encuentra en todos los ARNm
eucariticos (y es la caperuza tpica de los eucariotas unicelulares).
Sobre cap 0 pueden realizarse nuevas
metilaciones del transcrito. As, puede ocurrir
una segunda metilacin en el C2' de la ribosa
del primer nucletido procedente de la transcripcin (que ahora sera el segundo nucleti
do del transcrito), llevada a cabo por otra enzi-
193
ma (2'-O-metil transferasa), originndose cap

1. Esta caperuza es la predominante en todos
los eucariotas, excepto los unicelulares. En
algunos eucariotas superiores y siempre que la
base de este residuo sea una Adenina puede
complicarse este cap 1, adicionndose,
adems, un nuevo grupo metilo en N6 de esta
base.
Finalmente, en algunas especies, sobre su
estructura de cap 1 se produce una metilacin
en el azcar del siguiente nucltido, dando lugar
a un tipo de caperuza denominado cap 2.
Todas las molculas de ARNm de cualquier
eucariota presentan caperuza y en cada
organismo la proporcin de los diferentes tipos
de cap es una caracterstica propia, no conocindose si la caperuza de cada ARNm es invariable o pueden coexistir diferentes tipos de
cap para un mismo mensaje. Su funcin puede tener que ver con la proteccin en el ncleo
del mensaje, frente a nucleasas, hasta completarse el procesamiento, aunque tambin puede
tener implicaciones en el transporte del mensaje
desde el ncleo al citoplasma.
Adems de la metilacin implicada en el
capping, en los eucariotas superiores puede
darse una bajsima tasa metilacin en N6 de la
Adenina en la secuencia interna de los ARNm,
aproximadamente un residuo metilado cada
1.000 bases (1-2 metiladeninas en cada ARNm),
desconocindose el significado de la misma, ya
que no es una caracterstica obligatoria y
algunos ARNm no la presentan.
4.2.
ADICIN
DE
UNA
POLIADENINA EN EL EXTREMO 3'
COLA
DE
La mayora de los ARNm eucariticos

presentan una cola de poli(A), de
aproximadamente unos 200 residuos, en su
extremo
3'-OH,
aadida
postran
seripcionalmente en una reaccin que
comporta dos pasos: en primer lugar
una riboendonucleasa produce una rotura
en el transcrito en una regin del trailer entre 11 a 30 nucletidos ( dependiendo de los casos) hacia 3' de la secuencia
194
GENTICA
Fig. 14.11. Caperuzas en el ARNm eucaritico.
GENTICA MOLECULAR
AAUAAA, encontrada en todos los ARNm

poliadenilados. Parece, pues que esta secuencia
acta de gua en el corte. A continuacin, sobre
el nuevo extremo 3'-OH generado, la enzima
poli(A) polimerasa, va aadiendo los
nucletidos de Adenina, hasta completar la cola.
Sobre ella se ancla una protena, denominada
PABP (siglas de poly(A)-binding protein),
necesaria para que la cola ejerza correctamente
su funcin. Aunque sta no est an totalmente
aclarada, diversas evidencias parecen indicar
que ejerce, por una parte, una funcin de
proteccin del mensaje contra la degradacin y,
por otra, parece ser importante para que se
produzca una correcta iniciacin de la
traduccin. Casi todos los ARNm citoplasmticos poseen cola de poli(A). Una notable
excepcin la constituyen los ARNm para las
protenas histnicas, carentes de poli(A), sin que
se conozcan las causas o los aspectos de su
funcionamiento que hayan condicionado este
hecho.
4.3.
PROCESO DE PODA DE
SECUENCIAS INTRNICAS
(SPLICING)
Como ya se ha indicado, debido a la naturaleza fragmentada del gen eucariota, se origina

una transcripcin completa de ARN compuesto
de exones e intrones (ARNhn), lo que requiere
su procesamiento en orden a eliminar los intrones del ARN y empalmar los exones. A este mecanismo se le denomina splicing e implica las
roturas en las regiones de conexin intrn-exn
y la formacin de nuevos enlaces exn-exn.
En las dos ltimas dcadas se han realizado
numerosas investigaciones tendentes a aclarar
este fascinante proceso, habindose encontrado
varias modalidades de splicing, que han
establecido una clasificacin de los intrones en
dos grupos, I y II, segn la modalidad de poda
que adopten, crculo o lazada, respectivamente.
Incluso en el contexto del estudio del proceso de
splicing se llev a cabo el descubrimiento de los
ARN catalticos, que sern tratados a lo largo de
esta explicacin. Veamos a continuacin los
mecanismos principales de splicing:
195
FIG. 14.12. Secuencias consenso en un intrn.
Mecanismo general enzimtico. El mecanismo general de splicing, comn a todos los

transcritos de pre-ARN nucleares de los eucariotas superiores, es un proceso en el que interviene un complejo aparato enzimtico denominado spliceosoma, compuesto de ribonucleoprotenas (RNPs) que, con la ayuda de una serie
de secuencias gua en el ARN, va realizando las
reacciones necesarias para la eliminacin intrnica. Para la explicacin del proceso nos centraremos en un intrn tipo flanqueado por sus
dos exones, tal como se muestra en la figura
14.12. Las guas en el ARN son tres cortas
secuencias consenso, denominadas secuencia
consenso izquierda (GU), secuencia consenso
derecha (AG) y secuencia consenso central
(PyNPyPyPuAPy, aunque muy frecuentemente
la secuencia sin ambigedades es UACUAAC)
que ayudan a asegurar la absoluta especificidad
del proceso de corte y empalme que realizar el
spliceosoma, consistente en reacciones de transesterificacin. La figura 14.13 resume el proceso. Los ARN de las ribonucleoprotenas que
componene el spliceosoma son de importancia fundamental para el reconocimiento de las
secuencias consenso. Se trata de ARNsn (nucleares pequeos), denominados U y se han
aislado 6 diferentes ARNsn asociados a protenas formando las ribonucleoprotenas del spliceosoma (desde RNP-U1 a RNP-U6). UI presenta una secuencia, en su extremo 5', complementaria de la secuencia consenso izquierda del
intrn, por lo que dirige a la fraccin RNP que
lo contiene hacia ese lugar. U2 incluye
secuencias complementarias de la secuencia
consenso central (RNP-U2 se localiza en ese
punto). El reconocimiento de la secuencia
consenso derecha es an motivo de
controversia, pero parece que U5 se asociara a
ella, ms tarde, una vez formado el
acercamiento del extremo izquierdo intrnico
196
GENTICA
Fig. 14.13. Mecanismo de splicing mediado por el spliceosoma: complejo enzimtico que catoliza el proceso. Son ri
bonucleoprotenas complejas (ARNsn+protenas). Los ARNsn (Us) ayudan en los alineamientos de las secuencias
para los cortes y empalmes, por complementariedad de secuencias con regiones muy conservadas de los intrones. La
funcin cataltica la realizan las protenas del complejo.
GENTICA MOLECULAR
197
Fig. 14.14. Mecanismo de autosplicing del intrn del ARNr 35S en Tetrahymena (Intrn autocataltico = Ribozima).
Las reacciones de transesterificacin se indican con flechas discontinuas.
hacia la secuencia consenso central. Las subunidades U4-U6, junto a un conjunto de protenas,
serviran de estabilizantes del complejo. Entonces se origina una primera reaccin de transesterificacin entre el nucletido de Adenina altamente conservado de la secuencia consenso
central y el nucletido de guanina del extremo

izquierdo, con la formacin de un enlace 2'-5' y,
a continuacin, una segunda transesterificacin
une los dos extremos exnicos mediante un
enlace tpico fosfodister (3'-5'), quedando el
intrn libre y formando una lazada.
198
Autosplicing. En los primeros aos

ochenta el grupo de T. Cech y S. Altman realizaron un importante descubrimiento: analizando
el mecanismo de poda del intrn (perteneciente
al grupo I de intrones) del ARNr 26S, a partir de
su precursor 35S, en el protozoo ciliado
Tetrahymena descubrieron que la reaccin
poda realizarse in vitro de modo autnomo: el
intrn se escinde, los dos exones se ligan y todo
ello sin el concurso de ninguna enzima, entendida como protena. nicamente se requiere
como cofactor un nucletido de guanina (GTP,
GDP o GMP) e incluso simplemente guanosina.
Este ltimo requisito implica que se requerira
G-OH, pero no energa. La reaccin se muestra
en la figura 14.14. La idea de que toda actividad
enzimtica implicaba a una protena, se cambi
sustancialmente. Hasta ese momento se haba
credo que slo las protenas con sus variadas
estructuras y grupos podan crear los centros
activos necesarios para catalizar reacciones
enzimticas. Evidentemente eso es as, pero el
ARN tiene tambin esa potencialidad, o mejor
dicho, determinadas conformaciones del mismo,
como la que adopta el intrn cataltico de
Tetrahymena. A los ARN con capacidad enzimtica se les denomin ribozimas y sus descubridores recibieron el Nobel en 1989. Desde
1982 hasta la actualidad se han descubierto
otros muchos intrones catalticos, tanto de tipo I
como II (desde diversos intrones de genes de
mitocondrias y cloroplastos hasta intrones de
genes de virus y bacterias).
Existen otras modalidades especiales de
eliminacin de intrones, como la que sufren los
ARM que adoptan, en el estado inmaduro (an
con su intrn) una estructura que recuerda a su
forma activa, la cual parece ser necesaria para el
correcto splicing del intrn (splicing dirigido por conformacin) que se realiza por enzimas proteicas. Tambin se han descrito mecanismos, para algn gen mitocondrial, en los
que la propia secuencia intrnica es el gen de la
enzima que lo poda, As, primero se traduce el
gen del intrn y su protena lo eliminara. Finalmente se han descrito mecanismos de splicing alternativo para algunos genes, que sern
tratados en el contexto de la regulacin.
GENTICA
4.4. EDITADO DEL ARN
A finales de los 80 se descubri otro tipo de

procesamiento del ARN denominado editado,
por el que la secuencia nucleotdica es cambiada
en algunas de sus bases. El cambio puede ser la
sustitucin de bases o la insercin/delecin de
bases. El editado es muy frecuente en los ARN
de mitocondrias y cloroplastos de plantas (editado por sustitucin) y diversos animales parsitos (Tripanosoma, entre otros; editado por insercin/delecin), pero tambin lo sufren algunos ARN de genes nucleares de diversos
eucariotas. El editado puede llegar a cambiar
sustancialmente la secuencia del transcrito. Resultan an ciertamente controvertidos los procedimientos y finalidad del editado. En algunos
casos puede estar en conexin con mecanismos
regulatorios y en otros con la adopcin de determinadas conformaciones activas, como ocurrira
con el editado de las molculas de ARNt.
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Takagaki et al. (1988): Separation and characterization of a poly(A) polymerase and a cleavage/specificity factor required for a pre-mRNA
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Wagner, E. G. H. y Fl rdh, K. (2002): Antisense
RNAs everywhere?, Trends in Genetics, 18 (5):
223-226.
Captulo
15 Cdigo Gentico
1.
Caractersticas Esenciales del Cdigo
2.
Desciframiento de la Clave Gentica

2.1. Utilizacin de Homopolmeros
2.2. Utilizacin de Copolmeros con Proporciones Nucletidas
Fijadas
2.3. Utilizacin de Polmeros de Secuencia Conocida
(Copolmeros con Repeticin)
2.4. Afinidad Entre Complejos de Transferencia
(Aminoacil-ARNT) y Tripletas Especificas
3.
La Traduccin
3.1. El ARN Transferente
3.2. El Ribosoma
3.3. Fases del Proceso de la Traduccin
4.
Universalidad del Cdigo Gentico
202
El cdigo gentico, el lenguaje de la vida, es

la clave donde se encuentran codificados todos
los procesos vitales genticos. Es el soporte de
la herencia y su conocimiento fue fundamental
para entender toda la sntesis proteica, en base a
la cual se llevan a cabo todos los procesos
metablicos de todos los seres vivos.
Una vez aceptado el modelo de Watson y
Crick de la doble hlice, demostrada la colinealidad y descubierto el ARNm, estaba claro
que la informacin contenida en el ADN (en sus
bases) pasaba a las protenas a travs de ese
intermediario, pero quedaba por desentraar la
clave del paso desde las bases a los aminocidos. Las preguntas centrales eran cmo con una
clave de cuatro letras (las cuatro bases) se
podan especificar 20 palabras (los 20 aminocidos) y cules eran las palabras de esa clave.
La naturaleza del cdigo gentico centr el esfuerzo de multitud de genticos en los aos
cincuenta y sesenta y el desciframiento de esa
clave ser lo que veamos a lo largo de la primera parte de este captulo.
1. Caractersticas esenciales del cdigo
Antes de comenzar a referir la experimentacin tendente a descifrar el cdigo debemos

resumir sus caractersticas generales.
Haba 20 aminocidos a especificar, luego
lo primero era pensar cmo desde un lenguaje
escrito con cuatro letras se llegaban a codificar
esos 20 aminocidos. Fueron Brenner y Crick
quienes dieron la respuesta, indicando que el
cdigo deba estar en tripletas de bases, que se
denominaron codones y cada codn especificara un aminocido. Evidentemente no poda
haber una correspondencia base-aminocido y
tampoco dobletes de bases serviran, al existir
nicamente 16 combinaciones diferentes (42).
Un cdigo en tripletas dara lugar a 64 palabras
diferentes (43) que, aunque ms que lo estrictamente necesario, resultara mucho ms simple
que con combinaciones de cuatro letras, que
sera el siguiente escaln.
Desde esta caracterstica se lleg a la idea
GENTICA
de que el cdigo era degenerado, en el sentido
Fig. 15.1. Especificacin de tres aminocidos (aa) en el

supuesto de un cdigo no solapado (arriba) y de un
cdigo con solapamiento de una base (abajo).
de que ms de un triplete especificaba un aminocido dado. Como veremos ms adelante al

descifrarse el cdigo, esto se demostr que era
as para 18 de los 20 aminocidos. Experimentalmente esta idea fue tambin demostrada por
Wittmann, en 1962, induciendo mutaciones de
sustituciones de bases por desaminacin con
nitritos (C U y A G) en el virus del mosaico del tabaco (TMV), donde encontr que la
serina y la isoleucina podan ser codificadas por
varias tripletas.
Brenner tambin indic que el cdigo deba
ser no solapante. A partir de un cdigo en
tripletas, si fuese solapante, las secuencias de
aminocidos en las protenas deberan tener
restricciones en las posiciones relativas de los
mismos y habra aminocidos que nunca podran encontrarse consecutivos. Fijmonos en el
ejemplo mostrado en la figura 15.1. En un
cdigo con solapamiento de una base (si el solapamiento fuese de dos bases las restricciones
seran an mayores), detrs del primer aminocido (Ile, en la secuencia indicada) slo podra
incorporarse en el polipptido un amino-
GENTICA MOLECULAR
cido cuya primera base del codn fuese una C,

con lo que, en las distintas protenas, siempre
estara detrs de Ile uno de los siguientes aminocidos: Leu, Pro, His, Gln o Arg (vase figura
del cdigo en la pgina 202). Buscando en las
secuencias de protenas que se conocan en
aquella poca no se encontraban estas restricciones en las posiciones entre aminocidos
consecutivos, lo que cabra esperar de un cdigo
no solapado. Otro argumento en contra del
cdigo solapante provino tambin de los estudios sobre induccin de mutaciones en TMV
(Wittmann y Fraenkel-Conrat), donde cada
mutacin puntual en el gen de la protena de la
cpsula slo afectaba a uno de los 158 aminocidos que la componan. En un cdigo solapado se afectaran aminocidos adyacentes. Conviene indicar que, aunque el cdigo no sea solapado para la secuencia de un gen, no debe
confundirse este hecho con la existencia de genes solapados; genes inmersos unos dentro de
otros con un desplazamiento de la pauta de lectura entre ellos, que pueden encontrarse en algunos virus (SV40, X174, etc.) en relacin
con un grado extremo de economa de material
gentico para la produccin del mayor nmero
posible de protenas virales.
Otra caracterstica del cdigo es que no tiene comas (cdigo sin comas). A finales de los
cincuenta Crick lanz esta propuesta, que vena
a decir que no existan signos de puntuacin
internos en la lectura, siendo sta continua. La
prueba de esta hiptesis la obtuvo el mismo
Crick y sus colaboradores (Brenner, entre otros)
trabajando con mutantes del locus rII del fago
T4. Indujeron mutaciones mediante naranja de
acridina, que actuaba originando inserciones y
deleciones de una sola base en el ADN (lo que
se conoce como mutaciones de cambio de la
pauta de lectura o de cambio de fase),
encontrando que tales mutaciones eran muy
severas y los genes mutantes nunca daban
productos funcionales, lo que cabra esperar de
una lectura continua, sin comas. El ejemplo
mostrado en la figura 15.2 ilustra lo anterior.
Adems, dentro de ese estudio, mediante el
mismo compuesto generaron, en los primeros
mutantes, mutaciones que contrarrestaban o
supriman los efectos de las primeras, restitu
203
yendo el fenotipo salvaje (conviene tener en

cuenta que el anlisis gentico de las calvas de
lisis lenta producidas por la reversin indicaba
que no eran idnticas a las salvajes originales).
Este tipo de mutacin es lo que se conoce como
mutacin supresora que era, en realidad, una
segunda mutacin (poda ser separada de la
primera por recombinacin) siendo, de nuevo,
compatible nicamente con una lectura continua. En la figura 15.3 se ofrece un ejemplo de
mutacin supresora. Aunque tal mutacin se
localiza muy prxima a la primera, conviene
indicar que esto no tiene que ser as siempre,
pudiendo localizarse a mayor distancia, delante
o detrs de la primera, aunque siempre en
sentido contrario. Si la primera mutacin es una
insercin (+), la supresora ser una delecin (-)
y viceversa; es decir, dos mutaciones del mismo
signo nunca revertan a salvaje. Sin embargo, en
el curso de su investigacin, encontraron que
tres mutaciones del mismo signo prximas entre
s revertan al fenotipo salvaje, lo que result ser
una prueba a favor de una clave en tripletas
(suponga sobre la secuencia salvaje de la figura
15.3 la ganancia o prdida de tres bases
consecutivas, lo que originara un aminocido
ms o menos en la secuencia del polipptido
salvaje, afectndolo sutilmente).
Por ltimo, estos experimentos de modo indirecto apoyaban la idea de degeneracin del
cdigo. Partiendo de 64 tripletas diferentes (43 =
64) si slo 20 tripletas tuvieran sentido y las
restantes 44 no codificasen nada, no habran
funcionado los experimentos con mutaciones
supresoras: la primera mutacin en la mayora
de los casos parara la sntesis proteica y
difcilmente funcionara la supresin (2.a mutacin).
2. Desciframiento de la clave gentica
El desciframiento de la clave consisti en la

asignacin del codn o los codones para cada
aminocido. Esta investigacin se llev a cabo
entre 1961 y 1964, fundamentalmente los
grupos de trabajo dirigidos por M. Nirenberg, S.
Ochoa, J. H. Matthaei y H. Khorana.
Con la tecnologa gentica actual hubiera
204
GENTICA
Fig. 15.2. Consecuencias genticas de una mutacin de alteracin de la pauta de lectura sobre una protena
(se representa slo un pequeo fragmento del gen y de la cadena polipeptdica) en el supuesto de un cdigo
sin signos de puntuacin internos (a) o con ellos (b).
GENTICA MOLECULAR
FIG. 15.3. Restitucin del fenotipo salvaje mediante una mutacin supresora (en realidad es una segunda
mutacin de cambio de pauta de lectura compensatoria de la primera).
205
206
sido una tarea relativamente fcil: secuenciar un

gen o su ARNm, determinar la secuencia de
aminocidos de su protena y asignar las tripletas; pero en los aos en que se realizaron esos
trabajos no exista tcnicamente esa posibilidad
y hubo que abordar el problema de un modo
mucho ms imaginativo.
Dos descubrimientos previos establecieron
las bases metodolgicas necesarias para afrontar
la investigacin: el primero de ellos ocurri en
1955 cuando el equipo de Ochoa consigui
aislar una enzima, la polirribonucletido fosforilasa, cuya funcin metablica en las clulas
bacterianas era degradar ARN pero que, in vitro
y con altas concentraciones de ribonuclesidos
difosfato, era capaz de realizar la reaccin
opuesta y fabricar ARN (vase esquema
superior).
A diferencia de la ARN polimerasa no necesitaba molde de ADN, incorporando los nucletidos al azar, aunque era dependiente de las
concentraciones relativas de los ribonuclesidos
para su incorporacin al polinucletido en
formacin. Ello quera decir que la probabilidad
de insercin de un ribonucletido especfico era
proporcional a la proporcin relativa de su
precursor respecto a los otros precursores
disponibles en la mezcla de reaccin. Esta propiedad fue determinante para todas las investigaciones posteriores.
El segundo descubrimiento, realizado por
Nirenberg y Matthaei en 1961, consisti en
conseguir un sistema de sntesis proteica in vitro: un medio acelular estable, derivado de E.
coli y desprovisto de sus mensajeros, pero con
todos los dems ingredientes biolgicos necesarios para la sntesis proteica (aminocidos,
ARNt, ribosomas, varias enzimas, etc.). En este
medio, el ARNm sinttico poda servir de
sustrato para la sntesis de polipptidos. Para
GENTICA
seguir la sntesis, uno de los aminocidos en

cada mezcla de reaccin se marcaba radiacti
vamente (14C).
Con estas premisas metodolgicas, los grupos de trabajo realizaron una experimentacin
con ARNm sintticos, conducente a la asignacin de tripletas a aminocidos, que podra resumirse en cuatro apartados:
1. Utilizacin de homopolmeros.
2. Utilizacin de copolmeros con pro
porciones nucleotdicas fijadas.
3. Utilizacin de polmeros de secuencia
conocida (copolmeros repetidos).
4. Afinidad entre complejos de transferencia (aminoacil-ARNt) y tripletas
especficas.
2.1. UTILIZACIN DE HOMOPOLIMEROS
En 1961, Nirenberg y Matthaei, sintetizaron

un primer homopolmero, cido poliuridlico o
poli(U), utilizando la enzima de Ochoa y como
nicos precursores los nuclesidos de Uracilo
(vase esquema inferior).
Incorporando este ARNm poli-U a su sistema in vitro determinaron qu aminocido se incorporaba en el polipptido sintetizado. Afortunadamente, el medio acelular era tan rico en
magnesio que no requera codones de iniciacin
para la sntesis proteica. Para seguir esa incorporacin marcaban radiactivamente uno de los
20 aminocidos del sistema in vitro y realizaban
una batera de experimentos, en cada uno de los
cuales el aminocido marcado era diferente.
Esta forma de operar fue la tnica general para
rastrear los aminocidos incorporados a los polipptidos en toda la experimentacin subsi-
GENTICA MOLECULAR
guiente, por lo que deber entenderse as, en

este y los siguientes apartados, aunque no se relate de nuevo en cada caso. El polipptido sintetizado result ser polifenilalanina.
Suponiendo un cdigo en tripletas, hicieron
la primera asignacin de un codn: UUU
codificaba fenilalanina:
Del mismo modo, encontraron que poli-C

fabricaba poliprolina y poli-A sintetizaba poli-
lisina, estableciendo las siguientes asignaciones

codnicas:
Poli-G no sirvi de sustrato para la traduccin

debido, probablemente, a que se cerraba sobre s
mismo y no enganchaba en el ribosoma, por lo
que los homopolmeros sirvieron para asignar
tres de las cuatro tripletas de bases iguales.
2.2.
UTILIZACIN DE COPOLMEROS CON

PROPORCIONES NUCLEOTDICAS FIJADAS
Aprovechando las propiedades de la enzima

polirribonucletido fosforilasa, los grupos de
Nirenberg, Matthaei y Ochoa se dedicaron a la
sntesis de copolmeros con proporciones nucleotdicas fijadas. Segn las proporciones relativas de precursores (5:1, 3:1) se obtienen mensajes sintticos en los que se puede calcular las
proporciones esperadas de codones y hacer una
asignacin estadstica de aminocidos, de
acuerdo con los porcentajes de stos que se obtienen en el polipptido sintetizado. En la figura
15.4 se esquematiza la experimentacin y sus
resultados para un copolmero, con precursores
en proporciones 5CDP:1ADP (de ahora en adelante nos referiremos a los ribonuclesidos difosfato y a los ribonuclesidos del ARNm nom-
207
brndolos, resumidamente, por sus bases). Con

esas premisas, aunque la insercin de un ribonu
cletido en la molcula del ARNm sinttico se
realiza al azar, la probabilidad de ocupar cada
posicin vendra determinada por su proporcin
en la mezcla de reaccin: la probabilidad de
cada nucletido de Citosina es 5/6 (de cada 6
precursores 5 seran C) y la de cada nucletido
de Adenina es 1/6 (de cada 6 precursores 1 sera
A), pudiendo establecerse, estadsticamente, la
probabilidad de cada tipo de tripleta en el mensaje sinttico, que sera el producto de las
probabilidades de sus bases. A modo de
ejemplo, la probabilidad de cada codn 2C: IA
sera 5/6 x 5/6 x 1/6 y hay tres codones posibles,
CCA, CAC y ACC pues debido a la polaridad
de los cidos nucleicos no es igual un codn 5'CCA-3' que uno 5'-ACC-3'. Al analizar los
aminocidos incorporados al polipptido y sus
porcentajes, se puede asignar a cada uno de
ellos un tipo de tripleta, ayudndose de los resultados de asignacin codnica para CCC y
AAA a prolina y lisina, respectivamente. Se
confirma, adems, la degeneracin del cdigo,
ya que algunos aminocidos deben estar especificados por ms de un tipo de tripleta. En concreto, el porcentaje de prolina se ajusta a la
suma de las proporciones del codn CCC y un
codn 2C: IA (57,9 + 11,6) y algo similar
parece ocurrir con la treonina (14 %), pero en
este caso para la suma de las proporciones de
codones 2C:1A y 2A:1C (11,6 + 2,3). El resto
de aminocidos se ajustan en sus porcentajes a
un solo tipo de tripleta. Despus de realizar
numerosos experimentos con copolmeros con
diferentes combinaciones de precursores (hasta
los cuatro ribonuclesidos difosfato) y
diferentes proporciones nucleotdicas, se lleg a
establecer la asignacin a tipos de tripletas para
los 20 aminocidos, pero mediante esta
metodologa no era posible determinar las
secuencias especficas de las tripletas.
2.3.
UTILIZACIN DE POLMEROS DE SECUENCIA

CONOCIDA (COPOLMEROS CON REPETICIN)
El grupo de H. G. Khorana desarroll una

tcnica consistente en ensamblar largas molculas de ARNm por unin qumica de secuencias
cortas que replicaba primero muchas veces.
208
GENTICA
Fig. 15.4. Ejemplo de un experimento tpico con copolmeros de proporciones nucleotdicas fijadas. En este
caso se ha utilizado una relacin 5C:IA. Para todos los clculos se utilizan, realmente, las frecuencias relativas
respecto a la tripleta en mayor proporcin y respecto al aminocido en mayor porcentaje. Los datos se han
mantenido en porcentajes para facilitar la comprensin del experimento.
Como se indica en la figura 15.5, a partir de un

dinucletido se obtienen dos codones, tres codones para los mensajes a partir de trinucletidos y cuatro codones para los tetranucletidos
que se repiten en el ARNm fabricado. Cuando
se traducan estos mensajes se consignaban los
aminocidos incorporados en los polipptidos

(varios polipptidos para cada ARN dependiendo del lugar en el que se inicie la sntesis). En la
tabla 15.1 se indican resultados de incorporacin de aminocidos mediante esta metodologa.
Para establecer las asignaciones especficas
GENTICA MOLECULAR
209
Fig. 15.5. Tripletas producidas en copolmeros fabricados a partir de di-, tri- y tetranucletidos,
segn como se desplace el inicio de la sntesis.
Tabla 15.1. Algunos ejemplos de polmeros de secuencia conocida y los aminocidos (Aas) incorporados en cada caso. La
asignacin que se ofrece es la correcta, pero para ello es necesario combinar estos resultados con los de la experimentacin
con copolmeros de proporciones nucleotdicas fijadas (ver explicacin en el texto)
210
GENTICA
que se muestran sera necesario combinar los resultados de di-, tri y tetranucletidos entre s y/o
con los obtenidos a partir de la experimentacin
con copolmeros de proporciones nucleotdicas
fijadas. Por poner unos ejemplos del procedimiento que se sigui, fijmonos en el resultado
del experimento marcado como 1 en la tabla
15.1. Los codones ACA y CAC especifican
treonina e histidina, pero no se puede determinar cul a cada uno. Si volvemos a los datos de
la figura 15.4, vemos que, de los dos aminocidos, la treonina es el nico que se asigna a un
codn 1C:2A (adems de uno 2C:1A). Si la
histidina slo se especifica con un codn 2C:1
A, entonces el codn CAC ser de histidina y
ACA de treonina. Un poco ms complicada
resulta la asignacin de codones a senna y
leucina, a partir de los datos combinados de la
tabla 15.1. A partir del experimento 2 no se
puede conocer la asignacin especfica, pero si
vemos el experimento 3 y el 5 se puede llegar a
concluir que CUU es codn de leucina, pues es
el nico comn a ambos experimentos y leucina
el nico aminocido tambin comn en ambos.
Una vez fijado ese codn para leucina, tanto en
el experimento 5 como en el 3, entonces UCU
sera el codn de senna pues es comn a los
experimentos 2 y 3 y tambin senna lo es. Por
tanto, el codn de fenilalanina es UUC y leucina
vendra adems especificada por el codn CUC
(experimento 2).
Con todo este ingenioso procedimiento se
hicieron nuevas asignaciones y se reafirmaron
otras ya establecidas. Adems, mediante la utilizacin de los copolmeros de los tetranucletidos en los experimentos marcados en la tabla
15.1 como 6 y 7, que no incorporaban ningn
aminocido, se indic la existencia, entre sus
tripletas, de codones de terminacin, al menos
uno por cada secuencia (los subrayados), al no
compartir ningn codn.
2.4.
AFINIDAD ENTRE COMPLEJOS

DE TRANSFERENCIA (AMINOACIL-ARNT) Y
TRIPLETAS ESPECFICAS
Al tiempo que se iban realizando los experimentos del apartado anterior, el grupo de Niren
berg desarroll una metodologa de fijacin de

aminoacil-ARNt a minimensajes, en un ribosoma. Un minimensaje o mini-ARNm
consista en una secuencia de tres nucletidos
(una tripleta) que, en el medio acelular se enganchaba a los ribosomas y diriga la unin del
ARN transferente cargado con el aminocido
correspondiente. En cada ensayo el procedimiento era el siguiente: en el laboratorio se sintetizaba un mini-ARNm, se marcaba radiactivamente el aminocido (aa*) que se quera testar y se produca el correspondiente aa*-ARNt.
Todo ello se incorporaba al medio acelular y,
despus de un tiempo, se incubaba todo en un
filtro de nitrocelulosa que retiene a los ribosomas y deja pasar a otros componentes ms pequeos como el aa*-ARNt. Si no se retena la
radiactividad en el filtro es que el minimensaje
no haba dirigido la fijacin al ribosoma del
transferente con el aminocido radiactivo. Por el
contrario, si la radiactividad quedaba retenida
en el filtro era porque se haba producido el
complejo minimensaje-aa*-ARNt en el ribosoma. En este caso, la secuencia de ese minimensaje se poda asignar como codn del aminocido en cuestin (fig. 15.6).
Despus de casi cuatro aos de intensos
trabajos, el cdigo gentico fue prcticamente
descifrado, tal como lo conocemos hoy, transcurridos casi 40 aos. Los investigadores que
haban dirigido los trabajos recibieron en 1968
el Premio Nobel, salvo Ochoa, que lo haba recibido nueve aos antes por sus trabajos acerca
de replicacin del ARN, en los que descubri la
enzima que hizo posible que el sueo de conocer la clave del lenguaje de la vida se hiciera
realidad.
En la figura 15.7 se muestra el cdigo, las
64 palabras y sus especificaciones. La manera
de ordenarlo fue sugerida por Crick y de ella se
extraen varias conclusiones que pasamos a explicar.
Una primera observacin muestra de modo
evidente la degeneracin, que vara para los
distintos aminocidos; desde un codn para
triptfano y metionina, hasta 6 codones para
leucina, serina y arginina, siendo lo ms frecuente dos, tres o cuatro codones por aminocido. Adems esta degeneracin sigue un pa-
GENTICA MOLECULAR
211
Fig. 15.6. Afinidad entre complejos de transferencia (aa*-ARNt) y tripletas especficas en sistemas acelulares
(Nirenberg): Para el mini-ARNm 5'-CUC-3', si se utiliza el transferente Leu*-ARNt en la reaccin, se fija
al ribosoma y todo el complejo queda inmovilizado en el filtro, observndose ah la radiactividad.
trn y, al examinar un conjunto de codones que

especifican un aminocido, a menudo se destaca
que las dos primeras bases son idnticas y
difieren en la tercera (por ej.: GCU, GCC, GCA
y GCG son los cuatro codones que especifican
alanina). Esto llev a Crick a postular su
hiptesis del tambaleo y a establecer unas reglas
de emparejamiento de bases codnanticodn. Conviene, en este punto, introducir
en esta discusin al ARN transferente, la
molcula adaptadora de Crick. Los ARN
transferentes, que se vern ms en detalle un
poco ms adelante, llevan en su bucle anticodnico la secuencia complementaria del codn, el anticodn, y en su extremo 3'OH el
aminocido correspondiente. En la estructura

aminoacil-ARNt, el ARNt es el que reconoce el
codn, no interviniendo el aminocido que
porta. As, tratando cistena-ARNt Cys con hidruro de Nquel que convierte la cistena (unida
a su ARNt) en alanina, sin afectar a la secuencia
anticodnica (Cys) del ARNt (vase esquema), la
protena sintetizada contiene alanina en los
lugares donde deba haber cistena, indicando
que los aminocidos se sitan en las posiciones
que especifican las molculas adaptadoras

de ARNt. Ese lugar de especificidad
para el reconocimiento de los codones del
212
GENTICA
Fig. 15.7. El cdigo gentico.
ARNm es el anticodn, tripleta complementaria

y antiparalela a las bases del codn. Segn su
hiptesis, Crick propuso que las dos primeras
bases codnicas son ms importantes que la
tercera en la atraccin del aa-ARNt o, lo que es
lo mismo, que un mismo aa-ARNt puede incorporar su aminocido en la traduccin en respuesta a varios codones distintos. Tal como se
muestra en la figura 15.8, el tambaleo se produce en la base que ocupa el extremo 5' del anticodn (la tercera base si se considera el apareamiento con la tercera base del codn o la primera base si se lee el ARNt desde 5'). Esta
relajacin en el apareamiento de bases es debida
a un ligero desplazamiento de ese nucletido
que puede formar puentes de hidrgeno no slo
con su complementario, sino con otros nucletidos distintos. Esto no es aleatorio, sino
que sigue unas reglas, propuestas por Crick, en
base a consideraciones moleculares de la estructura de las bases. Adems, el tambaleo permite, cinticamente, que la velocidad de sntesis
pueda realizarse a alta velocidad. Otra de las
consecuencias del tambaleo es el concepto
de economa de transferentes. As, se necesitara un menor nmero de transferentes distintos

para realizar la sntesis proteica. Su aplicacin
estricta supondra nicamente 30 tipos diferentes de ARNt, aunque estos nmeros son
algo mayores tanto en procariotas como en eucariotas, pero nunca se alcanzan los 61 transferentes que debera haber si el tambaleo no existiera. Segn las reglas especificadas (fig. 15.8),
para algunos aminocidos nicamente existira
un transferente (Phe, Arg, etc.) mientras para
otros existen varias especies moleculares que
contienen anticodones diferentes. El caso extremo vendra representado por los ARNt de
senna, con varias especies moleculares, tres en
lo que respecta a sus secuencias anticodnicas
(tabla 15.2), y una cuarta que difiere de las anteriores en otro lugar de la secuencia. Estos
ARNt alternativos se denominan isoaceptores
(aceptan el mismo aminocido).
Ms recientemente, el anlisis del patrn de
degeneracin del cdigo ha evidenciado el
concepto de ordenacin del cdigo, que viene
a decir que los aminocidos qumicamente
GENTICA MOLECULAR
213
Fig. 15.8. Emparejamiento bases segn las reglas del tambaleo. En la parte superior se muestra un ejemplo ilustrati
vo en el que se observa que, en el ARNt, en el extremo S' del anticodn, la G puede adoptar dos posiciones de tamba
leo, apareando con tripletas que tengan U o C en la tercera posicin codnica (extremo 3').
Tabla 15.2. Especies moleculares de ARNtSer de acuerdo con las reglas del tambaleo
214
relacionados presentan tripletas relacionadas.

As, los codones de los aminocidos cidos
(Asp y Glu) empiezan por AG, los de los aminocidos aromticos muestran una U en la primera posicin, los aminocidos hidrofbicos
muestran en sus codones una pirimidina en la
segunda posicin, y lo contrario ocurre con la
segunda posicin de los aminocidos bsicos,
donde se fija siempre una purina. Por otra parte,
si las dos primeras posiciones estn ocupadas
por G, C o ambas se especifica el mismo
aminocido y, por el contrario, si las dos primeras posiciones estn ocupadas por A o U o
ambas, la identidad de la tercera base (Pu o Py)
define el aminocido. No hay ninguna duda de
que la degeneracin del cdigo (sobre la 3.a
base) evita que la accin de muchas mutaciones
trascienda al polipptido pero tambin la
ordenacin del cdigo ejerce una accin tamponadora del efecto, sobre la protena, de muchas mutaciones (sobre todo en la 2.a base),
pues el cambio de un aminocido se hace hacia
otro de propiedades qumicas parecidas.
Como corolario de este anlisis del cdigo
mostrado en la figura 15.7, se observan tres codones que no especifican para ningn aminocido. Son los codones de terminacin, tripletas
que no especifican ningn aminocido. Son
seales de parada de la traduccin y tambin se
denominan codones sin sentido porque no designan ningn aminocido. Ya hemos visto que,
de los experimentos con polmeros de secuencia
conocida (copolmeros repetidos), algunos
resultados negativos de incorporacin de
aminocidos indicaban la existencia de tripletas
de terminacin. La primera que se descubri en
1965 (Brenner) fue UAG, denominada mbar.
Su desciframiento se realiz a partir de
mutaciones de la protena de la cabeza del fago
T4. Todas ellas originaban secuencias de
aminocidos ms cortas que la salvaje (truncamiento de la protena por parada de la traduccin). El anlisis de los aminocidos que se insertaban (Gln, Gly, Glu, Tyr, Trp, Ser) en mutaciones supresoras de las anteriores (restituyen
secuencia salvaje) permiti deducir (aunque no
era tan obvio, si no se acompaara del
conocimiento de asignacin de tripletas que ya
se tena) que el codn mutante original era
GENTICA
UAG. A continuacin se descubrieron los otros

dos codones, UGA (palo) y UAA (ocre).
Cuando se produce una mutacin hacia un
codn de parada se denomina mutacin sin
sentido, aunque tambin se indican con el
nombre del codn de parada que se trate y a sus
mutaciones supresoras se las denomina supresores de mbar, palo u ocre.
3. La traduccin
La traduccin del ARNm es la polimerizacin biolgica de aminocidos en cadenas polipeptdicas, de acuerdo con las especificaciones
contenidas en su secuencia de bases (que provienen de la secuencia del gen que se trate),
mediante el concurso de las molculas adaptadoras (ARNt) y todo ello inmerso en una compleja maquinaria de sntesis cuyo elemento determinante es el ribosoma (junto a otros factores
proteicos adyuvantes para la sntesis).
Antes de entrar en detalles del proceso deberemos detenernos en la estructura del ARN
transferente y del ribosoma, dos elementos
esenciales en el proceso de la traduccin.
3.1. EL ARN TRANSFERENTE
Las molculas de ARNt, debido a su tamao, estabilidad e importancia biolgica se encuentran entre los ARN mejor conocidos y caracterizados. Son las encargadas de adaptar el
aminocido correcto a los codones especficos.
Fue Crick, en 1957, quien postul esa funcin
adaptadora que se confirm poco despus.
En 1965, el grupo de R. Holley dio a conocer la secuencia completa del ARNtAla (el superndice se refiere a especificidad del ARNt
por el aminocido, no necesariamente al aminocido que lleva incorporado, que se indicara
como aa-ARNt) aislado de levadura y, desde
entonces, se han caracterizado infinidad de estas
molculas, encontrndose que su estructura es
muy similar en todos los organismos.
Una molcula de ARNt est formada por
75-90 nucletidos y su secuencia presenta
varios nucletidos especiales con bases raras:
GENTICA MOLECULAR
cido inosnico (I) y metil inosnico (Im); cido

metil guamlico (Gm) y dimetil guanflico (Gm),
cido pseudouridilico ( ) y cido ribotimidlico (T), que se incorporan como consecuencia
del editado de la molcula transcrita. El anlisis
de la secuencia indujo a Holley a proponer la
conocida estructura bidimensional en hoja de
trbol con ciertas regiones de emparejamiento
interno, que se muestra en la figura 15.9a, donde
se destacan, adems, varias regiones de
importancia funcional en la molcula. Como los
tripletes para alanina eran GCU, GCC y CGA,
Holley busc dentro de la molcula y encontr
la secuencia anticodnica CGI en uno de los
bucles al que llam anticodnico. Hoy da se
conoce que esta estructura plana en hoja de
trbol no es la verdadera conformacin de la
molcula funcional, sino que sta presenta una
estructura tridimensional en hoja de trbol
plegada en forma de L, que se muestra en la
figura 15.9b. Aunque todos los ARNt comparten
muchos aspectos estructurales, cada uno tiene
una forma tridimensional nica que permite su
reconocimiento por la sintetasa correcta para su
unin al aminocido que viene especificado por
la secuencia anticodnica. Parece que las bases
raras tienen bastante que ver en esos
plegamientos inusuales y especficos y es en esa
forma como cada ARNt se carga con su
aminocido correspondiente, en una reaccin
catalizada por las enzimas aminoacilARNt
sintetasas. El nmero de sintetasas diferentes
tendra que ser, como mnimo, igual al nmero
de aminocidos diferentes y parece que es as.
3.2. EL RIBOSOMA
Es uno de los orgnulos ms importantes y

complejos de la clula, tanto procariota como
eucariota, habiendo sido ampliamente caracterizado en su estructura en ambos tipos de organismos. La partcula completa (70S en pro- y
80S en eucariotas) est compuesta por dos subunidades, una grande y otra pequea, y cada una
de ellas, a su vez, est compuesta por una o ms
molculas de ARN y numerosas protenas
ribosmicas. Las caractersticas esenciales de
215
estos orgnulos y las diferencias entre procariotas y eucariotas se muestran en la figura

15.10. A pesar de este conocimiento tan exhaustivo, algunas particularidades de la funcin
de este orgnulo, permanecen an desconocidas,
lo que no debe sorprendernos, dada su enorme
complejidad (en bacterias un ribosoma tiene un
peso molecular de 2,5 x 106 daltons).
A nivel funcional, dentro de sus subunidades, se distinguen dos lugares: el sitio P o peptidil, y el sitio A o aminoacil. El sitio A es el lugar de entrada de cada aminoacil-ARNt. En el
sitio peptidil se localiza el ARNt que va portando la cadena polipeptdica en formacin. La figura 15.11 muestra un esquema ilustrativo de
ambos lugares, indicndose cmo se realiza una
incorporacin aminoacdica a la cadena en
crecimiento. Cada nuevo aminocido se incorpora a la cadena en crecimiento mediante
transferencia de la cadena polipeptdica al nuevo aminoacil-ARNt, con la formacin de un
enlace peptdico. El ARNt descargado de la cadena es liberado del sitio peptidil mediante movimiento del ribosoma para cubrir una nueva
tripleta del ARNm, pero el proceso de sntesis
del polipptido es ms complejo y ser tratado
en detalle en el siguiente apartado.
3.3. FASES DEL PROCESO DE LA TRADUCCIN
Igual que hemos visto para la transcripcin,

el proceso de la traduccin puede subdividirse
en tres fase principales: iniciacin, elongacin y
terminacin. Todas ellas se esquematizan en las
figuras.
- Iniciacin. Esta fase se realiza por pasos
que se esquematizan en la figura 15.12. En la
iniciacin de la traduccin se requiere la
subunidad pequea del ribosoma, la molcula
de ARNm, un ARNt iniciador especfico cargado, GTP, Mg++ y, al menos, tres factores de
iniciacin (IFI, IF2 e IF3) proteicos. stos no
forman parte propiamente del ribosoma pero se
necesitan para incrementar la afinidad en la
unin de los diferentes elementos. En los procariotas el primer aminocido de cualquier
polipptido es N-formil-metionina (AUG) que
216
GENTICA
Fig. 15.9. Estructura de un ARNt: a) Estructura secundaria en hoja de trbol y b) estructura funcional
tridimensional en hoja de trbol plegada en forma de L.
GENTICA MOLECULAR
217
Fig. 15.10. Componentes de los ribosomas de procariotas y eucariotas.
se incorpora mediante un ARNt iniciador

(ARNtfMet). Su anticodn es idntico al del
transferente para metionina intercalar en el polipptido, pero va, sin embargo, cargado con el
aminocido modificado. La subunidad pequea
se une a IF3 y esta unin favorece el anclaje de
la subunidad pequea al ARNm, en la regin
lder (cubriendo tambin al codn de iniciacin). La secuenciacin de numerosas regiones lderes en bacterias y sus lagos ha demostrado que unas cuantas bases (~7) antes del
codn de iniciacin se encuentra una secuencia
altamente conservada (AGGAGGU), denominada secuencia de Shine-Dalgarno. Esta regin
es complementaria del extremo 3' del ARNr 16S

de la subunidad pequea del ribosoma (fig.
15.12, recuadro) y la unin complementaria de
ambas secuencias fija estos primeros elementos
del complejo de iniciacin. Por otra parte, el
factor de iniciacin IF2 se une a GTP y al ARNt
iniciador guindolo hacia el sitio P de la
subunidad pequea donde se localiza el codn
de iniciacin. Este paso es muy importante pues
ajusta la fase de lectura para que se lean todos
los codones posteriores del ARNm. Toda esta
estructura es el complejo de iniciacin que se
combina con la subunidad grande del ribosoma,
suministrando la energa necesaria la hi-
218
GENTICA
Fig. 15.11. Esquema que representa la incorporacin de un aminocido a la cadena polipeptdica en formacin.
Para una mejor comprensin se han numerado algunos codones y se han especificado con sus bases los codones y
anticodones de las posiciones internas al ribosoma y las dos posiciones flanqueantes.
drlisis del GTP y liberndose los factores de

iniciacin (el factor IF1 parece tomar parte en el
reciclaje del ribosoma).
- Elongacin. En esta fase se requieren
factores de elongacin (EF-Tu, EF-Ts y FT-G)
proteicos y energa proveniente de la hidrlisis
de GTP. Los distintos pasos de esta fase se resumen en la figura 15.13. La fase comienza una
vez que se han ensamblado las dos subunidades
del ribosoma. Entonces se establece el sitio A
para la entrada de nuevas molculas de ARNt
cargadas. El ARNt iniciador se localiza en el
sitio peptidil y el factor de elongacin EF-Tu
unido a GTP (activado) facilita la entrada del
siguiente ARNt cargado en el sitio aminoacil.
La hidrlisis de GTP favorece esa unin del
ARNt al sitio A, liberndose entonces EF-Tu. El
factor EF-Ts coopera en la liberacin de TuGDP y tambin en la regeneracin del complejo
Tu-GTP.
El siguiente paso es la verdadera elongacin

de la cadena polipeptdica, llevada a cabo por la
enzima peptidil transferasa. Se rompe la unin
covalente del aminocido localizado en el sitio
peptidil (fMet, en este primer paso) y dicho
aminocido se conecta formando un enlace
peptdico al aminoacil-ARNt del sitio A. Como
resultado el ARNt localizado en A lleva ahora
dos aminocidos.
En ese momento antes de que pueda iniciarse otra elongacin se realiza la traslocacin: con el concurso del factor EF-G activado,
el ribosoma se mueve (se transloca) hacia el
extremo 3' del ARNm a una distancia equivalente a un codn, gracias a la energa suministrada por la hidrlisis de GTP. Este movimiento libera del ribosoma el primer ARNt (lo
saca del sitio P) y coloca al 2. transferente, con
los dos aminocidos colgados de su brazo
aceptor, en el sitio P, liberndose el EF-G-GDP
y quedando el sitio A libre. Sobre este sitio
GENTICA MOLECULAR
Fig. 15.12. Fase de iniciacin de la traduccin (las explicaciones se encuentran en el texto).
219
Fig. 15.13. Fase de elongacin de la traduccin (las explicaciones se encuentran en el texto).
GENTICA MOLECULAR
puede entrar ahora un nuevo aminoacil-ARNt

repitindose esta fase hasta completarse la sntesis del polipptido (hasta llegar a un codn de
parada). Cuando la fase de elongacin ha avanzado un poco y el extremo 5' del ARNm queda
libre puede engancharse otra subunidad pequea
y formar otro complejo de iniciacin. Esto se
puede realizar varias veces dando lugar a snteis
de protenas en polirribosomas.
- Terminacin (fig. 15.14): Cuando el
ribosoma, en su movimiento hacia 3' por el
ARNm coloca en su sitio aminoacil un codn de
parada (UAG, UAA o UGA) no hay ningn
aminoacil-ARNt normal que lleve el anticodn
para ninguno de ellos (el ribosoma lleva an en
su sitio P el ltimo transferente del que se engancha el polipptido formado en la fase anterior). El codn de terminacin del sitio A es reconocido por factores proteicos de liberacin (o
de terminacin), llamados RF1 y RF2 (activados con GTP). RFI reconoce a los codones
UAA y UAG y RF2 a los codones UAA y UGA
(un factor IF3 tambin ayuda en esta fase). Se
separa la cadena polipeptdica del ARNt, producindose la liberacin del transferente y disocindose las dos subunidades del ribosoma.
La traduccin en eucariotas es, en sntesis,
muy similar a la procariota, aunque sus ribosomas sean ms grandes y complejos. Como rasgos distintivos podramos mencionar que la
traduccin est separada de la transcripcin.
Adems el ARNm eucaritico tiene una vida
media ms larga que el de procariotas y eso
puede tener relacin con los procesos de proteccin que se realizan durante su procesamiento (tratados en el captulo anterior), lo que,
a su vez, tambin guarda relacin con su
transporte al citoplasma. No se han encontrado
en eucariotas secuencias similares a las de Shine-Dalgarno. Parece que la caperuza metilada
en su extremo 5', desempeara funciones
equivalentes. Uno de los aspectos ms relevantes se refiere a la iniciacin de la traduccin que
en eucariotas, aun teniendo el mismo codn
de iniciacin, AUG, su ARNt iniciador no
lleva formilmetionina, sino metionina. Finalmente, las fases seran equivalentes, aunque
221
con mayor nmero de factores proteicos y, con

toda probabilidad, ms complejos.
4. Universalidad del cdigo gentico
Desde su desciframiento hasta 1978, los

genticos haban llegado a la conclusin de que
el cdigo era universal, es decir las mismas palabras de la clave codificaban los mismos aminocidos en todos los seres vivos. Numerosas
evidencias experimentales parecan demostrarlo.
As, tomando los ribosomas y el ARNm de
reticulocitos de conejo y mezclndolos con
ARNt y otros componentes bacterianos de la
traduccin se obtuvo hemoglobina de conejo.
La tecnologa del ADN recombinante no habra
podido desarrollarse si el cdigo gentico no
fuera universal. De un modo muy general, genes
eucariticos se donan y expresan en bacterias;
las enzimas de trabajo de la Gentica
Molecular son procariotas y pueden realizar sus
funciones sobre ADN eucariota, etc.
En 1978, sin embargo, se comenzaron a ver
discrepancias al secuenciarse genes mitocondriales de protenas estructurales de levaduras y
de la especie humana. Desde ese momento se
examinaron secuencias de numerosos genomas
mitocondriales descubrindose que existen dos
tipos de desviaciones de la universalidad en la
lectura del cdigo realizada por los ARM mitocondriales. La primera es la mayor economa de
transferentes (22 en mitocondrias humanas), y
la segunda desviacin afecta a los propios codones, de manera que un codn se interpretaba en
el genoma mitocondrial de manera distinta que
en el nuclear (tabla 15.3). No slo las mitocondrias se apartan en algunas de sus palabras de
la clave general, sino que en 1985 se descubrieron otras excepciones al cdigo, esta vez en la
bacteria Micoplasma capricolum y en los genomas nucleares de algunos protozoos (Paramecium, Tetrahymena y Stylonichia). Con posterioridad se han aadido nuevos casos.
Podra extraerse alguna pauta en varias de
estas asignaciones en relacin con la clave normal: la alteracin slo implica un cambio de reconocimiento en la tercera posicin, la que se
afecta por el tambaleo, por lo que se ha querido
Fig. 15.14. Fase de terminacin de la traduccin (las explicaciones se encuentran en el texto).
GENTICA MOLECULAR
223
TABLA 15.3. Excepciones a la universalidad del cdigo gentico (Mt = Mitocondrias, L = Levaduras,
C = Candida, Ps = Plantas superiores, D = Drosophila, H = Hombre, My = Mycoplasma, P = Paramecium,
T = Tetrahymena, S = Stylonichia, E = Euplotes)
ver como una caracterstica evolutiva hacia una

mayor economa de transferentes.
De cualquier modo, si se tiene en cuenta la
enorme diversidad biolgica en la Tierra, puede
decirse que el cdigo es universal y las excepciones encontradas seran la confirmacin de
la regla de la uniformidad fundamental de las
bases moleculares de la vida.
Cattaneo, R. (1991): Different types of

messenger RNA editing, Annu. Rev.
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Nirenberg, M. W. y Leder, P. (1964): RNA
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Segr, G. (2000): The Big Bang and the
genetic code, Nature, 404: 437.
Captulo
de la expresin gentica
16 Regulacin
en procariotas
1.
Nociones Generales Acerca de la Regulacin Gentica
2.
El Opern lac de E. coli

2.1. Metabolismo de la Lactosa y Anlisis Gentico de los Genes
Estructurales
2.2. El Gen Regulador del Opern Lac (Lac1): Control Negativo
2.3. Represin Catablica del Opern Lac: Control Positivo
3.
El Opern trp: Modelo de Atenuacin

3.1. Atenuacin
226
Hemos establecido en los anteriores captulos cmo el ADN se organiza en genes que almacenan la informacin gentica. Hemos visto
cmo son esos genes y cmo se expresan transcribindose en ARN que, en la inmensa mayora
de los casos, se traduce a protenas. Entonces
surge una pregunta clave en gentica: Cmo se
regula la expresin de los genes? En cualquier
eucariota superior todas sus clulas tienen la
misma informacin gentica, pero resulta evidente que, espacial y temporalmente, todos sus
genes no se estn expresando a la vez. Por citar
unos simples ejemplos, los sistemas enzimticos
que produce una clula heptica son muy diferentes a los que produce una clula sangunea
precursora de eritrocitos, muchos genes implicados en el desarrollo de ciertas etapas de la
vida dejan de expresarse en otras, etc. Incluso
en un organismo unicelular, como una bacteria,
la produccin enzimtica no es continua y total,
sino que responde a las necesidades celulares.
El anlisis de las protenas de E. coli demuestra
que las concentraciones de los casi 4.000 polipptidos que fabrica varan enormemente. As,
para las protenas implicadas en la gluclisis
hay ms de 100.000 copias por clula, mientras
de otras las cantidades son mnimas. Aunque en
bacterias siempre hay un cierto nivel basal de
cualquier producto gnico, en determinadas circunstancias las cantidades de ciertas protenas
se incrementan enormemente para despus volver a su estado inicial.
Resulta, adems, evidente que los sistemas
reguladores de procariotas y eucariotas deben
ser diferentes, en tanto en cuanto que ambos tipos de organismos presentan profundas diferencias en muchas de sus caractersticas vitales.
Un procariota es un organismo vivo que crece y
se divide mientras las condiciones del medio
sean las adecuadas y mantenga un suministro
correcto de nutrientes. Sus sistemas regulatorios
deben estar adaptados para optimizar esas
tareas. En el otro extremo, un eucariota superior
con diferentes tejidos y sistemas no slo crece y
se reproduce; pasa por diferentes etapas de
desarrollo y sus clulas se diferencian y
especializan, etc. Todo ello conlleva profundos
cambios
morfolgicos,
fisiolgicos
y
bioqumicos que deben ser mantenidos, por
GENTICA
lo que los genes expresados en unas determinadas etapas y tipos celulares (y tambin en ellos
en cantidades diferentes) dejan de hacerlo en
otros, y viceversa. De esa manera, en la vida
adulta, determinados circuitos estn permanentemente cerrados, mientras otros siguen expresndose, pudiendo hablarse de una regulacin irreversible, mientras que cada tipo tisular
debe no slo realizar sus funciones especficas
sino hacerlo del modo adecuado en cada momento (regulacin reversible).
En resumen, resulta obvio que deben existir
mecanismos complejos que regulen la expresin
de los genes. De modo general, desde la
secuencia de nucletidos del ADN hasta la
protena, hay varios niveles en los que se puede
ejercer el control: transcripcin (y procesamiento en eucariotas), traduccin y funcionalidad de la protena. En este y el siguiente captulo abordaremos los distintos procesos de control
del flujo de la informacin gentica.
La regulacin del proceso de sntesis proteica podra hacerse a tres niveles: replicacin,
transcripcin y traduccin. Sea cual sea, el resultado final podra consistir en la ausencia de
sntesis proteica (cuando no se requiera) o la
sntesis (cuando sea necesaria).
De todos los posibles sistemas de regulacin, el que acta a nivel de la transcripcin es
el mejor conocido, sobre todo en bacterias, y
este modelo, evidentemente el ms simple,
puede servir de base para comprender la regulacin de la accin gnica en los sistemas complejos de los organismos superiores.
1.
Nociones generales acerca de la

regulacin gentica
La regulacin de la expresin de los genes,

como tantos otros procesos celulares que ya
hemos visto, se ha estudiado mucho ms profundamente en los organismos procariotas,
principalmente en E. coli.
Dentro de la clula bacteriana, como en
cualquier clula, algunos procesos deben realizarse ininterrumpidamente, por lo que la produccin de las enzimas implicadas en los mismos es independiente de los cambios en el me-
GENTICA MOLECULAR
dio. stas seran las enzimas constitutivas. Para

el resto de la produccin enzimtica celular s
tendra que darse regulacin y esto no es un
concepto nuevo. Desde mediados del siglo xx se
demostr en levaduras y bacterias que si en el
medio est presente la lactosa se producen determinadas enzimas de su metabolismo. Este
concepto se generaliz, hablndose de que las
bacterias se adaptaban al medio ambiente en
el que se encontraban, de manera que la presencia o ausencia de muchas enzimas estaba en relacin con los cambios medioambientales; se
tratara de enzimas adaptativas. Si un metabolito
(pongamos por caso, lactosa) no est presente
en el medio celular, no se necesitaran las enzimas necesarias para su degradacin. Slo en el
caso de existir el sustrato a degradar en el medio
se produciran las enzimas necesarias para su
degradacin, por lo que seran enzimas adaptativas. Se tratara, entonces, de un sistema enzimtico inducible (adaptativo, por supuesto) por la
presencia en el medio del producto a degradar.
Por el contrario, las enzimas de muchas rutas biosintticas (vase a modo de ejemplo la
ruta de biosntesis de triptfano mostrada en la
figura 12.5 del captulo 12) estaran en muy baja
concentracin cuando en la clula existen
cantidades adecuadas del producto final (triptfano, en el ejemplo mostrado), es decir, la
presencia del producto final (en grandes cantidades) podra actuar reprimiendo a su propio
sistema de produccin. stos seran los sistemas
enzimticos reprimibles.
De lo anterior se deduce que los sistemas
inducibles corresponderan a procesos del catabolismo y los reprimibles a procesos del anabolismo.
A partir de estas ideas generales, a comienzos de los 60 se estableci el primer modelo de
regulacin de la expresin gnica, al que se llam opern lac (porque su descubrimiento se
llev a cabo en el sistema lactosa de E. coli),
que veremos a continuacin.
2. El opern lac de E. coli
En 1961, Jacob y Monod propusieron un

modo de regulacin coordinada para el grupo
de genes que controla el metabolismo de la lac-
227
tosa en E. coli, el opern lac, estableciendo el

modelo del opern como la base para la
comprensin de los mecanismos regulatorios de
la expresin gentica en procariontes.
2.1.
METABOLISMO DE LA LACTOSA Y ANLISIS

GENTICO DE LOS GENES ESTRUCTURALES
La lactosa (azcar de la leche) es un disacrido perteneciente al grupo de los -galactsidos. E. coli puede utilizarla como fuente de
energa y de carbono despus de degradarla,
convirtindola en glucosa y galactosa (fig.
16.1). La enzima que lleva a cabo el proceso de
hidrlisis en sus dos monosacridos es lap-galactosidasa. Esta enzima, adems, cataliza la
transformacin de lactosa en alolactosa.
En 1946, Monod y Andureau encontraron
que la capacidad de metabolizar lactosa (fenotipo lac+) de E. coli estaba bajo control gentico
y, a su vez, se necesitaba la presencia de galactsidos en el medio (que actuaban como
inductores del sistema). As, en presencia de
lactosa, la concentracin de -galactosidasa se
incrementaba rpidamente, de 5-10 molculas
por clula a miles de ellas. A partir de entonces,
diversos investigadores, entre los que se
encontraban J. Lederberg, E. Wollman, A.
Lwoff, A. Pardee, F. Jacob, y el propio J.
Monod, fueron realizando numerosos descubrimientos genticos y bioqumicos acerca de
esa funcin bacteriana, y sentaron las bases
hasta culminar en el establecimiento del modelo
de regulacin del opern lac. Por una parte,
cuando se induca la produccin de -galactosidasa, tambin se induca la sntesis de otras
dos enzimas: la galactsido permeasa y la galactsido transacetilasa. La primera de ellas facilita la entrada de lactosa a la clula bacteriana
y la segunda, aunque no est directamente implicada en el metabolismo de la lactosa, y su
funcin fisiolgica permaneci oscura por mucho tiempo (incluso no se la consider en muchos de los trabajos originales que resumiremos
a continuacin), actualmente se cree que entre
sus funciones est la de proteger a otros
galactsidos (mediante acetilacin) de la ac-
228
GENTICA
Fig. 16.1. Metabolismo de la lactosa: la enzima -galactosidasa catalina la rotura del enlace glucosidico
originando galactose y lactosa.
cin degradativa de la -galactosidasa. Tres

genes controlaban la sntesis enzimtica: lacZ
(de ahora en adelante nos referiremos a l como
Z) especificaba la secuencia de aminocidos
de la galactosidasa, el gen lacy (resumidamente
Y) codificaba la permease y el gen lacA
(A) era el responsable de la sntesis de la
galactoside transacetilasa. Se aislaron y
caracterizaron muchas mutaciones lac que eliminaban la funcin de alguna de estas enzimas
(lacZ- , lacY- lacA-) y mediante cartografa gentica (a partir de conjugacin y transduccin
especializada, fundamentalmente) se estableci
que los tres genes estaban contiguos, en el orden
indicado: lacZ-, lacY- y lacA. stos eran los
genes estructurales del sistema lac. Adems, se
transcriban como un nico ARNm policistrnico y, cuando se provocaba la induccin
del sistema, la sntesis del ARNm preceda a la
de las enzimas implicadas. Todo ello indicaba
que los tres genes se regulaban de modo
coordinado y, adems, pareca que la regulacin
se llevaba a cabo a nivel de su transcripcin
(transcripcin en presencia de lactosa/no
transcripcin en ausencia de lactosa).
Regulando la produccin del ARNm se regula-
ra la produccin de todo el sistema. Este descubrimiento result muy importante ya que en

aquellos aos se tena la idea de que el inductor,
la pequea molcula de /3-galactsido pudiera
dirigir la activacin enzimtica por modificacin estrica de alguna especie de forma
inactiva de la enzima ya preexistente en el medio. Para abundar en la imposibilidad de este
hecho, Jacob y Monod encontraron un inductor
no fisiolgico del sistema lac, que, adems, no
poda ser sustrato de la degradacin; se trataba
de isopropil-/3-D-tiogalactsido (IPTG), cuya
estructura se muestra en la figura 16.2. Tal molcula no tena afinidad estrica por la molcula
de la -galactosidasa, luego la regulacin no
poda residir en la activacin de la propia enzima. Haba que buscar por otro lado al elemento
regulador.
2.2.
El Gen Regulador del Opern Lac (Lac1): Control

Negativo
Entre los mutantes que se recogieron, existan

unos muy especiales, que se denominaron
mutantes constitutivos, en los que la
GENTICA MOLECULAR
229
travs del citoplasma como un represor del

sistema. En la tabla 16.1 se muestran varias
combinaciones de alelos I+ que permitieron establecer la conclusin anterior. En las dos primeras filas puede observarse que las bacterias l'
slo sintetizan las enzimas en presencia del
Fig. 16.2. Estructura del inductor

Isopropyl-, -o-thiogalactsido.
sntesis enzimtica se produca tanto en presencia como en ausencia de lactosa. La cartografa de estos mutantes mostr que se localizaban en una regin del cromosoma de E. coli
cercana a los genes estructurales, pero no
exactamente en la misma regin. A ese locus se
le llam lacI (I, de ahora en adelante). El
anlisis gentico de las mutaciones constitutivas
del gen I demostr que eran recesivas (I -)
respecto al alelo salvaje. Al combinar los dos
alelos (I+/I-) en merocigotos de conjugacin, la
accin (reguladora) del alelo salvaje sobre los
genes estructurales siempre domina respecto al
mutante, lo que quiere decir que I+
es
dominante en trans sobre I-. Ello quera indicar que el producto del gen I salvaje actuara a
inductor (IPTG) mientras las I - lo hacen siempre (con stitutivamente). Si nos fijamos en la
estirpe 3 de la tabla 16.1, se produce enzima galactosidasa (producto del gen Z+) slo en
presencia de inductor, aunque I* no se encuentra en el mismo segmento de ADN, luego ejerce
su accin en trans. Ya hemos hablado de los
trminos cis y trans en otros captulos, pero
conviene indicar que, en el contexto de la
regulacin, un elemento regulador en cis es
aquel que ejerce su accin sobre otros genes o
secuencias siempre que se localicen en la misma
molcula de ADN, mientras que un elemento
regulador en trans es aquel que ejerce su
accin sobre otros genes o secuencias que no
tienen por qu estar fsicamente sobre el mismo
segmento de ADN, luego su accin la ejecuta a
travs de un factor difusible. La prueba
experimental de la existencia de una molcula
represora producida por el gen I fue llevada a
cabo por Pardee, Jacob y Monod y se denomin
experimento Pajamo (palabra combinada a

partir de las dos primeras letras de cada
apellido). En la figura 16.3 se resume el
procedimiento experimental: despus de una
conjugacin entre Hfr I+Z+ (donante) /F1-Z- (receptora) y eliminadas las donantes
una vez completada la transferencia
Tabla 16.1. Combinaciones de alelos I que permitieron establecer las caractersticas de los mutantes constitu
tivos (F) del gen I. El alelo salvaje es dominante en trans respecto al mutante, lo que indica que el alelo mutante
produce un represor inactivo. La presencia de niveles altos de enzima se indican con el signo + y su ausencia
con el signo -. El smbolo V indica delecin.
230
GENTICA
Tabla 16.2. Combinaciones de alelos I que permitieron establecer las caractersticas de los mutantes I' del gen 1.
Son dominantes en trans respecto al alelo salvaje y a I-. I' elimina la respuesta a cualquier inductor, presumiblemente
por modificacin estrica del represor, lo que indica una interaccin directa entre el producto del gen I y el inductor.
La presencia de niveles altos de enzima se indican con el signo + y su ausencia con el signo -.
del cromosoma bacteriano, las bacterias receptoras (I+Z+/I- Z-) recuperan la capacidad de
sntesis de -galactosidasa en ausencia de inductor (IPTG) durante unas dos horas (muestra
2) y despus la sntesis de enzima finalizaba.
Slo si se aada inductor continuaba la

sntesis enzimtica (muestra l). La explicacin de estos hechos es la siguiente: el cito-
Fig. 16.3. Experimento Pajama: Configuracin Hfr I+Z

(receptoras). Se eliminan las donantes una vez
completada la conjugacin. Los merocigotos sintetizan
/3-galactosidasa sin inductor (IPTG) durante dos horas
(muestras 1 y 2). Despus de ese tiempo la sntesis no
prosigue (muestra 2), a no ser que se incorpore inductor
(IPTG) (muestra 1).
plasma de las bacterias receptoras careca del

producto del gen I+ (la molcula represora) por
lo que la -galactosidasa se empezaba a
sintetizar (a partir del gen Z+ suministrado por
la donante); pero, al mismo tiempo, se empezaban a sintetizar molculas represoras, producto del gen /+(tambin suministrado por la
donante) y, cuando su concentracin en el medio celular era lo suficientemente elevada,
empezaba a ejercer su accin represora sobre el
sistema lac. Si no se suministraba inductor la
sntesis de enzima se detena (muestra 1). Slo
si ste se aada el represor se inactivaba y se
mantena la sntesis enzimtica.
Puesto que el represor ejerce su accin sobre
el conjunto de los genes estructurales (accin
pleiotrpica), el modelo predijo la existencia de
una regin receptora de su accin mediante la
formacin de un complejo estrico especfico.
Esa regin fue denominada operador (O)
proponiendo que deba estar prxima a los
genes estructurales. Se descubrieron mutantes
constitutivos de esa regin (0c) capaces de
sintetizar las enzimas en ausencia de inductor

(en tasas menores que las inducidas, pero
muy por encima de los niveles basales). A
diferencia de lo que haba ocurrido con los
mutantes
constitutivos
del
gen
I,
experimentos de conjugacin (tabla 16.3) demostraron que los mutantes Oc eran dominantes en cis, tal como deba esperarse de una regin cercana y unida fsicamente a los genes
estructurales, receptora de la accin de la mo-
GENTICA MOLECULAR
231
Tabla 16.3. Combinaciones de alelos O que permitieron establecer las caractersticas del operador. Los mutantes Oc son
dominantes en trans respecto al operador, lo que indica que se tratara de una regin adyacente a los genes es tructurales
(diferente al promotor de la transcripcin). Sus mutaciones permitieron establecer sus caractersticas. La presencia de
niveles altos de enzima se indican con el signo + y su ausencia con el signo -.
lcula represora. Precisamente fue mapeada

delante del gen Z.
En 1961, con todas estas evidencias experimentales, Jacob y Monod (que recibieron el
Premio Nobel 4 aos ms tarde) propusieron un
modelo de control negativo de la regulacin al
que denominaron modelo del opern (fig. 16.4),
en el que un grupo de genes se regula y expresa
coordinadamente. La unidad gentica de
expresin coordinada era el opern, formado
por los genes estructurales y su regin adyacente (el operador), que puede esquematizarse
como OYZA. El opern se encuentra bajo el
control negativo del producto del gen I. El control negativo quiere expresar el modo de ejercer
la regulacin el producto del gen I, es decir, que
la transcripcin se produce cuando el represor
no est unido al operador. En esas condiciones,
se dice que el operador est abierto (fig. 16.4b),
y cerrado cuando est bloqueado por la protena
represora (fig. 16.4a). Un control positivo, por
el contrario, indicara que la accin de una
molcula reguladora es la de unirse a su
secuencia receptora para que se produzca la
transcripcin,
actuara
promoviendo
la
transcripcin, siendo un activador. Ms adelante
veremos ejemplos de control positivo de la
transcripcin.
A la luz del modelo se acenta la comprensin del modo de actuacin de los distintos mutantes encontrados. El anlisis gentico de mutaciones para todos los genes y el operador fue
mucho ms extenso que lo mostrado aqu. Se
aislaron y combinaron muchos tipos de mutantes para llegar a establecer las caractersticas
esenciales de los elementos del sistema. As, por
ejemplo, se aislaron mutaciones opuestas a I-,
llamadas Pen las que, en lugar de afectarse la
interaccin con el operador, como ocurra con
las primeras, se impeda la unin con la lactosa,
reprimiendo la sntesis de las enzimas. Estos
mutantes eran dominantes en trans, respecto al
gen I normal.
Merece recordarse en este punto que el modelo del opern se publica cuando estn en plena efervescencia las experimentaciones acerca
de la posible existencia de un intermediario entre el ADN y las protenas y, en su trabajo, Jacob y Monod lo sugieren (incluso en un primer
momento apuntan a que el represor fuese ARN).
Posteriormente, el modelo se fue completando y
perfeccionando, sin que, en ningn caso, esto
quiera quitar importancia a la propuesta inicial
de Jacob y Monod.
Unos aos despus se aisl el represor, que
ha sido caracterizado, demostrndose que se trata de una protena homotetramrica, con monmeros de 136 aminocidos que presentan cuatro
sitios de unin a lactosa y un sitio de unin al
operador (pero no a los mutantes Oc). Tambin
se ha caracterizado la secuencia de bases del
operador que, como se muestra en la figura
16.5, es una corta secuencia palindrmica (~25
pb), localizada justo delante del primer gen estructural (se localiza, por tanto, en el extremo 3'
del promotor y sus bases se transcribirn en la
232
GENTICA
Fig. 16.4. Modelo simplificado del opern lac.
GENTICA MOLECULAR
233
regin lder, al principio del ARNm (conviene

recordar que los elementos del opern forman
parte de una unidad de transcripcin).
2.3.
REPRESIN CATABLICA
CONTROL POSITIVO
DEL
OPERN
LAC:
El opern lac (y otros operones de degradacin de azcares) presenta, adems, un sistema

de control positivo. Se descubri que, a pesar de
que haya lactosa en el medio, la unin de la
ARN polimerasa es poco eficiente, a no ser que
no haya glucosa en el medio. Este aparente galimatas tiene su explicacin si se entiende que la
clula bacteriana prefiere a la glucosa como
fuente de energa y, si tiene glucosa en el medio
celular, no pondr en marcha la degradacin de
lactosa, hasta no haber agotado la glucosa disponible. La glucosa ejerce su accin inhibidora
(denominada represin catablica) de un modo
muy indirecto y, en cierta medida, desconocido:
a travs del AMP cclico (AMPc). Vemoslo
por partes: cuando los niveles de glucosa son altos los de AMPc descienden y viceversa. Esto
parece deberse a la accin de algn catabolito
producido en la degradacin de glucosa (an no
identificado) inhibiendo la enzima adenilato ciclasa que cataliza la conversin de ATP en
AMPc (fig. 16.6a).
Veamos ahora cmo interviene el AMPc en
esta regulacin: en el opern lac existe una
regin que se localiza corriente arriba en el
promotor (podramos decir que en su lado
opuesto al operador), que ha sido caracterizada
y consta de 14 pares de bases (fig. 16.6b). Dicha
regin se ha denominado sitio CAP, por ser el
lugar al que se ancla una protena (producto del
gen crp) llamada CAP (protena activadora por
catabolito). Pero la protena CAP por s sola no
se une al sitio CAP, sino que necesita estar
unida a AMPc y, una vez que se forma el
complejo CAP-AMPc, entonces se une a la
regin CAP y se facilita la unin de la ARN
polimerasa al ADN. El modo como CAP-AMPc
facilita esta unin no est del todo aclarado, La
estructura palindrmica de la regin CAP y
experimentos de cristalografa de rayos X
parecen indicar que el complejo CAP-
Fig. 16.5. Secuencia

del opern lac.
de
la
regin
operadora
Fig. 16.6. Represin catablica del opern lac:
Control positivo. La unin del complejo (protena

CAP cAMP) a la regin CAP facilita el anclaje de
la ARN polimerasa a la regin promotora. a)
Accin de la glucosa sobre los niveles de AMPc, y
b) Secuencia de la regin CAP, lugar del anclaje
del complejo (protena CAP-AMPc).
AMPc dobla el ADN de esa regin en un ngulo

de unos 90, hacindolo quiz ms accesible a
la ARN polimerasa.
Contrariamente a lo que ocurre con el control del represor, el complejo CAP-AMPc ejerce
un control positivo sobre el opern, ya que para
que se realice la transcripcin en tasas relevantes se necesita la presencia de una molcula activadora (CAP-AMPc) unida a su regin
receptora (sitio CAP).
Este control positivo potencia la transcripcin de los genes estructurales, siempre que no
exista glucosa y haya lactosa en el medio, pero
si en el medio coexisten glucosa y lactosa, y no
se lleva a cabo el control positivo, no se impide
totalmente la sntesis de los genes estructurales
del opern, nicamente descienden las tasas de
transcripcin. En la figura 16.7 se ofrecen dis-
Fig. 16.7. a, b y c) Funcionamiento del opern lac bajo el doble control de glucosa y lactosa. nicamente en
situaciones de bajos niveles de glucosa y altos niveles de lactosa se producen altas tasas de transcripcin. La
unin del complejo (protena CAP-AMPc) facilita, en la situacin mostrada en (c), la unin de ARN
polimerasa.
GENTICA MOLECULAR
tintas alternativas de funcionamiento del opern, bajo este control combinado negativo y
positivo.
Finalmente, con todas estas evidencias, y
recordando que el modelo del opern se integra
en la transcripcin, podemos retomar la figura
14.5 del captulo 14 e integrar, en la unidad de
transcripcin que en ella se representa, los elementos controladores de la transcripcin que
acabamos de ver, quedando aqulla del modo
que se muestra en la figura 16.8.
3. El opern trp: modelo de atenuacin
La ruta de biosntesis de triptfano es uno

de los procesos del metabolismo ms conocidos
y utilizados en diversas parcelas de la in-
235
vestigacin gentica; se conocen sus genes, sus

posiciones relativas, sus mutaciones (sobre todo
de las que se localizan en las subunidades
codificantes para la enzima triptfano sintetasa),
su ubicacin en el mapa bacteriano, etc. La
disposicin de todos sus genes contiguos y la
caracterstica bioqumica de la interrupcin de
la sntesis enzimtica cuando existen en el medio bacteriano grandes cantidades de triptfano,
hicieron proponer a Jacob y Monod que, con
toda probabilidad, poda tratarse de otro opern
bacteriano (al que denominaron opern
triptfano o trp, siglas derivadas de las del aminocido), diferente al opern lac, pero sometido
a un mecanismo de regulacin similar, es decir
de control negativo, en el que el represor slo
se unira al opern, bloqueando la transcripcin,
cuando
se
encontrara
unido
a
Fig. 16.8. Esquema parcial de la unidad transcripcional del opern lac en la que se sitan los elementos controladores (sitio
CAP y Operador). Se marcan tambin los elementos ms relevantes de la transcripcin, tanto en el ADN como en el ARNm.
En los procariotas transcripcin y traduccin estn acopladas (el segmento que posteriormente se va a traducir es menor que
el ARNm transcrito). El operador cubre parte de la regin que se transcribir como lder.
236
GENTICA
Fig. 16.9. a) Elementos bsicos del opern trp (P = promotor, O = operador y regin atenuadora). b) Se destaca
especialmente la composicin de la regin que se transcribir como regin lder, que contiene en su secuencia el gen
para el pptido lder y la regin atenuadora.
triptfano. El represor sera tambin en este

caso una protena alostrica.
Un exhaustivo anlisis de mutaciones semejante al realizado para el opern lac, demostr la
realidad de esta propuesta. En la figura 16.9a se
muestra un esquema del opern triptfano, con
sus regiones y elementos reguladores. Al gen
regulador se le llam R, y produce una protena
represora inactiva, con un sitio de unin a
triptfano. El complejo protena R + trp es
activo, mostrando afinidad por la regin
operadora del opern (trp0), con lo que se une a
ella y bloquea la transcripcin de los genes
estructurales del opern (trpE, trpD, trpC, trpB y
trpA). Se tratara, pues, de un sistema de
regulacin represible de control negativo. La
denominacin represible establecera la
diferencia con el opern lac, que es inducible
o inducido por la presencia de lactosa, mientras
que el opern trp es represible o reprimido
por la presencia de triptfano. Tales
circunstancias,
adems,
estaran
en
concordancia con el hecho de tratarse de rutas
pertenecientes a los dos tipos de procesos contrapuestos del metabolismo: catabolismo (lac) y
anabolismo (trp).
3.1. ATENUACIN
En el transcurso de las investigaciones sobre

el opern, Yanofsky encontr dos circunstancias
sorprendentes. En primer lugar, aunque el
opern se transcibe completo si no hay triptfano en el medio, en presencia de triptfano se
produce la transcripcin de la secuencia lder
del ARNm. De hecho, a altas concentraciones
de triptfano se produca un fragmento de
transcrito de unas 140 bases, y despus la
transcripcin se paraba. A partir de ah aisl y
secuenci el ARNm policistrnico y descubri
la existencia de una secuencia codificante en la
regin lder (ARNm lder) (fig. 16.9b), antes del
comienzo del primer gen estructural, que
especificaba la sntesis de un pequeo polipptido, al que llam pptido lder, que presentaba
varios residuos de triptfano en su secuencia.
Aisl mutantes de delecin de esa regin, encontrando que siempre producan ARNm para
las enzimas de la sntesis de triptfano a altos
niveles, aunque lo hubiera en el medio, mientras
que en los salvajes para dicha regin la sntesis
del ARNm se produca de acuerdo con las
GENTICA MOLECULAR
necesidades de triptfano, es decir, si haba

poco triptfano se transcriba mucho el opern y
si haba mucho triptfano la sntesis se atenuaba. Debido a ello, denomin a la regin del
ADN que especificaba a la lder, cuyas deleciones producan sntesis constitutiva, atenuador. El anlisis detallado del ADN y
ARNm de la regin lder ha demostrado que
237
presenta en su interior una unidad de transcripcin y traduccin del pptido lder hacia 5' y,
adems, presenta en su extremo 3' (justo antes
del comienzo del ARNm del primer gen estructural) un terminador rho independiente.
De hecho la regin lder presenta cuatro regiones de autoapareamiento, 1, 2, 3 y 4 (fig.
16.1Oa), siendo el apareamiento 3-4 la horqui
Fig. 16.10. a) Todas las posibilidades de autoapareamiento en la regin lder del opern trp. b) Apareamiento 3-4
formado cuando existen altas concentraciones de triptfano en el medio. Ntese que se forma un terminador de la
transcripcin. c) Apareamiento 2-3 formado cuando existen bajas concentraciones de triptfano. El terminador 3-4
no se forma. d) Situacin posible en estados carenciales graves.
238
GENTICA
Fig. 16.11. Secuencia de aminocidos del pptido lder y la correspondiente secuencia de bases del ARNm
de la regin lder del opern fenilalanina (a) y opern histidina (b).
Ha de terminacin de transcripcin mencionada.

La solucin propuesta por Yanofsky para
explicar cmo se ejerce la atenuacin fue la siguiente (partiendo de la idea de que la transcripcin y la traduccin van acopladas en procariotas): aunque haya altos niveles de triptfano, comienza a transcribirse la regin lder y,
tan pronto como el extremo 5' del mensaje empieza a salir, se engancha el ribosoma y comienza a traducir el pptido lder, cuya secuencia codificante se localiza muy cercana al extremo 5', en la regin mostrada como 1. Como
hay mucho triptfano, tambin habr abundancia de sus transferentes, con lo que la traduccin
se lleva a cabo de un modo rpido y el ribosoma
alcanza a cubrir la regin 2 (fig. 16.10b). La
ARN polimerasa iba por delante transcribiendo
la regin lder (recuerde transcripcin y
traduccin acopladas) y, despus de transcribir
los segmentos 3 y 4, stos se aparean,
formndose un terminador de la transcripcin,
con lo que la polimerasa se desengancha y no
llega a transcribir los genes estructurales.
Por el contrario (fig. 16.10c), si los niveles
de triptfano son muy bajos en el medio, todo
comenzara como antes, pero el ribosoma no
puede fabricar el pptido lder (se atasca en los
codones de triptfano que presenta su mensajero), al haber escasez de transferentes de triptfano. Esta parada ribosmica en la regin 1 hace
que no cubra a la regin 2. La ARN polimerasa
va delante transcribiendo las regiones 2
y 3 que se aparean tan pronto como estn transcritas y la regin 4 queda libre. En esas circunstancias no se forma el terminador (3-4), la polimerasa contina unida y sigue transcribiendo
los genes estructurales para la produccin de las
enzimas implicadas en la sntesis del aminocido.
Incluso existira una tercera posibilidad en
estados carenciales extremos (fig. 16.1Od); se
forman los apareamientos 1-2 y 3-4 con lo que
empieza la transcripcin y acaba en el terminador 3-4, pero no se realiza traduccin alguna.
La atenuacin no es exclusiva del opern
triptfano; muy al contrario la regulacin por
atenuacin es caracterstica de muchos operones
biosintticos de aminocidos, incluso como
mecanismo regulatorio nico o predominante en
algunos de ellos (opern his). En la figura 16.11
se muestran las secuencias y los pptidos lder
de los operones fenilalanina e histidina, en los
que, como puede observarse, existen varios
residuos del aminocido correspondiente.
Por ltimo, existe un tercer mecanismo de
control del opern trp, denominado retroinhibicin, que coopera con los ya relatados para un
control ms fino de la sntesis de triptfano.
Consiste en la inhibicin, producida por el triptfano, de la primera enzima de la ruta, tratndose por tanto de un mecanismo postraduccional.
No se conoce exactamente por qu coexis-
GENTICA MOLECULAR
ten tantos mecanismos regulatorios para un

mismo proceso, pero sea cual sea la razn, lo
que s es patente es la eficiencia alcanzada en la
expresin de los genes, incluso en un organismo
tan simple como una bacteria.
Botsford, J. L. y Harman, J. G. (1992): Cyclic

AMP in prokaryotes>>, Microbiol. Rev, 56:
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239
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Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 75: 5.988-5.991.
Captulo
de la expresin gentica
17 Regulacin
en eucariotas
1.
Caracteristicas Generales y Niveles de Regulacin
2.
Elementos Reguladores en el ADN

2.1. El Promotor
2.2. Intensificadores
2.3. Aislantes (Insulators)
3.
Los Factores de Transcripcin

3.1. Dominios de Unin al ADN
3.2. Dominios de Activacin en Trans
4.
Regulacin Postranscripcional
242
La mayora de los procesos genticos bsicos presentan grandes similitudes entre procariotas y eucariotas, aunque en estos ltimos
siempre existe un mayor grado de complejidad
(se remite al lector a los captulos dedicados a
replicacin, trascripcin o traduccin). En la
regulacin de la expresin gentica tambin se
puede aplicar esta regla, pero resulta evidente
que los organismos eucariontes, sobre todo los
superiores, con su enorme complejidad celular,
estructural y fisiolgica y sus complicadas y
diversas etapas en su ciclo de vida, han desarrollado intrincados y variados mecanismos regulatorios.
GENTICA
gentico acomplejado con protenas formando

la cromatina, sus genes fragmentados, la divisin de tareas entre citoplasma y ncleo, etc.
Todo ello hace que los mecanismos reguladores
puedan darse en muchos niveles diferentes y,
por tanto, el conocimiento acerca de ellos es
menor y ms fragmentado.
Las diferencias de expresin de los genes a
las que nos hemos referido: espaciales, temporales, reversibles, irreversibles, expresin
diferencial al corto, medio o largo plazo, etc.,
pueden ser el resultado de mecanismos regulatorios que se ejercen en alguno/s de los siguientes niveles:
1. Caractersticas generales y niveles

de regulacin
En todos los organismos pluricelulares

como Drosophila o el hombre, todas sus clulas
tienen la misma informacin gentica y, sin
embargo, no todos los genes se expresan, ni espacial ni temporalmente, a la vez. Un procariota
responde en su regulacin nicamente a requerimientos nutricionales para su crecimiento
y divisin y a las oscilaciones de su medio ambiente. Un eucariota superior no slo realiza
esas funciones, sino que pasa por diferentes y
complicadas etapas de desarrollo y sus clulas
experimentan profundas diferencias fenotpicas
al diferenciarse, especializarse, etc. Incluso,
cindonos a la vida adulta, cada tipo celular
expresa nicamente un conjunto de sus genes,
mientras que otros estn bloqueados permanentemente (irreversiblemente), al tiempo
que debe realizar sus funciones bsicas y sus
funciones especficas de acuerdo con los requerimientos celulares y del conjunto del organismo (regulacin reversible). En un eucariota
esta expresin gentica reversible (similar a la
bacteriana) se muestra mucho ms compleja y
necesita mecanismos ms exquisitos de control.
Los mecanismos regulatorios irreversibles que
controlan la diferenciacin y el desarrollo sern
tratados en otros captulos.
Como hemos indicado, la complejidad eucariota respecto a los procariotas se evidencia
incluso a nivel estrictamente celular, desde la
estructura de su enorme cantidad de material
La existencia del primer nivel proviene de la

evidencia de que los genes pueden encontrarse
en la cromatina en estado estructural activo o
inactivo: nicamennte en el primero de esos
estados pueden ser objeto de transcripcin, por
lo que la adquisicin de esa estructura activa,
sera prerrequisito para la expresin gnica. Este
nivel ya ha sido tratado en uno de los primeros
captulos de este texto, por lo que aqu nos
centraremos en los siguientes niveles de
regulacin, comenzando por el que se ejerce en
el inicio de la transcripcin, que ha sido el ms
analizado y, con toda probabilidad, el nivel ms
comn de regulacin de la expresin de los
genes eucariticos, aunque tambin nos
referiremos a los dems a lo largo de las
explicaciones
del
tema.
GENTICA MOLECULAR
2. Elementos reguladores en el ADN
La mayora de los genes eucariotas estn

bajo un control transcripcional aunque, adems,
sobre sus productos, existan otros mecanismos
reguladores. Como hemos indicado, la transcripcin eucariota es similar a la bacteriana y,
por tanto, se han intentado aplicar los mismos
principios que se han encontrado en los operones: elementos reguladores en cis, es decir, regiones de ADN unidas fsicamente a la secuencia a transcribir, y elementos reguladores en
trans, fundamentalmente de naturaleza proteica
que vienen a ejercer su accin reguladora sobre
los primeros. Los elementos reguladores en cis
son los promotores, los intensificadores y los
aislantes, no habindose encontrado regiones
equivalentes a los operadores bacterianos.
243
2.1. EL PROMOTOR
Es la regin en la que se localizan las seales que sirven para el reconocimiento por parte
de la ARN polimerasa. Aunque en eucariotas
hay tres ARN polimerasas diferentes, nos referiremos al promotor de ARN polimerasa II, la
encargada de transcribir los ARNm.
Los promotores eucariotas siempre se encuentran delante (5') de los genes que regulan,
son ms extensos y complejos que los bacterianos pero presentan regiones equivalentes a las
secuencias consenso de aqullos. De algunas de
ellas ya hemos hablado al referirnos a la
transcripcin pero analizaremos ahora su contribucin a la regulacin (fig. 17.1). La caja
TATA
o
de Goldberg-Hogness, situada
aproximadamente a -25 pares de nucletidos (co
Fig. 17.1. a) Representacin de un promotor de eucariotas superiores, en el que se muestran las regiones
conservadas o cajas. b) Mutaciones del promotor del gen de la /3-globin y su efecto sobre la transcripcin.
El nivel 1 indica la tasa de transcripcin del promotor salvaje.
244
GENTICA
Fig. 17.2. Complejo basal de iniciacin de la transcripcin. Los distintos factores de transcripcin (TFII)
para la ARN polimerasa II (Pol II) se indican resumidamente II, seguido de la letra indicativa del factor
de que se trate.
rriente arriba) del punto de inicio de la transcripcin es la equivalente a la regin -10 de los
promotores bacterianos. Su secuencia consenso
es ms amplia, un heptanucletido, siendo la
responsable de la puesta en marcha del inicio de
la transcripcin. En la figura 17.2 se resume la
cascada de uniones de factores de transcripcin
hasta llegar a formarse el complejo basal,
necesario para el inicio de la transcripcin. El
suceso desencadenante siempre es la unin, a la
caja TATA, de la protena TBP (TATA bin-
ding protein) que, a su vez, forma parte de un

complejo al que se asocian mltiples subunidades, denominadas en su conjunto TAFs. TBP
y TAFs constituyen el factor de transcripcin
TFIID, responsable de la unin inicial al ADN,
necesaria para que se ancle la ARN polimerasa,
que no puede establecer directamente su unin
al ADN de la regin promotora. A partir de ah
se van acomplejando otros factores de
transcripcin (IIA y IIB) y, en ese estado ya
puede anclarse la ARN polimerasa II. Poste-
GENTICA MOLECULAR
riormente se unen otros factores de transcripcin hasta formar el complejo basal (que se
muestra ensamblado al final de la fig. 17.2) necesario para el inicio de la transcripcin, sobre
el cual se ejercern las acciones reguladoras por
parte de otros elementos.
La segunda regin de importancia es la caja
CCAAT, de posicin mucho ms variable, pudiendo encontrarse en cualquier punto de un
segmento entre -50 y -500 nucletidos con
distintas orientaciones, segn los genes, y cuyas
mutaciones afectan a las tasas de transcripcin.
Una tercera regin conservada es la caja GC
que se localiza, generalmente, alejada del punto
de inicio de la transcripcin (aproximadamente
a unas 200 bases corriente arriba del punto de
inicio de la transcripcin), aunque su posicin y
orientacin puede variar bastante entre los
distintos promotores. Realmente esa sera la
estructura consenso de un promotor tipo, pero
la realidad es que los promotores eucariticos
son sumamente variables en cuanto al nmero,
localizacin y orientacin de estos elementos
controladores (a excepcin de la caja TATA).
El anlisis mutacional del promotor demuestra la importancia de estas regiones para el
inicio de la transcripcin. As, en la figura
17.1b, que muestra el anlisis mutacional del
gen de la /3-globina y su relacin con las tasas
de transcripcin, las mutaciones dentro de las
cajas reducen, de un modo espectacular, la
transcripcin, lo que no ocurre cuando las mutaciones se localizan fuera de ellas dentro del
promotor.
La enorme variabilidad y separacin entre
ellas indicara que, para su interaccin con el
complejo basal formado alrededor de la caja 10, las interacciones deben realizarse a travs de
uniones protena (del complejo basal)-protena
245
(asociadas a las cajas).
2.2. INTENSIFICADORES
Son secuencias de ADN cuya funcin consiste en incrementar las tasas basales de transcripcin de los promotores. Su posicin es extremadamente variable respecto al gen que regulan, pudiendo localizarse muchos cientos,
incluso miles, de pares de bases hacia 3', 5' o
internos al propio gen. En la figura 17.3 se
muestran dos intensificadores de SV40 que
ejercen su accin sobre los genes tempranos (se
localizan en 5' respecto a ellos) y tardos
(localizndose en 3' respecto a ellos). Su accin
activadora necesita, por tanto, realizarse a travs
de unin a protenas. En levaduras, se
encuentran secuencias similares a los intensificadores (denominadas UAS), salvo por su incapacidad de funcionar cuando se encuentran
corriente abajo (hacia 3') del gen. Un intensificador del virus SV40 ha sido uno de los primeros en ser caracterizado. Se localiza unos 200
pares de bases hacia 5' del punto de inicio de la
transcripcin, en una regin que presenta dos
secuencias idnticas de 72 pares de bases, dentro de las cuales se han identificado, mediante
mutaciones, cinco dominios funcionales de especial importancia para la activacin de la
transcripcin. Mediante la realizacin de construcciones genticas se ha puesto de manifiesto
que pueden activar cualquier gen que se localice
en su vecindad (relativa). Aunque son elementos que actan sobre genes situados en el
mismo segmento cromosmico en el que ellos
se encuentran, su localizacin tan alejada del
punto donde actan, incluso en el lado opuesto
al promotor, en relacin con el gen que regu-
Fig. 17.3. Regin controladora de SV40, en la que se seala la caja TATA, una caja GC y dos intensificadores.
La caja TATA y la GC seran elementos controladores de la transcripcin nicamente de los genes tempranos,
mientras los intensificadores actuaran sobre los genes tempranos y sobre los tardos.
246
GENTICA
Fig. 17.4. a) Aislantes HS4 y 3'HS del gen de la l3-globina de gallina. b) Aislantes de genes para ARNr.
lan, hizo plantearse a los investigadores distintas propuestas de su mecanismo de accin. As,
se pens que podan cambiar la densidad de
enrollamiento de la doble hlice, accesibilizando regiones del genoma; o ubicar una determinada regin cromosmica en un lugar preciso
(fijndola a la matriz nuclear, por ejemplo).
Tambin se supuso que podan actuar como un
punto de entrada para que otras protenas se
asociaran con la cromatina. Hoy en da se sabe
que su funcin es la de interaccionar con la regin promotora, no directamente sino a travs
de elementos en trans, protenas que interactuaran con el intensificador y, mediante la formacin de un bucle, se asociaran a protenas
localizadas en el complejo basal de la transcripcin.
2.3. AISLANTES (INSULATORS)
Descubiertos recientemente, podramos

decir que se trata de secuencias de ADN cuya
misin consiste en regular el mbito de accin
de los intensificadores para que ejerzan su accin sobre unos determinados genes y no hacia
otros. En un primer momento tras su descubrimiento se pens que podan actuar como barreras fsicas en unin con protenas, pero su anlisis ms detallado est demostrando que su accin es mucho ms que eso. Su accin reguladora de la expresin de los genes se est analizando en detalle, demostrndose que pueden
ejercer funciones muy diversas sobre los intensificadores, siempre mediante unin a protenas
especficas. Se han encontrado desde efectos
posicionales
de
activacin/desactivacin,
asociados a su modulacin por protenas, hasta
una accin facilitadora del acercamiento de los
intensificadores a regiones promotoras, el secuestro de un intensificador entre dos secuencias aislantes, etc. En la figura 17.4 se muestran
dos ejemplos de aislantes que actuaran de
barrera para impedir que determinados intensificadores ejerzan su accin sobre otros genes
diferentes a aquellos sobre los que deben actuar.
As, en el caso mostrado en la figura 17.4a, dos
aislantes HS4 y 3'HS, del gen de la -globina
de gallina bloquean la accin del intensificador
LCR de ese gen, hacia los genes A y B
respectivamente. Hacia el gen A existen
tambin otras seales inactivantes (metilacin).
As, LCR slo ejercera su accin intensificadora sobre el gen diana. Un ejemplo similar se muestra en la figura 17.4b, donde se representan los aislantes de intensificadores de
genes repetidos en tndem para ARNr. Se impide que cada intensificador pueda escapar en
su accin del segmento cuya actividad transcripcional promueve. El tiempo nos dar toda la
dimensin de su importancia en la regulacin de
la expresin de los genes, que puede ser mucha
si, como parece, estn involucrados en la
regulacin de patrones de desarrollo de algunos
organismos. Al menos en Drosophila esto
parece
estar
demostrado.
GENTICA MOLECULAR
247
Fig. 17.5. Dominio hlice-giro-hlice (Helix-Turn-Helix = HTH).
3. Los factores de transcripcin
Seran aquellas protenas que son necesarias

para el inicio de la transcripcin, aunque no
forman parte de la molcula de ARN polimerasa. Para ejercer su accin deben tener la caracterstica de presentar dos dominios estructurales:
uno de reconocimiento y unin a secuencias especficas del ADN (dominio de unin al ADN)
y, una vez que se ha llevado a cabo esa unin,
deben realizar su accin reguladora por unin a
otra protena del aparato transcripcional, mediante otro dominio estructural denominado
dominio de activacin en trans.
ADN. Las secuencias del ADN de

interaccin con estos dominios se han encontrado en gran nmero de genes eucariotas (genes
hometicos) implicados en el desarrollo. Dichas
secuencias constituyen las cajas hometicas
(homeobox), que se tratarn ms adelante.
Un segundo tipo de dominio de unin al
ADN de los factores de transcripcin lo
constituyen los dedos de Zinc (Zinc finger). Su
nombre proviene de su estructura, mostrada en
la figura 17.6, en la cual se observa cmo un
nmero pequeo de aminocidos altamente
conservados acomplejan un tomo de Zn
mediante uniones a dos cistenas y a dos
histidinas. Una protena en dedos de Zn presenta
varios de estos motivos es
3.1. DOMINIOS DE UNIN AL ADN
Los factores de transcripcin eucariotas (y,

en general, todas las protenas reguladoras de
unin al ADN) pueden presentar distintos dominios de unin al ADN, distinguindose cuatro
tipos bsicos que se muestran en las figuras
17.5a 17.8.
El dominio hlice-giro-hlice (helixturnhelix = HTH) (fig. 17.5), fue el primero que se
descubri, en protenas represoras de fagos. Est
constituido por dos a-hlices separadas por un
giro de unos pocos aminocidos, lo que permite
que se ajuste al surco mayor del ADN por una
de ellas, mientras la otra se coloca en ngulo en
el ADN, estabilizando la interaccin con el
Fig. 17.6. Dominio en dedos de Zinc.
248
GENTICA
El tercer tipo de dominio de unin al ADN

se denomina cremallera de leucina (leucine
zipper) (fig. 17.7). Cada parte de la cremallera
est formada por una cadena aminoacdica en la
que hay un residuo de leucina cada 8 aminocidos (cada dos leucinas habr 7 aminocidos), hacia su extremo carboxiterminal. En total, en cada cadena se localizan 4 de estos residuos. Hacia el extremo aminoterminal presenta
una serie de residuos cargados. La dimerizacin
de dos de estos elementos, en Y, hace casi intuir
su mecanismo de unin, abrazando al ADN con
sus brazos aminoterminales. El producto

proteico de muchos protooncogenes nucleares (familia jun, familia fos) presenta regiones con la potencialidad de formar crema-
Fig. 17.7. Dominio en cremallera de leucina.
ructurales, como si de una mano se tratara. Los

aminocidos que acomplejan el Zn pueden variar, establecindose distintos subtipos de
dedos de Zn que caracterizan a distintos tipos
de protenas reguladoras. As, la diferencia entre
los dedos de un receptor de glucocorticoides
y un receptor de estrgenos radica en los
aminocidos que acomplejan el Zn. Cada dedo
es una a-hlice que se inserta en el surco mayor
del ADN. Las protenas con estos motivos se
descubrieron por primera vez en el factor de
transcripcin IIIA de Xenopus, que se une a la
ARN polimerasa III para la transcripcin de los
genes de ARNr 5S. Desde entonces se ha
encontrado en numerosas protenas reguladoras
de diversa ndole: desde receptores de hormonas
esteroides, hasta protenas con potencial
oncognico, pasando por protenas reguladoras
de genes de desarrollo (constituyendo familias,
como la familia de protenas PAX de gran
importancia en la regulacin del sistema
nervioso en Drosophila).
Fig. 17.8. Dominio en Hlice-Bucle-Hlice

(Helix-Loop-Helix = HLH).
GENTICA MOLECULAR
lleras de leucina por dimerizacin. En ocasiones

dos protenas diferentes cooperan en la dimerizacin, formando heterodmeros (jun/fos,
por ejemplo), lo que ofrecera una mayor versatilidad o un mayor efecto regulatorio.
El cuarto tipo de dominio de unin al ADN
son los motivos estructurales hlice-buclehlice (helix-loop-helix = HLH) (fig. 17.8).
Similar en estructura a la cremallera de leucina
pero la asociacin entre las dos cadenas se
realiza mediante bucles que se engarzan. Las
protenas reguladoras con estos motivos
estructurales se encuentran formando dos
grupos: unas de expresin en todos los tejidos y
otras tejido-especficas. Entre estas ltimas, uno
de los grupos mejor analizados es el de los
factores de transcripcin controladores de la
formacin de msculo en mamferos (MyoD,
miogenina y Myf-e).
3.2. DOMINIOS DE ACTIVACIN EN TRANS
Los factores de transcripcin presentan,

adems, dominios de activacin en trans me-
249
diante los cuales establecen uniones entre ellos

(protena-protena). As, un intensificador unido
a su protena reguladora puede hacer contacto
en un bucle con el complejo basal. Pero, para la
activacin de los factores de trascripcin se
necesitan seales efectoras, originadas fuera de
la clula, que transmitan hasta el ncleo las
seales necesarias para la regulacin de la
transcripcin. Un grupo diverso de ligandos son
los encargados de transmitir desde el exterior
celular las seales necesarias para la correcta y
coordinada expresin de los genes; algunos
necesitan intermediarios citoplasmticos para
ejercer su accin (sealizacin) pero otros de
pequeo tamao, tales como las hormonas
esteroides, la hormona tiroidea, los glucocorticoides, etc., penetran en el interior de la
clula, regulando la expresin de los genes. De
entre todos los mecanismos de activacin el
mejor conocido es el que ejercen las hormonas
esteroides a travs de la unin a sus receptores
(que son factores de transcripcin). En la figura
17.9 se esquematiza esta accin. Los receptores
hormonales
presentan
una
regin
de
Fig. 17.9. Accin sobre la transcripcin ejercido por el complejo hormona-receptor.
250
unin a la hormona. Una vez se han unido a

ella, el complejo hormona-receptor se trasloca al ncleo para ejercer su accin reguladora,
activando intensificadores especficos que, en
ese estado, van a ejercer su accin sobre el
complejo basal de la transcripcin.
De todo lo que se ha visto hasta ahora se
desprende que la mayora de la regulacin de la
transcripcin eucariota se ejercera mediante
control positivo, es decir, las protenas reguladoras promoveran la transcripcin mediante
unin a las correspondientes secuencias de
ADN receptoras de su accin. Ciertamente parece ser que la regulacin en eucariotas se realizara en la inmensa mayora de los casos mediante control positivo, desde la formacin del
complejo basal, hasta la regulacin ejercida por
los intensificadores y la accin hormonal. No
obstante existen tambin mecanismos de control
negativo, ejercidos por represores proteicos en
unin a regiones de ADN (silenciadoras). Estos
mecanismos estn bastante menos analizados en
sus detalles.
4. Regulacin postranscripcional
Como vimos al principio existen diferentes

niveles en los que se puede ejercer la regulacin
de la expresin de los genes, una vez que se ha
producido la transcripcin de los mismos,
El procesamiento del ARNm es uno de los
procesos mediante los cuales se puede ejercer
regulacin. Ya hemos visto todas las etapas del
procesamiento: la adicin de la cola de poli A y
la consiguiente unin a protenas juegan un papel fundamental para evitar la degradacin del
ARN y tambin para el correcto funcionamiento
de la traduccin. Del mismo modo el capping
ejerce funciones protectoras y de transporte. El
control de la degradacin del ARN y de su
transporte al citoplasma afecta a las tasas de
produccin del producto proteico de un gen.
Pero es en la poda y empalme de exones donde
se han encontrado los mecanismos regulatorios
ms interesantes en este nivel. As, muchos genes sufren mecanismos de splicing alternativos, en muchos casos en relacin con la produccin de formas de protena especficas de
GENTICA
tejido (fig. 17.10) o en relacin con procesos de

desarrollo.
Tambin en eucariotas se han encontrado
mecanismos regulatorios que afectan al ARNm
degradndolo durante la traduccin. Estos
mecanismos pueden ser de inters para
productos gnicos implicados en procesos
esenciales de la clula que deben estar siempre
disponibles, con lo que la produccin no puede
estar supeditada a control transcripcional (que
podra suponer demasiado tiempo desde que se
necesitase por la clula hasta que estuviese disponible). Se ejerce entonces un control de autorregulacin durante la traduccin: se est
produciendo transcripcin de un modo que podramos denominar constitutivo. Si en el medio
existen tasas elevadas de la protena de que se
trate y se inicia la traduccin se establece una
interaccin reguladora entre los primeros
elementos de la cadena polipeptdica en formacin y su producto final citoplasmtico, activndose RNasas que degradan rpidamente el
mensaje antes de completar su traduccin. Si,
por el contrario, las cantidades de protena final
descienden en el medio se realiza la traduccin
del ARNm. Este mecanismo de regulacin
traduccional puede ser el que opere en la
regulacin de la produccin de histonas y otras
protenas esenciales para la clula.
Una vez que se ha completado la traduccin
an pueden llevarse a cabo procesos reguladores, en relacin con el procesamiento del
producto proteico o mediante modificaciones
que alteren la actividad de las protenas, etc.
Finalmente, merecen indicarse algunos
mecanismos especiales de regulacin de la expresin de los genes, consistentes en amplificaciones gnicas especficas para incrementar
las tasas de produccin de protenas, durante
etapas transitorias del ciclo de vida, predominantemente durante el estado embrionario y, por
tanto, en relacin con el desarrollo. Los
ejemplos tpicos son los de amplificacin gnica
especfica de los genes para ARNr en oocitos de
anfibios y la endorreduplicacin cromosmica
de las larvas de los dpteros. Pero, sin duda, el
modo ms fascinante de regular la produccin
de protenas es el que se desarrolla en el sistema
inmune de los vertebrados para la
GENTICA MOLECULAR
251
Fig. 17.10. Splicing alternativos tejido-especficos.
generacin de la diversidad de anticuerpos, que ser

tratado en otro captulo.
Bell, A. C. et al (2001): Insulators and Boundaries:
Versatile Regulatory Elements in the Eukaryotic
Genome, Science, 291: 447-450.
Brennan, R. (1993): The winged-helix DNA-binding
motif: another helix-turn-helix tajeoff , Cell, 74:
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Yen, T. J. et al. (1988): Autorregulated changes in
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mRNAs are specified by the first 13 translated
nucleotides, Mol. Cell Biol., 8: 1.224-1.235.
Captulo
18
Epigentica
1.
Concepto de Epigentica
2.
Fundamentos Moleculares
2.1. Modificaciones del ADN y las Historias
2.2. Patrones de Metilacin del Genoma de Mamferos
3.
Inactivacin de un Cromosoma X en la Lnea somtica

de las Hembras de Mamifero
4.
Los Fenmenos de imprinting o Marcado
5.
Alteraciones de los Procesos Epigenticos

y Enfermedades Humanas
6.
Silenciamiento Gentico Mediado por ARN
254
1. Concepto de epigentica
Por qu se inactiva una fraccin considerable de los genes de un cromosoma X en la lnea somtica de las hembras de mamferos?
Por qu se producen sndromes diferentes en
las disomias uniparentales de una misma regin
cromosmica dependiendo de su origen paterno
o materno? Cmo se inactivan algunos genes
supresores durante el desarrollo de un proceso
neoplsico sin que se produzcan alteraciones en
la secuencia de sus bases nucleotdicas? La
respuesta est en los fenmenos de naturaleza
epigentica, que actan a travs de la
metilacin del ADN, y la metilacin, fosforilacin y acetilacin/deacetilacin de las
histonas, provocando cambios en la configuracin de la cromatina que facilitan o impiden la
expresin de los genes. Este tipo de fenmenos
se han descrito en una amplia variedad de organismos (animales y vegetales), aunque existen
excepciones tan notorias como el caso de Drosophila cuyo genoma no tiene unos niveles significativos de metilacin.
En su acepcin ms moderna, la Epigentica
sera la parte de la Gentica que estudia los
cambios en la expresin de los genes que no se
deben a modificaciones en la secuencia primaria
de bases del ADN, pero que se pueden heredar
clonalmente durante las divisiones celulares o
incluso de unas generaciones a otras. Sin
embargo el trmino Epigentica no se ha utilizado siempre con el mismo sentido. La epignesis fue propuesta por Aristteles como
alternativa a las teoras preformacionistas de
Demcrito y Leucipo. En el siglo xvii William
Harvey y Casper Wolf presentaron nuevas formulaciones de la epignesis para referirse a
los mecanismos misteriosos que permitan la
aparicin de nuevas estructuras durante el desarrollo embrionario (como los rganos corporales) que no estaban presentes en el momento
de la fecundacin. En 1942 Waddington propuso su hiptesis epigentica para referirse a
los cambios en los patrones de expresin gnica
que tendran que producirse durante el desarrollo embrionario para explicar la formacin de
los distintos tipos de clulas y tejidos. Finalmente Wu y Morris propusieron la utilizacin
GENTICA
del trmino epigentica, para referirse al estudio de los cambios en la expresin gentica
que se heredan a travs de las mitosis o las
meiosis, pero que no se pueden explicar por alteraciones en la secuencia de bases del ADN.
Las primeras evidencias sobre la existencia
de este tipo de procesos epigenticos se podan
atribuir a Barbara McClintock. Esta investigadora observ que algunos transposones del maz
experimentaban ciclos de inactividad (que ella
denomin cambios de fase) que no se podan
explicar por reordenaciones cromosmicas
(cambios de estado). Estos cambios de fase
eran fcilmente distinguibles porque dejaban
sentir su efecto sobre la expresin de genes
vecinos como los implicados en la formacin de
pigmentos (efectos de posicin). Se empez a
hablar de epimutaciones en el maz y de
paramutacin. En la paramutacin, el alelo
paramutagnico puede inducir un cambio
heredable en la expresin de otro alelo
(paramutable) sin que medie ninguna
alteracin en la secuencia de sus bases nucleotdicas. La presencia de transposones cerca de
genes paramutables llev a proponer que las
paramutaciones se deban en realidad a la accin indirecta de los elementos mviles.
2. Fundamentos moleculares
2.1.
MODIFICACIONES DEL ADN Y

LAS HISTONAS
Los fundamentos moleculares de los procesos epigenticos radican en la introduccin de

modificaciones qumicas en las bases nucleotdicas o en determinados aminocidos de las protenas histnicas, que se traducen en cambios en
la configuracin de la cromatina. La cromatina
potencialmente activa tiene las citosinas de sus
regiones promotoras no-metiladas y sus histonas
acetiladas. Por el contrario, la cromatina potencialmente inactiva tiene aquellas citosinas
metiladas, y algunos aminocidos de las colas
de sus histonas metilados y deacetilados. Como
consecuencia su estructura est ms condensada
y resulta inaccesible para los factores activadores de la transcripcin. Por tanto los cambios
GENTICA MOLECULAR
epigenticos permiten crear patrones diferenciales de expresin gentica, y prestan un gran

servicio a los organismos al silenciar las secuencias retrovirales y los transposones que se han
ido acumulando en los genomas en el transcurso
de la evolucin.
Como ya se ha mencionado, las bacterias
tienen muchos juegos de metilasas (y sus correspondientes restrictasas), que son capaces de
metilar las citosinas y adeninas que existen en
secuencias concretas del ADN. Sin embargo la
metilacin de los genomas de eucariotas cuenta
con un nmero muy limitado de metilasas, y se
reduce casi exclusivamente a las citosinas que
van seguidas de una guanina (sitios CpG).
Excepcionalmente, la metilacin puede afectar
tambin a los sitios CpXpGp (sobre todo en
plantas), donde X representa cualquier
nucletido. Las metilasas eucariotas se reparten
las funciones de metilacin de novo y de
mantenimiento (actuando en este ltimo caso
sobre sitios hemimetilados). En los mamferos se han descrito cuatro metilasas esenciales (DNMT1, 2, 3a y 3b) que se encargan de
la metilacin global del genoma con la excepcin de unas secuencias denominadas islas
CpG, que se encuentran en las regiones promotoras y primeros exones de los llamados
genes domsticos (house-keeping genes)
(aproximadamente el 60 % del total de genes en
el genoma de un mamfero). Estas islas se
podran definir como segmentos de ADN de
ms de 200 pb con un alto contenido en sitios
CpG no metilados. A diferencia de los mamferos, los patrones de metilacin en las plantas y
hongos filamentosos se reducen a los transposones y otros tipos de secuencias repetidas. En
Arabidopsis se han descrito otras metilasas, algunas de ellas dependientes de un ARN gua
(este aspecto se comentar ms adelante en el
silenciamiento mediado por ARN). Las
reacciones de demetilacin se pueden producir
por eliminacin directa del grupo metilo en las
5-metil-Citosinas, por la sustitucin de la 5metil-Citosina por citosina mediante un mecanismo de escisin de bases, o por desaminacin de la 5-metil-Citosina y la reparacin de
bases mal apareadas (mismatch). La baja frecuencia de sitios CpG en los genomas eucari-
255
ticos se podra explicar por la tendencia de las

5-metil-Citosinas a sufrir desaminaciones
espontneas que las transforman en timinas
(transiciones C/G hacia T/A).
En 1993 Alan Wolffe demostr que la acetilacin/deacetilacin de las histonas alteraba el
acceso de otras protenas reguladoras al ADN
afectndose la expresin gnica. Despus se
aislaron acetilasas y deacetilasas y se
descubrieron interacciones con otras protenas
reguladoras para formar complejos activadores
o represores. En 1998 Adrian Bird confirm que
el ADN metilado puede interaccionar con
protenas especficas (MBD) que sirven de
puente para la incorporacin de las deacetilasas
de las histonas y otras protenas represoras.
Finalmente, Tony Konzarides ha demostrado
recientemente que la metilacin de la lisina 9 de
la histona H3 favorece la incorporacin de la
protena HP1 creando una configuracin
condensada incompatible con la expresin gentica. Las metilaciones, acetilaciones/deacetilaciones y fosforilaciones de las histonas,
ocurren en combinaciones especficas que podran estar definiendo un nuevo cdigo de
histonas que actuara de alguna manera superponindose al cdigo de tripletas del ADN
(fig. 18.1).
2.2. PATRONES DE METILACIN DEL GENOMA DE

MAMFEROS
Los genomas de los mamferos tienen unos

patrones normales de metilacin que varan de
forma especfica durante las diferentes etapas
del desarrollo. En el oocito fecundado el genoma est sustancialmente metilado, aunque hay
diferencias en los niveles de metilacin entre los
alelos paterno y materno de algunos genes. Se
inicia entonces un proceso global de demetilacin que acaba al final del estadio de mrula
o comienzos de blstula. En el estadio de
pregastrulacin el genoma comienza de nuevo a
metilarse (metilacin de novo) aunque se producen diferencias en el grado de metilacin de
unos linajes celulares a otros. El genoma alcanza sus niveles ms altos de metilacin en las
clulas somticas adultas, y se mantendr as
256
GENTICA
Fig. 18.1. Fundamentos moleculares de los procesos epigenticos (basado en Bird, 2001. Science, 294).
durante las divisiones celulares gracias a las

metilasas de mantenimiento. Las clulas derivadas del trofoblasto (que darn lugar a la placenta, saco embrionario, etc.) tienen niveles de
metilacin inferiores (submetiladas). Las clulas
germinales primordiales permanecen por el
contrario no-metiladas hasta que se produce la
diferenciacin gonadal. Entonces comienza una
metilacin de novo para que los genomas del
espermatozoide (sobre todo) y el oocito estn
densamente metilados (fig. 18.2). Se interpreta
que los patrones de metilacin del ADN de
mamferos constituyen un mecanismo de
defensa frente a los transposones y son una forma de perpetuar unos patrones diferenciales de
expresin gnica.
El anlisis de diploidas y disomias uniparentales, y la observacin de mutaciones que
causan un efecto diferencial cuando suceden en
el genoma de organismos con diferente sexo,
demuestran que hay diferencias significativas
entre los patrones y niveles de metilacin entre
los genomas paterno y materno. Cuando se

reemplaza el proncleo masculino de un oocito
de ratn por un segundo proncleo materno se
obtiene un ginogenote diploide (con dos genomas maternos) que tiene graves deficiencias en
los tejidos extraembrionarios aunque el embrin
sea relativamente normal. Sin embargo cuando
se obtiene un androgenote (dos genomas
paternos) el embrin del ratn parece mucho
ms afectado que los tejidos extraembrionarios.
Las diploidas uniparentales se pueden producir
tambin (aunque con muy escasa frecuencia) de
modo natural. En este caso las concepciones
androgenticas se desarrollan como molas
hidatiformes (masas de membrana corinica y
otras estructuras placentarias), y los ginogenotes
dan lugar a teratomas ovricos (masas de tejidos
adultos desorganizados incluyendo hueso,
cartlago, piel, etc.) pero no suelen producir estructuras extraembrionarias. Por otro lado las
disomias uniparentales de una regin concreta
del cromosoma 15 humano se pueden traducir
GENTICA MOLECULAR
en el sndrome de Angelman (si la disomia es de

origen paterno) o en el sndrome de PraderWilli (cuando las dos copias del 15 son de
origen materno).
3. Inactivacin de un cromosoma X
en la lnea somtica de las hembras
de mamfero
Se trata de uno de los ejemplos ms paradigmticos de fenmeno epigentico, y consiste

en la inactivacin al azar, con carcter reversible, de una fraccin significativa de los alelos
de uno de los dos cromosomas X en la lnea somtica de las hembras de mamferos. Se podra
considerar que constituye un mecanismo de
compensacin de la dosis gnica entre ambos
sexos, porque tiende a equilibrar la dosis
gnita entre las hembras (XX) y los machos
que slo tienen un cromosoma X (XY). Los genes del cromosoma X que escapan a la inactivacin son los que estn presentes en las regio-
257
nes de homologa con el cromosoma Y (PAR),

y aquellos cuya dosis no parece especialmente
relevante. Sorprendentemente hay un misterioso mecanismo de recuento que garantiza
la permanencia de un solo cromosoma X activo
por cada dos complementos haploides.
Este fenmeno ocurre en las primeras etapas
del desarrollo embrionario (se completa al final
del estadio de blstula) y consiste en un
autntico proceso de heterocromatinizacin
facultativa porque se produce la inactivacin
de muchos genes, hay un retraso en la replicacin del ADN, cambian los patrones de tincincondensacin (el X inactivado forma lo que se
denomina cuerpo de Barr, distinguible en los
ncleos interfsicos), y el cromosoma X que se
inactiva es elegido al azar entre el de
procedencia paterna o materna (con excepcin
de los tejidos extraembrionarios y los mamferos marsupiales donde se inactiva siempre el X
de origen paterno). En cualquier caso, la decisin adoptada por una clula se transmite clonalmente a su descendencia, pudiendo generar-
Fig. 18.2. Patrones de metilacin del genoma de mamferos.
258
GENTICA
Fig. 18.3. Inactivacin del cromosoma X en la lnea somtica de hembras de mamferos (1). a) Mecanismo
de recuento. b) El carcter aleatorio puede traducirse en mosaicismo gentico.
se situaciones de mosaicismo o variegacin en

los organismos adultos. Finalmente, la inactivacin del X revierte en espermatogonias y
oogonias de modo que cualquier cromosoma X
presente en un espermatozoide o en un oocito ha
sido ya reactivado antes de la fecundacin. Este
proceso de inactivacin reversible se conoce
tambin con el nombre de lyonizacin por la
contribucin decisiva de Mary Lyon al
conocimiento de sus mecanismos (fig. 18.3).
El anlisis de las reordenaciones cromosmicas del cromosoma X de mamferos que
afectaban el proceso de lyonizacin permiti
demostrar la existencia de una regin especfica
en Xg13 capaz de controlar el inicio y la
propagacin del mismo. Sera como el centro de
inactivacin del cromosoma X (Xic). Sor
prendentemente esta regin contiene un gen

(Xist) que se expresa exclusivamente en el X
inactivo, y dirige la sntesis de una molcula
funcional de ARN (no-codificante) que ejerce
un efecto iniciador de la inactivacin (efecto en
cis) sobre los alelos que se inactivan. Sin
embargo, la situacin no parece tan sencilla
porque hay otros genes en esa misma regin
implicados en la eleccin del X que se han de
inactivar (el gen Xce, X-controlling-element),
otros que regulan la expresin de Xist (como el
gen Tsix, que se transcribe a partir de la cadena
opuesta a la utilizada por Xist), una secuencia de
ADN susceptible de ser metilada (DMR) y,
posiblemente, una secuencia potenciadora (enhancer) capaz de bloquear la expresin de Xist
cuando DMR no est metilada (fig. 18.4). Por
GENTICA MOLECULAR
ltimo, el mantenimiento del estado inactivado

se explica esencialmente por la metilacin de
las regiones reguladoras de los genes, la hipoacetilacion de sus histonas, y la acumulacin de
una variante histnica (macroH2A). Se trata por
tanto de un proceso epigentico que se dispara
por la expresin de un ARN funcional nocodificante.
4.
Los fenmenos de
imprinting o marcado
Se sabe desde hace muchos aos que el cruce entre una yegua y un asno produce un mulo,
pero que el cruzamiento recproco deriva en un
burdgano con orejas ms cortas y patas ms
robustas. La explicacin de estas diferencias, y
de otros muchos ejemplos que se comentarn
ms adelante, radica en la expresin diferencial
de los alelos paternos y maternos de algunos
genes. Se trata de los fenmenos de imprinting o marcado (tambin llamados mar-
259
cado gamtico) que resultan en la expresin

mono-allica de genes concretos en todos o una
parte de los tejidos de un adulto. Se conocen
ms de treinta genes afectados por este fenmeno epigentico en el ser humano y el
ratn (http://www.mgu.har.mrc.ac.uk/imprinting), pero tambin se han descrito en algunos
insectos y en plantas con semillas. No se han
detectado en Drosophila o en Caenorhabditis
elegans cuyos genomas no tienen niveles significativos de metilacin. En los mamferos los
genes de origen paterno afectados se expresan
preferencialmente en trofoblastos y membranas
extraembrionarias, y los de origen materno en el
embrin. La mayora de los genes son autosmicos aunque se podran citar dos ejemplos
en el cromosoma X (el gen Xist y otro que
controla alguna funcin cognitiva descubierto
en el sndrome de Turner). Los genes autonmicos marcados son esenciales para el desarrollo prenatal, en el origen de determinados linajes celulares, y pueden influir en algunos aspectos del comportamiento (el gen Mest con
Fig. 18.4. Inactivacin del cromosoma X en la lnea somtica de hembras de mamferos (2).
a) Los genes que se inactivas aparecen en rojo y subrayados. b) Mecanismo molecular de la inactivacin.
260
GENTICA
Fig. 18.5. Regin del cromosoma 11 humano afectada por el fenmeno de imprinting.
trola la capacidad de cuidado y arropamiento de

las cras de ratn). En el Genoma Humano hay
dos grupos de genes marcados que han
sido bastante bien caracterizados. Uno de ellos
contiene los genes Ig/2 y H19 en una regin de
1 Mb en 11p15 (fig. 18.5). El otro caso se
refiere una regin de 2.3 Mb en 15g12. Resulta
curioso que este tipo de regiones marcadas
suela tener parejas de genes que se inactivan de
forma alternativa en los dos sexos, unas
secuencias con patrones diferenciales de metilacin, y un gen que codifica un ARN funcional
no codificante.
5. Alteraciones de los procesos
epigenticos y enfermedades
humanas
Los procesos epigenticos suceden de manera absolutamente normal y necesaria durante

el desarrollo, y su alteracin puede ser la causa
de algunas enfermedades conocidas. El sndro
me ICF (immunodefiency, centromeric instability, facial anomalies) se caracteriza por la sub
metilacin del ADN satlite y la descondensacin de regiones especficas de los cromoso
mas, y se debe a mutaciones en el gen de la metilasa DNMT3b (encargada especficamente de

metilar el ADN satlite). El sndrome de Rett se
debe a una mutacin en el gen de una protena
de unin a ADN metilado (MeCP2). El
sndrome de Beckwith-Wiedemann se puede
atribuir a la herencia en exclusiva (ya sea por
delecin o por disomia unipatental) de un
cromosoma 15 materno. La delecin del cromosoma 11 paterno produce el sndrome de
Prader-Willi, y la del materno el sndrome de
Angelman (fig. 18.5).
Los cambios en los patrones de metilacin
del ADN han sido relacionados con el desarrollo de procesos neoplsicos. As, la hipermetilacin de las secuencias promotoras parece ser
la responsable de la inactivacin de un buen
nmero de genes supresores de tumores, sobre
todo en cnceres espordicos: p16/INK4a (en
linfomas y muchos tumores slidos), E-caderina
(en carcinomas de mama, gstricos y de tiroides), BRCA1 (en carcinoma de mama), etc.
(fig. 18.6). Por otro lado se han descrito reactivaciones de genes marcados (IGF2, H19 y
p57/Kip2)
en algunos casos de tumores de
Wilms, hepatoblastomas, carcinomas uterinos,
de esfago, de pulmn, de prstata, etc. En
GENTICA MOLECULAR
cualquier caso, aunque no se alterasen los patrones normales de metilacin, la metilacin de

las citosinas estara siempre favoreciendo su
desaminacin espontnea y, por tanto, habra
una clara tendencia a la produccin de transiciones (C/G a T/A).
Desde la obtencin de la primera oveja clnica (Dolly) se ha generalizado la produccin de
organismos clnicos mediante trasplante nuclear
a partir de clulas diferenciadas del adulto. Sin
embargo slo un porcentaje muy pequeo
consiguen llegar a trmino (la mayora no
sobrepasan el estadio de blstula), y suelen
presentar una gama bastante amplia de
anormalidades. Incluso cuando se consigue
completar el proceso de desarrollo, los organismos clnicos que se han obtenido hasta la
fecha empiezan a presentar indicios de envejecimiento precoz. Habindose descartado otras
explicaciones, como el acortamiento de los telmeros, los datos actuales apuntan que la reprogramacin epigentica incorrecta de los
ncleos somticos trasplantados podra ser la
causa principal de todos los problemas mencionados.
6.
261
Silenciamiento gentico mediado

por ARN
El silenciamiento mediado por ARN

constituye tambin un mecanismo epigentico
que est teniendo una importancia creciente en
el control de la expresin gentica. Se trata de
pequeas molculas de ARN (21-25 pb),
resultantes de la degradacin de ARNs de
cadena doble, que pueden provocar la inactivaein (silenciamiento) de genes especficos
con secuencias complementarias. La inactivacin se puede producir tanto a nivel genmico
(a travs de la metilacin del ADN de algunos
genes de plantas mediante unas metilasas dependientes de ARN), como citoplasmtico
(degradacin de los ARNm con secuencias
homlogas). Se habla de Interferencia mediada
por ARN o de Inactivacin genica
postranscripcional mediada por ARN. Se ha
demostrado que los ARNs de cadena doble se
pueden producir mediante transcripcin de repeticiones invertidas de ADN, por la sntesis
simultnea de ARN sentido y anti-sentido, durante las replicaciones virales, o mediante
FIG. 18.6. Inactivacin de un gen supresor humano hipottico mediante hipermetilacin de sus promotores.
a) Forma activa. b) Forma inactiva. A: activadores; CA: coactivadores; DNMTs: ADN metil- transferasas; MBP:
protena de unin a ADN metilado; HA: acetilasas de historias; HDCA: deacetilasa de histonas; FTs: factores de
transcripcin basales; R: represores; CR: correpresores; CTCF y GCF2: protenas de unin a otros elementos re
guladores; Pro: promotor (basado en Jones y Takai, 2001. Science, 293: 1.068).
262
ARN polimerasas dependientes de ARN. Las

caractersticas de este tipo de procesos se han
deducido esencialmente del estudio de mutantes
de Neurospora, C. elegans, Arabidopsis y
Drosophila. Se han identificado helicasas (para
abrir los ARN de cadena doble), ribonucleases,
ARN polimerasas, etc., y se conocen incluso
algunos tipos de inhibidores de los procesos en
plantas. El silenciamiento mediado por ARN
podra ser un mecanismo esencial de defensa
frente a las inserciones de secuencias forneas
(transposones, secuencias retrovirales, etc.), y se
sabe que est implicado en algunos aspectos del
desarrollo normal de las plantas.
GENTICA
Baylin, S. B. y Herman, J. G. (2000): DNA hypermethylation in tumorigenesis. Epigenetics
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Stracham, T. y Read, A. P. (1999): Human Molecular genetics, 2 (2.a ed.), Bios.
Captulo
19
La tecnologa del ADN recombinante

1.
Construccin de molculas de ADN Recombinante
2.
Enzimas de Restriccin
3.
Vectores de Clonaje
4.
Estrategias de Clonaje
5.
Genotecas o Librerias de ADN
6.
Utilizacin del ADN Clonado: <<Southern y Northern blots>>
7.
Deteccin de Genes Clonados
8.
Secuenciacin
9.
Amplificacin en Cadena de la polimerasa
264
GENTICA
Uno de los objetivos esenciales de la Gentica es estudiar la estructura y funcin de los genes. Para ello resulta imprescindible conseguir
aislar dichos genes y caracterizar sus secuencias
nucleotdicas. Una pieza clave en el aislamiento
de secuencias gnicas fue el desarrollo de una
serie de procedimientos experimentales que
permiten unir fragmentos de ADN de distinta
procedencia en condiciones que pueden ser incluso aptas para la expresin gentica. Este conjunto de tcnicas reciben el nombre genrico de
tecnologa del ADN recombinante o ms coloquialmente ingeniera gentica.
1. Construccin de molculas de ADN
recombinante
El procedimiento de construccin de molculas de ADN recombinante se inicia con la extraccin de ADN del organismo objeto de estudio, u organismo donante, y el posterior frac-
cionamiento de ese ADN con enzimas de restriccin, que producen cortes especficos en el
ADN. A continuacin tiene lugar la insercin de
los fragmentos de ADN procedentes del organismo donante en pequeas molculas de
ADN capaces de replicarse autnomamente, o
vectores, las cuales permiten la amplificacin
selectiva de dichos insertos en hospedadores
adecuados. A las molculas de ADN que resultan de la unin de un inserto y de un vector se
las define como ADN recombinante porque representan combinaciones de ADN nuevas que
resultan de la unin de fragmentos de ADN de
distinta procedencia. Las molculas de ADN
recombinante se usan entonces para transformar
bacterias y generar numerosas copias de s
mismos, amplificando as los fragmentos de
ADN deseados. Este proceso de amplificacin
recibe el nombre donacin (fig. 19.1). La razn
del nombre surge del hecho de que una nica
bacteria transformada con un nico vector
recombinante es capaz de dar lugar a una colo-
Fig. 19.1. Proceso de construccin y clonacin de molculas de ADN recombinante.
GENTICA MOLECULAR
nia de clulas o clon, todas ellas portadoras del

mencionado vector.
El concepto de ADN recombinante explicado en este captulo hace referencia a un proceso
artificial de unin de molculas de ADN para
distinguirlo de aquel que ocurre de modo natural en el proceso de recombinacin gentica.
2. Enzimas de restriccin
Los trabajos de Arber sobre los fenmenos

de modificacin y restriccin en bacterias
durante los aos sesenta, condujeron al
descubrimiento de las enzimas que cortan en
secuencias especficas el ADN. Ciertas estirpes
bacterianas son capaces de degradar el ADN
procedente de fagos infectivos, a menos que el
ADN est modificado por metilacin en
determinadas secuencias. La degradacin se
produce mediante nucleasas especficas o
enzimas de restriccin, denominadas de esta
manera porque restringan la infeccin de
fagos entre cepas bacterianas.
Las enzimas de restriccin se pueden agrupar en tres categoras (I, II y III) dependiendo
del tipo de secuencia que reconocen, la natura-
265
leza del corte que producen en el ADN y la

naturaleza del enzima. Los tipos I y 111 no son
tiles para la donacin de genes porque cortan
el ADN por puntos distintos al de
reconocimiento, dando lugar a patrones de corte
aleatorios. Por el contrario, las de tipo 11
reconocen sitios especficos y cortan por esos
puntos. Estos sitios de reconocimiento son
repeticiones invertidas que definen secuencias
palindrmicas, esto es, ambas cadenas del sitio
de reconocimiento tienen la misma secuencia
nucleotdica pero en orientaciones opuestas (fig.
19.2). A partir de este momento nos
centraremos en el estudio de las enzimas de
restriccin de tipo 11. stas cortan el ADN de
dos maneras diferentes. Por un lado estn
aquellas enzimas que cortan ambas cadenas por
el mismo sitio generando extremos romos, y por
otro, nos encontramos con aquellas enzimas que
cortan las cadenas del sitio de reconocimiento
en puntos distintos, dando lugar a colas de
cadena sencilla en los sitios de corte (extremos
cohesivos) (fig. 19.2). En 1978, Arber, Nathans
y Smith recibieron el Premio Nobel de
Fisiologa y Medicina precisamente por sus
trabajos pioneros en el estudio de las enzimas de
restriccin.
Fig. 19.2. El mecanismo corte de algunas enzimas de restriccin genera extremos cohesivos.
266
3. Vectores de clonaje
Los vehculos de clonacin o vectores que

facilitan la amplificacin de los fragmentos
donados tienen que cumplir ciertos requerimientos. Deben ser molculas relativamente
pequeas de manera que sean fcilmente manipulables. Deben contener un origen de replicacin que permita su propia replicacin y la del
fragmento insertado dentro de la clula hospedadora. Deben existir sitios de restriccin adecuados que permitan la insercin del fragmento
de ADN que se pretende clonar. Por ltimo,
estos vectores deben ser identificados con facilidad y deben permitir una fcil recuperacin de
la molcula hbrida o recombinante. Existen
distintos tipos de vectores que pueden ser usados en los experimentos de clonaje: plsmidos
bacterianos, fago , csmidos, fagos ADN de
cadena sencilla, YACs, BACs y PACs.
Los plsmidos bacterianos son pequeas
molculas circulares de ADN que se replican
autnomamente dentro de la clula. Una de las
ventajas que ofrecen como vectores los plsmidos es su capacidad de conferir resistencia a
antibiticos a la clula hospedadora. Ello permite la seleccin directa de las clulas que incorporan y mantienen los plsmidos de ADN
recombinante. El principal inconveniente es el
tamao del inserto que no debe exceder de unas
15 kb. Plsmidos en replicacin con insertos
mayores tienden a perderlos, ya que la seleccin
favorece a los plsmidos ms pequeos.
Este problema puede evitarse utilizando el
fago como vector, ya que en su cpsida se
puede empaquetar una molcula de ADN de
unas 50 kb. Adems, la regin central del genoma del fago al no ser necesaria para la replicacin o el empaquetamiento en E. coli puede
ser eliminada. Esto permite clonar fragmentos
de unos 15 a 20 kb. El ADN recombinante puede transfectarse a E. coli o ser empaquetado in
vitro. Por cualquiera de los dos mtodos no se
necesita seleccin de clones recombinates, ya
que la mera presencia de una placa de lisis en un
cultivo bacteriano es indicativa de la presencia
de un fago que contiene el inserto.
Los csmidos son unos vectores hbridos
entre fagos y plsmidos que permiten incre-
GENTICA
mentar la longitud del fragmento a donar hasta

unas 45 kb. Los csmidos se generan incorporando a un plsmido trozos especiales del ADN
del fago necesarios para su empaquetamiento, sitios cos. Los csmidos tienen la ventaja de
que se mantienen in vivo en forma de plsmido
y permiten su purificacin por empaquetamiento in vitro.
Los fagos ADN de cadena sencilla tambin
se emplean como vectores de clonaje ya que tras
la infeccin en E. coli se convierten en formas
replicativas de cadena doble que pueden ser
posteriormente purificadas y utilizadas en
clonacin. Este tipo de fagos, en particular el
M13, adecuadamente manipulados (insercin
del gen bacteriano lacZ, que permite su seleccin), son muy tiles para la secuenciacin por
el mtodo de Sanger de un fragmento de ADN
donado.
Los YACs (del ingls yeast artificial chromosome), como vectores de clonaje, surgen
como consecuencia de la caracterizacin en levaduras de las secuencias centromricas, telomricas y ARS (del ingls autonomous replication sequences), presentes estas ltimas en el
plsmido de 2m (6,3 kb) de levaduras, que
permiten la construccin de cromosomas artificiales.
Los BACs (del ingls bacterial artificial
chromosome) son unos vectores, que al igual
que los YACs, se utilizan para clonar fragmentos de ADN de gran tamao (100-300 kb). La
base de este tipo de vector es el plmido bacteriano de 7 kb conocido como plsmido F. Aunque la capacidad de insercin de los BACs es
menor que la de los YACs, los BACs tienen varias ventajas sobre los YACs. Por un lado, pueden ser aislados y manipulados como plsmidos
bacterianos y, por otro, la formacin de insertos
hbridos es mucho menos frecuente que cuando
se utilizan los YACs.
Los PACs (del ingls bacteriophage PIderived artificial chromosome) son unos
vectores que combinan caractersticas de otros
vehculos de clonaje como el fago Pl y el plsmido F bacteriano. Los PACs pueden aceptar
insertos de 70-100 kb y frente a los BACs tienen la ventaja de que se pueden seleccionar directamente
los
clones
recombinantes.
GENTICA MOLECULAR
4. Estrategias de clonaje
Existen bsicamente tres mtodos para crear

molculas de ADN recombinante: por
generacin directa de extremos cohesivos, por
unin de extremos poli-dA/poli-dT y por unin
de extremos romos. El primer mtodo es utilizado en los casos en los que las enzimas de restriccin producen extremos cohesivos en el inserto y en el vector, facilitando de esta manera
la formacin de molculas de ADN recombinante (fig. 19.2a). En aquellos casos en los que
las enzimas de restriccin producen extremos
romos la unin de molculas de inserto y vector
se puede realizar utilizando bsicamente dos
tipos de estrategias: 1) la unin de extremos
poli-dA/poli-dT usando una enzima, la
transferasa terminal de timo de ternera, que
aade un segmento de poli-dA a los extremos 3'
del ADN a insertar y de un segmento de poli-dT
a los extremos 3' del vector, creando as
extremos cohesivos, y 2) la unin de molculas
de inserto y vector mediante la ADN ligasa del
Jago T4 que tiene la capacidad de pegar extremos romos. Esta enzima, adems, permite aadir fragmentos de ADN de cadena doble fabricados sintticamente y que contienen sitios de
restriccin. Estos conectores (o linkers segn la
terminologa inglesa) son muy tiles porque
permiten la creacin de sitios de restriccin, que
pueden cortarse luego con la enzima apropiada
para generar un fragmento con extremos
cohesivos.
5. Genotecas o libreras de ADN
En un sentido amplio de la palabra, una genoteca o librera de ADN es una coleccin de

fragmentos de ADN clonados que en conjunto
incluyen el genoma completo de un organismo.
Existen diferentes tipos de libreras dependiendo de cual sea el tipo de vector utilizado y el
origen de los fragmentos de ADN clonados.
Con
respecto a este segundo aspecto
podemos clasificar las genotecas en libreras
de ADN genmico o de ADNc. En el primer
caso se parte de una muestra de ADN
aislado que posteriormente es digerido
con una determinada enzima de restric-
267
cin para generar los distintos fragmentos que

sern clonados. En el segundo caso partimos de
una muestra de ARNm (ARN mensajero) que es
copiada a molculas de ADNc (ADN complementario) monocatenario mediante la transcriptasa inversa que utiliza un oligo-dT como
cebador (fig. 19.3). La transcriptasa inversa en
condiciones in vitro tiene la capacidad de generar un bucle hacia el extremo 5' del molde de
ARNm, el cual, despus de la degradacin de
dicho ARN con NaOH, forma un cebador para
que sea utilizado por la ADN polimerasa I y origine un ADNc bicatenario. Por ltimo, la nucleasa SI se encarga de eliminar el mencionado
bucle generando molculas de ADNc con sus
dos extremos libres que sern posteriormente
donadas. Debemos destacar que los clones de
ADNc son copias de los ARNm maduros, mientras que los clones de ADN genmico representan la estructura real de un gen (intrones y
exones). Adems de los dos tipos bsicos de genotecas, existen las libreras de expresin construidas a partir de ADNc con vectores de expresin (aquellos que permiten la transcripcin y
traduccin de genes clonados).
6. Utilizacin del ADN donado:
Southern y Northern blots
Una de las principales aplicaciones que tiene el ADN donado es su utilizacin como sonda
para detectar y aislar molculas de ADN especficas que se encuentren dentro de una mezcla de cidos nucleicos. Esta estrategia requiere,
como paso previo, la separacin de los distintos
cidos nucleicos que componen la mezcla
mediante un procedimiento conocido como
electroforesis. Esta tcnica consiste bsicamente
en depositar la mezcla de ADN en el pocillo de
un gel (de agarosa o de poliacrilamida segn los
casos), situado cerca del ctodo de un campo
elctrico, que cuando se establezca producir el
movimiento de las molculas de ADN a travs
del gel hacia el nodo a una velocidad que
depende de su tamao. Si la mezcla la
componen molculas de diferente tamao, stas
se separarn en bandas especficas. Las bandas
obtenidas despus de que hemos lleva-
268
GENTICA
FIG. 19.3. Sntesis de ADNc a partir de ARNin.
do a cabo la electroforesis se pueden visualizar

tiendo el gel mediante distintos mtodos
(bromuro de etidio o nitrato de plata, dependiendo de cual sea el soporte utilizado para hacer el gel).
La digestin de ADN genmico con enzimas de restriccin y la posterior separacin de
los fragmentos digeridos cuando se someten a
electroforesis en gel produce multitud de molculas de ADN de diferentes tamaos que no
permiten la aparicin de bandas definidas. Sin
embargo, utilizando una sonda de ADN clonado
podemos identificar un fragmento especfico
de la mezcla por hibridacin mediante
una tcnica de transferencia a una membrana de

nylon o nitrocelulosa conocida como Souther
blot (fig. 19.4). Esta tcnica de transferencia
puede ser igualmente aplicable a la
identificacin de una molcula especfica de
ARN que se haya separado de otras mediante
electroforesis en gel. En este caso la tcnica se
denomina, para distinguirla de la anterior,
Northern blot.
Existe una tcnica paralela, conocida como

Western blot que consiste en la transferencia de
protenas previamente separadas en un gel y que

permite la identificacin de protenas especficas mediante el uso de anticuerpos.
GENTICA MOLECULAR
7. Deteccin de genes cionados
Para detectar un gen clonado entre una coleccin de fragmentos de ADN donados de una
genoteca hay que utilizar una sonda de ADN
especfica, previamente marcada, que seleccione
aquellos clones que contienen el gen de inters.
De esta explicacin surge una paradoja
interesante. De dnde viene el ADN que
vamos a utilizar como sonda para detectar y
aislar un determinado gen? Si se dispone de un
ADN como sonda complementario al gen de
inters es porque se tiene aislado dicho gen y no
hara falta clonarlo. La pregunta que uno se
plantea es de dnde se obtiene el ADN que se
utiliza como sonda para detectar genes cionados? Existen varias maneras de obtenerlo.
1. Hibridacin con sondas heterlogas.
Esta estrategia consiste en utilizar una sonda
269
correspondiente al mismo gen que se desea aislar pero de otro organismo e hibridarla con el
ADN clonado candidato.
2. Hibridacin con ARNm/ADNc. Este
mtodo consiste en hibridar el ADN clonado
candidato contra un Northern blot que contiene
un panel de ARNm aislados de diferentes tejidos. Una hibridacin positiva nos estara indicando la presencia de un gen dentro del fragmento clonado. El siguiente paso sera analizar
una de librera de ADNc con el fragmento clonado anteriormente mencionado. Si el gen que
queremos aislar sospechamos que se tiene que
expresar en un determinado tejido podemos ir
directamente a la construccin de una librera de
ADNc de ese tejido para, posteriormente,
proceder a la hibridacin con el ADN donado
candidato.
3. Seleccin de ADNc. Esta tcnica consiste
en la purificacin repetida de un sub-
Fig 19.4. Southern blot.
270
grupo de clones de ADN e hibridarlos con una

poblacin de ADNc dada. El procedimiento
tiene tres partes: 1) al clon de ADN genmico
seleccionado se le aaden unas secuencias nucleotdicas que nos van a permitir disear unos
oligonucletidos marcados con biotina, los
cuales sern utilizados, a su vez, como cebadores en una reaccin de PCR posterior (esta tc
nica se explicar en detalle al final del captulo);
2) una coleccin de clones de ADNc son
amplificados por PCR utilizando como cebadores oligonucletidos complementarios a las
regiones del vector que flanquean el ADNc
clonado, y 3) hibridacin de los productos de
PCR obtenidos en los dos tipos de amplificaciones con PCR, y seleccin de los clones hbridos. Esta operacin se repite ms veces con
objeto de enriquecer un determinado tipo de
ADNc.
4. Deteccin de islas CpG. Muchos genes de
organismos superiores llevan asociados en su
extremo 5' secuencias ricas en GC que se
encuentran hipometiladas y que se caracterizan,
adems, por presentar mltiples dianas de
restriccin ricas en GC (p. ej., SacII, Eagl o
BssHII), las cuales se encuentran representadas
en el genoma con una frecuencia muy baja. El
mtodo consiste en hibridar el ADN clonado
candidato contra un Southern blot que contiene
muestras de ADN genmico digerido con las
mencionadas enzimas de restriccin.
5. Exon trapping. Este mtodo se basa en
la identificacin de exones en un ADN
genmico clonado, mediante la subclonacin de
ese ADN en un vector de expresin (por
ejemplo un plsmido que contenga una secuencia promotora de SV40 y dos secuencias exnicas eucariticas diferentes correspondientes al
inicio y final de la transcripcin) y la transfeccin en una lnea celular eucaritica apropiada
(dirige el mecanismo de eliminacin de intrones). Los patrones obtenidos despus de producido el mecanismo de eliminacin de intrones
se puede distinguir mediante PCR, utilizando
como cebadores oligonucletidos diseados a
partir de las secuencias de uno de los dos
extremos de cada uno de los dos exones del
vector de expresin.
GENTICA
6. Bsqueda de dominios peptdicos conservados. En el caso de que el gen de inters se

sospeche que puede tener algn tipo de homologa funcional con respecto al de otro organismo, y del que, adems, sea conocida la secuencia de aminocidos de la protena, se puede
sintetizar artificialmente una secuencia nucleotdica complementaria, que incluya determinados dominios peptdicos conservados, y
que sirva como sonda. Para la construccin de
dicha sonda se disean oligonucletidos degenerados para amplificar por PCR las secuencias
nucleotdicas complementarias.
8. Secuenciacin
Bsicamente existen dos mtodos que permiten determinar secuencias nucleotdicas, el

qumico desarrollado por Maxam y Gilbert
(1977) y el enzimtico (o mtodo del didesoxinucletido) desarrollado por Sanger y colaboradores (1977). A Gilbert y Sanger les fue concedido el Nobel de Qumica en 1980, precisamente por haber desarrollado independientemente mtodos de secuenciacin del ADN. Este
galardn fue compartido con Berg quien lo
recibi por haber construido las primeras
molculas de ADN recombinante (insercin del
genoma del virus SV40 en el fago A). El mtodo
qumico consiste en la rotura del ADN por bases
especficas (fig. 19.5a), mientras que el
enzimtico implica la sntesis de ADN. La
principal novedad del segundo mtodo es la
utilizacin de desoxinucletidos que carecen del
grupo OH en la posicin 3' de la desoxirribosa.
Esto hace que no pueda continuar la polimerizacin de la cadena de ADN una vez incorporado el nucletido correspondiente (fig.
19.5b). Cualquiera de los mtodos de secuenciacin comienza con una coleccin de fragmentos de ADN marcados en uno de los extremos. Este marcaje suele hacerse empleando
istopos radiactivos (32P). Actualmente se utilizan sistemas de secuenciacin automatizados,
utilizando como mtodo de marcaje compuestos
fluorescentes. En estos casos cada uno de los
didesoxinucletidos se marcan con un distinto
fluorocromo.
GENTICA MOLECULAR
Fig. 19.5a. Mtodo qumico de secuenciacin de cidos nucleicos.
Fig. 19.5b. Secuenciacin de cidos nucleicos por el mtodo del dideoxinucletido.
271
272
GENTICA
Fig. 19.6. Reaccin en cadena de la polimerasa.
9.
Amplificacin en cadena
de la polimerasa
En 1983 Mullis (galardonado con el Premio

Nobel de Qumica en 1993) desarroll un
mtodo denominado reaccin en cadena de la
polimerasa o PCR (del ingls polymerase chain
reaction) que permite obtener un gran nmero
de copias de un gen o secuencia de ADN
mediante sucesivas rondas de sntesis llevadas a
cabo por una ADN polimerasa especial que no
se degrada a altas temperaturas, la Taq
polimerasa (aislada inicialmente de la bacteria
Thermus aquaticus). Esta tcnica puede ser
utilizada para amplificar cualquier tipo de ADN
que est presente en una clula, por muy
pequea que sea la cantidad o por muy pobre
que sea la calidad. El nico requisito es que se
conozca la secuencia de nucletidos que
flanquean la secuencia de inters. Esta informacin es necesaria para construir oligonu-
cletidos complementarios que servirn como

cebadores para que acte la Taq polimerasa.
Cada ciclo de sntesis consta de tres etapas:
desnaturalizacin del ADN molde, unin del
cebador a la cadena molde y sntesis del ADN
(fig. 19.6). Las distintas etapas de cada ciclo
estn controladas por cambios en las temperaturas, ya que stas son diferentes en cada una de
las mencionadas etapas. Los ciclos tienen lugar
de manera continua y sin interrupcin en los
aparatos de PCR o termocicladores que son
simplemente baos de agua programables.
Adems, no es necesario aadir componentes
nuevos a la mezcla de reaccin durante todo el
proceso. En nuestros das, la tcnica de PCR se
emplea en los laboratorios de gentica molecular de modo rutinario y con diferentes usos por
su capacidad para amplificar rpidamente regiones de ADN de inters, que de otro modo
requeriran mtodos ms laboriosos y prolongados.
GENTICA MOLECULAR
Arber, W. y Dussoix, D. (1962): Host

specificity of DNA produced by E. coli. I.
Host controlled modification of phage
lambda, J. Mol. Biol., 5: 18-36.
Dussoix, D. y Arber, W. (1962): Host specificity of DNA produced by E. coli. II. Control over acceptance of DNA from infec-
273
ting phage lambda, J. Mol. Biol., 5: 37-49.

to Genetic Analysis, W. H. Freeman.
Nathans, D. y Smith, H. O. (1975): Restriction
endonucleases in the analysis and
restructuring of DNA molecules, Ann. Rev.
Biochem., 44: 273-293.
molecular genetics, 2, Bios Sci.
Captulo
20
Aplicaciones de la tecnologa del

ADN recombinante
1.
Mutagnesis in Vitro
2.
Identificacin Gentica
3.
Gentica Inversa
4.
Organismos Transgnicos
4.1. Animales Transgnicos
4.2. Plantas Transgnicas
5.
Modificacin de Secuencias gnicas Mediante Recombinacin

Homloga: Ratones Knockout y Knockin
6.
Expresin de Genes Eucariticos en Bacterias
7.
Diagnstico Gentico y Terapia Gnica

7.1. Dignstico Gentico
7.2. Terapia Gnica
276
En este captulo examinamos las distintas

aplicaciones que pueden tener la creacin de
molculas de ADN recombinante. En primer
lugar, se hablar de la posibilidad de crear alteraciones en sitios especficos del ADN (mutagnesis dirigida), mediante diferentes estrategias relacionadas con la tecnologa del ADN
recombinante y su importancia como mtodo
para el estudio de los efectos que ejercen las
mutaciones sobre la funcin gnica. Discutiremos igualmente cmo ha contribuido este tipo
de tecnologa a la identificacin de genes.
Tambin nos referiremos a la utilizacin de genes modificados para cambiar las caractersticas
de bacterias, animales o plantas (organismos
transgnicos). En el caso de las enfermedades
genticas humanas, la tecnologa del ADN
recombinante tiene una gran relevancia por
cuanto que ofrece la posibilidad de corregir los
defectos genticos asociados con este tipo de
enfermedades.
1. Mutagnesis in vitro
Las mutaciones son de un valor incalculable

para el anlisis gentico, pues nos permiten
llegar a determinar qu nucletidos dentro de un
gen son imprescindibles para una funcin
concreta. Ahora bien, como veremos en captulos posteriores, aunque los agentes mutagnicos
tienen un mecanismo especfico de accin (por
ejemplo, la desaminacin de citosinas), stos
producen las mutaciones al azar (cualquier
citosina puede alterarse, en principio, con la
misma probabilidad). Con el advenimiento de la
tecnologa del ADN recombinante se ha podido
programar
una
alteracin
especfica
(mutagnesis dirigida) sobre un gen concreto,
previamente aislado y clonado (mutagnesis in
vitro) que el investigador est interesado en estudiar. De esta manera, con la mutagnesis dirigida se puede llegar a saber, de un modo ms
sencillo, qu parte especfica de un gen es la
responsable de una determinada funcin. Los
trabajos pioneros en el campo de la mutagnesis
dirigida pertenecen al grupo de Michael Smith,
quien recibi el premio Nobel de Qumica
en 1993 por su contribucin fundamental
GENTICA
al establecimiento de la mutagnesis dirigida

mediante oligonucletidos.
Las tcnicas de mutagnesis in vitro posibilitan la produccin de mutaciones en sitios
especficos de cualquier gen o secuencia de
ADN clonada y aislada. Podemos modificar
desde un nucletido o varios, a regiones ms o
menos extensas dentro de la regin clonada.
Una vez mutado el gen, se puede estudiar in vitro o reintroducir en clulas en cultivo para su
estudio in vivo. Existen varios mtodos para
producir mutagensis dirigida sobre cualquier
gen clonado y aislado:
1. Mutagnesis por manipulacin de una diana
de restriccin. Con este mtodo se pueden
introducir cambios de bases en un ADN

clonado, primero a travs de la generacin de
zonas cortas de cadena sencilla, producidas por
la accin de una endonucleasa de restriccin;
seguida de digestin limitada con exonucleasas
(nucleasa SI, exonucleasa III o la actividad
exonuclesica de la ADN polimerasa I), y posterior modificacin qumica de bases nucleotdicas con agentes qumicos (por ejemplo el bisulfito sdico que produce la desaminacin de C).
La molcula de ADN se repara entonces aadiendo una ADN polimerasa, los 4 nucletidos
precursores y una ADN ligasa.
2. Mutagnesis por el mtodo del oligonucletido y el fago M13 (fig. 20.1). La regin de
inters debe clonarse en el fago M13, que es un

fago de cadena sencilla, que pasa por una forma
replicativa de cadena doble. Se sintetiza,
asimismo, un oligonucletido sinttico igual a la
secuencia original (tipo salvaje), pero mutado
en un nucletido. ste sirve como cebador para
la sntesis in vitro de la cadena complementaria
del fago M13. Aunque exista una base mal
apareada cuando el oligonucletido sinttico
hibride con la secuencia complementaria
incluida en el fago M13, el apareamiento
errneo de una o dos bases puede ser tolerado si
la hibridacin se realiza a baja temperatura y
alta concentracin de sales. Tras la sntesis de
ADN in vitro mediada por una ADN polimerasa,
se
reproduce el fago M13 en E. coli y
muchos de los fagos resultantes llevarn la
mutacin deseada. El oligonucletido sinttico
GENTICA MOLECULAR
277
Fig. 20.1. Mutagnesis in vitro mediante la utilizacin de un oligonucletio.
mencionado anteriormente puede ser utilizado

como sonda para distinguir los fagos mutantes
de los salvajes mediante hibridacin esta vez a
temperatura alta. Este procedimiento ha sido
empleado para mutar el gen que cifra el ARNt
para la lisina creando un anticodn UAG que
sustituye a la tripleta original AAA.
3. Mutagnesis por el mtodo de la reaccin
encadena de la polimerasa. Se parte de dos
reacciones de PCR diferentes y dos cebadores

externos (uno para cada reaccin); asimismo se
sintetiza un cebador (comn para las dos
reacciones) en el que hayamos introducido un
nucletido errneo que constituir la mutacin.
Los productos de PCR de ambas reacciones se
juntan para formar molculas de ADN hbrido
con dos extremos 3'OH que podrn ser
extendidos y amplificados en una nueva reaccin de PCR, utilizando como cebadores los
oligonucletidos externos iniciales.
4. Mutagnesis por interrupcin gnica y

reemplazamiento gnico (conocida tambin como
gene targeting si utilizamos la terminologa
inglesa). Se basa en la creacin in vitro de una
mutacin (por insercin de una secuencia de

ADN) dentro de un gen preseleccionado
(previamente aislado y donado) de un determinado organismo, que resulta en la inactivacin
de su expresin genica (mutacin knockout);
seguida de la sustitucin in vivo del gen endgeno por la copia mutada mediante recombinacin homloga, utilizando para ello la maquinaria recombinacional de la clula. Este ltimo
tipo de mutagnesis dirigida ha sido de gran
utilidad a la hora de construir ratones knockout, unos organismos que tienen mutadas por
gene targeting las dos copias de un gen endgeno preseleccionado en todas sus clulas (su
generacin la estudiaremos en detalle ms adelante
en
este
captulo).
278
GENTICA
Fig. 20.2. La tecnologa del ADN permite un nuevo tipo de anlisis gentico.
2. Identificacin gentica
El advenimiento de la tecnologa del ADN

recombinante a principios de los aos ochenta
del siglo xx facilit enormemente la labor de
bsqueda de genes por cuanto contribuy al
desarrollo de las metodologas necesarias para
acometer con xito este objetivo. Esto result de
especial relevancia en el caso de la identificacin de un gen concreto responsable de un
determinado sndrome hereditario. La estrategia
generalmente utilizada para la bsqueda de
estos genes pasa por varias etapas (clonaje posicional): 1) el ligamiento del locus responsable
de un determinado sndrome hereditario a una
regin cromosmica concreta utilizando
marcadores polimrficos de ADN; 2) construccin de un mapa fsico (fragmentos de ADN
clonados y ordenados) detallado de la regin
crtica; 3) identificacin de secuencias gnicas
candidatas en los fragmentos de ADN clonados
del mapa fsico previamente construido,
siguiendo
alguna
de las estrategias de
deteccin de genes clonados (vase captulo
19); 4) caracterizacin molecular de dichas secuencias gnicas (secuenciacin), y 5) anlisis
estructural y funcional del gen candidato en los

individuos portadores de la enfermedad.
3. Gentica inversa
El anlisis clsico de un determinado carcter hereditario requiere de la existencia de un

fenotipo mutante, contina con la demostracin
de la existencia del gen mediante el anlisis de
las segregaciones fenotpicas en la descendencia
y finaliza con su donacin y caracterizacin
molecular.
La tecnologa del ADN recombinante posibilita una nueva aproximacin experimental que
opera justamente en sentido opuesto a la
anteriormente descrita y que se denomina Gentica inversa. En este caso, partimos de una
protena o ADN en busca de su funcin. Por
ejemplo, un gen que haya sido donado pero del
que no sabemos nada de su funcin se puede
someter a algn tipo de mutagnesis in vitro
(alelo mutante) y ser introducido posteriormente
en la clula para conocer su funcin (fenotipo
mutante). La figura 20.2 compara las dos
estrategias que acabamos de explicar.
GENTICA MOLECULAR
4. Organismos transgnicos
Un organismo transgnico es aquel cuyo

genoma ha sido modificado por la incorporacin
de un ADN exgeno. Esta secuencia nucleotdica (modificada genticamente o no)
puede proceder de la misma o distinta especie y
recibe el nombre genrico de transgn. Un
ADN exgeno se puede introducir en la clula
hospedadora de diferentes maneras: por transformacin, por microinyeccin, va infeccin
viral (o bacteriana en el caso plantas) o mediante tcnicas de bombardeo.
4.1. ANIMALES TRANSGNICOS
El procedimiento usual de generacin de organismos transgnicos (p. ej., ratones) es la microinyeccin de oocitos fecundados (fig. 20.3).
Este proceso se inicia con el cruzamiento entre
machos y hembras frtiles (estimuladas para
una superovulacin) para obtener los corres-
279
pondientes oocitos fertilizados. El ADN exgeno (transgn) se microinyecta normalmente en

el proncleo masculino (que suele ser el de mayor tamao). Una vez finalizada la microinyeccin los oocitos modificados se mantienen en
cultivo durante un tiempo variable, para seleccionar de esta manera los cigotos o embriones
unicelulares que no han tenido ningn problema
durante la microinyeccin (un 60-90 % de los
oocitos modificados). Los oocitos modificados
que han sobrevivido al proceso de microinyeccin se transfieren (implantan) a los oviductos
de una madre pseudogestante. El resultado final
ser la obtencin de organismos donde se encontrar algn animal transgnico. Segn los
datos disponibles hasta la fecha slo un 2 % de
los cigotos que han sido microinyectados acabarn desarrollando individuos transgnicos.
Como resultado de la integracin los transgenes
pueden pasar a la siguiente generacin con una
probabilidad del 50 %, puesto que la microinyeccin slo se realiz en uno de los dos proncleos.
Fig. 20.3. Generacin de ratones transgnicos por microinyeccin pronuclear.
280
La integracin mediante microinyeccin del

transgn en el genoma receptor plantea algunos
inconvenientes. Se produce al azar, casi siempre
en un solo sitio (rara vez en dos), y en la forma
de copias mltiples (alrededor de 50). La integracin aleatoria de un ADN exgeno posibilita
la aparicin de alteraciones cromosmicas en el
lugar donde se ha producido la insercin que
pueden afectar a la viabilidad del cigoto, y tambin puede suponer la ocurrencia de efectos de
posicin indeseables. Los efectos de posicin de
los transgenes pueden ser soslayados mediante
el empleo como vector de transgnesis de cromosomas artificiales de levadura (YACs). Sin
embargo, el uso de este tipo de construcciones
transgnicas no elimina totalmente el riesgo de
mutacin por insercin. La resolucin de este
problema parece ir en dos direcciones. Una alternativa estara relacionada con el aumento de
los segmentos de homologa del transgn con
respecto al gen endgeno, puesto que esto podra correlacionarse con una mayor frecuencia
de recombinacin homloga en detrimento de
una recombinacin integrativa. La segunda vendra del empleo de transgenes que vayan incluidos en construcciones extracromosmicas estables. En este sentido, se ha apuntado la utilizacin de cromosomas artificiales de mamfero
(MACs) como vectores transgnicos, por permitir la expresin del transgn sin interaccionar
con el genoma de la clula receptora.
La mayora de las construcciones transgnicas incluyen normalmente la regin codificante
del gen cuya funcin se pretende analizar, las
secuencias que dirigen la expresin del gen seleccionado (promotor y secuencias reguladoras)
y las secuencias de terminacin de la transcripcin que posibilitan que se lleve a cabo una correcta expresin del gen. Por tanto, la integracin del transgn en el genoma receptor implica
en la prctica una ganancia en la funcin
del
gen
endgeno
seleccionado
(sobreexpresin o adquisicin de funcin en
tejidos donde no debera expresarse). Existen,
por otro lado, determinadas construcciones
transgnicas que llevan un gen invertido que
origina un transcrito contrasentido
que
consiguen limitar la funcin del gen endgeno
o incluso inactivarlo completamente. Esto se
produce gracias a que el transcrito trans-
GENTICA
gnico es complementario al transcrito normal

del gen endgeno, favoreciendo la hibridacin
entre ambas molculas y, por tanto, el bloqueo
de la traduccin de la correspondiente protena.
De una forma parecida se pueden disear construcciones transgnicas encaminadas en este
caso a suprimir determinados tipos celulares. El
transgn en cuestin (toxign) es un gen que codifica para una protena que es citotxica per se
o que adquiere la citotoxicidad una vez ha sido
metabolizada.
4.2. PLANTAS TRANSGNICAS
Dada su enorme importancia econmica, las

plantas han sido objeto desde hace mucho tiempo del anlisis gentico dirigido al desarrollo de
mejores variedades. Con las tcnicas del ADN
recombinante se ha abierto una nueva dimensin en este esfuerzo. Ahora es posible generar
plantas transgnicas que lleven ADN exgeno
de otras especies de planta o, incluso, de animales y bacterias. Los vectores que se utilizan rutinariamente para producir plantas transgnicas
derivan todos de la bacteria del suelo Agrobacterium tumefaciens. Esta bacteria produce una
enfermedad conocida como agalla de la corona,
caracterizada por un crecimiento incontrolado
(tumor o agalla), normalmente en la base (o
corona) de la planta infectada. La clave en la
aparicin del tumor es un plsmido de 200 kb,
el plsmido Ti (inductor de tumor). Cuando una
de estas bacterias infecta una clula de la planta,
parte del plsmido Ti, el ADN-T, se inserta aleatoriamente en el genoma de la clula husped.
Si bien el ADN-T no cataliza su insercin (esta
funcin la realizan otras regiones del plsmido
Ti), si lleva la informacin gentica necesaria
para otras funciones interesantes, como la sntesis de unos compuestos llamados opinas (sintetizadas por la planta husped bajo la direccin
del ADN-T). Estos compuestos son muy importantes por cuanto juegan un papel clave en la
activacin de los genes presentes en el plsmido
Ti.
Los plsmidos Ti son demasiado grandes
para ser manipulados con facilidad y resulta difcil hacerlos ms pequeos porque contienen
GENTICA MOLECULAR
pocos sitios de restriccin nicos. Por tanto, el

uso del plsmido Ti como vector en la generacin de plantas transgnicas pasa por la creacin
previa de una forma atenuada del mismo que se
cointegrar con un vector intermediario ms pequeo antes de transformar la clula vegetal. En
el vector intermediario se inserta el gen de inters (transgn), un gen de resistencia a spectinomicina (usado como sistema de seleccin de los
plsmidos cointegrados en E. coli) y otro de resistencia a kanamicina (diseado mediante ingeniera gentica para su expresin en plantas).
Adems este plsmido lleva dos segmentos del
ADN-T, la regin terminal izquierda, que proporciona una seccin de homologa con el plsmido Ti atenuado, y el gen para la sntesis de
nopalina (una opina). Una vez construido el
vector intermediario se inserta en un plsmido
Ti atenuado dando lugar a un plsmido
cointegrado que se introduce en la clula de la
planta por transformacin. La creacin de una
planta transgnica tiene lugar, entonces,
mediante el crecimiento en cultivo de la clula
transformada.
5. Modificacin de secuencias gnicas
mediante
recombinacin
homloga: ratones knockout y
knockin
Como ya hemos apuntado, el gene targeting es un procedimiento de mutagnesis dirigida in vivo consistente en la modificacin total o
parcial de un gen endgeno seleccionado. La
modificacin se basa en la recombinacin entre
una molcula exgena de ADN portadora de la
mutacin a introducir y su secuencia homloga en
el ADN genmico receptor de clulas en cultivo.
Si la mutacin diseada produce la inactivacin
del gen se habla de una mutacin knockout. Hay
dos tipos de vectores de targeting: de insercin y
de reemplazamiento. En los de insercin, se
produce la integracin completa de todo el vector
mediante una simple recombinacin integrativa.

En los vectores de reemplazamiento se produce
un doble fenmeno de recombinacin que
permite Ia sustitucin de parte del genoma
receptor (gen o parte del gen que se desea
modificar) por la secuencia exgena (fig. 20.4a).
281
Este tipo de tecnologa hoy por hoy es aplicable exclusivamente al ratn. Las etapas que se
siguen en la generacin de los ratones
knockout son las siguientes (fig. 20.4b):
1. Inactivacin por insercin del gen neo'
(resistencia a neomicina) dentro de una secuencia exnica del gen preseleccionado, seguida de la insercin de un segundo marcador
gnico en uno de los extremos del gen preseleccionado, por ejemplo el gen tk del virus del
herpes que codifica para una timidinaquinasa.
2. Introduccin del gen mutado (vector de
targeting) en clulas madre embrionarias
indiferenciadas (o clulas ES, del ingls Embryonic Stem Cells) en cultivo.
3. Aislamiento de aquellas clulas que
llevan la mutacin en el gen preseleccionado,
crecindolas en un medio que contiene unas
drogas seleccionadas (neomicina y ganciclovir
en este caso). Cuando se produce la recombinacin homloga, la secuencia modificada del
gen donado, y el gen neo-r, sustituyen a la secuencia diana presente en el cromosoma. El gen
tk no se integra en el cromosoma y es degradado por la clula. Si el vector se inserta
aleatoriamente, el genoma receptor acaba englobando todo: secuencia gnica, gen neo-r y
gen tk. Las clulas que no han recibido nada se
distinguen fcilmente por la ausencia total de
marcadores. Todas estas posibilidades se pueden
distinguir cultivando las clulas ES en medios
que contengan dos tipos de drogas: un anlogo

de la neomicina (denominado 6418) y un
antiherptico (ganciclovir). El anlogo de la
neomicina matara a las clulas que carecen del
gen neo', pero no a las que lo lleven insertado en
su cromosoma. Por otra parte el ganciclovir
matara a todas las clulas que lleven el gen
herptico tk. Las nicas clulas supervivientes
seran las portadoras de la insercin dirigida
(que tienen el marcador positivo neo-r y carecen
del marcador negativo tk).
4. Introduccin de las clulas ES que llevan
la mutacin (generalmente en heterocigosis) en
el blastocele de un blastocisto, o se agregan
en embriones en estado de mrula, obtenidos
de ratones que difieran en el carcter color
del pelo (por ejemplo fenotipo negro), con el
282
GENTICA
Fig. 20.4a. Estrategia para la obtencin de gen knockout.
Fig. 20.4b. Generacin de ratones knockout.
GENTICA MOLECULAR
objeto de saber si las clulas ES (por ejemplo

fenotipo agut) han sobrevivido en el embrin.
Estos blastocistos son reimplantados en
hembras de ratn hormonalmente receptivas
(pseudopreadas) de fenotipo negro. En estas
circunstancias, si obtenemos un ratn quimera o
mosaico (zonas de la piel con fenotipo agut y
otras con fenotipo negro) es que las ES
modificadas han sobrevivido.
5. Cruzamiento entre los ratones quimeras y
ratones normales (con fenotipo negro en este
caso) para obtener individuos que lleven una
copia mutada del gen preseleccionado en todas
sus clulas. Posteriormente, se realizan
cruzamientos hermano X hermana entre los
mencionados individuos para poner en homocigosis la copia mutada del gen.
Los vectores de targeting pueden ser ms
sofisticados que los descritos. Recientemente ha
surgido una nueva generacin de vectores que
contienen genes de bacterifagos responsables
de sistemas especficos de recombinacin que
no existen en las clulas de mamferos. As, por
ejemplo, el sistema de recombinacin Cre-loxP
del bacterifago P1, se basa en que Cre es un
gen bacteriano que codifica para una enzima especial llamada recombinasa que es capaz de
283
producir recombinacin entre dos secuencias

loxP del fago. Vectores de targeting que contengan estos sitios loxP flanqueando el gen de
inters se pueden utilizar para inactivar (noquear) un gen endgeno preseleccionado slo en
un tejido o tipo celular determinado, o en un
momento concreto del desarrollo. Bastara con
que la presencia de la recombinasa se circunscribiera al tipo celular deseado al estar sometida
su expresin a los elementos reguladores propios de esas clulas. Para ello, se debe generar
previamente un ratn transgnico que lleve
como construccin el promotor del tejido de inters junto con el gen Cre. Cruzamientos entre
estos ratones transgnicos y aquellos que llevan
los vectores de targeting con los sitios loxP
permitiran generar ratones knockout especficos de tejido. De esta forma se resolvera el
problema de la letalidad embrionaria que padecen muchos ratones knockout.
Adems de la tcnica del noqueado, se
estn desarrollando protocolos inversos que
consisten en la incorporacin de una secuencia
gnica funcional dentro de un gen endgeno
preseleccionado que quedara inactivado (ratones knockin) (fig. 20.4c). Si se respeta la
funcionalidad del gen endgeno se trata de una
verdadera
adicin
gentica.
Fig. 20.4c. Estrategia para la obtencin de un gen knockin.
284
GENTICA
Fig. 20.5. Sistema de dos componentes para la expresin del gen que codifica para el factor
de coagulacin VIII humano.
6. Expresin de genes eucariticos

en bacterias
En la seccin precedente hemos utilizado el

concepto de organismo transgnico para referirnos a aquellos individuos en los que se ha
introducido un ADN exgeno dentro del genoma de una clula receptora. En este sentido, las
bacterias que llevan integrados genes eucariticos en su genoma se pueden considerar bacterias transgnicas.
La posibilidad de que un determinado gen
eucaritico se exprese en una bacteria permite
que de un modo relativamente fcil se obtengan
grandes cantidades del producto gnico en
cuestin. Para ilustrar este punto podemos citar
un sistema basado en la utilizacin de la ARN
polimerasa del fago T7 (cuyo gen ha sido integrado en el cromosoma de E. coli) operando
sobre una secuencia promotora tambin del fago
T7 (integrada junto al gen de inters en un
plsmido tambin de E. coli) (fig. 20.5). El genoma de este fago se caracteriza, entre otras
cosas, por presentar diferentes secuencias promotoras pertenecientes a genes de expresin
tarda. La presencia de promotores tardos es una
caracterstica que resulta muy til en este caso,
porque permite sintetizar slo aquellos
productos gnicos que estn bajo control de los
promotores del fago T7. Por tanto, no habr expresin alguna de genes bacterianos en esa etapa. Otro aspecto interesante de este sistema es
que la expresin de la ARN polimerasa est bajo
el control del promotor lac bacteriano, que est
regulado por el represor lac, el cual a su vez se
puede inactivar por un anlogo de la lactosa
(que acta como inductor), el IPTG. En
presencia de IPTG se producen grandes cantidades de ARN polimerasa T7, dirigiendo la
sntesis del gen inters en grandes cantidades.
Este tipo de estrategia se ha seguido, por ejemplo, en la produccin del factor VIII de coagulacin humano. En el caso de las cadenas A y B
de la insulina humana el gen que las cifra se ha
insertado junto al gen /3-galactosidasa de E. coli
y, por lo tanto, est bajo el control del promotor
bacteriano.
7. Diagnstico gentico y terapia
gnica
7.1 . DIAGNSTICO GENTICO
Muchos de los sndromes hereditarios humanos tienen su base en la existencia, protenas
o enzimas alteradas o incluso ausentes.

Existen dos tipos de procedimientos que permiten hacer un diagnstico de estas enferme-
GENTICA MOLECULAR
dades durante el periodo de gestacin para posibilitar la opcin de abortar los fetos afectados:
amniocentesis (extraccin de clulas fetales a
partir del lquido amnitico) y muestreo de las
vellosidades corinicas (extraccin de clulas
de la placenta).
Este tipo de anlisis est limitado a aquellas
enfermedades que afectan a protenas que se
expresan en clulas en cultivo. La tecnologa del
ADN recombinante ha mejorado el diagnstico
de estas enfermedades puesto que permite un
anlisis directo del ADN. Con esta metodologa
podemos detectar alteraciones de un sitio de
restriccin por mutacin (por ejemplo la anemia
falciforme) o de secuencias alteradas que no
incluyan un sitio de restriccin mediante el uso
de oligonucletidos sintticos como sonda o
bien mediante el anlisis por PCR y
secuenciacin.
7.2. TERAPIA GNICA
La terapia gnica se presenta como una

promesa teraputica de utilidad en todo tipo de
patologas y promete revolucionar la concepcin actual de la Medicina. Esta estrategia teraputica se ha hecho realidad gracias a los avances producidos en campos tales como la Biologa Molecular, Gentica, Virologa y Biofsica
por citar algunas.
Existen dos grandes tipos de terapia gnica:
la terapia de clulas germinales y la de clulas
somticas. La primera de ellas ha sido desarrollada exclusivamente en animales y consiste
en introducir un gen exgeno en una clula
huevo, obteniendo un organismo transgnico
que expresa el producto gnico. La aplicacin
de la terapia gnica en la especie humana queda
restringida, por razones de tipo tico y metodolgico, a las clulas de la lnea somtica.
La mayor parte de los ensayos clnicos en
terapia gnica, dirigidos a corregir desrdenes
hereditarios o al tratamiento del cncer, han
utilizado vectores virales como retrovirus y
adenovirus y vectores no virales como los
complejos DNA-liposomas. Los vectores virales ofrecen como ventajas la especial capacidad
de los virus para infectar clulas y facilitar
285
la expresin de genes exgenos pero presentan

como desventajas la respuesta inflamatoria y
antiviral del sistema inmunitario, lo cual constituye un riesgo para el paciente y una limitacin para el tratamiento con dosis mltiples. Los
vectores no virales son menos efectivos como
sistemas de transferencia gnica pero ofrecen
como principal ventaja la seguridad. Entre los
mecanismos no virales de transferencia gnica
podemos citar, tambin, mtodos qumicos,
como el fosfato clcico, o fsicos, como la
electroporacin, o el bombardeo de partculas.
La terapia gnica se puede llevar a cabo
mediante dos tipos bsicos de estrategias: ex
vivo e in vivo. Las estrategias ex vivo parten de
la obtencin previa de clulas del paciente procedentes de un tejido u rgano de inters. A
continuacin se procede a la disgregacin de las
mismas y su mantenimiento en condiciones de
cultivo de tejidos in vitro, en donde las clulas
son posteriormente transfectadas con el gen
teraputico utilizando para ello un vector adecuado. Las clulas transfectadas son seleccionadas en funcin de su capacidad para expresar
el gen exgeno de forma estable. Las clulas
son entonces multiplicadas y seleccionadas con
el fin de ser reimplantadas en el paciente. Las
estrategias in vivo estn basadas en la administracin sistmica de la construccin gnica
de inters. Aunque el ADN puede ser administrado de forma directa, lo habitual es recurrir
a la ayuda de un vector que facilite el proceso
de transferencia del gen y permita la entrada y
localizacin intracelular del mismo. Asimismo,
es importante recurrir a vectores con destino
especfico dentro del organismo para permitir la
entrada selectiva del gen en las clulas de un
determinado tejido sin requerir procesos
quirrgicos.
Gillam, S. y Smith, M. (1979a): Site-specific

mutagenesis
using
synthetic
oligodeoxyribonucleotide
primers:
I.
Optimum
conditions
and
minimum
oligodeoxyribonucleotide length,
Gene., 88: 81-97.
286
Gillam, S. y Smith, M. (1979b): Site-specific mu
tagenesis using synthetic oligodeoxyribonu
cleotide primers: II. In vitro selection of mutant
DNA, Gene., 88: 99-106.
Montoliu, L. (1997): Transgnesis por microin
GENTICA
yeccin, Revista Real Academia Ciencias, 91:

139-146.
Strachan, T. y Read, A. P. (1999): Human molecular
genetics, 2, Bios. Se.
Torres, M. (1997): La modificacin dirigida del genoma de ratn y su repercusin en
biomedicina, Revista Real Academia Ciencias,
91: 147-152.
Captulo
21
Genmica
1.
Genmica Estructural: Secuenciacin de Genomas

1.1. Automatizacin del Proceso de Secuenciacin de Genomas
2.
Genmica Funcional: <<Micro-Arrays de ADN>>

2.1. <<Micro-Arrays>> de Clones de ADNc
2.2. <<Micro-Arrays de Secuencias Oligonucleotdicas>>
288
La posibilidad de secuenciar genomas

completos da un giro al anlisis gentico permitiendo el estudio de los genes a gran escala.
El anlisis comparado de genomas de individuos pertenecientes a una misma especie facilita
enormemente la deteccin de variantes polimrficas en la poblacin haciendo ms sencillo, por ejemplo, el diagnstico gentico en los
individuos que padecen o que pueden padecer
en un futuro (predisposicin gentica) una determinada enfermedad hereditaria. Por otro
lado, el anlisis genmico funcional posibilita
estudios globales de expresin gnica durante el
desarrollo. Hay que destacar igualmente que el
anlisis comparado de genomas de distintas
especies permite identificar genes que resultaron cruciales en la creacin de nuevas especies.
La Genmica es una nueva subdisciplina de
la Gentica cuyo objetivo es precisamente el
estudio sistemtico de genomas completos
(Lander y Weinberg, 2000). La investigacin en
Genmica se puede realizar a dos niveles:
Genmica estructural cuyo objetivo es la caracterizacin fsica (secuenciacin) de genomas
completos, y Genmica funcional, que abarca el
estudio del conjunto completo de genes de un
genoma (proteoma), as como de los patrones de
expresin gnica globales.
1. Genmica estructural: secuenciacin
de genomas
En 1985 se abord por primera vez la tarea

de secuenciar por completo el genoma humano.
La empresa pareca quijotesta por cuanto
existan enormes dificultades logsticas para
llevarla a cabo. El genoma humano est formado por 3 billones de bases y las tcnicas de secuenciacin de entonces permitan secuenciar
sin ambigedades solamente fragmentos de
unas 300 bases, por lo que se necesitaran dcadas de trabajo de miles de tcnicos para completar esta tarea. Adems se argumentaba por
algunos cientficos que esta tarea era absurda
por cuanto una fraccin muy elevada del genoma humano no codificaba para protenas. Pero
el proyecto sigui adelante y varios aos de debate reestructuraron el proyecto inicial en una
GENTICA
serie de subproyectos encaminados a secuenciar

genomas ms pequeos de importantes organismos experimentales. En 1990, estos esfuerzos se organizaron en lo que se ha dado en
llamar el Proyecto Genoma Humano, el primer
intento de crear a gran escala la infraestructura
necesaria para el estudio sistemtico de genomas completos.
El primer genoma en ser secuenciado fue el
de la bacteria Haemophilus influenzae (1.8 Mb)
como consecuencia del esfuerzo de un nico
laboratorio (Fleischmann y colaboradores,
1995). A partir del ao 1997, cuando se
secuenci el genoma de la levadura Saccharomyces cerevisae (12 Mb) (Clayton y colaboradores, 1997), los objetivos del Proyecto Genoma Humano se han ido cumpliendo escalonadamente. En 1998 se concluy la secuenciacin del genoma del primer organismo multicelular, el nematodo Caenoarditis elegans, (The
C. elegans Sequencing Consortium, 1998).
Unos aos ms tarde le siguieron los genomas
de la planta Arabidopsis thaliana y el de
Drosophila melanogaster (Rubin y colaboradores, 2000). La mayor sorpresa que se ha llevado la comunidad cientfica al conocer la secuencia nucleotdica de Drosophila ha sido
constatar que esta mosca (un organismo multicelular complejo) tiene solamente el doble de
genes (13.000) que la levadura S. cerevisae (un
organismo unicelular). De aqu se puede extraer
la conclusin interesante de que el aumento en
la complejidad de los organismos no va
necesariamente asociado con un aumento
considerable del tamao del genoma. Recurdese, en este sentido, la paradoja del valor C
que viene a constatar la existencia de tamaos
de genomas mayores incluso al del humano en
organismos tales como ciertos peces no telesteos y muchas especies vegetales. El goteo de
genomas completos secuenciados se ha seguido
produciendo. As en el ao 2000 se hacen
pblicos los datos del genoma del arroz (12
cromosomas), una especie vegetal de indudable
inters alimenticio. La secuenciacin completa
del genoma humano al menos en su forma
preliminar fue dada a conocer de manera oficial
al ao siguiente (2001) por Francis Collins
(Director del Proyecto Pblico) y Craig Venter
GENTICA MOLECULAR
(Director del Proyecto Privado). La secuencia

completa del ratn, otro importante organismo
modelo estar completada en el ao 2005.
La secuenciacin completa de un genoma se
puede llevar a cabo mediante dos tipos bsicos
de estrategias: secuenciacin de clones al azar y
la secuenciacin de clones ordenados.
El fundamento de la secuenciacin de clones al azar consiste en la fragmentacin del
ADN que se desea secuenciar para obtener una
coleccin numerosa de clones aleatorios que
posteriormente sern secuenciados. El genoma
de la bacteria Haemophilus influenzae fue secuenciado siguiendo este tipo de estrategia. En
este caso, se utilizaron cebadores complementarios al ADN adyacente del vector para secuenciar regiones cortas de los extremos de los
insertos de ADN bacteriano que sirvieran de
etiquetas para alinear los distintos clones genmicos y, posteriormente, proceder a su secuenciacin. Mediante la estrategia del paseo cromosmico empleando el extremo de una secuencia donada como cebador para secuenciar
tramos adyacentes no donados es como se
consigui determinar la secuencia completa de
esta bacteria. El proyecto de secuenciacin del
Genoma Humano desarrollado por el grupo de
Venter ha seguido precisamente el mtodo de
secuenciacin de clones aleatorios.
La secuenciacin de clones ordenados requiere necesariamente la elaboracin de mapas
fsicos (disposicin [o coleccin] ordenada de
cromosomas, regiones cromosmicas o fragmentos de ADN clonados) correspondientes a
una parte o a la totalidad del genoma que se
pretende secuenciar. Si la coleccin de clones se
prepara a partir del ADN genmico completo el
proceso de ordenacin de clones es muy
laborioso. Este proceso es notablemente ms
sencillo si partimos de un cromosoma especfico. Para obtener una coleccin de clones procedentes de un cromosoma concreto se puede
emplear la tcnica de electroforesis en campo
pulsado (PFGE, del ingls pulse field gel electrophoresis) si los cromosomas son cortos o,
tambin, si utilizamos segmentos cromosmicos
cortados con endonucleasas de restriccin,
como Not I, que cortan el ADN con baja frecuencia. Los cromosomas pueden separarse al-
289
ternativamente por citometra de flujo mediante

la tcnica de separacin de cromosomas activada por fluorescencia (FACS, del ingls fluorescence-activated chromosome sorting). El
fundamento de esta tcnica se basa en el hecho
de que los preparados cromosmicos se tien
con dos colorantes, uno de los cuales se une a
regiones ricas en pares de bases AdeninaTimina y el otro a regiones ricas en pares
Guanina-Citosina. Una vez se ha procedido a la
rotura de las clulas y los cromosomas estn en
suspensin, sta se pasa por un pulverizador en
el que la concentracin de cromosomas es tal
que una gota del pulverizador equivale a un
cromosoma. La solucin pulverizada pasa por
un haz de rayos lser, produciendo cada cromosoma una seal fluorescente determinada que
es reconocida electrnicamente por unas placas
deflectoras que dirigen la gota a un tubo
colector especfico.
1.1. AUTOMATIZACIN DEL PROCESO DE

SECUENCIACIN DE GENOMAS
La preparacin de los clones de ADN, el

aislamiento del ADN donado, as como los
mtodos de secuenciacin se han adaptado a
mquinas que funcionan a modo de sofisticados
robots pudiendo llevar a cabo la caracterizacin
de secuencias de nucletidos a gran escala.
2.
Genmica funcional: microarrays de ADN
El anlisis gentico-molecular se ha centrado tradicionalmente en estudios intensivos de

uno o unos pocos genes al mismo tiempo. Conforme la genmica se ha ido desarrollando y la
secuenciacin de genomas completos ha pasado
de ser una posibilidad a una realidad, ha surgido
la idea de desarrollar tecnologas que permitan
el anlisis de genes a gran escala e, incluso, de
todo un genoma en un nico ensayo.
Los ensayos de colecciones de clones de
ADN (genmico o ADNc) en unidades 6 x 6
sobre membranas de nylon (filter-based arrays)
290
GENTICA
Fig. 21.1. Micro-array de ADNc.
supuso el primer paso para estudiar genes a gran

escala. Sin embargo, este tipo de tecnologa tiene limitaciones debido al tipo de soporte donde
se encuentran los clones de ADN.
Dos recientes innovaciones tcnicas han
aumentado notablemente las posibilidades de la
tecnologa de los arrays, dando lugar al
desarrollo de los micro-arrays de ADN (o
chips de ADN). La primera de ellas es el uso
de un soporte slido no poroso como el cristal,
que es mucho ms apropiado para la miniaturizacin y robotizacin del proceso. La segunda
innovacin tcnica hace referencia a la posibilidad de la sntesis in situ de oligonucletidos
sobre el soporte de cristal. Los micro-arrays
de ADN permiten colocar colecciones muy
grandes de fragmentos de ADN (ADNc, oligonucletidos, etc.) fijados al cristal de un portaobjetos, los cuales sern usados como una
sonda no marcada para hibridarlos con la secuencia que se pretende analizar, que se encuentra marcada y en solucin. Como ejemplo,
decir que la empresa americana Affymetrix

consigui en 1998 manufacturar chips de
ADN que contenan ms de 300.000 oligonucletidos dentro de un rea de 1,28 x 1,28 cm.
La tecnologa de los micro-arrays de
ADN tiene dos tipos fundamentales de aplicaciones: i) estudios de expresin gentica (micro-arrays de clones de ADNc o microarrays
de secuencias oligonucleotdicas especficas de
genes), y ii) anlisis de la variacin del ADN
(deteccin de mutaciones o deteccin de single
nucleotide polymorphisms o SNPs) mediante
micro-arrays de secuencias oligonucleotdicas.
2.1. <<MICRO-ARRAYS DE CLONES DE ADNC
Los
micro-arrays
de
ADNc son
muestras
de
ADNc clonados que se
disponen de manera ordenada sobre un
portaobjetos. Con la ayuda de mquinas
robotizadas , cada ADNc que va a ser
GENTICA MOLECULAR
utilizado en la construccin de este tipo de

chip se amplifica previamente mediante PCR,
se purifica y se deposita en una posicin
especfica. Estos portaobjetos estn cubiertos
por poli-lisina para permitir la unin del ADN,
despus de una exposicin a luz ultravioleta, al
soporte fsico. Las cadenas de ADN depositadas
en el chip son entonces desnaturalizadas para
permitir la hibridacin posterior con las sondas
marcadas. Estas sondas se construyen a partir de
ARN obtenido de las dos situaciones que se pretenden analizar (por ejemplo del tejido normal y
del tejido cancergeno). Dichos ARNs contienen
todos los genes que estn siendo expresados en
cada situacin. Mediante una transcriptasa
inversa se copian todos los ARN de cada situacin a ADNc. En el transcurso de la reaccin
se aaden diferentes nucletidos marcados con
fluorocromos especficos (Cy3-dUTP o Cy5dUTP). Las sondas para cada una de las dos
situaciones son marcadas diferencialmente
( Cy3-dUTP y Cy5-dUTP, respectivamente ) e
291
hibridadas simultneamente sobre el portaobjetos que contiene fijados los distintos ADNc (fig.
21.1). Despus de la hibridacin, se excita con
la longitud de onda correcta el fluorocromo que
define a cada uno de los dos tipos de sondas
marcadas que se estn utilizando. La fluorescencia emitida en cada una de las dos situaciones es recogida por separado. Las dos imgenes
obtenidas son posteriormente normalizadas y
superimpuestas. Aquellos genes que se expresen
diferencialmente aparecern como puntos rojos
o verdes, indicando sobreexpresin o expresin
disminuida segn los casos.
2.2. MICRO-ARRAYS DE SECUENCIAS

OLIGONUCLEOTIDICAS
Este procedimiento carga el chip con una

serie ordenada de oligonucletidos que se
sintetizan de un modo real, nucletido a
nucletido, sobre el propio portaobjetos. Para
Fig. 21.2. Micro-array de oligonucletidos.
292
ello, se recubre el cristal con una capa de grupos

qumicos protectores que impiden la unin del
ADN. Luego, se coloca sobre el portaobjetos
una pantalla agujereada que corresponde a los
sitios por donde se depositar el ADN. Esos
agujeros dejan pasar un haz de rayos lser que
eliminan en sitios especficos los grupos qumicos protectores, permitiendo posteriormente
la adicin de nucletidos especficos (fig. 21.2).
Cada nucletido lleva su propio grupo protector
que puede ser eliminado de manera especfica
en una segunda ronda de sntesis. De esta
manera, mediante la aplicacin secuencial y de
una manera previamente establecida se suelen
sintetizar
micro-arrays
de
secuencias
oligonucleotdicas especficas.
GENTICA
Clayton, R. A. et al. (1997): Nature, 387: 459.
Fleischmann, R. D. et al. (1995): Science, 269:
496.
Lander, E. S. y Weinberg, R. A. (2000): Science,
287: 1.777.
Rubin et al. (2000): Science, 24.
Strachan, T. y Read, A. P. (1999): Human molecu
lar genetics 2, Bios Sci.
The C. Elegans Sequencing Consortium (1998):
Science, 282: 2.012.
The chipping forecast (1999): Nature Genet, 21:
supplement.
The Human Genome (2001): Nature, 409: 745964.
Captulo
22
Fundamentos moleculares y citognicos

de la variacin gentica
1.
Tipos de Mutaciones Gnicas
2.
Mutaciones Germinales y somticas
3.
Sistemas de Deteccin y Seleccin en Procariotas y Eucariotas

3.1.
3.2.
3.3.
3.4.
4.
Reversin de Auxtrofos
Enriquecimiento por Filtracin
Enriquecimiento por Penicilina (y Otros Antibioticos)
Seleccin de Resistencias a Agentes no Tolerados
por las Cepas Salvajes
Carcter Preadaptativo de la Mutacin
296
GENTICA
El trmino mutacin fue propuesto, en 1901,

por H. De Vries para explicar la variacin que
observaba en cruzamientos con plantas de
Oenothera lamarckiana. Aunque la mayora de
estas variaciones se ha demostrado que eran
debidas a un sistema de translocaciones
mltiples, en dos de los casos se trataba
realmente de lo que hoy en da se entiende por
mutacin gnica: cambio en la secuencia de las
bases constituyentes del material hereditario. La
mutacin es, por tanto, el proceso mediante el
cual se producen las formas alternativas, las
variantes (alelos), de los genes. Sin ella, la diversidad biolgica existente no habra podido
desarrollarse. A menudo, los genticos se refieren a ella como fuente primaria de la variabilidad gentica, que ser potenciada y barajada por otros tres mecanismos, recombinacin,
reordenaciones cromosmicas y elementos
genticos transponibles, que contribuyen a la
variacin gentica que se observa en los organismos. La mutacin es, por tanto, el sustrato
indispensable (la materia prima) sobre el que
acta el proceso evolutivo de la seleccin natural.
Las mutaciones son la base para las investigaciones en cualquier especialidad gentica. Sin
la existencia de formas alternativas de los genes
habra sido imposible determinar qu caracteres
estn
genticamente
controlados.
Los
experimentos de Mendel no habran podido
llevarse a cabo sin variantes allicas (generadas
por mutacin), ni todas las investigaciones
genticas posteriores, hasta las ms sofisticadas
tecnologas actuales de esta ciencia, habran
podido realizarse (es ms, ni siquiera tendran
sentido) si no existiera la mutacin.
1. Tipos de mutaciones gnicas
Debido a su enorme importancia se han establecido numerosas clasificaciones, segn los

aspectos que se utilicen como criterios clasificatorios, lo que ha originado una enorme profusin de adjetivos (tipos) calificativos de las
mutaciones. A continuacin veremos algunas de
las clasificaciones ms utilizadas que, en su
conjunto, recogen la terminologa gentica
ms frecuentemente usada para referirse a las

mutaciones.
De un modo general, al considerar cualquier
cambio hay que tener un referente y, en el caso
de la mutacin, el punto de partida es siempre el
alelo salvaje, con lo que cualquier variante del
alelo salvaje se denomina mutacin hacia
adelante (forward mutation), mutacin directa
o, simplemente, mutacin. Cualquier cambio en
sentido contrario, es decir, la vuelta desde el
alelo mutante hacia el salvaje se denomina
mutacin hacia atrs (reverse mutation),
mutacin reversa o, ms frecuentemente,
reversin. Conviene indicar que, habida cuenta
el criterio que se sigue para definir el alelo
salvaje (la forma encontrada en la naturaleza o
en las cepas estndares de laboratorio), estas
denominaciones no presuponen, en principio,
ninguna otra caracterstica (por ejemplo, una
mutacin directa puede ser dominante o ser
recesiva) aunque, teniendo en cuenta que los
alelos salvajes han estado sometidos a seleccin
(aunque fuesen mutantes en su origen), en
general, las nuevas variantes comienzan su
andadura con peores caractersticas desde el
punto de vista funcional y, por tanto, de la
adaptacin (vanse los captulos dedicados a la
gentica de poblaciones y evolutiva, para completar estos conocimientos).
Si se establece como criterio clasificatorio
las tcnicas necesarias para la deteccin o reconocimiento de las mutaciones se habla de:
- Mutaciones morfolgicas, aquellas que
afectan visiblemente a la forma general del
organismo (aspecto, color, tamao, etc.) o a
partes estructurales muy caractersticas del
mismo (fig. 22.1).
- Mutaciones nutritivas o bioqumicas, las
que se detectan en funcin de la prdida o el
cambio en una funcin metablica esencial, de
manera que dicha mutacin impide el crecimiento y proliferacin del organismo afectado,
a no ser que se le suministre el compuesto final
de la ruta. Los microorganismos constituyen un
material de eleccin para el estudio de este tipo
de mutantes; las cepas salvajes (prototrficas)
nicamente necesitan para crecer un medio
mnimo, compuesto de sales inorgnicas y
VARIACIN GENTICA
297
Fig. 22.1. Dibujos representativos de algunos mutantes morfolgicos de Drosophila

(se muestra el salvaje como referencia).
una fuente de energa, generalmente glucosa.

Los mutantes bioqumicos autotrficos necesitan un medio suplementado con el producto final de la ruta metablica que muestran alterada.
- Mutaciones letales seran las que afectan a
la supervivencia de los individuos, producindoles la muerte antes de alcanzar la madurez sexual. Cuando la mutacin no produce la
muerte, sino slo una disminucin de su capacidad para sobrevivir o reproducirse, se habla de
mutacin deletrea. Las mutaciones letales son,
en su mayora, recesivas (manifestndose en
homocigosis o hemicigosis en haploides y en las
ligadas al sexo). Existen casos de mutaciones
letales dominantes, pero con la doble
caracterstica de letales condicionales, ya que
una mutacin estrictamente letal y dominante
surgira y desaparecera con el individuo en el
que apareciera. Las mutaciones nutritivas podran considerarse, en muchas ocasiones, leta-
les recesivas (los mutantes moriran si no se les

suministrase los correspondientes suplementos
en el medio).
- Mutaciones condicionales, si el fenotipo
mutante slo se manifiesta en un determinado
ambiente (la condicin restrictiva), mostrando la
caracterstica salvaje en otras condiciones
medioambientales (la condicin permisiva). Un
ejemplo sera la mutacin Curly (fig. 22.1) (alas
con las puntas curvadas hacia arriba) que slo se
manifiesta en condiciones de cultivo por debajo
de los 18 C, mientras que a la temperatura
normal de cultivo (20-25 C) las moscas
mutantes no se diferencian de las salvajes.
- Mutaciones de resistencia, si el fenotipo
mutante puede crecer en presencia de un agente
medioambiental o biolgico (compuesto
qumico, fro, virus, etc.) que afecta negativamente a los individuos salvajes.
298
GENTICA
- Mutaciones de desarrollo, aquellas que se

manifiestan en esa etapa de la vida de los organismos, antes del nacimiento.
- Mutaciones de comportamiento, son las
que originan un cambio en una caracterstica de
comportamiento del individuo afectado.
- Mutaciones de ganancia de funcin,
aquellas que comportan la aparicin de una
nueva caracterstica a sus portadores, sin prdida de la funcin residente en el alelo salvaje.
Evidentemente, todos estos tipos no son

mutuamente excluyentes. Por citar algunos
ejemplos, el mutante yellow (cuerpo amarillo) y
otros mutantes morfolgicos afectando a las alas
de Drosophila, muestran deficiencias en la
realizacin del cortejo, por lo que seran, tambin, mutaciones de comportamiento; muchos
mutantes del desarrollo son mutaciones que se
detectan en el adulto como mutaciones morfolgicas, etc.
De acuerdo con el efecto que se produzca en
relacin con la protena sintetizada se distinguen
varios tipos de mutaciones (tabla 22.1):
- Mutacin silenciosa (silent), si la alteracin de una base origina una tripleta que codifica el mismo aminocido que en la protena
producida por el alelo salvaje.
- Mutacin neutra (synonymous), si se
origina una tripleta codificadora de un aminocido diferente al existente en esa posicin en la
protena salvaje, pero funcionalmente equivalente.
- Mutacin de cambio de sentido (missense),
si el cambio mutacional origina una tripleta
codificadora de un aminocido diferente al de la
protena salvaje y funcionalmente no
equivalente.
- Mutacin sin sentido (nonsense), la que
origina el cambio de una tripleta para un aminocido por un codn de parada, con lo que se
produce una protena truncada por la terminacin prematura.
- Mutacin de cambio de la pauta de lectura
(frameshift), provocada por la insercin o
delecin de una o varias bases (en nmero diferente a mltiplo de 3). Se producen graves
afectaciones de la protena, que conducen a
productos no funcionales. Muy frecuentemente,

como en el caso anterior, da lugar a una protena
truncada (por la generacin de codones de
parada prematuros) que, adems, presenta
diferentes aminocidos en su secuencia polipeptdica desde el punto de insercin o delecin
hasta la terminacin.
- Reversin directa, cambio nucleotdico
que restaura exactamente la secuencia salvaje y,
por tanto, la protena.
- Reversin equivalente, cambio nucleotdico que produce un codon equivalente (del
mismo aminocido) al salvaje original.
- Mutaciones supresoras intragnicas, que
en la mayora de los casos se trata de mutaciones de cambio de fase de signo opuesto al
primer suceso mutacional, que restituyen la
funcin salvaje. Tambin se han encontrado
mutaciones supresoras de cambio de sentido;
parece ser que supondran un segundo cambio
mutacional que origina un nuevo cambio conformacional en una protena ya alterada que
restablece, en parte, su funcionalidad.
- Mutaciones supresoras intergnicas, que
en la mayora de los casos consisten en mutaciones en genes de ARNt que originan inserciones de aminocidos correctos en codones
mutados de un gen, con lo que se restituye la
funcionalidad salvaje del mismo. Se conocen
algunos casos de mutaciones supresoras intergnicas en las que no se involucran los ARNt;
son las mutaciones supresoras fisiolgicas:
consisten en la alteracin en un gen de una ruta
relacionada con la mutada originalmente, que
suprime los efectos mutantes de sta.
Por ltimo, tal vez la clasificacin de las
mutaciones ms asptica es aquella que se
realiza atendiendo al cambio molecular ocurrido
en el ADN (sustituciones de bases, inserciones,
deleciones, etc.) que ser tratada en el siguiente
captulo.
2. Mutaciones germinales y somticas
En los organismos pluricelulares, segn el

tejido en el que se produce una mutacin, se distinguen mutaciones somticas, si se originan en
VARIACIN GENTICA
299
Tabla 22.1. Tipos de mutaciones de acuerdo con el cambio molecular producido en la protena
clulas de tejidos somticos, y mutaciones germinales, si se producen en clulas de tejido germinal. Las consecuencias genticas sern muy
diferentes segn el caso de que se trate.
Las mutaciones somticas no se transmiten a
la descendencia, salvo para aquellos organismos
con reproduccin asexual y siempre que el
sector o la clula mutante participe en ella. Las
consecuencias, si las hubiera, son nicamente
para el organismo en el que se producen, que se

ver afectado de distintos modos de acuerdo con
el tipo de mutacin de que se trate, el tejido en
el que se produzca y el momento del desarrollo
en el que se origine la mutacin.
Como regla general las mutaciones somticas recesivas prcticamente no afectan al individuo en el que se producen, teniendo mayores
efectos si se trata de mutaciones dominantes o
300
GENTICA
ligadas al cromosoma X (que pueden expresarse

de modo inmediato). En cualquier caso, como
se ha indicado, tambin las consecuencias sern
distintas segn el tejido y momento del desarrollo en el que se produzcan. As, cuando una mutacin ocurre en una clula durante el desarrollo, se formar un clon de clulas mutantes,
cuyo tamao guardar relacin con el momento
en que se produce el hecho mutacional. Si se
produce en etapas tempranas de desarrollo el
clon alcanzar gran tamao y viceversa. Como
las clulas del clon permanecen prximas entre
s, a menudo es posible observar fenotpicamente una regin de clulas mutantes (sector mutante), siempre que el tipo de mutacin (dominante,
morfolgica, etc.) y las caractersticas del organismo lo permitan. Si el organismo est completamente diferenciado y se produce en una clula
que se sigue dividiendo (de tejido sanguneo,
por ejemplo) de nuevo se podr formar un clon
mutante, pero si la mutacin se produce en una
clula de un tejido que no mantenga la capacidad de divisin, las consecuencias de este hecho
sern prcticamente despreciables. Aun cuando
se trate de una mutacin dominante de efectos
indeseables (incluso de muerte celular) quedara
enmascarada por los miles de clulas salvajes de
ese tejido que efectuaran las funciones
normales del mismo.
Todo lo anterior, sin embargo, puede cambiar de modo dramtico si la mutacin afecta a
un gen con potencialidades oncogenticas: la
consecuencia para el organismo podra llegar a
ser la formacin de un cncer.
Las mutaciones que se producen en la lnea
germinal, contrariamente a lo que ocurre con las
mutaciones somticas, no afectan al individuo
en el que se generan, pero son de gran importancia, ya que se pueden transmitir a la descendencia. En este caso se producen individuos mutantes que de acuerdo con las particularidades de la
mutacin podrn expresarla a nivel fenotpico.
As ocurrir con las mutaciones dominantes y
las recesivas ligadas al cromosoma X en los machos descendientes de una hembra que haya sufrido una mutacin gamtica, siempre que se reciba el alelo mutado. Una mutacin germinal
autosmica recesiva, incluso letal, puede pasar
desapercibida durante muchas generaciones,
hasta que se extienda por la poblacin y un cruzamiento al azar entre dos individuos portadores
la ponga de manifiesto en descendientes homocigticos recesivos.
3. Sistemas de deteccin y seleccin
en procariotas y eucariotas
Como se ha puesto de manifiesto al comienzo del captulo, la obtencin de mutantes es

un paso previo, no slo para los estudios acerca
de cualquier aspecto relacionado con el propio
proceso de la mutacin, sino en muchas otras
parcelas de la investigacin gentica. Pinsese
en los trabajos relatados en muchos de los captulos de este libro (en los temas 12 y 13, por
ejemplo), donde de modo continuo se hacen referencias tales como se aislaron mutantes
para..., se seleccionaron mutaciones..., partiendo de mutantes en.... Frases como estas o
similares llevan, de modo implcito, a la necesidad de disponer de individuos o clulas mutantes. La inmensa cantidad de mutantes que se citan y analizan en cualquier texto de Gentica
pudiera plantear la falsa idea de que este suceso
resulta abundante en las poblaciones. Nada ms
alejado de la realidad; la mutacin es un suceso
extremadamente raro; basta pensar en la fidelidad de los procesos genticos, tales como la replicacin y la transcripcin, y en la estabilidad y
constancia de cualquier especie y organismo,
para comprender que se hace necesario disponer
de sistemas que detecten la mutacin cuando
ocurra y la extraigan del contexto salvaje
de que se trate en cada caso (progenie viral, poblacin bacteriana, descendencias de cruzamientos, etc.). Ciertos organismos se han revelado como ms idneos para su utilizacin en
diversas investigaciones genticas por la mayor
facilidad y eficiencia en la deteccin y seleccin
de sus mutaciones.
A lo largo de este apartado veremos sistemas de deteccin muy utilizados en las investigaciones genticas con diversos organismos,
pero antes conviene establecer una serie de
condiciones generales y premisas que deben ser
tenidas en cuenta en este tipo de experimentaciones.
VARIACIN GENTICA
Partiendo del hecho de que muchas mutaciones son recesivas respecto a su correspondiente alelo salvaje, cualquier sistema de deteccin tiene que disearse de manera que no se
enmascaren las mutaciones que se produzcan
por la presencia del alelo dominante. Una
manera simple y ampliamente utilizada para
solventar este problema consiste en escoger organismos haploides, en los que este problema
no se plantea. Precisamente muchas experimentaciones genticas de las que conforman el
bagaje histrico de esta ciencia se han realizado
en este tipo de organismos debido, en parte, a su
haploida (entre otras muchas cualidades que se
sealarn ms adelante). Pero en muchas
ocasiones esto no es posible y se necesitan
establecer procedimientos ingeniosos para evidenciar el suceso mutacional, de modo inmediato, tras su produccin. Un ejemplo sumamente ilustrativo proviene de uno de los primeros estudios en los que se llev a cabo un sistema de deteccin, el realizado por L. Stadler en
los aos 20 para analizar la tasa de mutacin del
alelo C (color del endospermo en el grano de
maz) hacia c (ausencia de color del grano de
maz). Teniendo en cuenta que el endospermo
es triploide y se forma por la fusin de dos
ncleos haploides femeninos y un ncleo
haploide masculino (y la condicin de dominancia del alelo C sobre c), para poder
analizar la tasa de mutacin necesitaba partir de
un endospermo Ccc, de manera que un nico
cambio C - c se manifestara de modo inmediato
en el fenotipo. El planteamiento experimental
fue realizar un cruzamiento con una planta
parental femenino homocigtica recesiva y el
parental masculino homocigtico dominante
para el carcter, tal como se aprecia en el
esquema.
De esta manera, la aparicin de un grano
301
incoloro dentro de una mazorca evidenciaba la

ocurrencia de la mutacin de modo inmediato.
En general, el trabajo con organismos diploides
resulta siempre ms laborioso (culminando estas
dificultades cuando se realizan estudios en la
especie humana), pero el ejemplo presentado
ilustra cmo para cada situacin particular
pueden llegar a establecerse las premisas adecuadas. As, en Drosophila se han diseado
sistemas especiales mediante la utilizacin de
hembras con los cromosomas X unidos o mediante la utilizacin de letales y en plantas,
donde la experimentacin mediante cruzamientos resulta larga y laboriosa, las tcnicas de
cultivos celulares y de tejidos han simplificado
el anlisis de mutaciones, muy importante para
la seleccin de alelos de inters en programas de
mejora. As se pueden testar en tales cultivos
genes de resistencia a herbicidas, al fro, etc., de
un modo ms rpido y eficiente, previamente a
su introduccin en variedades de inters
comercial.
Los organismos haploides resultan, indiscutiblemente, ms adecuados para los estudios de
mutacin (mucha progenie en tiempos muy cortos, poco espacio y poco coste para su mantenimiento, etc.), por lo que en ellos es donde ms
se han desarrollado sistemas selectivos para la
recogida de mutantes, en combinacin o no con
la utilizacin de mutgenos fsicos o qumicos
que incrementen las tasas generales de
mutacin. Los sistemas selectivos, como
veremos, son muy variados pero todos tienen en
comn un alto poder de resolucin, es decir se
resaltan inmediatamente los mutantes y se
extraen (seleccionan) del conjunto de
individuos de la poblacin de partida (
que previamente pueden haberse sometido
a algn tratamiento con algn agente
mutagnico para favorecer las tasas generales
de
mutacin).
A continuacin, veamos
302
GENTICA
Fig. 22.2. Sistema de deteccin de reversin de auxtrofos. En el ejemplo se seleccionan re vertientes prototrficos a partir
de mutantes auxotrficos deficientes para leucina.
algunos sistemas selectivos para la recogida de

mutantes en organismos haploides, principalmente bacterias y hongos.
3.1. INVERSION DE AUXOTROFOS
El mtodo pretende, como su nombre indica, recoger, a partir de una poblacin de mutantes nutricionales para un compuesto dado (a-),
los escasos individuos salvajes (a+) que se originen por reversin (a- - a+). Es una tcnica muy
utilizada en bacterias que sirve de mtodo para
establecer tasas de reversin de los genes. Ha
servido, adems, de base para los tests de mutagenicidad de un compuesto (que veremos al final del siguiente captulo). En la figura 22.2 se
muestra un ejemplo del procedimiento: se man-
tiene la cepa autotrfica (leu , en este caso) en

crecimiento en medio lquido suplementado con
la sustancia incapaz de fabricar (leucina), hasta
obtener un nmero determinado (elevado) de
individuos. En ese momento se pasa la suspensin a medio mnimo slido en placa petri y se
observa la aparicin de colonias de crecimiento
bacteriano que correspondern a la multiplicacin de bacterias salvajes, las escasas revertientes prototrficas. El recuento del nmero de colonias ser indicativo de la tasa de reversin
para esa mutacin en ese locus.
3.2. ENRIQUECIMIENTO POR FILTRACIN
Es un mtodo muy utilizado para la recogida de mutantes nutricionales en hongos fila-
VARIACIN GENTICA
mentosos y precisamente aprovecha sus caractersticas biolgicas para seleccionar mutantes nutricionales. El procedimiento (resumido en la fig. 22.3) consiste en cultivar, en
medio mnimo, una suspensin de esporas. Las
esporas prototrficas crecern originando
micelios, pero las esporas mutantes autotrficas
no podrn hacerlo, permaneciendo en la
suspensin an vivas. Transcurridas unas 12
horas se pasa el contenido por un filtro que retiene los micelios pero deja pasar las esporas
junto al medio, recogindose en otro tubo. El
medio estar enriquecido en mutantes nutricionales (todas las esporas que no lograron
formar micelios). En ese momento se puede
testar los mutantes para una serie de compuestos, realizando siembras sobre placas petri que
contengan, en el medio, un nico suplemento
nutritivo. La observacin de formacin de
micelios en cada caso correspondern a
mutantes nutricionales para cada uno de los
suplementos. Mediante este mtodo pueden
seleccionarse muchos mutantes nutritivos a
partir de un nico procedimiento experimental.
303
3.4. SELECCIN DE RESISTENCIAS A AGENTES NO

TOLERADOS POR LAS CEPAS SALVAJES
La seleccin de mutantes de resistencia, en

resumen, consiste en sembrar las bacterias en un
medio sin el agente frente al cual se quieren recoger individuos resistentes y, despus de un
periodo de crecimiento, se pasan las bacterias a
un medio selectivo que contiene el agente en
cuestin y aquellas bacterias que crezcan sern
las resistentes. Mediante este procedimiento experimental se pueden seleccionar numerosas
mutaciones de resistencia (para muchos antibiticos, infecciones por fagos, resistencia a condiciones medioambientales diversas, etc.) no slo
en bacterias sino en otros muchos organismos.
Adems, una de las primeras experimentaciones
de seleccin de resistencia realizada en E. coli,
en relacin con la resistencia al fago T1, sirvi
de base para la demostracin de la naturaleza
preadaptativa de la mutacin que veremos a
continuacin.
4. Carcter preadaptativo de la mutacin
3.3. ENRIQUECIMIENTO POR PENICILINA (Y OTROS

ANTIBITICOS)
Es un mtodo de seleccin de auxtrofos

muy utilizado en bacterias. Las bacterias son
sensibles a la penicilina, pero nicamente durante el periodo de divisin, de tal manera que si
se pone una suspensin de bacterias sensibles en
un medio con dicho antibitico, transcurrido un
cierto tiempo todas las bacterias prototrficas
habrn muerto, por accin de la penicilina,
durante su replicacin. En el medio, no
obstante, permanecern vivas las mutantes
autotrficas (ya que no han podido dividirse, al
carecer de los suplementos nutricionales que
necesitan). Transcurrido el tiempo necesario
para que se produzca la eliminacin de todas las
salvajes, se retira la penicilina con los filtros
adecuados y se tiene una coleccin de mutantes
autotrficos que pueden ser testados para su
mutacin concreta de modo similar al
procedimiento anterior.
Desde que se comenzaron los estudios sobre

mutacin, a comienzos del siglo xx, se plante
el debate acerca de si las mutaciones se producan como respuesta a la seleccin (mutaciones
adaptativas) o si eran de naturaleza aleatoria, es
decir se producan al azar (mutaciones preadaptativas o aleatorias). Durante casi 50 aos (hasta
1943) prevaleci el criterio de que las mutaciones surgan como un mecanismo de adaptacin
(de supervivencia) de los organismos como respuesta a los cambios medioambientales (visin
lamarkiana). Existan numerosas pruebas que,
aparentemente, apoyaban este hecho (resistencias al DDT en moscas, resistencias a antibiticos en bacterias, etc). Entre ellas destac el fenmeno del mecanismo industrial consistente
en la observacin del oscurecimiento de la pigmentacin de la mariposa Biston betularia de
los bosques de Inglaterra, a partir de la poca
del desarrollo industrial. En el contexto de la
adaptacin este hecho se explicaba de la
siguiente manera: las mariposas haban
oscurecido su pigmentacin en respuesta al
oscurecimiento
304
GENTICA
Fig. 22.3. Mtodo de seleccin de mutantes nutricionales en hongos filamentosos mediante enriquecimiento
por, filtracin.
VARIACIN GENTICA
de los rboles (debido al holln de las fbricas)

sobre los que se posaban, para pasar desapercibidas a los pjaros, sus depredadores, ya que
con la pigmentacin ms clara que tenan antes
eran esquilmadas ahora con suma facilidad. La
explicacin alternativa sera que las mutaciones
de pigmentacin oscura se encontraban en las
poblaciones antes del desarrollo industrial, pero
en esas circunstancias (rboles ms claros) no
eran favorecidas por la seleccin pero, tras el
desarrollo industrial, la presin de seleccin
cambi, actuando a favor de las mariposas oscuras, con lo que esos genes se expandieron en las
poblaciones (vanselos captulos dedicados ala
Gentica de poblaciones para una comprensin
mejor de lo expuesto). Y, en medio de esa polmica que se decantaba hacia el lado de los
adaptacionistas, se lleg a 1943, ao en el que
dos investigadores Salvador Luria y Max Delbrck, estudiando la resistencia de algunas bacterias de E. coli al fago T1, demostraron que la
mutacin de resistencia se produca de modo
aleatorio y al exponer las bacterias al fago, ste
realiza la nica misin de seleccionar los mutantes que ya se haban producido, pero no era
el agente desencadenante de la mutacin. La demostracin experimental es lo que se conoce
como test de fluctuacin.
El fago T1 es virulento para las cepas de E.
coli, produciendo en ellas el fenmeno de la fisis bacteriana, de manera que si se sembraba E.
coli en una placa en la que previamente se haban distribuido densamente fagos T1 las bacterias se lisaban y moran. Pero algunas bacterias no sufran la lisis, sobreviviendo a la infeccin. Si las colonias formadas se aislaban y
cultivaban, todas las bacterias eran resistentes al
fago. Luria y Delbrck se cuestionaron si las
bacterias se hacan resistentes al fago por una
adaptacin fisilgica como respuesta a la exposicin al fago, en cuyo caso el fago induca
la mutacin (hiptesis adaptativa) o bien el
cambio gentico era independiente de la
adaptacin, se originaba de modo aleatorio en
cualquier cultivo bacteriano y la presencia del
fago nicamente serva para poner de manifiesto
esta
mutacin
de resistencia (hiptesis
aleatoria o preadaptativa). Para distinguir entre
las dos alternativas realizaron 20 cultivos en
305
medio lquido de una cepa de E. coli sensible al

fago T1 (cultivos individuales) y de cada uno
sembraron una alcuota (en todos los casos con
las mismas cantidades de bacterias) en placa
petri densamente poblada de fago T1 (20 placas). Por otra parte, realizaron un cultivo nico
a partir del cual sembraron 10 alcuotas (con
idnticas cantidades de bacterias que las de los
cultivos individuales) en placas petri igualmente
pobladas con fago T1. En todos los casos
contaron posteriormente el nmero de colonias
de resistencia que se formaban, mostrndose los
resultados en la tabla 22.2. A partir de aqu, el
razonamiento seguido fue el siguiente:
a) Si cada bacteria tiene una pequea
probabilidad de adquirir la resistencia al fago al
exponerla a su contacto, como respuesta al
mismo (hiptesis adaptativa), al utilizar un nmero igual de bacterias y fagos e idnticos
tiempos de incubacin deben obtenerse nmeros
similares de colonias de resistencia en todas las
placas, tanto las procedentes del cultivo nico
como las procedentes de cultivos individuales,
es decir, deber existir muy poca fluctuacin
que vendr dada, estadsticamente, por un valor
bajo de la varianza de la distribucin del
nmero de colonias (y viceversa para mucha
fluctuacin).
b) Si la resistencia resulta de un cambio al
azar, puede ocurrir en cualquier momento y en
cualquier clula durante la incubacin de las
bacterias en el medio lquido, antes de la puesta
en contacto con el fago (hiptesis aleatoria o
preadaptativa). Si en un cultivo se produce una
mutacin en una bacteria al principio de la incubacin, las sucesivas divisiones de la bacteria
resistente darn lugar a un nmero abundante de
bacterias mutantes y, por el contrario, si en otro
cultivo la mutacin se produce en una
bacteria casi al final del periodo de
incubacin habr finalmente pocas bacterias
resistentes. Al sembrar las alcuotas de los

cultivos individuales debern obtenerse
cantidades muy variables de colonias de
resistencia, segn las bacterias resistentes
que hubiera, proporcionalmente, en cada
cultivo (mucha fluctuacin). Sin embargo,
en el cultivo nico, se d en el
306
GENTICA
Tabla 22.2. Resultados del test de fluctuaciones de Luria y Delburck
momento que sea una mutacin de resistencia,

las bacterias descendientes (muchas o pocas) se
irn distribuyendo de modo homogneo por el
cultivo y, al ir tomando alcuotas para sembrar
en placas, todas tendrn cantidades similares de
bacterias resistentes, lo que dar nmeros
similares de colonias de resistencia en las
distintas placas (poca fluctuacin).
Los resultados obtenidos nicamente eran
compatibles con la propuesta preadaptativa,
confirmndose el carcter aleatorio de la mutacin. An as, el test de fluctuacin no fue generalmente aceptado por la comunidad cientfica de la poca hasta que en 1952, el matrimonio formado por Joshua y Esther Lederberg obtuvo la prueba directa e irrefutable de que la
mutacin de resistencia ocurra antes de la
puesta en contacto de la bacteria y el fago, lo
que se conoce como el mtodo de las rplicas en
placa (fig. 22.4): sembraron bacterias de E. coli
de una cepa sensible al fago T1 en una pla-
ca petri con medio normal (sin fago) obteniendo

un nmero elevado de colonias de crecimiento
(placa maestra). De esa placa hicieron rplicas
en otras pobladas con fago T1, cuidando
mantener las posiciones de las colonias al
realizar el proceso. Las colonias de resistencia
aparecieron en todas las rplicas en la misma
posicin, lo que evidenciaba que provenan de
la placa maestra, cuyas bacterias nunca haban
estado en contacto con el fago. Si la resistencia
fuera inducida como respuesta a T1, las posiciones de las colonias en las rplicas habran
sido variables.
Adems, si se tomaban muestras de la placa
maestra, justamente en las colonias de las que
derivaban las de resistencia en las rplicas, y se
pasaban a un medio lquido con fago T1 se
observaba crecimiento bacteriano, luego la
mutacin de resistencia indudablemente se encontraba en las bacterias de la placa maestra
antes de poner a las bacterias en contacto con el
fago
TI.
VARIACIN GENTICA
Desde entonces se han realizado numerosas

pruebas experimentales, incluyendo la demostracin de la ausencia de adaptacin para el
melanismo industrial, la resistencia al DDT, a
los antibiticos, de manera que el carcter
preadaptativo de la mutacin puede considerarse un hecho general. No obstante, recientemente, los grupos de J. Cairns y B. Hall han
307
proporcionado evidencias que parecen indicar la

posibilidad de que en bacterias algunas mutaciones especficas se puedan originar como
respuesta a presiones medioambientales. Se han
proporcionado algunas pruebas preliminares que
parecen apoyar la propuesta de que, en
condiciones de presin nutricional (como sera
la de una bacteria lac puesta a crecer en un me-
Fig. 22.4. Mtodo de las rplicas en placa.
308
GENTICA
dio cuya nica fuente de carbono sea la lactosa),

las bacterias podran activar mecanismos (an
desconocidos) que generen un incremento de las
tasas de mutacin de genes implicados en la
supervivencia.
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Captulo
23
Bases moleculares
de las mutaciones gnicas
1.
Mecanismos de Origen de las Mutaciones Gnicas Espontaneas

e Inducidas
1.1. Mecanismos de Origen de las Mutaciones Espontneas
1.2. Mecanismos de Origen de las Mutaciones Inducidas
2.
Relacin Entre Mutgenos y Carcingenos: El Test de Ames
310
GENTICA
El conocimiento molecular del gen ha permitido llegar al establecimiento de los distintos

modos en que puede alterarse dando origen a
una mutacin. Atendiendo al cambio molecular
ocurrido en el ADN se distinguen (tabla 23.1):
1. Sustituciones de bases: Cambios de
unas parejas nucleotdicas por otras, pudiendo
hablarse de una transicin, si se origina la sustitucin de una base prica por la otra prica y
pirimidnica por la otra pirimidnica, o una
transversin, si el resultado en la doble hlice
consiste en el cambio de una base prica por pirimidnica y viceversa.
2. Inserciones de bases: Modificacin de la
secuencia de un gen por introduccin de una o
ms bases en algn lugar de la molcula.
3. Deleciones de bases: Modificacin de la

secuencia de un gen por prdida de una o ms
bases en algn lugar de la molcula.
4. Transposiciones de bases: Modificacin
de la secuencia de un gen por cambio en la
posicin de una o ms bases en algn lugar de la
molcula.
5. Inversiones de bases: Modificacin de la
secuencia de un gen por giro de 180 de un
grupo de bases dentro de la molcula.
Estos cambios moleculares pueden obedecer
a causas muy diferentes, desde fallos del propio
proceso replicativo hasta la accin de una
amplia variedad de mutgenos de muy diversa
ndole. En este captulo revisaremos los
mecanismos mediante los cuales se producen.
Tabla 23.1. Tipos de mutaciones segn el cambio molecular que se produce en el ADN
VARIACIN GENTICA
1. Mecanismos de origen
de las mutaciones
espontneas
e
inducidas
De modo general, de acuerdo con su origen,

existen dos grandes categoras de mutaciones:
espontneas e inducidas. Las mutaciones
espontneas son las que se producen de manera
natural, sin que se utilice ningn agente inductor
especfico, mientras que las mutaciones
inducidas seran aquellas que surgen
artificialmente por la accin de un agente inductor.
La primera demostracin de induccin artificial de mutaciones fue llevada a cabo por H.
Mller, en 1927, al provocar mutaciones en
Drosophila mediante rayos X. Desde entonces se
ha demostrado que numerosos agentes fsicos,
qumicos e, incluso, biolgicos (virus y
elementos transponibles) son mutagnicos (inductores de mutacin).
Resulta evidente que los lmites entre uno y
otro tipo de mutaciones se establecen en base a
la manera mediante la cual las percibimos pero,
a nivel molecular, esa separacin puede no estar
tan clara en muchos casos, de tal manera que
mutaciones que se observan espontneamente
pueden haber sido causadas por algn agente
mutagnico, aunque no haya sido usado de
modo artificial y voluntariamente por un
experimentador.
1.1.
MECANISMOS DE ORIGEN
DE LAS MUTACIONES ESPONTNEAS
Las mutaciones espontneas se producen

principalmente como consecuencia de errores
en la replicacin o por la accin de procesos
celulares (fluctuaciones trmicas, oxidaciones,
etc.) que alteran las bases nitrogenadas (lo que
se denomina lesiones espontneas).
Los errores replicativos de emparejamientos
errneos de las bases, si no son reparados (vase
siguiente captulo), originan transiciones.
La tautomera es uno de los mecanismos de
produccin de estos errores. Las bases del
ADN pueden existir en formas tautomricas,
311
que son ismeros estructurales (formas qumicas alternativas) que se diferencian por el desplazamiento de un protn en la molcula. En el
ADN las formas tautomricas predominantes de
las bases son las formas ceto (de la Guanina y la
Timina) y las amino (de la Citosina y la
Adenina). Las formas tautomricas enol (de la
Guanina y la Timina) y las mino (de la Citosina
y la Adenina) no se encuentran normalmente
(formas raras). Estas formas raras muestran
relaciones de emparejamiento diferentes (figs.
23.lb y 23.2b) a las existentes entre los
tautmeros normales del ADN (figs. 23.la y
23.2a). En ocasiones alguna base puede adquirir
una forma tautomrica rara y, durante la replicacin, se emparejar incorrectamente lo
que originar una transicin (fig. 23.3).
Los deslizamientos de las hlices en regiones con repeticin de nucletidos durante la replicacin (fig. 23.4) es otro tipo de fallo replicativo que origina inserciones y deleciones de
bases (segn la cadena que sufra el deslizamiento) lo que, en ltimo extremo, dar lugar a
cambios de la pauta de lectura de un gen. El
modelo fue propuesto por G. Streisinger en los
aos sesenta y, unos aos ms tarde, mediante
secuenciacin de puntos calientes de mutacin
en ciertos genes (vase fig. 13.5, cap. 13) se demostr que esas regiones eran secuencias repetidas del tipo de las propuestas por Streisinger.
La hipermutabilidad de esas regiones demostraba que los errores por deslizamiento de las
cadenas ocurren frecuentemente durante la replicacin y, si no se reparan, dan lugar a mutacin. En humanos estos deslizamientos de hlices, denominados bucles de insercin/delecin
(IDL) deben ser frecuentes y existen mecanismos especiales de reparacin de los mismos,
que se vern en el siguiente captulo. Se ha demostrado en diversas enfermedades hereditarias
como la distrofia miotnica, la enfermedad de
Huntington, el sndrome del X frgil, la atrofia
muscular espinobulbar, algunos tipos de ataxia,
etc., que la patologa se origina por el
incremento importante en el nmero de
tripletas (expansin de tripletas) en los
genes
responsables
de las mismas que
muestran en su secuencia regiones con
repeticiones de nucletidos (trinucletidos).
312
GENTICA
Fig. 23.1. a) Emparejamientos normales C-G. b) Emparejamientos de las formas

tautomricas mino (A* y C*).
VARIACIN GENTICA
Fig. 23.2. a) Emparejamientos normales A-T. b) Emparejamientos de las formas

tautomricas enol (T* y G*).
313
314
GENTICA
Fig. 23.3. Transicin AT - GC producida, tras dos rondas replicativas, como consecuencia del cambio
tautomrico de la Adenina (A - A*). Se muestra, en recuadros, el par nucleotdico original y el resultado final.
Las lesiones espontneas del ADN son un

conjunto de alteraciones de las bases que tienen
como denominador comn su formacin a partir
de procesos celulares normales de la clula.
En 1945, el fsico E. Schroedinger indic
que, fuese cual fuese la naturaleza del material
hereditario, un gen tendra que ser pequeo, en
trminos moleculares. En caso contrario, debido
al nmero tan elevado de genes que se necesitaban para el desarrollo y las funciones metablicas de un organismo, el material gentico no
cabra en el ncleo. Al mismo tiempo, predijo que, a consecuencia de su pequeo tama-
o, poda esperarse que un gen sufriera cambios

debidos a reacciones espontneas inducidas por
colisiones aleatorias con molculas del
disolvente (medio intracelular). En el ADN de
una clula humana se ha estimado que se producen, diariamente, miles de cambios al azar,
que seran lesiones espontneas; la eficiencia de
los mecanismos de reparacin de la clula
(vase cap. 24) hace posible que nicamente
unos pocos errores se mantengan; de ah la baja
frecuencia de mutacin de los genes.
Una de las lesiones ms frecuentes es la
prdida de una base (generalmente una puri-
VARIACIN GENTICA
315
Fig. 23.4. Modelo de Streisinger de deslizamiento de hlices durante la replicacin, para explicar
la produccin de inserciones y deleciones de bases (mutaciones de alteracin de la pauta de lectura) en el ADN.
na), por destruccin trmica, formndose un sitio apurnico (AP). La transcripcin puede verse
alterada directamente y si la clula con este tipo
de lesiones se replica la consecuencia inmediata
es la mutacin, pudiendo originarse tanto
transiciones como transversiones, en ambos
sentidos (bidireccionales).
El proceso de desaminacin de la citosina (o
la adenina ms infrecuentemente) (fig. 23.5) por
ataque hidroltico es otra lesin espontnea que
puede sufrir el ADN. En el primer caso se produce uracilo, que aparea con la adenina y, tras la
replicacin, se produce una transicin (CG TA). En el segundo caso se produce hipoxantina
(Hx) que aparea con la citosina producindose
una transicin (par AT - par GC). Dada la alta
frecuencia con que se producen estas lesiones,
se han seleccionado sistemas muy eficientes de
reparacin de las mismas, que reconocen la base
errnea (U o Hx) y la sustituyen por la correcta.
Sin embargo, la desaminacin de 5-metilcitosina (5-mC) origina timina y la clula, por razones obvias, no dispone de ningn mecanismo de
reparacin que reconozca esta base como errnea, por lo que las regiones donde se acumulan
residuos 5-mC son puntos calientes de mutacin
(y el dinucletido CpG, sustrato para la formacin de 5-mCpG, est subrepresentado en el
ADN de las clulas eucariotas).
La oxidacin de las bases, fundamentalmente la guanina, causada por las formas reactivas del oxgeno presentes en el medio celular,
es otra lesin espontnea que puede originar
tanto transiciones como transversiones, debido a
los peculiares apareamientos que se pueden
producir (vase captulo de reparacin).
1.2.
Mecanismos de origen
de las mutaciones inducidas
Como ya se ha indicado, existe una amplsima variedad de agentes fsicos, qumicos y

biolgicos inductores de mutacin (mutgenos)
y continuamente se van descubriendo otros
nuevos.
316
GENTICA
Fig. 23.5. Desaminacin de la citosina y de la 5-metilcitosina.
VARIACIN GENTICA
Cada mutgeno que se analiza en su capacidad de induccin de mutaciones muestra una

especificidad mutacional, es decir, causa preferentemente un tipo de cambio molecular en el
ADN. Esta especificidad se muestra tambin
para lugares dentro de la secuencia de los genes.
La especificidad hacia un tipo de cambio molecular est relacionada con el mecanismo mediante el cual induce la mutacin. La preferencia hacia unos determinados lugares dentro del
gen en ocasiones tambin se deriva de la propia
secuencia del ADN en esa regin. As, los lugares con residuos 5mC sern puntos calientes de
mutacin (transiciones 5mCG
TA) por tratamiento con un agente desaminante, por las razones expuestas en el anterior apartado. Esto no
siempre resulta tan obvio desconocindose, por
el momento, las razones de la hipermutabilidad
de determinados puntos calientes en genes en
los que se ha rastreado la frecuencia de mutaciones a lo largo de su secuencia.
De acuerdo con el mecanismo mediante el
cual los mutgenos actan sobre el ADN pueden diferenciarse cuatro grandes grupos: los que
sustituyen a las bases (anlogos de bases), los
que alteran las bases de manera que se producen
apareamientos errneos, los agentes que se
intercalan (agentes intercalantes) entre las bases
originando inserciones y deleciones de las
mismas durante la replicacin (mutaciones de
cambio de fase) y los que eliminan bases o las
daan de modo que se produce un bloqueo
replicativo (inductores de respuesta SOS).
Algunos mutgenos, sobre todo agentes fsicos, pueden actuar sobre el ADN combinando
diferentes mecanismos. As, los rayos X y otras
radiaciones ionizantes pueden producir una
enorme variedad de efectos (de ah su alto poder
mutagnico), produciendo desde ionizaciones
del medio interno y de las bases hasta grandes
alteraciones en la doble hlice (incluso roturas y
reordenaciones cromosmicas).
Los compuestos que sustituyen a las bases
o anlogos de base son molculas que, por su
parecido, pueden sustituir a las bases durante la
replicacin. Una vez incorporadas pueden
establecer relaciones de apareamiento incorrectas que conducen a transiciones. El ejem-
317
plo ms conocido es el del 5-bromouracilo (5BrU), anlogo de la timina, a la que sustituye

durante la replicacin. Este anlogo en su forma
ceto aparea con la adenina (igual que lo haca la
timina) pero la presencia del tomo de bromo lo
hace muy proclive a sufrir un cambio
tautomrico a su forma enol o a una forma
ionizada, que aparea con la guanina. Despus de
una ronda de replicacin se habr producido una
5-BrUG CG).
transicin (TA
5-BrUA
Adems, la presencia de 5-BrU en el medio
incrementa la sensibilidad de la molcula de
ADN a la radiacin ultravioleta (UV). Otro
anlogo de base es la 2-aminopurina (2AP),
anlogo de la adenina. De modo similar a lo
anterior, aparea normalmente con la timina,
pero en forma protonizada lo hace con la citosina, lo que da lugar, tras la replicacin, a una
transicin (AT
2APT
2APC GC).
Dentro del grupo de mutgenos que producen alteraciones de las bases que conducen a
apareamientos errneos se encuentran los
agentes alquilantes y desaminantes y la hidroxilamina. El poder mutagnico de los agentes
alquilantes se descubri durante la Primera
Guerra Mundial, en investigaciones sobre armas
qumicas (los gases mostaza usados en esa
guerra pertenecan a ese grupo de compuestos).
Un agente alquilante, como indica su nombre,
cede grupos alquilo (CH3 o CH2-CH3) a grupos
amino o ceto de los nucletidos. Uno de los ms
conocidos es el etilmetanosulfonato (EMS) que
alquila los grupos ceto de la guanina
(preferentemente) y de la timina, con lo que
estas bases alquiladas cambian sus relaciones de
emparejamiento (AlquilG = T; AlquilT = G) y
se originan transiciones. Se conocen otros
muchos agentes alquilantes como, por ejemplo,
la nitrosoguanidina (NG), el cloroetilsulfuro
(gas mostaza), el metilmetanosulfonato (MMS),
el etiletanosulfonato (EES), etc.
Los agentes desaminantes, como el cido
nitroso (NA), actan sobre la citosina y la adenina (las dos bases susceptibles de ser desaminadas). Como ya hemos visto, al hablar de las
desaminaciones espontneas, se establecen relaciones de apareamiento diferentes (C
U=
A; A
Hx = C), producindose transiciones
(CG
TA).
318
GENTICA
Fig. 23.6. Agentes intercalantes.
Finalmente, la hidroxilamina es tambin un

compuesto que origina apareamientos errneos.
Hidroxila preferentemente la citosina, que de
esa manera pasa a emparejarse con la adenina,
originando especficamente transiciones CG TA.
Los agentes intercalantes son un grupo de
mutgenos qumicos que causan mutaciones
de cambio de la pauta de lectura, producidas por

la adicin o delecin de una base (generalmente). Se ha investigado mucho acerca del
mecanismo por el que inducen estas mutaciones, utilizando principalmente los colorantes de
acridina (proflavina y naranja de acridina,
principalmente) (fig. 23.6a) y otros compues-
VARIACIN GENTICA
tos denominados ICR. Los agentes intercalantes

son molculas planas del tamao de un par de
bases que se acoplan (intercalan) entre dos pares
de bases consecutivas de la doble hlice (fig.
23.6b). Su mecanismo de accin no est
completamente determinado. Se ha propuesto
que actan durante la replicacin, reparacin o
recombinacin del ADN, facilitando desplazamientos de hlices (a causa de las distorsiones
de su intercalacin).
Por ltimo, existen una serie de mutgenos
que eliminan bases en el ADN o las daan de tal
modo que durante la replicacin se produce un
bloqueo en los sitios lesionados (parada replicativa). En esas circunstancias la accin del
mutgeno sera simplemente letal, producindose la muerte de la clula afectada. Las clulas
deben superar esta parada replicativa, aunque
ello suponga la incorporacin de un nucletido
incorrecto. En bacterias se ha descubierto un
mecanismo de emergencia, que se denomina
respuesta SOS que, al activarse, reanuda la
replicacin (evitndose la muerte de la clula),
pero incorporando cualquier nucletido (se
anula la actividad correctora de pruebas de la
ADN polimerasa III) como complementario al
lugar de la lesin y siguiendo una replicacin
menos fiel, con lo que se producirn nuevas
mutaciones (vase captulo de reparacin). En
eucariotas, la respuesta a lesiones de este tipo,
que originan parada replicativa, sigue otra va
(mediante la activacin de p53) que ser tratada
en detalle en el siguiente captulo. Los agentes
que ocasionan este tipo de lesiones en el ADN
sern por tanto altamente mutagnicos. Entre
ellos destaca la radiacin ultravioleta (UV) cuyo
efecto principal es la produccin de dmeros de
timina, formados por uniones covalentes entre
dos bases T consecutivas (T = T) en una hlice.
Tambin pueden producirse uniones entre otras
pirimidinas consecutivas (C = C y C = T), pero
son minoritarias. Aunque las clulas tienen
eficientes sistemas de reparacin de estas
lesiones, tal como hemos visto al tratar las
mutaciones espontneas, los efectos de la
radiacin UV de modo inducido, resultan
incluso letales para muchos microorganismos.
Los agentes que provocan sitios apurni-
319
cos (AP), entre los que destacan las radiaciones

ionizantes (por su accin directa sobre el enlace
glucosdico) y los compuestos de adicin a las
bases, como la aflatoxina B, y otras muchas
sustancias cancergenas (generan sitios AP
despus de unirse a las bases), son tambin
sustancias altamente mutagnicas, originndose
tanto transiciones como transversiones.
Finalmente, los elementos genticos mviles, presentes de modo natural en todos los organismos, desde bacterias al hombre, y ciertos
virus pueden ser considerados agentes mutagnicos. El tipo de mutacin producida resulta diferente de todo lo expuesto hasta el momento.
Generalmente la alteracin a nivel molecular
proviene de su insercin dentro de la secuencia
de un gen, interrumpindolo (son las llamadas
mutaciones polares, que sern tratadas en el cap.
28). Precisamente los primeros elementos
mviles se descubrieron por su efecto mutacional, tanto en eucariotas como en procariotas
(variegacin de color del grano de maz y mutaciones polares en genes del opern gal de E.
coli; vase cap. 28) y desde entonces se han ido
incorporando numerosas evidencias acerca del
poder mutagnico de estos tipos de elementos.
Tambin muchos virus, entre los que podemos
citar los retrovirus, lentivirus, papovavirus, etc.,
por su capacidad de integracin en los genomas,
pueden introducirse en la categora de agentes
inductores de mutacin. Merece citarse el caso
del fago Mu (una partcula intermedia entre
virus y transposn), altamente mutagnico (de
ah su nombre derivado de
Mutator).
2.
Relacin entre mutgenos y

carcingenos: el test de Ames
El cncer es un conjunto de enfermedades

genticas que se producen por alteraciones en
los genes. La mutacin, por tanto, es una causa
bsica del desarrollo de cualquier proceso
neoplsico por lo que no hay duda de que un
compuesto mutagnico pasa a ser un compuesto
potencialmente cancergeno. En la sociedad
actual se utiliza una enorme variedad
320
GENTICA
de productos qumicos: aditivos alimentarios

(colorantes, conservantes, espesantes, edulcorantes, etc.), medicamentos, tejidos, productos cosmticos, pesticidas, etc. Muchos de
los compuestos que se utilizaban hace aos en
algunas de las categoras indicadas han sido
retirados de la comercializacin porque se ha
demostrado su alto poder mutagnico y/o cancergeno. En muchas ocasiones la deteccin de
la carcinogenicidad de un compuesto se ha
realizado, a partir de estudios epidemiolgicos
que han demostrado su implicacin en algn
tipo de proceso cancergeno y cada vez son ms
rigurosas las medidas de los gobiernos para el
control de cualquier producto antes de su
comercializacin. Pero continuamente aparecen
nuevos productos que deben ser analizados en
su mutagenicidad. Existen numerosos ensayos
para esta deteccin que utilizan diversos
organismos como ratn o clulas de mamferos
en cultivo, pero son laboriosos. Hasta la dcada
de los setenta no se pensaba en las bacterias
como un material adecuado, como tampoco lo
es Drosophila, para ensayos de mutagenicidad,
al estar tan alejadas de la fisiologa humana,
hasta que Bruce Ames dise un procedimiento
experimental que aprovech las ventajas de las
bacterias para el anlisis mutacional y solvent
sus inconvenientes de alejamiento evolutivo. El
mtodo se ha denominado test de Ames y es
la prueba ms comn que se realiza para la
comprobacin de la mutagenicidad/inocuidad de
cualquier compuesto qumico, mostrndose
resumidamente en la figura 23.7. Se utilizan dos
cepas mutantes auxotrficas his- de Salmonella
typhimurium, una para detectar sustituciones de
pares de bases (su mutacin his es sensible a la
reversin mediante mutaciones de cambios de
nucletidos) (Cepa 1) y la otra para detectar
mutaciones de cambio de la pauta de lectura
(sensible a la reversin mediante inserciones o
deleciones) (Cepa 2). En la prueba se utiliza la
frecuencia de reversin de auxtrofos
(hishis+). Adems, para aumentar su
sensibilidad frente a los mutgenos las cepas
presentan mutaciones que eliminan la
reparacin por escisin y la barrera de lipopolisacridos que protege a la bacteria.
Ya hemos indicado que las bacterias estn

fisiolgicamente muy alejadas del hombre. En
nuestro organismo los compuestos qumicos son
metabolizados
(destoxificacin
y
descomposicin) en el hgado. Una sustancia inocua para una bacteria puede ser muy mutagnica
para el hombre como resultado de la mutagenicidad de algn compuesto intermedio de
su metabolismo heptico. Por tanto, para
simular esto en el sistema bacteriano, se incorporaron las enzimas del hgado de un mamfero (al que se le activaba previamente la
produccin de enzimas hepticas). A partir de
ah, una vez puestas en contacto las bacterias,
las enzimas hepticas y el compuesto a testar en
medio lquido suplementado con histidina, se
dejaban crecer y, transcurrido el tiempo necesario para obtener el volumen adecuado de
clulas bacterianas, se tomaban muestras y se
sembraban en placas petri con medio mnimo.
La existencia de colonias en alguna de las placas de bacterias sometidas al compuesto testado
indicaba que se haba producido reversin
his+ (la reversin es un suceso an ms
hisraro que la mutacin his+ his-), lo que era,
a su vez, determinante del carcter mutagnico
del compuesto. Adems segn en qu placa se
produjesen colonias se podan inferir el tipo de
accin que realizaba el mutgeno sobre el ADN.
As, por ejemplo, si el compuesto a testar
origina colonias prototrficas preferentemente
en la cepa sensible a la reversin mediante
mutaciones de cambio de la pauta de lectura
(Cepa 2) se tratar, con toda probabilidad, de un
agente intercalante. Adems, siempre se
utilizaban controles sin el compuesto a testar,
donde no deba visualizarse ninguna colonia, ya
que se trataba de cepas autotrficas. Aunque la
respuesta positiva como mutgeno no demuestra
exactamente la capacidad carcinognica (para
ello se necesitaran ensayos directos de
carcinogenicidad) realmente resulta sumamente
til. Es obvio que cualquier sustancia que se
muestre
mutagnica
es
inmediatamente
descartada para fines comerciales y la mayora
de los laboratorios industriales y farmacuticos
de todo el mundo lo utilizan como tcnica
rutinaria para testar todos sus compuestos.
VARIACIN GENTICA
Fig. 23.7. Esquema resumido del test del Ames. Las siglas MS y MM se refieren a medio suplementado
con histidina y medio mnimo, respectivamente.
321
322
GENTICA
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Captulo
24
Reparacin del dao gentico

1.
Mecanismos de Reparacin
1.1.
1.2.
1.3.
1.4.
Sistemas Preventivos
Sistemas de Reparacin Directa
Sistemas de Reparacin por Escisin
Sistemas de Reparacin Posreplicativa: Reparacin
de Emparejamientos Errneos (HMR)
1.5. Reparacin Recombinatoria (HR)
1.6. Reparacin inducida Ante un Dao Generalizado:
Respuestas SOS
1.7. Reparacin Inducida en Clulas Eucariotas
2.
Enfermedades Humanas Debidas a Fallos en los

Sistemas de Reparacin
324
GENTICA
El mantenimiento de la estabilidad gentica

es fundamental para la supervivencia de los
individuos y de las especies aunque, como veremos en los ltimos captulos del libro, a largo
plazo las posibilidades de supervivencia de una
especie aumentan al introducir una cierta tasa de
variabilidad. La estabilidad gentica en los
individuos se ha alcanzado, en primer lugar,
mediante el desarrollo de un mecanismo muy
preciso de copia del ADN que precede a las
divisiones celulares. En segundo lugar se han
desarrollado mecanismos exactos de divisin
celular y, por ltimo, existen sistemas de
reparacin que evitan los errores de copia y las
lesiones accidentales del material gentico.
Cuando estos ltimos mecanismos no consiguen
su objetivo se producen cambios permanentes
en el ADN que conocemos como mutacin
(analizada en los captulos precedentes).
El material gentico sufre continuamente
errores accidentales al ser copiado y daos debidos a radiaciones, agentes qumicos, oxidaciones, radicales libres, calor, etc. Las clulas
procariotas y eucariotas responden al dao gentico, para minimizar y corregir sus efectos,
induciendo una gran variedad de mecanismos de

reparacin capaces de ayudar a la clula a
sobrevivir.
1. Mecanismos de reparacin
Existen diferentes mecanismos de reparacin; algunos previenen el dao, otros realizan

la reparacin directa de la base daada, mientras
otros sustituyen las bases que han sufrido el
dao. Algunos tipos son especficos de una
lesin particular del ADN, aunque generalmente
el mismo mecanismo es capaz de reparar
lesiones de diferente ndole (fig. 24.1), de
manera que una misma lesin puede ser reparada por varios sistemas lo que constituye un
sistema de seguridad para la clula: cuando en
una clula no funciona un mecanismo por
encontrase alterado, pueden actuar otros para
eliminar las lesiones. A continuacin analizaremos los distintos mecanismos de reparacin,
fundamentalmente en procariotas, donde estn
mejor estudiados. Dada su fundamental
importancia para la supervivencia de la clula,
estos mecanismos han sido altamen-
Fig. 24.1. Agentes causantes de daos en el ADN y sistemas de reparacin.
VARIACIN GENTICA
325
Superxido dismutasa
Catalasa
Radicales superxido____________________> Perxido de hidrgeno__________ > HzO
te conservados a lo largo de la evolucin, si bien
en eucariotas intervienen un mayor nmero de
protenas debido a la mayor complejidad de su
genoma.
1.1. SISTEMAS PREVENTIVOS
No son propiamente sistemas de reparacin

sino ms bien previenen posibles daos en el
ADN. Estos mecanismos actan neutralizando
compuestos potencialmente mutagnicos. Los
radicales libres daan el ADN por oxidacin de
las bases nitrogenadas; para evitar la existencia
de estos radicales en la clula existe una
enzima, la superxido dismutasa, que cataliza el
paso de radicales superxido a perxido de
hidrgeno que es finalmente convertido en agua
por la catalasa, con lo que desaparece el peligro
potencial de oxidacin del ADN (vase
esquema [arriba]).
1.3. SISTEMAS DE REPARACIN POR ESCISIN
Son mecanismos generales que se encuentran prcticamente en todos los organismos y

que actan eliminando la zona daada del ADN,
para lo que necesitan la participacin de
endonucleasas que reconocen el dao producido
en una de las cadenas por la distorsin estructural que ste conlleva. Se conocen distintos
sistemas de reparacin por escisin, algunos de
ellos son muy generales mientras otros son
especficos de lesiones muy frecuentes.
1.3.1.
Reparacin por Escisin de

Nucletidos (NER)
Es un mecanismo de reparacin general para

daos en el ADN que provoquen distor-
1.2. SISTEMAS DE REPARACION DIRECTA
La forma ms directa de reparar una lesin

es revertirla, aunque esto no siempre es posible.
Por ejemplo, la luz ultravioleta (UV) produce
daos en el ADN al formar dmeros de pirimidinas adyacentes que detienen las maquinarias de replicacin y transcripcin. Aunque es
posible la generacin de dmeros, por la formacin de enlaces covalentes, C = C y C = T,
fundamentalmente se forman dmeros T = T
(fig. 24.2).
Las clulas de procariotas y eucariotas inferiores (no en humanos) poseen una enzima, la,
fotoliasa, que se activa por la luz visible, reconoce la distorsin estructural producida por el
dmero rompiendo el anillo ciclobutano formado (fotorreactivacin) y regenerando las
bases originales. En ausencia de luz o de fotoliasa, la reparacin de estos dmeros es llevada
a cabo por otros sistemas de reparacin (escisin) que veremos a continuacin.
Fig.24.2.Dimero de timina inducido por la UV.
326
GENTICA
Fig. 24.3. Reparacin de un dmero de timina por el sistema de reparacin por escisin.
siones en la doble hlice; este tipo de lesiones

son causadas por la luz ultravioleta (dmeros de
pirimidinas), agentes qumicos tales como los
hidrocarburos aromticos policclicos que se
unen a las bases covalentemente, etc. Este sistema acta eliminando los nucletidos daados
al cortar los puentes fosfodister a ambos lados
de la lesin (fig. 24.3). El dao en el ADN es
reconocido por un complejo multienzimtico
constituido por las protenas Uvr (A, B, C, D).
El complejo formado por dos subunidades UvrA
y una UvrB rastrea el ADN buscando distorsiones de la doble hlice, y cuando las detecta UvrB se queda unida a la zona distorsionada
mientras que UvrA es liberada. UvrC se une a la
protena UvrB que est anclada. Cada una de
estas protenas, con actividad endonucleasa,
hace un corte a cada lado de la lesin. El pequeo oligonucletido cortado de 12-14 nucletidos, que incluye la lesin, es desplazado por
UvrD (con actividad helicasa). El hueco que se
genera es reparado por la ADN polimerasa I a
partir del extremo 3' OH libre, por ltimo una
ligasa sella los extremos.
Existe una variante de este sistema en la que

los huecos que se producen son de mayor
tamao. Adems, en organismos eucariticos
tambin se da este mecanismo, con un total de
siete genes implicados llamados XPA, XPG. En
la figura 24.4 se resume el funcionamiento del
sistema, en el que XPA en colaboracin con
XPE son responsables del reconocimiento de la
lesin en el ADN al que se unen. En el desenrollamiento de la doble hlice interviene un complejo de helicasas (XPB, XPC, XPD, CSA, CSB).
La escisin la realizan XPG y XPF produciendo
la liberacin del oligonucletido que incluye la
lesin. RPA coloca la pinza PCNA para que la
ADN polimerasa d/e, realice la sntesis y, por
ltimo, una ligasa realiza el sellado.
1.3.2. Reparacin por Escisin de Base (BER)
Este sistema se encarga de la reparacin del

dao producido en el ADN por agentes tales
como los rayos X, los radicales libres, los agen-
VARIACIN GENTICA
327
Fig. 24.4. Sistema de reparacin por escisin de nucletidos en eucariontes.
tes alquilantes, etc. El sistema se encarga de

eliminar nicamente la base daada; se basa en
la accin de las ADN glicosilasas que rompen el
enlace N-glicosflico que une la base al azcar,
pero no pueden romper los enlaces fosfodister.
Como consecuencia de la rotura del enlace
glicoslico se genera un hueco: sitio AP (sin una
purina o una pirimidina) (fig. 24.5). El sitio AP
es reconocido por el sistema de reparacin de
AP endonucleasas que veremos a continuacin.
1.3.3. Reparacin por AP endonucleasas
Las clulas poseen endonucleasas capaces

de atacar los sitios AP, por lo que se denominan
AP endonucleasas pues reconocen cualquier
lugar de la doble hlice de ADN que contenga
una desoxirribosa sin una base unida (sitios
AP). Como vimos en los captulos anteriores,
las depurinaciones espontneas son muy
frecuentes en las clulas, por ello la existencia
de estas endonucleasas son de gran importancia
para la supervivencia celular. Las AP endonucleasas realizan cortes en la cadena cortando
el enlace fosfodister del sitio AP, lo que dispara el sistema de reparacin por escisin.
1.3.4. Reparacin GO
Es un sistema muy especfico para la reparacin del dao causado por la oxidacin de la
guanina en el ADN o por la incorporacin de 8oxodG (GO) (fig. 24.6). En este sistema intervienen tres glicosilasas: MutM, MutY y MutT.
MutM elimina la lesin 8-oxodG producida por
la oxidacin espontnea, dejando un sitio AP,
que es reparado por el sistema de AP
endonucleasas. No obstante, en el caso de que la
ADN polimerasa que interviene en la replicacin est prxima a la lesin, sta aade un
residuo A, lo que produce un apareamiento de
bases incorrecto. MutY elimina la A introducida
errneamente y se puede realizar normalmente
la reparacin del sitio AP. Si la que acta es la
polimerasa de reparacin sta introduce una C,
por lo que nuevamente comienza el proceso de
reparacin con MutM.
Finalmente, existe tambin un mecanismo
de prevencin de las lesiones producidas
328
GENTICA
Fig. 24.5. Generacin de sitios AP por rotura del enlace glicoslico.
8-oxodG, consistente en la eliminacin de los

precursores oxidados que pueden ser incorporados, de manera que MutT hidroliza el 8oxodG trifosfato en monofosfato.
1.4.
SISTEMAS DE REPARACIN
POSREPLICATIVA: REPARACIN
DE EMPAREJAMIENTOS ERRNEOS (MMR)
A pesar de la gran fiabilidad del proceso de

replicacin, durante el transcurso del mismo se
introducen algunos errores que no son reparados
por la capacidad de correccin de pruebas que
posee la polimerasa. Estos errores consisten en
la introduccin de bases incorrectas; as, si a
una T por error se le enfrenta una G, el emparejamiento no es correcto (mismatch). Normal-
mente la actividad exonucleasa que posee la polimerasa debera reparar el error, y as ocurre en
la mayora de los casos pero, ocasionalmente, el
error escapa de la correccin por lo que tiene
que ser eliminado antes de que ocurra una nueva
replicacin, con el fin de eliminar la posibilidad
de introduccin de mutaciones.
Estos errores introducidos durante la replicacin son reparados por los sistemas de reparacin de apareamientos errneos, que en
eucariontes han extendido sus capacidades
siendo capaces de corregir alteraciones de mayor tamao como son los bucles originados por
inserciones y deleciones (IDL).
En E. coli la reparacin de bases mal apareadas es un mecanismo de reparacin especializado en la correccin de los errores que se
producen cuando se replica el ADN. El siste-
VARIACIN GENTICA
329
Fig. 24.6. Sistema de reparacin GO. Formacin de 8-oxoGMP a partir de su precursor 8-oxoGTP.
ma de reparacin examina la cadena de ADN

recin sintetizada en la replicacin, pues la base
errneamente introducida se encontrar en ella.
Dicha cadena se distingue de la molde por el
elevado nmero de secuencias GATC que no
estn metiladas en la de nueva sntesis ya que la
metilasa Dam an no ha actuado en ella; la
actuacin de la metilasa Dam tarda un breve
lapso de tiempo lo que permite reconocerla y
localizar las parejas de bases incorrectamente
apareadas que forman un bucle de
apareamiento. Una vez reconocido el error, se
corta la regin de la hlice donde se encuentra
y, mediante nueva sntesis de ADN, se restaura
la secuencia correcta. El sistema en E. coli
consta esencialmente de 4 protenas: MutH,
MutL, MutS y MutU. La reparacin se inicia
por la unin de MutS a la base mal apareada,
seguida de la adicin de MutL. El ensamblaje
de este complejo lleva a la activacin de una
endonucleasa GATC asociada con la protena
MutH, que corta la cadena no modificada en
una secuencia d(GATC) hemimetilada. La
reaccin de escisin la lleva a cabo una exonucleasa que depende de MutS, MutL y la accin cooperativa de la ADN-helicasa II (protena MutU). Por ltimo la ADN polimerasa
rellena el hueco y una ligasa realiza el sellado
(fig. 24.7).
Dada la importancia de este sistema en E.

coli no es sorprendente que se haya conservado
selectivamente a lo largo de la escala evolutiva,
existiendo sistemas homlogos en organismos
superiores. As, se ha demostrado que la va
principal de reparacin del ADN en S.
cerevisiae requiere un homlogo de la protena
MutS: MSH2 (y quizs MSH3 y MSH6
homlogos al GTBP humano) y dos homlogos
de la protena MutL: MLH1 y PMSI. Al igual
que en los mutantes de reparacin de bacterias,
las levaduras con deficiencias en los sistemas de
reparacin acumulan mutaciones a una
velocidad incluso cien veces superior a la
normal.
Todava no se ha podido demostrar que este
proceso de reparacin sea extrapolable a las
clulas humanas, pero todo parece indicar que el
mecanismo ha de ser, en parte, equivalente. Los
extractos celulares humanos son capaces de
llevar a cabo reacciones de reparacin muy
similares, en cuanto al mecanismo, a las
bacterias. Evidentemente las funciones reparadoras de las protenas bacterianas no pueden ser
idnticas a las de sus homlogas eucariotas ya
que un fallo en la reparacin de nucletidos mal
apareados tendra como consecuencia la
aparicin de transiciones y transversiones de
bases, pero nunca las inserciones y deleciones
330
GENTICA
Fig. 24.7. Sistema de reparacin posreplicativa de emparejamientos errneos (MMR) en E. coli.
que afectan a las secuencias repetidas en eucariotas. En humanos se han descubierto genes de
este sistema, homlogos a los de levadura (por
lo que se le nombra anteponiendo una h a los
de levaduras) (tabla 24.1). Se ha podido
comprobar que la protena hMSH2 no slo se
une a nucletidos puntuales mal apareados, tal
como lo hacan sus homlogos en bacterias y
levaduras, sino que reconoce eficientemente los
bucles de insercin/delecin (IDL: insertion/deletion loops) de oligonucletidos mal
apareados, confirmndose su papel en el
reconocimiento de los errores de replicacin

asociados con las secuencias simples repetidas
(microsatlites) del genoma humano. La existencia en eucariotas de estas secuencias de ADN
altamente repetido con unidades cortas de
repeticin, especialmente proclives a fallos
replicativos de deslizamiento de hlices, puede
explicar la ampliacin de las funciones de las
protenas reparadoras que ha tenido lugar en los
organismos superiores. La prdida de la funcin
del gen hMSH2 (o la de los otros genes de
reparacin) dara lugar a la ausencia de re-
VARIACIN GENTICA
Tabla 24.1. Genes que intervienen en el sistema

de reparacin de emparejamientos errneos (MMR)
en humanos
conocimiento de los IDL, y por tanto al mantenimiento de las expansiones y deleciones de

ADN, caractersticas de la inestabilidad en muchos tumores humanos.
1.5. REPARACIN RECOMBINATORIA (HR)
El papel de la protena RecA durante la recombinacin se analizar en el captulo dedicado al anlisis de este mecanismo a nivel molecular. Bsicamente, RecA reconoce el ADN
de cadena sencilla y promueve la invasin de
esta cadena de ADN, hacia una doble hlice que
est en su proximidad. Si encuentra homologa
desplaza a la cadena de igual polaridad a la que
gua. Las cadenas invasoras buscan la
posibilidad de apareamiento y cuando
encuentran la zona con bases complementarias
se fijan mediante el establecimiento de puentes
de hidrgeno entre bases complementarias.
Adems, RecA tiene un papel fundamental
en la reparacin, pues al activarse en presencia
de ADN de cadena sencilla inhibe el represor de
una serie de genes implicados en la reparacin
(tal como veremos a continuacin en el
mecanismo de reparacin SOS). Por otra parte,
RecA tiene la funcin de rellenar los huecos, en
una cadena de ADN recin sintetizada, originados por paradas replicativas. Para ello invade
dichos huecos con trozos de cadena de ADN de
idntica polaridad que provienen de la hlice
complementaria al molde daado. En esta
situacin la polimerasa I y la ligasa se encargarn de reconstruir la doble hlice.
1.6.
331
REPARACIN INDUCIDA ANTE UN DAO

GENERALIZADO: RESPUESTA SOS
En bacterias existe un mecanismo de emergencia que se dispara ante un dao masivo en el

ADN producido por ciertos agentes mutagnicos que daan un gran nmero de bases y, por
tanto, origina mltiples desemparejamientos. El
mecanismo se ha denominado respuesta SOS en
alusin a que es un mecanismo de emergencia
que se dispara cuando los otros mecanismos de
reparacin se encuentran desbordados ante la
gran cantidad de dao, permitiendo la
supervivencia de la clula an a costa de
introducir mutaciones.
Todos los sistemas de reparacin que hemos
estudiado hasta ahora se basaban en que el dao
se restringa a una de las cadenas, pudiendo utilizar la complementaria como molde en la reparacin. En el caso de un dao generalizado, las
dos cadenas pueden quedar lesionadas en determinadas regiones, originando un hueco en el
que la replicacin se bloquea, al no existir una
cadena que acte como molde. En bacterias se
consigue desbloquear la replicacin bien suministrando un molde correcto de un ADN homlogo, o introduciendo bases al azar.
La respuesta SOS se dispara por la induccin de la expresin de una serie de genes, la
mayor parte de los cuales se encuentran implicados en la reparacin y la recombinacin general. LexA es un represor que reprime la expresin de varios genes (recA, uvrA, uvrB y
uvrD) unindose a la secuencia consenso que
poseen todos: caja SOS (5'-CTGX10CAG-3').
La protena RecA en presencia de ADN de cadena sencilla se activa y se une a LexA, produciendo probablemente su protelisis, por lo que
permite la expresin de los genes que reprima.
Una vez que se realiza la reparacin del dao
dejan de existir regiones de cadena sencilla por
lo que recA deja de activarse y LexA vuelve a
actuar como represor detenindose la respuesta
SOS.
Los genes Uvr que son activados
suponen un incremento en la capacidad
reparadora de la clula pues al expresarse
funcionan como lo hacan en el sistema de
reparacin por escisin de nucletido.
332
GENTICA
Fig. 24.8. Sistema de reparacin de emergencia en eucariotas.
La presencia de recA induce UmuD que es

cortado por recA para dar UmuD' (forma activa
de UmuD) al que se une UmdC. El complejo
UmuD'/UmuC permite que la ADN polimerasa
111 (que estaba bloqueada debido a los daos
en el ADN) pase a travs de la lesin. Esto se
produce debido a la prdida de su actividad
correctora de pruebas (exo 3' - 5'). De este
modo, la replicacin se reanuda, pero la prdida
de fidelidad del proceso en general, origina que
sea un mecanismo generador de nuevas
mutaciones.
1.7. REPARACIN INDUCIDA EN CLULAS

EUCARIOTAS
En las clulas eucariotas que han sufrido un

gran nmero de lesiones en su ADN, tambin
existe un mecanismo de emergencia: la activacin de la protena p53 (fig. 24.8). Cuando p53
se activa produce la parada del ciclo celular a
travs de la activacin de p2] que bloquear la

ciclina G,. La parada del ciclo permite la reparacin de las lesiones antes de que el ADN se
replique y se fijen mutaciones. Adems, la activacin de p53 tiene otras consecuencias, pues es
capaz de activar los mecanismos de reparacin
para corregir las lesiones, detiene la replicacin
pues p2] se une a PCNA, factor necesario para
la actuacin de la polimerasa durante la
replicacin y, en caso de que la clula no sea
reparada, induce la apoptosis (muerte celular
programada).
2.
Enfermedades humanas debidas

a fallos en los sistemas de reparacin
Como hemos visto, las clulas eucariotas

disponen de muchos sistemas de reparacin para
corregir diferentes tipos de daos que sufre el
ADN. Cuando los mecanismos de repara-
VARIACIN GENTICA
333
Tabla 24.2. Sndromes humanos por defectos en los sistemas de repareacin
cin no funcionan adecuadamente el resultado

es la produccin de un gran nmero de mutaciones. En humanos se conocen actualmente un
buen nmero de enfermedades, fundamentalmente debidas a fallos en estos sistemas (tabla 24.2); en muchos casos incluso se conoce el
gen alterado dentro del sistema por lo que comienza a ser posible un diagnstico precoz, un
mejor seguimiento de la enfermedad con terapias ms adecuadas y en un futuro no muy lejano es posible que se pueda realizar la curacin a
travs de terapia gnica.
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Captulo
25
Mutaciones cromosmicas
estructurales
Juan Jos Gonzlez Aguilera
1.
Origen de los Cambios Estructurales
2.
Deleciones
3.
Duplicaciones
4.
Inversiones
5.
Translocaciones
336
GENTICA
El nmero y morfologa de los cromosomas

en una especie, por lo general, permanece
constante. Cuanto ms alejadas estn dos especies ms difieren en sus cariotipos, mientras que
las especies muy prximas filogenticamente
muestran cariotipos ms similares. No obstante,
especies muy divergentes muestran similitudes
a lo largo de miles de pares de bases en sus
genomas, en los que se conservan genes con
funciones similares. Esto pone de manifiesto
que especies que provienen de un ancestro
comn han remodelado sus genomas a lo largo
del proceso evolutivo a travs de diversas
reordenaciones
cromosmicas,
que
han
contribuido a las diferencias entre especies. Las
reordenaciones cromosmicas (cambios en la
ordenacin lineal de los genes), as como los
cambios en el nmero de los mismos, al alterar
el nmero, la posicin o el orden de los genes
pueden afectar tanto a la expresin de los genes
como a su transmisin.
En el presente captulo examinaremos las
reordenaciones que afectan a la estructura de
los cromosomas ( mutaciones cromosmicas
estructurales). stas pueden clasificarse segn

afecten a uno o ms de un cromosoma en: deleciones, duplicaciones, inversiones y translocaciones (fig. 25.1).
1. Origen de los cambios estructurales
Existen varios mecanismos por los que

pueden producirse las reordenaciones cromosmicas.
1. Por rotura y reunin de las molculas de
ADN que constituyen los cromosomas, que
ocurren de forma espontnea o pueden ser o inducidas experimentalmente por agentes externos
(radiaciones ionizantes). El proceso de formacin de una reordenacin implica la existencia de dos roturas en un nico cromosoma que
afectan al fragmento implicado (duplicaciones,
deleciones e inversiones) (fig. 25.2a) o bien
roturas en dos cromosomas diferentes
(translocaciones) (fig. 25.2b).
Sea como fuere el proceso de rotura y reu-
Fig. 25.1. Clasificacin de las reordenaciones cromosmicas.
VARIACIN GENTICA
Fig. 25.2a. Origen de los cambios estructurales. A: dos roturas en el mismo cromosoma y reunin errnea.
Fig. 25.2b. Origen de los cambios estructurales. B: dos roturas en cromosomas homlogos.
337
338
GENTICA
Fig. 25.2c. Origen de los cambios estructurales. C: entrecruzamiento desigual entre cromosomas homlogos.
o transposones.
Puede ser mediado por segmentos de ADN repetido
nin, cada cromosoma originado por la reordenacin debe contener estructuras telomricas, y
al menos, un centrmero. Las reordenaciones
que produzcan la abolicin de las funciones de
estas estructuras sern letales para la clula en
que se produzcan; por ello, aquellas reordenaciones que en la observacin citolgica parecen
afectar el final del cromosoma (deleciones
terminales), deben realmente incluir dos roturas,
una de las cuales debe estar prxima al telmero
sin incluirlo.
2. Por entrecruzamiento desigual entre
regiones cromosmicas, bien porque contengan
ADN repetido o elementos transponibles (fig.
25.2c).
2. Deleciones
Las deleciones (o deficiencias) son cambios estructurales consistentes en la prdida de

un segmento cromosmico y, por consiguien-
te, de la informacin gentica contenida en l

(fig. 25.1).
Las deleciones pueden hacerse visibles a
nivel citolgico si tienen un tamao adecuado.
As, durante la metafase mittica puede observarse el acortamiento de uno de los cromosomas
de un par de homlogos; adems si se disponen
de cromosomas bandeados es posible reconocer
la ausencia de las bandas correspondientes al
segmento delecionado (fig. 25.3a). Durante el
apareamiento meitico de un heterocigoto para
una delecin, cuando un cromosoma normal se
aparea con uno delecionado, en el lugar de la
deficiencia se formara un bucle (bucle de
delecin) (fig. 25.3b).
Las deleciones con un tamao suficientemente grande como para poder ser observadas a
nivel citolgico son multignicas, es decir,
incluyen gran nmero de genes (incluso miles).
No obstante, pueden ser mucho ms sutiles y
pasar desapercibidas a la observacin microscpica, pudiendo incluso ser intragnicas,
Fig. 25.3. Reconocimiento de las deleciones a nivel citolgico. a) Mitosis: acortamiento de cromosomas
homlogos, desaparicin de bandas. b) Bucle en el apareamiento meitico en un heterocigoto.
VARIACIN GENTICA
es decir que slo afecten a parte de un gen. El

efecto de las deleciones va a depender de la
cantidad de genes afectados, pero sobre todo de
la importancia de la informacin que se pierda.
En general, las deleciones multignicas tienen
efectos deletreos sobre los individuos que las
portan, y si alcanzan la homocigosis suelen ser
letales (hemicigosis cuando ocurre en el
cromosoma X). Por ejemplo, en humanos la
heterocigosis para una delecin en el brazo
corto del cromosoma 5 produce el sndrome
conocido como Cri du Chat caracterizado por la
aparicin de malformaciones faciales y daos
cerebrales graves que reduce su coeficiente de
inteligencia (IQ) a un valor entre 20-40; los
individuos afectados emiten un sonido que recuerda al maullido de un gato. Cuanto mayor es
el tamao de la delecin, mayor es la afectacin
del paciente.
Las deleciones intragnicas conducen a la
inactivacin de genes y, segn sea la funcin
del gen que se pierde, as sern sus consecuencias. La prdida de un segmento cromosmico
que contenga genes claves en el control del ciclo celular (genes supresores de tumor) produce
la susceptibilidad a padecer ciertos tipos de
tumores y la prdida de funcin del alelo que
permaneca intacto (por una nueva delecin, una
mutacin puntual u otro mecanismo desactivante), irremediablemente desencadena la
aparicin de un tumor.
Las deleciones se han utilizado para localizar genes en cromosomas: mapas de delecin,
basados en el fenmeno de pseudodominancia
que es un efecto dominante especfico que producen ciertas deleciones. La pseudodominancia
consiste en que un alelo recesivo queda desenmascarado y se comporta como dominante
en cuanto a su expresin en un heterocigoto,
debido que el alelo dominante, situado en el
cromosoma homlogo, est delecionado y no
puede complementar la mutacin. Slizinska, en
1938, localiz y caracteriz una serie de deleciones por la prdida de bandas en el cromosoma X de Drosophila, situando en ellas una
serie conocida de mutantes (fig. 25.4). El mutante ojos blancos (w) se comporta como pseudodominante en las cepas 258-11, 258-14, N-8
Mohr y 264-3 1. Las bandas 3C1 y 3C2 son co-
339
munes a todas las deleciones, o sea el mutante w

(ojos blancos) deba estar localizado en ellas.
Igualmente las cepas 264-33, 264-37, 264-2 y
264-9 tenan en comn la prdida de la banda
3C7 expresando por pseudodomiancia el
mutante notch (alas dentadas), es decir este
mutante estaba en esta banda o muy prximo a
ella.
3. Duplicaciones
La duplicacin es un cambio estructural

consistente en la aparicin de una copia extra de
un segmento cromosmico (fig. 25.1). Durante
la mitosis puede observarse una duplicacin en
el patrn de bandas cromosmicas o un
alargamiento de uno de los cromosomas del par
de homlogos, en el caso de no disponer de
estas marcas longitudinales. Durante la meiosis
los heterocigotos para una duplicacin se
comportan de manera anloga a los heterocigotos de delecin formando un bucle en la zona
desapareada (bucle de duplicacin), por lo cual
esta observacin citolgica slo nos permite
constatar la existencia de una reordenacin
cromosmica pero no exactamente el tipo (fig.
25.5).
Los efectos de las duplicaciones son, en
principio, menos perjudiciales que las deleciones para el individuo portador, puesto que suponen una ganancia de material gentico; no
obstante esto no resulta totalmente cierto, pues
en los organismos existe un estricto control del
equilibrio de las dosis gnicas y sus productos.
El mutante dominante Bar de Drosophila es un
ejemplo muy ilustrativo de los efectos de las
duplicaciones (fig. 25.6).
El ojo salvaje de Drosophila es ovalado y
compuesto por un nmero medio de 779 facetas,
mientras el fenotipo Bar se caracteriza por una
reduccin del nmero de facetas que le da el
aspecto caracterstico de ojo en forma de barra.
En 1936, Bridges observ en los cromosomas
politnicos de las glndulas salivales que el
fenotipo Bar se asociaba a una duplicacin de
una regin (16A) del cromosoma X. Los
heterocigotos para la duplicacin presentan tres
dosis de la regin 16A, dos en un
Fig. 25.4. Localizacin de genes en Drosophila analizando la pseudodominancia en heterocigotos para deleciones. Regin
white-notch del cromosoma X
de Drosophila (Slizinska, 1938). El sombreado negro indica el tamao de la delecin.
VARIACIN GENTICA
341
Fig. 25.5. Recomocimiento de las duplicaciones a nivel citolgico. a) Mitosis: alargamiento de cromosomas
homlogos, aparicin de bandas repetidas. b) Bucle en el apareamiento meitico de un heterocigoto. e) Bucle
de apareamiento en los cromosomas politnicos de Drosophila.
cromosoma y una en su homlogo; en esta situacin el nmero de facetas del ojo se reduce a
358. La presencia de regiones repetidas en los
cromosomas homlogos conduce a la existencia
de entrecruzamientos asimtricos. Una hembra
de Drosophila homocigota Bar, tiene cuatro
dosis de la regin 16A (2 en cada uno de los
cromosomas homlogos) y muestra una
reduccin del nmero de facetas a 68. Una
hembra Ultrabar, tiene igualmente cuatro dosis
de dicha regin (tres en un cromosoma X y slo
una en el homlogo) y, sin embargo, el efecto
de las cuatro dosis no es el mismo pues en esta
situacin (3/1) la reduccin del nmero de
facetas es ms severa (45). El mutante Bar
pone de manifiesto que las dosis gnicas y, por
tanto, sus productos estn estrictamente
regulados y una disminucin o aumento de
las copias de un gen puede conducir a efectos
indeseables en el fenotipo al afectar las relaciones con otros genes. Por otra parte, el compor-
tamiento de Bar demuestra que la posicin de

los genes es importante en cuanto a su expresin, de manera que copias de genes situadas en
posiciones diferentes pueden tener efectos
fenotpicos diferentes.
A pesar de los posibles efectos indeseables
de las duplicaciones, stas han jugado un papel
fundamental en la evolucin como origen de
nuevos genes. Se conocen muchos genes estructurales que se encuentran en nmero de dos o
ms copias idnticas en el genoma. En otros
casos existen genes cuyas secuencias y funciones son muy parecidas constituyendo lo que se
denomina familias gnicas. Los genes que
constituyen estas familias pueden mantenerse
juntos, como ocurre con los de las histonas, o
bien haberse separado por reordenaciones cromosmicas (globinas). Estas familias de genes
se han originado por duplicacin de un gen ancestral que a lo largo del tiempo ha sufrido una
divergencia tanto en estructura como en fun-
342
GENTICA
Fig. 25.6. Duplicaciones y equilibrio gnico: el mutante Bar de Drosophila.
cin, lo que demuestra que las duplicaciones

han jugado un papel muy importante en el proceso evolutivo como origen de nuevos genes y
funciones. En los orgenes de la vida las formas
ancestrales contenan probablemente uno o muy
pocos genes. Los miles de genes que presentan
los organismos superiores actualmente provienen de esos genes ancestrales a travs de duplicaciones seguidas de una divergencia gradual
hacia funciones distintas a lo largo del proceso
evolutivo. En la figura 25.8 se esquematiza la
evolucin de los genes de las globinas, que resulta un ejemplo muy ilustrativo de la evolucin
de genes por duplicaciones.
La mioglobina (Mb) es una protena monomrica con un grupo hemo (anillo porfirnico
con un tomo de hierro central) situado en el
centro de su estructura tridimensional y un Pm
de 17.000 daltons aproximadamente. Esta molcula tiene una alta afinidad por el oxgeno y se
encarga de su intercambio en el msculo de
los vertebrados (las globinas de los insectos,

anlidos y moluscos tambin son monomricas).
Las hemoglobinas (Hb) desempean una
funcin similar en la sangre, pero en este caso
se trata de una protena tetramrica, constituida
por cuatro monmeros iguales dos a dos. El
peso molecular de las hemoglobinas es de
aproximadamente 67.000 daltons, es decir, casi
cuatro veces el de la mioglobina. Adems, la
secuencia polipeptdica de los monmeros que
constituye las Hbs recuerda a la de la mioglobina. Estas coincidencias tanto en secuencia
como en peso molecular y el hecho de desempear funciones parecidas, pusieron sobre la
pista de que podran ser molculas (genes)
emparentadas y probablemente a travs de duplicaciones gnicas.
A lo largo del desarrollo de un ser humano
se expresan distintas hemoglobinas (constituidas
por subunidades diferentes) que van siendo
sustituidas hasta llegar al adulto, como resulta-
VARIACIN GENTICA
343
Fig. 25.7. Hemoglobinas humanas.
do del silenciamiento y activacin de distintos

genes a lo largo del desarrollo. En el adulto hay
dos tipos de hemoglobinas, A1 y A2, siendo la
primera la ms abundante. En la figura 25.7 se
describen los genes, su situacin en los cromosomas, los polipptidos que se sintetizan a partir
de estos genes y las subunidades que constituyen cada una de las hemoglobinas desde el
embrin hasta el individuo adulto.
El gen ancestral de las globinas sufri una
duplicacin hace unos 650 millones de aos
(MA) en el origen de la lnea ancestral de los
vertebrados, separndose la mioglobina del gen
ancestral de los genes de las modernas hemoglobinas, parecido probablemente al de las
cadenas a actuales. Las globinas monomricas
muestran una fuerte afinidad por el oxgeno, por
lo que no realizan una oxigenacin muy
eficiente, aunque adecuada para el tamao de
los animales existentes en el precmbrico. Si no
hubieran aparecido durante la evolucin
molculas ms eficientes en la descarga de oxgeno, no podra haber aumentado el tamao
corporal de los animales por dificultades de
oxigenacin de todas sus clulas. Sin embargo,
hace unos 380 MA hubo una nueva duplicacin
en la lnea de separacin de telesteos y
artrpodos; uno de los genes divergi codificando una cadena ligeramente diferente a la
original. La existencia de este nuevo gen abri

la posibilidad de una estructura heterotetramrica (cuatro subunidades iguales dos a dos) y
con ello el comportamiento alostrico (cooperacin entre los grupos hemo), de manera que
cuando uno de los grupos hemo descarga el
oxgeno, produce un cambio conformacional en
los otros tres que facilita la descarga de oxgeno, aumentando por tanto la eficiencia de
oxigenacin.
Posteriormente, el gen ancestral de las cadenas sufrira nuevas duplicaciones originando los genes 1 2 y que an hoy da se
mantienen en el mismo cromosoma (cromosoma 16 humano). El gen ancestral de las cadenas
debi verse envuelto en una reordenacin del
genoma (probablemente una translocacin)
pasando al cromosoma 11 actual humano. En la
lnea evolutiva de los primates hace unos 150
MA se produjo una nueva duplicacin, y uno de
los genes sufri una divergencia hacia el gen
ancestral de las hemoglobinas embrionarias,
mientras que el otro continu sintetizando
cadenas . Este ltimo gen sufrira una
posterior duplicacin (35 MA) en la lnea ancestral de los primates superiores originndose
el gen 6, que hace aparecer la hemoglobina A2
de los adultos y que slo est presente en humanos y simios antropoides (fig. 25.8).
344
GENTICA
Fig. 25.8. Evolucin de los genes de las globinas.
4. Inversiones
Las inversiones son cambios estructurales

que consisten en el giro de 180 de un segmento
cromosmico (fig. 25.1). Como consecuencia de
este giro cambian las relaciones de ligamiento
entre genes. La inversin puede incluir el
centrmero en cuyo caso se denomina pericntrica (alrededor del centrmero), cuando no
lo incluye se denomina paracntrica. El hecho de
incluir o no el centrmero conlleva un
comportamiento diferente tanto en mitosis como
en meiosis, al realizar la observacin microscpica. Durante la mitosis las inversiones
pericntricas pueden conducir a un cambio en la
morfologa cromosmica, al cambiar la situacin del centrmero, adems de alterar el
patrn de bandas, mientras que las paracntricas
slo alteran el patrn de bandas (fig. 25.9).
Durante la meiosis de un heterocigoto para una
inversin se forma un bucle de apareamiento
para conseguir la sinapsis del segmento inver-
tido. Si ocurre un entrecruzamiento en este

segmento, las inversiones paracntricas se distinguen de las pericntricas por la aparicin durante la anafase I, en las primeras, de un puente
entre los polos y un segmento acntrico que no
se incluir en ninguno de los polos (fig. 25.9c).
A pesar del diferente comportamiento durante la anafase meitica de las inversiones para
y pericntricas, las consecuencias genticas de
ambos tipos resultan similares (figs. 25.10 y
25.11), pues en el caso de existir entrecruzamiento en el segmento invertido los gametos recombinantes resultantes portarn cromosomas con duplicaciones y/o deleciones que
resultan letales, de manera que los nicos
gametos viables son los no recombinantes. En
definitiva las inversiones impiden la recombinacin gentica en el segmento invertido y reducen la fertilidad en un 50 %. A pesar de estos
dos hechos, reduccin de la variabilidad y de la
fertilidad, aparentemente poco favorables desde
el punto de vista evolutivo, las inversiones
VARIACIN GENTICA
345
Fig. 25.9. Reconocimiento de las inversiones a nivel citolgico. a) Inversin pericntrica: cambio en la morfologa
cromosmica. en la ordenacin de bandas cromosmicas durante la mitosis. b) Inversin paracntrica: cambio en
la ordenacin de bandas cromosmicas durante la mitosis. c) Observacin durante la anafase I meitica de un puen
te y un fragmento acntrico resultado de un entrecruzamiento en el bucle de una inversin paracntrica.
han jugado un papel fundamental en la

ecolucin de numerosos grupos de organismos
(p.ej., Drosophila). La explicacin ms probable
a este hecho es que las inversiones, al impedir la
recombinacin, favorecen el que la combinacin
de alelos situados en el segmento invertido no
pueda ser barajada por ese proceso,
constituyendo lo que se conoce como un
supergn: un coadaptado de genes que favorece
la adaptacin de la poblacin al medio ambiente
en el que se desenvuelve asegurando su
supervivencia y, por consiguiente,

seleccionado favorablemente.
es
5. Translocaciones
La translocacin es un cambio estructural

consistente en que un segmento cromosmico
cambia de grupo de ligamiento (cromosoma) y,
en consecuencia, cambian las relaciones de
ligamiento. Las translocaciones ms frecuentes
346
GENTICA
Fig. 25.10. Comportamiento meitico de las inversiones pericntricas.
son las recprocas o intercambios, en las que dos

cromosomas intercambian segmentos Cromosmicos (fig. 25.1).
Durante la mitosis las translocaciones pueden detectarse porque pueden producir un
cambio en la morfologa cromosmica cambiando la posicin relativa del centrmero. Durante la meiosis en los heterocigotos para una
translocacin, el apareamiento de los cromosomas implicados en la misma, conduce a la formacin de un tetravalente caracterstico (cruz
paquitnica). La segregacin durante la anafase I
meitica de este tetravalente puede realizarse de
tres formas diferentes, dependiendo de la
distribucin de los centrmeros en los polos
(fig. 25.12):
- Segregacin alternada: se separan
correctamente los centrmeros homlogos
(1
1t y 2
2t) y, por azar, en uno de los
polos anafsicos se incluyen los dos cromosomas translocados y en el otro los cromosomas
normales; ello conduce a gametos viables, en
principio, pues contienen todas las dosis gnicas
(fig. 25.12a).
- Segregacin adyacente - I: se separan

correctamente los centrmeros homlogos
(1
1t y 2
2t) pero, por azar, en cada polo
anafsico se incluye un cromosoma normal y
otro translocado, lo que conduce a desequilibrios (duplicaciones y deleciones) que
harn inviables los gametos producidos tras la
anafase II (fig. 25.12b).
- Segregacin adyacente - II: debido a la
orientacin del tetravalente en la placa ecuatorial se separan los centrmeros no homlogos
(1t
2 y 1
2t) por lo que ambos polos
quedan desequilibrados al incluir cada uno
cromosomas homlogos que no han segregado
(aunque uno de ellos tenga un segmento
translocado); ello nuevamente conducir a
gametos inviables (fig. 25.12c). Este tipo de
segregacin se da con mucha menor frecuencia
que las anteriores, por lo que el resultado de la
meiosis de un heterocigoto de translocacin es
una reduccin de la fertilidad de, al menos, el
50 %.
Los polimorfismos para translocaciones son

relativamente frecuentes en plantas y ms raros
en animales. Las translocaciones probablemen-
VARIACIN GENTICA
Fig. 25.11. Comportamiento meitico de las inversiones paracntricas.
Fig. 25.12. Comportamiento meitico de las translocaciones.
347
348
GENTICA
Fig. 25.13. Translocacin t(9; 22) (q34; q11): Leucernia mieloide crnica. a) Cariotipo de un individuo afecto.
b) Origen de la protena de fusin como consecuencia de la translocacin.
te tienen el mismo significado evolutivo que las

inversiones, es decir, cambiar grupos de ligamiento y promover supergenes con un alto valor
adaptativo. Sin embargo, en ocasiones las translocaciones pueden tener efectos fatales para los
individuos portadores, porque el cambio de posicin de determinados genes puede conducir a
su desregulacin; se es el caso frecuente en las
leucemias en que, por ejemplo, la translocacin

t(9; 22) (q34; ql l), es responsable de la Leucemia Mieloide Crnica. Dicha translocacin lleva
el oncogn c-abl, situado en el cromosoma 9,
hasta el gen bcr situado en el cromosoma 14,
produciendo una protena de fusin (c-abl/bcr)
con una actividad anormal que desencadena la
neoplasia
(fig.
25.13).
VARIACIN GENTICA
349
Fig. 25.14. Translocaciones robertsonianas. a) Fusiones cntricas. b) Fisiones cntricas.
Un caso particular de translocaciones son

las fusiones y fisiones cntricas (Translocaciones robertsonianas) (fig. 25.14). Las primeras se producen cuando dos cromosomas
acrocntricos se fusionan para formar uno meta
o submetacntrico, reduciendo el nmero de
cromosomas (grupos de ligamiento). Las
fisiones o disociaciones se producen cuando un
cromosoma (meta o submetacntrico) divide su
centrmero por un fenmeno denominado
misdivision y origina dos cromosomas
acrocntricos/telocntricos, aumentando el
nmero de cromosomas. En ambos casos, a
pesar de cambiar el nmero de cromosomas, se
mantiene el nmero de brazos cromosmicos y,
por tanto, no hay prdidas ni ganancias de
material gentico. Las translocaciones robertsonianas han sido muy frecuentes en la
evolucin de algunos grupos animales (insectos,
roedores, etc.).
Lacadena, J. R. (1988): Gentica, A.G.E.S.A.,
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784-791.
Captulo
26
Mutaciones cromosmicas
numricas
1.
Euplida: Monoploida y Poliploida

1.1. Monoploida
1.2. Poliploida
2.
Aneuploida: Nulismicos, Monosmicos y Trismicos
3.
Ingeniera Cromosmica en Plantas
352
GENTICA
En el captulo anterior hemos analizado los

cambios estructurales que pueden sufrir los
cromosomas; en el presente analizaremos las
variaciones en el nmero de cromosomas. stas
pueden afectar a los juegos de cromosomas
completos (cambios euploides o euploida) (fig.
26.1), o a cromosomas individuales (cambios
aneuploides o aneuploida) (fig. 26.2). Como el
comportamiento y las consecuencias de ambos
tipos son diferentes los analizaremos por
separado.
1. Euploida: monoploida y polipioida
El nmero de cromosomas de una especie,

salvo excepciones, es constante. Los organismos con reproduccin sexual ms frecuentemente son diploides, es decir su dotacin cromosmica est constituida por dos juegos de n
cromosomas diferentes y por ello se simboli-
zan como 2n. El nmero de juegos cromosmicos puede variar de una forma espontnea en la
naturaleza y ello ha ocurrido repetidamente a lo
largo del proceso evolutivo, con incrementos en
el contenido de ADN de los genomas, aumento
en el nmero de genes y la posibilidad de
alcanzar una mayor complejidad estructural y
funcional.
1.1. MONOPLOIDIA
La haploida es una condicin normal de

muchas clulas y organismos, as por ejemplo
las bacterias, los hongos, etc., son organismos
haploides. En el desarrollo normal del ciclo vital
de los organismos diploides (2n) se forman
clulas sexuales haploides (n): los gametos. En
algunas especies diploides de insectos (abejas) y
otros organismos, se forman por partenognesis
individuos haploides (generalmente ma-
Fig. 26.1. Cambios euploides.
VARIACIN GENTICA
353
Fig. 26.2. Cambios aneuploides.
chos). Sin embargo, de manera anormal en algunas especies diploides se producen espordicamente individuos haploides, que se denominan monoploides por presentar un solo juego
cromosmico de la especie. Estos individuos, si
consiguen desarrollarse, son de pequeo tamao
y poco vigorosos. Adems, cuando sufren la
meiosis, durante la metafase los cromosomas
permanecen como univalentes al no existir
cromosomas homlogos que se apareen
(bivalentes). Esto conduce a una segregacin
anafsica anmala, con prdidas de cromosomas
que no se incluyen en los polos y grandes
desequilibrios numricos, de manera que los
gametos tienen un nmero inferior al complemento n de la especie, lo que provoca que estos
individuos sean estriles. En general, se ha observado que las especies vegetales capaces de
generar monoploides en la naturaleza de forma
espontnea, tienen un origen poliploide.
La monoploida tiene un gran inters para
la gentica aplicada, pues se puede inducir artificialmente la aparicin de individuos monoploides a partir de plantas diploides (fig. 26.3)
y, una vez obtenidos, puede duplicarse fcilmente su nmero cromosmico tratado con
colchicina. Los individuos as generados sern
homocigticos en todos sus loci, evitando un
largo programa de cruzamientos para obtener
una lnea pura. Adems, estos individuos estarn libres de genes letales pues si existieran se
expresaran y no conseguiramos que se desarrollaran y, partir de plantas libres de genes letales, es de gran importancia al abordar un programa de mejora.
1.2. POLIPLOIDIA
Los individuos poliploides presentan mltiples juegos completos de cromosomas (fig.

26.1). Los poliploides se originan con frecuen-
354
GENTICA
Fig. 26.3. Utilizacin de la monoploda en los programas de mejora gentica de plantas.
cia en la naturaleza de forma espontnea, estando ampliamente extendidos en el reino vegetal (ms del 50 % de las angiospermas tiene
un origen poliploide) aunque se da raramente en
animales, como lo demuestra el hecho de que en
la mayora de animales los nmeros gamticos
oscilan entre 6 y 20, mientras que en las plantas
este rango se ampla considerablemente (1-220).
Es decir, mientras que la poliploida se muestra
como uno de los mecanismos ms
trascendentales en la evolucin de las especies
vegetales, su papel ha sido escaso en animales.
La explicacin a este hecho puede atribuirse, en
primer lugar, a que en los animales para
producirse una raza poliploide se requiere que
ocurra un fenmeno de poliploidizacin en un
macho y en una hembra y que stos se apareen,
con lo que los dos sucesos mutacionales deben
coincidir espacial (en la misma poblacin) y
temporalmente (en la misma generacin). En
segundo lugar, en los animales la
poliploidizacin
produce
un
mayor
desequilibrio gnico que en las plantas, incluyendo el desequilibrio entre cromosomas sexuales y autosomas. De hecho, la existencia de
animales poliploides se reduce, casi exclusivamente, a animales hermafroditas o a formas con
hembras partenogenticas, con la excepcin de
algunos peces (salmnidos).
La poliploida produce sobre los individuos

efectos morfolgicos y fisiolgicos marcados,
siendo el ms inmediato el incremento del
tamao celular que conduce generalmente a un
incremento en el tamao de la planta, lo que se
denomina efecto gigas. Este efecto se suele
poner de manifiesto sobre todo en hojas, flores,
frutos y semillas, por lo que resulta de un
indudable inters comercial para los mejoradores de plantas.
Si el individuo poliploide se origina a partir
de un individuo de una especie entonces todos
los juegos cromosmicos sern iguales y en este
caso se denomina autopoliploide. Cuando el
poliploide se origina por la duplicacin del
nmero de cromosomas del hbrido formado
entre dos especies emparentadas, entonces se
denomina alopoliploide. En este ltimo caso los
cromosomas de las especies emparentadas no
son homlogos, sino homelogos (parcialmente
homlogos). Los poliploides se denominan tri-,
tetra-, penta-, hexa-, etc., segn el nmero de
juegos de cromosomas que lleven sus clulas
(fig. 26.1).
Los poliploides pueden originarse de una
forma espontnea en los organismos con reproduccin sexual por la fecundacin de un vulo
por ms de un espermatozoide, por fallos en la
mitosis que dupliquen el nmero de cromoso-
VARIACIN GENTICA
mas en las clulas somticas y que conduzcan a

gametos con el doble de cromosomas o por fallos en la meiosis que den lugar a gametos con
nmeros cromosmicos no reducidos. Pero
tambin puede ser inducida artificialmente mediante productos qumicos (colchicina), choques
trmicos,
cruzamientos
interespecficos,
cultivos celulares, etc.
El comportamiento citolgico de los poliploides en mitosis no muestra ninguna irregularidad, salvo que en el cariotipo los cromosomas en vez de aparecer por parejas existen n
elementos en cada par (figs. 26.1 y 26.5). Sin
embargo, durante la meiosis la presencia de
varios juegos cromosmicos introduce anomalas que van a ser diferentes segn sea el
origen del poliploide (autopoliploide vs. alopoliploide).
Para analizar la meiosis en los autopoliploides nos centraremos en el anlisis de los
triploides (3n) y tetraploides (4n), por ser lo ms
frecuente, pero los resultados son extrapolables
a poliploides de rango superior.
355
En los autotriploides el apareamiento meitico entre tres cromosomas homlogos podra

ser de diferentes maneras. Teniendo en cuenta
que los cromosomas en esta fase se aparean de
dos en dos, se podrn formar para cada cromosoma un bivalente y un univalente (1 11 + 1 I) o
un trivalente (1 111) (fig. 26.4a). La
segregacin de estos trivalentes, bivalentes y
univalentes
en
la
anafase,
conducir
inexorablemente a frecuentes anomalas
numricas en los gametos, al segregar los
trivalentes de una forma azarosa y quedar los
univalentes incluidos al azar en uno de los polos
o incluso perderse. Esto conduce a que los
autotriploides muestren una esterilidad muy
elevada, con las consiguientes ventajas comerciales en frutos de consumo habitual (sandas, pltanos, etc.) por el incremento de tamao
y la ausencia de semillas.
El comportamiento meitico de los autotetraploides es similar al de los autotriploides
salvo que en este caso son cuatro los cromosomas homlogos (fig. 26.4b). En este caso, durante el apareamiento meitico, se podrn for-
Fig. 26.4. Apareamiento meitico en: a) Autotriploides. b) Autotetraploides.
356
GENTICA
Fig. 26.5. Autopoliploides: cromosomas mitticos en dos variedades de Narcissus bulbocodium subsp.,
bulbocodium. a) Var. bulbocodium (2n = 14). b) Var graelsii (2n = 28). c y d) Configuraciones tetravalentes
en la meiosis del autotetraploide Reseda alba (n = 20).
mar 2 II, 1 111 + 1 I o 1 IV (cuadrivalente) (fig.

26.5). Las posibilidades de segregaciones
anafsicas regulares aumentan respecto a los
trivalentes, por ser un nmero par de juegos
cromosmicos con una mayor probabilidad de
dar lugar a polos anafsicos con nmeros de
cromosomas equilibrados y, por tanto, no se
producir una reduccin tan drstica de la fertilidad.
El comportamiento meitico de los alopoliploides muestra diferencias respecto al observa-
do en los autopoliploides debido al origen de los

primeros. Los alopoliploides se originan por la
duplicacin del nmero de juegos cromosmicos en hbridos formados entre especies prximas. Estos hbridos en su formacin pasan una
fuerte barrera de esterilidad debido a los desajustes existentes entre cromosomas homelo-
VARIACIN GENTICA
gos, que llevan a desapareamientos durante la

profase meitica, que originarn univalentes con
un destino incierto en la segregacin anafsica.
Cuanto ms alejadas sean las especies que
forman el hbrido, mayor sern las diferencias
entre sus cromosomas y mayor el nmero de
univalentes que se encontrarn en la meiosis.
Sin embargo, si en el hbrido se duplica el nmero de cromosomas se restablecer la estabilidad meitica alcanzando tasas de fertilidad
prcticamente normales (vase esquema). As,
una vez que ha tenido lugar la duplicacin cromosmica, cuanto ms alejadas sean las especies originales, ms estable meiticamente ser
el alopoliploide formado, pues al ser ms
diferentes sus cromosomas formarn menos
configuraciones multivalentes que segreguen
irregularmente.
Los alopoliploides han mostrado tambin
inters comercial, un ejemplo clsico de alopoliploide utilizado en alimentacin es el trigo
panadero (triticum aestivum) que es un alohexaploide.
A pesar de que, en general, la poliploida
produce inicialmente una reduccin en la fertilidad, lo que supone en trminos evolutivos una
inferioridad adaptativa, tal como veamos antes,
ha sido uno de los principales mecanismos
evolutivos en las especies vegetales. La
explicacin de esta aparente contradiccin
puede encontrarse en las ventajas de la herencia
polismica, al aumentar considerablemente el
nmero de heterocigotos en la poblacin
(respecto a la herencia dismica) y, con ello, las
posibilidades de explotacin del medio ambiente (al tamponarlo) al que est sometida la
poblacin. En la figura 26.6 se analiza comparativamente la herencia dismica y la herencia
tetrasmica en un cruce entre dos parentales
357
AAA 'A' (totalmente frtil)

que difieren en todos sus alelos. Por otra parte,
esta circunstancia permite a la poblacin la colonizacin de nuevos medios al presentar multitud de combinaciones genotpicas que pueden
adecuarse a ellos. Adems, la poliploida reduce
fuertemente el establecimiento de mutaciones
recesivas, en cambio las mutaciones dominantes
pueden ser extendidas rpidamente.
2. Aneuploida: nulismicos,
monosmicos y trismicos
La aneuploida es un cambio numrico que

afecta a un nmero discreto de cromosomas del
complemento de un individuo, un rgano, un
tejido o una clula, de manera que su nmero
cromosmico difiere por exceso o defecto del
que presenta la especie. Cuando la aneuploida
no afecta a todas las clulas de un individuo,
ste queda constituido por clulas con diferentes
constituciones cromosmicas, denominndose
individuo mosaico si la aneuploida afecta a los
autosomas y giuandromorfo cuando afecta a los
cromosomas sexuales.
Los aneuploides se clasifican de acuerdo
con el nmero de cromosomas que presenten en
exceso o en defecto (fig. 26.2). En general la
aneuploida es mejor soportada por las especies
vegetales que por las animales; las razones para
ello pueden ser variadas, pero el equilibrio
cromosmico y gnico, al que aludimos anteriormente, parece ser ms estricto en animales
que en vegetales. Adems, la aneuploida es
mejor tolerada por las especies poliploides (por
tener una redundancia de material) que por las
especies diploides, y las primeras son mucho
ms
frecuente
en
los
vegetales.
358
GENTICA
Fig. 26.6. Comparacin entre la herencia dismica y la herencia tetrasmica.
La aneuploida se origina por la unin de

gametos desequilibrados numricamente. Estos
gametos pueden formarse por no disyuncin en
la meiosis de individuos normales o por segregacin cromosmica de individuos aneuploides
(fig. 26.7).
La deteccin de los aneuploides se puede
realizar por recuentos cromosmicos durante la
metafase mittica. El comportamiento mei-
tico es muy diferente segn el tipo de aneuploide as como sus consecuencias.

Los nulismicos (2n-2) formarn durante la
meiosis n-1 bivalentes. Son muy poco frecuentes, pues la prdida de toda la informacin correspondiente a una de las parejas
cromosmicas los hace inviables en la mayora
de los casos. Mucho ms frecuentes son los
monosmicos (2n - 1), pues presentan una
mayor viabilidad.
VARIACIN GENTICA
359
Fig. 26.7. Origen de los aneuploides. Formacin de gametos desequilibrados numricamente.
Los monosmicos (2n - 1) forman durante la

meiosis n - 1 bivalentes y 1 univalente. Este
univalente tendr un destino incierto durante la
meiosis, perdindose o incluyndose al azar en
uno de los polos anafsicos por lo que se producirn gametos desequilibrados.
En humanos se conocen monosomas que
producen sndromes ms o menos severos, siendo el ms conocido el Sndrome de Turner (X0).
Los individuos que presentan este sndrome se
desarrollan como mujeres pero, al carecer de
uno de los cromosomas X, desarrollan una serie
de caractersticas peculiares: corta estatura, baja
insercin de la lnea del pelo, manchas en la
piel, escaso desarrollo de las mamas, ovarios rudimentarios y ausencia de menstruacin.
Los trismicos (2n + 1) forman durante la
meiosis n-1 bivalentes y un trivalente lo que
origina desequilibrios durante la segregacin

anafsica. Son los ms frecuentes, pues no implican prdida de material; no obstante, la ganancia de un cromosoma en ocasiones conduce
a fuertes anomalas e incluso la muerte del individuo. Los efectos de las trisomas los descubri Blakeslee en 1913 trabajando con Datura
stramonium, por sus propiedades narcticas y su
posible inters farmacolgico, al encontrar un
grupo de 12 mutantes con caractersticas especiales de transmisin. Posteriormente, en
1920, Belling descubri que cada tipo de mutante corresponda a un trismico para cada uno
de los cromosomas de la planta (fig. 26.8). En
humanos se conocen diferentes trisomas
afectando a los autosomas y que producen sndromes de mayor o menor gravedad en los portadores; los ms frecuentes son:
360
GENTICA
Fig. 26.8. Efectos morfolgicos de los aneuploides. Trismicos en Datura stramonium (Blakeslee, 1913).
- Sndrome de Down: trisoma del cromosoma 21, por lo que los individuos portadores muestran 2n = 47 cromosomas (fig. 26.9).
En ocasiones este sndrome se produce por la
presencia de tres dosis del cromosoma 21, pero
una de ellas es el brazo largo del cromosoma
unido a otro cromosoma del complemento, debido a la existencia de una translocacin. En
estos casos los individuos muestran 2n = 46
cromosomas. Este sndrome presenta una incidencia de 1 caso de cada 700 nacidos vivos
(1/700), aumentando con la edad materna (fig.
26.9) y los efectos deletreos que produce en
sus portadores son bien conocidos.
- Sndrome de Patau: trisoma del cromosoma 13, con una incidencia de 1/5.000-6.000
individuos nacidos vivos, y que produce ano-
malas fsicas y mentales, con cabeza malformada y la muerte en los primeros das de vida.
- Sndrome de Edward: trisoma del cromosoma 18 con una incidencia de 1/10.000 y
que produce un gran nmero de anomalas fsicas que conducen a la muerte a su portador en
las primeras semanas de vida.
El Sndrome de Klinefelter (XXY) es una
aneuploidea de los cromosomas sexuales, compatible con la vida, pero que da lugar a varones
con retraso mental y estriles.
Actualmente estas anomalas pueden ser
diagnosticadas prenatalmente en cultivos de clulas amniticas, vellosidades coriales o en sangre de cordn umbilical mediante tcnicas convencionales de citogentica (bandas G), para lo
VARIACIN GENTICA
361
Fig. 26.9. Sndrome de Down: a) Origen de una trisoma del cromosoma 21. b) Aumento de la incidencia
del sndrome de Down con la edad materna.
que se requieren preparaciones con una buena

morfologa cromosmica o mediante citogentica molecular de clulas en interfase de lquido
amnitico (tcnica mucho ms rpida al no requerir cultivo) (fig. 26.10) y que permite la deteccin simultnea de las anomalas ms frecuentes.
aneuploides tienen utilidades tericas y prcticas. Entre las primeras est la localizacin de
genes en cromosomas particulares. Desde el
punto de vista prctico se han utilizado en los
programas de mejoras de plantas, pues permiten
sustituir cromosomas entre variedades de una
especie e incluso entre especies mediante cruzamientos dirigidos (ingeniera cromosmica).
3. Ingeniera cromosmica en plantas
La aneuploida se puede inducir artificialmente en plantas, mediante distintos procedimientos de formacin de gametos desequilibrados (radiacin, agentes qumicos, ultrasonidos, etc.). Los nulismicos obtenidos suelen ser
individuos poco vigorosos, mientras que los
monosmicos y trismicos presenta un mayor
vigor y cierta fertilidad. En cualquier caso, estos
Lacadena, J. R. (1988): Gentica, A.G.E.S.A.,

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Gentica,
Stebbins, G. L. (1971): Chromosomal
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362
GENTICA
Fig. 26.10. Deteccin de las anomalas numricas ms frecuentes en humanos mediante citogentica molecular
de interfase.
Cytogenetics: The chromosome in division, inheritance and evolution, Prentice-Hall, Nueva

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Captulo
27
Mecanismos de recombinacin
1.
Los Mecanismos de Recombinacin y la conversin gnica
2.
Rotura y Reunin de las Molculas de ADN
3.
Mecanismos Moleculares de la Recombinacin General

Homloga
3.1. El Modelo de Holliday
3.2. El Modleo de Meselson-Radding
4.
Recombinacin Especifica de Sitio
364
GENTICA
La fuente primaria de variabilidad es la

mutacin, tal como hemos analizado en los
captulos precedentes, sin embargo en los organismos con reproduccin sexual la produccin de individuos con nuevas combinaciones
de alelos, a partir de los ya existentes en la poblacin, es el mecanismo ms importante de
produccin de variabilidad gentica, pudiendo
llegar a darse incluso intercambios genticos
entre distintos organismos. Existen diferentes
tipos de recombinacin: recombinacin
homloga general, recombinacin especfica de
sitio y transposicin. En el presente captulo
centraremos la atencin en los dos primeros
tipos y en el siguiente analizaremos la
transposicin.
1. Los mecanismos de recombinacin y la

conversin gnica
En el captulo 8 veamos que en eucariotas

la recombinacin gentica se produca por la
distribucin independiente de los cromosomas
durante la meiosis y por la existencia de un intercambio fsico de segmentos cromosmicos
entre cromosomas homlogos, a travs del entrecruzamiento que tena lugar durante la profase meitica. En procariotas la recombinacin
gentica se lleva a cabo mediante fenmenos
parasexuales (conjugacin, transformacin,
transduccin y sexduccin).
Las teoras iniciales sobre el origen mecnico del entrecruzamiento propuestas por
Darlington en 1937 (Teora electrosttica) y
White en 1954 (Teora de las fronteras) estn
en la actualidad totalmente descartadas y han
sido sustituidas por el concepto de que el entrecruzamiento debe tener una gran precisin a
nivel molecular, pues si fuera un proceso puramente mecnico de rotura y fusin no tendra
por qu producirse en lugares idnticos y sera
una fuente continua de mutaciones. Ya en 1933,
Belling relacion (aunque equivocadamente) el
fenmeno del entrecruzamiento en eucariotas
con un mecanismo molecular como es la
replicacin de la cromatina. Posteriormente,
Lederberg en 1955, recogiendo estas ideas,
sugiri tambin que la recombinacin gentica

en bacterias podra estar relacionada con la
replicacin, postulando la Teora de la eleccin
de copia: durante la replicacin la copia que se
sintetizaba tomaba alternativamente como
molde una u otra cadena del ADN parental, por
lo que simultneamente se recombinaban los
genes. Nuevamente la hiptesis no era correcta.
El descubrimiento del fenmeno de la conversin gnica realizado por Lindegren en 1953
en Sacharomyces supuso un punto de partida
para esclarecer el mecanismo, puesto que las
teoras sobre el entrecruzamiento tendran que
dar una explicacin satisfactoria a este
fenmeno.
Tal como veamos en el captulo 9, en
Saccharomyces cerevisiae los cuatro productos
de cada meiosis permanecen juntos, agrupados
en ttradas, aunque en este caso los productos
de la meiosis sufren una divisin mittica con
posterioridad generando un octete. Cuando se
realizaba un cruce entre dos parentales con
diferencias fenotpicas atribuibles a dos alelos
(A y a) del mismo gen, se podan obtener
ordenaciones de ascosporas producidas por la
segregacin durante la primera divisin
meitica (4A:4a) o durante la segunda
(2A:2a:2A:2a
o
2A:2a:2a:2A),
como
consecuencia de un fenmeno de entrecruzamiento entre el locus y el centrmero. Sin
embargo, con cierta frecuencia aparecan otras
ordenaciones (5A:3a / 2A:6a / 2A: la: IA: 1
a:1A:2a y otras) que no podan explicarse por
fenmenos de entrecruzamientos. Lo que
ocurra era un cambio de un estatus allico por
otro (a ! A o A ! a), que se denomin
conversin gnica. El intento de explicar este
fenmeno que apareca en el contexto de la
recombinacin llev a Whitehouse, en 1963, a
proponer la Teora del ADN hbrido, que
posteriormente fue sustituida por el modelo de
Holliday (1964) con las modificaciones
introducidas por M. Meselson y C. M. Radding.
Estos modelos son los ms aceptados hoy da,
entre otras causas, porque no requieren una
cantidad tan elevada de sntesis de ADN durante
la recombinacin, como propona el modelo de
Whitehouse, y que no ha podido ser
demostrada.
VARIACIN GENTICA
2. Rotura y reunin de las molculas

de ADN
Cuando se observan los quiasmas y el entrecruzamiento a nivel citolgico los cromosomas homlogos realizan un intercambio fsico
de segmentos (vase experimentos de Creighton-McClintock en el cap. 8), lo que supone la
existencia de procesos de rotura y reunin de las
molculas de ADN. M. Meselson y J. Weigle,
en 1961, demostraron la existencia de este
proceso de rotura y reunin durante la recombinacin en el fago lambda (A), en un experimento similar al realizado para esclarecer el
modo de replicacin del ADN (vase cap. 11).
Estos autores marcaron dos cepas del fago )L
hacindolas crecer en medios con istopos ligeros y pesados de carbono y nitrgeno (fig.
27.1). Con ellas infectaron E. coli, bajo condiciones que no permitan la replicacin del fago
(para evitar interferencias de la replicacin en el
experimento). Al realizar esta coinfeccin se
podr dar recombinacin entre los dos fagos
(ligero y pesado). Pasado el tiempo necesario
para que las partculas virales se empaqueten,
aislaron los fagos, los lisaron y analizaron sus
ADNs en un gradiente de densidad. Los fagos
que no haban recombinado se situaban en las
bandas correspondientes a los istopos con los
que iban marcados, sin embargo los fagos recombinantes se situaban en bandas intermedias
situadas entre las dos anteriores, segn el tamao del segmento intercambiado, lo que demostraba que la recombinacin a nivel molecular
implicaba la rotura y reunin de las molculas
de ADN.
3.
Mecanismos moleculares
de la recombinacin general homloga
3.1. EL MODELO DE HOLLIDAY
En la figura 27.2 se esquematizan los pasos

bsicos del proceso de recombinacin en el que
dos cromosomas homlogos sufren la rotura y
posterior reunin de las molculas de ADN. El
modelo que explica la recombinacin a nivel
molecular es bsicamente el propuesto por
365
R. Holliday (1964) para procariotas (fig. 27.3);

aunque en eucariotas se conoce mucho menos,
se supone que debe ser muy similar.
- El proceso comienza con el apareamiento
de los cromosomas homlogos mediado por el
complejo sinaptonmico. Las dobles hlices
implicadas en el entrecruzamiento rotan de
manera que queden enfrentadas con la misma
polaridad (5' ! 3' en el esquema) (fig. 27.3[1]).
Por claridad en la esquematizacin a partir de
ahora nos referiremos exclusivamente a estas
dos dobles hlices implicadas en el entrecruzamiento.
- Iniciacin. El punto inicial de la recombinacin es la produccin de cortes en las
dos cadenas de la misma polaridad y el desenrollamiento de la doble hlice. Este paso lo lleva a cabo un complejo de protenas constituido
por: RecB, RecC y RecD (complejo RecBCD)
con actividad nucleasa y helicasa, que genera
cadenas sencillas (fig. 27.3[2] y [3j). La actividad nucleasa reconoce el sitio chi, una secuencia constituida por 8 bp (5'-GCTGGTGG-3') y
que se encuentra en multitud de sitios del genoma. La cadena sencilla originada, una vez estabilizada por la protena Ssb (que acta de la
misma forma que en la replicacin), parece desencadenar el proceso.
- Intermediario de Holliday. Los extremos
rotos invaden a la doble hlice contraria: una
hlice sencilla (roja) desplaza a la cadena de su
misma polaridad (azul) y recprocamente (fig.
27.3[31). Las cadenas desplazadas se unen a
RecA (enzima tambin implicada en reparacin); esta enzima reconoce el ADN de cadena
sencilla y promueve la invasin de esta cadena
de ADN, hacia una doble hlice que est en su
proximidad. Si encuentra homologa desplaza a
la cadena de igual polaridad a la que gua (fig.
27.3[4]). El que se mueve es siempre el extremo
3'OH. La cadena desplazada formara lo que se
denomina un bucle-D. Las cadenas invasoras
buscan la posibilidad de apareamiento y cuando
encuentran la zona con bases complementarias
se fijan mediante el establecimiento de puentes
de hidrgeno entre las mismas. Finalmente los
huecos que se han originado son sellados por
una
ligasa.
Este
es el intermedia-
Fig. 27.1. Experimentos de Messelson v Weir le demostralir'os de la existencia de rotura y reunin

de nrolcirlas durante la recombinacin.
VARIACIN GENTICA
367
rio de Holliday: dos dobles hlices entrecruzadas por una de sus cadenas (fig. 27.3[4]).
- Migracin: El intermediario de Holliday
crea un cruce entre las cadena que puede
moverse a lo largo del heterodplex (doble hlice hbrida). Este movimiento se origina desde
el punto en que se produjo la invasin y, en su
movimiento, incrementa la regin de ADN heterodplex (fig. 27.3[5]). Las protenas RuvA y
RuvB son responsables de la migracin. Se denominan protenas Ruv, porque los mutantes
Ruv son ms sensibles a la luz ultravioleta debido a que no reparan por recombinacin los
daos causados por dicha radiacin. RuvA es un
tetrmero que reconoce especficamente el
punto de entrecruzamiento y, entonces, dos
molculas de RuvB la flanquean, constituyendo
un complejo hexamrico. El complejo se
desplaza por la doble hlice, abriendo la hlice
Fig. 27.2. Pasos bsicos en la recombinacin

general homloga a nivel molecular.
Fig. 27.3a-b. Modelo de Hollidav de recombinacin

general homloga.
368
GENTICA
Fig. 27.3b.
hacia delante (direccin 5') y cerrndola por

detrs (fig. 27.3[5]).
- Resolucin del intermediario de Holliday.
Las figuras 27.3[6] y [7], representan el
despliegue y rotacin de 180 que deben sufrir
las cadenas en el intermediario de Holliday para
su resolucin. sta tiene lugar por un corte y

posterior unin entre las dos cadenas originales,
lo que podemos denominar corte Este-Oeste
(fig. 27.3[8]), o bien de las cadenas intercambiadas, corte Norte-Sur (fig. 27.3[9]). El corte EO no da lugar a cromtidas recombinantes en-
VARIACIN GENTICA
tre los marcadores flanqueantes A y B, es decir,

se mantienen las relaciones de ligamiento idnticas a las parentales (AB/ab). Sin embargo, el
corte N-S origina recombinacin, cambiando las
relaciones de ligamiento de los marcadores
flanqueantes (aB/Ab). Los cortes necesarios
para la resolucin del intermediario de Holliday,
son realizado por RuvC, una endonucleasa que
realiza dos cortes simtricos en cadenas que no
se crucen. Existen adems otras dos protenas:
RecG y Rus que parece que pueden intervenir
tambin en el proceso de corte.
369
El modelo de Holliday cumple el requisito

de explicar el fenmeno de conversin gnica.
Al principio del captulo veamos cmo en
Saccharomyces cerevisiae podan aparecer segregaciones anmalas (5A:3a / 2A:6a / 2A: la:
1A:1a:1A:2a y otras) que no podan ser explicadas mediante los entrecruzamientos y las segregaciones meiticas. Pareca como si ciertos
alelos se hubieran convertido en otros (conversin gnica). La conversin puede afectar a una
cromtida completa o tan slo a media cromtida (fig. 27.4). Estas conversiones se pue-
Fig. 27.4. Conversin gnica.
370
GENTICA
Fig. 27.5. Reparacin del heterodplex que desemboca en conversin gnica.
den explicar en base a la reparacin de los

apareamientos errneos que ocurren en el ADN
heterodplex que se origina en el intermediario
de Holliday tal como se esquematiza en la
figura 27.5.
3.2. EL MODELO DE MESELSON-RADDING-
M. Meselson y C. M. Radding propusieron un

modelo de recombinacin general homloga
modificando el de R. Holliday pues, aunque
VARIACIN GENTICA
muy plausible, es incapaz de explicar todos los

resultados experimentales obtenidos del anlisis
de ttradas, que apuntan a que la conversin gnica y la formacin de ADN heterodplex se
dan fundamentalmente en una sola cadena. En
371
cambio, la invasin de las dos cadenas sencillas

(fig. 27.3[4]) propuesta en el modelo de Holliday, hara que estos fenmenos se dieran con
igual probabilidad en ambas cadenas.
En la figura 27.6 se resumen esquemtica
Fig. 27.6. Modelo de Meselson-Radding de recombinacin general homloga.
372
GENTICA
Fig. 27.7. Recombinacin sitio-especfica.
VARIACIN GENTICA
mente los puntos principales del modelo. La

diferencia fundamental, respecto al modelo anterior, estriba en que el intermediario de Holliday se genera con un corte slo en una de las
cadenas que sera el acontecimiento iniciador
del proceso (fig. 27.4[2]). Inmediatamente se
inicia un pulso de sntesis de ADN en la cadena
en que se ha producido el corte a partir del extremo 3' OH libre. Este proceso de sntesis provoca el desplazamiento de la cadena hacia el
extremo 3' (fig. 27.4[3]). Detrs del corte, la
cadena desplazada invade a la doble hlice homloga, que genera un bucle D (fig. 27.4[4]).
La porcin de cadena incluida en el bucle ser
posteriormente degradada enzimticamente (fig.
27.4[5]). Una ligasa sellar los huecos y se
formar un intermediario de Holliday. La resolucin de este intermediario se podr dar por
cortes anlogos a los propuestos en el modelo
de Holliday, es decir E - O o N - S, lo que generar la aparicin de ADN heterodplex en una
de las cadenas (fig. 27.6[6a]). No obstante, la
migracin de las cadenas y posterior resolucin
del intermediario podra explicar la aparicin de
ADN heterodplex en las dos cadenas (fig.
27.6[6b]).
4. Recombinacin especfica de sitio
La recombinacin general homloga se basa

en la existencia de grandes regiones con
homologa de secuencias en las cuales, tras el
apareamiento meitico, puede realizarse el intercambio de segmentos en diferentes sitios con
una precisin a nivel molecular. No obstante,
existe otro mecanismo de recombinacin en el
que no se requiere esta gran extensin de
regiones homlogas, sino que basta que exista
homologa de secuencia en una regin muy pequea para que sta pueda llevarse a cabo, es la
recombinacin especfica de sitio.
Este tipo de recombinacin es muy

diferente, desde el punto de vista
mecnico y enzimtico, a la recombinacin
general homloga. El ejemplo mejor
conocido es la integracin/escisin del forgo
lambda en la bacteria E. coli. Este fago utiliza
mecanismos
enzimticos
capaces
de
reconocer lugares especficos (att) presen-
373
tes en su ADN y en el de su husped (fig. 27.7).

El sitio att tiene regiones cortas de homologa
que permiten la recombinacin entre los dos
ADNs, produciendo al final una nica molcula
de ADN que contiene ambos genomas. El sitio
especfico del fago (attP) interacciona con el de
la bacteria (attB). Las regiones diferentes que
flanquean a att se denominan P y P' en el caso
del fago, y B y B' en el de la bacteria. La
reaccin de integracin est mediada por la
protena Int, codificada por el fago, en cooperacin con una protena del husped (IHF) que
juega un papel estructural produciendo el plegamiento del ADN para que la reaccin se lleve a
cabo. La escisin requiere la participacin
adicional de la protena Xist codificada por el fago.
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Captulo
28
Elementos genticos transponibles

1.
Transposones procariticos
1.1. Transposones Simples: Secuencias de Insercin en Bacterias
1.2. Transposones Compuestos
2.
Mecanismos de Trasposicin en procariotas

2.1. Transposicin Conservativa
2.2. Transposicin Replicativa
3.
Transposones Eucariotas
3.1. Elementos Controladores en el Maz
3.2. Elementos P de Drosophila
4.
Retrovirus y Retrotransposones
5.
Efectos de los Elementos genticos Transponibles
376
GENTICA
La transposicin es una fuente de variacin

en los organismos adicional a las vistas hasta
ahora
(mutaciones
gnicas,
mutaciones
cromosmicas y recombinacin), siendo un
mecanismo de recombinacin diferente al estudiado en el captulo anterior, permitiendo que
segmentos de ADN puedan moverse de una
zona a otra del genoma, e incluso entre genomas. Este mecanismo de variacin es el ms
recientemente descubierto, aunque como
veremos ms adelante, su existencia fue ya
constatada en 1940 con el descubrimiento de
unos genes que no ocupan posiciones fijas en
los cromosomas del maz, sino que se movan
por el genoma, por lo que algunos les llamaban
genes saltadores. Tal descubrimiento fue
recibido con gran escepticismo por la comunidad cientfica, hasta que no hace mucho tiempo
se constat la existencia de estos elementos
movibles en una amplia variedad de organismos, desde bacterias hasta mamferos. Una
vez aislados se han podido caracterizar y, aunque son variables en estructura, todos presentan
las caractersticas comunes de poder moverse en
los genomas en que se encuentran o a otros
genomas, por lo que se denominan
transposones, elementos genticos transponibles, elementos genticos mviles (incluso genes
saltadores), y de encontrarse siempre integrados
en los genomas de manera que no existen
formas libres.
Los elementos genticos mviles incluyen
cualquier entidad gentica capaz de moverse por
el genoma y, por tanto, producir una serie de
efectos (mutaciones) debido a esa movilidad.
Aunque inicialmente fueron descritos en
eucariotas su estructura y naturaleza molecular
se ha desentraado en procariotas.
1. Transposones procariticos
1.1.
TRANSPOSONES SIMPLES: SECUENCIAS

DE INSERCIN EN BACTERIAS
Los transposones fueron descubiertos en

bacterias por Shapiro en la dcada de los sesenta, como secuencias que se insertaban espontneamente en los operones bacterianos, aunque
este fenmeno ocurra con una frecuencia muy
baja (10-s-10-4). Las mutaciones que originaban
estas secuencias se caracterizaban por una alta
tasa de reversin y porque se mapeaban en
localizaciones diferentes del cromosoma bacteriano, por lo que se denominaron mutantes
polares. Cuando se consigui aislar las secuencias responsables de las mutaciones sorprendi
su tamao (~800 nucletidos) y, como aparecan insertadas en el interior de los genes, se les
denomin secuencias de insercin (IS). Se aislaron diferentes juegos de secuencias y a cada
una se le denomin con el prefijo IS, seguido de
un nmero (ISI, IS2). Actualmente se sabe que
el genoma bacteriano y los plsmidos bacterianos estn plagados de secuencias de insercin (tabla 28.1).
Las secuencias de insercin son los transposones ms simples, pues contienen solamente
los elementos necesarios para la transposicin,
de manera que son entidades autnomas que codifican slo para una protena, la transposasa,
responsable de su propia transposicin. Su estructura es muy simple: la secuencia del gen de
la transposasa flanqueada por unas secuencias
de entre 15 y 25 bases repetidas en forma inversa (IR) (fig. 28.1). Cada IS tiene su propia transposasa que reconoce sus propias dianas que son
ms o menos especficas. Despus de la insercin, la diana husped queda flanqueando al
Tabla 28.1. Secuencias de insercin en E. coli y el pldsmido F
VARIACIN GENTICA
377
FIG. 28.1. Estructura e insercin de los IS.
transposn en forma de una secuencia repetida

directa (DR). Las DR se originan como consecuencia del mecanismo de transposicin, que
implica la rotura del ADN husped a nivel de la
diana; esta rotura se hace por cortes escalonados
(no enfrentados) que generan extremos cohesivos. Tras la insercin del transposn quedan
unos huecos que repara la ADN polimerasa, lo
que da lugar a la repeticin directa (DR) que
flanquea el transposn. El tamao de las DR
(bp) de un determinado transposn es siempre el
mismo, ya que esto es consecuencia del mecanismo de corte de la transposasa. Cuando el
transposn se mueve a otro sitio deja como huella una DR. En el caso del IS 1 con 768 pb, las
IR tienen 23 bp, y la DR 9 bp.
1.2. TRANSPOSONES COMPUESTOS
No todos los transposones son tan simples,

algunos llevan genes de resistencia a drogas y
otros marcadores, adems de las funciones para
transponerse. Estos transposones complejos se
denominan Tn.
El descubrimiento de los Tn se produjo en la

dcada de los cincuenta a raz de una epidemia
de disentera bacteriana en los hospitales
japoneses. Este tipo de disentera puede combatirse con un amplio espectro de antibiticos;
sin embargo, en estos hospitales la estirpe bacteriana aislada de los pacientes era resistente a
gran cantidad de ellos (penicilina, tetraciclina,
estreptomicina, cloranfenicol, e incluso a las
sulfamidas). La resistencia mltiple se transmita en bloque y de modo infeccioso, lo que
favoreca la supervivencia de las bacterias y dificultaba el tratamiento de los pacientes. El
vector que transmita la resistencia entre bacterias era un plsmido similar al F, el plsmido R
(de resistencia), que se transfiere por conjugacin tal como hacen los factores F. Posteriormente, se descubrieron un buen nmero de
plsmidos R portadores de diferentes genes de
resistencia.
Cuando se sometan a desnaturalizacin los
plsmidos R y se renaturalizaban lentamente
(con lo que las cadenas sencillas generadas podan autoaparearse), se observaba la formacin
de un bucle de desapareamiento en el extremo
378
GENTICA
Fig. 28.2 . a) Descubrimientos de los transposones compuestos. Experimentos de desnaturalizacin

de plsmidos R. b) Estructura de un transposn compuesto (Tn3).
de una zona apareada (como una seal de trfico) (fig. 28.2). Las regiones que renaturalizaban
rpidamente eran repeticiones inversas IRs, luego en la secuencia interna del plsmido existan
repeticiones inversas que realmente eran secuencias flanqueantes de un elemento de insercin (ISs), que quedaba formando el bucle. Posteriores investigaciones pusieron de manifiesto
que los factores R eran complejos, conteniendo
una regin en la que se codifican las funciones
de transferencia de la resistencia (RTF) y una
regin que corresponde a un transposn (Tn).
Se han aislado numerosos transposones
compuestos que se denominan con el prefijo Tn,
seguido de un nmero (Tn1, Tn2 ). Los Tn se
caracterizan por sus marcadores internos (genes
de resistencia) y sus elementos flanqueantes que
pueden ser IS en orientaciones similares, opuestas e incluso distintos IS en cada lado (por ejemplo: Tn9 tiene IS 1 a ambos lados en repeticin
directa; Tri 903 tiene IS903 a ambos lados

invertidas; TnlO tiene IS IOR a la derecha).
Dado que uno o, incluso, los dos IS son
funcionales para la transposicin, los Tn pueden
transmitirse y expandirse a otros plsmidos.
Los transposones compuestos son la base de
resistencia a antibiticos, ya que el segmento
incluido entre ellos puede llevar resistencia a
antibiticos; contra ellos la industria farmacutica lucha continuamente desarrollando
nuevos antibiticos.
Fig. 28.3. Estructura de un transposn compuesto.

tnpA: gen de la transposasa. tnpR: gen de la resolvasa.
res: sitio de recombinacin. ant: genes de resistencia.
IR: repeticiones inversas.
VARIACIN GENTICA
379
Fig. 28.4. Esquematizacin simplificada de los mecanismos de transposicin.
2.
Mecanismos de transposicin en
procariotas
Los elementos genticos movibles pueden

moverse en el genoma de dos formas distintas
(fig. 28.4):
1. Transposicin conservativa: el trans
posn abandona la posicin que tena en el genoma y se mueve a otra.
2. Transposicin replicativa: una copia
del transposn se inserta en un lugar del genoma
mientras queda otra copia en su posicin
original, por tanto, el movimiento del transposn implica su replicacin.
2.1. TRANSPOSICIN CONSERVATIVA
Este tipo de transposicin se inicia con la

produccin de dos cortes flanqueando al trans-
posn en la molcula donante y otros dos en la

diana de la transposasa de la molcula receptora
(fig. 28.5). Las cadenas de las molculas donadora y receptora adoptan una conformacin
que permite ligar los extremos del transposn al
nuevo husped. No se conoce bien cmo termina el proceso, pero en el ADN donante queda
un hueco que, o se sella cerrndose nuevamente,
o bien se pierde toda la molcula. De esta
manera el transposn habr pasado de un sitio a
otro sin replicarse.
2.2. TRANSPOSICIN REPLICATIVA
El mecanismo de transposicin replicativa

est acoplado a la replicacin del propio transposn, de manera que una copia permanece en
el donante y otra en el receptor. El receptor
puede ser, incluso, otra localizacin en la misma
molcula de ADN. Los transposones de la
380
GENTICA
Fig. 28.5. Transposicin conservativa.
familia TnA utilizan este tipo de transposicin.

El mecanismo se inicia, igual que en la conservativa, con la produccin de cuatro cortes (fig.
28.6). Como una etapa intermedia se forma un
cointegrado, en el que se fusionan los ADN de
donante y receptor.
El mecanismo es complejo y no del todo
conocido, la transposasa (tnpA) se comporta
como una enzima de restriccin, cortando los
extremos del transposn porque reconoce las
secuencias repetidas invertidas, y produce dos
cortes no enfrentados a ambos lados del transposn, en las cadenas opuestas. En el sitio donde se va a integrar tambin produce dos cortes
no enfrentados, por reconocer la secuencia diana de la transposasa. Los extremos del transposn que quedan libres (uno por cadena) se van a
unir a uno de los extremos generados tras el
corte del ADN del receptor. De esta manera el

transposn queda unido a cuatro cadenas de
ADN: dos del donante y dos del receptor. La
ADN polimerasa rellena los huecos que quedan,
generando, tal como vimos antes, repeticiones
directas. Al llegar al final de la replicacin la
ADN polimerasa no se detiene, sino que
contina replicando el transposn, por lo que
ste se duplicar, originndose un cointegrado.
El
cointegrado
se
resuelve
por
recombinacin sitio-especfica, es decir que se
da entre dos regiones especficas (res), una del
transposn original y otra en la copia recin
sintetizada lo que origina que la molcula
donante tenga una copia del transposn y otra la
receptora. La resolucin del cointegrado est
mediada por la enzima resolvasa (tnpR)
sintetizada por el propio transposn.
VARIACIN GENTICA
381
Fig. 28.6. Transposicin replicativa.
3. Transposones eucariotas
3.1. ELEMENTOS CONTROLADORES EN EL MAZ
Los elementos genticos transponibles no

son exclusivos de procariotas, los eucariotas
contienen elementos movibles muy variados en
secuencias. Brbara McClintock descubri, en
1940, el primer elemento transponible
estudiando el maz y, en 1983, se reconoci su
gran descubrimiento otorgndole el premio
Nobel. Ella observ que la variegacin en la
coloracin del grano de maz se deba a una
mutacin inestable (fig. 28.7). El locus C produce una coloracin prpura cuando el gen C
est mutado no se produce el pigmento apareciendo una coloracin blanco-amarillenta.
Ocasionalmente la mutacin sufre una reversin
y aparece una coloracin moteada consecuencia
de los clones celulares en los que ha ocurrido la
reversin. El hecho de que las zonas prpuras
sean muy abundantes pone de manifiesto la
inestabilidad de la mutacin, mucho ms alta de

lo que podra esperarse de la reversin de
mutaciones normales. McClintock propuso que
la mutacin del gen C se deba a la insercin de
un elemento gentico transponible al que
denomin Ds (disociador). Otro elemento
transponible Ac (activador), hara que Ds
sufriera una transposicin desde C que
provocara la reversin de la mutacin (fig.
28.7). Posteriormente, Nina Federoff consigui
desentraar la estructura molecular del
activador Ac, y tres diferentes formas del
disociador. Ac muestra la estructura tpica de un
transposn (fig. 28.3), mientras que los
diferentes elementos disociadores (Ds) son
elementos derivados de Ac que han sufrido
deleciones de diferentes tamaos en el gen de la
transposasa.
382
GENTICA
Fig. 28.7. Variegacin en la coloracin del maz kernel.

3.2. ELEMENTOS P DE DROSOPHILA
En Drosophila existen otros elementos

transponibles entre los que se encuentran los
elementos P que producen una disgenesis hbrida
(descendencia hbrida estril), que se desarrolla
al cruzar hembras de laboratorio con machos de
poblaciones naturales. Las cepas de laboratorio
tienen un tipo celular que se denomina citotipo
M, mientras de las poblaciones naturales
muestran el citotipo P. Al realizar el cruzamiento (9 citotipo M X d' citotipo P) los descendientes muestran disgenesis hbrida que se
manifiesta en esterilidad, altas tasas de mutacin y anomalas cromosmicas. Curiosamente
el cruce recproco no produce estas anomalas.
La inestabilidad generalizada del genoma se
debe a la accin de unos elementos transponibles
P que aparecen en el genoma de Drosophila de
citotipo P, pero estn ausentes en el M. Estos
elementos P codifican para transposasa y para
un represor de P, que inhibe la produccin de
transposasa. En el citotipo P, al existir un
gran nmero de copias de estos elementos, se

produce una gran cantidad de represor, por lo
que dichos elementos movibles quedan inmovilizados al no producirse transposasa. Al hacer
los cruzamientos de hembras de laboratorio con
citotipo M que, por no tener elementos P carecen de represor, con machos de citotipo P, stos
aportan los elementos P que pueden moverse y
producir la alta inestabilidad en el genoma que
conduce a la disgenesis hbrida.
4. Retrovirus y retrotransposones
Para algunos autores los retrovirus son un

tipo de elementos genticos movibles. El ciclo
de vida del retrovirus, al poseer como material
gentico ARN de cadena sencilla, implica la
transposicin, pues se replica a travs de un intermediario de ADN de doble cadena; para ello
inserta esta doble cadena en el ADN husped
mediante una transposicin, generando las repeticiones caractersticas de los elementos mo-
VARIACIN GENTICA
vibles, que en este caso se denominan LTR (repeticiones terminales largas) (fig. 28.8). La caracterstica ms sobresaliente de los retrovirus,
fue descubierta por H. Temin y D. Baltimore en
los aos setenta, y es su capacidad para
transcribir su material gentico, ARN, a ADN,
para lo que utiliza una transcriptasa inversa o
retrotranscriptasa (RT) (ADN polimerasa dependiente de ARN).
Se conocen un buen nmero de transposones que se comportan como retrovirus, utilizando la transcriptasa inversa, por lo que se denominan retroposones o retrotransposones. Tal
es el caso de los elementos Copia de Drosophila
que aparecen en mltiples copias en su genoma
y de los que se conocen al menos siete familias
(con secuencias parecidas) que en total suponen
alrededor del 10 % del genoma de Drosophila.
Estos elementos tienen un tamao que oscila
entre 5 y 8 kb y su estructura es similar a la de
los retrovirus. Los elementos Copia se
caracterizan por producir mutaciones por insercin.
383
En levaduras existen elementos genticos

similares denominados Ty, con un tamao de
6.300 bp y que tambin contienen los genes necesarios para su propia transposicin, va retrotranscriptasa.
La transcripcin inversa e integracin en el
genoma parece haber jugado un importante papel en la conformacin de los genomas como lo
demuestra la existencia de pseudogenes procesados. Los pseudogenes son secuencias de ADN
que recuerdan a genes, pero que no funcionan, y
que probablemente se han originado por
duplicaciones gnicas y posterior divergencia
por acumulacin de mutaciones. Los
pseudogenes procesados tienen, probablemente,
el mismo origen que los pseudogenes pero a
travs de una integracin en el genoma por
transcripcin inversa, como apunta el hecho de
presentar colas poli-A, copiadas de las colas
poli-A de un ARNm, y carecer de intrones.
El Proyecto Genoma Humano ha puesto de
manifiesto que en el genoma humano existen
multitud de elementos mviles. Por ejemplo,
Fig. 28.8. Ciclo de vida (a) y estructura bsica de un retrovirus (b) (gag: protena de la cubierta;
pol: transcriptasa inversa; int: protena de la membrana).
384
GENTICA
Fig. 28.9. a) Produccin de reordenaciones cromosmicas por los elementos genticos movibles.
b) Relocalizacin de genes: transposones compuestos.
existen pseudogenes procesados en mltiples

copias, tal como las secuencias Alu (por contener abundantes dianas de la enzima de restriccin Alul) y cuya secuencia recuerda a la del
ARN 7S. Estas secuencias tienen 0,28 kb de
longitud y estn representadas por alrededor de
106 copias, que se encuentran dispersas por todo
el genoma. Las secuencias Alu constituyen una
de las secuencias dispersas, altamente repetidas
ms abundantes del genoma humano: las SINES
(secuencias cortas dispersas).
Adems, en el genoma humano se encuentran otros retroposones no virales, las secuencias LINES (secuencias largas dispersas). La
LINE ms abundante en mamferos es la LI
(LINE 1) o familia Kpn (por la abundancia de la
diana de esta enzima en su secuencia) con un
tamao de 6,4 kb, y representada en el genoma
humano por unas 20.000 copias. En su secuencia se encuentra codificada una protena muy
parecida a la transcriptasa inversa.
5. Efectos de los elementos genticos

transponibles
La insercin de un elemento gentico movible en un gen o en su proximidad puede afectar

su expresin y alterar el fenotipo, produciendo
un efecto mutacional. Cuando la integracin es
en el gen puede producir un cambio en la pauta
de lectura, produciendo mutaciones sin sentido
y protenas trucadas. Pero si se inserta en las regiones que controlan la transcripcin del gen,
puede causar un efecto drstico sobre la cantidad de producto gnico sintetizado.
Adems, los elementos transponibles pueden producir reordenaciones en el genoma,
produciendo duplicaciones, deleciones, etc. (fig.
28.9).
Por ltimo, los transposones pueden relocalizar genes. Cuando dos copias del mismo
elemento movible se encuentran prximas en un
cromosoma, stas pueden englobar a toda la
VARIACIN GENTICA
regin cromosmica comprendida entre ellas y

moverse como un transposn compuesto (gigante), que al moverse relocalizar los genes
comprendidos entre las dos copias (fig. 28.9).
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Captulo
29
Control gentico del ciclo

de divisin celular
1.
Control Gentico de la Proliferacin y la Muerte Celular

1.1. Control Gentico de la Proliferacin Celular
1.2. Control Gentico de la Muerte Celular
2.
El Cncer Como Descontrol Gentico del Ciclo Celular

2.1. Oncogenes
2.2. Genes Supresores de Tumores
390
GENTICA
Una de las decisiones ms cruciales que una

clula en estado proliferativo debe tomar es si
contina una nueva ronda de divisin celular o
si pasa a un estado no proliferativo. De un modo
similar, una clula que estuviera en estado no
proliferativo debe decidir si entra o no en un
ciclo de divisin celular.
Durante el desarrollo embrionario temprano
pocas son las clulas que abandonan el ciclo
celular. Por el contrario, en organismos adultos,
la mayora de las clulas no se dividen. Solamente algunas clulas especializadas, como
por ejemplo determinados linajes celulares hematopoiticos o las clulas de capa basal del
epitelio gstrico o de la epidermis, mantienen un
estado proliferativo.
Las clulas cancergenas se caracterizan por
un estado de proliferacin celular incontrolado.
Dado que los tumores se originan generalmente
en tejidos del individuo adulto, se ha postulado
que la ventaja selectiva que tienen las clulas
tumorales se debe a su habilidad para evitar la
entrada en un estado no proliferativo y que tiene
que ver con alteraciones en genes especficos.
En este contexto, el cncer vendra definido por
un descontrol gentico del ciclo de divisin
celular.
1.
Control gentico de la proliferacin

y la muerte celular
1.1.
CONTROL GENTICO DE LA PROLIFERACIN

CELULAR
En eucariotas el ciclo celular consta de cuatro etapas fundamentales. En la etapa Gl (del

ingls gap, intervalo), la clula aumenta de
tamao y se prepara para replicar su ADN. La
replicacin del material gentico tiene lugar en
la siguiente fase, la etapa S (de sntesis), durante
la cual la clula duplica con precisin su
complemento cromosmico. Una vez que los
cromosomas se han replicado, la clula entra en
la etapa G2, durante la cual se prepara para la
ltima fase, etapa M (de mitosis), en la que la
clula se divide para dar lugar a dos clulas hijas, cada una de las cuales recibe una serie
completa de cromosomas. Las nuevas clulas
entran inmediatamente en fase G, y continan el

ciclo de nuevo. Cuando los estmulos mitognicos cesan, las clulas dejan de dividirse y
pasan a un estado no proliferativo (etapa Go).
Todas las clulas comparten una misma estrategia de progresin a travs del ciclo celular.
Este ciclo bsico, comn a todas las clulas, requiere la actividad ordenada de unos complejos
proteicos formados por dos tipos de protenas,
las quinasas dependientes de ciclinas (CDKs) y
las ciclinas (cyc). Las ciclinas se denominan as
porque los genes que las codifican se
transcriben y traducen solamente durante
momentos especficos del ciclo celular. Las
CDKs son protenas enzimticas que fosforilan
ciertos residuos aminoacdicos (generalmente
serinas o treoninas) de determinadas protenas
que controlan la transcripcin de genes implicados en el crecimiento celular. Para que las
CDKs puedan llevar a cabo la fosforilacin de
las mencionadas protenas es necesario que se
forme previamente el complejo binario con las
ciclinas correspondientes.
La actividad de las quinasas dependientes de
ciclinas (CDKs) se regula positiva y negativamente a distintos niveles. La sntesis de ciclinas, la fosforilacin por los complejos
CDK7-ciclina H (CAK, del ingls CDK activating kinase) o defosforilacin mediante
fosfatasas (p. ej., CDC25) son mecanismos que
promueven la sntesis de las CDKs. Por el contrario, la degradacin de ciclinas, la fosforilacin por otras quinasas (p. ej., WEE1) o las
protenas de la familia INK4 y Cip/Kip, regulan
negativamente la actividad de las CDKs.
Al ciclo bsico se le superponen controles o
checkpoints que actan detenindolo transitoria o permanentemente, o desvindolo hacia
un programa de diferenciacin, senescencia o
apoptosis. Una caracterstica aparentemente
universal de las clulas cancergenas es,
precisamente, el funcionamiento defectuoso de
los checkpoints del ciclo celular. Existen tres
puntos de control del ciclo celular: R (controla
el inicio de la sntesis de ADN), G2-M (controla
la entrada en mitosis) y M (controla el final de
la divisin celular). El control de los
checkpoints y, en trminos generales, el de la
progresin a travs del ciclo celular depen-
391
FIG. 29.1. Regulacin dela transicin Gl/S.
de, entre otros factores, de los productos codificados por dos genes supresores de tumores: Rb
y p53. En este control participan tambin una
serie de factores proteicos de pequeo tamao,
denominados genricamente CKIs (Inhibidores
de las quinasas dependientes de ciclinas). Estas
protenas estn codificadas por genes que se
pueden clasificar en dos familias. La primera de
ellas est definida por los genes p21, p27 y p57
(familia Cip/Kip), cuyos productos se asocian
con diferentes tipos de complejos CDK/cyc. La
segunda incluye a los genes p16INK4a p15INK4b
p18INK4c y p19INK4d (familia INK4), cuyos
productos se unen de manera especfica slo a
ciertos complejos tales como cyc-CDK4/6 en el
caso de p15, p16 y p18 o cycA-CDKs para p19.
Un momento crucial del ciclo celular tiene
lugar al final de la fase G,, en el punto de control R, cuando la clula decide si debe o no continuar con el proceso de divisin celular. El
punto de restriccin es un parmetro biolgico
(Pardue, 1974) que permite definir una situacin

en la fase G, despus de la cual las clulas
proliferan independientemente de los estmulos
mitognicos. Cuando las clulas que se encuentran en un estado no proliferativo reciben
un estmulo mitognico, abandonan la fase Go y
entran en G, (preparacin para la sntesis de
ADN). Si el estmulo mitognico desaparece las
clulas pueden volver a Go si no han alcanzado
el punto de restriccin. Para que la clula
traspase este punto y entre en la fase S, es preciso que un conmutador molecular (los complejos cycD-CDK4/6) pase del estado no activo
(apagado) al activo (encendido) (fig. 29.1).
1..2.
CONTROL GENTICO DE LA MUERTE

CELULAR
Es un hecho sabido que las clulas no viven

indefinidamente. En condiciones normales, cada
tipo celular tiene una duracin ms o me-
392
GENTICA
nos determinada. La muerte celular es una de

las distintas opciones que puede seguir una clula en divisin activa. Las otras son la capacidad de poder continuar dividindose de manera
controlada, la de diferenciarse adquiriendo un
fenotipo especializado incompatible con la
proliferacin y, por ltimo, la de perder el control de su proliferacin originando cncer. El
tomar una u otra opcin depende de una serie de
circunstancias especficas. As la muerte de las
clulas se produce por mltiples causas como
son por ejemplo: el dao mecnico, la infeccin
por virus u otros microorganismos, la accin de
agentes txicos, la acumulacin de sustancias de
desecho, etc. Estas causas provocan alteraciones
en la clula que la hacen inviable, lo cual, a su
vez, conduce a la destruccin celular y a la
liberacin de sustancias citoplasmticas al
medio externo (necrosis celular).
Existe un segundo tipo de muerte celular
que implica la activacin de mecanismos genticos especficos en la clula que conducen a su
destruccin. Este fenmeno, denominado
apoptosis o muerte celular programada, se produce de modo natural durante el desarrollo embrionario y posnatal temprano en mltiples tejidos. Tambin, durante el ciclo de divisin celular se produce apoptosis cuando el ADN que
se va a replicar sufre un dao severo. La muerte
celular programada ocurre en dos fases: una
fase de determinacin en la cual las clulas
reaccionan ante un estmulo tomando la decisin de iniciar el proceso de muerte, y una fase
de ejecucin en la que las clulas sufren una serie de alteraciones estructurales que conducen a
la muerte. Estas alteraciones son diferentes de
las que ocurren en el proceso de necrosis. Por
ejemplo, en el proceso de apoptosis la
membrana celular no estalla sino que se forman
lo que se conoce como cuerpos apoptticos,
constituidos por trozos de citoplasma rodeados
de membrana, que son englobados y digeridos
por otras clulas.
La muerte celular programada est
mediada por una cascada secuencial de
sucesos proteolticos que activan protenas
destinadas a destruir los componentes celulares.
Los motores de este proceso son unas proteasas
denominadas caspasas (del ingls cysteine contai-
ping aspartate-specific proteases). En las clulas normales, las caspasas se encuentran en un

estado inactivo denominado zimgeno. Para
pasar a su forma activa el zimgeno es necesario que elimine parte de su secuencia polipeptdica mediante un proceso de protelisis.
Existen dos tipos bsicos de caspasas: iniciadoras y ejecutoras. Las primeras actuaran sobre
las segundas activndolas, las cuales a su vez
actuaran sobre protenas especficas implicadas
en los procesos de destruccin celular (fig.
29.2).
2.
EL CANCER COMO DESCONTROL

GENETICO DEL CICLO CELULAR
El cncer no es un proceso patolgico nico

sino que engloba a un grupo heterogneo de
enfermedades genticas. Independientemente
del tipo de cncer de que se trate, las clulas
cancergenas se caracterizan por: 1) una independencia de seales de proliferacin celular, 2)
una insensibilidad a seales inhibidoras de la
proliferacin celular, 3) una evasin de la
apoptosis, 4) un potencial replicativo ilimitado,
5) una induccin de la angiognesis (proceso de
formacin de nuevos vasos sanguneos a partir
de vasos preexistentes) y 6) una capacidad de
escapar de su sitio natural y colonizar
(invasividad) y proliferar en otros tejidos u rganos (metstasis).
Los cambios genticos que contribuyen a la
aparicin del fenotipo cancergeno son el resultado de alteraciones genticas (mutaciones) o
epigenticas (modificaciones en los patrones de
metilacin del ADN) en dos tipos de genes
proto-oncogenes y genes supresores de tumores.
Los proto-oncogenes estimulan la proliferacin
celular (reguladores positivos del crecimiento
celular), inhiben la apoptosis, o favorecen la
angiognesis, invasidad y metstasis. Su
activacin como oncogenes se produce por
mutaciones dominantes de ganancia de funcin.
Los genes supresores de tumores tienen un
efecto contrario (reguladores negativos), y su
participacin se debe generalmente a la
inactivacin de los dos alelos (mutaciones recesivas). Las alteraciones que los implican en
393
Fig 29.2. Mecanismos de actuacin de las caspasas.
el desarrollo tumoral son de prdida de funcin.

Dentro de la categora de genes supresores
de tumores se podran incluir tambin los genes
que controlan la reparacin del dao gentico.
La aparicin de un fenotipo tumoral puede verse
influenciado por mutaciones de prdida de
funcin en genes de reparacin del ADN cuyas
alteraciones, si bien no estn implicadas
directamente en el desarrollo del proceso cancergeno, conducen a la aparicin de un fenotipo
mutador que puede facilitar la aparicin de
mutaciones en proto-oncogenes y genes supresores.
2.1. Oncogenes
Los oncogenes fueron identificados por

primera vez como genes expresados por retrovirus responsables de la transformacin tumoral
aguda en aves y roedores, pero que estn ausentes en los retrovirus transformantes dbiles
(o retrovirus no transformantes), estos ltimos
llamados as por producir, generalmente, tumores despus de perodos de latencia largos.
En 1970, Martin consigui aislar mutantes del
virus del sarcoma de Rous o RSV (descubierto
en 1911 por Rous, y por cuyo descubrimiento
fue galardonado en 1966 con el Premio Nobel
394
GENTICA
de Fisiologa y Medicina) cuya capacidad tumorognica, pero no su infectividad, dependa

de la temperatura. Estos mutantes podan infectar clulas de pollo tanto a 35 C como a 41
C, pero slo originaban focos de clulas transformadas a 35 C, lo que demostraba que el
RSV deba su accin tumoral a la presencia en
su genoma de un gen carcinognico, que no
afectaba para nada a la replicacin del virus.
Este gen fue llamado v-src (gen viral causante
del sarcoma de Rous), y se acuo el trmino
oncogn para referirse al gen causante de tumores. Duesberg y Vogt (1970) confirmaron la
existencia fsica del oncogn v-src al demostrar
que la capacidad carcinognica del RSV se
poda perder por delecin de un trozo de su genoma.
El descubrimiento que abri la era de la investigacin de los oncogenes se produjo en
1976 cuando Bishop, Varmus y colaboradores
demostraron la existencia de un gen homlogo
al oncogn v-src en clulas normales de pollo
(Stehelin et al., 1976), un hecho que le supuso a
Bishop y Varmus la concesin del Premio
Nobel de Fisiologa y Medicina en 1989. Este
experimento crucial consisti, inicialmente, en
el aislamiento de los ARN genmicos de virus
RSV transformantes y no transformantes (mutantes delectivos). Utilizando como molde los
ARN de los virus RSV transformantes, adems
de la transcriptasa inversa y nucletidos radiactivos, se sintetiz, posteriormente, los
ADNc, y los incub con un exceso de ARN de
los virus RSV mutantes. De este modo se consigui que slo los fragmentos de ADNc correspondientes al gen v-src se quedasen sin hibridar, en forma de cadena sencilla, mientras
que el resto formara hbridos de cadena doble.
Finalmente, el ADNc radiactivo correspondiente al gen v-src fue utilizado como sonda
para analizar la presencia de secuencias homlogas en el genoma de las clulas normales de
pollo. Esta metodologa abri la puerta a ensayos anlogos que emplearon sondas para otros
oncogenes existentes en otros tipos de retrovirus
transformantes agudos, y que llevaron al
descubrimiento de nuevos genes homlogos a
oncogenes retrovirales. Se denomin entonces
proto-oncogenes a las secuencias normales de
ADN de las que derivan los oncogenes retrovirales.

El desarrollo de las tcnicas de transferencia
de ADN a clulas de mamfero en cultivo fue un
hecho trascendental en el descubrimiento de
proto-oncogenes activados (oncogenes) en
tumores humanos. Mediante este tipo de
tcnicas se pudo comprobar que el ADN de clulas normales contena secuencias que eran
capaces de transformar clulas pertenecientes a
la lnea de fibroblastos de ratn NIH 3T3, induciendo un crecimiento anormal y desordenado en focos, aunque la eficiencia era menor que
cuando se utilizaba el v-src. Dicha eficiencia se
igualaba cuando el ADN utilizado haba sido
purificado, bien a partir de los mencionados focos de clulas transformadas, o bien proceda de
clulas transformadas con agentes qumicos.
Estos resultados demostraban claramente que
las clulas normales contenan proto-oncogenes
que se activaban durante el proceso de
transfeccin o por agentes qumicos, y que
dichos oncogenes se podan detectar utilizando
el ensayo de transfeccin de monocapas de
clulas NIH 3T3. En 1982, aplicando este tipo
de metologa, los grupos de Barbacid, Weinberg
y Cooper identificaron por vez primera un
oncogn humano activado en un tumor
(carcinoma de vejiga) como el homlogo del
oncogn v-H-ras presente en el genoma del
virus Harvey del sarcoma de rata. Este descubrimiento ha resultado fundamental para comprender que los oncogenes que causan tumores
de origen no viral (oncogenes celulares o abreviadamente c-onc) son los mismos que los genes retrovirales con potencial carcinognico
(oncogenes virales o abreviadamente v-onc)
(fig. 29.3).
El proceso por el cual un proto-oncogn se
transforma en oncogn se conoce como activacin oncognica. Este proceso se puede
producir de varias maneras: 1) por mutacin
puntual, 2) por reordenamientos genticos, 3)
por delecin y 4) por amplificacin gnica (fig.
29.4).
El ejemplo clsico de activacin oncognica
por mutacin puntual lo encontramos en los
oncogenes de la familia ras, que estn alterados
por este mecanismo en una amplia varie-
Fig. 29.3. Diferencias estructurales entre oncogenes celulares y retrovirales.
Fig. 29.4. Mecanismos de activacin oncognica.
395
396
GENTICA
dad de tumores humanos (vase revisin de

Bos, 1989). Los oncogenes ras cifran unas protenas de 2lkDa (p21-ras) con capacidad de unir
e hidrolizar GTP, siendo su forma activa el
complejo (p21-ras-GTP) y su forma inactiva el
complejo (p21-ras-GDP). Una mutacin de G a
T en el proto-oncogn c-H-ras humano que
ocasiona el cambio de un codn GGC, que codifica para la glicina, a otro GTC (valina) es suficiente para alterar la actividad biolgica de la
protena normal, induciendo un estado permanente de activacin al disminuir su actividad
GTPasa.
El reordenamiento gentico es el sustrato
molecular de las alteraciones encontradas en
tumores con translocaciones cromosmicas.
Uno de los ejemplos que ilustran esta circunstancia es la translocacin 9;22 que se observa en
la leucemia mieloide crnica (LMC). En este
caso el oncogn abl (localizado en el cromosoma 9) se encuentra truncado y yuxtapuesto
al gen bcr (situado en el cromosoma 22). Esto
da lugar a un gen de fusin bcr-abl, que se
transcribe como una unidad que comienza en el
extremo 5' del gen bcr y contina con el gen
abl, que proporciona la parte 3' de dicho gen. La
alteracin funcional que se produce en ambos
genes como consecuencia del mencionado
reordenamiento es el factor desencadenante ms
importante en el desarrollo de las LMCs. Otra
forma de reordenamiento es cuando las dos
secuencias yuxtapuestas no forman necesariamente un gen de fusin, pero donde la proximidad de un proto-oncogn a un potente potenciador de la transcripcin (enhancer),
como consecuencia de la translocacin, hace
que el proto-oncogn sufra una alteracin en la
regulacin de su expresin gentica y predisponga a la clula a la transformacin maligna.
Uno de los casos ms conocidos que presentan
este tipo de alteracin se observa en el linfoma
de Burkitt, donde el proto-oncogn c-myc (localizado en el cromosoma 8) se yuxtapone a los
genes que codifican para distintas cadenas de
las inmunoglobulinas situados en los cromosomas 14, 2 y 22.
La delecin de porciones de un protooncogn, como por ejemplo el erbBl que
codifica para el receptor del factor de creci-
miento epidrmico (EGF), puede inducir en su

producto gnico una funcin aberrante. Se ha
visto que la falta del dominio extracelular de la
protena puede inducir en el receptor un cambio
conformacional que mantiene una activacin
continua en ausencia de ligando.
Por ltimo, la amplificacin gnica produce
frecuentemente una sobreexpresin del producto
gnico del proto-oncogn, desencadenando una
proliferacin
celular
anormal.
En
neuroblastomas el oncogn N-myc est activado
de esta manera. Las manifestaciones citogenticas de la amplificacin gnica de un protooncogn son la aparicin en los cromosomas de
reas de tincin uniforme (HSR) y/o de
fracciones del rea amplificada que se separan
del cromosoma de origen, formando los cromosomas diminutos dobles.
La mayor parte de las protenas codificadas
por los proto-oncogenes estn implicadas en la
proliferacin celular. Atendiendo a las funciones
de dichos productos gnicos se pueden clasificar
los proto-oncogenes en seis grandes grupos: 1)
factores de crecimiento (p. ej., proto-oncogn sis),
2) receptores de factores de crecimiento (p. ej.,
erbBl ), 3) componentes de la maquinaria de
transduccin de la seal mitognica al ncleo (p.
ej., src y ras), 4) factores de transcripcin que
regulan la expresin de los genes esenciales para la
proliferacin celular (p. ej., jun y fos), 5)
reguladores positivos del ciclo celular (p. ej.,
ciclina Dly Cdk4) y 6) productos implicados en
seales de supervivencia o seales antiapoptticas
(p. ej., bc12).
Adems de jugar un papel importante en el
control del crecimiento celular los productos de los
proto-oncogenes
actan
como
elementos
funcionales en los programas de desarrollo controlando diferentes etapas de la embriognesis y de
la diferenciacin celular. As, por ejemplo, los
proto-oncogenes son necesarios para la maduracin de los oocitos y durante las primeras
etapas del desarrollo embrionario (p. ej., mos, raf y
rel), como genes embrionarios implicados en la
proliferacin y diferenciacin celulares (p. ej., kit),
as como en la diferenciacin de lneas celulares
que sufren una renovacin continua (clulas
hematopoyticas) a lo largo de la vida del
individuo (p. ej., inyb).
2.2. GENES SUPRESORES DE TUMORES
Las primeras evidencias de que los cambios

genticos que contribuyen a la aparicin del
fenotipo tumoral podan ser el resultado de una
prdida de funcin de genes especficos vinieron de los experimentos con clulas hbridas
somticas. Segn estos estudios, la fusin de
clulas cancergenas con clulas normales no
daban lugar siempre a la aparicin de tumores,
existiendo adems una asociacin especfica
entre la presencia de cromosomas concretos y el
control de la expresin tumoral.
El concepto de gen supresor de tumores fue
definido por primera vez por Knudson (1971) a
partir del anlisis de las familias de pacientes
con retinoblastoma, un cncer infantil de la retina. Este tipo de cncer se presenta en dos formas: una de tipo espordico y otra de tipo hereditario. Este investigador predijo la necesidad
de dos eventos mutacionales para explicar la
aparicin del retinoblastoma de tipo hereditario.
Una de estas mutaciones se heredara a travs de
la lnea germinal (la cual por s sola no sera
suficiente para provocar la transformacin
tumoral, pero conferira a la clula que la lleva
un alto riesgo de convertirse en una clula
tumoral) y la otra ocurrira durante los primeros
aos de vida en alguna clula de la retina del
individuo portador (lnea somtica). La menor
frecuencia de este tipo de tumores en pacientes
no pertenecientes a familias de alto riesgo
(formas espordicas, 1/30.000) se explicara por
dos eventos mutacionales que ocurriran durante
los primeros aos de vida del paciente, y que
alteraran los dos alelos del gen en una clula de
la retina (lnea somtica) inicialmente normal.
Los genes supresores de tumores se han
aislado siguiendo dos tipos de estrategias. Una
de ellas ha sido la delimitacin de las regiones
de prdida cromosmica en tumores, tanto a
nivel citogentico (estudio de las anomalas
cromosmicas asociadas con el tumor) como
molecularmente mediante, por un lado, el anlisis de segregacin (o ligamiento) de marcadores polimrficos con el riesgo (susceptibilidad) a padecer una sndrome de cncer hereditario a un tipo especfico de tumor, y, por otro,
los ensayos de prdida de la heterocigosidad de
397
marcadores polimrficos (LOH) en el ADN de

los tumores. De esta manera, se aisl el primer
gen supresor de tumor, el gen de la susceptibilidad al retinoblastoma (o gen Rb). La otra estrategia empleada (que incluye a la anterior)
para aislar genes supresores de tumores ha sido
el estudio de las rutas que controlan la proliferacin celular, y as se han aislado genes supresores de tumores como p53, p16 o p15.
Los genes supresores de tumores se pueden
inactivar bsicamente mediante tres tipos de
mecanismos (fig. 29.5): 1) delecin de ambos
alelos (deleciones homocigotas), 2) delecin de
un alelo y mutacin intragnica del alelo
restante y 3) delecin de un alelo y modificacin epigentica de la expresin del otro alelo.
Un caso de inactivacin de genes supresores
que se desva del modelo de Knudson (ocurrencia de dos eventos mutacionales) lo encontramos en el gen supresor p53. Si bien en una
amplia variedad de tumores este gen se ha encontrado alterado por delecin de un alelo y
mutacin puntual del otro, una alteracin en uno
solo de los dos alelos del gen (como ocurre en la
activacin ontognica) puede comprometer
severamente la funcin de la protena, afectando
por consiguiente a la proliferacin celular
(mutacin dominante negativa). La explicacin
a este hecho hay que buscarla en las
peculiaridades de la protena p53. Se trata de una
protena oligomrica (a diferencia del resto de
productos gnicos codificados por genes supresores) que existe en forma de complejos tetramricos. En el caso de que una clula tenga
una copia defectiva y otra normal del gen, se
pueden formar distintas combinaciones de hetero-oligmeros (aquellos que llevan una o ms
copias de la protena p53 alterada) provocando
una prdida de su funcin. En ocasiones, se
pueden inactivar los genes supresores por la
prdida de elementos potenciadores de la
transcripcin (enhancers) o de reguladores
positivos de la expresin de un gen supresor
(p. ej., p19ARF y ATM estabilizan a p53).
Atendiendo a la funcin de sus productos

gnicos, los genes supresores de tumores pueden clasificarse en cuatro grandes grupos.
Una primera categora estara constituida por
398
GENTICA
Fig. 29.4. Mecanismos de inactivacin de genes supresores de tumores.
aquellos genes, como el gen RB y los genes

CKIs (p16, pl5, etc.), que regulan negativamente
el ciclo de divisin celular actuando de una
manera directa sobre factores promotores de la
divisin celular (ciclinas, CDKs, E2F). La
segunda clase la formaran aquellos genes
supresores (p. ej., p53, ATM) que intervienen de
manera indirecta en la regulacin de la divisin
celular, en respuesta a un dao en el ADN,
manteniendo la estabilidad del genoma. El
tercer grupo lo compondran aquellos genes
cuya funcin es la de inducir la apoptosis (p. ej.,
Fas, Pten y de nuevo p53). Por ltimo, estaran
aquellos genes implicados en los procesos de
reparacin del ADN (p. ej., BRCA1 y BRCA2).
Segn la trascendencia o el carcter de su
funcin se pueden clasificar en tres categoras
(Kinzler y Vogelstein, 1998). 1) Gatekeepers:
su mutacin es el paso fundamental para el
desarrollo de un tumor concreto y actan directamente promoviendo la proliferacin o
evitando la muerte celular (APC en cncer de
coln (FAP), RB en el retinoblastoma, etc.). 2)

Caretakers: su inactivacin no promueve
directamente la proliferacin ni evita la apoptosis, sin embargo promueve la inestabilidad
gentica que acaba afectando a los gatekeepers (genes MMR Mismatch repair) en cncer de colon hereditario (HNPCC), BRCA1 y 2
en cncer de mama, etc.). 3) Landscapers:
genes que crean un microambiente anormal que
favorece el desarrollo de las clulas tumorales.
Por ejemplo en pacientes con sndrome de
poliposis juvenil (JPS) se desarrollan plipos a
base de clulas estromticas, y esto favorece la
transformacin neoplsica de las clulas
asociadas con los plipos (PTEN en JPS, etc.).
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Captulo
30
Gentica del desarrollo

1.
Aspectos Fundamentales de la Gentica del Desarrollo
2.
Determinacin del Sexo en Drosophila y mamferos

2.1. Determinacin del Sexo en Drosophila
2.2. Determinacin del Sexo en Mamferos: El Factor TDF
3.
Lnea Somtica Versus Lnea Germinal
4.
Formacin de Patrones Complejos: el Plan Corporal Bsico

de Drosophila
4.1. Sinopsis de la Oogensis y del Desarrollo Embrionario
de Drosophila
4.2. Las Asimetras Citoplasmticas y la Generacin de la
Diversidad Morfolgica en el Eje Antero-Posterior
4.3. La sealizacin Clula-Clula y la Generacin de la
Diversidad Morfolgica en el Eje Dorso-ventral
402
GENTICA
El punto de partida del desarrollo de cualquier animal o planta multicelular es un vulo

fecundado, el cual empieza un ciclo de sucesos
que culmina con la formacin de un organismo
complejo, el individuo adulto. La secuencia de
sucesos que se producen durante el desarrollo
de cualquier organismo multicelular est bajo
un estricto control gentico. La base gentica de
los procesos de desarrollo es una accin gnica
diferencial en el tiempo, y tambin entre
diferentes tejidos presentes en una misma etapa
del desarrollo.
1.
Aspectos fundamentales
de la gentica del desarrollo
Durante el establecimiento del plan corporal

de un individuo multicelular, las clulas quedan
comprometidas a seguir destinos celulares
concretos, adquiriendo la capacidad de
diferenciarse en determinados tipos celulares.
Dicho compromiso est relacionado con la posicin de la clula en el embrin y las asignaciones de destino se reparten entre un grupo de
clulas vecinas (territorio de desarrollo).
La informacin posicional se establece
generalmente mediante seales proteicas provenientes de una fuente que puede estar bien en
la propia clula, como es el caso del cigoto, o
bien dentro un territorio de expresin. Una vez
que se ha adquirido una determinada informacin posicional dentro de un territorio de
desarrollo se generan tipos celulares intermediarios, los cuales darn lugar a poblaciones
de clulas que sucesivamente tendrn especificadas de forma cada vez ms precisa las
opciones de desarrollo (refinamiento de destinos).
Entre las decisiones de desarrollo que se toman en el embrin temprano, unas veces implican compromisos irreversibles entre dos opciones, decisiones binarias (por ejemplo, el establecimiento del sexo del individuo o la separacin de las lneas germinal y somtica),
mientras que otras implican seleccin entre opciones mltiples (por ejemplo, la subdivisin
del eje antero-posterior en una serie de unidades
segmentales).
2. Determinacin del sexo en Drosophila

y mamferos
El sexo de un organismo representa un

agregado de caractersticas genticas, anatmicas, fisiolgicas y de comportamiento que conforman la masculinidad o feminidad (Fernndez-Piqueras, 1990). La diferenciacin sexual
de un organismo es un claro ejemplo del papel
que desempean los genes durante el desarrollo.
En este sentido, el determinismo gentico del
sexo comprende un conjunto de factores y
mecanismos genticos que definen el carcter
sexo en un individuo. Como excepciones se conocen algunos casos, como el del gusano marino Bonellia viridis, en los que el sexo parece
estar determinado por circunstancias ambientales. Aun entonces debe de haber una base gentica que regule un mismo comportamiento en
unas determinadas circunstancias ambientales.
En estos casos parece ms acertado hablar de
determinismo gentico crptico del sexo.
En los organismos superiores ms complejos, como los vertebrados, la diferenciacin sexual es un proceso gradual que comienza con el
establecimiento de sexo gentico en la fecundacin. El sexo gentico dirige entonces la diferenciacin primaria o gonadal determinando
la formacin de ovarios o testculos a partir de
un blastema indiferenciado: sexo gonadal. Sin
embargo, existen numerosos ejemplos de vertebrados no mamferos donde la diferenciacin
gonadal puede estar influenciada por factores no
genticos, y los mecanismos disparadores seran
de tipo ambiental. Por ejemplo, en muchas
especies de tortugas la diferenciacin gonadal
depende de la temperatura y as, por ejemplo, en
Emys orbicularis la incubacin de los huevos a
27,5 C conduce a la formacin de machos,
mientras que temperaturas superiores a 29,5 C
determinan hembras. La incubacin a
temperaturas intermedias tiene como consecuencia el nacimiento tanto de machos como de
hembras e incluso de algn intersexo (con
gnadas de carcter mixto). En mamferos, sobre todo euterios, desaparece la labilidad de los
mecanismos genticos, y la obtencin de sex
reversals (o inversin del sexo gonadal) slo
puede conseguirse mediante trasplante de g-
nadas fetales. Los testculos u ovarios una vez

formados secretan las hormonas necesarias para
la diferenciacin secundaria o extragonadal,
formndose as las genitalias masculinas y
femeninas: sexo fenotpico. La ltima fase es el
establecimiento y mantenimiento de los patrones morfolgicos y funcionales caractersticos de cada sexo que afectan virtualmente a
todo el cuerpo. Conviene resaltar que toda esta
serie de acontecimientos que acabamos de
mencionar se llevan a cabo a travs de una accin gnica diferencial en la que participan de
manera escalonada numerosos genes.
La determinacin del sexo gentico est ntimamente relacionada con la existencia de los
cromosomas sexuales. Existen diferentes tipos
de determinismo cromosmico del sexo: sistemas XX-XY, sistemas, ZZ-ZW, sistemas XXXO o sistemas compuestos (X.Xn-XnY; XXXY,,; X.X-XY,,; X.X.-X.0). El sexo heterogamtico es aquel que produce dos tipos
distintos de gametos, mientras que el sexo homogamtico produce un nico tipo de gametos.
En el sistema ZZ-ZW (definido en aves), y a
diferencia de lo que ocurre en los otros casos,
los machos son homomrficos y las hembras
son heteromrficas en lo que a los cromosomas
sexuales se refiere. Sin embargo, ste no es el
nico modo posible de determinar el sexo. Una
manera alternativa puede ser mediante mecanismos allicos en los que el sexo venga determinado por un nico alelo o por alelos mltiples
no asociados con cromosomas heteromrficos.
Recordar a este respecto que muchas especies
de vertebrados inferiores (peces, anfibios y
reptiles) tienen cromosomas sexuales indiferenciados. En ciertos grupos de insectos
existe un mecanismo de determinismo del sexo
que no parece depender tampoco de los cromosomas sexuales sino ms bien del nivel de ploida del individuo. En este caso, los machos son
haploides y las hembras son diploides: determinismo por haplo-diploida.
2.1. DETERMINACIN DEL SEXO EN DROSOPHILA
En Drosophila melanogaster, la sola presencia de los cromosomas sexuales no es sufi-
403
ciente para determinar el sexo gentico de un

individuo. En esta especie el determinismo
gentico del sexo es el resultado de un equilibrio entre alelos presentes en el cromosoma X
que favorecen la feminidad y alelos autosmicos que favorecen la masculinidad, de manera que si la relacin X/A es 1 se producen
hembras, mientras que si es 0,5 da lugar a
machos.
Los genes que se requieren en la determinacin de sexo en Drosophila melanogaster
forman parte de un proceso jerrquico de activacin, cuyos estados alternativos especifican el
desarrollo hacia hembra o macho (fig. 30.1).
As, el gen Sxl (Sex lethal) funciona como un
interruptor que cuando est conectado (el gen
est activo) suprime el desarrollo masculino,
dirigiendo por tanto la diferenciacin sexual
hacia una hembra, mientras que cuando est
desconectado el resultado es un macho. Este
gen controla la expresin de los genes tra
(transformer) y dsx (double sex), los cuales
controlan a otros distintos. La regulacin molecular de este programa de desarrollo tiene lugar a travs de un mecanismo de splicing alternativo. El producto del gen Sxl gobierna el
splicing de su propio pre-ARNm y el del gen
tra, originando tipos de ARNm maduros especficos. De manera anloga, el producto del gen
tra gobierna el splicing del pre-ARNm del
gen dsx.
A su vez, el gen Sxl est regulado por genes
que se encuentran situados tanto en el cromosoma X como en los autosomas. Los genes
del cromosoma X, que regulan Sxl hacia un
estado conectado (desarrollo femenino), se
denominan elementos del numerador porque
actan sobre el numerador de la relacin X/A
antes mencionada. Los genes de los autosomas,
que regulan Sxl hacia el estado desconectado
(desarrollo masculino) se denominan elementos
del denominador. Dichos elementos son factores
de transcripcin del tipo hlice-vuelta-hlice
(HLH). Estos factores proteicos pueden formar
homodmeros (dos cadenas polipeptdicas
idnticas) o heterodmeros. Algunos de estos
polipptidos (los elementos del denominador)
han perdido una regin necesaria para la unin
del
ADN,
de
ma-
404
GENTICA
Fig. 30.1. Principales sucesos de la diferenciacin sexual femenina y masculina de Drosophila.
nera que los homodmeros formados a partir de

estas cadenas polipeptdicas o los propios
heterodmeros son inactivos. La relacin X/A se
mide a travs de la competencia que se establece entre los dos tipos de elementos (numeradores y denominadores) para formar dmeros
activos: dos cadenas polipeptdicas codificadas
por genes del cromosoma X. Teniendo en
cuenta que cada cadena polipeptdica se
sintetiza proporcionalmente al nmero de copias
de cada gen presentes en el genoma de una
clula, la probabilidad de formar dmeros
activos ser mucho mayor cuando la relacin
X/A sea 1. Por tanto, slo en este caso es cuando se produce la sntesis de una protena Sxl
activa.
2.2.
DETERMINACIN DEL SEXO EN MAMFEROS: EL

FACTOR TDF
En mamferos la determinacin primaria del

sexo est ntimamente relacionada con un gen
localizado en el cromosoma Y. El supuesto gen
de la masculinidad se denomin inicialmente
factor TDF (factor determinante de testculos)
en la especie humana y Tdy en el ratn. El
aislamiento de unas secuencias de ADN
repetido, presentes en uno de los cromosomas
sexuales de serpientes (satlite Bkm), y el
hallazgo de secuencias similares en el cromosoma del ratn hizo que durante algn
tiempo se considerara el posible papel de este
tipo de secuencias en la determinacin prima-
ria del sexo, tanto en reptiles como en mamferos. Sin embargo, este tipo de secuencias
apenas aparecan en el cromosoma Y humano, y
la propuesta fue pronto descartada.
Algo ms duradera fue la hiptesis que
consideraba el papel primario de un antgeno
menor de histocompatibilidad exclusivo del
sexo masculino: el antgeno H-Y. Esta hiptesis
fue cuestionada al comprobarse la formacin de
testculos en ratones carentes de antgeno H-Y.
Hoy se sabe que el gen estructural del antgeno
H-Y est localizado en el cromosoma 6 humano
y el cromosoma Y contiene un factor regulador
(activador) de dicho gen.
A partir de aqu, los intentos para aislar el
autntico TDF se han basado fundamentalmente
en el anlisis gentico molecular tanto en el
ratn como en la especie humana de individuos
del sexo masculino con determinismo XX (sex
reversals), buscando la secuencia mnima de
ADN capaz de inducir la masculinizacin de las
tericamente hembras XX. La construccin de
un mapa gentico a partir de los fragmentos del
cromosoma Y humano presentes en varones
XX, limit la regin candidata a contener el
TDF a la parte distal del cromosoma Y (zona
sexual),
muy
cerca
de
la
regin
pseudoautosmica (es decir, la zona terminal de
homologa con el cromosoma X).
El anlisis detallado de esta regin mediante
la tcnica del paseo cromosmico llev a
identificar un locus, denominado ZFY, como
candidato a ser el gen TDF, ya que posea una
isla CpG, una caracterstica propia de secuencias gnicas. Sin embargo, este gen, que codifica para un factor de transcripcin con un motivo
de unin al ADN del tipo dedos de zinc, se
descart cuando se comprob que existan
secuencias homlogas del mismo en el cromosoma X. La demostracin de secuencias similares en autosomas de marsupiales, la expresin
nica del gen Zfy del ratn en clulas germinales y la existencia de varones XX portadores de secuencias del Y que no contienen el gen
ZFY, fueron pruebas adicionales que contribuyeron a descartarlo.
En 1990, el grupo de Goodfellow llev a
405
cabo la hibridacin de 50 subclones, aislados de

la zona sexual del cromosoma Y cercana a la
regin pseudoautosmica, con el ADN de
machos y hembras de diferentes mamferos
(incluida la especie humana) y con clulas
hbridas ratn-humanas portadoras de cromosomas X o Y humanos, resultando que slo
uno de los subclones, el pY53.3, era capaz de
hibridar con el ADN del cromosoma Y en todas
las muestras. El anlisis detallado de este
subcln demostr que tena los elementos
estructurales necesarios como para contener un
gen. Este supuesto gen se denomin sex
reversal on chromosome Y (SRY en humanos
y Sry en el ratn), puesto que fue identificado a
partir de los estudios de individuos sex
reversals.
Para que un gen pueda ser considerado
como el autntico factor determinante testicular,
tiene que estar en los machos XX pero no en las
hembras XY, mostrar un alto grado de
conservadurismo evolutivo, de modo que
existan genes similares en el cromosoma Y de
mamferos, presentar una clara especificidad
tisular, de manera que el producto de su expresin aparezca en testculos, pero no en otros
tejidos; y ser capaz de inducir cambios de sexo
en animales transgnicos que hubieran sido
modificados genticamente con la implantacin
de este gen. El gen SRYhumano o el Sry del
ratn, rene todos estos requisitos.
3. Lnea somtica versus lnea germinal
En el diseo del plan corporal de un individuo, la decisin ms temprana que se toma es la

de la separacin de las lneas germinal y somtica. Una vez se ha producido, sta es irreversible de manera que las clulas germinales
no contribuyen a la formacin de los distintos
tejidos somticos. Para poder tomar la mencionada decisin el embrin utiliza el citoesqueleto
(entramado que da forma a la clula) para localizar un determinante de la lnea germinal en
un grupo determinado de clulas embrionarias
tempranas. En Drosophila estos determinantes
se conocen como grnulos polares, mientras
406
GENTICA
Fig. 30.2. Separacin de las lneas germinal y somticas durante el desarrollo embrionario temprano
de C. elegans.
que en el nematodo Caenorhabditis elegans reciben el nombre de grnulos P.

El estudio del desarrollo embrionario de C.
elegans ha aportado pruebas convincentes
acerca del papel que desempean las asimetras
citoesquelticas en la formacin de la lnea
germinal. Este nematodo tiene una serie de
ventajas que le hacen ser un excelente organismo modelo para el estudio de los procesos de
desarrollo. Por ejemplo, se puede trazar un rbol
de linajes celulares para todas las lneas de
clulas descendientes hasta la etapa de 1.000
clulas del gusano adulto. Este patrn de
divisiones celulares puede seguirse con facilidad al microscopio. En la figura 30.2 se
puede apreciar cmo el destino hacia la lnea
germinal se correlaciona en las primeras divisiones del cigoto unicelular (o clula Po) con la
distribucin asimtrica de los grnulos P.
4.
Formacin de patrones complejos:

el plan corporal bsico de Drosophila
Una de las principales cuestiones que pretende dilucidar la Biologa del Desarrollo es el
diseo gentico del cuerpo de los organismos
multicelulares. Muchos de los avances que han
permitido descifrar una gran parte de los principios genticos que gobiernan la generacin de
la diversidad morfolgica corporal han venido
de estudios realizados con Drosophila
melanogaster, un organismo metamerizado
donde cada uno de los segmentos se desarrollan
de manera independiente. Una serie programada
de instrucciones genticas que estn operando
durante el proceso de desarrollo son las
responsables de esta organizacin. El plan
corporal bsico de Drosophila se establece ya
en el embrin temprano, en el que ya se en-
cuentran separadas las clulas que formarn

cada segmento, desarrollndose cada uno de
ellos de forma especfica tanto en sus aspectos
externos como en sus estructuras internas.
4.1.
SINOPSIS DE LA OOGNESIS
Y DEL DESARROLLO EMBRIONARIO DE
DROSOPHILA
Los individuos de la especie Drosophila

melanogaster son un tipo de insectos que sufren
una completa metamorfosis para alcanzar el
estadio adulto. Este proceso dura aproximadamente 10 das. El desarrollo embrionario que
va desde la formacin del cigoto hasta la
eclosin del huevo dura un da, dando lugar a la
fase larvaria, que a su vez dura cuatro das y
pasa por tres estadios, durante los cuales se forman los discos imaginales. A continuacin se
sucede un perodo pupal, que dura cinco das,
donde se produce la metamorfosis y la mosca
adulta emerge del pupario. Los discos imaginales darn lugar a toda la cabeza, trax genitalia y analia mientras que los histoblastos, formados en el estadio de pupa, darn lugar al abdomen del individuo adulto.
El ovario de las hembras de Drosophila est
formado por varias ovariolas, cada una de las
cuales contiene una serie de oocitos que se
desarrollan secuencialmente. Cada oocito forma
parte de un folculo, en cuyo desarrollo
cooperan tanto clulas de la lnea somtica
como germinal. El desarrollo del oocito comienza con la divisin de una clula germinal
madre que da lugar a otra clula madre y a un
oocito primario, que se divide, a su vez, para dar
lugar a una agrupacin de 16 clulas conectadas
unas a otras por canales circulares. Una de estas
clulas se convierte en el oocito propiamente
dicho y las otras 15 se convierten en clulas
nodriza. Estas ltimas se hacen poliploides y
aumentan mucho de tamao. Los canales
circulares antes mencionados son sitios por
donde se produce un trasvase de citoplasma de
las clulas nodriza al oocito, un hecho de vital
importancia en la maduracin del oocito. Al
mismo tiempo que las clulas nodriza se desarrollan (se hacen poliploides), el oocito se ro-
407
dea de una monocapa de clulas somticas, las

clulas foliculares, que tambin se hacen poliploides y son las responsables de formar la cubierta del huevo que rodea al oocito, el cual una
vez alcanzada la maduracin adopta una morfologa elipsoidal con dos ejes, uno anteroposterior (AMP) y otro dorso-ventral (D/V)
perfectamente distinguibles.
En la oognesis temprana, la estructura de
los microtbulos del oocito en desarrollo es
como la de una tpica clula somtica, con los
extremos (-) hacia el centro del oocito (en el
centro organizador de los microtbulos o
MTOC) y con los extremos (+) en la periferia
del mismo. En esta etapa, distintos grupos de
clulas foliculares (polares e intermedias) se
encuentran ya rodeando al oocito, cuyo ncleo
transcribe un ARNm que dirige la sntesis de
una protena requerida para el establecimiento
de un destino dorsal y posterior tanto del oocito
como de determinadas clulas foliculares. Este
ARNm que se localiza cerca del ncleo del
oocito est codificado por el gen gurken (grk).
La protena GRK acta como ligando de la protena EGFR, un receptor de la familia de las tirosina quinasas que se encuentra en la membrana de todas las clulas foliculares pero que
solamente est activado en aquellas clulas foliculares polares que estn en contacto con el
oocito. Esta activacin promueve, por un lado,
una reorganizacin de los microtbulos del
oocito, y, por otro, una localizacin diferencial a
lo largo del eje A/P de dos ARNm codificados
por los genes maternos bicoid (bcd) y nanos
(nos). A partir de este momento, el ncleo del
oocito migra hacia una localizacin ms dorsal
y, de nuevo a travs de una seal GRK-EGFR,
hace que las clulas foliculares situadas en su
vecindad adopten un destino celular dorsal
creando el eje D/V.
El embrin de Drosophila se desarrolla
mediante una serie de divisiones nucleares del
cigoto que dan lugar a un blastodermo sincitial.
Durante el noveno ciclo, aproximadamente 5
ncleos alcanzan la superficie del polo posterior
del embrin, rodendose de las correspondientes
membranas plasmticas y generando las clulas
polares que darn lugar a los gametos del
adulto. El resto de los ncleos llegan a la
408
GENTICA
periferia despus del ciclo 10 de divisin sufriendo cuatro divisiones adicionales. En el ciclo 13 tiene lugar la formacin del blastodermo
celular compuesto por aproximadamente 6.000
ncleos individualizados. Es en el ciclo de divisin 14 cuando se produce un aumento significativo del nivel de transcripcin global y comienza formalmente la gastrulacin. A partir de
este momento irn ocurriendo una serie de
movimientos morfogenticos que culminarn
con la eclosin de larva 24 horas despus de la
fecundacin.
El plan corporal bsico de Drosophila es el
mismo en el embrin, larva y adulto, estando
formado por seis segmentos ceflicos, tres torcicos y diez abdominales, con dos estructuras
no segmentadas, una en la parte ms anterior
(acron) y otra en el extremo ms posterior del
cuerpo (telson).
4.2.
LAS ASIMETRAS CITOPLASMATICAS

Y LA GENERACIN DE LA DIVERSIDAD
MORFOLGICA EN EL EJE ANTEROPOSTERIOR
Los genes responsables de la generacin de

la diversidad morfolgica a lo largo del eje A/P
de Drosophila se pueden agrupar en dos clases
generales: genes de efecto materno y genes que
actan a nivel cigtico. Los primeros afectan al
desarrollo embrionario por la contribucin de
productos gnicos del ovario de la madre al
oocito en desarrollo. Dado que en el caso de
genes de efecto materno el fenotipo de la
descendencia no depende de su propio genotipo
sino del genotipo de la madre, mutaciones en
estos genes, las cuales son de tipo recesivo,
hacen que la descendencia tenga un fenotipo
mutante solamente en el caso de que la madre
sea homocigota para la mutacin. Los genes de
la segunda clase contribuyen al desarrollo del
embrin mediante productos gnicos que se
expresan exclusivamente a partir de la formacin del cigoto. Mutaciones recesivas en los
genes de accin cigtica determinan fenotipos
mutantes en aquellos individuos de la descendencia que sean portadores de la mutacin en
homocigosis. Estos genes cigticos se pueden
clasificar, a su vez, en dos categoras principales: los genes de segmentacin que subdividen
al embrin en unidades segmentales sucesivamente ms pequeas, y los genes hometicos
que determinan una identidad concreta para
cada uno de los segmentos formados.
En Drosophila, el proceso que conduce al
establecimiento del patrn segmental (nmero
correcto de segmentos) y a la asignacin de la
identidad de cada uno de los distintos segmentos comienza antes de que se produzca la fecundacin del oocito. La madre va a aportar
unos determinantes localizados (ARNm) que
establecen la polaridad (asimetra qumica) a lo
largo del eje A/P del oocito. Esta polaridad es
necesaria para definir regiones geogrficas en el
embrin (informacin posicional). La informacin posicional a lo largo del embrin temprano de Drosophila se establece mediante la
creacin de gradientes de concentracin de
protenas difusibles (morfgenos) sintetizadas a
partir de los determinantes localizados (fig.
30.3a). Este tipo de informacin posicional se
establece exclusivamente durante la embriognesis temprana, porque en esa etapa el embrin
es un sincitio multinucleado unicelular. A partir
de la etapa de blastodermo celular cobra especial relevancia otro tipo de informacin posicional basada en la generacin de gradientes
de concentracin de protenas difusibles extracelulares (fig. 30.3b).
Genes maternos. Las etapas del desarrollo
embrionario de Drosophila comprendidas entre
la fecundacin del oocito y el final de la
divisin sincitial nmero 13 se caracterizan por
la existencia de unas tasas de transcripcin muy
bajas, sugiriendo que la formacin del plan
corporal bsico requiere inicialmente productos
gnicos depositados en el citoplasma del oocito
durante la oognesis. Estimulados por estas
observaciones Nlssein-Volhard y Wieschaus
realizaron bsquedas de mutaciones letales
recesivas de efecto materno saturando el
genoma de mutaciones que alteraban el patrn
corporal de la larva.
Gracias a los trabajos de Nlssein-Volhard
(Premio Nobel de Fisiologa y Medicina en
1995) y sus colaboradores se han podido identificar aproximadamente 30 genes letales de
409
Fig. 30.3. Tipos de informacin posicional establecidos durante el desarrollo embrionario de Drosophila.
efecto materno diferentes que afectan a los fenotipos embrionarios A/P o D/V. stos se clasifican en cuatro grandes categoras atendiendo
a los fenotipos larvarios mutantes producidos
por madres homocigticas para la mutacin: 1)
terminales (los fenotipos mutantes larvarios se
caracterizan por la carencia de todas las
estructuras que derivan de los polos del embrin), 2) anteriores (carencia de todas las estructuras torcicas y de la cabeza), 3) posteriores (carencia de todos los segmentos abdominales) y 4) dorsoventrales (un subtipo se caracteriza por la prdida de las estructuras dorsales y
ventrales, y el otro por la prdida de las estructuras ventrales y laterales).
De los genes maternos que se necesitan para
formar la porcin anterior del embrin el ms
importante es bicoid (bcd). El producto del gen
bcd es un factor de transcripcin, cuyo ARNm
se localiza en una pequea regin del polo
anterior del citoplasma del oocito (fig. 30.4).
La traduccin de los transcritos bcd tiene
lugar despus de la fecundacin difundindose
en forma de gradiente con concentraciones ms

altas hacia la parte anterior del embrin. Este
gradiente abarca aproximadamente los dos
tercios anteriores del embrin en el ciclo nueve
de divisin. La protena BCD acta como factor
de transcripcin, activando determinados genes
cigticos, y como represor postranscripcional.
En este ltimo caso, el blanco de actuacin de
su actividad represora es el ARNm caudal
(cad). Los transcritos cad, a diferencia del
ARNm bcd, se encuentran uniformemente
distribuidos en el citoplasma del oocito, pero
debido a que la protena BCD reprime la
traduccin de los transcritos cad, la protena
CAD produce un gradiente complementario al
BCD con concentraciones ms altas hacia la
parte posterior del embrin. La protena CAD
juega un papel importante activando genes de la
ruta de segmentacin que dar lugar a las
estructuras posteriores.
Un segundo gen materno implicado en el
establecimiento de informacin posicional antero-posterior es hunchback-maternal (hb-m),
410
GENTICA
Fig. 30.4. Las interacciones entre los productos de genes maternos son las responsables de la distribucin
en gradientes de los distintos morfgenos a lo largo del AP del embrin temprano.
cuyo transcrito est uniformemente distribuido

por el oocito y el embrin temprano (fig. 30.4).
La protena (HB-M) est presente en el embrin
en forma de un gradiente similar al de la
protena BCD, pero menos acusado y ms extendido hacia posiciones posteriores. El gradiente HB-M es producido tambin por regulacin postran scripcional. En este caso, la traduccin de este ARNm hb-m es bloqueada por
la protena NOS, codificada a su vez por el gen
nanos (nos) (fig. 30.4). El ARNm nos se localiza en el polo posterior del oocito y se traduce
inmediatamente despus de la fecundacin,
produciendo un gradiente totalmente opuesto al
BCD con concentraciones muy altas en el polo
posterior.
Genes cigticos de segmentacin. Los
gradientes de las protenas BCD, HB-M y CAD,
establecidos en el embrin temprano van a ser
los responsables primarios del control de la
expresin espacial de los genes cigticos en-
cargados de la formacin del patrn segmental

bsico de Drosophila melanogaster. A diferencia de los genes maternos, cuya expresin tiene
lugar durante la oognesis, los genes cigticos
de segmentacin son transcritos en los ncleos
de las clulas embrionarias que derivan del cigoto original. Esta expresin empieza en la etapa de blastodermo sincitial (ciclo 10 de divisin). Un segundo anlisis de mutaciones que
determinan alteraciones en el patrn segmental
de la larva, llevado a cabo por Nlssein-Volhard
y Wieschaus permiti identificar cerca de 20
genes de segmentacin que se clasifican en tres
diferentes categoras principales: genes gap,
genes de la regla de los pares y genes de
polaridad segmental. Estas tres clases siguen
una jerarqua de expresin gnica que culmina
en el establecimiento de los distintos segmentos
del embrin (fig. 30.5).
Los primeros genes cigticos de segmentacin en ser transcritos son los genes gap, los
cuales se expresan en varias zonas amplias del

embrin dependiendo de cual sea el gradiente
de protenas maternas establecido en esa regin. En el establecimiento de este patrn de
segmentacin juegan un papel importante las
regiones promotoras de los genes gap, las cuales tienen sitios de unin con afinidades diferentes por los factores de transcripcin maternos. Por ejemplo, genes gap como hunchbackzigotic con sitios de unin de baja afinidad por
la protena BCD se expresarn en las regiones
ms anteriores donde los niveles de BCD son
ms altos. Por el contrario, genes gap con
sitios de unin de alta afinidad por BCD se
activarn en regiones ms posteriores.
Los genes de la regla de los pares dividen
las regiones establecidas por los genes gap en
siete bandas peridicas (una por cada dos segmentos) de ncleos que se extienden en crculos alrededor del embrin. Este patrn de ex-
411
presin depende de factores de transcripcin

codificados tanto por genes matemos como por
genes gap, los cuales se unen a las regiones reguladoras de los genes de regla de los pares activndolos. Por ejemplo, la transcripcin del gen
even-skipped (eve) en la segunda banda peridica
est dirigida por el gen bicoid y el gen
hunchback-zigotic, mientras que su represin
viene mediada por dos genes gap, krppel y
giant.
La distribucin a lo largo del eje anteroposterior del embrin de los productos proteicos
codificados por los genes de la regla de los
pares determina la activacin de una serie de
genes cigticos de segmentacin, encuadrados
todos ellos en una nueva categora, los genes de
polaridad segmental. La expresin de estos
genes va a estar restringida a 14 bandas
peridicas (una por segmento), estableciendo la
primera unidad metamrica en el embrin, el
Fig. 30.5. Jerarqua de expresin gnica durante el desarrollo embrionario de Drosophila.
412
GENTICA
Fig. 30.6. La mayora de las mutaciones hometicas se localizan en el cromosoma 3 en dos agrupaciones
gnicas: el complejo Antennapedia (C-ANT) y el complejo Bithorax (c-BX).
parasegmento (PS). El PS no representa en s

mismo una unidad anatmica por cuanto se corresponde con la mitad posterior de un segmento y la mitad anterior del siguiente. Ms bien
por el contrario, se trata de una unidad bsica de
expresin, ya que los lmites del parasegmento
definen la regin donde determinados genes se
muestran activos.
El control de la expresin de los genes de
polaridad segmental en una banda peridica de
un determinado segmento es bastante complejo.
En general, los factores de transcripcin codificados por los genes de la regla de los pares
inician el establecimiento de este patrn peridico activando directamente determinados genes
de polaridad segmental. A continuacin, una
serie de interacciones gnicas establecidas entre
los propios genes de polaridad segmental van a
ser las responsables de mantener la periodicidad
recin establecida a lo largo del desarrollo
embrionario tardo. La activacin ocurre justo
despus de que ha concluido la celularizacin.
Hasta ese momento la difusin de morfgenos
en el sincitio es de vital importancia en el
establecimiento del patrn segmental. A partir
de la etapa de blastodermo celular este tipo de
informacin posicional no va a tener ese carcter esencial, ya que ahora el destino celular
empieza a ser establecido fundamentalmente
mediante la difusin de protenas secretadas
entre clulas.
El lmite entre el compartimento posterior y
anterior de cada uno de los segmentos corporales est gobernado fundamentalmente por tres
genes de polaridad segmental, engrailed (en),
hedgehog (hh) y wingless (wg). La presencia de
los dos primeros define el compartimento
posterior, mientras que la activacin del tercero
determina el anterior.
Genes hometicos. Despus de que los
genes de segmentacin han subdividido al embrin en un nmero preciso de segmentos, los
genes hometicos (Hox), denominados tambin

genes selectores, actan como reguladores
principales que controlan la transcripcin de
bateras de genes responsables del desarrollo de
las estructuras especficas de cada segmento.
Los genes hometicos estn regulados
principalmente por los genes cigticos de segmentacin gap y de la regla de los pares, de manera que en la etapa de blastodermo celular cada
gen hometico se expresa dentro de un
subgrupo especfico de segmentos. La mayora
de estos genes selectores permanecen activos
durante lo que resta del periodo embrionario
dirigiendo el desarrollo segmental.
Las mutaciones en los genes hometicos
producen cambios que afectan a estructuras a lo
largo del eje antero-posterior, y que consisten en
la transformacin de un rgano en otro normalmente presente en un lugar diferente del cuerpo.
Este hecho ya fue observado a finales del siglo
xix por Bateson (1894), quien defini a este
fenmeno como homeosis. Los estudios realizados en los aos ochenta del siglo xx demostraron que en Drosophila melanogaster existen 8
genes hometicos primordiales agrupados en 2
complejos que se encuentran localizados en el
cromosoma 3: cinco genes adyacentes que forman el complejo Antennapedia (ANT-C) y controlan la identidad de los segmentos de la
cabeza y trax anterior (estudiados por
Kaufman, Gehring y sus colaboradores),
separados de otros tres genes que forman el
complejo Bithorax (BX-C) y controlan la
identidad del tercer segmento torcico y de
todos los segmentos abdominales (estudiados
por Lewis, Premio Nobel de Fisiologa y
Medicina en 1995, Hogness y sus
colaboradores) (fig. 30.6). Una propiedad
inherente a los genes de ambos complejos es la
existencia de una correspondencia entre la posicin que ocupan dichos genes dentro del complejo y las regiones del cuerpo donde stos se
expresan (colinearidad). En aquellos casos en
los que dos genes Hox se expresen en una misma regin del cuerpo, la identidad del segmento
vendr dada por aquel que se exprese ms
posteriormente. Esta nueva propiedad se conoce
como supresin fenotpica. El desarrollo de ltimo segmento corporal, la analia, est bajo el
control del gen caudal (cad), un gen selector que
no pertenece a ninguno de los dos complejos
gnicos.
Todos los genes hometicos tienen una regin de homologa de 180 pb localizada dentro
de la secuencia codificante denominada homeobox. La secuencia de 60 aminocidos (homeodominio) codificada por dicha regin es un
dominio de unin al ADN estructuralmente relacionado con el motivo hlice-giro-hlice de
muchas protenas reguladoras. El hecho de que
todos los genes hometicos compartan una secuencia homeobox tiene dos implicaciones
fundamentales. Por un lado, las caractersticas
estructurales del homeodominio con un motivo
capaz de unirse al ADN indican que los genes
Hox se comportan como factores de transcripcin. Por otro lado, la presencia de secuencias
conservadas en genes adyacentes sugiere un
origen evolutivo comn para dichos genes.
La regulacin de los genes hometicos es un
proceso bastante complejo, que implica en
algunos casos la interaccin entre distintos genes selectores. Por ejemplo, el control de la expresin del gen Antennapedia (Antp) viene definido principalmente por el uso alternativo de
promotores (P1 o P2), pudindose transcribir en
dos ARNm precursores diferentes. Distintos
factores de transcripcin codificados por
algunos genes maternos y genes gap son capaces de activar la transcripcin bien desde Pl o
bien a partir de P2. Paradjicamente, ambos
transcritos dan lugar a un mismo tipo de protena. Existen igualmente una serie de represores
de la actividad del gen Antp, como es por ejemplo la protena codificada por el gen hometico
Ultrabithorax (Ubx) que inhibe especficamente
la transcripcin llevada a cabo desde P1. A su
vez, la regulacin del gen Ubx se lleva a cabo
mediante un procesamiento alternativo de su
ARNm precursor. Durante la embriognesis
temprana el proceso de corte y empalme del
transcrito primario Ubx incluye dos microexo-
413
nes en el ARNm maduro. En el desarrollo del

sistema nervioso, por el contrario, uno o incluso
ninguno de estos pequeos exones forman parte
del transcrito maduro.
4.3.
LA SENALIZACIN CLULA-CLULA
Y LA GENERACIN DE LA DIVERSIDAD
MORFOLGICA EN EL EJE DORSO-VENTRAL
La seal inicial responsable de generacin

de la diversidad morfolgica en el eje dorsoventral de Drosophila surge de un proceso de comunicacin entre el embrin (oocito en ese momento) y la cubierta del oocito (capa de clulas
foliculares) donde ste se desarrolla. Las clulas
foliculares ventrales, en las que no se ha activado el gen que codifica el receptor de
crecimiento epidrmico (EGFR), mandan una
seal desconocida al espacio perivitelino que
activa una cascada de proteasas responsables de
la activacin de la protena Spc tzle (SPZ), un
ligando del receptor TOLL, y cuya activacin
genera un gradiente a lo largo del eje dorsoventral de la protena Dorsal (DL), un factor de
transcripcin codificado por el gen materno
dorsal (dl). La protena DL existe en dos formas:
1) como factor de transcripcin activo alojado
en el ncleo y 2) como protena citoplsmica
inactiva secuestrada por la protena CACT,
codificada por el gen cactus (cact) (fig. 30.7).
El gradiente de la protena DL es el responsable de la formacin de los distintos tejidos en
el eje dorso-ventral. As, por ejemplo, niveles
altos de DL activan a los genes que determinan
el desarrollo de mesodermo, tales como twist
(twi) y snail (sna). Por su parte, niveles bajos de
DL activan a rhomboid (rho) implicado en la
determinacin del neuroectodermo. La protena
DL reprime adems al gen decapentaplegic (dpp)
que es responsable de la formacin de los
distintos tejidos de la parte dorsal (amnioserosa
y ectodermo dorsal). La especificacin de los
distintos tipos celulares de la regin dorsal del
embrin requiere un gradiente de actividad DPP
inverso al DL. Adems del gen dl existen otros
genes implicados en la formacin del gradiente
DPP tales como short gastrulation (sog), screw
(scw)
tolloid
(tld).
414
GENTICA
Fig. 30.7. Ruta de sealizacin que determina la formacin del morfgeno DL.
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Captulo
31
Gentica del desarrollo

en vertebrados y plantas
1.
Paralelismo Entre la Formacin de Patrones Corporales en

insectos y Vertebrados
2.
Inmunogentica
3.
Aspectos Diferenciales del Desarrollo en Plantas
418
GENTICA
Hemos visto en el captulo anterior cmo los

homeogenes juegan un papel crucial en el
desarrollo de Drosophila. Aqu estudiaremos,
entre otros aspectos, que el plan corporal de los
vertebrados, est determinado tambin por una
familia de genes emparentados similares a los
de Drosophila.
Las propiedades de las clulas diferenciadas
vienen determinadas por un control de la
actividad gnica durante el desarrollo que establece directa o indirectamente los tipos y las
cantidades de diferentes protenas. Una posibilidad de regular de manera especfica la sntesis
de protenas es programando cambios en la
estructura de algunos genes en tejidos somticos, durante su proceso de diferenciacin, sin
que se altere la organizacin gentica de la lnea
germinal. Cabe recordar, por ejemplo, que en
animales el tejido somtico y el tejido germinal
se separan muy pronto durante el desarrollo.
Para ilustrar este punto estudiaremos el modo en
que se genera la diversidad de anticuerpos en
los organismos superiores.
La identidad de los distintos rganos de una
planta, al igual que ocurre en animales, viene
determinada por la activacin de genes
reguladores maestros. Estructuralmente hablando estos genes son diferentes de los homeogenes encontrados en insectos y vertebrados.
1.
Paralelismo entre Ia formacin

de patrones corporales en insectos
y vertebrados
Una vez caracterizadas las secuencias hometicas presentes en los homeogenes de Drosophila, McGinnis y colaboradores las utilizaron como sondas en experimentos de hibridacin de ADN para comprobar si existan secuencias similares en genomas tales como el de
Xenopus, el de ratn o el humano. Concretamente, realizaron zoo blots (aplicacin de la
tcnica de Southern blota ADN de distintos
tipos de organismos digeridos con diferentes
enzimas de restriccin) utilizando como sonda
la secuencia hometica del gen Antennapedia
de Drosophila. Los resultados obtenidos de-
mostraron la existencia de secuencias hometicas homlogas en los distintos genomas eucariticos analizados. De hecho una de las secuencias homeobox de Xenopus es muy similar
a la secuencia homeobox de Antennapedia en
Drosophila, encontrndose tan slo un cambio
en 1 de los 60 aminocidos que forman el homeodominio.
El siguiente descubrimiento fue constatar
que los genes hometicos de vertebrados
tambin forman un complejo de genes adyacentes. Ms sorprendente an fue comprobar la similitud tan grande que existe entre las agrupaciones de genes hometicos de mamferos,
llamadas complejos Hox, y las agrupaciones
ANT-C y BX-C de Drosophila (presentes tambin en otros insectos), denominadas colectivamente como complejos de genes hometicos
(HOM-C). En el ratn y en el hombre los complejos Hox muestran caractersticas parecidas en
cuanto a su estructura (el orden de sus genes),
aunque se pueden distinguir cuatro agrupaciones
situadas cada una en un cromosoma diferente,
denominadas en el ratn Hox-1, Hox-2, Hox-3 y
Hox-4 (HOX-1, HOX-2, HOX-3 y HOX-4 en
humanos) (fig. 31.1). As, por ejemplo, los genes
cercanos al extremo 3' de cada agrupacin Hox son
muy parecidos, no slo entre s, sino tambin a
algunos de los genes de la regin 3' HOM-C (ANTC) de insectos. Entre las distintas agrupaciones
Hox se establecen relaciones similares. De esta
manera, dos genes situados en la misma posicin
en dos complejos Hox diferentes presentarn ms
homologa entre ellos que dos genes vecinos

pertenecientes a un mismo complejo. Este
hecho es de una gran relevancia ya que se ha
conservado a lo largo de la evolucin no slo la
secuencia homeobox o algn gen hometico
sino todo el complejo Hox como un conjunto
(organizacin interna y orden de los genes).
Los genes con secuencias hometicas de
Xenopus y del ratn (probablemente tambin los
genes hometicos humanos) se expresan de un
modo segmental en regiones discretas a lo largo
del eje antero-posterior del embrin (fig. 31.2).
El anlisis sistemtico de los territorios de
expresin de los homeogenes y su comparacin
con la organizacin de los complejos de
Fig. 31.1. Anlisis comparado de la estructura de los genes hometicos de Drosophila y de mamferos.
420
GENTICA
Fig. 31.2. Dominios de expresin de los homeogenes de Drosophila y del ratn.
homeogenes indica, por un lado, que la posicin

de la frontera de expresin en el embrin de un
homeogn dado (su anterioridad o posterioridad) depende de la posicin relativa de este
gen en su complejo. As, los genes localizados
en los extremos de los complejos tienen los
campos de expresin ms anteriores o posteriores. Esta importante caracterstica, ya descrita en los complejos ANT-C y BX-C de Drosophila, podra explicar la conservacin de los
homeogenes en complejos gnicos durante la
evolucin.
El hecho de que algunos genes hometicos
de Drosophila presenten homologas con secuencias de homeogenes vertebrados y ocupen
las mismas posiciones relativas sobre los complejos, adems de que los patrones de expresin
a lo largo del cuerpo del embrin son
exactamente comparables entre los genes hometicos homlogos son dos tipos de evidencias que sugieren que la organizacin de los
complejos de homeogenes se ha conservado a lo
largo de la evolucin. Esto nos lleva a suponer
que existe una gran similitud en la lgica
funcional de los procesos de desarrollo que
operan durante la embriognesis tanto de los
insectos como de los vertebrados. El alineamiento de los complejos de Drosophila y vertebrados permite deducir que estos dos tipos de
agrupaciones de homeogenes proceden de un
antepasado comn, que seguramente contena
un nico complejo. Un hecho que avala la existencia de un complejo de genes hometicos ancestrales lo encontramos en el escarabajo de la
harina Tribolium castaneum, donde slo existe
un nico complejo HOM-C. Es decir, las agrupaciones ANT-C y BX-C que forman el men-
cionado complejo, y que en Drosophila estn

situadas en puntos alejados del cromosoma 3, en
el escarabajo de la harina estn estrechamente
ligados.
El desarrollo de ratones knockout ha
proporcionado datos que sugieren que el modo
de accin y funcin de los genes Hox de vertebrados son similares a los de Drosophila; su
actividad est relacionada con la diversificacin
morfolgica en el eje antero-posterior. Un
ejemplo de esto son los ratones knockout para
el gen Hox-3. En estos ratones la primera
vrtebra lumbar (L1) se ha transformado hometicamente en la identidad segmental de otra
vrtebra anterior. Esta situacin guarda un
enorme paralelismo con la ausencia del gen Ubx
de Drosophila (estructuralmente parecido al
Hox-3.1 y que ocupa una posicin relativa
tambin similar dentro del complejo BX-C) que
produce un cambio hometico hacia el
segmento corporal inmediatamente anterior.
2. Inmunogentica
Los genes que determinan la estructura de

cada anticuerpo no estn presentes como tales
en las clulas germinales ni en las clulas del
embrin recin formado. Estas clulas en vez de
llevar una serie de genes completos y activos
para fabricar anticuerpos, contienen esta
informacin gentica en segmentos genmicos
separados. Durante el desarrollo de las clulas
del sistema inmunitario, encargadas de la produccin de anticuerpos (linfocitos B), los segmentos correspondientes de ADN se mezclan y
unen de mltiples maneras. Las combinaciones
generan informacin gentica para fabricar anticuerpos completos distintos.

Los anticuerpos se componen de dos pares
de subunidades idnticas: cadenas polipeptdicas ligeras y pesadas unidas entre s por puentes
disulfuro. Dentro de cada cadena polipeptdica
podemos distinguir, a su vez, una regin
constante y otra variable. Dentro del dominio
variable una proporcin elevada de aminocidos
es no obstante similar, exceptuando unas
regiones poco extensas denominadas hipervariables, cuyo elevado grado de variacin es responsable de la especificidad de anticuerpos. Las
cadenas ligeras se agrupan en dos clases, x y ),
en funcin de la secuencia de aminocidos de la
regin constante. Por otro lado, la secuencia de
aminocidos de la regin constante de las
cadenas pesadas define cinco tipos: y, a, t, d y
e. La estructura de los anticuerpos fue dilucidada en la dcada de los sesenta por Porter
(1973) y Edelman (1973). Ambos investigadores fueron galardonados con el Premio Nobel de
Qumica en 1972 por sus descubrimientos sobre
la estructura qumica de los anticuerpos.
Cada cadena ligera est codificada por tres
segmentos de ADN distintos: el C, que codifica
la regin constante; el V, que codifica la
porcin N-terminal de la regin variable, incluyendo las dos primeras regiones hipervariables y parte de la tercera; y el J, que codifica el
resto de la regin variable, incluyendo la ltima
parte de la tercera regin hipervariable. La
cadena pesada est codificada por cuatro segmentos: el V, que codifica la porcin terminal
de la regin variable, incluyendo las dos primeras regiones hipervariables; el D, que codifica para la tercera regin hipervariable, exclusivamente; el J, que codifica la porcin restante
de la regin variable y el C, que codifica para la
regin constante. En 1976, Hozumi y Tonegawa
(galardonados por este descubrimiento con el
Premio Nobel de Fisiologa y Medicina en
1987) demostraron la base gentica de la diversidad de anticuerpos. El experimento consisti
en comparar ADN que codifica para la cadena x
en el ratn en clulas embrionarias (no sintetizan anticuerpos) y en clulas plasmticas
cancergenas (mieloma) (que sintetizan anticuerpos). La diversidad de anticuerpos es con-
421
secuencia, por un lado, de la existencia de un

gran nmero de secuencias nucleotdicas V, J y
D distintas; y, por otra parte, de la formacin
del gen funcional como resultado de la unin de
un segmento variable V concreto a una regin
formada por distintos segmentos J (D+J, en el
caso de las cadenas pesadas) y uno C. El
transcrito primario sintetizado a partir de este
gen sufre un procesamiento para dar lugar al
ARNm maduro, el cual est formado por una
nica secuencia V, J (D+J para el caso de las
cadenas pesadas) y C.
La reordenacin de estos segmentos se lleva
a cabo en la lnea somtica mediante un mecanismo de recombinacin no generalizada. En
el extremo 3' de cada gen variable hay un segmento que contiene dos secuencias, una de 7 pb
y otra de 9 pb altamente conservadas, separadas
por un espaciador de 12 pb. En el extremo 5' de
cada secuencia de unin (D o J) aparece la
misma estructura, pero las secuencias de 7 y 9
pb estn situadas en orientacin contraria y el
espaciador es ligeramente mayor (23 pb).
Durante el ensamblaje de los genes de las inmunoglobulinas la recombinacin ocurre entre
los segmentos de 12 y 23 pb, un hecho ste que
se ve facilitado por la existencia de secuencias
complementarias flanqueantes (7 y 9 pb). Se
cree que dos protenas cifradas por los genes
RAG-1 y RAG-2 (del ingls recombinationactivating genes) se unen a las secuencias que
acabamos de mencionar y participan en el
citado fenmeno de recombinacin.
3.
Aspectos diferenciales del desarrollo

en plantas
El desarrollo en vegetales es muy distinto

del de los animales. As, por ejemplo, mientras
que en los animales se separan en etapas muy
tempranas del desarrollo la lnea germinal de la
somtica, en las plantas esta decisin se toma
muy tarde. Otro hecho diferencial es que prcticamente no ocurre migracin celular durante el
desarrollo de una planta, debido fundamentalmente a la existencia de paredes celulares.
Para llevar a cabo el anlisis gentico del desarrollo vegetal, se han utilizado fundamental-
422
GENTICA
mente dos especies: Arabidopsis thaliana y

Antirrhinum majus. Estas especies vegetales
presentan una serie de caractersticas que las
hacen especialmente tiles para este tipo de
anlisis como son: un genoma pequeo, un nmero pequeo de cromosomas, tiempo de generacin corto y tamao pequeo de la planta.
En el control gentico del desarrollo floral
de Arabidopsis thaliana parecen estar implicados dos tipos de genes: los que determinan la
identidad de los meristemos, y aquellos que definen la identidad de los rganos en los diferentes verticilos de la flor. De los primeros depende
el inicio del desarrollo floral, es decir, la
transicin del meristemo de inflorescencia a
meristemo floral. Los segundos determinan por
qu en el primer verticilo de la flor se desarrollan spalos, en el segundo ptalos, los estambres en el tercero y carpelos en el cuarto.
Los genes que dan identidad a los diferentes
rganos en los verticilos de la flor caen dentro
de tres clases: A, B y C (modelo ABC). Los
genes de la clase A se activan cuando empiezan
a emerger el primer y segundo verticilo, los de
la clase B son activados en el periodo de definicin del segundo y tercer verticilo y los de la
clase C se encuentran activos en la etapa de diferenciacin del tercer y cuarto verticilo. Los
productos codificados por estos tres tipos de
genes determinarn la identidad de los distintos
rganos florales activando genes especficos.
As, el producto A determina spalos, A y B
juntos definen ptalos, la combinacin de B ms
C promueve la formacin de estambres, y el
producto C determina carpelos. Las actividades
de A y C son mutuamente excluyentes, de
manera que en regiones donde A se encuentra
activo C est inactivo, y viceversa. Si una
mutacin inactiva A, C se activa originando
carpelos en lugar de spalos. Si por el contrario
est mutado C origina spalos en lugares donde
deberan formarse carpelos. El establecimiento
de estos patrones de desarrollo ha sido posible
gracias al aislamiento de mutaciones hometicas que alteran la identidad de los rganos florales de Arabidopsis tales como Apetala-2
(mutantes de la clase A), Apetala 3 o Pistilata
(mutantes de la clase B) y Agamous (mutantes
de la clase C).
La caracterizacin molecular de estos genes

reguladores maestros ha puesto de manifiesto
que estos factores de transcripcin no
pertenecen a la familia de genes con secuencias
homeobox sino que se caracterizan por la presencia de secuencias MADSbox. Cabe destacar,
sin embargo, que genes con secuencias homeobox y MADSbox se han encontrado tanto
en animales como vegetales. Todos estos hechos sugieren que los patrones de desarrollo no
son homlogos debiendo de haber evolucionado
independientemente una vez se separaron los
reinos animal y vegetal.
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Captulo
32
Gentica del comportamiento

1.
Antecedentes Histricos e Inicio de la Especialidad Gentica
2.
Metodologas Genticas Para el Estudio del Comportamiento

2.1. El Mtodo Comparativo
2.2. El Mtodo de Seleccin
2.3. Efectos de Genes nicos Sobre una Pauta de
Comportamiento
3.
Gentica del Comportamiento en Drosophila
4.
Gentica del Comportamiento Humano
426
GENTICA
El comportamiento o conducta es la manera

de responder a los estmulos o al ambiente. En
los comienzos del siglo xx gentica y
comportamiento eran trminos contrapuestos.
Los primeros cientficos interesados en el
comportamiento no mostraban ningn inters
por la gentica y los primeros genticos no tenan herramientas de anlisis (ni quiz el inters) para estudiar los caracteres de comportamiento. Los estudios sobre comportamiento
fueron, entonces, copados por dos especialidades no genticas, la etologa (en Europa) y la
psicologa animal (en Estados Unidos). Los investigadores del primer grupo se dedicaron al
estudio de animales en sus hbitats naturales,
analizando el papel de la evolucin en el desarrollo de patrones de comportamiento innato y,
sobre todo, del aprendizaje. Por ello recibieron
el Premio Nobel, en 1973, K. von Frisch, K.
Lorenz y N. Tinbergen. La escuela estadounidense de psicologa animal se dedicaba al estudio en el laboratorio de pautas de comportamiento en ratones, principalmente aquellas que
podan ser modificadas por el aprendizaje, con
lo que su principal atencin se polarizaba hacia
el medio ambiente. En ambos casos se dejaba a
un lado, e incluso se rechazaba, la influencia
gentica sobre el comportamiento (para ello
puede leerse el discurso Ethology and stress
diseases de Tinbergen en la recogida del Nobel
el 12 de diciembre de 1973; http://www.no-bel.
se/medicine/laureates/ 1973/index.html).
A todo ello se sumaba la dificultad de establecer metodologas rigurosas capaces de extraer la contribucin gentica en los complejos
rasgos de comportamiento, es decir, faltaban
instrumentos objetivos de medida en los que la
comunidad cientfica se pusiera de acuerdo.
Otra dificultad especfica del anlisis del
comportamiento humano (aparte de las obvias
complejidades de las pautas de comportamiento
de nuestra especie y la imposibilidad de realizar
experimentacin controlada) estriba en la
posibilidad de capitalizar ideolgicamente los
resultados que se extraen de cualquier estudio
acerca del binomio naturaleza-nutricin
(nature-nurture) y, cierta y lamentablemente,
algunas interpretaciones acerca del determinismo biolgico de caractersticas de com
portamiento han sido aprovechadas, en determinadas sociedades y momentos histricos,

como argumentos para la segregacin de grupos
o individuos. En ese contexto, es fcil que los
partidarios de la herencia (nature) sean tildados
de racistas frente a los ambientalistas
(nurture) considerados liberales, en cuanto que
el comportamiento humano para ellos no est
prefijado biolgicamente, lo que ha complicado
enormemente el anlisis riguroso de las pautas
de comportamiento humano, para establecer sus
bases biolgicas.
Indudablemente, existen numerosos ejemplos de comportamientos, a lo largo de toda la
escala evolutiva, que no pueden explicarse por
mera influencia ambiental. Por citar algunos,
podramos indicar los elaborados rituales de
cortejo de muchos animales, las modalidades de
cuidados de la prole en numerosas especies, etc.
El desarrollo de las metodologas para el estudio
de los caracteres cuantitativos (que ya se han
tratado en otro captulo) abri una puerta para
que algunos genticos iniciaran anlisis
genticos de comportamiento, bajo las premisas
de que una demostracin de influencia gentica
nunca descarta la contribucin ambiental en la
manifestacin fenotpica final.
En este captulo se dar una visin general
de la contribucin del genotipo como la base fsica esencial del comportamiento, comenzando
por describir brevemente la gestacin de esta
especialidad gentica y las aproximaciones
metodolgicas que se utilizan en la actualidad,
pasando despus a centrarnos en estudios de
comportamiento en organismos clave, para
finalizar con algunos ejemplos de la contribucin gentica al comportamiento en la especie
humana.
1. Antecedentes histricos e inicio de la
especialidad gentica
Los primeros estudios en los que se analizaron de un modo cientfico rasgos de comportamiento humano se deben a Sir Francis Galton,
mdico, matemtico y naturalista, contemporneo de Mendel y primo de Darwin. Puede
considerrsele el padre de la gentica cuantita-
tiva e iniciador de la biometra (la estadstica

aplicada a la biologa). Midi numerosas caractersticas fsicas y de comportamiento humano, investigando su herencia. A l se debe el
trmino eugenesia para referirse a la mejora
de las cualidades genticas humanas, la cual
propugn. Tal vez debido a esto ltimo, despus
de las dramticas utilizaciones polticas de
algunas de sus ideas a lo largo de la primera
mitad del siglo xx, en ocasiones ha sido relegada, e incluso olvidada, su contribucin como
pionero de los estudios genticos de comportamiento.
Ya en el siglo xx, los primeros estudios genticos de comportamiento se desarrollaron a
partir de 1924 por E. Tolman, que comenz a
trabajar con un grupo de ratas heterocigticas en
las que meda su capacidad para aprender a
recorrer un laberinto al final del cual obtenan
alimento. Dichos anlisis fueron continuados,
en los aos treinta y cuarenta, por el grupo de
Robert Tryon de la Universidad de Berkeley en
California y, despus de los aos cincuenta, se
intensificaron las investigaciones acerca de la
contribucin gentica en las pautas de comportamiento, diversificndose los sujetos de estudio
(Drosophila, insectos sociales, bacterias,
nematodos, etc.), se comenzaron a publicar los
primeros textos sobre Gentica del comportamiento y, en 1970, surgi la primera revista
cientfica sobre el tema (Behavior Genetics),
pudiendo considerarse esa fecha como la de
consolidacin de esta especialidad gentica.
2.
Metodologas genticas
para el estudio del comportamiento
Existen varios procedimientos metodolgicos para el anlisis gentico del comportamiento, pero antes de entrar en ellos debemos
hacer una serie de consideraciones generales.
Una premisa esencial para cualquier estudio
gentico de comportamiento (particularmente en
la especie humana) consiste en definir claramente el rasgo de comportamiento que se estudia, al objeto de no introducir ruido gentico
que impida que se llegue a una asignacin correcta de los genes implicados en la etiologa
427
de una pauta conductual. Cuando se trata de

enfermedades mentales es necesario que la patologa se encuentre bien caracterizada clnicamente, lo que evita introducir sujetos de fenotipos similares pero cuyas alteraciones bioqumicas y moleculares sean muy diferentes. Esto
resulta complicado pero, en la actualidad, se van
solventando los problemas puesto que se ha
avanzado mucho en las normas para la correcta
caracterizacin desde el punto de vista de la
clnica. Ms difcil resulta definir correctamente
los fenotipos de otros comportamientos no
encuadrados en patologas mentales. Por citar
un ejemplo, el alcoholismo sera el desarrollo de
conductas asociadas al consumo excesivo de
alcohol, pero puede resultar complicado
determinar estrictamente el fenotipo alcohlico frente al no alcohlico en sociedades donde el consumo de alcohol es incluso una
norma social. Por citar un ejemplo an ms
complejo, si nos referimos a las tendencias sexuales, puede resultar complicado discernir
ciertos fenotipos de comportamiento homosexual. Segn se defina el fenotipo conductual de
un modo estricto o amplio, se pueden introducir
unos sujetos en el anlisis gentico o pueden
excluirse, con lo que dicho anlisis puede variar
de unos experimentos a otros y, con ello, los
resultados del modo de herencia de ese rasgo
pueden ser muy diferentes. Para otros muchos
rasgos de comportamiento humano con un
amplio espectro de fenotipos resulta extremadamente complicado establecer su control
gentico. Fijmonos en la inteligencia, la personalidad, las emociones, etc., todas ellas caractersticas difciles de definir de manera objetiva, difciles de someter a medidas y con
fuertes (pero difciles de identificar y medir)
contribuciones mediaombientales. Se estn
realizando numerosos esfuerzos para definir
nuevas estrategias de anlisis gentico, en
combinacin con las ya existentes, y a ello nos
referiremos al final del captulo.
Pero centrndonos en las metodologas generales para el estudio gentico de comportamiento, se distinguen tres grandes grupos: los
mtodos comparativos, los mtodos selectivos y
los mtodos de anlisis de los efectos de genes
nicos sobre un rasgo de comportamiento.
428
GENTICA
2.1. EL MTODO COMPARATIVO
Este tipo de aproximacin metodolgica

consiste en analizar pautas de comportamiento
en cepas de la misma especie o en especies
estrechamente emparentadas, enfrentadas a un
mismo ambiente: cualquier diferencia en el
comportamiento puede atribuirse a diferencias
en el genotipo. En la especie humana, los
estudios con gemelos (que se han visto ya en el
captulo dedicado a los caracteres cuantitativos)
y los estudios comparativos de rasgos de
comportamiento entre grupos siguen bsicamente este mtodo, pero con las particularidades inherentes a los trabajos con nuestra especie. Ms adelante en este captulo veremos
ejemplos concretos de la aplicacin de esta
metodologa al anlisis de rasgos de comportamiento en nuestra especie, pero quiz los
ejemplos paradigmticos de este mtodo son los
estudios en ratones sobre preferencias por el
alcohol y las pruebas en campo abierto para
analizar su comportamiento exploratorio y
emocional.
En el primero de ellos se utilizaron cepas
consanguneas de ratones (C57BL, C3H/2,
BALB/c y A/3) y se evalu la ingesta de alcohol
frente a la de agua durante un periodo de varias
semanas, midindose el consumo diario.
Los porcentajes de consumo alcohlico se
muestran en la tabla 32.1. El anlisis estadstico

de los datos demostraba que las cepas C57BL y
C3H/2 mostraban un consumo de alcohol
significativamente mayor que el de las otras dos
cepas. Teniendo en cuenta que el ambiente era
igual para todas las cepas la conclusin era que
las diferencias encontradas podan ser atribuidas
a diferencias genotpicas. Sin embargo, el
anlisis de las variantes genticas encontradas
para las enzimas implicadas en el metabolismo
del alcohol en estas cepas (alcohol
deshidrogenasa y acetaldehdo deshidrogenasa)
no ha evidenciado una clara asociacin entre
alguna de dichas variantes y los diferentes
consumos alcohlicos, pudiendo residir tales
diferencias en otros genes hasta ahora
desconocidos, aunque parece que pudieran estar
en relacin con los diferentes efectos
neurolgicos del alcohol en estas cepas. Esto
pone de manifiesto la dificultad de encontrar el
sustrato gentico subyacente a un carcter de
comportamiento, aun cuando se evidencie la
naturaleza gentica del carcter en cuestin.
Las pruebas en campo abierto sirven para
comparar el comportamiento exploratorio y
emocional de los ratones, pudiendo distinguirse
diferencias significativas de comportamiento
entre las distintas cepas. El carcter exploratorio
(por
contraposicin
a
baja
acti
Tabla 32.1. Ingesta de alcohol en ratones
vidad) se asocia a una escasa conducta emocional y viceversa. El modo de medir estas
pautas de comportamiento consiste en contar los
movimientos en un suelo de cuadrculas, para
cuantificar el carcter exploratorio, y contar el
nmero de micciones y defecaciones, como
ndices de su conducta emocional (un ratn es
muy emocional si realiza gran nmero de
micciones y defecaciones). De este modo se
distinguen cepas con intensos movimientos
exploratorios y poco emocionales (C57BL)
frente a cepas con escasas actividades
exploratorias y muy emocionales (BALB/c). La
cepa BALB/c es albina, hornocigtica recesiva
para el color del pelaje (cc), mientras que la
C57BL presenta pelaje normal, siendo
homocigtica dominante (CC). El anlisis del
comportamiento en los descendientes de los
cruzamientos entre ambas cepas y de los
posteriores cruces entre ratones de la F,, con la
consiguiente segregacin de ratones albinos en
la F,, ha puesto de manifiesto que los ratones
albinos se comportan como la lnea progenitora
BALB/c mientras que los ratones pigmentados
siguen un comportamiento similar a la lnea
progenitora pigmentada C57BL, indicando que
el gen del albinismo afecta al comportamiento
de los ratones. Las pruebas de heredabilidad indican que el gen del albinismo justifica un 12 %
de la varianza gentica de la actividad
exploratoria y un 26 % de la varianza de la
capacidad emocional, lo que refleja que este
locus es un componente importante, pero no
nico, de estas caractersticas del comportamiento en ratones, que estarn bajo un control
polignico.
La implicacin del gen del albinismo en estas pautas de comportamiento reside en su
afectacin a la pigmentacin de los ojos y, por
tanto, a la visin. La falta de visin en los ratones albinos explica su baja actividad exploratoria y su alta emotividad. Como corroboracin de
ese hecho, cuando ambas cepas se colocaban en
experimentos a campo abierto con luz roja (que
dificulta la visin de los ratones aunque estn
pigmentados) se comportaban de un modo
similar, poco exploratorio y altamente emotivo.
429
2.2.EL MTODO DE SELECCIN
Este procedimiento consistira en separar,

mediante cruzamientos controlados en una poblacin genticamente heterognea, los extremos de un carcter de comportamiento variable.
La premisa es que todo carcter susceptible de
ser seleccionado estara bajo control gentico y
si la pauta de comportamiento seleccionada se
transmite a la descendencia o a otras
poblaciones de la especie, mediante cruzamientos, pueden llegar a establecerse patrones
de herencia.
El ejemplo clsico de esta aproximacin
experimental son los laberintos de aprendizaje.
Como ya se ha indicado, los primeros estudios
genticos de comportamiento en el siglo xx se
llevaron a cabo, siguiendo esta aproximacin
experimental, partiendo de 82 ratas heterocigticas en las que se cuantific su capacidad
para obtener alimento al final de un laberinto en
T, del que se muestra un esquema representativo
en la figura 32.1. Cuando una rata se enfrenta
por primera vez a este tipo de laberinto va
explorando todos sus ramales hasta desembocar
en el final, donde se encuentra el alimento. Al
repetir sucesivas veces la prueba, las ratas
aprenden a evitar los callejones sin salida,
Fig. 32.1. Laberinto en T utilizado en estudios

de comportamiento con ratas.
430
GENTICA
Fig. 32.2. Seleccin de los lneas de ratas, listas

y torpes, de acuerdo con sus errores de aprendizaje
en la superacin de un laberinto.
de manera que se dirigen hacia el final cometiendo cada vez un nmero menor de errores.
Mediante estas primeras pruebas se seleccionaron 9 parejas de ratas listas (las que haban
aprendido ms rpido y cometan menos errores
en el laberinto) y otras 9 parejas de ratas
torpes, continundose la seleccin a lo largo
de varias generaciones de cruzamientos
controlados (listas x listas, por un lado, y torpes
x torpes, por otro). Despus de 18 generaciones
de seleccin se obtuvieron dos lneas (ratas
listas y ratas torpes) significativamente
diferentes en relacin con su capacidad de
aprender a pasar sin errores por el laberinto (fig.
32.2); incluso despus de slo 8 generaciones se
evidenciaba esta delimitacin, de manera que
las ratas ms torpes de la lnea de las listas se
comportaban mejor en el laberinto que cualquier
rata lista que perteneciera a la lnea de las
torpes. Posteriormente se analiz si Ia
superioridad para la bsqueda de alimento en
el laberinto llevaba aparejada una superioridad
en otras pautas de comportamiento que estaran
integradas en el rasgo general de ratas ms
inteligentes pero, de modo sorprendente, las
ratas listas en el laberinto eran inferiores en
sus respuestas de huida frente al agua y, en las
pruebas en campo abierto, se mostraban ms
emocionales y con menor capacidad exploratoria que las ratas torpes del laberinto.
Ello sirve, adems, de demostracin experi

mental de la cautela (incluso la inutilidad,
cuando no la aberracin) en la generalizacin de
conclusiones acerca de mayor o menor inteligencia dndole el sentido de organismos superiores o inferiores a otros de su misma
especie, y mucho ms en lo que se refiere a estudios de comportamiento en la especie humana.
Tambin mediante mtodos de seleccin se
ha investigado acerca del control gentico de las
taxias, movimientos de locomocin hacia
(positiva) o en contra (negativa) de un estimulo
medioambiental (luz, agua, sustancias qumicas,
gravedad, soporte slido, calor, etc.). Un
ejemplo caracterstico de estos anlisis viene
dado por las investigaciones del grupo de J.
Hirsch en relacin con la geotaxia en Drosophila (respuesta positiva o negativa frente a la
gravedad). El diseo experimental consisti en
un laberinto vertical, similar a lo esquematizado
en la figura 32.3, por el que se desplazan las
moscas hacia la comida, pudiendo tomar
decisiones en el sentido de dirigirse hacia arriba
o hacia abajo de manera que. de acuerdo con el
conjunto de decisiones en uno y otro sentido, se
recogern en los diferentes tubos, cada uno de
los cuales lleva asignado un valor de respuesta
geotxica.
Se realizaron cruzamientos controlados entre moscas con una fuerte geotaxia positiva y,
del mismo modo, entre moscas con el mximo
valor de geotaxia negativa y, despus de numerosas generaciones de seleccin, se llegaron a
establecer dos cepas que diferan significativamente en su respuesta geotctica media (- 6 para
la cepa con geotaxia negativa y + 4 para la cepa
con geotaxia positiva) (fig. 32.4). Las
fluctuaciones encontradas dentro de cada lnea
de seleccin (aunque se continu la experimentacin hasta alcanzar ms de 500 generaciones) parecan poner de manifiesto un patrn
de herencia controlado por varios genes y, para
corroborar este supuesto, a partir de cruzamientos entre machos de ambas lneas y hembras marcadoras (que presentan una mutacin
dominante en cada uno de sus cromosomas) se
puso de manifiesto la contribucin de genes localizados en los cromosomas X. 2 y 3 en la expresin de esta pauta de comportamiento.
Fig. 32.3. Tipo de laberinto utilizado en estudios de geotaxia en Drosophila.
Fig. 32.4. Seleccin de dos lneas de Drosophila,

con geotaxia positiva y negativa respectivamente,
mediante cruzamientos controlados a lo largo
de muchas generaciones.
431
432
2.3.
GENTICA
EFECTOS DE GENES NICO

UNA PAUTA DE COMPORTAMIENTO
Con esta metodologa, muy utilizada en la

actualidad, se aslan (de modo espontneo o inducido) mutantes de comportamiento (en organismos con genotipos relativamente constantes)
y se realizan estudios familiares y anlisis de
ligamiento, incluyendo el empleo de los mtodos de la tecnologa del ADN recombinante,
hasta llegar al aislamiento, clonacin y caracterizacin de los genes implicados y al anlisis
molecular de las mutaciones desencadenantes
de las patologas de comportamiento. Esta metodologa es la idnea cuando se trata de analizar un rasgo aislado de comportamiento bien
definido cuya herencia est controlada por un
gen pero, en general, las pautas de comportamiento se ajustan a modelos de herencia polignica y sus alteraciones podran considerarse
como enfermedades complejas. An as, puede
resultar til para evaluar la contribucin de un
determinado gen a una pauta compleja, incluso
puede definirse su importancia en la misma,
pudindose determinar, incluso, si contribuye de
un modo aditivo a crear el fenotipo (modelo
polignico aditivo), si se trata de un gen principal en su contribucin al fenotipo o un gen secundario (modelo polignico complejo), etc.
Un ejemplo paradigmtico de este tipo de
anlisis fue el llevado a cabo para determinar las
bases genticas del comportamiento higinico
(versus no higinico) de las abejas. Las larvas
de las abejas son susceptibles a lainfeccin por
la bacteria Bacillus larvae que produce la peste
de las abejas. Esta enfermedad puede ser
atajada si las abejas obreras presentan un
comportamiento higinico, consistente en abrir
las celdillas que contienen larvas infectadas y
limpiarlas de los restos de dichas larvas. Por el
contrario, en aquellas colmenas cuyas obreras
no muestran un comportamiento higinico la
enfermedad se propaga rpidamente. El grupo
de W. Rothenbuhler analiz, mediante
cruzamientos, la base gentica subyacente a esta
elaborada
pauta
de
comportamiento,
estableciendo el nmero de genes implicados
y su modo de herencia. Tal como se
muestra en la figura 32.5, la experimentacin
parti del cruzamiento entre reinas de una lnea

higinica (Brown) y znganos de una lnea no
higinica (Van Scoy). La Fi mostr, en sus
obreras, un comportamiento no higinico, lo
que indicaba la dominancia de esa caracterstica
frente a su contrapartida higinica. No
obstante, al realizar el retrocruzamiento de los
znganos de la F, con reinas higinicas (de la
generacin parental), en la descendencia (F,)
aparecan las correspondientes clases no higinicas e higinicas (que deberan ser las
nicas existentes si se tratase de un modo de
herencia simple mendeliana; un solo gen con
dos alternativas allicas: no higinico > higinico) pero adems se encontraban otras dos
clases fenotpicas: abejas capaces de abrir las
celdillas, pero que no limpiaban, y abejas que
limpiaban celdillas que previamente hubieran
sido destapadas, siendo ellas incapaces de
abrirlas. La existencia de esas cuatro clases
fenotpicas en proporciones equivalentes se
explicaba con un modelo de herencia en el que
intervenan dos genes, uno que controlaba la
apertura de las celdillas (U: no abrir > u: abrir)
y otro que ejerca su accin sobre la limpieza de
las celdillas (R: no limpiar > r: limpiar). Como
puede observarse, para ambas parcelas de esta
pauta de comportamiento los alelos no
higinicos son los dominantes y, de ah, la homogeneidad en la F1.
Tambin en bacterias flageladas se han aislado y caracterizado los genes controladores del
comportamiento quimiotctico, mediante este
procedimiento. Se trata de un escaso nmero de
genes, cuyos productos proteicos reciben las
seales del exterior celular, generando las
respuestas de movimientos flagelares diferentes
a travs de cascadas de fosforilaciones
proteicas, que componen un sistema de transduccin de seal hasta la base del flagelo. Las
bacterias flageladas presentan dos tipos de movimientos quimiotcticos: las marchas y los
tumbos. En el primer caso se trata de movimientos suaves generados por rotacin flagelar
en sentido contrario a las agujas del reloj, que
originan la propulsin de la bacteria en una direccin determinada. Los tumbos, por el contrario, son movimientos de menor duracin que
se producen por movimientos flagelares en
433
Fig. 32.5. Cruzamientos que explican el modo de herencia del comportamiento higinico en las abejas.
el sentido de las agujas del reloj, lo que origina

un cambio brusco en la direccin del movimiento bacteriano. En presencia de una sustancia atrayente para la bacteria el movimiento
predominante es la marcha (hacia la sustancia)
mientras que ante una sustancia repelente (o
simplemente en ausencia de gradientes qumicos de sustancias atrayentes) predominan los
tumbos y la bacteria presenta movimientos ms
anrquicos. Como se resume en la figura 32.6,
se ha demostrado que en presencia de una
sustancia repelente se origina una cascada de
fosforilaciones, iniciada a partir de un cambio
conformacional en un quimiorreceptor transmembrana (por unin o separacin de la molcula sensora correspondiente). El producto
del gen CheA (unido a otra protena CheW) se

encuentra interactuando con el dominio citoplasmtico del quimiorreceptor. El cambio
conformacional de ste desencadena la fosforilacin de CheA (CheA-P) que, a su vez, provoca la fosforilacin del otro elemento de la cascada de transduccion de seal (CheY) que, en su
forma fosforilada, interacta con la base del
flagelo provocando su rotacin en el sentido de
las agujas del reloj. Para la marcha, esta cascada
de fosforilaciones se invierte, se disminuye la
fosforilacin de CheA, lo que provoca la
desfosforilacin de CheY (ayudada tambin por
la accin de la protena CheZ) que origina la
inversin del sentido de la rotacin del flagelo.
434
GENTICA
Fig. 32.6. Quimiotaxia en bacterias.
Del mismo modo, se han inducido y caracterizado numerosas mutaciones de comportamiento en el nematodo Caenorhabditis elegans,
organismo extensamente utilizado en estudios
genticos, sobre todo de desarrollo, debido a su
relativa simplicidad, la facilidad de induccin
de mutaciones y de deteccin de las mismas, la
existencia
de
hermafroditismo
y
la
disponibilidad de cruzamientos genticos (entre
hermafroditas y machos). Adems, el cuerpo del
gusano es transparente con lo que se visualizan
fcilmente sus estructuras, lo cual es idneo
para el seguimiento de mutaciones de
muchos tipos (morfolgicas, de motilidad, etc.).
Desde la dcada de los sesenta, numerosos
grupos de investigacin, entre los que ha
destacado el grupo de S. Brenner, han diseccionado la biologa de este organismo, desde

los aspectos morfolgicos, citolgicos, genmicos, de desarrollo, etc., constituyendo en la
actualidad una herramienta muy importante en
diversas parcelas de la investigacin gentica,
incluida la gentica del comportamiento. El
sistema nervioso de este organismo es muy
sencillo y est perfectamente caracterizado con
lo que es posible inducir mutaciones de comportamiento y correlacionarlas con defectos
anatmicos y bioqumicos del sistema nervioso.
De este modo se han analizado numerosos
mutantes de comportamiento (quimiotcticos,
termotcticos, del aparato locomotor, alimentarios, etc.), conocindose muchos de los genes
implicados, que se distribuyen en los seis grupos de ligamiento que constituyen el nmero
haploide de cromosomas de la especie.
Tambin en ratones se conocen numerosos
genes concretos que alteran las pautas de comportamiento, entre los que destaca, incluso por
motivos histricos, el mutante danzarn, que
se describi en China hace ms de 2.000 aos.
El fenotipo danzarn se produce por homocigosis recesiva para el alelo mutante y su defecto
molecular consiste en la degeneracin del odo
interno que origina sordera y movimientos
incontrolados y en crculos, como si quisiera
alcanzar su propia cola. Muchas de las mutaciones de comportamiento en ratones son de
naturaleza neurolgica y, dado el alto grado de
conservacin de las funciones del sistema nervioso a lo largo de la escala evolutiva, el conocimiento de los defectos moleculares subyacentes puede ser de gran utilidad para la comprensin de enfermedades neurolgicas de la
especie humana.
3. Gentica del comportamiento
en Drosophila
Drosophila es un organismo ampliamente
utilizado en estudios de comportamiento, como
en tantas otras especialidades genticas, debido
al exhaustivo conocimiento gentico que se
tiene del mismo, a la facilidad de cultivo, su
idoneidad para la induccin y recogida de
mutaciones, la posibilidad de obtencin de
mosaicos, etc.
A comienzos del siglo xx, A. Sturtevant indic que la mutacin yellow (color amarillo del
cuerpo) afectaba, adems, a las preferencias de
apareamiento, de manera que los machos yellow
y los salvajes preferan aparearse con hembras
yellow, en situaciones de competencia con
hembras salvajes, mientras que las hembras
yellow y las salvajes preferan aparearse con
machos salvajes cuando stos se encontraban en
situaciones de competencia con machos yellow.
Estos comportamientos pudieron ser explicados
(en parte) al observarse que los machos
mutantes mostraban deficiencias en la
realizacin del cortejo, lo que condiciona-
435
ba sus cpulas cuando competan con machos

salvajes. Se desconocen, sin embargo, las razones por las que las hembras yellow son preferidas para los apareamientos por ambos tipos de
machos.
Desde entonces se han ido encontrando (de
modo espontneo o inducido) numerosos mutantes de comportamiento, habindose caracterizado, en muchos casos, sus patrones de herencia y el defecto gentico asociado a la mutacin. Dado que muchos mutantes de comportamiento son de tipo neurolgico, la determinacin del defecto molecular y el aislamiento de
los genes responsables han servido para la localizacin de genes humanos similares, con las
correspondientes repercusiones diagnsticas y
teraputicas en enfermedades humanas cuya
etiologa era desconocida. Como se resume en
la tabla 32.2, se han encontrado mutantes de
comportamiento de muchos tipos, desde los
clsicos de afectacin del aparato locomotor,
del comportamiento sexual, de respuesta al estrs, etc. Merece destacarse la existencia de
mutantes de aprendizaje, que han sido caracterizados ampliamente y algunos de ellos han suministrado informacin valiosa acerca de la
participacin de los nucletidos cclicos en aspectos del aprendizaje y la memoria, que pueden extrapolarse a otros organismos, incluida
nuestra especie.
Drosophila tiene la capacidad de aprendizaje
manteniendo una memoria de lo aprendido a
corto plazo. Este tipo de comportamiento se
instaura rpidamente y muestra un periodo de
retencin (de recuerdo) muy corto, que se cree
que es consecuencia del mantenimiento de la
excitacin de los circuitos neuronales implicados, durante un breve periodo de tiempo
despus de haber aprendido. Esto abri la posibilidad de estudiar una pauta de comportamiento compleja en un organismo simple, pudiendo inducirse y seleccionar mutantes con
defectos del aprendizaje y la memoria que
afectan, en la mayora de los casos, a un nico
gen, con lo que se puede rastrear y caracterizar
el defecto molecular asociado. La manera de
estudiar el aprendizaje de las moscas consiste en
ofrecerles estmulos olfatorios, uno de los
cuales se acompaa de una descarga elctrica,
436
GENTICA
Tabla 32.2. Mutantes de comportamiento en Drosophila
con lo que aprenden rpidamente a evitar el

olor asociado a la descarga y recuerdan
durante un corto periodo de tiempo esa
experiencia. De ese modo se pueden
seleccionar moscas mutantes que presenten
alguna alteracin en el aprendizaje. Entre los
mutantes encontrados, las mutaciones dunce
(zopenco), rutabaga (nabo) y turnip (bobo)
han servido para demostrar la conexin entre
al AMP cclico y el aprendizaje. El AMP
cclico se produce en el interior de muchos
tipos celulares, incluidas las clulas del
sistema nervioso, a partir de ATP y mediante
la enzima adenilato ciclasa (fig. 32.7) como
respuesta a estmulos externos. Es una
molcula activadora de proteinquinasas,
enzimas que fosforilan protenas, originando
una cascada de efectos metablicos
(transduccin de seal) que activan la expre-
sin gnica. Se ha determinado que el locus

rutabaga es el responsable de la produccin
de adenilato ciclasa, y su alelo mutante se
debe a una mutacin de cambio de sentido
que genera una enzima inactiva. La mutacin
turnip se origina en el locus que produce la
protena G que, unida a GTP, activa a la
adenilato ciclasa, mientras que la mutacin
dunce facilita la degradacin de AMPe, a
travs de su accin sobre la fosfodiesterasa.
4. Gentica del comportamiento humano
Las pautas de comportamiento se encuentran entre las caractersticas fenotpicas ms

complejas que pueden analizarse y esto es
an ms acusado cuando se trata del ser
humano.
437
Fig. 32.7. Ruta metablica del AMP cclico.
Como ya se adelant al comienzo del captulo,

existen mltiples razones, no slo de ndole
cientfica, sino tambin social y poltica, que
hacen de esta especialidad gentica una parcela
sumamente controvertida, en la que los resultados pueden ser malinterpretados y utilizados de
modo sensacionalista, e incluso con fines
espurios. Cindonos al mbito puramente
cientfico, en primer lugar, las caractersticas del
comportamiento humano son extremadamente
elaboradas y complejas, y se encuentran muy
influidas por factores ambientales, con lo que
tambin son muy complejas las patologas que
las afectan. No existe discusin cuando se trata
de establecer el papel de los genes en un
carcter que sigue un patrn de herencia mendeliano o que se asocia a anomalas cromosmicas. Sin embargo, muchas caractersticas del
comportamiento, aun no entrando en el mbito
de las patologas, no muestran ese tipo de herencia, existiendo una gradacin fenotpica que
hace ms difcil la realizacin de estudios
genticos (caracteres multifactoriales) y, en to-
dos los casos, al estar la expresin fenotpica

bajo la influencia de factores ambientales, resulta an ms difcil discernir la constitucin
gentica del carcter a partir del anlisis de los
fenotipos. Sumado a todo ello, por razones obvias, resulta impensable en nuestra especie la
utilizacin de muchas de las tcnicas habituales
para otros organismos, con lo que se han tenido
que desarrollar metodologas de anlisis
alternativas. Entre ellas destacan los estudios
genealgicos, los anlisis de concordancia y
discordancia con gemelos mono y dicigticos y
los estudios sobre adopciones. A partir de estos
anlisis se pueden realizar estimaciones de la
heredabilidad como primer paso para continuar
desentraando los componente hereditarios en
rasgos complejos de comportamiento (como por
ejemplo: las tendencias sexuales, el alcoholismo
o la inteligencia) y en enfermedades concretas
como la psicosis maniacodepresiva, la
esquizofrenia, etc.
Los estudios con gemelos han sido ampliamente utilizados para el anlisis de caractersti-
438
GENTICA
cas de comportamiento, aunque presentan

limitaciones. Si un carcter de comportamiento
presenta mayor concordancia en gemelos
monocigticos (MZ), que son genticamente
idnticos, que en dicigticos (DZ), que comparten slo la mitad de sus genes como cualquier pareja de hermanos, sera indicativo de la
heredabilidad del carcter en cuestin, pero
tambin es posible que la concordancia mayor
en MZ pueda tener tambin causas ambientales.
Por ejemplo, los gemelos MZ son del mismo
sexo, mientras los DZ pueden ser de sexo
distinto (50 % de los casos), lo que puede conllevar a diferencias en el ambiente (diferencias
en el trato por parte de sus familiares, educadores y amigos, diferencias en el modo de vestir,
etc.) que para ciertas caractersticas de comportamiento pueden resultar importantes. Al
utilizar parejas de gemelos en el anlisis de caracteres de comportamiento hay que tener en
cuenta estas circunstancias (no utilizar DZ de
sexo distinto, por ejemplo). Los gemelos MZ
separados desde el nacimiento son un material
idneo para estudios de comportamiento (mismo genotipo, distintos ambientes). La concordancia en stos para un rasgo de comportamiento apoya fuertemente su carcter gentico.
El nmero de estas parejas, afortunadamente
(pues siempre son consecuencia de guerras o
dramas familiares), no es muy grande, lo que
supone una limitacin para su utilizacin (conviene tener en cuenta que los estudios de comportamiento requieren una evaluacin estadstica de los datos).
Los estudios sobre adopcin resultan muy
sugestivos ya que es posible seguir una caracterstica o una patologa de comportamiento
desde distintas perspectivas. As, es posible
evaluar si una caracterstica de comportamiento
presente en la familia biolgica se encuentra en
los sujetos adoptados (gentica) o evaluar si una
caracterstica presente en los padres de adopcin
se manifiesta en los hijos adoptivos (ambiental).
Tambin es posible localizar individuos
adoptados con una determinada patologa o
rasgo de comportamiento y rastrear dicho
carcter en las familias biolgicas y adoptivas.
Las posibilidades de anlisis son muchas y las
nicas limitaciones son la falta de informacin

sobre los padres biolgicos (ms acusada en el
caso del progenitor masculino).
Con estas premisas, resulta lgico que uno de
los abordajes experimentales ms utilizados
haya sido desentraar la accin de genes nicos
sobre un rasgo de comportamiento, a partir del
estudio de enfermedades de herencia
mendeliana simple, generalmente recesiva, que
muestren entre sus sntomas alteraciones del
comportamiento. Principalmente se tratara de
aquellas que cursan con afectacin del sistema
nervioso y, en muchas de ellas, se ha llegado a
determinar el gen responsable y la va mediante
la cual se produce la alteracin conductual.
Uno de los casos mejor analizados ha sido el
de la enfermedad de Huntington (HD), a la que
nos hemos referido en varias ocasiones, en la
que las alteraciones de comportamiento (prdida
de control sobre las funciones motoras y de
coordinacin, cambios de personalidad, etc.) se
producen por los niveles altos de cido
quinolnico (neurotoxina) en el cerebro y se
asocian a la mutacin en el gen de la
hungtintina. Otro ejemplo sera el del sndrome
de Lesch-Nyhan donde la mutacin en el gen
que codifica a la enzima hipoxantin-fosforribosil transferasa (HPRT), implicada en el
metabolismo de los cidos nucleicos, es responsable (por la acumulacin de purinas y cido
rico) de los sntomas neurolgicos que
producen la caracterstica de comportamiento
consistente en la automutilacin compulsiva de
los pacientes.
Un caso interesante sera la asociacin de
ciertas pautas complejas y variables de comportamiento agresivo (desde violaciones hasta
apualamientos y piromana) y el defecto (ausencia) de actividad de la enzima monoaminooxidasa A (MAOA) encargada del metabolismo
de ciertos neurotransmisores, que se acumulan
produciendo alteraciones de comportamiento.
La porfiria, la enfermedad de Menkes, la
ataxia de Friedreich, el sndrome del X frgil, y
un largo etctera de enfermedades hereditarias
neurodegenerativas son otros tantos ejemplos de
enfermedades de comportamiento, en las que un
gen controla un carcter conductual.
De modo similar, se ha demostrado la asociacin entre anomalas cromosmicas y alteraciones del comportamiento, pero entre todas
destaca, por su controversia, la asociacin entre
varones XYY y el comportamiento antisocial
violento y peligroso. Los resultados de una
encuesta citogentica sobre 197 varones recluidos en instituciones penitenciarias escocesas
por delitos de la ndole indicada demostraron
que el 4,5 % de estos reclusos eran XYY, cifra
muy por encima de la frecuencia de varones
XYY en la poblacin normal (0,1 %). Esto
parecera indicar que algunas formas de comportamiento violento tendran una predisposicin gentica y, de hecho, ha sido utilizado
como argumento legal de defensa, sin xito,
Otros estudios han demostrado resultados discrepantes con los anteriores, poniendo de manifiesto que en el primer estudio poda existir un
error en la eleccin de la muestra control. As,
al introducir dentro del grupo control, XY,
nicamente a individuos altos (ms de 1,84 m),
para hacer las muestras ms comparativas (ya
que los XYY son de elevada estatura) y combinar otros parmetros educacionales, no parece
evidenciarse la asociacin genotpica a la criminalidad, sino ms bien la combinacin de una
elevada talla y un bajo cociente intelectual,
independientemente del cariotipo. Actualmente
estos estudios han sido abandonados, en parte
por el temor a las repercusiones sociales y a las
dificultades de los procedimientos metodolgicos.
Por otra parte, se han hecho importantes
contribuciones al conocimiento de las bases
genticas de enfermedades complejas que cursan con alteraciones graves del comportamiento,
como la esquizofrenia y las enfermedades
maniacodepresivas, entre otras. Los estudios de
gemelos y de adopcin parecen apoyar la
existencia de un componente gentico subyacente en la maniacodepresin. As, la concordancia es mayor entre MZ que entre DZ y en
sujetos adoptados existe una relacin entre su
padecimiento y el de sus padres biolgicos. Los
anlisis de ligamiento han resultado, hasta el
momento, infructuosos (e incluso discrepantes),
en el intento de localizar loci asociados. Las
causas pueden estar en la identificacin in-
439
correcta, en muchos casos, de los fenotipos y la

posible heterogeneidad gentica.
Algo similar cabe decir para la esquizofrenia, la principal causa de enfermedad mental
crnica, afectando al 1 % de la poblacin. Aparece en etapas tempranas de la vida adulta (alrededor de la adolescencia) y entre sus sntomas
destacan los cambios emocionales y de
personalidad con trastornos del pensamiento,
trastornos de la percepcin, que cursan con
alucinaciones, trastornos psicticos, con ideas
delirantes y alteraciones de la conducta (agresividad/ensimismamiento, segn las fases; alteraciones del movimiento, etc.). Junto a esta
forma severa, se encuentran los trastornos esquizoides (aproximadamente el 3 % de la poblacin), que seran equivalentes a manifestaciones leves de la conducta esquizofrnica, pareciendo que se trata de la misma enfermedad.
Los estudios de concordancia de gemelos revelan que sta es mayor para MZ que para DZ, indicando un componente gentico, del mismo
modo que ocurre con los estudios familiares
(tabla 32.3) y de adopcin. Se han propuesto
diversos modos de herencia (monohbrida,
dihbrida, polignica) y los anlisis de ligamiento han implicado a loci de varios cromosomas pero, hasta el momento, los resultados se
muestran conflictivos, no habindose determinado adems ninguna alteracin bioqumica
asociada a la enfermedad.
Por otro lado, debemos referirnos brevemente a las investigaciones tendentes a determinar la contribucin gentica en rasgos o pautas complejas de comportamiento. Las diferentes tendencias u orientaciones sexuales (heterosexualidad versus homosexualidad) constituyen un aspecto complejo del comportamiento
humano. Los estudios de gemelos y de adopcin
han determinado la contribucin gentica en el
carcter. En las distintas series analizadas, la
concordancia del carcter homosexual en
varones fue siempre mayor en MZ que en DZ y
hermanos,
habindose
establecido
unas
estimaciones de heredabilidad que oscilan entre
el 30 y el 70 % (segn las series), similares a las
obtenidas en estudios de homosexualidad en
mujeres. A rasgos generales, los datos existentes hasta el momento indican que la orienta-
440
GENTICA
Tabla 32.3. Resultados combinados de diversos estudios sobre la proporcin de parientes en primer grado de
individuos esquizofrnicos que muestran la misma enfermedad o un trastorno esquizoide
cin sexual es un carcter multifactorial, en el

que intervienen varios genes y factores medioambientales desconocidos, pudiendo intervenir incluso el ambiente prenatal.
El alcoholismo es un trastorno de la conducta que conlleva importantes problemas, no slo
para la salud del individuo, sino de ndole social
y familiar, por lo que est siendo objeto de numerosos estudios tendentes a desentraar la
contribucin gentica a la alteracin. Esto sera
un paso previo necesario para el establecimiento
de acciones teraputicas ulteriores ms efectivas
que contribuyan a la disminucin de este
problema social. Todos los estudios realizados
hasta el momento, tanto genealgicos como de
concordancia entre gemelos y de adopcin (tabla 32.4), evidencian la existencia de un componente gentico en la preferencia por el alcohol y
se han propuesto distintos modos de herencia.
Los intentos de asociar el trastorno con un alelo
de un gen que codifica una protena receptora de
neurotransmisores (D2) han dado resultados
contradictorios. As, mientras los estudios de ligamiento lo descartan, otros estudios encuentran
cierta correlacin entre este gen y el comportamiento alcohlico.
Finalmente, como rasgo paradigmtico de

complejidad del comportamiento humano, la
inteligencia ha sido objeto de numerosos y
controvertidos estudios dirigidos a determinar la
importancia de la contribucin gentica en esta
caracterstica fundamental del hombre.
La inteligencia se define como la capacidad de entender o comprender, incluyendo
entre sus rasgos caractersticos cualidades como
la capacidad para el razonamiento abstracto, el
pensamiento racional, la resolucin de
problemas, la expresin verbal, la creatividad,
etc. El primer problema al que se enfrenta
cualquier estudio gentico sobre ella es la manera de medir esas cualidades y ah radica
una de las principales objeciones a los anlisis
de herencia de este rasgo de comportamiento.
Alfred Binet, psiclogo francs de comienzos
del siglo xx, desarroll unas pruebas para medir
esas cualidades en base a la resolucin de tareas
por edades, que constituyeron lo que se
denomina un test de inteligencia que defina
una edad mental que al ser dividida por la cronolgica (y multiplicar por 100 para evitar los
decimales) daba lugar a un cociente o coefi-
Tabla 32.4. Resultados sobre alcoholismo en un estudio de adopcin
ciente intelectual (IQ) cuyo valor, para una

persona de edad mental igual a la cronolgica
(una persona de inteligencia normal), era 100.
Con modificaciones y adaptaciones, este tipo de
instrumento de medida es el que contina
usndose en la actualidad.
Nunca se ha podido comprobar que el IQ
realmente mida las cualidades esenciales de la
inteligencia humana y sus detractores indican
que los tests de inteligencia slo miden la capacidad para resolver tests de inteligencia. Sin
caer en extremismos, se puede decir que los
valores de IQ que se obtienen mediante tests de
inteligencia pueden medir ciertas cualidades
de la inteligencia y tener elementos heredables
de importancia. Los estudios de gemelos han
demostrado valores de concordancia muy altos
en MZ (tanto criados juntos como por separado)
en relacin con las restantes categoras de
hermanos, habindose establecido valores de
heredabilidad entre 0,4 y 0,6 para el IQ (segn
los estudios) (vase el captulo dedicado a la
herencia de los caracteres complejos), lo que
significa que entre el 40 % y el 60 % de la
variabilidad observada para los IQ (la
inteligencia, si se quiere) en las poblaciones es
debida a causas genticas, mientras el resto se
debe a variaciones ambientales. Con ello se
comprende que es absolutamente incorrecto
hacer deducciones tales como que se hereda el
40 % de la inteligencia... al referirse a un
individuo, y mucho menos sirven las estimaciones de heredabilidad como criterios comparativos para definir diferencias genticas entre
grupos (por ejemplo entre razas). Lo que s
puede inferirse es que tanto los factores genticos como los ambientales contribuyen a la inteligencia humana.
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Captulo
33
Gentica de las poblaciones

1.
La Variacin Gentica
2.
Estimaciones de la Variacin Gentica
3.
Conservacin de las Frecuencias Gnicas: el Equilibrio

Hardy-Weinberg
446
GENTICA
La gentica de poblaciones es la rama de la

gentica que analiza la herencia en grupos de
individuos, es decir, poblaciones de una especie
determinada. Una poblacin se define como una
comunidad de individuos ligados entre ellos por
lazos de apareamiento y parentesco. Un
concepto ms amplio lo representa la gentica
evolutiva, estrechamente emparentada con la de
poblaciones, en la que se analiza la herencia en
cualquier poblacin, sea o no de la misma
especie.
La teora de la evolucin de Darwin (18091882) postula que la evolucin de una especie
es el resultado de la diferente tasa de
supervivencia y reproduccin de los distintos
tipos de individuos. Adaptando los postulados
de Darwin a la teora moderna, la evolucin supondra un cambio en la constitucin gentica
de las poblaciones.
La moderna teora de la evolucin se basa
en tres principios fundamentales: a) Entre los
individuos de cualquier poblacin existen variaciones en la morfologa, fisiologa y conducta; esta variacin intra e interpoblacional se
origina por la existencia de varios alelos en los
diferentes loci gnicos. b) Las variaciones sobre
las que acta la seleccin se heredan segn las
leyes de Mendel. c) Algunas formas tienen ms
xito que otras en sobrevivir y reproducirse en
un medio ambiente determinado. La seleccin
natural es la causa fundamental de la evolucin
de las especies.
En definitiva, debido a la seleccin natural
las frecuencias de los distintos tipos dentro de
una especie cambiarn con el tiempo, pero la
seleccin natural producir estos cambios en las
poblaciones slo si hay variantes que seleccionar.
El objetivo de la Gentica de poblaciones es
conocer la composicin de una poblacin y las
fuerzas que determinan el cambio en su
composicin.
1. La variacin gentica
Para que exista evolucin es necesario que

exista variacin, es decir la seleccin natural
cambiar las frecuencias de los distintos tipos
dentro de una especie slo si hay variantes que

seleccionar. Si una poblacin es homognea,
por ejemplo homocigota para un alelo en un locus determinado, no es posible cambiar la
composicin de la poblacin para ese locus al
no existir una alternativa que pueda ser ms
ventajosa. La variacin intra e interpoblacional
se origina por la existencia de varios alelos en
los diferentes loci gnicos.
El genetista de poblaciones puede observar
los fenotipos directamente, pero no los genes ni
los genotipos. Por ello es necesario realizar en
primer lugar una descripcin de la variacin a
nivel fenotpico, y despus interpretarla en
trminos genticos (genes y genotipos).
Las poblaciones naturales muestran una
gran cantidad de variacin que se manifiesta a
muy diferentes niveles, y que en definitiva origina polimorfismos (del griego = muchas formas). Estos polimorfismos pueden ser morfolgicos afectando a gran cantidad de rasgos; por
ejemplo la especie humana es polimrfica para
muchos caracteres como la coloracin del pelo,
de los ojos, de la piel, estatura, forma de la
nariz, etc. Los naturalistas han descrito, a lo
largo de los aos, la gran variabilidad existente
en las poblaciones de distintos organismos, por
ejemplo, respecto a los patrones de coloracin
en pjaros, mariposas, caracoles, plantas con
flores, etc. (fig. 33.1). Los genetistas han puesto
de manifiesto que en gran parte de esta variacin subyace un componente gentico, aunque
en ocasiones es muy complejo y, por tanto, difcil de utilizar en estudios poblacionales.
Existen adems polimorfismos inmunolgicos (que pudieron ponerse de manifiesto por
primera vez cuando se descubrieron los grupos
sanguneos), que son debidos a las distintas especificidades antignicas determinadas por diversos loci. Las bases genticas sencillas de algunos de ellos los hacen muy adecuados para
los estudios poblacionales como veremos ms
adelante. Estos polimorfismos alcanzan su mxima complejidad en los sistemas de histocompatibilidad (Sistema HLA en humanos) en los
que con excepcin de los gemelos idnticos,
prcticamente cada individuo presenta un haplotipo particular.
Tal como analizamos en el captulo dedica-
447
Fig. 33.1. Coloracin de la flor en Narcissus.
do a las variaciones cromosmicas, existen en

las poblaciones naturales abundantes polimorfismos cromosmicos (fig. 33.2), de manera que
en una poblacin pueden mantenerse simultneamente varias constituciones cromosmicas. Por ejemplo, en la especie humana se
han detectado pequeas inversiones en determinados cromosomas que no afectan a los individuos portadores y que son frecuentes en la
poblacin.
El desarrollo de las tcnicas de electroforesis de protenas puso de manifiesto que existe
Fig. 33.2. a) Polimorfismo del cromosoma Y humano. b) Polimorfismo para la heterocromatina

pericentromrica en varios cromosomas humanos.
448
GENTICA
Fig. 33.3. Polimorfismo intraespecfico de los loci de la isoenzima esterasa-1 (E-]) y esterasa-2 (E-2)
en varias especies de Reseda L.
mucha ms variacin gentica (polimorfismo de

protenas) que la puesta de manifiesto por la
observacin directa de los organismos en la naturaleza. La utilidad de esta tcnica se basa en
las propiedades fsicas de las protenas, que
pueden cambiar cuando hay sustituciones de
aminocidos. Es necesario recordar aqu que
existen cinco aminocidos: arginina, asprtico,
glutmico, histidina y lisina, que confieren carga neta a la protena, adems los cambios entre
aminocidos no cargados pueden afectar al
plegamiento del polipptido. Estos cambios
conformacionales o de carga de la protenas
afectarn a su movilidad electrofortica, permitiendo deducir directamente el genotipo del
individuo para el locus que codifica la protena,
y esto supone una aproximacin muy directa,
pues la secuencia de aminocidos de un
polipptido es un reflejo de la secuencia de codones en el ADN que lo codifica (fig. 33.3).
Finalmente, los anlisis directos del ADN
permiten estudiar las variaciones en las secuencias de ADN y ponen de manifiesto gran nmero de polimorfismos de ADN. A lo largo de diferentes captulos hemos visto que existen secuencias de ADN especialmente polimorfas. La
utilizacin de enzimas de restriccin puso de
manifiesto la existencia de RFLPs (polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restriccin), es decir, polimorfismos de ADN origina-
dos por cambios en la secuencia diana de enzimas de restriccin. Adems, las secuencias repetidas en los genomas tienden a originar variaciones en el nmero de repeticiones. Entre estos
polimorfismos podemos sealar las VNTRs (repeticiones en tndem en nmero variable), Minisatlites y Microsatlites (fig. 33.4). Por ltimo,
la secuenciacin del genoma de diversos
organismos ha puesto de manifiesto abundantes
polimorfismos de un nico nucletido (SNPs),
de los que en el genoma humano ya hay descritos ms de dos millones.
La utilizacin de estos polimorfismos permite establecer los patrones de variacin en los
poblaciones naturales, hacer estimaciones de la
proporcin de loci gnicos que son polimrficos
en una especie determinada y, por tanto,
susceptibles de cambiar. Ello permite, adems,
analizar los mecanismos e intensidad de los
procesos que producen los cambios en las frecuencias de los distintos genotipos y hacer predicciones sobre la futura composicin de la poblacin segn la intensidad de las fuerzas que
acten sobre ella.
2.
Estimaciones de la variacin gentica
Una medida fundamental en la gentica de

poblaciones es la frecuencia en la que los ale-
449
Fig. 33.4. Polimorfismo en la secuencia de un microsatlite humano.
los aparecen en un locus gnito de inters. Una

vez conocido este parmetro podremos realizar
comparaciones entre diferentes poblaciones o
analizar la poblacin a lo largo del tiempo para
observar sus cambios. Para conocer la
constitucin gentica de una poblacin,
previamente debemos conocer la variacin que
existe en dicha poblacin para los caracteres
analizados, es decir, en primer lugar tendremos
que reconocer los diferentes fenotipos presentes
en la poblacin para despus traducirlo (si se
conocen sus bases genticas) en trminos
genotpicos.
Supongamos que queremos analizar la composicin de la poblacin espaola respecto al
grupo sanguneo MN. Para ello determinamos el
grupo sanguneo en 1.000 voluntarios utilizando
los antisueros correspondientes (tabla 33.1).
En la columna 3 de la tabla hemos realizado
la descripcin de la variacin fenotpica
observada en la poblacin para ese carcter,
determinando la frecuencia de cada fenotipo
en la muestra analizada. El paso siguiente ser

la traduccin de estos fenotipos en trminos
genticos. Las bases genticas de estos grupos
sanguneos fueron establecidas por Landsteiner
y Levine en 1927, de manera que los fenotipos
estn determinados por los alelos codo
minantes LM y LN. La exacta correspondencia
existente entre genotipo y fenotipo, sin que las
relaciones de dominancia impidan la distincin
entre homocigotos dominantes y heterocigotos,
ha hecho de estos grupos un instrumento
preferido en la gentica de poblaciones. De
acuerdo con estas bases genticas las
frecuencias genotpicas coinciden con las fenotpicas. Por tanto, podemos conocer la frecuencia de cada uno de los alelos en la poblacin objeto de estudio.
Para calcular la frecuencia de alelo LM en la
poblacin tendremos en cuenta que cada individuo homocigoto LMLM (fenotipo M) presentar dos alelos LM mientras que los heterocigotos LM LN presentarn slo uno , y tendremos
Tabla 33.1
450
GENTICA
que dividirlos por el total de alelos presentes en

la poblacin 2 X 1.000:
p = Frecuencia de LM = (302 X 2) +
+ (496) / 1.000 x 2 = 0,55
o bien puede partirse de las frecuencias genotpicas observadas
p = Frecuencia de LM = 0,302 +'h 0,496 = 0,55
De la misma manera puede calcularse la
frecuencia del alelo LN:
q = Frecuencia de LN = (202 X 2) +
+ (496) / 1.000 x 2 = 0,45
gotos que deberemos tener en cuanta en los

clculos:
p (frecuencia del haplotipo MS) = frecuencia
de homocigotos (MS/MS) + 1/2 frecuencia de
heterocigotos MS/NS + 1/2 frecuencia de hete
rocigotos MS/Ms +'h frecuencia de dobles he
terocigotos MS/Ns.
En el caso del clculo de las frecuencias de
haplotipos es importante tener en cuenta, no
obstante, la fraccin de recombinacin entre los
genes, es decir la posibilidad de que exista
recombinacin entre los dos marcadores analizados. En el caso que hemos analizado la frecuencia de recombinacin entre los loci M y S
es prcticamente cero (es decir, estn tan prximos que existe ligamiento absoluto).
o bien,
q = Frecuencia de L' = 0,202 +'/z 0,496 = 0,45
En definitiva, la frecuencia de ambos alelos
en la poblacin ser 1, es decir (p + q) = 1, donde p y q representan las frecuencias gnicas,
allicas o gamticas.
Igualmente podemos describir la variacin
en trminos de varios loci, en vez de uno slo,
es decir calcularamos las frecuencias gamticas
de mltiples loci simultneamente, tambin
conocidas como frecuencias de haplotipos. Para
calcular las frecuencias de haplotipos podemos
continuar con el ejemplo de los grupos
sanguneos MN. Con posterioridad al
descubrimiento de Landsteiner y Levine, en
1947, Race y Sanger establecieron que el sistema S/s, descubierto por Walsh y Montgomery
en ese mismo ao, estaba estrechamente ligado
al grupo MN. El locus S (factor secretor)
determinaba que las protenas M y N se
expresaran en la saliva, de manera que los individuos pertenecientes al grupo M podran ser
S o s (MS o Ms), al igual que los N (NS o Ns).
Podramos hacer un clculo de la frecuencia
de
la
combinacin
de los alelos MS
(haplotipo) en la poblacin; para ello procederemos como antes pero tendremos presente que
se generan un mayor nmero de heteroci-
Una medida de la variacin gentica de una

poblacin es la proporcin de loci polimrficos
(P), es decir, la cantidad de polimorfismos. Este
parmetro es til en algunos casos pero el
nmero de loci variables que observaremos depender en gran medida del nmero de individuos que analicemos, adems considera que un
loci con dos alelos es tan polimrfico como uno
que presente mltiples alelos, por lo que esta
medida es arbitraria y subjetiva a pesar del
desarrollo de criterios restrictivos para considerar un locus polimrfico.
La estimacin ms utilizada de la variacin
gentica es la heterocigosidad (H), es decir, la
frecuencia de heterocigotos en la poblacin,
pues resulta mucho ms fiable y objetiva que la
anterior. Para calcularla se analiza la frecuencia
de heterocigotos en diferentes loci y despus se
obtiene la media. Si slo existe un alelo en un
locus determinado, todos los individuos de la
poblacin sern homocigotos y, por tanto, la
heterocigosidad ser cero. La heterocigosidad
ser mayor cuanto ms alelos existan en cada
loci y stos tengan frecuencias parecidas.
Los clculos de la heterocigosidad se desarrollan en la tabla 33.2, suponiendo que hemos
analizado 4 loci en cien individuos (para estimaciones vlidas de heterocigosidad es necesario analizar muchos ms loci).
451
Tabla 33.2
3.
Conservacin de las frecuencias

gnitas: el equilibrio HardyWeinberg
Los principios de Mendel consideran la herencia a nivel de individuos pero no de poblaciones. Supongamos el cruzamiento de dos individuos heterocigotos para un locus (Aa): de
acuerdo con Mendel en la siguiente generacin
aparecer una proporcin fenotpica 3 [dominante]: 1[recesivo]. De una forma intuitiva podra esperarse que en la poblacin los individuos dominantes fueran ms frecuentes (3) que
los recesivos (1). Sin embargo, estas proporciones se cumplen a nivel de cruzamientos individuales pero al considerar la poblacin en su
totalidad en una generacin, adems del cruzamiento indicado arriba, ocurren otros muchos
cruzamientos entre individuos con otras combinaciones genotpicas (homocigotos AA, aa),
de manera que en la poblacin ocurre como si
todos los gametos posibles originados en una
generacin se mezclaran al azar y originaran
todas las combinaciones posibles.
Hardy y Weinberg en 1908 argumentaron
matemticamente el comportamiento de las
frecuencias de los genes en las poblaciones en la
que se conoce como Ley del equilibrio de
Hardy-Weinberg, demostrando que la herencia
en s misma no produce cambios en las frecuencias allicas ni genotpicas. Bsicamente,
esta ley establece que en una poblacin idealizada, en la que no actan fuerzas para el cambio, las frecuencias gnicas y genotpicas se
mantienen constantes (en equilibrio) de generacin en generacin. Adems, si los apareamientos son al azar (la probabilidad de
apareamiento entre individuos es independiente
de su constitucin gentica) las frecuencias
genotpicas estn en relacin con las frecuencias

gnicas por una simple frmula: (p + q)2.
Indudablemente
la
frecuencia
de
los
apareamientos entre los distintos genotipos
depender de la frecuencia del genotipo en
cuestin.
Supongamos el cruzamiento anteriormente
indicado. Si las frecuencias de los alelos en los
gametos son:
Frecuencia de A = p; Frecuencia de a = q;
p+q=1
Cruzamiento Aa x Aa
Las frecuencias de los cigotos formados

para dar lugar a la primera generacin sern:
AA (p2) + Aa (2pq) + aa (q2)
y la frecuencia de los alelos A y a en esta generacin ser:
Frecuencia de A = p, = p2 (frecuencia total
del genotipo A) + pq ('/z de la frecuencia del
genotipo Aa) = p2 + pq = p (p + q) = p.
Lo mismo puede deducirse para q (frecuencia de a).
Por convencin las frecuencias en el equilibrio se denominan: p , q
Las frecuencias genotpicas de equilibrio se
alcanzan en una generacin de apareamiento al
azar y luego se mantienen. 0 sea, indepen-
452
GENTICA
dientemente de los genotipos de la generacin

parental la distribucin de los genotipos tras una
generacin de apareamientos al azar depende
exclusivamente de las frecuencias allicas. Las
poblaciones equilibradas continan produciendo
proporciones genotpicas similares generacin
tras generacin.
Supongamos tres poblaciones con diferentes
frecuencias genotpicas:
Aunque con las mismas frecuencias allicas:
Tras una generacin de apareamientos al

azar las tres poblaciones tendran las mismas
frecuencias genotpicas, las frecuencias de
equilibrio:
(p + q)2 = p2(AA) + 2pq(Aa) + g2(aa) =
= (0,36)2(AA) + 2 x 0,6 X 0,4 (Aa) + (0,4)2 aa
! AA = 0,36 Aa = 0,48 aa = 0,16
En el ejemplo anterior, hemos considerado
un gen cuyos alelos muestran codominancia, lo
cual permite distinguir los heterocigotos de
ambos homocigotos. En el caso de que exista
dominancia no podremos hacer esta distincin,
por lo que para hacer los clculos de las frecuencias gnicas deberemos suponer que la poblacin est en equilibrio y partir de la frecuencia genotpica del homocigoto recesivo (vase
ecuacin).
El equilibrio de Hardy-Weinberg supone
apareamientos al azar, es decir que la probabilidad de apareamiento entre individuos sea in-
dependiente de su constitucin gentica. Sin

embargo, en determinadas ocasiones esto no se
cumple y deberemos tenerlo en cuenta; este es
el caso de la existencia de una barrera, por
ejemplo geogrfica, que asla un grupo de individuos de la poblacin, estos individuos se vern obligados a elegir sus parejas sexuales dentro del grupo y no con otros miembros de la poblacin general producindose endogamia. Otra
desviacin del apareamiento al azar lo
introduce, en los vegetales, la posibilidad de
autofecundacin.
Por otra parte, el equilibrio de HardyWeinberg se cumple para genes situados en los
autosomas, pues permite asumir que las
frecuencias de los alelos en los gametos masculinos y femeninos son idnticas. Sin embargo,
cuando consideramos genes ligados al sexo esta
afirmacin no es cierta, pues el sexo
homogamtico porta diferente nmero de copias
del gen, que el heterogamtico, y no existe la
relacin establecida de frecuencias gnicas y
genotpicas.
Ayala, F. J. et al. (1980): Evolucin Molecular,

Falconer, D. S. (1964): Introduction to
Quantitative Genetics, Oliver and Boyd,
Londres.
Dobzhansky, T. et al. (1980): Evolucin,
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Kolata, G. B. (1974): Population genetics:
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Lewontin, R. C. (1979): La base gentica de la
evolucin, Ediciones Omega, Barcelona.
Mettler, L. E. et al. (1988): Populations Genetics
AND evolution, Englewood Cliffs, N. J. Prenti-
ce Hall.
Captulo
34
Fuentes de variacin (1)

1.
Fuentes de Variacin
2.
Procesos Sistemticos
2.1. Mutacin
2.2. Recombinacin
2.3. Migracin
454
GENTICA
1. Fuentes de variacin
Segn el modelo de Hardy-Weinberg, una

poblacin ideal de tamao infinito llega a un
estado de equilibrio en sus frecuencias gnicas y
genotpicas mantenindose stas constantes en
el tiempo. Como veamos en el captulo anterior
la evolucin supone un cambio en la
constitucin gentica de las poblaciones. Sin
embargo, una poblacin que alcanza el equilibrio no cambia su constitucin gentica en el
tiempo y, por tanto, no evoluciona.
Se reconocen diferentes procesos que pueden producir cambios en las condiciones de
equilibrio y que en definitiva producirn las
variaciones en las frecuencias gnicas que se
reconocen en el proceso evolutivo. Estas fuentes
pueden clasificarse en:
Normalmente varios de estos procesos pueden actuar conjuntamente. Los procesos

sistemticos actan en poblaciones grandes y en
ellos son predecibles tanto la direccin como la
magnitud del cambio. Los procesos dispersivos,
por el contrario, actan sobre poblaciones
pequeas y, aunque se puede conocer la
magnitud del cambio, su direccin es al azar e
impredecible.
Analizaremos ahora cmo actan estos
procesos sobre la variacin gentica y cul es su
peso en el proceso evolutivo.
2. Procesos sistemticos
2.1. MUTACIN
La mutacin es la principal fuente de variabilidad gentica. Sin mutacin no existira evolucin, pero el cambio que sta produce por s
misma en la constitucin gentica de las poblaciones es muy lento, porque la tasa de muta-
cin es muy baja, lo que conducira a un proceso evolutivo extremadamente lento. En realidad
la mutacin va a producir la materia prima
(variantes) sobre la que actuarn otros procesos
para producir la evolucin.
Consideremos el efecto de la mutacin recurrente sobre una poblacin en relacin con el
cambio de frecuencias gnicas que sta produce
en el tiempo.
En una poblacin en la que todos los individuos son homocigticos (AA) para el locus A,
se puede producir una mutacin que origine el
alelo a. Si esta mutacin es un acontecimiento
nico, la probabilidad de que se expanda por
toda la poblacin en generaciones sucesivas es
muy pequea y, adems, por efecto del muestreo la mutacin podra no llegar a pasar a la siguiente generacin. Si la mutacin es recurrente
tiene ms posibilidades de pasar a generaciones
sucesivas y propagarse. Analicemos las
consecuencias de este tipo de mutacin sobre
las frecuencias gnicas.
Supongamos que el gen A, muta a A2 con
una frecuencia u (usualmente 10-s).
Gen A: 2 alelos = A, y A2.
Tasa de Mutacin: A, -+ A2 = u (por gameto y
generacin).
Si po es la frecuencia inicial de A, y q0 la del
nuevo mutante A2.
En esta generacin inicial la mutacin
cambiar un cierto nmero de alelos A, en A2.
Como la frecuencia inicial de Al = po; pon alelos
A, cambian a A2.
1.generacin:
Frecuencia de A1 despus de la generacin
bajo el efecto de la mutacin:
P1, = [alelos A, iniciales menos los que han
cambiado a A2] = PO - (upo) = Po (1 - u).
2. generacin:
P2= p1-up1, = p l (1 -[sustituimos el valor de pl ]
= po (1- u) (1 - u) = Po (1 - u)2.
Despus de t-generaciones:
La frecuencia de A, ser:
pt = po (1-u)t
Como 1 - u es menor que 1, cuando t aumenta
[= aumenta el n.' de generaciones] p, llega a ser
cero, es decir, desaparecera A, de la poblacin y
su constitucin gentica habra cambiado a ser A2.
No obstante, el cambio originado por la
mutacin en las frecuencias gnicas de la poblacin es extremadamente lento, de manera que,
si u = 10-5 y aplicamos las frmulas deducidas, se
necesitarn 1.000 generaciones para pasar de una
frecuencia de A, = 1 a 0,999; 2.000 generaciones
para pasar desde una frecuencia de 0,50 a 0,49 y
10.000 generaciones para cambiar desde A, = 0,10
a 0,09. A medida que disminuye el nmero de
alelos A, en la poblacin el cambio se va haciendo,
lgicamente, ms lento pues existen menos alelos
A, que puedan cambiar a A2.
Si consideramos adems que las mutaciones
gnicas suelen ser reversibles el cambio todava se
ralentizara ms, pues en cada generacin pasaran
[upo] alelos A, a A2, pero algunos de estos alelos
A2 recin originados pasaran nuevamente a A,
debido a la tasa v de reversin [vq0], llegndose a
un equilibrio entre los dos sentidos de la mutacin
en el que el cambio sera cero. Realmente, este
equilibrio rara vez se alcanza pues sobre las
variantes originadas por la mutacin actan otras
fuerzas, como la seleccin, favoreciendo a alguno
de los alelos.
2.2. RECOMBINACIN
La recombinacin, al permitir que se barajen

las variantes creadas por mutacin en diferentes
loci gnicos, resulta un proceso mucho ms
eficiente que la mutacin en si misma para crear
variabilidad. Las combinaciones de los genes
parentales que recibe cada individuo de la
poblacin se deshacen y se barajan durante la
meiosis, cuando ocurre el entrecruzamiento entre los cromosomas homlogos y cuando los
455
cromosomas no homlogos se distribuyen independientemente. Mediante la recombinacin

pueden generarse un gran nmero de genotipos
partiendo de un reducido nmero de alelos diferentes que se encuentren unos pocos loci. As si
consideramos n loci y a alelos en cada uno de
ellos, el nmero posible de genotipos que pueden
generarse es:
a(a + 1)
2
En el caso de que fueran tan slo 3 loci, cada
uno de ellos con 4 alelos, se originarn [4 X 5/2]3 =
1.000 genotipos diferentes, pero si elevamos el
nmero de loci considerados a 100, cada uno con 4
alelos, se originaran [4 x 5/2]100 = 10'0 = cien mil
millones de genotipos diferentes. Si tenemos en
cuenta que, por ejemplo, en la especie humana
existen alrededor de 30.000 genes, el nmero de
genotipos
diferentes
producidos
por
la
recombinacin puede llegar a ser tremendamente
elevado.
Por tanto, podemos concluir que la recombinacin potencia fuertemente la variabilidad
gentica producida en las poblaciones al combinar
las diferentes posibilidades (alelos) existentes en
cada locus gnico, posibilitando que con relativa
facilidad se produzcan combinaciones gnicas
favorables, sobre las que acte la seleccin natural.
En los organismos asexuales, por ejemplo las
bacterias, la produccin de variabilidad gentica
mediante recombinacin es un camino casi vetado
al no existir la meiosis; en cambio estos
organismos poseen altas tasas de proliferacin que
compensan la lentitud de los cambios producidos
por mutacin. A pesar de lo cual, sus tasas de
evolucin resultan mucho ms bajas que las de los
organismos con reproduccin sexual.
Indudablemente, la produccin de un elevado
nmero de combinaciones de alelos por recombinacin puede ser una ventaja de las poblaciones frente al proceso evolutivo, pero la recombinacin tambin puede destruir grupos de
alelos que proporcionan a los individuos ventajas
adaptativas para las condiciones en que se
456
GENTICA
desenvuelve la poblacin, de manera que si se

pierden estas combinaciones adaptativas la poblacin corre el riesgo de no sobrevivir y extinguirse. Por tanto, en las poblaciones naturales es
necesaria la existencia de un equilibrio entre
produccin de nueva variacin que conducira a
heterocigosidad y posibilitara la evolucin, y la
endogamia (por cruzamientos entre individuos
emparentados o autofecundacin) que conducira a la homocigosidad y que facilitara la adaptacin de la poblacin a las condiciones medioambientales actuales. Un ejemplo clsico de
esta aparente contradiccin es la importancia
evolutiva que han supuesto las inversiones en
determinados grupos de insectos, justamente
impidiendo la recombinacin en el segmento invertido e impidiendo que se barajen los supergenes (coadaptados de alelos) que suponen una
ventaja para la adaptacin de la poblacin, tal
como ya vimos en el captulo de reordenaciones
cromosmicas estructurales.
2.3. MIGRACIN
Como consecuencia de las migraciones se

produce intercambio gnico entre las poblaciones. Si es un proceso recurrente, la migracin o
flujo gnico existente entre poblaciones con
constituciones genticas diferentes resulta otra
fuente de variacin gentica, que puede alterar
el equilibrio gnico por introduccin de nuevos
alelos. Obviamente, la migracin no va a cambiar la constitucin gentica de toda la especie,
pero s puede hacerlo en la poblacin que recibe
los emigrantes.
Entre poblaciones vecinas de una especie
existe la posibilidad de intercambio de genes a
travs de migraciones. Cuanto ms intensas
sean stas, ms semejantes sern sus constituciones genticas, es decir, tendrn frecuencias
gnicas muy parecidas. En cambio, si las poblaciones estn aisladas geogrficamente no
existir posibilidad de migracin, y la transferencia de genes entre ellas estar ms restringida por lo que podrn fijarse diferentes alelos en
cada poblacin y sus constituciones genticas
irn divergiendo paulatinamente.
Pueden hacerse estimaciones de la intensidad del cambio que producen las migraciones,
aunque depender en gran medida de la estructura de las poblaciones (donadora y receptora de

emigrantes), de la magnitud de las migraciones
y de las diferencias gnicas existentes entre las
dos poblaciones.
Consideremos que en una poblacin la frecuencia de alelo A, es q0 y que esta poblacin
recibe M emigrantes de una poblacin vecina en
la que la frecuencia de este alelo es qM. Cuando
estos emigrantes lleguen a la poblacin
receptora, la frecuencia del alelo A, cambiar y
ser igual a la frecuencia total [1] menos la
frecuencia de los genes llegados de la poblacin
donadora [M], es decir, 1 - M.
Despus de una generacin en que los emigrantes se cruzarn con los individuos de la poblacin receptora, las frecuencias gnicas sern:
qi=q0(1-M)+qMM=q0+qoM+qMM=
= qo - (qo - qM)M
Por tanto, el cambio [ ] en una generacin

ser:
q=q1-q0=q0-(q0-qM)M-q0=q0-q0
M+qMM-q0=M(qM-q0)
O sea, cuanto mayor sea el nmero de emigrantes [M] y mayor la diferencia en las frecuencias gnicas entre poblacin donadora y
receptora, mayor ser el cambio que se producir en las frecuencias gnicas de la receptora.
Aq es cero slo cuando se detiene la migracin
(M = 0), o cuando se igualan las frecuencias
gnicas entre la poblacin donadora y receptora
(qM - q0 = 0). En este punto se alcanza el
equilibrio.
Mediante las frmulas deducidas tambin
podemos calcular la intensidad de la migracin:
M=
q
qM q0
En Estados Unidos durante los siglos xviii

y xix se introdujeron esclavos negros, la poblacin blanca es tan grande que la introduccin de
genes negros produce cambios insignifican-
tes en las frecuencias gnicas. Sin embargo,

podemos extender el concepto de migracin a la
introduccin de genes (flujo gnico) en una
poblacin desde otra y, en ese sentido, la poblacin afroamericana mucho ms reducida ha
recibido influencia de los genes blancos. Es decir, podemos considerar a estos efectos que la
poblacin negra es la receptora. Glass y Li, en
1953, demostraron que la frecuencia del alelo R
del gen Rh tena una frecuencia de 0,028 en
americanos blancos y 0,446 en americanos negros. Para conocer la frecuencia del alelo R en
la poblacin original podemos obtenerlas de las
poblaciones africanas de donde eran originarios
los esclavos (y suponer que no han cambiado en
estos 300 aos, aproximadamente 10
generaciones). En estas poblaciones la frecuencia de R es 0,63. Es decir, la frecuencia del
alelo se ha reducido en la poblacin afroamericana probablemente como consecuencia
de los cruzamientos con blancos en la que el
alelo es mucho menos frecuente.
M10 =
q 0,4460,028
=
= 0,694
qM q0 0,6300,028
O sea el 69,4 % de los genes se han conservado desde la poblacin original africana en la
poblacin afroamericana. Si tenemos en cuenta
que esto ha ocurrido en 10 generaciones, en una
generacin:
M= 10 0,694 = 0,036
457
Lo que significa que, si no han intervenido

otras fuentes de variacin, un 3,6 % de los genes de la poblacin afroamericana fueron introducidos desde la poblacin blanca en cada
generacin. Si estos clculos son extensibles al
resto de genes podemos estimar que el 70 % de
los genes de la poblacin afroamericana son de
origen africano y el 30 % blanco, aunque estudios ms recientes indican que las tasas de migracin fueron diferentes en distintas zonas de
Estados Unidos, por lo que las proporciones
variarn segn las zonas.
Ayala, F. J. et al. (1980): Evolucin Molecular, Ediciones Omega, Barcelona.
Clarke, B. (1973): Mutation and population size,
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Current Opinion in Genetics & Development, 7:

829-834.
Captulo
35
Fuentes de variacin (2)

1.
Seleccin
1.1.
1.2.
1.3.
1.4.
2.
Seleccin Contra el Alelo Dominante

Seleccin Contra el Alelo Recesivo
Seleccin en Contra y a Favor de los Heterocigotos
Seleccin Dependiente de la Frecuencia
Deriva Gentica
460
GENTICA
1. Seleccin
La seleccin natural es la causa fundamental

de la evolucin de las especies. El trmino fue
propuesto por Darwin por semejanza al de la
seleccin (artificial) realizada por los criadores
y mejoradores de plantas y animales que eligen
como reproductores para generar la siguiente
generacin a los individuos ms vigorosos, que
ms descendientes producen o que prefieran por
unas caractersticas determinadas.
Tal como veamos en el captulo anterior,
uno de los postulados de la moderna teora de la
evolucin se basa en la traduccin a trminos
genticos del principio darwiniano de supervivencia de los ms aptos, de manera que algunas formas tienen ms xito que otras en sobrevivir y reproducirse en un medio ambiente
determinado y, es obvio, que si los portadores
de un alelo determinado dejan ms descendientes la frecuencia de este alelo ir aumentando en
generaciones sucesivas.
La seleccin natural es la causa ms importante del cambio de las frecuencias gnicas. Los
procesos sistemticos que hemos estudiado
hasta ahora (mutacin, recombinacin y migracin) son independientes de su posible valor
adaptativo para la poblacin. Sin embargo, la
seleccin favorece los cambios que aumentan la
adaptacin de los individuos de la poblacin
(cambios adaptativos). Debido a la seleccin
natural las frecuencias de los distintos tipos
dentro de una especie cambiarn con el tiempo e
irn produciendo mejoras en la adaptacin de la
especie.
En los planteamientos que hemos tenido
hasta ahora, hemos supuesto que todos los
individuos de una generacin contribuyen
igualmente a la generacin siguiente, pero esto
no tiene por qu ser as, no todos los individuos
tienen por qu ser igualmente frtiles o viables.
Supongamos que los individuos de genotipo AA
son ms viables, es decir, tienen mayor
probabilidad de desarrollarse, llegar a adultos,
etc., que los individuos de otro geno
tipo alternativo, por ejemplo aa; o que los portadores de un genotipo son ms frtiles que los
de otro, llegan antes a la edad reproductora y
sta se le prolonga durante ms tiempo, o son
ms activos sexualmente. Cualquiera de estas
ventajas o una combinacin de varias, puede
conferir a los portadores de un genotipo una

eficacia biolgica superior a la de otros genotipos.
La eficacia biolgica (tambin conocida
como valor adaptativo o fitness) se define como
la capacidad reproductora o de supervivencia de
un fenotipo (y por tanto de un genotipo)
determinado. La forma de estimarla es ver la
contribucin proporcional de un genotipo a la
formacin de la progenie. Es importante tener
en cuenta que el trmino est referido a una
poblacin y no a un individuo. Adems, la eficacia biolgica es una consecuencia de la relacin de un genotipo con un ambiente determinado en el que los individuos de la poblacin se
desenvuelven. Un genotipo puede tener diferentes eficacias biolgicas frente a diferentes
ambientes o, lo que es lo mismo, frente a los
cambios ambientales los genotipos pueden
cambiar sus eficacias biolgicas y genotipos con
un fuerte coeficiente de seleccin en contra en
un determinado ambiente pueden pasar a ser
favorecidos en el nuevo ambiente originado tras
el cambio.
Consideremos individuos portadores de dos
alelos diferentes de un gen en un ambiente
determinado. Si los individuos con genotipo A
dejan como promedio 100 descendientes,
mientras que los de genotipo a dejan 70, estos
ltimos individuos tienen una reduccin del 30
% de su xito reproductivo en ese ambiente. Es
decir, los individuos de genotipo A tienen una
eficacia biolgica (W) superior a los de genotipo a, y esta superioridad puede cuantificarse
como sigue:
Genotipo A ! 100 descendientes;
Eficacia biolgica WA = 100/100' = 1
Genotipo a ! 70 descendientes;
Eficacia biolgica Wa = 70/100! = 0,7.
Siendo cl numerador los descendientes producidos por

el genotipo analizado y el denominador los descendientes
del genotipo que mayor nmero produce.
La fuerza que acta sobre cada genotipo para

reducir su valor adaptativo se define como
coeficiente de seleccin [s], y su relacin con la
eficacia biolgica queda establecida mediante la
siguiente frmula:
W = 1 - s o s=1-W
En el caso del ejemplo anterior el coeficiente de
seleccin para el genotipo A sera:
s=1-1=0
mientras que para el genotipo a sera:
s = 1 - 0,7 = 0,3
o lo que es lo mismo, el genotipo a presenta un
coeficiente de seleccin en contra s = 0,3.
Cuando el coeficiente de seleccin alcanza el
valor 1 entonces el gen es letal.
La eficacia biolgica predice cmo cambiarn las frecuencias gnicas por efecto de la
seleccin. Si la eficacia biolgica es reducida
para un genotipo, la seleccin acta en contra de
este genotipo de forma proporcional a la reduccin que ha sufrido su contribucin a la
descendencia, y su frecuencia disminuir. En
ltimo extremo la seleccin tender a eliminar
uno de los alelos o conducir a una situacin de
polimorfismo equilibrado que, como veremos
ms adelante, mantendr simultneamente en la
poblacin ms de un alelo.
El cambio en la frecuencia gnica producido
por la seleccin natural puede determinarse
fcilmente y para ello consideraremos diferentes
situaciones. La seleccin puede actuar tanto a
nivel de los gametos (gametos con baja
viabilidad o inviables) o de los cigotos, aunque
para simplificar los clculos que realizaremos y
hacerlos ms fcilmente comprensibles nos
ceiremos a la seleccin cigtica.
contra de manera ms eficiente que contra un

alelo recesivo.
Supongamos una poblacin que rene las
condiciones del equilibrio de Hardy-Weinberg
para un alelo determinado, es decir, es suficientemente grande y los cruzamientos son al
azar; el cambio en las frecuencias gnicas ser
como se describe en la tabla 35.1.
En el caso extremo de que el alelo dominante sea letal (s = 1), al sustituir en las frmulas deducidas:
p =
-spq 2
1pq 2
-pq 2
=
= 2 = -p
2
2
1- s - sq 1-1-1q
-q
es decir, como el homocigoto dominante y el

heterocigoto son letales el alelo desaparece en
una sola generacin.
1.2. SELECCIN CONTRA EL ALELO RECESIVO
Los alelos recesivos no se expresan en el

heterocigoto por lo que stos tendrn una eficacia biolgica similar a la del homocigoto dominante y en este caso la seleccin actuar nicamente en contra del homocigoto recesivo. Para
analizar el cambio en las frecuencias gnicas
que produce este tipo de seleccin, supondremos una poblacin que rene las condiciones
del equilibrio de Hardy-Weinberg tal como hicimos para el caso de seleccin contra el alelo
dominante (vase tabla 35.2).
Qu ocurrir en el caso de que el homocigoto recesivo sea letal? Desaparecer en una
generacin como ocurra en el caso de un alelo
dominante letal? En este caso el coeficiente de
seleccin es s = 1, es decir, su eficacia biolgica
sera W = 1 - s = 0 y las nuevas frecuencias
gnicas tras una generacin actuando la seleccin seran:
qs =
1.1. SELECCIN CONTRA EL ALELO DOMINANTE
Los alelos dominantes se expresan en los

heterocigotos por lo que la seleccin, al no estar
enmascarado su efecto, podr actuar en su
461
q - sq 2 q - q 2
q(1- q)
=
=
=
1- sq 2 1- q 2 (1+ sq)(1- q)
q
1- q
462
GENTICA
Tabla 35.1
y el cambio en las frecuencias gnicas
q:
q - sq 2
-spq 2 -pq 2
-q =
p =
=
=
1- sq 2
1- sq 2 1- q
-(1- q)q 2
-q 2
=
=
(1+ q)(1- q) 1+ q
En este caso el alelo no desaparece en una
generacin, sino que la tasa de disminucin del
alelo a (Aq) se ir haciendo ms pequea a
medida que el alelo vaya desapareciendo de la
poblacin (su frecuencia q se hace ms
pequea). Es decir, la eliminacin de un alelo
recesivo letal mediante seleccin es un proceso
muy lento que puede extenderse a lo largo de
miles de generaciones.
1.3.
SELECCIN EN CONTRA Y A FAVOR DE

LOS HETEROCIGOTOS
De la actuacin de la seleccin contra un

alelo dominante o contra uno recesivo podemos
deducir que el proceso de cambio en las
frecuencias se detendr [Ap = 0 o Aq = 0] cuando el alelo sobre el que acta la seleccin desaparece [p = 0 o q = 0] y con l, el proceso
selectivo. Sin embargo, en determinadas condiciones puede llegarse a un equilibrio de manera que Ap = 0 o Aq = 0, sin que las frecuencias de A (p) o a (q) lleguen a ser cero. Esta situacin se puede alcanzar por dos vas alternativas:
463
Tabla 35.2.
1.3.1.
Seleccin en contra
de los heterocigotos (Inferioridad
al alcanzar el equilibrio [Aq = 0] las frecuencias

de los alelos no sern iguales [p 9'- q].
de los heterocigotos o infiadominacia)
Cuando los heterocigotos tienen una eficacia biolgica inferior a la de ambos homocigotos, es decir, hay una seleccin en contra
de los heterocigotos. Este es el caso de los
heterocigotos para reordenaciones cromosmicas, pues presentan una fertilidad baja, tal como
se analiz en el captulo correspondiente. Para
que esto ocurra, adems, la eficacia biolgica
de ambos alelos debe ser igual [ WAA =
Waa > WAa],. y se alcanzar un equilibrio
[Aq = 0] cuando se igualen las frecuencias
de los dos alelos [p = q]. No obstante, en
los casos en que los dos homocigotos tengan
eficacias biolgicas diferentes, aunque superiores a los heterocigotos [WAA = Waa > WAa],
1.3.2. Seleccin a favor de los heterocigotos (Superioridad

de los heterocigotos, sobredominancia o heterosis)
Cuando hay una superioridad en la eficacia

biolgica de los heterocigotos respecto a ambos
homocigotos [WAa > Waa = o # WAA], o 10 que
es lo mismo cuando la seleccin favorece a los
heterocigotos. En este caso tambin puede
llegarse a un equilibrio en el que [Aq = 0], y a
este equilibrio estable se le denomina polimorfismo equilibrado, en el que se mantienen las
frecuencias de los dos alelos p y q equilibradas.
Un caso extremo de heterosis es el de los
letales equilibrados, en el que ambos alelos en
homocigosis son letales [WAA = Waa = 0] y slo
464
GENTICA
--- Cy ----- Pm+ ------ --- Cy+ ----- Pm -------- Cy ----- Pm+ ------ --- Cy+ ----- Pm -----Letal
Letal
el heterocigoto es viable, por ejemplo los mutantes Curly (Cy) y Plum (Pm) de Drosophila
(vase esquema).
1.4. SELECCIN DEPENDIENTE

DE LA FRECUENCIA
Los casos de seleccin analizados hasta

ahora dependan exclusivamente de la eficacia
biolgica de los distintos genotipos. Sin embargo, la seleccin tambin puede actuar dependiendo de la frecuencia de los genotipos en
la poblacin y en estos casos tambin puede alcanzarse una situacin de polimorfismo equilibrado sin necesidad de heterosis. Una situacin
tpica de este tipo de seleccin es la que establece un predador sobre sus presas. Supongamos que unos pjaros se alimentan de mariposas, y que stas poseen unos alelos que le producen diferentes patrones de coloracin que el
predador ve de forma preferencial. Inicialmente
los pjaros podrn cazar las ms abundantes,
por ejemplo las de patrn A,, porque las encontrarn con ms frecuencia. Los pjaros se acostumbrarn a capturar mariposas con este patrn,
de manera que producirn una disminucin en
su nmero hasta mermar sensiblemente la
poblacin. Mientras tanto, las mariposas con
patrn A2, menos abundantes, estarn sometidas
a una depredacin mucho menos intensa, por lo
que su nmero aumentar notablemente.
Cuando el patrn A2 sea muy abundante y el A,
escaso, la relacin con el depredador se invertir
y los pjaros comenzarn a cazar mariposas con
patrn A2, ante la ausencia de las de patrn A,.
Es decir, las mariposas menos frecuentes
tendrn en ese momento una eficacia biolgica
mayor, con una mayor supervivencia y, a medida que su frecuencia aumente, ir disminuyendo su eficacia biolgica al disminuir su supervivencia. En consecuencia la eficacia biolgica depende negativamente de la frecuencia del
alelo en la poblacin.
Se conocen tambin ejemplos en los que la
--- Cy ----- Pm+ -------- Cy+ ---- Pm ------Viable
eficacia biolgica depende positivamente de la

frecuencia; esta situacin suele darse en la
competencia entre diferentes predadores, de
manera que cuanto ms abundante es un predador ms descendencia deja y mejor compite
contra otro que est en menor frecuencia. Este
tipo de seleccin mantendr en la poblacin
ambos alelos en un equilibrio dinmico.
2. Deriva gentica
En las poblaciones grandes la muestra de

genes que pasa a la generacin siguiente es ms
o menos constante, pero en poblaciones pequeas la muestra puede no ser representativa de la
generalidad de la poblacin, lo que originara un
error de muestreo y la desviacin de las frecuencias gnicas en cualquier sentido, por lo
que tender a fijarse aleatoriamente alguno de
los alelos. Estos efectos de muestreo producidos
por el azar se denominan deriva gentica.
La deriva gentica es un factor que disminuye la variacin gentica existente en las poblaciones y la magnitud de su efecto es inversamente proporcional al tamao de la poblacin:
cuanto ms pequea es la poblacin mayor es su
efecto.
El efecto que produce la deriva gentica sobre las frecuencias gnicas puede ejemplificarse
si consideramos las caras de una moneda como
los alelos de un gen. Si lanzamos una moneda al
aire un milln de veces, obtendremos una
frecuencia muy aproximada del 50 % de cara y
el 50 % de cruz. Es decir, la frecuencia del alelo
cara en esta poblacin de un milln de
individuos sera 0,5, igualmente la frecuencia
del alelo cruz en esta poblacin grande sera 0,5.
Sin embargo, sabemos por experiencia que si
lanzamos la moneda al aire slo diez veces el
resultado es muy azaroso y, es fcil que, por
ejemplo, nos salgan siete caras y tres cruces. Es
decir, en esta poblacin pequea de diez
individuos, las frecuencias gnicas iniciales
(cara = 0,5; cruz = 0,5) se nos han desviado
a 0,7 y 0,3 respectivamente, no porque la moneda est pesada hacia una de las caras (seleccin a favor de uno de los alelos) sino por efectos del azar. Aunque conocemos la magnitud del
cambio producido sobre las frecuencias gnicas,
por su efecto aleatorio es impredecible su
direccin (no sabemos hacia cul de las caras de
la moneda).
La deriva gentica conduce a lo largo de las
generaciones a una prdida de variabilidad y,
por tanto, a la homocigosis en las poblaciones
pequeas que la experimentan y a la fijacin de
alelos diferentes a los que se fijan en poblaciones grandes, con lo cual conduce a una divergencia entre poblaciones y finalmente a especiacin.
La deriva gentica tambin acta cuando
una poblacin reduce mucho su efectivo, por
ejemplo debido a un cambio medioambiental
adverso, pasando la poblacin lo que se denomina un cuello de botella. En ese momento el
nmero de individuos de la poblacin es pequeo y susceptible, por tanto, de sufrir los
efectos de muestreo descritos.
Otra situacin favorable para la actuacin de
la deriva gentica es el efecto fundador. La
colonizacin de nuevos territorios, por ejemplo
islas, se lleva a cabo por unos cuantos individuos procedentes de una poblacin grande
continental. Los pocos individuos que comienzan la nueva colonia representan una muestra
aleatoria de los genes de la poblacin original,
conduciendo a una divergencia de las frecuen
cias allicas y finalmente de los alelos fijados
465
respecto a la poblacin original por efecto de la

deriva gentica. Uno de los ejemplos mejor conocido es el descrito por Darwin sobre la especiacin de los pinzones en las islas Galpagos.
Los pinzones llegaron a estas islas desde el
continente suramericano y los descendientes de
los colonizadores originales se extendieron por
las 29 islas que componen el archipilago,
sufriendo una divergencia gentica entre ellas
debido a la deriva gentica, llegando en muchos
casos a la formacin de nuevas especies.
Ayala, F. J. et al. (1980): Evolucin Molecular, Edi

ciones Omega, Barcelona.
Clarke, B. (1972): Density-dependent
selection, Am. Nat., 106: 1-13.
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Falconer, D. S. (1964): Introduction to Quantitative
Genetics, Oliver and Boyd, Londres.
Kimura, M. (1955): Solution of a process of ran
dom genetic drift with a continuous model,
Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 41: 144-150. Lewontin,
R. C. (1979): La base gentica de la evolucin,Ediciones Omega, Barcelona.
Mayr, E. (1963): Animal species and evolution,
Harvard University Press, Mass.

Wallace, B.: Fifty years of genetic load, J. He
red., 78: 134-142.
Weyl, N. (1979): Some genetic aspects of

plantation slavery, Perspect. Biol. Med., 13:
618-625.
Captulo
36
Gentica evolutiva
1.
Teoras Evolutivas
2.
Divergencia de las Poblaciones
3.
El Proceso de Especiacin
4.
La Evolucin a Nivel Molecular
468
GENTICA
En los captulos precedentes hemos analizado la transmisin de la informacin gentica

en las poblaciones a travs de las generaciones y
las fuerzas que la hacen cambiar a lo largo del
tiempo. La gentica evolutiva, estrechamente
emparentada con la de poblaciones, analiza la
herencia en cualquier poblacin, sea o no de la
misma especie. En este captulo analizaremos
cmo la diferenciacin de las poblaciones conduce a la formacin de nuevas especies a lo largo del proceso evolutivo.
1. Teoras evolutivas
La moderna teora de la evolucin, tambin

conocida como teora sinttica de la evolucin o
teora neodarwinista, supone una revisin de la
teora de Darwin y nace como sntesis de los
conocimientos alcanzados en tres disciplinas:
Gentica, Sistemtica y Paleontologa. La moderna teora se fundamenta, como la de Darwin,
en el principio de seleccin natural como causa
fundamental de la evolucin de las especies. Sin
embargo, actualiza los conocimientos sobre la
herencia rechazando el principio lamarckiano de
la herencia de los caracteres adquiridos, de
manera que las variaciones sobre las que acta
la seleccin se heredan segn las leyes de
Mendel. En un principio, gracias a las
aportaciones del genetista T. Dobzhansky
(1937), la teora sinttica rechaza el saltacionismo (teora que mantena la formacin de
nuevas especies por saltos bruscos debidos a
mutaciones que produciran cambios drsticos
en los organismos) y lo sustituye por el gradualismo: las variaciones implicadas en el proceso evolutivo son pequeas; la evolucin, por
tanto, consistira en un cambio progresivo en la
composicin gentica de las poblaciones. Estas
pequeas variaciones seran los distintos alelos
de un gen que se originan por pequeas
mutaciones, de manera que los individuos portarn distintas combinaciones allicas en los
distintos genes. No todas las combinaciones
tendrn el mismo valor adaptativo y algunas
proporcionarn ventajas a sus portadores en un
medio ambiente determinado, por lo que en
las siguientes generaciones estas combinaciones
sern ms frecuentes. A lo largo del tiempo, los

alelos que aumentan la eficacia biolgica de sus
portadores tendern a fijarse en la poblacin,
por lo que se habr producido un cambio en la
constitucin gentica de la misma que llegar a
ser muy diferente de la poblacin inicial e
incluso originar una nueva especie. La contribucin de la gentica a la teora de Darwin se
vio apoyada y enriquecida por la aportacin de
la sistemtica. El botnico L. Stebbins (1950) y,
posteriormente, el zologo E. Mayr (1963)
corroboraron la variacin geogrfica de las especies (debida a diferencias en la constitucin
gentica). Adems, establecieron el concepto
biolgico de especie y el de especiacin aloptrica, que esclarecan los mecanismos de formacin de nuevas especies. Con este nuevo
punto de vista, una especie se consideraba un
conjunto de poblaciones naturales capaces de
reproducirse entre ellas pero aisladas reproductivamente de las dems, es decir, incapaces
de realizar intercambios gnicos con poblaciones de otras especies. Las poblaciones ms alejadas geogrficamente estarn sometidas a
condiciones medioambientales diferentes, por lo
que presentarn caracteres adaptativos diferentes, originndose una variacin geogrfica
intraespecfica (razas geogrficas). Si una de
estas razas alejadas llega a aislarse geogrficamente por algn fenmeno natural, se interrumpir el flujo gnico con el resto de la especie; comenzar entonces una divergencia
gradual hasta llegar a ser tan diferente que no
pueda cruzarse y originar descendencia con los
individuos de la poblacin original llegando,
por tanto, a constituir una nueva especie. A este
mecanismo de especiacin, en localidades diferentes, se le denomina aloptrica.
La paleontologa corroboraba tambin lo
establecido por las otras disciplinas y en este
sentido G. G. Simpson (1953) verifica en el registro fsil el gradualismo al analizar la filogenia de los quidos. En sus estudios observa que
cambios pequeos que aparecen en las poblaciones se van extendiendo a otras poblaciones
en periodos geolgicos sucesivos, conduciendo
a la diferenciacin gradual de nuevas especies a
partir de las ancestrales. Sus anlisis le
llevan a la conclusin de que la historia de la
vida revelada por el registro fsiles compatible

con una evolucin basada en mutaciones genticas sobre las que actuara la seleccin.
En 1957 J. B. S. Haldane argument matemticamente que para transformar una especie
en otra no podan sustituirse ms de una docena
de genes, pues si el nmero era mayor la disminucin del nmero efectivo de individuos en la
poblacin (al tener muchos de ellos una eficacia
biolgica menor) conducira inexorablemente a
la extincin de la poblacin. Como es bien
conocido las especies, aun aquellas muy
prximas filogenticamente, difieren entre ellas
en cientos o miles de genes. Por tanto, para
evitar la extincin de la especie, la sustitucin
de genes debera realizarse a un ritmo muy
lento, lo que conducira a un proceso evolutivo
extremadamente lento, que no se da en el mundo real. En definitiva la evolucin basada en la
sustitucin de genes por otros ms aptos resultaba matemticamente imposible (Dilema de
Haldane). La solucin ms acertada a este dilema fue propuesta por M. Kimura en 1968 al
proponer que en la transformacin de una especie en otra, efectivamente, no podan reemplazarse ms de una docena de genes por la
actuacin de la seleccin natural y el resto de
genes se sustituiran por azar. Los genes sustituidos por el azar tendran valores adaptativos
similares, es decir, seran selectivamente neutros (Teora neutralista). Los estudios realizados por R. C. Lewontin en 1966 sobre los polimorfismos enzimticos pusieron de manifiesto
una alta tasa de heterogeneidad gentica en las
poblaciones que desembocaba nuevamente en el
dilema de Haldane y confirmaba la existencia
de multitud de alelos selectivamente neutros.
El gradualismo, inicialmente mantenido por
la teora sinttica, posteriormente fue ampliado
por la posibilidad de aparicin de especies
nacidas bruscamente, por salto, mediante una
revolucin de su patrimonio gentico (saltacionismo). En este sentido los estudios de H.
Lewis, realizados en 1966 en las especies de
plantas del gnero Clarkia, demostraban que
las reordenaciones cromosmicas (translocaciones e inversiones) ocurridas en la periferia de
una poblacin ancestral haban conducido a
469
la formacin de nuevas especies, pues la existencia de estas nuevas ordenaciones cromosmicas disminuan drsticamente la fertilidad de
los cruzamientos entre portadores y no portadores de la reordenacin (tal como analizamos
en el captulo dedicado a las reordenaciones
cromosmicas), por lo que los individuos
portadores quedan aislados reproductivamente
del resto, lo que abre tambin la posibilidad de
la especiacin simptrica (en la misma localidad). Este modelo de especiacin a travs de
reordenaciones cromosmicas, sin necesidad de
una divergencia gradual, ha podido ser demostrado posteriormente en otras muchas especies de plantas y animales.
En 1972 los paleontlogos N. Eldredge y S.
J. Gould (recientemente fallecido) en sus estudios de la evolucin del gnero Trilobites han
corroborado la existencia del saltacionismo en
el registro fsil. Estos autores demostraron que
cada especie permaneca estable durante
millones de aos (periodo de stasis: ausencia
de evolucin) para luego ser reemplazada
bruscamente por otra que muestra claras
diferencias con la anterior; a este tipo de evolucin se le denomina de equilibrios intermitentes.
2. Divergencia de las poblaciones
Ya hemos analizado los diferentes procesos

que pueden actuar sobre las poblaciones y que
en definitiva producirn las variaciones en las
frecuencias gnicas que se reconocen en el
proceso evolutivo (Mutacin, Recombinacin,
Migracin, Seleccin y Deriva). La variacin
gentica intra e interpoblacional se debe a la
accin simultnea de todas estas fuerzas, de
manera que existe un equilibrio entre las fuerzas
que mantienen o incrementan la variabilidad
dentro de las poblaciones y, por tanto, impiden
la divergencia entre poblaciones, y aquellas que
producen una divergencia entre las poblaciones,
reduciendo la variabilidad y promoviendo la
homocigosis. En la tabla 36.1 se resumen el
efecto sobre la variabilidad y la divergencia de
las distintas fuerzas que actan sobre las
poblaciones.
470
GENTICA
Tabla 36.1. Efecto sobre la variabilidad y la divergencia de las distintas fuerzas que actan sobre
las poblaciones
Como puede observarse la seleccin natural

puede tener los dos tipos de efectos descritos,
pues, independientemente de sobre qu genotipos realice su efecto tal como vimos en el
captulo anterior, la seleccin funciona sobre las
poblaciones naturales de formas diversas y con
consecuencias diferentes pudiendo distinguirse
varios tipos de seleccin: Estabilizadora,
Direccional y Dispersiva.
La Seleccin Estabilizadora o Normaliza
dora elimina de la poblacin las formas extremas
seleccionando favorablemente los individuos
bien adaptados a las condiciones ambientales en
que se desenvuelve la poblacin (fig. 36.1). Este
tipo de seleccin disminuye la variacin en las
poblaciones y es la ms frecuente en la
naturaleza. Un ejemplo clsico en la especie
humana es la seleccin que ha existido hacia un
peso medio de los nios al nacer (alrededor de
los 3,5 kg), de manera que los nios que nacen
con un peso muy por debajo o muy por encima
de esta media estn seleccionados en contra, con
menores posibilidades de supervivencia
perinatal.
Fig. 36.1. Seleccin estabilizadora
La generacin de variabilidad gentica en la

poblacin tiene indudables ventajas, sin embargo, los individuos cuyos genotipos no alcanzan la norma poblacional constituyen lo que
se denomina lastre gentico, pues son individuos
que no tienen una eficacia biolgica ptima y,
sin embargo, consumen recursos, sin que la
seleccin normalizadora los elimine de la
poblacin. Este lastre gentico, no obstante,
resulta en muchos casos imprescindible para la
supervivencia de la poblacin, pues mientras el
ambiente es estable los individuos que cumplen
la norma son los mejor adaptados, sin embargo
ante un cambio medioambiental brusco todos
estos individuos tendrn una eficacia biolgica
muy baja y sern eliminados, por lo que la
poblacin corre el riesgo de extinguirse a no ser
que, entre las variantes fenotpicas que
constituyen el lastre gentico, existan individuos
capaces de adaptarse a las nuevas condiciones,
por lo que en ese momento comenzara a actuar
otro tipo de seleccin, la direccional. En
definitiva en el lastre gentico de una poblacin
se mantienen individuos que, en muchos casos,
aseguran la supervivencia de la poblacin ante
cambios del medio ambiente.
La Seleccin Direccional se manifiesta por
actuar en contra de una de las variantes producindose un cambio progresivo en la composicin gentica de la poblacin al promover la fijacin de una variante, en detrimento de la que
se selecciona en contra que desaparecer de la
poblacin a lo largo de generaciones sucesivas
(fig. 36.2). Este tipo de seleccin promueve la
divergencia de poblaciones y ha resultado de
crucial importancia en la evolucin cuando
Fig. 36.2. Seleccin direccional.
existen cambios medioambientales, y nicamente los fenotipos extremos son capaces de

adaptarse a las nuevas condiciones. Un ejemplo
claro del efecto de esta seleccin es el melanismo industrial de la mariposa Biston betularia. Esta mariposa en estado silvestre tiene
una forma clara y tiene el hbito de posarse sobre los troncos de los rboles. En algunas regiones industriales de Gran Bretaa, los troncos
de los rboles estn ennegrecidos por el holln y
las mariposas claras destacan sobre el tronco,
con lo cual resultan presa fcil para los pjaros
que se alimentan de ellas (seleccin en contra).
En tan slo cincuenta aos las formas claras han
sido sustituidas por oscuras en estas regiones,
pues estas formas oscuras se confunden con el
color del tronco y pasan desapercibidas para sus
predadores. En las regiones no industrializadas
acta sobre la mariposa una seleccin
estabilizadora, promoviendo la norma (color
claro) frente a variantes extremas (color oscuro)
que presentan una presin de seleccin en
contra al ser fcilmente visibles sobre los
troncos claros.
La Seleccin Dispersiva o Diversificadora
acta de forma contrapuesta a la seleccin normalizadora, favoreciendo las variantes extremas
y eliminando los individuos con genotipos
medios, por lo que conduce al mantenimiento de
una situacin de polimorfismo en la que se
mantienen simultneamente diferentes variantes
(tal como analizamos en el captulo anterior:
superioridad de los heterocigotos), o bien a la
fragmentacin de la poblacin original en razas
diferentes, de manera que promueve la
divergencia entre poblaciones (fig. 36.3).
471
Fig. 36.3. Seleccin dispersiva.
3. El proceso de especiacin
Una especie es un conjunto de poblaciones

naturales capaces de reproducirse entre ellas
pero aisladas reproductivamente de las dems,
es decir, incapaces de realizar intercambios
gnicos con poblaciones de otras especies
(Concepto biolgico de especie, E. Mayr).
Dentro de una especie, debido a la divergencia
gentica entre poblaciones, pueden distinguirse
razas geogrficas o variantes locales. Estas
razas estn constituidas por poblaciones
claramente diferentes en cuanto a sus
frecuencias gnicas, como resultado de la
actuacin de las diferentes fuerzas selectivas o
la deriva gentica, pero an conservan la posibilidad de intercambios de genes con la poblacin original. Las diferencias entre las razas
pueden acentuarse hasta llegar un momento en
que la reproduccin sea imposible, es decir se
alcanza un aislamiento reproductivo y la raza
alcanza la categora de especie. As pues, un
punto clave en la constitucin de una especie es
el establecimiento de un aislamiento
reproductivo y ste puede alcanzarse por
diferentes vas:
- Mecanismos de aislamiento precigticos:
Impiden el apareamiento, la fecundacin y la
formacin de cigotos. Pueden ser de distintos
tipos:
Fisiolgicos o inmunolgicos: Los gametos
son incompatibles con el tracto reproductivo
extrao, dando lugar a la mortalidad de los
mismos.
472
GENTICA
Mecnico: No se consigue la fecundacin

debido a la diferente estructura de los rganos
genitales.
Sexual o de comportamiento (etolgico):
Los patrones de cortejo son diferentes evitando
el apareamiento (se restringe a los animales).
Estacional o temporal: No puede producirse la fecundacin porque los individuos de
las dos poblaciones maduran sexualmente o
florecen en distintas pocas.
Geogrfico o ecolgico: Las poblaciones
estn aisladas por una barrera geogrfica natural
(ro, montaa, etc.) o an viviendo en la misma
localidad ocupan hbitats diferentes.
- Mecanismos de aislamiento poscigticos:

Aunque es posible el apareamiento, la fecundacin y la formacin de cigotos, stos no
son viables o son estriles, de manera que no
pueden contribuir a la formacin de la siguiente
generacin. Pueden ser de distintos tipos:
Mortalidad de los cigotos: El vulo es
fecundado por el espermatozoide o polen pero
el cigoto no se desarrolla, muriendo prematuramente.
Inviabilidad de los hbridos: Los cigotos
se desarrollan pero el hbrido es inviable y
muere antes de la madurez sexual.
Esterilidad de los hbridos: Los hbridos
son viables pero son incapaces de reproducirse
o estriles. Pueden reducirse a uno de los sexos.
Esterilidad de la descendencia de los hbridos: Los hbridos se desarrollan y son viables
pero los cruzamientos entre hbridos o con uno
de los parentales son inviables o estriles.
En la naturaleza las barreras de aislamiento

entre las especies no se reducen a un solo tipo
sino que son varios los mecanismos de aislamiento reproductor que se establecen simultneamente. En general, los mecanismos de aislamiento ms efectivos son los precigticos,
mientras que los poscigticos son menos efectivos y costosos para la poblacin pues suponen
una prdida de energa y recursos.
Se han propuesto diferentes modelos de especiacin, alguno de los cuales se han comen
tado sucintamente al comienzo de este captulo,

aunque todos ellos tienen en comn el establecimiento de un aislamiento reproductivo. Se
reconocen dos modelos principales de especiacin:
Especiacin aloptrica: es probablemente el
mecanismo ms frecuente de formacin de
nuevas especies. Las poblaciones grandes estn
extendidas geogrficamente y, por tanto,
sometidas a ambientes diversos. Esto conduce a
la existencia de distintas fuerzas selectivas en
los diferentes ambientes por lo que se producirn adaptaciones locales. Esta divergencia
adaptativa en el seno de la poblacin conducir
a la formacin de razas o subespecies que mantienen la potencialidad de reproducirse entre
ellas, aunque en la prctica no lo hagan, pues
los cruzamientos se realizarn preferentemente
entre individuos pertenecientes a la misma raza
geogrfica, por lo que el flujo gnico se restringe a los individuos de la misma raza. Si en este
momento se establece una barrera geogrfica
accidental (crecida de un ro, un glacial, etc.) las
poblaciones quedarn aisladas geogrficamente,
en alopatra (diferentes localidades). La barrera
geogrfica impedir, de una forma efectiva, el
intercambio de genes con la poblacin original
al impedir el contacto entre las poblaciones, por
lo que comenzar una divergencia en los
genotipos y sus frecuencias y, probablemente, el
desarrollo de mecanismos de aislamiento pre o
poscigticos que impedirn definitivamente el
flujo gnico entre ellas, aunque puedan ponerse
nuevamente en contacto, originando una nueva
especie.
Especiacin simptrica: este tipo de especiacin se da sin necesidad de establecer una
barrera de aislamiento geogrfico. Tal como
analizbamos al principio del captulo, la aparicin de reordenaciones cromosmicas puede
establecer una barrera de aislamiento reproductivo poscigtico, baja fertilidad de los hbridos (heterocigotos de reordenacin), por lo
que homocigotos normales y homocigotos
reordenados quedarn aislados reproductivamente en simpatra (en la misma localidad),
impidindose el flujo gnico. En este momento
puede iniciarse un proceso de divergencia en-
tre ambos tipos de homocigotos (normales y

reordenados) tal como ocurre en las especies del
gnero Clarkia.
4. La evolucin a nivel molecular
La similitud en las clulas de todos los organismos conocidos, en cuanto a procesos genticos, bioqumica y orgnulos subcelulares,
sugiere que la amplia variedad de formas de
vida que existen actualmente provienen de una
clula original que surgi al comienzo de la
vida. No existen evidencias fsiles de los albores de la vida, pero puede deducirse que comenz a partir de una molcula con capacidad
de contener informacin y de autorreplicarse,
suficientemente simple como para poder formarse de una manera espontnea. Actualmente
parece claro que esta molcula primordial pudo
ser de ARN, pues adems de cumplir las
caractersticas reseadas tiene la posibilidad de
plegarse y desempear actividades catalticas,
por ello se denomina a esta vida primitiva, el
mundo ARN.
El hecho de que todos los organismos vivos
compartan las cuatro bases (A, U, G, C) en su
ARN, nos induce a pensar en un nico origen de
toda la informacin gentica. No obstante, el
ARN es una molcula relativamente inestable
por lo que a lo largo del proceso evolutivo debi
evolucionar hacia una molcula ms estable
como es el ADN.
Se piensa que las primeras clulas, originadas en altas temperaturas volcnicas, estaran
constituidas por una membrana que rodeara la
molcula de ARN. Los representantes actuales
de estas formas primitivas, las arqueobacterias,
son organismos unicelulares que contienen en
su material gentico genes fuertemente empaquetados carentes de intrones. Los intrones
aparecieron con los eucariotas; estos organismos fueron capaces de incorporar orgnulos
intracelulares, y evolucionaron hacia la compartimentalizacin del interior de la clula, aislando en el ncleo el material que contena la
informacin gentica. Posteriormente en esta
misma lnea evolutiva apareceran los organismos pluricelulares. A lo largo de este proceso
la cantidad de material gentico se ha ido incre-
473
mentando para asumir funciones cada vez ms

complejas.
En la base de todo el proceso evolutivo se
encuentran los cambios en el material gentico;
basta recordar que las variantes sobre las que
acta la seleccin son el resultado de mutaciones en el ADN. Las mutaciones ocurren al
azar y pueden ser favorables, neutrales o deletreas para los individuos que las portan. En
este sentido, es necesario tener en cuenta que,
por ejemplo, en los organismos superiores las
regiones reguladoras y codificantes del ADN
suponen una fraccin muy pequea de su genoma (5-10 %), por lo que la mayora de las mutaciones ocurrirn fuera de estas regiones y, por
tanto, no afectarn a la eficacia biolgica de los
individuos por lo que resultarn selectivamente
neutras. Las mutaciones que afecten a la expresin de los genes pueden ser beneficiosas, en
cuyo caso sern favorecidas por la seleccin, o
deletreas presentando una seleccin en contra,
por lo que en las generaciones sucesivas
reducirn su frecuencia en la poblacin y
finalmente desaparecern, a no ser que exista
una superioridad de los heterocigotos en cuyo
caso se mantendrn en equilibrio, aunque con
baja frecuencia.
El aumento en el tamao del genoma, que
ha acompaado al aumento de complejidad de
los organismos, ha tenido lugar a travs de
duplicaciones que han dado como consecuencia
la aparicin de nuevos genes tal como qued
demostrado en el captulo de reordenaciones
cromosmicas, pues al ocurrir una duplicacin
una de las copias del gen seguir desempeando
su funcin, mientras que la otra (redundante)
podr acumular mutaciones de manera que se
constituir en un laboratorio de experimentacin
para la creacin de nuevos genes y funciones.
En un principio la supervivencia de la
duplicacin en el individuo que se produce es
una mera cuestin de azar y, si una mutacin
silencia (por alteracin de las regiones
reguladoras o las codificantes) uno de los genes
redundantes ste se convierte en un pseudo gen,
que resultar selectivamente neutro y, por tanto,
se transmitir por azar (deriva gentica)
pudiendo desaparecer o aumentar su frecuencia
a
travs
de
este
proceso.
474
GENTICA
Los pseudogenes, al no sufrir presin selectiva,

acumularn mutaciones a lo largo de las sucesivas
generaciones pudiendo diferenciarse tanto del
original que resulte imposible reconocer su origen.
Eventualmente, estas mutaciones al azar podrn
hacer que se convierta en un nuevo gen con una
nueva funcin que sea beneficiosa para el
individuo que la porte y, por tanto, sea favorecida
por la seleccin (vase evolucin de los genes de
las globinas).
Los datos moleculares sobre protenas y ADN
proporcionan a los evolucionistas un reloj
molecular, que les permite trazar genealogas con
gran fiabilidad. Las tasas de cambios en las
secuencias de aminocidos en las protenas y de
nucletidos en el ADN son aproximadamente,
aunque no en todos los casos, similares en las
diferentes lneas evolutivas, lo que permite establecer una buena estimacin de la poca de separacin de las especies y, junto a los datos morfolgicos, bioqumicos, paleontolgicos, etc.,
establecer rboles filogenticos.
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en GAYBAN GRFIC, S. L.
Almirante Oquendo, 1
08020 Barcelona
ERRNVPHGLFRVRUJ

Varios - Genetica

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Ariel Ciencia

Jos Fernndez Piqueras, Antonia Mara Fernndez Peralta,

Diseo de la cubierta: Joan Batall

(Concepto de gentica, evolucin histrica, cuerpo de doctrina, perspectivas actuales, lecturas

FUNDAMENTOS DEL ANLISIS GENTICO

1. Las leyes de Mendel.................................................................................................................

CAPTULO 3. Naturaleza y estructura del material gentico...................................................

1.1. El principio transformante en las bacterias.....................................................................

CAPTULO 4. Organizacin del material gentico.....................................................................

CAPTULO 5. Interacciones gnicas............................................................................................

CAPTULO 6. La herencia de los caracteres complejos.............................................................

2.2. Teora de los factores polmeros.........................................................................................

CAPTULO 7. Patrones de herencia extranuclear......................................................................

CAPTULO 8. Ligamiento y recombinacin...............................................................................

1. Los fenmenos del ligamiento y la recombinacin gentica....................................................

CAPTULO 9. Tcnicas especiales de cartografiado en cromosomas eucariticos..................

1. Anlisis de productos meiticos individuales...........................................................................

CAPTULO 10. Transferencias de genes en bacterias y bacterifagos.....................................

1. Demostracin del modelo semiconservativo.............................................................................

2. Origen nico, bidireccionalidad y carcter semidiscontinuo.....................................................

CAPTULO 12. Naturaleza del gen...............................................................................................

CAPTULO 13. La estructura fina del gen.................................................................................

CAPTULO 14. Biologa molecular de la funcin gnica...........................................................

CAPTULO 15. Cdigo gentico....................................................................................................

1. Caractersticas esenciales del cdigo........................................................................................

3.3. Fases del proceso de la traduccin.....................................................................................

CAPTULO 16. Regulacin de la expresin gentica en procariotas.........................................

CAPTULO 17. Regulacin de la expresin gentica en eucariotas...........................................

CAPTULO 18. Epigentica...........................................................................................................

CAPTULO 19. La tecnologa del ADN recombinante...............................................................

1. Contruccin de molculas de ADN recombinante...................................................................

CAPTULO 20. Aplicaciones de la tecnologa del ADN recombinante.....................................

CAPTULO 21. Genmica.............................................................................................................

CAPTULO 23. Bases moleculares de las mutaciones gnicas...................................................

1. Mecanismos de origen de las mutaciones gnicas espontneas e inducidas............................

1.1. Mecanismos de origen de las mutaciones espontneas......................................................

CAPTULO 24. Reparacin del dao gentico.............................................................................

CAPTULO 25. Mutaciones cromosmicas estructurales...........................................................

CAPTULO 26. Mutaciones cromosmicas numricas...............................................................

1. Euploida: monoploida y poliploida.......................................................................................

CAPTULO 27. Mecanismos de recombinacin..........................................................................

CAPTULO 28. Elementos genticos transponibles.....................................................................

1.1. Transposones simples: secuencias de insercin en bacterias............................................

GENTICA DE LA DIFERENCIACIN Y EL DESARROLLO

CAPTULO 30. Gentica del desarrollo.......................................................................................

CAPTULO 31. Gentica del desarrollo en vertebrados y plantas...........................................

1. Paralelismo entre la formacin de patrones corporales en insectos y vertebrados..................

1. Antecedentes histricos e inicio de la especialidad gentica....................................................

CAPTULO 32. Gentica del comportamiento.............................................................................

LOS GENES EN LAS POBLACIONES

CAPTULO 34. Fuentes de variacin (1)......................................................................................

CAPTULO 35. Fuentes de variacin (2)......................................................................................

CAPTULO 36. Gentica evolutiva...............................................................................................

Ha participado como investigador en numerosos proyectos de investigacin. Autor de ms

(Concepto de gentica, evolucin histrica, cuerpo de doctrina,

Los mecanismos de la herencia encierran los procesos fisiolgicos posiblemente

estudios en la Universidad de Olmutz ingres como fraile agustino en la abada de Brno.

para que pudiese operar la Seleccin Natural,

esperar an algunos aos hasta los trabajos

FIG. 1.1. La doble hlice de DNA y el cromosoma

in vitro de los cidos nucleicos de Severo

FIG. 1.2. El dogma central d la Gentica Molecular.

FIG. 1.3. Naturaleza fragmentada del gen.

abriendo nuevas perspectivas para comprender el significado de los diferentes tipos de