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Mdicaux

Collection de Prcis
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Anatomie pathologique,

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Paris et L. iNattan LARiuEii, ancien chef de Laboratoire la Facult.
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Facult de Paris.

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Beza.non, professeur agrg


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dition, xviii-640 pages, 148 figures
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Microscopie, par M. LangerOiX, prparateur

la Facult de Paris.

Prface de M. le P' R. Blanchard. Technique. Exprimentation. Diagnostic, xxiii-751 pages, 270 figures.

Examens de Laboratoire employs en


professeur

l'Universit

de

Genve,

clinique, par L. Bard,


avec la collaboration de

MM. G. HuMBERTetH. MALLET.i''eV/iYion,xiv-766 pages, 162 figures. lOfr.


Diagnostic mdical, par P. Spillmann etL. Haushalter, professeurs,
et L. Spillmainn, professeur agrg la Facult
xiv-569 pages, avec 181 figures

Thrapeutique

et

Pharmacologie, par

A.

de Nancy.

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agrg la Facult de Paris. -2" dition, xxx-984 pages ... 12 fr.
Mdecine lgale, par A. Lacassagne, professeur l'Universit de
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Lyon. 2" dition, 866 pages, 112 figures, 2 planches
Chirurgie infantile, par E. Kirmisson, professeur la Facult de
Riciiaud,

Paris. ^^ dition, xvin-796 pages, avec 475 figures

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Mdecine
de Paris,

infantile, par P. NoiicouHT, professeur agrg la Facult


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dition, 932 pages, 136 figures, 2 planches
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dition entirement refondue

Dermatologie, par

J.

122 ligures.

l'hpital Lariboi-

{Sous presse).

Dakier, mdecin de l'hpilal Broca. xvi-708 pages,


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la Facult
de Paris, et Hist, mdecin des hpitaux, ancien inspecteur gnral
des services sanitaires maritimes d'Egypte. 810 pages, 160 figures; et

Pathologie exotique, par Jeanselme, professeur agrg

12

2 planches

Parasitologie, par E.

Brumpt, professeur agrg

la

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Facult de

Paris. xxvi-yiO pages, 683 figures et 4 planches en couleurs.

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Pathologie chirurgicale, par MM. Bgouin, Bourgeois, Pierre Duval,


GossET, Jeambi'.au, Lecne, Lenormant, R. Proust, Tixier.

Tome I.

Patholofjie chirurijicale gnrale. Maladies gnrales des tissus,


Hachis, par P. Lecne et R. Proust, professeurs agrgs la Fac. de
Paris, et L. Tixier, prof, agrg la Fac. de Lyon. 1.028 pages, 349 fig. 10 fr.

Crne

et

Tome II. Tte, Cou, TJiorax, par II. Bourgeois, oto-rhino-laryngologiste


des hpitaux de Paris, et Ch. Lenormant, professeur agrg la Facult de
Paris, xii-981 pages, 341 figures
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Glandes mammaires, Abdomen, par MM. Pierre Duval,


Tome III.
A. GossET, F. Lecne, Ch. Lenormant, professeurs agrgs la Facult de
40 fr.
Paris, xii-782 pages, 352 figures

Pour paratre en

Tome

IV.

fvrier 1913

Organes gnito-urinaires. Membres, par MM.

P. Bgouin, pro-

fesseur agrgea la Facult de Bordeaux, E. Jeanbrau, professeur agrg la


Facult de Montpellier, R. Proust, professeur agrg la Facult de Paris,
L. Tixier, professeur la Facult de Lyon.

de Technique opratoire

Prcis

PAR LES PROSECTEURS DE LA FACULT DE MDECINE DE PARIS

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de plus de iOO figures,

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Tte et cou, par Ch. Lenormant. Troisime

Thorax

et

Abdomen,

membre

dition.

suprieur, par A. Sgiiwartz. Deuxime dition.

par M. Guib. Troisime dition.

Appareil urinaire et appareil gnital de l'homme, par Pierre


DuvaL. Troisime dition.

Appareil gnital de

Membre

la

femme,

par B, Proust. Troisime dition.

infrieur, par Georges Labev. Deuxime dition.

661-11.

Coulomniiers. Imp,

Paul BRODARD.

1-13.

PRCIS

DE MICROSCOPIE

PRCIS

va'^

MICROSCOPIE
.

TECHNIQUE

EXPRIMENTATION

DIAGNOSTIC

PAR

LE

D^ M.

LANGERON

Chef des travaux de parasitologie Tlnstitut de mdecine coloniale,


Prparateur la Facult de Mdecine de Paris.

PREFACE PAR M. LE PROFESSEUR R. BLANCHARD


Membre de l'Acadmie de mdecine.

270 FIGURES

DANS LE TEXTE

PARIS
MASSON ET
LIBRAIRES

DE

120,

G'%

:^---

DITEURS

l'aCADMIE

DE

MDECINE

bollevard saint-germain

1913

.^m^^

i-^

Tous droits de reproduction, de traduction

pour

et

d'adaptation reserves

tous pays.

Copyright by Masson et

C'" (1913).

PREFACE

Voil dix ans dj que

le D''

Lan^eron

est entr

au

Laboratoire de Parasitologie de la Facult de Mdecine


de Paris, en qualit de prparateur; ses travaux de

botanique m'taient connus, je savais trouver en lui un


naturaliste habile et consciencieux et attacher mon
Laboratoire un prcieux auxiliaire.

Mon

attente n'a pas

trompe il est devenu un trs habile micrographe,


un technicien consomm et, lorsqu'il me devint possible
t

de

lui

confier la

de

Institut

Parasitologie
savais que les lves
plus dvou

et le

des travaux pratiques

direction
1

Mdecine coloniale,

de

trouveraient

dmonstrateur

en

lui

le

guide

de
je
le

le

plus expriment.
L'autorit qu'il a acquise dans ce rle, ainsi qu'auprs
des lves du Laboratoire, m'a depuis longtemps engag

lui suggrer l'ide d'crire

micrographique. Sur

mon

un ouvrage de technique

par en
accepter l'ide, puis en ajourna l'excution, sous prtexte de connaissances insuffisantes, en ralit par un

sentiment d'excessive
il

finit

Le

insistance,

finit

il

modestie. J'insistai

encore,

et

par entendre raison.


livre

que j'attendais de

lui, et

que

j'ai

le

grand

plaisir de prsenter au public mdical, est incorpor par

PREFACE

VIII

une bibliothque de

Prcis de mdecine,
mais je ne crains pas de dire qu'il a plutt l'importance
d'un Trait, en ce sens que, bien loin d'tre un livre
l'diteur

lmentaire,

il

aborde

et

dans

expose

toute

leur

diverses questions ou scientifiques ou praampleur


tiques qui sont de nature intresser tous ceux qui
travaillent dans les laboratoires d'histologie, de zooloi^ne,
les

de botanique, de parasitologie, en un mot et d'une faon


plus gnrale, dans les tablissements o l'on tudie
l'une

ou

l'autre

des branches multiples qui sont du

ressort de la Biologie.

Les livres de technique microscopique sont nombreux


dj, mais presque tous, et les plus prtentieux sont

ceux qui prsentent le plus ce caractre, s'obstinent


rpter, en se copiant les uns les autres, des formules
des mthodes dsutes. M. Langeron a eu
mrite de couper court avec tout ce fatras et de ne

surannes
le

s'en

tenir

lesquels
lui

il

et

qu'aux procds vraiment nouveaux, avec


est trs familiaris et dont la valeur relative

est bien

connue. Ce

lui-mme nombre de

il

l'a

fois, et l'on

ses apprciations, car

exprience. Ce que

indique,

appliqu
peut s'en rapporter
sont le fruit de sa propre

qu'il

elles

je dis

l n'est

pas seulement vrai

c'est tout aussi


pour la technique micrographique
exact en ce qui concerne la partie instrumentale et la
partie exprimentale de son ouvrage.
:

C'est donc, dans

toute la force du terme, un livre

vcu et longuement mri que j'ai mission de prsenter


aux amis des sciences mdicales et naturelles. Ce livre
double emploi avec aucun autre, parce qu'il est
conu sur un plan entirement nouveau et parce que,
dans chacun de ses chapitres, il porte l'empreinte de son

ne

fait

PREFACE

IX

va devenir indispensable dans tous les laboratoires de biologie et il sera, dans une large mesure, un
auteur.

11

instrument de progrs scientifique. En effet, grce un


tel guide, se trouvent mises la porte de chacun des

mthodes perfectionnes, souvent

dlicates,

mais d'un

rsultat certain, la condition de suivre la lettre les

prescriptions formules par l'auteur et les tours de

main

dont une longue exprience lui a dmontr les avantages. Le succs sur lequel je compte pour cet ouvrage
viendra dmontrer que je n'ai pas apprci d'une faon
trop logieuse les mrites du D"" Langeron et que j'ai eu
lui proposer d'crire un tel livre, dont
besoin se faisait depuis longtemps sentir.

raison de

R. Blanchard,
Professeur de parasitologie
la Facult de mdecine de Paris.

le

TABLE DES MATIRES

Prface

vu

Table des matires

xi

xix

Introduction

PREMIRE PARTIE
^

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES


Chapitre premier.

II.

Principe du microscope

Partie mcanique du microscope.


I. Le pied du microscope
II.

III.

III.

La

.'

10
12
18

platine

Le tube

25

Appareil d'clairage
Sources lumineuses
Emploi de l'appareil d'clairage
Rsum de l'emploi de l'appareil d'clairage.

IV.

V.

VI.

91

93

Oculaires

Formation de l'image microscopique.


Thorie de

VIL

42

'6
88

96

Notation des oculaires

34

46

Objectifs
Classification des objectifs
Notation des objectifs
Tableaux de concordance

31

la

mise au point du microscope.

Microscopes de voyage

98

104

105

XH

TABLE DES MATIERES

CiiAP.

VllI.

IX.

X.

Loupes

et

microscopes

...

108

....

113

dissection.

Microscopes prismes redresseurs

116

Appareils dessiner
1.

11.

IIS

Appareils dessiner miroir

Chambres

claires

dites.

proprement

123
127
128

Autres appareils dessiner


IV. Emploi des appareils dessiner

III.

XI.

Choix d'un microscope

134

XII.

Entretien du microscope

140

XIII.

L'observation microscopique
I.

II.

XIV.

Conditions de

la vision

145

microscopique.

145
152

Consquences pratiques

Emploi du microscope
I.

Manire de

saisir

160
et

de

160

microscope
IL Installation du microscope-

le

transporter
.

....

161

m.

Mise au point du microscope


IV. Mise au point des objectifs immersion.
V. Causes d'erreur dans la mise au point.
VI. Manuvre de la vis micromtrique et
observation microscopique
VII. Choix des objectifs et des oculaires
.

XV.

163
164

165
169

Dtermination des constantes optiques


du microscope
1.

II.

....

Dtermination du grossissement
Vrillcation du pouvoir dfinissant.

.
Vrification du pouvoir rsolvant.
IV. Vrification de l'tendue et de la planit

III.
.

du champ et des dformations de l'image.

XVI.

Mensurations microscopiques
I. Mensurations dans un plan
1.
2.

Procd de la chambre
Procd de l'oculaire

claire.

XVII.

Procd de mensuration directe.


Mensuration des paisseurs

Emploi de
I.

II.

m.
IV.

la

170
173
175
178

179
180

microm-

3.

l'^O

179
horizontal.

trique
II.

161

192

lumire polarise

192
196

Notions sur la lumire polarise


Appareils de polarisation

Microscope polarisant
Emploi du microscope polarisant

184
189
190

....

202
203

TABLE DES MATIERES


Chat.

XVlll.

clairage
scopie

III.

IV.

V.
Yl.

noir

XIII

et

ultramicrc208
.

IL

XIX.

fond

Principe de l'clairage fond noir


Appareils pour l'clairage fond noir.
Remarques concernant tous les appareils
fond noir
Technique de l'examen sur fond noir.
Indications de l'emploi du fond noir.
Notions sur l'ultramicroscopio

I.

209

211

214
220
221
224

Appareils accessoires

227

DEUXIEME PARTIE

MTHODES GNRALES
Chapitre premier.

II.

But de

la

III.

La prparation microscopique

Examen
I.

234
230
238

....

l'tat frais

239

Liquides d'examen

241
242

IL Mthodes d'examen
IIl. Indications de l'examen l'tat frais.

231

technique microscopique.

Nettoyage des lames et des lamelles


Altrations des lames et des lamelles

281

246

IV.

Colorations vitales

V.

Dissociation, digestion artificielle, dcal-

248

cification

234

255
258
202

Dissociation mcanique
IL Dissociation chimique
llI. Dcalcification
I.

VL
VIL
VUl.

Thorie de

Agents

IL
III.

IV.

V.
VI.

270

fixateurs

279

Mlanges fixateurs
I.

IX.

265

la fixation

Fixateurs
Fixateurs
Fixateurs
Fixateurs
Fixateurs
Fixateurs

hase d'acide osmique.

hase de chrome
base de sublim corrosif.
base d'acide pierique.
base de formol
base d'alcool

Choix d'un fixateur

279
282
282
284
286
286
287

TABLE DES MATIERES

XIV
GiiAP.

X.

Pratique de
Appendice.

XI.

la fixation

290

Mthodes spciales de

295

fixation,

Mthodes d'inclusion

298
299
313

Inclusion la paraffine
II. Inclusion au collodion
III. Inclusion mixte la parafiine et au collodion
IV. Autres masses d'inclusion
I.

Xll.

Mthodes

pour excuter les coupes.

Coupes
II. Coupes
III. Coupes
IV. Coupes
V. Coupes
1.

Appendice.

XIII.

317
318

319

main leve

325
327
329
330
339

au microtome main
par conglation
la paraffine
au collodion

Coupes par usure et polissage.

Traitement et collage des coupes

341

....

342

Coupes la paraffine
H. Coupes au collodion

342
350

Thorie des colorations

352

I.

XIV.

XV.
XVI.

Classification des colorants


Classification

des

mthodes

.356

de

colo-

ration

XVII.

XVUI.

Colorations au carmin

II.

XIX.

II.

III.

XX.

Coloration par la laque aluminique.


Coloration par la laque ferrique

Colorations par les couleurs d'aniline.


I.

369

Colorations l'hmatoxyline
I.

359

373
.

401
404

417

Colorations Fhmatoxyline
1.

2.
3.
4.

5.
6.
7.

382

382
382
392
397

Colorants basiques
A. Colorations progressives
B. Colorations rgressives
Colorants acides
Colorants neutres
Mthode de Romanovsky

Colorations combines
I.

374
376

Hmaline-osine
Chromotropes de Hcidenhain.
Mthode de Van Gieson
Mthode de Mann
Mthode au safran de P. Masson.
Triple coloration de Prenant.
Trichromique de P. Masson ...
.

418
418
421
421

422
423
424
424

XV

TABLE DES MATIERES


II.

III.

Colorations la safranine
Colorations la fuchsine basique.
1. Maffenta-vert lumire
2.

Trichromique de Cajal
aux bleus basiques

IV. Colorations

Bleu polychrome de Unna ....


osine et bleu de toluidine.
V. Mthode de Mann au bleu de mthylc1.

2.

osine

Chap.

430

XXI. Imprgnations mtalliques


XXII. Milieux d'observation et de conservation.
XXIII. Luts et vernis
XXIV. Dpigmentation
XXV. Liquides conservateurs pour collections

XXVII.

XXVIII.

XXVI.

432
436
447

430

452

macroscopiques

425
425
426
420
427
427
429

Prhension, contention, anesth&ie.


Rsum des mthodes gnrales
Principaux insuccs des prparations.
.

Causes et remdes.

456
459

403

TROISIME PARTIE

MTHODES SPCIALES
Premire seca'on.

Chapitre premier.

407

PROTOZOAIRES

408

Amibes
1.

II.

III.

471

Rcolte des Amibes


Fixation et coloration

471

473
475
477

Exprimentation

IV. Culture

II.

'

Flagells
I.

II.

Flagells du tube digestif


Flagells sanguicoles

479
480

Trypanosomes et Trypanoplasmes.
Exprimentation
III. Diagnostic des trypanosomoses humaines.
IV. Diagnostic des leishmanioses
V. Culture des Trypanosomes et des Leishma.

,,

nia

479

481

480
491

495
500

TABLE DES MATIERES

XVI
Chap.

)ll.

Spirochtes et organismes

sijirals.

Coloration des frottis


H. Coloration des coupes
III.

IV.

Procds spciaux

518

Sporozoaires
I.

II.

III.

518
524
527
528
529

Ilmosporidies
Coccidies

Gr^arines

IV. Myxosporidies

V. Sarcosporidies

V.

Infusoires

531

Technique de l'tude morphologique des Chlamydozoaires

Appendice.
I.

II.

111.

Deuxime

Chapitre premier.

Vaccine
liage

Trachome

section.

MTAZOAIRES

II.

m.

545

Rcolte des Helminthes


Fixation et conservation des Helminthes.
Recherche et conservation des oeufs d'Hel-

minthes
V. Sangsues
II.

Arthropodes

574
574
578
578
579
588
592
594
613

Technique gnrale
I.

II.

Linguatulides
Acariens
Ixodids

111.

Insectes

Hmiptres
Diptres

Hymnoptres

111.

IV.

Plankton

Examen

615

des liquides organiques

621

Technique iimatologique
Numralion

621

630
644
646
647

Cytodiagnoslic
Examen des crachats
Examen des urines

V.

545
549
562
570
573

IV, Exprimentation

540
540
540
543

545

Vers
I.

502

503
509
512

I.

Technique histologique lmentaire.

651

TABLE DES MATIERES


Chap.

VI.
VII.
VIII.

IX.

Chapitre premier.
II.

III.

Troisime section.

XVII

Technique cytologique
Analyse chromatique et microchimie
Mthode des injections physiologiques.
Technique microscopique mdico-lgale.

TECHNIQUE BOTANIQUE

Technique bactriologique

664

668
677
680

688

089

Technique mycologique

702

Histologie et cytologie vgtales

721

Bibliographie gnrale

734

Table alphabtioue

735

M. Langeron.

Prcis de Microscopi.

INTRODUCTION

Multumcgerunc. quiantenos
non peregerunt;
multum adhuc restt operis
multumquc restabit, noc ulli
nato post nulla scula prcludclur occasio aliquid adhuc
fuerunt, sed

a'ijicicndi.

SNQUE, Epist.,

6i.

Le mot microscopie veut dire examen de toutes espces d'objets,


du microscope.
Dans une matire aussi complexe, il faut faire un choix, sous
peine de donner l'ouvrage une tendue dmesure et d'accabler
le novice sous la multitude des procds. Je me suis donc attach
faire ressortir les mthodes gnrales de travail et dcrire ce
l'aide

qu'on ne trouve pas dans

les autres livres

de technique microsco-

pique.

Dans

les

ouvrages de ce genre, on

laisse

gnralement de ct

tout ce qui a trait au microscope et son maniement, parce qu'on


suppose ces notions connues du travailleur ou tout au moins faciles

connatre pour lui. Or il n'en est rien; tous ceux qui sont
appels diriger des lves savent que, la plupart du temps, ceuxci ignorent
totalement les principes les plus lmentaires de

du microscope. Aussi ai-je consacr un tiers de ce prcis


du microscope et de son fonctionnement.
La seconde partie renferme l'expos des mthodes gnrales de

l'emploi

la description

la microscopie. J'ai conserv celles qui m'ont paru rellement


pratiques et d'une application sre et facile. J'ai fait table rase
des procds suranns; j'ai laiss de ct tous ceux qui m'ont
paru trop compliqus ou qui font double emploi avec les mthodes

classiques. Mais, de ce que je ne cite pas une technique, il ne


s'en suit pas que je la dsapprouve. Dans un ouvrage de ce genre,

XX

INTRODUCTION

ne peut loul dire; j'ai du, pour ne pas drouler le dbulant,


passer sous silence d'excellenls procds.
Les mthodes spciales font l'objet de la troisime partie. C'est

011

surtout que le choix s'impose il est en mme temps des plus


difficiles, cause des procds particuliers. Chaque chercheur,
ici

qui s'est spcialis dans une branche, a perfectionn la technique


de cette branche et indiqu des tours de main qui peuvent tre
trs prcieux. Je donne le plus grand nombre possible de ces
indications de dtail, surtout pour les questions qui intressent
particulirement le mdecin

et

l'exprimentateur.

Malheureuse-

ne puis tre complet et tout citer. Mon choix n'est pas


guid seulement par la valeur des mthodes, mais surtout par le
dsir d'tre avant tout pratique. Aussi, dans mes indications biblio-

ment

je

graphiques, je ne mentionne que les ouvrages

les plus rcents et

ceux qui me paraissent les plus utiles connatre. J'ai d laisser


de ct, bien regret, d'excellentes publications; le fait de ne pas
citer n'implique donc,

de

ma

part,

ni oubli, ni dsapprobation.

Je n'ai pas parl de la technique des ractions humorales (agglutination et dviation du complment), i)arce que ces procds ne
font pas partie du domaine de la niicroscopie proprement dite; ils
sont d'ailleurs exposs, d'une faon trs dtaille, dans de nom-

breux ouvrages rcents.


J'ai

que

essay

et

contrl

je dcris. J'ai eu la

moi-mme presque
bonne fortune de

ratoires trs diffrents et de faire

toutes les mthodes

travailler

dans des labo-

beaucoup de botani(|uc

et

de

systmatique, avant de devenir zoologiste et })arasitologue. J'ai


donc eu l'occasion d'tudier des objets trs varis et d'essayer
beaucoup de teclini([ues. Je sais par moi mme combien les

dbutants peuvent tre dsorients, mme dans de trs bons laboratoires, faute de certaines indications pratiques. A plus forte
raison le travailleur isol, et particulirement le colonial, peuvent
tre arrts |)ar des obstacles, en apparence insurmontables, dont

un mot

d'claircissement les aurait dlivrs, en leur permettant


de poursuivre des travaux d'un grand intrt.
La valeur des procds techniques^ mme insignifiants en
apparence, est donc trs grande. Claude Bernard a dit excellem-

ment que
sont de

dans l'investigation scientifique,

les

moindres procds

plus haute importance et que les plus grandes


vrits scientifiques ont leurs racines dans les dtails de l'investila

gation exprimentale

').

INTRODUCTION
.

Mais que

le

XXI

dbutant ne s'y mprenne pas

la

perfection des

procds techniques n'est pas la condition essentielle des dcouvertes. Dans son admirable Introduction ftude de la mdecine exprimentale, laquelle je viens d'emprunter les lignes qui
prcdent, Claude Bernard dit encore, au sujet de la dcouverte,

neuve qui surgit propos d'un

Tide
qu'elle est

fait trouv
par
mais qu' il n'y a pas de rgles donner
pour faire natre dans le cerveau une ide juste et fconde . Plus
la mthode
loin, il ajoute que
exprimentale ne donnera pas des

hasard ou autrement

ides fcondes ceux qui n'en ont pas, elle servira seulement
dans toutes les
diriger les ides chez ceux qui en ont , que
sciences, le plus grand nombre des hommes dveloppe et poursuit

nombre d'autres ; et il conclut en disant


y avoir de mthode pour faire des dcouvertes.
Pour bien montrer que la perfection des techniques n'est pas la

les ides

d'un

petit

qu'i^ ne saurait

cause des grandes dcouvertes, il suffit de rappeler la gense de


ces dernires dans le domaine de la microscopie. Les premiers
tels que Leeuwenhoek, Swammerdamm,
Mali)ighi et
d'autres, ont ouvert la voie en observant avec des lentilles

matres,
tant

rudimentaires
Pasteur,

sans l'aide d'aucun

et

fondement

effectus sans le

de

colorant.

Les travaux de

nos

connaissances actuelles, ont t


secours des mthodes de coloration. Laveran a

du paludisme par de simples examens de


Schaudinn, qui avait pourtant sa disposition
l'arsenal moderne, est arriv voir le premier le Trponme, en
examinant simplement la srosit frache des chancres. De mme
dcouvert

sang

les parasites

l'tat frais.

Trypanosomes et les Spirochtes sanguicoles ont t dcouverts


par des examens de sang l'tat frais. C'tait bien simple, dirat-on mais encore fallait-il y penser. En effet, ce qui est difticile,

les

ce n'est pas d'apercevoir des organismes trs petits, c'est de voir


ce qui na pas encore t vu par d'autres. Il faut penser
regarder, savoir voir, puis interprter ce qu'on a vu tout est l.
Les grandes dcouvertes ont presque toujours t faites avec des
;

moyens excessivement simples, compenss par une grande puisles perfectionnements de la technique sont
venus ensuite, pour permettre de retrouver facilement les nouveaux objets dcouverts et d'tudier leur structure fine.

sance d'observation

Le

travail le plus difficile,

procd d'examen

le

en microscopie,

plus simple, l'tat

c'est

frais

prcisment le
ou par les colora-

tions vitales. C'est l qu'il faut dployer tous les artifices d'clai-

INTRODUCTION

XXII

rage et savoir observer. Avec de la patience et du soin, on russit


colore el on arrive sans trop de peine
toujours une prparation
il n'en est
la lire
pas de mme pour un simple examen entre lame
;

el lamelle.

J'cris ceci

drer

la

de ses

pour

le dbutant,

prparation dfinitive,

elTorts. S'il

pense ainsi,

qui est souvent tent de consiet tiquete, comme le but

monte
il

est tout fait

dans l'erreur. Les

bonnes prparations, ne sont pas la fin


ce
sont seulement les moyejis qui lui
il
doit
tendre,
laquelle
le domaine de la microscopie, d'arriver la
dans
permettront,

mthodes techniques,

connaissance de

les

la vrit.

Les bonnes prparations sont des docu-

ments prcieux, qu'il faut conserver avec soin et accumuler en


nombre aussi grand que possible; mais, en fin de compte, ce sont
seulement des matriaux. Il faut ensuite les mettre en uvre et,
pour cela, il n"y a pas de mthode technique.

La puissance de

la

pense

et

de l'observation sont

les

dons

naturels ncessaires pour effectuer de grandes dcouvertes. Mais


s'il n'est pas donn tous d'en faire, tout observateur patient et

peut noter des faits, qui, lorsqu'ils sont bien


sont
observs,
susceptibles d'clairer singulirement des questions
mal connues. Pour s'exercer obseiver, il n'est pas de meilleur
consciencieux

rpter les observations et expriences, publies par


des matres d'une autorit reconnue, sur un point quelconque de
microscopie. On choisit ce point, suivant ses tendances person-

moyen que de

nelles et suivant le matriel dont

on dispose.

11

faut s'appliquer

minutieusement, dans les plus petits dtails, toutes les


et de biologie du sujet qu'on s'est
particularits de morphologie
la plus scrupuleuse
propos. Il est indispensable de s'astreindre
vrifier

exactitude, en dcrivant et dessinant tout ce qu'on observe. C'est


seulement ainsi qu'on arrive dvelopper son acuit visuelle et

son jugement.
En terminant cette introduction, je liens exprimer mon
excellent matre, le professeur R. Blanchard, toute ma reconnaissance pour sa prface si bienveillante, et pour la libralit avec
sa riche bibliothque". Je remercie tous ceux
laquelle il m'a ouvert
qui

m'ont donn

des renseignements

ou

des

titude

le D'"

E.

Deux
ma gra-

conseils.

excellents collgues et amis ont particulirement droit

Brumpt m'a gnreusement prodigu une


et indites, puises

foule

dans son trsor exp-

d'indications prcieuses
rimental et a eu l'obligeance de revoir toutes

mes preuves

je

INTRODUCTION
dois

au

XXIII

outre de

P.

Masson,
multiples dtails, plusieurs
mthodes ratioDuelles et sres, qui mritent de devenir classiques.
Je souhaite que ce Prcis vienne en aide aux nombreux traD'"

vailleurs de

bonne volont que suscite

le

merveilleux essor des

pathologie animale ou vgtale. Le microscope n'est plus un instrument rserv aux seules
recherches de science pure; il est devenu un moyen de diagnostic

sciences naturelles, appliques

la

permis de ngliger. A ceux qui savent l'interroger,


rvle toujours des faits intressants, et il procure, mme aux

qu'il n'est plus


il

plus modestes, des satisfactions qui compensent amplement les


petits dboires de l'apprentissage.

Paris, 31

dcembre

1912.

M. Langeron.

PRECIS
DE

MIGROSGOPIE
TECHNIQUE

EXPRIMENTATION

DIAGNOSTIC

PREMIRE PARTIE

LE MICROSCOPE
ET SES ACCESSOIRES
CHAPITRE PREMIER

PRINCIPE DU MICROSCOPE
Le microscope est un instrument (roplique qui permet de voir et
dludierdes objets que leur petitesse rend plus ou moins invisibles
il fournit de ces
Toeil nu
objets une image considrablement
;

agrandie. Ce rsultat est obtenu par des combinaisons de lentilles.


Le microscope est donc essentiellement constitu par deux sys-

tmes de lentilles qui forment la partie optique et sont portes


par un ensemble de pices reprsentant la partie mcanique. Ce
microscope correspond ce que les physiciens nomment micros-

cope compos, par opposition la loupe ou microscope simple^


constitu par une lentille ou })ar un systme de lentilles fonction-

comme lentille simple.


Un microscope, adapt aux

nant

besoins de la techni(jue moderne, se


compose d'une monture (par lie mcanique) d'un appareil d'clai,

rage, d'objectifs et d'oculaires [partie optique), et enfin d'un certain nombre d'accessoires destins aux mensurations, aux dessins, etc.

Pour

M. Langeron.

utiliser

compltement

Prcis de Microscopie.

les

ressources que fournil


1

LK MLCROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

microscope, il est ncessaire de coaiialre


l'emploi de chacune de ses parties.
le

la

sigiiificalioii

et

Rappelons d'abord en quelques mots le principe sur lequel est


le microscope et donnons quelques dlinilions indispensables

fond

pour comprendre la construction de sa partie optique. Dans ces


notions trs sommaires, nous faisons intentionnellement abstrac-

donne mathmatique, de faon conserver cet


exclusivement pratique.
son
caractre
ouvrage
Les lentilles sont des instruments d'optique qui
Lentilles.
produisent la convergence ou la divergence des rayons lumineux.
tion de toute

Elles sont construites en verre, sauf dans des cas particuhers. Elles
sont limites soit par deux surfaces courbes, soit par une surface

plane et une surface courbe. Dans le premier cas, elles peuvent


tre biconvexes, ou encore convexes-concaves; dans le second cas,

plan-convexes ou plan-concaves. Les lentilles surfaces


convexes sont dites encore positives, convergentes, collectrices ou

elles sont

grossissantes; les lentilles surfaces concaves sont dites ngatives,


divergentes, dispersives et fournissent une image rduite. Dans le
cas des lentilles convexes-concaves, c'est la surface courbure

plus accentue qui dtermine les proprits de la lentille.


Ces proprits des lentilles sont dues aux phnomnes de rfraction que subissent les rayons lumineux qui les

la

Rfraction.

traversent. Lorsqu'un rayon lumineux, dit rayon incident, arrive


la surface d'une lame de verre faces parallles,
il n'est
pas dvi de son trajet rectiligne en passant de l'air dans

normalement

l'air. Au contraire, si ce
rayon tombe
la lame du verre, il est dvi de sa direction
sur
obliquement
rectiligne, d'abord son entre dans le verre, c'est--dire au
moment de son passage d'un milieu moins dense dans un milieu

le

verre et du verre dans

moment de sa sortie du verre et de son


nouveau passage dans un milieu de moindre densit.
Cette dviation se nomme rfraction. La nouvelle direction que
prend le rayon rfract dpend de la densit du milieu travers.
Lorsque le rayon incident passe de l'air dans le verre, il se
rapproche de la normale au point d'incidence; au contraire,
plus dense, puis au

du verre pour repasser dans l'air, il s'loigne de


normale. La figure 1 rend compte de ce phnomne. Soient
nn la normale au point d'incidence b, ob le rayon incident,
lorsqu'il sort
la

bc la direction du rayon rfract aprs passage d'un milieu


moins dense dans un milieu plus dense (bc se rapproche de la

PRINCIPE DU MICROSCOPE

normale nn'), cd la direction du rayon rfract aprs passage


d'un milieu plus dense dans un milieu moins dense {rd s'loigne
de la normale ??').

Rfraction dans les lentilles.


Dans
qui nous intressent, la rfrac-

les lentilles

convexes,

les seules

tion se produit suivant les mmes lois.


L'tude sommaire de ces phnomnes
est indispensable

les

pour comprendre

proprits des lentilles. Prenons d'abord

comme exemple une


vexe
a, 6,

(iig'.

c,

lentille

trois

Supposons

2).

rayons

normale

dont l'incidence est

par rapport la face plane de la lentille.


Ces rayons ne seront pas rfracts; ils
vont traverser la lentille, arriver la

Fig.

n'est

lentille,

pas rfract.

Rfraction tralanae de verre

se

Il

faces parallles, ab, rayon


incident; bcd, rayon rfract nn\ normale au point
d'incidence b.
Original.

Le rayon hn, qui concide avec l'axe


la

1.

vers une

face convexe o leur sort est diffrent.

de

&

plan-con-

comporte comme s'il sortait, au niveau


du point d'mergence, d'une facette plane,

parallle la surface

d'incidence.

Les rayons a et c sont au contraire obliques par rapport


courbe de la lentille.
.3^
Ils vont donc tre rfracts

la

surfiice

de

la

nor-

male xy, x'y' au point

d'in-

et

s'loigneront

cidence,

passent

puisqu'ils

du verre dans

l'air.

rapprochent de

l'axe

lentille et vont venir

le

rayon bn au point

Deux

Ils

se

de

la

couper

/"(lg. 2)

considrations

rsultent de ces

lois

Fig.

Rfraction,

dans

une

lentille

plan-convexe, a, ,c, rayons incidents paral-

lles; xy, x'y\


dence xc' xa',

Tout rayon passant par


centre d'une lentille n'est

1
le

2.

de la

lentille.

normales aux points


rfracts

rayons
Orifjinal.

/',

d'inci-

foyer

pas rfract
la
2 Tout rayon ne passant pas par le centre est rfract
dviation est d'autant plus grande qu'il traverse la lentille en un
point plus loign du centre. Les rayons ainsi rfracts conver;

gent tous en un point qui est

le

foyer de la lentille.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

Foyer.
les

verger

Le foyer

rayons

est

donc

parallles

le

on

point

Taxe,

viennent

aprs

con-

travers

avoir

la

lentille.

On

peut facilement s'en rendre compte en recevant sur une


plan-convexe ou biconvexe les rayons provenant d'une

lentille

source lumineuse trs loigne, par exemple du

soleil.

Ces rayons

sont parallles et on les voit converger en arrire de la lentille en


un point qui est la fois trs lumineux et trs chaud, d'o le nom

de foyer. Les rayons calorifiques suivent


rayons lumineux.

La distance
Distance focale.
le foyer du centre de la lentille.
pare
En

ralit cette dfinition n'est

la

mme marche que

les

focale est la distance qui s-

pas exacte, car la distance focale est

celle qui spare les foyers des plans principaux de la lentille. Les plans
principaux sont les plans perpendiculaires l'axe de la lentille, nu

niveau desquels se coupent les rayons incidents et rfracts. Prati(iuement nous ne pouvons pas tenir compte de cette marche relle des
rayons et nous compterons la
distance focale partir du centre
de la lentille.
Nous avons, pour plus de simplicit, pris le cas dune lentille
plan-convexe. La marche des

rayons est fondamentalement la

mme

Rfraction dans une lentille


biconvexe. a,b.c, rayons incidents; /",
foyer; premire rfraction en ' et c';
deuxime rfraction en e' et '.

Fig.

3.

yexe
^g^

dans une

(fig.

jg^

3).

diffrence

ravons subissent deux

rfractions

uricniud.

bicon-

lentille

La seule

successives,
^

la
.

pre-

.-n

miere en entrant dans la lentille,


la seconde la sortie, puisque

ces rayons, sauf celui qui passe par l'axe oplique, se trouvent tre obliques par rapport aux surfaces convexes. Pourtant, dans les constructions trs simples que nous avons faire, nous ngligerons ces deux
rfractions et nous supposerons (jue les rayons incidents ne sont
rfracts qu'une seule fois, au niveau d'un plan perpendiculaire l'axe

optique et passant par

le

centre de

Formation de l'image par

la

lentille.

les lentilles convexes.

Les

phnomnes de rfraction que nous venons d'tudier vont nous


permettre d'expliquer comment les lentilles peuvent former des
images.

Prenons une

lentille

])iconvexe et

un

ohjet.

L'image de cet

ohjet variera suivant qu'il sera plus ou moins loign de la lentille.


Trois cas peuvent se prsenter
:

1"

L'objet

est trs loign

de

la

lentille,

une distance plus

PRINCIPE DU MICROSCOPE

grande que le double de la dislance focale. L'image sera relle^


renverse et d'autant plus petite que Tobjel sera plus loign.
C'est le cas des objectifs pliotographiques.
2 L'objet est plac un peu au del du

foyer, l'image sera


relle, renverse et d'autant plus grande que l'objet sera plus
rapproch du foyer. C'est le cas des objectifs de microscope.
le foyer. L'image sera
3''
L'objet est plac entre la lentille et
virtuelle, droite et d'autant plus petite que l'objet sera plus rapde la lentille. C'est le cas des loupes et des oculaires de

proch

microscope.

Ces

lois

sont les

mmes pour

mant un systme centr.


Lentilles concaves

les

combinaisons de

lentilles for-

Ajoutons, pour

tre complet, que les


concaves donnent toujours une image virtuelle et ren-

lentilles

verse, place entre le foyer et la lentille. Cette image est d'autant plus petite et plus rapproche
(loign

de

du foyer que

l'objet est plus

la lentille.

Les images relles sont formes par des


relle.
elles
convergents,
peuvent tre recneillies sur un cran ou
rayons
sur une plaque photographique.

Image

Les images virtuelles sont dues des


sont pas constitues comme les images
ne
rayons
relles par une vritable convergence de rayons. Ce sont des
images purement subjectives qui ne peuvent tre recueillies sur
un cran ou une plaque photographique. Nous ne les percevons

Image

virtuelle.

divergents; elles

que parce que notre il suit


gents en arrire de l'objet et

le

prolongement de ces rayons diverconverger de manire cons-

les fait

tituer l'image virtuelle. Ces images jouent un grand rle dans les
instruments d'optique.

deux

Prenons

exemples

pour

montrer comment

se

forme

l'image relle d'un objectif microscopique simple et l'image virtuelle d'une loupe.

un peu au del du foyer


(fig. 4) est plac
biconvexe. Le rayon ae, parallle l'axe optique,
est rfract au foyer f et continue son tiajet rectiligne jusqu'au
P'" cas.

f d'une

L'objet ab

lentille

point a', o

il

rencontre

le

rayon ac qui, passant par

le

centre de

rayons qui ])artent du


a
former
se
runissent
donc
a'
en
point
l'image du pointa.
pour y
Il en est de mme
b
les points qui se
et
tous
le
pour
pour
point
la lentille,

n'a pas t rfract.

trouvent entre a et

b.

Comme

le

Tous

les

point a se trouve de l'autre ct

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

de Taxe opli(nie par rapport au point a, il en rsulte


que Timage
est renverse. En outre c'est nne
image relle qu'on peut recevoir
sur un cran.

cas.

2*^

L'objet aO

(lig.

5) est plac en dedans

d'une

du foyer

/",

lentille bicon-

Parmi

vexe.

rayons mis par


jet, les

fracts

les
l'ob-

uns sont rviennent

et

au foyer
f. Les autres, ac
et 6c, ne sont pas rse runir

continuent

fracts,

leur trajet rectiligne


et

4.

Fig.

du

Image

relle. L'objet ab est plac


cib'

foyer, l'image

verse.

ne peuvent conavec
les

verger

est relle,

en avant

agrandie

et

ren-

Original.

rfracts
une

rayons

pour

former

image

relle.

Mais

de ces rayons qui paraissent converger en arrire


de faon former l'image virtuelle et agrandie a'b'.

l'il suit le trajet

de

l'objet,

Celle-ci se trouve toujours en arrire de l'objet et c'est elle seule

que

l'il

peroit.

Formation de
Limage dans le
microscope compos.

nous

savons

Ce que
des

proprits des lentilles va nous perFig.

5.

Image

dedans du foyer, l'image


et droite.

est ainsi

parce

L'objet ab est

plac en

a'b' est virtuelle,

agrandie

virtuelle.

microscope compos. Cet instrument

Original.

nomm

qu'il est

par opposition

mettre de comprendre le principe du

la

loupe, ou microscope simple,

form de deux svstmes de

lentilles.

Ces deux

systmes, qui doivent tre centrs, c'est--dire avoir le mme axe


optique, peuvent tre considrs chacun comme une lentille
simple.

La

lentille

qui est tourne du ct de l'objet se

nomme

objectif

PRINCIPE DU MICROSCOPE

possde une distance focale trs courte. Il est donc facile de


un peu au del de son foyer, de faon obtenir une
image relle, renverse et agrandie.
et

placer Tobjet

La

par laquelle regarde Tobservaleur se

lentille

Elle fonctionne

observer

comme

et

loupe

agrandir

relle fournie par Tobjectif.

tance

entre

rociilaire

nomme oculaire.

et sert

l'image

La

dis-

et

Tobjectif
doit donc tre calcule de telle sorte

que l'image

relle

lentille objective se

fournie par

la

forme en dedans

du foyer de la lentille oculaire.


Le grossissement fourni par

le

microscope compos dpendra donc


d'abord de la longueur focale de
l'objectif. Plus cette longueur sera
petite et plus l'objet sera

de

l'objectif,

rapproch

plus l'image relle sera

grande. Le grossissement dpend en


outre de la longueur focale de la
lentille oculaire qui grossira d'autant

plus l'image

relle

que son foyer

sera plus court.

Une

construction
trs
simple
rendra compte de cette marche des rayons. Soient Obj l'ob-

(fig. 6)

jectif

et

Oc

l'oculaire,

ab

6.
Principe du microscope
compos. Obj., objectif; Oc, ocu-

Fig.

laire

ab, objet.

Original.

l'objet,

le foyer de l'oculaire. La lentille


foyer de l'objectif,
fournit limage relle, renverse et agrandie a'b'.
objective
Cette image se forme en dedans du foyer
f' de la lentille oculaire.
L'il de l'observateur percevra donc, travers cette
dernire,

le

l'image virtuelle, droite et agrandie a"b" de l'image relle a'b'

CHAPITRE

II

PARTIE MCANIQUE DU MICROSCOPE


La

parlie

mcanique du microscope

nomme

se

ou

statif.

encore monture

Elle est de forme

de dimensions trs varia-

et

suivant

bles,

leur et

cunslruc-

le

le prix

de Tinslru-

menl.

On

divise gnralement
microscopes en grands
modles, moyens modles

les

et

microscopes de voyage.

Les grands modles


7, 8,

(fig.

de

tous

10) sont munis

les

perfectionne-

ments mcaniques qui assurent au travailleur le ma-

Aimum

de

rapidit,

de

prcision et de confortable
dans l'examen des prparations.

Ce sont des

ments en quelque

instru-

sorte uni-

aux
versels, qui se prtent
travaux les plus varis et
sont susceptibles de recevoir toutes les combinaisons
d'objectifs
Fig.

7.

Microscope grand modle de

Zeiss.

et

d'oculaires

quC tOUS

IcS appareils

accessoires

(polar iseurs,

ainsi

spectroseopes, cbambres pbotographiques,

elc

PARTIE MECANIQUE DU MICROSCOPE


sont dj d'un emploi plus res(fig. 9)
Sullisanls pour des examens bactriologiques rapides, ils
ne devienneni appropris tous les travaux micrographiques que

Les moyens modles

treint.

s'ils

sont

chariot.

munis d'un bon appareil d'clairage


Ce genre

et

d'une plaline

d'instrumentsest surtout pratique

pour

laboratoires

oi

vaillent de

les

tra-

nombreux

lves, auxquels il
faut fournir des mi-

croscopes plus simples et plus robustes

que
tant
ploi

grands momais permet-

les

dles,

cependant l'emdes objectifs

immersion.
Enfin

les

microscopes
dent des

])elits

rponbesoins

trs restreinls.
difficile

un

(Tv

revolver

Il

est

adapter

ou

un

appareil d'clairage;
ils

._.

ne peuvent donc

^f^jS^gfep^^^

fournir que des grossissements faibles et

moyens, jusqu' 500


ou 600 diamtres. Ce
sont des instruments

qui

Fig.

Microscope grand modle de Stiassnie.

ne conviennent

que pour des examens

trs

sommaires, des travaux

lmen-

de botanique ou des tudes de systmatique.


de leurs principaux inconvnients est leur peu de stabilit,

taires

Un

8.

de zoologie

et

qui rsulte de leur petit volume


tine est aussi trs petite el

et

de leur faible poids. La pla-

peu commode. Ces

petits microscopes
ce
peuvent rendre des services comme instruments de voyage
microsvritables
aux
de
encore
infrieurs
ils
sont
vue,
point
:

copes de voyage ou microscopes

[liants (p.

105).

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

10

Nous prfrons beaucoup ces petits modles les montures pour


examens sommaires telles que celle que reprsente la figure 11. Le
pied est suflisamment stable et la platine, qui est trs large,
permet de manipuler commodment. La crmaillre est d'une

9.
Microscope moyen modle
de Stiassnie. Modle pliant pouvant
servir de microscope de voyage.

Fig.

Fig.

10.

Microscope grand modle

de Leitz, platine carre.

pour permettre de mettre au point des objectifs


donnant un grossissement d'environ 300 diamtres.
Toute monture, quelle que soit sa complication, prsente considrer un pied^ une platine et un tube.

finesse suffisante

I.

Il

existe

LE

PIED DU MICROSCOPE

deux formes principales de

pied,

le

pied

en

fer

cheval et le pied anglais.

Le pied en

fer clieval est,

d'une lourde masse


cintre

supporte

une

en

comme

forme de

nom l'indique, form


cheval, dont la partie

son

fer

tige sur laquelle

repose tout

le

reste de

l'appareil.

Le pied anglais, trs variable de forme, est fondamentalement


un trpied, dont les branches sont diversement cartes, courbes,

PARTIE MECANIQUE DU MICROSCOPE

Ce genre de

bifiirques ou vides.

comme

pied, gnralement considr

prcdent, est aussi plus lger et


malgr cela un peu plus stable, cause de Tcartement des branches.
le

lgant que

plus

Microscope inclinant.
sont

que

dits
la

moyens microscopes

suprieure du pied
charnire autour de

laquelle l'ensemble de

du tube peut

platine et

la

se dplacer

dans un

Gnralement

vertical.

plan

et

partie

une

porte

Les grands

c'est--dire

inclinants,

le

immobilis

tre

microscope peut
dans une position quelconque au
moyen d'une sorte de clef ou levier
qui

fait

modles

Dans

pression.

(fig.

et 9), la

certains

longueur

de l'axe horizontal autour duquel


tourne la partie suprieure du

microscope permet d'tablir en per-

manence un serrage

suffisant

et

dispense de l'emploi du levier.


Les avantages que procure un
:^

"

microscope inclinant sont multiples.


D'abord cette disposition est presque
11

1.

la

pour

mdiSpensable

En

tOgraphie.

effet

il

au point de vue de
de la commodit de
horizontaux.

-1
miCropho-

Il

y a avantage,

t^ig-

H-

pour
{'.es

^^

^"
de

Leltz
Microscope
sommaires avec

examens

grande platine, sous laquelle


un diaphragme tournant.

se trouve

stabilit et

la

mise au point, employer les appareils


faut donc, dans ce cas, pouvoir placer le tube du
la

microscope horizontalement. D'autre part, bon nombre d'observateurs travaillent avec le microscope inclin. 11 est certain que
l'on est ainsi dans

une

position

beaucoup plus confortable

quelle

hauteur respective de la table et de la chaise, on


que
sans tre oblig de pencher pniblement la tte
observer
peut
comme lorsque le tube du microscope est vertical. Mais on ne
peut utiliser cet avantage qu'avec des prparations termines
soit

la

bien lutes, et encore, mme avec ces prparations, l'emploi


des objectifs immersion est peu agrable, parce que la goutte
d'huile de cdre, obissant la pesanteur malgr sa viscosit,
finit par couler et par dpasser les bords de la lamelle, puis de la
et

lame.

On

a bien

la

ressource de n'employer qu'une trs petite

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

12

mais on

goiille,

toin'DO

alors

dans un autre inconvnient

un

dplacement in'me trs })eu tendu de la prparation fait perdre


le contact entre la lentille frontale de robjeclif et la goutte d'huile

Fimage dis{>ara{t. Le travail avec le microscope inclin, quoique


beaucoup plus agrable, ne convient donc que ])Our des cas trs
limits. 11 devient tout fait impraticable lorsqu'on examine des
et

prparations extemporanes, de petits organismes vivants, et en


gnral toutes les prparations faites en milieu liquide et non
lutes.

Il

en

est

de

mme

lorsqu'on suit au microscope une colo-

une diffrenciation de frottis ou de coupes baigns par


un liquide nous verrons que cette opration est trs frquente
dans les travaux de laboratoire. Lorsqu'un dessine la chambre
ration ou

mme

on dispose d'une table spciale, il est vritablele microscope inclin. Dans


l'immense majorit des cas, le micrographe doit donc travailler
avec le microscope vertical le seul moyen d'viter une position
claire,

si

ment peu pratique de dessiner avec


:

une grande fatigue des muscles du cou,


consiste rgler la hauteur de la table de travail ou de la chaise,
de manire ce que l'oculaire du microscope arrive peu prs au
niveau de Til de l'observateur. Les tabourets sige mobile, au

incommode de

la

tte et

moyen d'un support

vis, peuvent rendre de grands services dans

ce cas.

II.

LA PLATINE

elle
La platine est destine supporter les prparations
prsente en son centre une ouverture circulaire pour le passage
des rayons lumineux fournis par l'appareil d'clairage.
Dans la plupart des grands microscopes
Platine tournante.
:

cette platine est ronde, peut tourner dans

un plan horizontal

et

de plus, au moyen de deux vis latrales, elle peut effectuer des


mouvements lents eu tous sens. Ce mcanisme est gnralement
trs prcis et fort commode pour le centrage exact de fins dtails

Malheureusement, les mouvements


et ne peuvent tre utiliss
amplitude
qu'une
pour l'examen mthodique d'une vaste surface.
Au contraire, les platines chariot ou double mouvement,

et

pour

n'ont

les

mensurations.
trs

faible

dans deux directions perpendiculaires, ont un champ beaucou})


plus tendu. Elles permettent l'examen mthodique et complet
des prparations entires et facilitent

la

recherche d'organismes

PARTIE MCANir)LE DU MICROSCOPE


les

trs dissmins, tels

Hmatozoaires dans

les

13

lames de sang.

que
Leur emploi conomise beaucoup de temps et de fatigue. Elles
sont munies de deux verniers, au moyen desquels on peut reprer
et retrouver coup sr un point quelconque d'une prparation.
Prenons quelques exemples parmi les
Platine carre.
modles de platines les plus usits. La figure 10 nous montre la
forme de platine la plus simple, qui est la platine carre. C'est
une simple plaque de mtal noirci, de verre, ou plus souvent

d'bonite, perce en son centre d'une ouverture pour le passage


des rayons lumineux. La prparation peut tre immobilise, sur

ce genre de platine, au moyen de deux valets. Ces valets sont


forms <le deux lames llexibles traverses Tune de leurs extr-

mits par deux liges rigides et cylindriques. Les deux tiges


pntrent frottement dur dans deux orifices placs droite et
gaucbe, sur le bord postrieur de la platine. Les lames tlexibles
appuient ainsi sur la prparation la manire de ressorts. Ces
valets

peuvent tre de fabrication plus ou moins com})lique. Ceux


la lame tlexible est fixe
(fig. 9) sont bien compris

de Stiassnie

la tige rigide par Fintermdiaire d'un ressort boudin; on peut


ainsi dgager la prparation en faisant basculer la lame flexible,

sans avoir toucher aux tiges rigides, enfonces frottement dur

dans

la })latine.

Platines chariot.
d'ailleurs de l'emploi

valets.

|)lalines chariot

dispense

Ces platines rpondent

un

permettre Texamen mthodique et complet de


surface des prparations: 2" faciliter le reprage des points

double but
toute la

Lemploi des
des

1*^

intressants et permettre de retrouver ces points sans difficult.


Prenons comme exemple la grande platine chariot de Zeiss,

reprsente par les figures 7

et

12. Cette platine est forme de

superposs. L'tage infrieur est constitu par une


platine tournante ordinaire, c'est--dire par une ])laque circulaire
pouvant tourner autour de l'axe du microscope et susceptible en
trois tages

outre de faibles dplacements latraux. Cet tage infrieur supporte un premier chariot destin dplacer la prparation d'avant

en arrire. Sur ce premier chariot est fix un second, fournissant


le mouvement latral Ce second chariot est fix au
{iremier sim-

plement par une vis, trs visible sur la figure il, et peut s'enlever
avec la plus grande facilit. On a alors une platine tournante ordinaire, sur laquelle on peut fixer des valets.

Pour examiner une prparation, on

carte l'querre de droite,

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

14

qui glisse frottemenl doux dans une rainure du cliariot suplixe, comme nous le verrons

rieur (l'querre de gauche est

plus loin, par une vis de pression). On place la prparation


bien entre dans l'querre de gauche, et on repousse
plat,

Tquerre de droite jusqu' ce que celle-ci vienne buter contre la


lame porte-objet. On peut alors dplacer la prparation de gauche
droite et d'avant en arrire au

Grande

moyen

des deux boutons qui se

a, levier servant immobiliser


platine chariot, de Zeiss.
destine arrter le mouvement de rotation.
La
lame centrer est place entre les deux querres. Elle indique la place que

Fig.

1-2.

le chariot infrieur; b, vis

doit occuper

chacun des

trois verniers

pour que

la platine soit centre.

trouvent droite de la ligure. Il est facile d'imaginer comment,


en commenant l'examen par la partie suprieure du couvre-objet
(fig. 99), puis en avanant d'arrire en avant, par fractions gales,
mesures par le vernier I, on peut explorer mthodiquement toute
la prparation. Il suffit, en effet,
chaque tape marque par le
vernier I, de parcourir, au moyen du chariot dplacement
latral, loute la largeur de la prparation. L'tendue des dpla-

cements du chariot infrieur dpendra du grossissement employ

PART[E MCANIQUE DU MICROSCOPE


el (lu

champ de

l'objectif.

Pour ne

laisser

15

chapper aucun point,

faudra donc s'assurer que chacun des champs examins recouvre


lgrement le prcdent une fois la valeur du dplacement dteril

mine, il ne reste plus qu' avancer de quantits gales, mesures


exactement au moyen du vernier I.
Le simple examen d'une prparation ne rclame pas de prcautions
si l'on veut reprer exactement des points intressants
en inscrivant les indications des verniers et tre sir de les retrouver,
il faut procder encore au centrage de la platine.
Si on dsire un centrage de prcision, pour retrouver de fins dtails
un fort grossissement, ce centrage doit tre excut pour chaque
objectif, surtout si on se sert du revolver. Avec les changeurs d'objectif
coulisse (flg. 19) on peut obtenir un centrage parfait pour toute une
spciales. Mais

en ayant soin de centrer d'abord tous les changeurs.


L'emploi d'un oculaire rticule permet d'augmenter encore la prcision du centrage.
Cette opration trs simple peut tre excute approximativement
une fois pour toutes. Pour effectuer le centrage, on prend la plaque
centrer, qui est livre dans un crin avec chaque platine et on commence par mettre les verniers sur les divisions indiques par l'tiquette
de la plaque centrer. Notamment, on immobilise, au moyen de la vis
de pression, l'querre de gauche dans la position indique pour le
vernier IL Ceci fait, on libre, en desserrant la vis b, l'tage le plus
au moyen des deux vis de centrage, non
infrieur de la platine
reprsentes sur la figure 12 mais visibles sur les figures 7 et 21, on
amne exactement au milieu du champ la croix trace sur la lame
centrer. Une fois celte opration faite, on ne touche plus aux vis latrales et on immobilise la plaline tournante en serrant de nouveau la
vis b. Les chariots sont alors centrs pour l'objectif employ et on peut
retrouver facilement les points dont on aura repr la position au
moyen des verniers.
sont de petites rgles, gradues sur une longueur de
Ces verniers
9 mm. Ces 9 mm. sont diviss en 10 parties gales, qui correspondent
chacune 9/10 de millimtre la diffrence entre les longueurs d'une
division millimtrique et d'une division du vernier est donc de un
dixime de millimtre. Cet artilice permet d'valuer les diximes de
millimtre par la simple juxtaposition d'une chelle millimtrique ordinaire et du vernier. 11 suffit pour cela de lire le chiffre de l'chelle
srie d'objectifs,

'

du vernier. Soit 12 ce
millimtrique qui est le plus rapproch du
dans le vernier I de la figure 12. Puis on suit les divisions du
vernier, partir du U, jusqu' ce que l'une d'elles se trouve concider
avec un des traits de la division millimtrique. Soit, toujours dans le
vernier I de la figure 12, la 4" division de ce vernier, la longueur ainsi
mesure correspondra 12 mm. 4. En effet, cause de la valeur de la
diffrence entre une division du vernier et une division millimtrique,
chiffre

1.
Les verniers sont ainsi nomms du nom du gomtre Pierre Vernier,
d'Ornans (Doubs), inventeur de cet artifice, dcrit dans un ouvrage imprim
Bruxelles en 1631 et intitul La construction, l'usage et les proprit<-s du cadran
:

nouveau.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

16

du vprnier

0. 1, 2 et 3, qui prcdent celui pour le(|uel il y a


concidence sont distants du trait de la division millimtrique de 4, 3,
diximes de mm. Par suite, le trait 0, qui prcde de 4 divisions le
2,
trait 12, est distant de ce trait de 4 diximes de mm. On peut donc, au
moyen des verniers de cette plaline, reprer un objet, dans deux directions perpendiculaires, un dixime de millimtre prs.

les traits

Notons ds maintenant qn'en pratique


rien.

A mon

les verniers

ne servent

avis les constructeurs devraient les supprimer, de

manire diminuer un peu


le ])rix

faire

Pour

des chariots.

avancer

la

prparation
d'arrire en avant ou d'avant

en arrire, on n'a pas besoin


de vernier; on se contente
le
de
chariot
(l|tlacer

de l'tendue d'un champ.


Quant au reprage des
points

intressants,

est

il

trop long de le faire au vernier, de noter les chiffres


lus

et

la suite.

En

de

difficile

trop

remettre tout en

])lace

dans

outre, ces indi-

cations ne sont valables

que
pour un seul microscope.
Fig. 13.

Petite

Dans
avec

de Leitz

les platines

la platine

J'indique, i)age 228, des pro-

platine chariot de Leitz.

cds plus simples et plus


srs pour le reprage.
13), le chariot ne fait pas corps

(fig.

du microscope

est

donc amo-

une monture quelconque.


constitu par trois pices
1" un

collier qui

proprement

dite

il

vible et peut tre adapt sur

Le

chariot est

permet

de

ici

fixer

moyen d'une

vis

lappareil

de

pression;
et 3

vement antro-postrieur,

du microscope, au
chariot pour le mou-

colonne

la

un

un

chariot pour

le

mouvement

latral.

La prparation

est

fixe

sur ce dernic-r; elle est maintenue

l'querre de gauche, qui peut coulisser dans le chariot,


un
levier ressort. Le vernier de ce chariot est^ dans certains
par
modles, au vingtime, c'est--dire qu'il col'respond une lon-

contre

PARTIE MCANIQUE DU MICROSCOPE


giieur de 19

mm.

divise en vingt jDarlies.

li

"7

permet donc de

reprer 1/20 de millimtre prs.

Une bonne prcaution


collier sur la

chariots,

il

consiste fixer une fois pour toutes le


Si on dsire enlever les

monture du microscope.

de dgager de sa crmaillre le chariot antropoussant en avant, sans toucher la vis de pres-

suffit

postrieur en

le

du collier. La platine du microscope devient libre ainsi pour


manipulations que l'on dsire effectuer.
Il existe d'autres platines chariot
pourvues, en outre des vis

sion
les

de commande, d'un dplacement automatique. Stiassnie fabrique

Fig-. 14.

Oculaire

champ quadrangulaire

variable.

depuis quelque temps des platines de ce genre pour ses grands


modles (fig. 8).

Le mouvement automatique est produit par un levier qui commande un cliquet. Il y a un levier pour chaque chariot et la
manuvre de chacun d'eux dplace le chariot correspondant d'une
quantit dtermine. L'emploi de ce dispositif doit tre combin
avec celui d'un oculaire champ quadrangulaire variable (fig. 14).

On

arrive ainsi dterminer, pour

mouvements du

chaque

objectif, le

nombre de

levier ncessaires

pour dplacer la prparation


d'une quantit correspondant au champ embrass par l'objectif.
Ce dispositif permet de parcourir automatiquement, et sans en
chapper un seul point, des prparations trs tendues.
Ces platines peuvent rendre des services pour l'examen du sang
ou des matires fcales et en gnral pour tous les cas o il faut

laisser

rechercher

et

compter des corpuscules dissmins dans une pr-

paration.

Nous terminerons ici notre


Nous ne saurions les numrer
pour

ainsi

dire, son

M. Langeron.

modle

description des platines chariot.


toutes, car chaque constructeur a,

particulier.

Prcis de Microscopie,

On

voit

que

toutes,

en

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

18

par deux chariots, placs angle droit


dont les dplacements se mesurent au moyen de verniers.
Ainsi est remjjli le double but de ces appareils qui est de perdliiiilive, sonl constitues

et

mettre d'une part l'examen mthodique des prparations, d'autre


part le reprage des points intressants.

III.

LE TUBE

Le tube supporte la partie optique proprement dite du microscope, c'est--dire les oculaires et les objectifs. 11 est form de deux
cylindres creux, concentriques, glissant frottement l'un dans
Sa longueur est donc variable. Le tube intrieur doit
une
porter
graduation millimtrique, dont Tusage sera indiqu
l'autre.

plus loin (p. 87).


Le tube est adapt, par un bras horizontal,

la tige

qui sur-

monte le pied.
Dans les grands modles, destins

la microphotographie, le
tube est trs large afin d'viter les rflexions sur les parois et de
permettre de faire des photographies sans se servir d'oculaire et
sous un grand angle.

Colonne du microscope.

Cette tige, relie au pied par

l'articulation qui sert incliner la partie suprieure de l'instru-

ment, se

nomme

la

colonne du microscope. Dans

les

modles

construits jusqu' ces dernires annes (fg. 9), cette colonne renfermait la vis micromtrique servant la mise au i)oint prcise des
objectifs.
reil

Dans

les

micromtrique

qui relie

le

tube

statifs

grands
la

est report

colonne.

Mcanisme de mise au
objectifs se fait

modernes

(fig. 7, 8, 10) cet appa l'extrmit du bras horizontal

La mise au foyer des


point.
ce mouveen dplaant verticalement le tube
:

ment

s'effectue, dans les microscopes grands et moyens, par


l'intermdiaire de deux appareils, le mouvement rapide ou cr-

maillre et le

mouvement

lent ou vis micromtrique. Les petits


le mouvement lent micromtrique.

microscopes ne possdent que

Mouvement

La crmaillre qui sert au mouverapide.


elle porte des dents
fixe au tube lui-mme
dents
avec
les
galement obliq les d'un
obliques qui engrnent
petit pignon. Le tout est dispos de faon quo deux dents soient

ment rapide

est

toujours en prise

la fois.

On

vite ainsi tout relard dans la Irans-

PARTIE MCANIQUE DU MICROSCOPE


mission.

Le

petit

est

pignon

places de chaque ct du bras horizontal. Ce


est trs

commode pour

la

des objectifs trs faibles


s'efTectue
le

rapide

aussi pour relever rapidement le tube


les petits microscopes, ce mouve-

Dans

la main le tube dans un cylindre


Nous dconseillons absolument l'emmodles sans crmaillre un de leurs principaux

en faisant glisser

bras horizontal.

port par
ploi de ces petits

inconvnients

remploi du

mouvement

vis

mise au point grossire, pour l'emploi

et

et laisser la platine libre.

ment

19

deux grandes

actionn par

est

de ne

permettre
revolver porte-objectif et de
pas

Tclairage par condensateur.

Mouvement micromtrique.
mise au point prcise se

fait

La

encore, dans

plupart des microscopes, au moyen de


la vis micromtrique. Cette vis est place

la

dans

la

colonne et meut

et le bras qui le supporte.

un

fort ressort

tenir le

la fois

le

tube

Gnralement

antagoniste permet d'obvertical de va-et-vient.

mouvement

La tte de la vis micromtrique porte


une graduation tablie de telle sorte que
chaque division correspond un dplacement vertical de 1/100" de millimtre.

Ic?^

Ancienne vis
micromtrique des microscopes de Leitz.

Fig.

15.

Cette disposition permet d'valuer approximativement l'paisseur des objets, en


mettant au point successivement leurs parties superficielle et profonde et en reprant chaque fois la tte de la vis, au moyen de

Findex

fix

au tube.

La figure 15 reprsente le dtail de la vis micromtrique des microscopes de Leitz. iLa colonne est forme d'un prisme triangulaire sur
lequel glisse frottement doux une pice cylindrique taille, l'intrieur, exactement sur ce prisme. Celui-ci est creux et renferme un fort
ressort boudin, suffisamment puissant pour supporter le poids de toute
la partie optique du microscope. Le prisme se termine sa partie suprieure par une pice cylindrique, creuse d'un pas de vis qui sert
d'crou la vis micromtrique. Elle est en outre traverse par une
barre qui maintient la colonne creuse et limite la hauteur de son
ascension. La vis micromtrique possde une large tte, en forme
d'entonnoir, portant sur ses bords la division dont nous avons parl
plus haut. Sa partie filete est traverse par une tige d'acier qui appuie
sur la barre transversale fixe la colonne creuse et fait descendre
tout l'appareil optique. Le mouvement d'ascension se produit par
l'action antagoniste du ressort qui se trouve dans le prisme.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

20

Le mouvement de

qu'une tendue
deux
arrts
par
brusques.
En outre, la prcision de ce mouvement est forcment limite,
car on ne peut dpasser une certaine finesse dans la taille du pas
cette vis micromtriqiie n'a

d'environ 5 millimtres et

de

la vis

il

est limit

micromtrique, c'est--dire environ 0,5 millimtre.

Actuellement, la plupart des grands microscopes (fig. 7, 8, 10)


munis d'un mcanisme micromtiique beaucoup plus perfectionn. Ici encore chaque

sont

constructeur a son dispositif

Tous

particulier.

reposent

mme

sur le
consiste

principe qui
agir sur la vis

non

pas

directement, comme
l'ancien modle que

dans

micromtrique,

nous

venons de dcrire, mais par


l'intermdiaire d'engrenages
faire
qui permettent de
avancer cette vis de quantits trs faibles.

dans

truits,

Fig.

16.

En

le

nouveau mouve-

ment micromtrique
Mouvement micromtrique des

microscopes de Leitz, coupe verticale.


a, axe filet; 6, coussinet renfermant un
ressort; c, coussinet; d, roue dente;/,
pice en forme de cur; g, galet; k, support du galet; r, tambour gradu dont

sans

dans

fin,

les

outre,

modles bien cons-

les

et agit

fait xis

galement

deux sens.

Les microscopes de Zeiss sont


dispositif invent par
chaque
i
Berger
(fig. 17). Ici, l'ancien
prisme est remplac par un
chariot. Ce ctiariot est m par une vis micromtrique, mais celle-ci n'est
elle porte, sa partie infrieure, une roue
pas actionne directement
dente qui engrne avec une vis sans fin, termine par deux boutons
extrieurs. Le mouvement de descente est produit par un ressort antagoniste. Tout le mcanisme est enferm dans un support en forme de
poigne (fig. 7) qui le met compltement l'abri de la poussire et
des accidents. L'un des boulons extrieurs porte une division dont
chaque degr correspond un dplacement de 2 a.
Les microscopes de Leitz possdent un mouvement micromtrique
analogue (fg. 16). Deux boutons extrieurs mettent en mouvement une
vis sans fin a, qui s'engrne avec une roue dente d. Cette roue
dente porte, fixe sur son axe, une pice /, en forme de cur.
division reprsente

munis du

;/.

1.

Zeitschrift

f.

Instrumentenkunde, XVIII,

p. 129-133, 1898.

PARTIE MECANIQUE DU MICROSCOPE

21

un

galet g, maintenu par le support k, sur lequel


repose aussi le chariot du tube du microscope. Le poids de l'appareil
optique et l'action d'un puissant ressort assurent le contact permanent
des pices g et f, ainsi que de l'eng-renage d-a. Le ressort boudin, qui
Celle-ci

agit sur

se trouve la partie suprieure, maintient en place le galet g.

Fig. 17.

Mouvement micromtrique des microscopes de Zeiss (systme

Chacun

Berger).

des deux cts de la pice en forme de cur dessine une spirale dont la
une demi-rotation de
longueur est de 3 mm. La roue d a 60 dents
cette roue dplace le tube de 3 mm., donc chaque dent fait avancer le
mm. 1. D'autre part la roue d n'avance d'une
tube de 3/30% soit de
dent qu'aprs une rotation complte de l'axe a; comme le tambour r
que porte cet axe est divis en 100 parties, l'intervalle de chaque division correspondra donc
mm. 001, c'est--dire 1
Lorsqu'on tourne le bouton extrieur, le tube du microscope s'lve
:

ij,.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

22

tant que le galet remonte d'un ct ou de l'autre de la pice en cur.


Supposons que le galet soit arriv la pointe du cur et que l'on
tourne toujours la vis dans le mme sens, il redescend de l'autre ct
jusqu' ce qu'il soit arriv dans l'encoche. A ce point, il commence

remonter.
Ce mcanisme produit donc la descente ou la monte du tube dans
tous les sens et sans arrt. Il n'y a pas se proccuper de savoir si
l'on est arriv bout de course. Le contact de l'objectif avec la
lamelle est mme rendu inoffensif, car, peine a-t-on dpass le point
le plus infrieur de la course du chariot que celui-ci remonte immdiatement, quel que soit le sens dans lequel on tourne la vis a.
Ce diposilif dilfre, on le voit, de celui de lcrger par la suppression
de la vis micromtrique et son remplacement par une pice taille
d'une faon particulire.

mouvements micromtriques, quelle que soit la


sont conus, sont trs suprieurs aux anciens. Ils
permettent une mise au point beaucoup plus exacte et beaucoup
on vite aussi une grande partie de la fatigue ocuplus prcise
Ces

iioLiveaiix

faon dont

ils

laire

qui rsulte des efforts d'accommodation ncessits par une

mise au point imparfaite.


L'appi'ciation et la mensuration des paisseurs se trouvent
grandement facilites. Enfin le paralllisme des axes du mouve-

ment rapide

et

plus

et

rapide

l'autre.

Revolver.

du mouvement micromtrique rend beaucoup


beaucoup plus commode le passage de l'un

Un

accessoire inqiortant

du tube

est le revolver,

qui permet
changement rapide des objectifs. Le revolver est
constitu essentiellement par deux calottes sphriques concenle

triques et adaptes
l'une

trs

exactement
l'autre.

rieure

La

calotte

porte

une

sur
infsrie

de bagues, sr lesquelles
se vissent les objectifs.
calotte suprieure

La

forme

couvercle

et
s'adapte
sur les bagues avec assez
Fig. 18.

sire.

La

Revolver pour

En

la calotte

calotte suprieure est fixe

autour d'un axe


cope.

de prcision pour empcher l'entre de la pous-

trois objectifs.

qui est

plac en

partant de cette dfinition,

avant du
il

est facile

infrieure tourne

tube du microsd'imaginer toutes

23

PARTIE MCANIQUE DU MICROSCOPE

que peut prsenter le revolver. La calotte infrieure


nombre variable de bagues 2, 3 ou 4. La calotte
un
peut porter
suprieure peut tre chancre et former une srie de couvercles

les variantes

rester continue
spars, pour cliacune des bagues. Elle peut aussi
et former une vaste calotte pro-

comme

tectrice,

dans

rcents de Leitz

les

modles
Les

12).

(fig.

figures 8, 9, 10, reprsentent des


microscopes munis de cet organe

important. Ainsi, les objectifs


sont bien protgs de la poussire
et, pour passer de l'un Tautre,
il

suffit

d'un simple mouvement

de rotation.

Le choix d'un revolver


pas indilfrent.
les revolvers

Il

n'est

est certain

deux

que
ne

objectifs

conviennent que pour les microscopes de voyage ou pour ceux


qui sont destins aux sances

de travaux pratiques. En ce qui


concerne les grands microscopes,
les

constructeurs sont malheu-

reusement

trop

enclins

munir de revolvers
l

les

triples. C'est

une tendance fcheuse, car

le

revolver triple est trs insuffisant


dans la pratique. Nous verrons
loin

est

ncessaire

plus
d'avoir toujours sa disposition
trois objectifs sec de puissance
qu'il

Fig-.

r.t.

lisse,

Changeur

de Zeiss.

d'objectifs cou-

En haut

le

tube du

microscope portant la pice fixe.


En bas la pice mobile portant l'objectif,

par

l'intermdiaire

d'une

bague de serrage. A droite les deux


carrs servant au centrage, au moyen
d'une clef de montre.

un objectif immersion. Nous ne saurions donc trop


recommander de toujours choisir un revolver quadruple.
La longueur des objectifs doit tre calcule de telle faon
progressive et

qu'avec les systmes sec

il

suffise

de tourner

le

revolver pour

que l'image soit immdiatement visible. Un lger mouvement de


la vis micromtrique compltera la mise au point. Les constructeurs n'apportent pas toujours une attention suffisante ce dtail
important.
l'emploi

On

du

perd ainsi une partie des avantages que procure


puisque, au lieu d'excuter un simple

revolver,

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

24

mouvement de

rotation,

faut d'abord relever le tube

il

cope au moyen du mouvement rapide, puis refaire


point, aprs avoir

du microsla

mise au

chang Tobjectif.

Quelle que soit la prcision avec


Changeur d'objectifs coulisse.
laquelle les revolvers sont construits, le centrage des objectifs par
rapport au tube n'est jamais absolument rigoureux. Lorsque, pour des
recherches spciales ou pour la microphotographie, on veut obtenir un
prcis de la partie optique, on
d'objectifs coulisse de Zeiss (fig. 7 et fig. 19).

centrage trs

emploie

encore un autre avantage

Cet appareil possde


d'un nombre illimit

il

permet l'emploi

le

changeur

d'objectifs.
1 une pice fixe
d'objectifs est form de deux pices
visse sur le tube du microscope et qui y reste demeure;
pice mobile qui coulisse dans la prcdente et qui porte

Le changeur
qui
2

se

une

l'objectif.

On

doit se

munir d'autant de

pices mobiles que l'on possde

d'objectifs.

La figure 19 montre que la coulisse de la pice fixe est incline d'un


certain angle (84), par rapport l'axe optique. La coulisse de la pice
mobile possde la mme inclinaison. On peut donc enlever l'objectif
sans risquer de rayer la lentille frontale contre la prparation ou de
dplacer cette dernire. L'inclinaison de la coulisse a prcisment pour
but d'loigner l'objectif de la prparation et d'viter ces inconvnients.
Le centrage exact de chacjue objectif peut tre fait, une fois pour
toutes, par le micrographe lui-mme. Le jeu de la coulisse est limit
par un butoir qu'on peut rgler au moyen d'une cl de montre. Ce
butoir se trouve droite de la pice mobile. Une autre vis, galement
facile rgler au moyen d'une cl de montre, se trouve au-dessus du
butoir et sert au centrage dans le sens perpendiculaire.
En outre, l'objectif est fix sur la pice mobile par un pas de vis
muni d'une bague de serrage. On peut donc faire une fois pour toutes
la mise au point peu prs exacte de chaque objectif. Grce ces dis-

changer d'objectif par un mouvement trs


que la mise au point soit sensiblement
modifie et sans aucun dplacement du point de la prparation que l'on
avait mis au centre du champ.

positions combines, on peut


simple de coulissage, sans

'

CHAPITRE

III

APPAREIL D'CLAIRAGE
Son but

fix sous la platine.


L'appareil d'clairage est

clairer Tobjet par

lumire transmise. En

effet,

se
majorit des cas, l'tude des prparations

Ce

n'est

trs

que

exceptionnellement

et

fait

est d'-

dans l'immense

par transparence.

dans des cas dtermins

en clairant
qu'on observe en lumire rflchie, c'est--dire
surface de l'objet.
d'un miroir
L'appareil d'clairage se compose essentiellement

la

et

d'un diaphragme; mais ce dispositif est insuffisant pour l'emploi


des forts objectifs sec et surtout des objectifs immersion. Aussi
un microscope complet doit-il possder en outre un condensateur

un diaphragme-iris.
il devra donc
est deux faces plane et concave
tourner autour de deux axes horizontaux de manire ce qu'on
couvenablement
puisse utiliser volont les deux faces et diriger
les rayons lumineux dans l'axe optique du microscope, suivant la
condensateur rend
position de la source lumineuse. L'emploi du
inutiles des mouvements plus compliqus, qui seraient destins
modifier considrablement la direction du faisceau clairant et
obtenir, par exemple, des cnes lumineux trs obliques. Nous
et

Le miroir

verrons que ces modalits de l'clairage ne peuvent tre utiles que


dans des cas trs spciaux et qu'ils sont raliss d'une faon beaucoup plus prcise par la manuvre du diaphragme-iris et avec

du condensateur.
Le diaphragme destin tre employ avec le miroir seul doit
il doit
tre plac immdiatement sous la platine
prsenter une
srie d'ouvertures de diamtres variables de manire permettre

l'aide

d'obtenir des cnes

diaphragme

est dit

lumineux de plus en plus troits. Tantt ce


il est
alors form d'une plaque

tournant

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

26

mtallique circulaire ou disque, louruanl autour de son centre et


munie d'une srie d'ouvertures de plus en plus petites. Ces ouvertures viennent se placer Tune aprs Tautre au centre de l'ouverture de la platine, lorsqu'on fait tourner le disque. Leur centrage
par un cliquet ressort qui s'engage dans des crans

est assur

correspondant aux ouvertures.


Une autre forme de diaphragme est celui qui est dit cijlindre.
Ce diaphragme prsente son tour deux formes. Dans les petits

microscopes

le

cylindre est tiroir

chaque diaphragme est port


par un cylindre mtallique

qui

glisse

frottement

dur dans un chariot, fix


lui-mme par des coulisses
la face infrieure de la

Pour changer de
diaphragme on ahaisse le

platine.

Fig. 20.

cylindre et on tire

Diaphragme
le

cylindre, remplar-aut
condensateur.

Dans

hsse.

les

complets,

plus

la

cou-

microscopes
le

dia-

phragme est un cylindre proprement dit (fig. 21), qu'on introduit


dans le manchon de l'appareil d'clairage, la [lace du condensateur, et sur lequel on peut adapter une srie d'ouvertures de plus en
plus petites. Enfin, dans les microscopes modernes,

cylindre est remplac par

est fix

incommode
la tahle

de

un diaphragme-iris

le

diaphragme

coupole, qui

l'appareil d'clairage. En effet, il est


d'avoir retirer le condensateur et le dposer sur

demeure dans
travail,

il

causes de dtrioration.
cylindre du

est
11

expos

est plus

manchon chaque

poussire et toutes les

la

incommode encore de

retirer

veut changer de
diaphragme. Le diaphragme-iris coupole remdie tous ces
inconvnients. La figure 21 montre ce diaphragme. S, prt fonc-

le

fois

tionner aprs que le diaphragme-iris


t carts hors de l'axe optique.

Avec

que

l'on

et le
la

condensateur C ont

mthode d'clairage que

j'indique plus loin (p. 42), on se sert trs rarement de ce diaphragme qui, mon avis, constitue plutt une complication inutile.
Pour obtenir les grands cnes lumineux
Condensateur.

ncessaires pour l'emploi des forts grossissements, il faut avoir


recours aux appareils, dits condensateurs, forms d'une ou de

plusieurs lentilles. Ce terme de condensateur est d'ailleurs fort


impropre, car il n'y a pas en ralit une condensation des rayons

APPAREIL d'clairage

27

luniineux, mais seulement un agrandissement de la section du


cne clairant, d'o rsulte une plus grande clart de Timage.
Mais, en ralit,

la

puissance lumineuse de ce cne n'est pas sup-

'"'"""'

^^.,^^<^^'"''

La sous-platine dispose de faon montrer le porte-diaphragme et


condensateur cartes hors de l'axe; le diaphragme-iris coupole est prt
fonctionner.
D. porte-diaphragme cart hors de l'axe.
S, diaphragme-iris
en coupole servant modrer l'cclairogo fourni par le miroir, lorsque le condensateur est retir.
servant

manuvrer
le
K, tige
diaphragme-iris en
H. manivelle servant abaisser le condensaC, condensateur.
coupole.
teur.
R, bras horizontal, portant le condensateur.
Z, axe autour duquel
pivote le condensateur, lorsqu'on l'cart de l'axe optique.
L, bras horizontal
portant le diaphragme-iris en coupole;
W, bouton de la crmaillre qui
lve ou abaisse tout l'ensemble de l'appareil d'clairage.

Fig. 21.
le

Heure

celle de la source de lumire. Uuelle

que

soit la

puissance

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

28

du condensateur, c'est tout au plus si on peut obtenir pour


cne lumineux une clart gale celle de la source.
Le condensateur
deux (flg. 26)ou de

le

il
est form de
plus employ est celui d'Abbe
Dans le premier cas l'ouverture num1
est de 1,20, tandis que dans le second
rique
elle est de 1,40 et permet ainsi d'avoir un cne
lumineux trs large. Ces appareils sont dits con:

trois lentilles.

^^'I|f^'l'i^|j'~T*^^A
m
iL_^ii-ia^U

CondensaFig. 2-2.
teur aplantique et

achromatique de
Leitz, ouv. num. 1,40,
pour la microphoto-

ou

le

fond

densateurs ordinaires, par opposition aux condensateurs achromatiques. Ces derniers (llg-. 22 et 2.3)
construits avec des lentilles doubles plus
gQj^j.
ou moins nombreuses, d'aprs le type des
objectifs immersion. Ils sont corrigs comme
ces derniers pour les aberrations chromatique
et sphrique et pour l'aplantisme. Ils sont gnralement pourvus d'un mcanisme de centrage.
Ces condensateurs s'emploient de prfrence pour

microphotographie, car, grce leur correcils permettent d'obtenir dans le plan de


l'objet une image parfaitement nette d'une petite
source lumineuse, condition ncessaire pour avoir
une dfinition aussi parfaite que possible. Les condensateurs non
achromatiques ont une aberration de sphricit trop forte pour donner
une image contours nets d'une surface lumineuse d'tendue rduite;
pour obtenir ce rsultat, il faut s'adresser une source lumineuse
graphie

le

noir avec diaphragme


central (hg. 121).

Fig. 23.

la

tion,

Condensateur achromatique de Zeiss avec mcanisme de centrage.


dans le manchon; p, manette du dia-

vis de fixation du condensateur


phragme-iris: u et u' vis de centrage.
r,

bien plus large, telle que les nuages blancs, car alors les rayons qui
partent de divers points de cette vaste surface se runissent pour agir
sur chaque point de l'objet. Pour le travail courant les condensateurs
ordinaires sont parfaitement suffisants-.
Voir, p. 49, la dfinition de l'ouverture numrique.
Au sujet des condensateurs consulter Belles Lee, La Cellule, XIX, p. 413-419,
1902; Nelson, The substage condenser, its histor^', construction and manage1.

2.

APPAREIL D ECLAIRAGE

Le diaphragme-iris

20

complment indispensable du condensateur. Primitivement, pour rtrcir le cne lumineux, on se


est le

servait de diaphragmes circulaires. On les


du condensateur dans un porte -diaphragme

chaque

qu'on voulait changer de

fois

insrait

d'obtenir instantanment, sans autre

Les dia-

diaphragme.

iris ont remdi cet inconvnient

phragmes

au-dessous

qu'il fallait excentrer

ils

manuvre que

permettent
celle d'agir

sur un levier, une srie gradue de cnes lumineux, passant


insensiblement de l'un l'autre.

Tout diaphragme-iris
lames d'acier
en croissant
ques.

est

form d'un certain nombre de minces

tailles

et

imbri-

Chacune

de

ces lames est fixe

une extrmit par une


vis

autour de laquelle

,,

elle
(fig.

peut tourner
24),

tandis qu'

l'autre extrmit

uue des lames


Fig. 24.
du diafalciformes

elle

phragme-iris, pouvant
tourner autour d'un
point

fixe.

Original.

Fig-.

25.

rieur

Disque infdu diaphragme-

portant des encodans lesquelles


pntrent les extrmits libres des lames
mobiles. A gauche se
trouve le bouton du diairis,

ches

se termine par une


expansion rectangulaire libre. Ces lames
phragme. Original.
sont ainsi disposes sous le disque suprieur
du diaphragme
dans le disque infrieur se trouve une pice
:

mtallique circulaire (fig. 25), mue par un levier et portant une


srie d'encoches, dans lesquelles pntrent les expansions rectangulaires des lames falciformes. Le tout est compltement enferm

dans un tambour.

On comprend donc
les

qu'en appuyant sur le levier on fait tourner


lames autour de leur point fixe et ainsi on rtrcit ou on largit

l'ouverture centrale.

Dans certains cas, il peut tre utile de dplacer excentriquement le diaphragme, de manire obtenir un clairage oblique.
Ce dplacement s'effectue au moyen d'une crmaillre, visible dans
les figures 21 et 26, qui permet de faire glisser dans un plan horitambour qui renferme le diaphragme. L'clairage oblique
surtout utile pour rexamen des organismes ou corpuscules

zontal le
est

pourvus d'ornements trs fins en relief, tels que les Diatomes,


ufs d'Helminthes, les spores, etc. Nous verrons plus loin

les

ment. Journ. Roy.

microscop.

8 dit. p. 298-316, 1901.

Soc,

p.

90,

1891

Carpenter, The

microscope,

30

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

73) que Tclairage oblique permet, dans certaines conditions,


la puissance de rsolution des objectifs. Il est indispensable que le tambour du diapbragme puisse tourner autour

(p.

d'augmenter

d'un axe vertical, aprs avoir t excentr, de faon faire varier


Fincidence du faisceau lumi-

neux oblique

et

en vidence

les

dtails des

mettre ainsi
plus

fins

organismes qu'on

examine.
Enfin

le

porte-diaphragme

doit pouvoir tre facilement

dgag et amen sur le ct


par une simple traction, ce

mouvement

est indispensable

pour contrler l'ouverture de


l'iris ou pour introduire dans
la rainure,

dans

Ensemble de l'appareil d'clairage des microscopes do Zeiss, avec condensateur Abbe deux lentilles, diac, condensaphragme-iris et miroir.
teur; r, vis de pression servant immobiliser le condensateur dans le manchon
qui le supporte p, tige servant manuvrer le diaphragme-iris; s, bouton
de la crmaillre qui lve ou abaisse
Au milieu de
l'appareil d'clairage.
la figure, en dessous du condensateur,
on voit le bouton de la crmaillre qui

Fig. 26.

permet d'excentrer

le

diaphragme-iris

et d'obtenir l'clairage oblique.

Ce

mme

bouton permet, par une simple traction


d'amener tout le porte-diaphragme en
dehors de l'axe optique, sur le ct du
microscope.

rserve cet effet

porte-diaphragme, des
verres oolors ou dpolis, un
le

polariseur, etc.

montre

La figure 21

le

porte-diaphragme
cart de l'axe opti-

ainsi

que.
L'ouverture
doit tre

l'iris

maxima

l'angle d'ouverture

densateur. Enfin

mode

d'avoir

de

au moins gale
il

du concom-

est

des

divisions

graves sur le tambour le


long de la course du levier
:

permettent, surtout pour


microphotographie, de re-

elles
la

prer exactement la largeur du cne lumineux.


Les lentilles du condensateur rfractent les rayons lumineux

par le miroir, de manire les faire converger sur


en un cne large ouverture. Le foyer de l'appareil se

rflchis
l'objet

trouve en

mm.

mum

effet

au voisinage du plan de

au dessus de

la lentille

l'objet observ,

suprieure

(fig.

59

et 60).

environ

Le maxi-

d'clairage est obtenu quand l'objet se trouve exactement au


foyer. Pour raliser celte concidence et pour loigner dans cer-

APPAREIL D'CLAIRAGE

31

du condensateur, il est ncessaire que


puisse tre dplac dans le sens vertical.
Dans les grands microscopes, ce rsultat est obtenu au moyen
d'une crmaillre et d'un pignon (fig. 20, S; 21, W)
dans les
tains cas de l'objet le foyer

l'appareil d'clairage

modles
vis

mme

ou

mouvement

les plus petits le

la

simplement

vertical est produit par

une

main.

SOURCES LUMINEUSES
Avant d'expliquer l'emploi de

l'appareil d'clairage,

il

est nces-

sommairement les sources lumineuses les plus


employes en microscopie. Nous laisserons de ct celles qui

saire

d'tudier

servent en microphotographie, car leur tude compliquerait trop

notre expos.

Lumire du

jour.

C'est naturellement l'clairage le plus

employ. La manire la plus favorable de l'utiliser est de recevoir


sur le miroir la lumire rflchie par les nuages blancs un ciel
bleu et limpide est moins favorable l'observation. La lumire
:

du soleil ne peut tre utilise que pour la microphotograen


aucun cas elle ne peut servir l'observation directe;
phie,
cependant on pourrait la rigueur la diffuser au moyen d'une
toffe blanche et utiliser la lumire fournie par cet cran.
directe

La condition

pour avoir un bon clairage,

essentielle,

est

que

source lumineuse, quelle qu'elle soit, ait une tendue suffisante


pour couvrir toute la surface du miroir et pour remplir tout
l'angle d'ouverture du condensateur. Il sera donc ncessaire de

la

placer

la table

de travail contre

Quand on a
cerlainement celle du nord,
pas trs grande.

la fentre,

le choix, la

surtout

si

celle-ci n'est

meilleure exposition est

car on n'y est jamais gn par le

soleil.

Lumire

La lumire artificielle prsente des


artificielle.
au
considrables
point de vue de la constance et de
avantages
l'intensit. Aussi est-elle particulirement favorable pour les forts
grossissements,

avec lesquels

elle

est

souvent

prfrable la

lumire du jour. Certains observateurs l'emploient uniquement,


de manire avoir toujours un clairage uniforme. Boites Lee^
1.

Bolls Lee, L'clairage et l'emploi du condensateur dans la micrographie

histologique.

La

Cellule,

XIX,

p.

103- J33,

pi.,

1902.

32

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

une tude fort intressante, o on trouvera de


nombreux documents sur les divers condensateurs et sur les prin-

a publi ce
sujet

cipales sources lumineuses. Les dtails de

cette tude dpassent

malheureusement de beaucoup la porte de la pratique courante.


En effet, la plupart du temps, on achte de confiance un microscope, tel que le fournit la maison laquelle on s'adresse, sans

commander spcialement

le

condensateur.

On

a d'ailleurs raison,

car les microscopes des grandes maisons spciales sont gnralement bien compris il vaut mieux les prendre tels quels si on est
incomptent dans la matire. En outre on utilise au hasard la
;

source lumineuse dont dispose

le laboratoire

les trs intressantes indications

ment mises en

pratique.

o on

travaille.

Aussi

de Bolles Lee seront- elles rare-

Nous en rsumerons plus

loin (p. 44)

les points essentiels.

Les sources lumineuses


les conditions

artificielles sont trs variables,

se trouve l'observateur

suivant

lampes huile vgtale


ou animale, ptrole, lampes lectriques incandescence ou
arc, becs de gaz varis, mais de prfrence incandescence. Les
principes gnraux que nous allons donner permettront l'observateur d'utiliser pour
dont il disposera.

le

mieux

la

source de lumire

artificielle

La condition essentielle est toujours d'envoyer sur le miroir un


cne lumineux bien homogne et possdant un angle d'ouverture
suffisant. Lorsque la source lumineuse a une faible tendue \ il
faut qu'elle soit suffisamment rapproche du microscope. Dans le
cas contraire, il est bon d'interposer entre elle et le miroir soit une
grande lentille collectrice, soit un ballon de verre rempli d'eau
et

faisant

(p.

43

et

l'office

de

lentille.

rgle la position de ce ballon

la surface du miroir soit


bon moyen de s'en assurer
miroir un morceau de papier blanc.

bien uniformment claire.


est

On

45) de manire ce que toute

de placer sur

le

Un

trs

Pour les faibles grossissements, lorsqu'on veut obtenir un large


cne lumineux avec une source de faible tendue, on peut interposer un papier de soie ou un verre finement dpoli entre la lampe
et le miroir. On peut encore placer dans le porte-diaphragme un
1. Giltaj*, Zeitschr, f. wiss. Mikr., XXV, p. 163, 1908, fait remarquer que les
sources lumineuses trop restreintes donnent lieu des figures d'interfrence qui
troublent la vision. On les reconnat Taide de grains d'amidon de pomme de
terre, en suspension dans l'eau, qui so montrent entours de bandes lumineuses

colores.

APPAREIL D'CLAIRAGE

33

disque de verre dpoli. Mais, par ce moyen, on perd beaucoup de


lumire et on nuit la dfinition, car les images sont plates, sans
relief et sans dtails.

En

outre on ne peut user de cet artifice avec

les forts objectifs.

La couleur de la lumire artificielle est quelquefois trs gnante,


surtout pour tudier des prparations colores
le ptrole et le gaz, en
particulier, donnent des flammes trs jaunes ou rougetres. On les
amliore en introduisant un disque de verre bleu dans le portediaphragme. Quand on se sert d'un ballon comme lentille collectrice,
on peut teinter l'eau qu'il renferme avec un peu d'eau cleste (obtenue
en versant quelques gouttes d'ammoniaque dans une solution de sulfate
de cuivre). Jannsens
conseille l'emploi d'une solution de carbonate de
cuivre prpare d'aprs la formule de Ost^ et dilue de moiti, ou plus
simplement une solution de bleu de mthylne. Ces liquides interceptent une partie des radiations rouges et laissent passer tous les
rayons utiles, notamment les radiations violettes. Ces crans peuvent
aussi tre disposs dans une cuve verticale faces planes.
Nous ne dirons qu'un mot des
Lampes pour micrographie.
lampes construites spcialement pour l'clairage du microscope. La
lampe de Ranvier n'est pas autre chose qu'une lampe gaz ou huile
munie d'une lentille condensatrice. Les lampes albo-carbon, dans
lesquelles le gaz se sature de naphtaline et donne une flamme trs
blanche, n'ont plus gure de raison d'tre depuis que les brleurs
manchon genre Auer sont rpandus partout. Nanmoins elles donnaient
une (lamme trs clairante et trs propice aux observations microscopiques, cause de sa fixit et de sa puissance sous une faible tendue.
Les lampes lectriques incandescence se prtent d'autant mieux
l'observation microscopique que le filament est plus court ou, tout au
moins, enroul dans un troit espace, de faon fournir une source
lumineuse aussi puissante que possible sous un petit volume. La lampe
de Nernst (p. 217), dont le filament est remplac par une spire tours trs
:

'

rapprochs, forme d'oxydes mtalliques (zireonium et thorium), est


excellente ce point de vue. Il faut se mfier des miroirs concaves ou
des ampoules argentes sur une de leurs faces. Ces appareils donnent

des rayons lumineux non orients, avec lesquels il est trs difficile
d'tablir un clairage microscopique correct.
Des micrographes de grande valeur et d'une incontestable autorit,
comme Bulles Lee (voir p. 44), considrent que le meilleur clairage
possible pour les travaux cytologiques est celui qui est fourni par les
lampes ptrole mche plate. Une lampe quelconque de ce modle
fournit un clairage suffisant, pourvu que la mche ait environ
12 millimtres de largeur et qu'elle soit taille en pointe obtuse, de
manire fourq.ir une flamme pointue. Pourtant les lampes verres
arrondis et renfls dforment un peu l'image de la flamme. Il est donc
prfrable d'employer, lorsque cela est possible, une lampe chemine
mtallique, munie en face de la flamme d'une fentre rectangulaire
garnie d'une lame de verre plane. On doit pouvoir employer volont
1.

La

2.

Chemiker Zeitung,

Cellule,

XIX,

M. Langeron.

p. 11, 1901.

p. 1784-85, 1829-30, 1895.

Prcis de Microscopie.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

34

le plat de la flamine oa son tranchant. Les constructeurs anglais, par


exemple Baker, fabriquent d'excellents modles de ces lampes, munies
ou non d'une lentille condensatrice (lampes Nelson ou Dallingerj.

EMPLOI DE L'APPAREIL D'CLAIRAGE


Rappelons brivement

les principes sur


lesquels est fond
source
des
Une
lumineuse,
microscopes.
clairage
quelle qu'elle soit, envoie sur Tobjet un faisceau de rayons convergents. L'angle d'ouverture de ce faisceau dpend de la gran-

Fappareil

de l'loignement de la source lumineuse dans le microslumineuse est en ralit le miroir plan ou concave
source
cope
ou l'ensemble form par le miroir et le condensateur.

deur

et

la

Supposons que

ra}q)areil

d'clairage

envoie

sur l'objet

des

ravons manant d'une source lumineuse d'tendue illimite, ce


qui est le cas pour la lumire du jour. L'objet est clair par un

cne lumineux convergent vers lui et divergent vers Tobjectif. La


grandeur et l'angle d'ouverture de ce cne dpendent de l'tendue
relle ou relative de la surface clairante, lentille ou miroir, quelle

que

soit la

forme de ce dernier, plan ou concave. La grandeur du


la dimension du miroir et l'angle d'ouverture de

cne dpend de

cet angle augmente en raison inverse de la


augmente aussi par l'introduction d'une lentille entre
le miroir et l'objet. La lentille agit alors comme si elle agrandissait la surface i-tlcbissante. Si on introduit un diaphragme,
on diminue l'tendue du faisceau clairant alors Tloignementdu

sa distance l'objet

dislance,

il

dimension n'ont plus d'action, pourvu que la surface


du miroir n'ait pas une tendue infrieure l'ouverture du diamiroir

et sa

phragme.
Si, au contraire,

comme

c'est

le

la

cas

source lumineuse a une tendue limite^


pour la lumire artificielle, les choses se

passent autrement. Le miroir plan se comporte par rapport au


miroir concave comme si on avait diaphragm le cne lumineux
fourni par ce dernier. Le miroir concave fournit donc, dans ce cas,

un cne lumineux beaucoup plus


reoit plus de rayons lumineux et

large que le miroir plan, car il


les rflchit par toute sa surface,

que le miroir plan reoit moins de rayons et n'claire


que par une partie de sa surface. De son ct, le condensateur, jiour une source lumineuse ou une surface de miroir relativement petites, fournit un cne lumineux trs large et pro-

tandis

l'objet

APPAREIL D'CLAIRAGE

35

porlionnel roiiverUire et la longueur locale du systme.


Le miroir concave et le condensateur agissent donc comme s'ils

donnaient

source

la

lumineuse une plus


grande tendue, sans
diminuer son inten-

la

comme

ou

sit,

s'ils

rapprochaient.

En rsum,

l'ap-

pareil d'clairage du
microscope a pour

but, au

moyen d'une

source

lumineuse

d'une

position

et

d'une tendue donnes,


l'objet

d'envoyer sur

un

faisceau

mme

lumineux de

mais sous

intensit,

forme de cne
ouverture.

large

doit

Il

aussi permettre
facile

gradation

une
et

tendue de l'ouverture et de

la

direction

de ce cne.

Aprs avoir
ces

principes

raux

de

la

tabli

gn-

Fis.

-27.

Valeur relative du miroir plan


concave.
-

thorie

et

du miroir

rayons utiles rflchis par le miroir plan '.


rayons utiles rflchis par le miroir

concave.

de l'clairage par la
lumire
transmise,

T'U'Il

rayons non

utiles.

nous allons tudier

la signilication et l'emploi de
parties de l'appareil d'clairage.

Emploi des miroirs.


le

miroir plan ou

le

chacune des

Gnralement on emploie au hasard

miroir concave et

le

plus souvent

tort.

Nous

donc prciser dans quelles conditions il faut choisir l'un ou


l'autre. Pour cela, nous devons examiner successivement l'emploi
allons

des miroirs seuls ou combins avec

le

condensateur.

1. Le point d'incidence des raA'ons Fp et F'p' devrait se trouver sur le miroir


plan. C'est par erreur que l'incidence se produit sur le miroir concave.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

36
l*"

Emploi du miroir

nons d'abord

la

Examiseul, sans condensateur.


valeur relalive du miroir plan et du miroir con-

(fig. 27)
lorsque nous connatrons leurs proprits, nous
pourrons en dduire leur mode d'emploi.

cave

Soit FF' une source lumineuse, par exemple l'ouverture d'une fentre,
PP' un miroir plan, ce' un miroir concave et
l'objet clairer. Le
rayon central fmO sera rflchi de la mme manire par les deux
miroirs, mais il y a de grandes diirences pour les autres rayons. Les
rayons envoys par les bords de la source lumineuse et rflchis par le
miroir plan ne peuvent clairer l'objet que s'ils proviennent de points
de ce miroir situs entre p et/)'. Ainsi le rayon Fa; sera rflchi dans la
direction xa, le rayon F'j, dans la direction yb. La source lumineuse FF'
fournit donc, par rflexion sur le miroir plan PP', un cne lumineux
dont l'angle d'ouverture est pOp'.
Le miroir concave ce' fournira, avec la mme source lumineuse, un
cne beaucoup plus large dont l'angle d'ouverture sera cOc'. En efl'et,
les rayons qui partent des points F et F' sont rflchis sur l'objet,
suivant les directions eO et c'O.

la

Donc, pour une source lumineuse de mme tendue et place


mme distance, le miroir concave fournit un cne lumineux

plus large, et utilise une bien plus grande partie de la surface


de cette source. Il peut donc envoyer plus de lumire Tobjet.

Pour que
lumire,

le

il

miroir plan puisse fournir une gale quantit de


que la source lumineuse soit reprsente par

faudrait

L'avantage du miroir concave est donc de fonctionner


du miroir plan comme une source lumineuse plus tendue.
Une premire rgle dcoule de ces faits le miroir plan donne

la ligne FJ^^.

vis--vis

des cnes lumineux, troits, plus favorables Temploi des objectifs faibles; les cnes plus larges, fournis par le miroir concave,
conviennent mieux aux objectifs forts, qui demandent un faisceau
clairant grande ouverture.

Influence du diaphragme sur le miroir. ~ Le diaphragme


le miroir et
l'objet (diaphragme disque, tiroir,
cylindre, diaphragme-iris en coupole) permet de rtrcir le
cne lumineux fourni par le miroir. Un diaphragme d'ouverture

interpos entre

donne

laissera

passer

un cne d'autant plus

plac plus loin de l'objet.


le diaphragme cylindre

On

pourra donc rgler

ou

le

troit qu'il

sera

l'clairage, avec

diaphragme-iris coupole, non

seulement en changeant le diamtre de l'ouverture, mais encore


en la dplaant verticalement
on voit donc l'importance de ce
:

mouvement

vertical.

37

APPAREIL d'clairage

montre que l'usage des diaphragmes est fort


donner
plus de nettet aux images. Nous en comprenpour
drons plus loin la raison, quand nous expliquerons (p. 71) le rle
de la rgion de l'objectif dite espace obscur. C'est en effet, dans
L'exprience

utile

cette rgion, que se trouvent les faisceaux de diffraction produits


par les fins dtails de structure des objets et qui ont une si grande
la formation de l'image. Bien que celte image
d'autant plus parfaite que Tangle d'ouverture de l'objectif est

importance dans
soit

il
plus grand, on comprend que, pour mnager l'espace obscur,
souvent ncessaire de diminuer, par lusage des diaphragmes,

est

l'angle

d'ouverture

du

faisceau

clairant et de le rendre

bien

infrieur ce qu'il devrait tre pour remplir tout l'angle d'ouverture de l'objectif.

Influence du miroir sur

le cne d'clairage.
Lorsqu'on
n'emploie pas de diaphragme et que la source lumineuse est
d'tendue illimite, l'ouverture du faisceau clairant dpend de la

dimension du miroir. Dans ce


exactement

comme

le

cas,

le

miroir concave;

miroir plan se comporte


n'y a de diffrence que

il

pour une source lumineuse d'tendue limite,

comme nous

le

verrons plus loin.

Les dimensions du miroir ne peuvent, pratiquement, dpasser


On peut bien augmenter l'angle d'ouverture du

certaines limites.

faisceau en rapprochant le miroir de l'objet; mais alors la platine

du microscope empche
miroir,

si elle

rfracts par le

l'arrive

des rayons lumineux sur le

rapproche. En outre, les rayons sont


porte-objet; ceux dont l'inclinaison dpasserait le

en

est trop

double de l'angle limite (voir p. 48) pour l'air et le verre,, subiraient infailliblement la rtlexion totale (voir p. 48) or cet angle
;

est

de 4io. Ceci nous donne

la limite

de

la

puissance des miroirs.

Pour obtenir des cnes lumineux plus larges, il est ncessaire


d'avoir recours aux condensateurs.
Emploi de la lumire artificielle.
Lorsqu'on se sert de
la lumire arlificielle, ou en
d'une
source lumineuse
gnral

d'tendue hmite, il ressort de ce que nous avons dit plus haut


que le miroir concave donne toujours un faisceau de plus grande
ouverture. C'est donc surtout dans ce cas que s'applique la rgle

que nous avons formule

prendre le miroir plan pour des objecmiroir concave pour les objectifs forts. Mais,
outre la largeur du faisceau lumineux, il est une autre condition
de l'clairage qui a surtout une grande importance avec les objectifs

faibles

et

le

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

38
lifs

faibles, c'est

la

ralisalion d'un

champ

iiiiirormment clair

sur toute son tendue, permettant de voir toute

comprise dans ce champ.

la partie

de Tobjet

Uniformit d'clairage du champ.


Pour une source
lumineuse d'tendue illimite, cette uniformit dpend unique-

comme nous

l'avons vu, de la dimension du miroir et de la


spare de l'objet. Peu importe dans ce cas qu'il
soit plan ou concave.
Au contraire, pour une source lumineuse d'tendue limite, le

meut,

distance qui

le

miroir plan donne un champ clair plus vaste que celui foui'ui
par le miroir concave. Ce dernier projette peu prs dans le

plan de l'objet une image relle de la source lumineuse, qui se


confond avec l'image de l'objet et qui est trs gnante. D'ailleurs,
cet inconvnient est encore plus sensible avec le condensateur qui
fournit une image trs petite de la source lumineuse dans le plan

de

l'objet.

Donc, jjour avoir un chanq^ uniformment clair avec les


objectifs trs faibles, il faut employer le miroir plan seul, sa7is
condensateur.

Nous avons vu plus haut que


Emploi du condensateur.
miroir seul, mme lorsqu'il est concave, ne peut pas fournir
des cnes lumineux, ayant une ouverture suprieure 82. Or,
cet clairage est insuffisant avec les objectifs de grande ouverture
2""

le

numrique

(voir p. 49).

On

est alors oblig d'avoir recours

aux

condensateurs. Nous savons que ces appareils ont une forte ouvertui'e numrique.
L'objet est ]dac au voisinage et un peu au-dessous de leur foyer suprieur. Dans ces i*onditions, les rayons que
condensateur reoit du miroir sont peu prs parallles; il
n'est donc pas ncessaire que ce dernier ait une grande surface.

le

Pour uLiliser compltement la grande ouverture numriciue des condensateurs (1.20 et mme 1.40), il faut interposer une goutte d'huile de
cdre immersion enlre la lentille suprieure et le porte-objet, de faon
empcher une partie des rayons lumineux de subir la rflexion totale,
au moment de leur passage du verre dans l'air. Cette prcaution est,
d'ailleurs, rarement indispensable et ne saurait avoir d'importance que
pour les objectifs immersion. En effet, les objectifs sec ne peuvent
admettre, mme dans les circonstances les plus favorables, qu'un cne
lumineux ayant une ouverture gale au plus au double de l'angle
limite pour le verre et l'air; or le condensateur fournit facilement un
cne de cette ouverture sans interposition d'huile de cdre. Ajoutons
que l'immersion du condensateur n'est rellement. efficace que lorsque
l'instrument a t spcialement calcul dans ce but.

APPAREIL D'CLAIRAGE
Pour

on emploie
tion.

39

large cne lumineux fourni par le condensaleur,


diaphragme-iris dont nous avons donn la descrip-

rtrcir le
le

Ce diaphragme

est plac

en dedans du loyer infrieur du

condensateur.

L'emploi du condensateur

est

absolument indis[iensable avec

puissants et avec les objectifs immersion, qui


cne clairant trs large, dont l'ouverture puisse

les objectifs sec

exigent un
atteindre 120. Avec ces objectifs, le foyer du condensateur doit se
trouver dans le plan de l'objet ou un peu au-dessus pour que

Tappareil donne son maximum d'effet. Le mouvement vertical


en effet,
servira assurer la mise au point du condensateur
:

lorsque

la

tandis qu'il

et court,

source

source lumineuse est loigne,

lumineuse

est

le

cne projet

est large

plus troit et plus allong

est

(lumire

lorsque la
artificielle). Cette

rapproche
mise au point du condensateur assurera donc la pntration, dans
Tobjectif, d'un cne lumineux aussi large que possible.
Certains observateurs conseillent de limiter l'emploi du con-

densateur aux objectifs immersion et aux systmes sec trs


puissants. Tel n'est pas notre avis. Nous pensons qu'il y a grand
avantage employer le condensateur, mme avec les objectifs
faibles, jusqu'

25 millimtres environ de distance

focale, c'est-

-dire jusqu'aux objectifs n" 2 inclusivement. Pour une distance


focale plus grande, on ne peut obtenir un champ uniformment
clair,

mme

en abaissant

le

condensateur au maximum. Dans

ce cas, on emploiera le miroir plan seul. Pour les objectifs foyer


infrieur 25 millimtres, on abaissera le condensateur, de

manire ce que l'image de la source lumineuse ou des barreaux


la fentre ne gne pas la perception de l'image microscopique.
Ds que ce rsultat est atteint, on arrte le mouvement du con-

de

et on se sert du diaphragme-iris pour rgler l'clairage,


en diminuant l'ouverture du cne lumineux. Pour les observations

densateur

qui rclament de frquents changements d'objectifs, ce procd


est bien plus pratique que celui qui consiste carter chaque

du microscope, puis rgler de


nouveau Tclairage avec le miroir et le diaphragme de la platine.
11 suffit, en
changeant l'objectif, de modifier lgrement la posi-

instant le condensateur de l'axe

tion verticale du condensateur et l'ouverture de l'iris. Avec un


peu d'habitude, ces mouvements sont excuts presque automatiquement. En outre, en enlevant le condensateur, on se priverait
du diaphragme-iris qui permet de rgler trs commodment lclai-

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

40

le diaphragme-iris coupole, install sous la plaline, ne donne


jamais un rglage aussi prcis et des images aussi bien dfinies.
Gomme la grande majorit des observations courantes se font

rage

des grossissements variant de 25 800 diamtres, on pourra, dans


ces limites, ne jamais supprimer le condensateur
nous recom:

mandons vivement
beaucoup

minimum

de

manire de procder, comme conomisant


et donnant d'excellentes images avec le

cette

temps

de fatigue oculaire.

Quel miroir faul-il employer avec le condensateur ? DdLiis les


conditions ordinaires, c'est--dire avec la lumire du jour ou avec
une lumire artificielle suffisamment loigne, c'est le miroir plan
qui permet d'obtenir les cnes lumineux les plus ouverts, c'est
donc lui qu'il faudra presque toujours employer. Le miroir concave

conviendra pour les cas o la source lumineuse est trs rapproche


en effet, dans ces conditions, le miroir concave peut
clairer tout l'angle d'ouverture du condensateur avec une source
:

lumineuse bien moins tendue que celle qu'exigerait le miroir


Au contraire, pour une source lumineuse loigne, le miroir

plan.

concave exige une surface clairante plus tendue que le miroir


plan, pour illuminer tout l'angle d'ouverture du condensateur.

Influence de la largeur du cne d'clairage sur l'image


microscopique. Nous nous sommes efforcs jusqu'ici d'obtenir
les cnes lumineux les plus larges possibles dans toutes les conditions d'clairage qui peuvent se prsenter. Il nous reste voir
comment on doit utiliser ces larges faisceaux et dans quelles
conditions on doit les rduire au moyen du diaphragme. En effet
la largeur du cne d'clairage exerce une grande influence sur la
qualit de l'image microscopique. Plus ce cne est troit, plus
l'image a des contours nets au contraire, l'image produite par un
:

cne grande ouverture rsulte de la superposition d'un grand


nombre d'images, formes par des rayons dont l'inclinaison varie
par rapport l'axe. Les images fournies par ces derniers ne sont
pas identiques et l'image totale forme par la superposition de ces
images lmentaires n'a pas des contours absolument nets.
L'exprience est facile faire en clairant un objet non color avec
un cne lumineux trs large on verra alors que le champ n'est pas net
et mme, dans certains cas, l'image microscopique pourra disparatre
entirement. 11 n'en sera pas de mme pour une prparation colore,
car alors les lments ne se distinguent pas uniquement par la diff:

rence de leurs indices de rfraction, mais en outre par leur plus ou

APPAREIL d'clairage

41

moins grande facult d'absorption pour les rayons lumineux. Si on se


sert d'un objectif parfaitement corrig pour la totalit de son ouverture,
on peut clairer la prparation avec un cne lumineux trs large sans
que l'image disparaisse. Au contraire, ce sont les parties non colores
absorbantes dont l'image disparatra, ce qui constitue un
et non
avantage, par exemple pour la recherche des Bactries colores au
milieu d'lments ou de tissus non colors.
Par contre, l'troitesse du cne clairant augmente le pouvoir pntrant de l'objectif et la planil du champ. On sait, en effet, que la
plupart des objectifs microscopiques donnent un champ qui parat
il en rsulte
plus ou moins courbe
que l'image ne peut lre mise au
point en mme temps au centre et sur les bords. Plus le cne d'clairage est large, plus la zone centrale de nettet est troite. Cet inconvnient est surtout sensible pour la microphotographie
dans l'observation oculaire, le mouvement constant de la vis micromtrique supple
largement ce dfaut.
:

On peut admettre, comme rgle gnrale, que l'clairage le plus


favorable est fourni par un cne lumineux, dont l'ouverture est gale
au tiers de celle de l'objectif et qui, par consquent, n'claire que le
tiers de l'ouverture de cet objectif. On peut s'en assurer en enlevant
l'oculaire et en regardant dans le tube du microscope
on peut aussi
laisser l'oculaire en place et se servir d'une loupe pour contrler la
:

largeur du cne d'clairage.

En

pratique,

largeur du cne
manuvre, trs

il

faut,

pour toutes

clairant en

les prparations, faire varier la

manuvrant

le

diaphragme-iris. Cette

qu'on arrive en peu de temps excuter


instinctivement, permet de trouve)- pour chaque objet l'clairage
facile, et

le plus favorable et qui fournit la meilleure dfinition. En gnral,


avec les objectifs sec, on ouvre peu le diaphragme, surtout avec
les forts grossissements dont l'ouverture numrique est moindre.

Au

contraire, avec les objectifs immersion, et surtout lorsqu'on


examine des prparations intensment colores, on peut l'ouvrir
entirement et utiUser la totalit du cne lumineux.
En gnral, les prparations colores peuvent tre examines

avec un cne lumineux trs ouvert, pourvu toutefois que l'objectif


puisse fournir une image nette dans ces conditions. Dans ce cas,
les contours qui apparaissent grce la diffrence de rfringence
sont moins marqus et les colorations ressortent mieux. Au contraire, s'il s'agit d'objets non colors, c'est la diffrence de rfrin-

gence seule qui permet de distinguer


les dtails

de structure

il

plus troits. Pourtant, il


certaine limite. Nous verrons en

des objectifs

(p. 75),

les

contours

et

d'apercevoir

faut alors employer des cnes lumineux


ne faut pas descendre au-dessous d'une
effet,

en tudiant

les proprits

qu'on peut arriver, au moyen de cnes lumi-

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

42

(le
grande ouverture, augmenter dans certains cas la
puissance de rsolution des objectifs et distinguer de fins dtails
de structure qui restent invisibles lorsqu'ils sont clairs par un
faisceau de faible ouverture.

neux

RSUM DE

L'EMPLOI] DE L'APPAREIL D'CLAIRAGE

On emploie le miroir plan seul,


1" Emploi du miroir seul.
sans condensateur, avec les objectifs faibles long foyer (!25
40 mm.). A partir de 25 mm. de distance focale, ce qui correspond
aux objeclifs n 2 et au-dessous [aa de Zeiss); nous conseillons
vivement de se servir du condensateur.

Le miroir concave sera employ avec les objeclifs forts sec,


lorsqu'on ne disposera pas d'un condensateur et lorsque la source
lumineuse sera de

faible

tendue (lumire

artificielle,

troite).

2
le

Emploi du condensateur

condensateur toutes

toutes les fois que

mm.
Quand

et des miroirs.

fentre

On emploie

que cela est possible, c'est--dire


n'a
pas une distance focale suprieure
l'objectif
les fois

25

la

source lumineuse, quelle que soit son tendue, est


claire avec le miroir plan. Le

du condensateur, on

loigne

miroir concave ne doit tre emploij que lorsque la source


lumineuse est la fois de faible tendue et trs rapproche.
Pour obtenir un cbamp uniformment clair, on lve ou on

moyen du pignon et de la crmaillre


on rgle l'intensit de l'clairage avec le dia[ihragme-iris. Celle
on ne doit jamais chercher
remarque est trs importante

abaisse le condensateur au
et

diminuer

de l'clairage en dplaant le condensateur,


mais seulement en fermant le diaphragme-iris '. Le mouvement
l'intensit

vertical

du condensateur ne

mment

clair

le

sert qu' obtenir

un champ unifor-

pour les objectifs faibles, on sera oblig d'abaisser


condensateur au maximum; pour les objectifs moyens, on le
:

relvera, plus ou moins; pour les objectifs immersion,


tre relev au maximum ou presque au maximum.

il

devra

1. Thoriquement le diaphragme-iris ne doit, servir qu' rgler les dimensions


du cne lumineux, mais non modrer l'intensit de la lumire. Pratiquement,
dans le travail courant, ces deux oprations se trouvent confondues. Pour les
observations difficiles, il faut rgler Tinlensit lumineuse avec des verres

colors (p. 41).

APPAREIL d'clairage

43

en

obtenu

projetant l'image de la
L'clairage oplinuim
source lumineuse dans le plan de l'objet; pour la lumire du jour,
s'en assurer en amenant provisoirement dans le champ l'image
est

barreau de

d'un

la

fentre

cette

image

doit tre parfaitement

nette; pour rclairage artificiel, voir plus loin, 4^.

Je suppose le microCentrage du cne d'clairage.


ou
d'une
d'une
en
face
fentre
on peut
lampe
scope plac
chercher l'clairage optimum par ttonnements, en dplaant le
miroir pendant que l'il regarde par l'oculaire; on arrte les mouvements du miroir ds qn'on pense avoir obtenu un clairage
3

suffisant.

Voici une mthode beaucoup plus facile et plus sre


l'^ Prendre un
objectif faible n 2 ou 3 (aa ou A de Zeiss). Le
:

centrage de l'clairage est beaucoup plus facile avec


faible

qu'avec

un

un

objectif

objectif fort.

Retirer l'oculaire et regarder dans le tube du microscope,


du miroir. On voit trs nettement,

2*^

tout en faisant varier la position

une

petite distance de l'objectif,

une image de

la

source lumi-

neuse, fentre ou lampe. On dplace lentement le miroir, jusqu'


ce qu'on ait amen bien au centre l'image de la flamme ou celle

d'un carreau bien clair.

On remet

alors l'oculaire et on peut

observer.
3"
voici

Quand on emploie le condensateur et la lumire artificielle,


comment on peut procder le condensateur est remont au
:

maximum

et

le

se

fait

centrage
foculaire et on monte ou descend
oive de

comme
le

nouveau nettement l'image grossie de

manchon lumineux. On

On remet

la

flamme ou du

abaisse alors le condensateur, jusqu' ce

que l'image de la flamme disparaisse


uniformment clair. Si on passe un
le

ci-dessus.

tube, jusqu' ce qu'on aper-

condensateur autant qu'il

et

que

le

champ

objectif plus

est possible sans

fort,

soit

bien

on relve

nuire l'uniformit

d'clairage du champ. La rgle est de toujours tenir le condensateur aussi haut que possible.

Lumire

Cette
artificielle et lentille convergente.
mthode permet d'agrandir beaucoup la surface de la
source lumineu.-e et d'obtenir un clairage aussi bon que la
lumire naturelle. Prendre une lentille ou un ballon de verre
de 15 centimtres au moins de diamtre et rem})li d'eau. Colorer
l'eau avec un peu d'eau cleste ou placer un verre bleu dans le
porte-diaphragme. Disposer la lentille entre la source lumineuse
4

excellente

LE MICROSCOPE Et SES ACCESSOIRES

44
et le

microscope, 15 cenlimtres environ de chacun d'eux. On


du miroir plan (vrifier avec

arrive ainsi clairer toute la surface

un

petit carr de carton hlaiic qu'on pose sur le miroir).


Je conseille d'employer ce dispositif trs simple toutes les fois

qu'on

travaille la

lumire

artificielle.

lumire artificielle pour recherches trs


Nous avons dj mentionn
dlicates (mthode de Bolles Lee).
Bolles
Lee
mthode
de
la
pour l'clairage de prcision des
(p. 32)
Nous
allons
en rsumer les indications
cytologiques.
prparations
essentielles, car c'est certainement une des meilleures techniques
d'clairage, permettant d'obtenir une rsolution et une dfinition
5 clairage la

aussi parfaites

que

possible.

Il faut se servir d'une lampe ptrole mche plate, telle que celles
que nous avons dcrites (p. 33) et d'un condensateur achromatique et
aplantique aussi bien corrig que possible. Les becs de gaz manchon
g-enre Auer donnent une lumire excellente, mais l'image du treillis du

rendrait l'observation presque impossible. On doit s'efforcer


d'obtenir un cne lumineux bien centr, dont l'angle d'ouverture soit
le sommet de ce cne devra se
gal celui de l'objectif employ
trouver dans le plan de l'objet. Cet clairage, que Bolles Lee considre

manchon

comme

peut tre utilis qu'avec des prparations fixes et


de le modifier pour l'tude des objets non colors.
a) Placer la lampe 25 centimtres environ du microscope, en tournant le tranchant de la flamme du ct du miroir, car le plat de la
flamme ne donne pas une image assez brillante. Absorber les rayons
rouges par un cran color si cela est ncessaire (p. 33). Employer le

colores.

idal, 'ne

On

est oblig

miroir plan.

Mettre une prparation au


b) Centrage du cne lumineux.
point avec un objectif faible, puis, au moyen de la crmaillre du
condensateur, mettre au point ce dernier, de faon ce qu'on voie
l'image de la flamme aussi nette que celle de l'objet, et bien au milieu

du champ.
c)

Rglage du cne lumineux.

Prendre

l'objectif fort

qui doit

du cne d'clairage au moyen


du diaphragme-iris. Pour cela, enlever l'oculaire, regarder dans le tube
et fermer l'iris jusqu' ce que ses bords empitent lgrement sur le
petit cercle lumineux. On obtient ainsi un cne dont l'ouverture est
gale environ aux trois quarts de l'ouverture de l'objectif.
Toujours sans oculaire,
d) Mise au point du condensateur.
monter ou descendre lgrement le condensateur jusqu' ce que
l'image de la llamme soit bien nette, sans dformation et aussi grande
que possible.
e) Rglage de l'intensit de la lumire.
Uniquement avec
des verres colors qu'on place devant la flamme de la lampe, mais

servir l'observation et rgler la largeur

1. La condition essentielle est


que l'image de la source lumineuse couvre peu
prs tout le champ optique. Pour les condensateurs ordinaires, la mthode d'clairage de Bolles Lee ne peut donc tre mise en pratique qu'avec les objectifs forts.

APPAREIL D'CLAIRAGE

45

jamais en touchant au diaphragme, ni la crmaillre du condensateur. Il ne faut modifier l'ouverture du diaphragme que si on ne peut
obtenir autrement la nettet de l'image, mais le diaphragme ne doit
jamais servir modrer l'intensit de l'clairage. De mme, il ne faut
abaisser le condensateur que pour obtenir une vue d'ensemble de la
prparation, puis, pour l'tude des dtails, le remonter jusqu'au point
du maximum de nettet de l'image de la flamme.
6''
Emploi d'une lentille condensatrice devant la source
Cette lentille, fixe
lumineuse (Mthode de BoUes Lee).

lampe par un bras horizontal, le long duquel elle


doit
tre, autant que possible, un doublet bien corrig
peut glisser,
au point de vue de Taberration sphrique. Son emploi prsentera
1 Tirnage de la flamme est agrandie, donc le
deux avantages
champ clair est plus vaste; 2 Tangle d'ouverture du condensa-

demeure

la

teur est agrandi, car

il

faut

le

remonter pour mettre au point

Timage de la llamme.
la flamme de la lampe doit se
a) Mettre la lentille au point
trouver son foyer principal. Pour trouver ce foyer, mettre un
:

carton blanc la place

de

la

mche de

la

lampe

et

chercher

former sur ce carton l'image nette d'une source lumineuse loigne,


par exemple le soleil, en approchant et loignant la lentille. Une
place trouve, y fixer la lentille demeure avec
On obtiendra ainsi des rayons parallles.
b) Centrer la lentille par rapport la flamme,
le miroir pian.
c) N'employer que

fois la

pression.

la vis

de

CHAPITRE

IV

OBJECTIFS
L'objectif est un systme optique, form d'une ou plusieurs
lentilles, et, destin fournir une image relle de l'objet. Bien
les lentilles doivent former un systme centr, c'est--dire
que leurs axes optiques doivent concider exactement pour former
Taxe optique du systme. L'objectif est viss la partie infrieure
du tube, soit directement sur ce dernier, soit sur un revolver ou

entendu,

un cbangeur
L'image

coulisse tels

relle fournie

que ceux qui sont

par l'objectif

est

dcrits plus haut.

observe au

moyen de

du tube
elle est alors
agrandie et transforme en image virtuelle. La nettet de cette
dernire dpend donc essentiellement de la qualit de l'image
l'oculaire

plac

la

partie suprieure

relle projete par l'objectif.

Avant de dcrire les diffrents modles d'objectifs, il est indispensable


de dfinir certaines proprits des lentilles et des systmes de lentilles,
dont la connaissance prside h la construction des objectifs et permet
au micrographe d'en faire un emploi judicieux.
Nous avons tudi plus liaut la formation des images par les diffrentes sortes de lentilles; ces lois sont les mmes pour un systme centr,
complexe qu'il soit, que pour une seule lentille.
Notons en outre que, pour l'il humain, il existe une dislance minima
bien dtermine, laquelle il distingue nettement et sans effort de trs
petits objets, tels, par exemple, que les caractres imprims d'un livre.
C'est ce qu'on nomme distance de la vision normale
elle est en gnral
de 25 cm., mais elle est plus courte chez les myopes et plus longue chez
les hypermtropes. Pour percevoir nettement l'image fournie par une
lentille, il suflit de la regarder la distance de la vision normale. En
ralit les choses sont un peu plus compliques et une foule de conditions viennent influer sur la perception des images relles ou virtuelles,
par exemple l'angle d'ouverture de la lentille.
C'est l'angle que forment entre eux les rayons
Angle d'ouverture.
marginaux extrmes qui traversent la lentille. En d'autres termes,

si

OBJECTIFS

47

l'angle form par les rayons qui limitent le cne lumineux mis
par un point donn. On obtiendra donc l'angle d'ouverture en runissant par des lignes droites les bords de la lentille au point dont elle
doit former l'image.

c'est

L'angle d'ouverture est un facteur trs important pour la puissance


optique d'une lentille. Il est presque toujours modifi par la prsence
d'un diaphragme.
Modifications de l'angle douverture par le diaphragme.
Un
diaphragme est une plaque mtallique, perce d'une ouverture circulaire et place soit en arrire du systme de lentilles, soit entre les
groupes de lentilles. Le diaphragme sert liminer les rayons marginaux qui produisent les aberrations, il a aussi pour but de limiter le
champ, mais en mme temps il rduit l'angle d'ouverture. Pour con-

Influence du diaphragme sur l'angle d'ouverture d'une lentille.


dd\ diaphragme; /"/", foyers de la lentille; p, objet; p' image de l'objet; ee'
image virtuelle de l'ouverture du diaphragme (pupille d'entre;.
Original.

Fig. 28.

natre l'tendue de la modification apporte cet angle par un diaphragme, il suffit de construire l'image du diaphragme forme par la
lentille diaphragme. Comme le diaphragme est presque toujours situ
prs de la lentille et en dedans du foyer, cette image sera virtuelle et

agrandie.

Il

suffit,

pour avoir l'angle d'ouverture, de joindre

le

point

lumineux aux bords de l'image de l'ouverture du diaphragme.


Ainsi, dans la figure 28, soit dd' le diaphragme, / et/' les foyers de
la lentille
l'image virtuelle de l'ouverture du diaphragme sera en ee
et l'image du point p sera en p
L'angle d'ouverture de la lentille
:

sera epe

virtuelle de l'ouverture du diaphragme, fournie par la


systme de lentilles en arrire desquelles il est plac, ne
permet pas seulement de dterminer l'angle d'ouverture du systme,
elle joue encore un trs grand rle dans la thorie des instruments
d'opti([ue. C'est elle qu'Abbe a donn le nom d'EintritispupUie on pupille

Cette

lentille

image

ou

le

d'entre.
le diaphragme est plac entre les lments d'un systme de
l'image forme par les lentilles qui se trouvent en arrire de
ce diaphragme donne la mesure de l'angle d'ouverture du systme.

Lorsque

lentilles,

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

48

image qu'Abbe a donn le nom 'Austrittspupille ou pupille


d'mergence.
L'examen de la figure 28 montre que la grandeur de l'angle d'ouverture de la lentille dpend de Tloignement du point observer. Cet
angle est d'autant plus petit que le point est plus loign. Par contre,
la position de l'image du diaphragme n'est pas modilie. Cette image
peut donc servir dterminer l'angle d'ouverture pour un point quelconque situ sur l'axe optique ou en dehors de cet axe; elle permet aussi
de trouver l'image d'un point quelconque.
Modifications de l'angle douverture par la rfraction. Angle
limite. Rflexion totale.
L'angle que font entre eux les rayons
marginaux d'un cne lumineux est modifi par le passage de ce cne
d'un milieu donn un autre milieu, dont l'indice de rfraction est
diflerent, lorsque la surface de sparation des deux milieux est plane.
Il est possible
de calculer, par la trigonomtrie, l'angle d'ouverture
C'est cette

Fig. 29.

Rflexion totale et angle limite.

Original.

d'un faisceau lumineux pntrant dans un milieu donn quand on


connat l'angle d'ouverture du faisceau dans le premier milieu et l'indice
de rfraction des deux milieux.
Cette modification de l'angle d'ouverture est facile comprendre
d'aprs les notions lmentaires que nous avons exposes plus haut
(p. 2) sur la rfraction. Nous savons que lorsqu'un rayon lumineux
passe d'un milieu plus dense dans un milieu moins dense, par exemple
du verre dans l'air, le rayon rfract s'carte plus de la normale que
le rayon incident. Plus l'angle form par le rayon incident avec la normale est grand, plus le rayon rfract se rapproche de l'horizontale.
Il arrive un moment o ce rayon rfract devient parallle la surface
de sparation des deux milieux; le rayon incident forme alors, avec la
normale, un certain angle dont la valeur varie suivant l'indice de
rfraction du milieu. Au del de cet angle, dit angle limite, le rayon
rfract cesse d'tre horizontal et se trouve rflchi par la surface du
milieu le plus dense. Il ne peut donc passer dans le milieu moins
dense et a subi ce qu'on nomme la rflexion totale. L'angle limite est
d'autant plus grand que la difl^rence entre les indices de rfraction
des deux milieux est plus faible.
De ces donnes, nous pouvons conclure qu'un cne lumineux ne peut
passer compltement d'un milieu plus dense dans un milieu moins
dense, que si son angle d'ouverture ne dpasse pas l'angle limite pour
les milieux donns. En effet, tous les
rayons qui dpassent cet angle ne

49

OBJECTIFS

peuvent passer dans le milieu moins dense et subissent la rtlexion


totale au niveau de la surface du milieu le plus dense.
La figure 29 donne un exemple de ce phnomne. Soit p q*' q'^
l'angle d'ouverture d'un cne lumineux fourni par le point p situ dans
La moiti gauche de la figure reprsente le passage des
le verre.
rayons du verre dans l'air, la moiti droite du verre dans l'eau. L'angle
limite pour le verre et l'air est de 41, il est de 61 pour le verre et l'eau.
Aussi, voyons-nous le rayon q^^ subir la rtlexion totale en passant du
verre dans l'air, tandis que c'est seulement le rayon q'^ qui est rflchi
totalement au passage du verre dans l'eau.
La connaissance de l'angle limite a une trs grande importance pour
l'clairage du microscope. Nous y reviendrons en parlant des objectifs
immersion (p. 80). Nous pouvons cependant dire tout de suite que la
supriorit de ces objectifs sur les objectifs sec dcoule de ce qu'on
le passage des rayons lumineux du verre dans l'air, au sortir de
la prparation, et qu'on peut ainsi donner ces objectifs un angle
d'ouverture beaucoup plus grand que pour les objectifs sec.
vite

Ouverture numrique.

Pour dsigner Tangle d'ouverture

bon d'avoir une notation particulire qui soit


indpendante de la nature plus ou moins dense du milieu. Abbe
a propos pour cette notation une valeur laquelle il a donn le
des objectifs,

nom

il

est

d'ouverture numrique. Le calcul de cette valeur est bas


fait, que le produit du sinus du demi-angle d'ouverture du

sur ce

cne

lumineux, aprs rfraction, par l'indice de rfraction du

milieu, est constant pour un mme cne lumineux, quel que soit
le milieu travers. C'est ce
produit qu'Abbe a dsign sous le

nom

d'ouverture numrique, et qui est employ maintenant pour


indiquer Fangle d'ouverture d'un objectif. L'ouverture numrique
a d'un systme optique est dtermine par l'quation

a:=: nsin.u,

u tant le demi-angle d'ouverture pour un milieu d'indice n.


Dans le cas o l'objet se trouve dans l'air et o, par consquent

sin.u^ c'est--dire sera


??=:1, l'ouverture numrique sera a
au
sinus
du
d'ouverture.
gale
demi-angle

Nous reviendrons'plus
en tudiant

loin (p. 58) sur cette importante donne,


des objectifs. Mais nous pouvons dire ds
exprime trs bien leur puissance optique,

les qualits

maintenant qu'elle
puisque c'est de l'ouverture
qualits les plus essentielles.

un mme grossissement,

numrique que dpendent leurs


etlet la clart de l'image, pour

En

crot

comme

numrique. Le pouvoir rsolvant


M. liANGEROx.

et le

Prcis de Microscopie.

le

carr de l'ouverture

pouvoir dfinissant, dont


*

LK MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

50

l'importance est majeure, sont directement proportionnels


l'ouverture numrique. Par contre, la profondeur du foyer,
qu'on dsigne encore sous le nom de pouvoir pntrant, est

inversement

proportionnelle

cette

que ce dernier rapport

toutefois

n'est

grandeur.
vrai

Remarquons

que pour

les faibles

angles d'ouverture; avec de grands angles, le ])ouvoir pntrant


est en proportion inverse de la tangente du demi-angle d'ouverture.

Champ.

L'tendue du ctiamp d'un systme optique dpend, d'une

part du diamtre de l'ouverture des diaptiragmes qu'il renferme,


d'autre part de l'angle d'ouverture de l'il. En effet, l'il ne peroit
avec la mme intensit lumineuse qu'une partie de Vimage virtuelle

d'un objet fournie par une lentille; en dehors de ce cercle uniformment clair et dont l'intensit lumineuse est proportionnelle l'angle
d'ouverture de la lentille, l'clairement de l'image diminue progressi-

vement. Pour raliser un clairage uniforme et, par consquent, pour


limiter nettement le champ, il faut liminer par un diaphragme toute
la portion de l'image situe en dehors de la partie uniformment
claire.

outre le diaLorsqu'il s'agit d'une image relle, il en est de mme


rgler l'angle d'ouverture de la lentille, il faut
encore placer, dans le plan de l'image virtuelle, un diaphragme dit
de champ, destin liminer les parties marginales de l'image dans
:

phragme destin

diminue progressivement.

lesquelles l'clairage

Nous retrouverons
des oculaires

l'application de cette notion

quand nous parlerons

(p. 93).

C'est la distance qui spare la lentille


Distance frontale.
du couvre-objet de la prparation, lorsque
l'image est au point. Il est trs avantageux que pour un objectif
donn, cette distance frontale soit maxima. En effet, pour les

frontale de l'objectif

objectifs faibles, elle

microscope,

les

permet de pratiquer plus facilement, sous le


dilacrations. Pour les objectifs

dissections ou

puissants, elle facilite la mise au point,

profondeur

permet l'exploration en

prparations paisses, l'examen


goutte pendante et rend moins funestes les
d'paisseur des lamelles couvre-objet. Celle donne

de

coupes ou

de

d'organismes en
variations

ne doit pas tre confondue avec


elle

dpend

la

Les objectifs actuels possdent


compatible avec leur grossissement

Aberrations des lentilles.


que

les

dislanc focale

(p.

4),

dont

d'ailleurs.

images formes par

sont des points.

En

ralit,

la

frontale

ou

maxima

angle d'ouverture.

Nous avons suppos

les lentilles
il

distance

et leur

les

jusqu'ici

systmes de lentilles

n'en est rien, car toutes les lentilles

OBJECTIFS

51

et tous les syslmes de lentilles donnent des images plus ou moins


d 'fectueuses. Ces dfauls sont dus aux aberralions, c'est--dire

ringale rlVaclion que subissent les rayons lumineux, mis par

un

objet,

en traversant

les lentilles

ou

les

systmes de

lentilles.

Cette rfraction ingale influe sur les images de deux manires


diffrentes
d'une part les contours de Timage sont dpourvus de
:

nettet, parie

mme

les

que

d'autre

part,

colores dues

bords de

les

rayons rfracts ne se runissent pas en un


nomme aberration de sphricit;

ce qu'on

point, c'est

ce

que

l'image

les

lentilles

sont

entours

dcomposent

de
la

bandes
lumire

blanche, mais ne peuvent runir en un mme point les rayons


qui ont t spars et qui sont ingalement rfrangibles, c'est ce

qu'on nomme {aberration chromatique


Ces aberrations sont d'autant plus accentues que la courbure
des lentilles est plus forte. Pour y remdier on emploie diffrents
.

moyens, dont on combine gnralement l'action


1" On intercepte, au moyen de rliaphragmes,

naux qui sont


d'un emploi

les

rayons margiiMalheureusement ce procd est


cause de la grande perte de lumire qui en

les plus dvis.

trs limit

rsulte, surtout aux fortes amplifications.

En

effet la

luminosit

d'un systme de lentilles diminue proportionnellement au carr du


grossissement; on est donc oblig, pour les puissants objectifs,
d'utiliser autant

que possible toute l'ouverture de

la lentille,

ce

qui limite singulirement l'emploi des diaphragmes.


^

On remplace

les lentilles

systmes de deux ou plusieurs


ment une courbure moindre.
3"

On

simples de forte courbure par des


lentilles,

prsentant individuelle-

emploie des lentilles plan-convexes, dont l'aberration est


celle des lentilles biconvexes, surtout en ayant soin

moindre que
de diriger

la

face plane

du ct de

l'objet observer.

plus sur, s'il tait praticable, serait de remplacer les


par des lentilles tailles en hyperbole, en parabole
ou ea ellipse, suivant Ploignement de l'objet. Malheureusement la
taille de pareilles lentilles prsenterait trop de difficults. Le mieux est
donc de combiner les courbures des deux surfaces de la lentille de
manire rduire l'aberration au minimum. Pour les verres trs
rfringents, dont l'indice de rfraction dpasse 1,65, la meilleure forme
de lentille est la forme plan-convexe, mais il n'est pas indiffrent de
tourner vers l'objet l'une ou l'autre face de la lentille. Dans le cas de
l'objectif microscopique, o l'objet est trs rapproch du foyer de la

Le moyen

le

lentilles spliri(iues

lentille, celle-ci reoit

des rayons divergents; aussi l'aberration est-elle

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

52

au minimum lorsque la surface


rayons, c'est--dire vers l'objet.
rduite

On

manire

plane est tourne vers ces

runit des lentilles de pouvoir dispersif diffrent, de


ce que Faberralion de Tune corrige les dfauts de

l'autre.

La correction de l'aberration de sihricit


celle de l'aberration chromatique se

tisme,

tisme.
1

Aberration de sphricit.

nomme aplannomme achroma-

se

Elle consiste essentiellement

rayons, })artis d'un point situ sur l'axe optique, ne


se runissent pas de nouveau en un mme point, aprs avoir

en ce que

les

travers la lentille, mais viennent couper l'axe en des points plus


les uns des autres.

ou moins loigns

Prenons comme exemple une lentille biconvexe: si elle prsente une


courbure accentue, les rayons qui passent prs des bords sont plus
fortement rfracts que ceux qui passent au voisinage de Taxe, aussi
vont-ils couper l'axe en un point plus rapproch de ia lentille. Dans la
figure 30, nous voyons que les rayons pa et pa' sont rfracts plus fortement que les rayons pb et pb' et coupent l'axe en un point c plus
rapproch de la lentille que le point d o viennent se runir les rayons
pb et p'b'. Donc, au lieu d'avoir une image nette et punctiforme du

Cette figure montre la fois l'aberration de sphricit et la correction par dfaut. Les rayons marginaux aa et a'a' coupent l'axe plus prs de la
lentille que les rayons centraux hb et b'b'.
Original.

Fig. 30.

point p, nous obtiendrons une srie de cercles de dispersion, rpartis


entre les points c et d et dont le diamtre minimum se trouvera dans le
plan xy. C'est au niveau de ce plan que se formera l'image la plus
nette que puisse donner la lentille en question. Toutefois on ne peut
dire que ce plan soit rellement le plan de l'image puisque celle-ci se
trouve comprise en ralit dans une srie de plans situs entre les
points c et d. On voit donc qu'une telle lentille ne peut pas donner
d'images nettes. En effet il se produit, par suite de ces phnomnes,
plusieurs images places les unes derrire les autres. Comme elles sont

OBJECTIFS

53

de g-randeur diffrente, elles ne se recouvrent pas; il en rsulte que


l'image perue par l'il est courbe et indistincte sur les bords.

Nous avons

dit

que Taberratiou de sphricit


la courbure de la

forte;

mais

il

lentille est plus

un autre facteur qui

intervient

en gnral,

est,

d'aulant plus accentue que

est

l'indice

rfraction de la substance dont est forme la lentille.


focale

distance

d'une

lentille

En

de

effet la

dpend non seulement de son

rayon de courbure, mais encore de son indice de rfraction.


Donc, des lentilles de mme distance focale, mais construites en
verres diffrents, n'auront pas la mme aberration. Inversement,

Fig. 31.

pour une
focale.

l'indice

mme

que

les

Les rayons'marginaux aa et a'a' coupent


Original.
rayons centraux bb et bb'

Correction par excs.

l'axe plus loin

aberration, elles n'auront pas la mme dislance


de sphricit est d'autant plus faible que

L'aberration

de rfraction

est

focale. C'est cette proprit

plus lev pour une

qu'on

utilise

mme

longueur

pour corriger l'aberration

de sphricit, c'est--dire pour obtenir l'aplantisme.


Supposons qu'on runisse deux lentilles, l'une concave
l'autre convexe, dont les aberrations soient gales,

et

mais de sens

Pour que ce systme


suffit que l'lment
convexe,
convexe soit fait d'un verre plus dense, donc plus rfringent;
cet lment rfractera plus fortement les rayons lumineux que
l'lment concave et aura un foyer plus court. Dans ces conditions, le systme form_^ par ces deux lentilles fonctionnera comme
une lentille simple convergente et dpourvue d'aberration de
contraire, l'aplantisme se trouvera ralis.

fonctionne

comme une

lentille

il

sphricit.
Dans certaines

conditions, au lieu de rechercher un aplanlisme parfait, on ne corrige que partiellement l'aberration sphrique.

Deux

cas peuvent alors se prsenter

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

54
\'^

correctrice de la

L'action

lentille

concave peut tre assez

non seulement pour compenser Taberralion de la lentille


convexe, mais encore pour faire apparatre une aberration de sens
en
contraire. Un tel systme est dit corrig par excs (fig. 31)
elTet le point de convergence des rayons marginaux est plus loign
forte,

de

la lentille

2
(fig.

Dans

le point de conveigence des rayons centraux.


cas contraire, le" systme est dit corrig par dfaut

que

le

30), parce

que l'aberration de

la

lentille

convexe n'est pas

compltement corrige.
Jusqu'ici, nous n'avons considr que les points situs le long
de l'axe optique. Mais il ne suffit pas, pour obtenir de bonnes
images, de compenser l'aberration pour ces points; il faut encore,
autant que possible, supprimer Taberration pour tous les rayons
compris dans les limites de l'angle d'ouverture, quelle que soit
leur direction.

ment

On

tend ainsi raliser l'galit du grossissela condition essen-

pour tout le cbamp, ce qui est


tielle pour obtenir une image parfaite.
linaire

soit la perfection

Quelle que

des combinaisons de lentilles,

il

une correction absolument complte


au point de vue thorique. Tout ce qu'on peut arriver raliser,
c'est une compensation suffisante pour que les aberrations ne soient
n'est pas possible d'obtenir

plus sensibles l'il. En elel notre il est constitu de telle sorte,


qu'il peroit sous forme de points, les cercles dont le diamtre ne
dpasse pas certaines dimensions. Il suffit donc, pour obtenir des

images pratiquement nettes, sinon thoriquement, d'abaisser aule diamtre des cercles de dispersion pro-

dessous de cette limite

duits par les diverses aberrations.


Il faut
remarquer en outre que les combinaisons de lentilles,

employes pour remdier aux aberrations, ne donnent une image


nette que dans un plan dtermin et pour une distance dtermine de l'objet. Si celui-ci s'approche ou s'loigne, l'image se
forme dans un autre plan

ses dfauts apparaissent alors d'autant


accentus
plus
qu'elle s'loigne davantage du plan pour lequel a
:

maxima.
Aberration chromatique.

t ralise la correction
2*'

ou aberration de
sphricit,

L'aberration

rfrangibilit est due,

comme

chromatique

l'aberration de

une rfraction ingale des rayons lumineux.

JVlais

cette ingalit n'est pas produite uniquement par la courbure


de la lentille; elle est due la diffrence de rfrangibilit des difici,

frents rayons

du spectre suivant

leur longueur d'onde

plus

OBJECTIFS

55

cette dernire est courte, plus les rayons sont dvis. Les rayons

qui composent

la

lumire blanche sont donc ingalement rfracts,

que le foyer des rayons les plus rfrangibles et


courte longueur d'onde, qui sont les rayons violets, sera plus rapproch de la lentille que celui des rayons rouges qui sont les
moins rfrangibles et dont la longueur d'onde est la plus grande.
Les fovers des autres rayons sont rpartis entre ces deux fovers
c'est--dire

extrmes.

Il

forme par

en rsulte que l'image fournie par


la

la

lentille

est

superposition d'images lmentaires, en nombre

Cette figure, trs schmatise, montre la


Aberration chromatique.
dcomposition des rayons lumineux par la lentille et leur rfraction ingale.
En dedans du foyer, dans le plan ab. l'image a une bordure rouge; au del du
foyer, dans le plan a'b', elle a une bordure bleue. En outre ces images n"ont

Finr. 3-2.

pas la

mme

grandeur.

Original.

de l'image totale
gal celui des rayons du spectre. Les bords
seront donc indistincts et entours de franges colores; en dedans

du foyer l'image a une bordure rougetre, en dehors du foyer


elle prsente une bordure violette. Comme ces images lmentaires ne sont pas toutes de mme taille, ainsi que le montre la
figure 32,

elles

une image

ne se recouvrent pas compltement et forment


contours indistincts et colors. En somme la

totale

comme un prisme sur la lumire blanche, elle la


mais
ne peut en runir ensuite en un mme point les
dcompose,
lments constituants.

lentille

agit

Nous avons dit que l'aberration chromatique ne dpend pas seulement de la courbure de la lentille, mais encore de la nature du verre

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

56

En efTet, Taberration est d'autant plus accentue que le


pouvoir dispersif est plus grand, c'est--dire que les diffrences sont plus
grandes entre les indices de rfraction d'un verre donn pour les diffrents rayons du spectre. Mais il n'y a pas proprement parler de proportionnalit entre la rfringence et le pouvoir dispersif. Prenons en
effet comme exemple le crown-glass et le tlint-glass
la diffrence
entre les indices de rfraction pour les rayons rouges et violets est de
0,0204 pour le crown, 0,0434 pour le flint, ce qui donne pour ce dernier
un pouvoir dispersif plus de deux fois plus fort (jue celui du crown. Par
contre, la diffrence entre les indices de rfraction des deux verres pour
des rayons de mme couleur est beaucoup plus faible et ne dpasse
gure 0,1, ainsi qu'en tmoigne le tableau suivant
celte lentille.

(le

'

Indices de rfraction pour les rayons


(Rouge.)

(Orang.)

(Violet.)

Flint-glass

1,6277

1,6350

1,6711

Crown-glass

1,5243

1,5280

1,5447

Donc, de deux lentilles construites avec ces verres et possdant peu


mme longueur focale, celle de flint aura un pouvoir dispersif
beaucoup plus considrable que celle de crown. Inversement, pour un
mme pouvoir dispersif, la lentille de crown aura une longueur focale
beaucoup plus grande ({ue celle de flint.
prs la

Taberration chromatique, comme Taberralion de


deux lentilles, Tune convexe en crown,
combinant
en
sphricit,
Tautre concave en flint, calcules de telle sorte que l'aberration
Oii^ corrige

chromatique de
possible par

d'une

les propiits
dit

est

la

lentille

la lentille

convexe

soil

compense autant que

concave, tout en conservant Tensemble

lentille

convexe.

On

ralise ainsi

un systme

achromatique, c'est -dire dans lequel le spectre secondaire


supprim, au moins d'une faon approche. Ce mode de cor-

rection de Taberration chromatique a t dcouvert en 1757 par


un opticien de Londres, DoUond. C'est encore le procd qui est

employ aujourd'hui.
Pourtant cet achromatisme n'est jamais parfait. En ellet. le
mme pour
pouvoir dispersif du crown et du flint n'est pas le
toutes les longueurs d'onde, aussi un systme de lentilles pour
des silicates doubles de potassium et de calcium
pour le cristal.
de potassium et de plomb,
Le
riche en oxyde de plomb. C'est donc un verre dense et trs rfringent; il est
plus riche en plomb que le cristal ordinaire. Son pouvoir dispersif est trs grand.
Le crown-glass est, comme le verre de Bohme, un silicate de potassium et
de calcium, mais il est plus riche que ce dernier en potasse et en chaux, il est
1.

pour

On

sait

que

les verres sont

les verres ordinaires, de potassium et de plomb


flint-glass est un cristal, c'est--dire un silicate

moins rfringent

et

moins dispersif que

le flint.

OBJECTIFS

57

lequel on a obtenu la concidence exacte des rayons des deux


couleurs n'est-il pas du tout corrig pour les autres. De l rsulte
la production de ce ({u'on nomme le spectre secondaire, form
par les franges colores qui proviennent de la dviation ingale
des autres rayons.

bleue du spectre domine, l'image est entoure


et Tobjectif est dit corrig par excs; au
contraire, lorsque l'image prsente une aurole jauntre, Tobjectif
est dit corrig par dfaut. C'est cette dernire correction qui

Lorsque

la partie

d'une lueur bleutre

est toujours adopte.

Un autre obstacle l'acliromatisme parfait est l'angle d'incidence des


rayons. En effet la concidence complte des rayons de deux couleurs
ne peut tre ralise que pour une incidence donne, qu'elle soit obli(iue
ou normale; avec toute autre incidence on voit immdiatement apparatre, les franges colores, mme avec les systmes de lentilles les
mieux corrigs. C'est ce qu'Abbe a nomm diffrence chromatique de
Vaberration sphriqiie. 11 est facile de comprendre que ce dfaut sera
d'autant plus accentu que l'angle d'ouverture du systme sera plus
grand. Un moyen d'y obvier consiste raliser la correction non pour
les rayons centraux, mais pour les zones moyennes de la lentille. Remarquons d'ailleurs que ce dfaut tait beaucoup plus sensible avec les
anciens verres. Depuis l'emploi des verres spciaux d'ina ^ on arrive
bien plus facilement compenser ce genre d'aberration.
Enfin, une dernire condition de l'achromatisme est d'obtenir des
images d'gale grandeur pour toutes les couleurs du spectre. Il faut
donc compenser ce qu'on nomme diffrence chromatique du grossissement.
Grce aux verres actuels, tous ces dfauts d'achromatisme sont

devenus pratiquement ngligeables, aussi


tiques fournissent-ils d'excellentes
santes pour le travail courant.

Pourtant on
parfait

et

rayons

de

les objectifs

achroma-

images, parfaitement suffi-

cherch obtenir un achromatisme encore plus


mme point non plus seulement les

runir en un

deux couleurs, mais ceux de

trois

couleurs.

On

arrive ainsi supprimer presque compltement le spectre secondaire. Les objectifs ainsi construits sont dits apochromatiques^
Les verres gnralement employs en optique depuis une vingtaine d."anes
par Schott et C'^ d'ina prsentent deux ordres d'avantages 1*^ les
rapports entre la rfringence et la dispersion sont beaucoup plus varis, c'est
ainsi que certains crown peu dispersifs sont aussi rfringents que duHint;
'* les verres
prsentent une proportionnalit bien plus accentue de la dispersion pour les ditlrentes zones du spectre. Par suite de ces qualits, ils permettent de raliser un achromatisme beaucoup plus parfait. L'addition d'acide
phosphorique et borique en quantits dtermines est un des principaux facteurs
1.

et fabriqus

de ces amliorations.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

58

nous

Nous verrons que, dans

tudierons plus loin (p. 76).

les

ces

systmes, on corrige aussi l'aberration de sphricit pour deux


couleurs diflerentes, ce qui fait disparatre la diiTrence chromatique
l'aberration sphrique. Malheureusement ces avantages ne
peuvent tre raliss, comme nous le verrons, que pour un car-

due

tement dtermin de

de l'image

l'objet et

dfauts reparaissent.

En de

et

au del

les

Nous avons dj indiqu (p. 49)


de
d'ouverture
et de l'ouverture numrique;
l'angle
rimportance
nous venons de voir la ncessit de la correction des aberrations
Qualits des objectifs.

pour la nettet des images.


La ralisation de ces deux qualits
grande ouverture numrique et correction des aberrations, donne aux objectifs les pro:

que nous devons exiger de ces


Pouvoir rsolvant ou sparateur,

prits

appareils

c'est--dire facult

de dis-

ce pouvoir
tinguer les plus fins dtails de structure des objets
dpend surtout de l'ouverture numrique et non du grossissement,
:

comme nous

le

verrons plus loin

Pouvoir dfinissant,

contours parfaitement nets


correclion des aberrations.

La

ralisation de ces

cope, qui est

(p. 63).

c'est--dire facult de fournir des


:

images

ce pouvoir dpend surtout de

deux qualits remplit

le

la

but du micros-

de nous montrer avec une nettet parfaite

les plus
de structure des objets.
On parle souvent aussi du pouvoir pntrant des objectifs
microscopiques, qualit qui est surtout recherche par les dbutants, et qui permet de voir simultanment et avec nettet plu-

fins dtails

sieurs plans d'un

qu'aux

mme

objectifs faibles;

objet. Cette qualit ne peut appartenir

comme

elle

dpend de

l'troitesse

de

l'angle d'ouverture, elle se trouve tre oppose au pouvoir rsolvant. En ralit le pouvoir pntrant n'a qu'une importance trs

secondaire, car

dans une

Nous

la

manuvre de

trs large

dirons

la vis

micromtrique

le

compense

mesure.

mme

avec Ranvier^ que

le

dfaut apparent de

plus prcieuse de l'objectif, puisqu'il permet non seulement d'tudier les contours, mais de connatre la situation relative des diffrentes parties d'un objet, de le

pntration est

la qualit

la

toucher, pour ainsi dire, l'aide de

1.

la vis

Trait technique d'histologie, 2 d., 3889, p. 24.

micromtrique

et

d'en

59

OBJECTIFS

la pense, une srie


apprcier l'paisseur . On tablit ainsi, par
de coupes optiques, dont la superposition donne une ide exacte
de la structure de l'objet.

pourtant un cas o la pntration est une qualit impor(fun objectif microscopique, c'est en microphotographie.

est

Il

tante

Dans ce

en

cas,

effet,

on ne peut y suppler, comme dans Tobserla facult d'accommodation et Tinsensibi-

valion oculaire, soit par


lit

de l'il aux petits dfauts des images,

incessante de

la vis

forts

la

manuvre

donc

un grand

par

micromtrique.

Le dfaut de pntration des


obstacle l'obtention de bonnes
ques aux

soit

grossissements et

objectifs

est

preuves microphotographiavec des prparations un peu

paisses.

Le pouvoir rsolvant et le pouvoir dfinissant dpendent encore


de conditions plus complexes que celles que nous venons d'indiquer. Aussi croyons-nous ncessaire d'entrer dans quelques
dtails sur le rle des phnomnes d'interfrence et de ditraction
dans

la

formation des images microscopiques.

Thorie de l'image secondaire d'aprs Abbe.


Rappelons en
quelques mots que les phnomnes lumineux sont expliqus par la
thorie des ondulations: la lumire est produite par un mouvement
vibratoire ou ondulatoire de rlher, perpendiculaire la direction de
propagation de la lumire. L'intensit de la lumire varie en raison
directe de l'amplitude des vibrations. Les couleurs difl'rentes des rayons
lumineux sont dues la vitesse
au
plus ou moins grande de ces vibrations

cette vitesse

parce qu'on appelle


d'onde,

par

la

est

mesure

la

longueur
qu'on dsigne
grecque a. Dans la

quantit
lettre

ligure 33, soit AB la direction suivant laquelle se propage le rayon


lumineux, ab reprsentera Tam-

plitude de la vibration et AB la
longueur d'onde, c'est--dire l'es-

Mouvement ondulatoire dun


p^^ 33
rayon lumineux se propageant dans la
direction AB.
ab, amplitude de la
vibration; AB, longueur d'onde (> du
Orujvml.
rayon lumineux.

pace correspondant la dure


d'une phase comprise entre les deux positions extrmes d'une molcule
d'ther, vibrant sous l'impulsion d'un rayon lumineux. La longueur
d'onde dpend non seulement de la couleur du rayon lumineux, mais
encore du milieu dans lequel se propage ce rayon.
Voici les principales longueurs d'onde, correspondant aux raies de
Frauenhofer et aux principales couleurs du spectre dans l'air l'unit
est le dix-millime de millimtre ou unit d'Angstrm qu'on dsigne
:

par

la lettre

A.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

60

Raie

61

OBJECTIFS

Ce que nous venons de dire sur les phnomnes d'inDiffraction.


terfrence permet d"expii(|uer les phnomnes de dillraction; on nomme
ainsi les modifications qu'prouve dans sa marche un rayon lumineux
qui vient raser la surface d'un corps.
Supposons un faisceau lumineux monochromaticiue pntrant dans
une chambre noire, travers une lentille converg,ente court foyer.
Faisons raser par ce faisceau monochrome le bord d'un mince cran.
Recevons sur un autre cran Tombre ainsi produite. Celte ombre ne sera
pas l'ombre gomtrique exacte du premier cran, c'est--dire qu'il n'y
aura pas une ligne de dmarcation tranche entre la lumire et l'ombre.
Une faible lumire pntrera dans cette ombre; puis, en dehors, on
verra apparatre une srie de bandes ou franges, alternativement bril-

"A

Lb

Franges de diffraction produites


AA, paroi de la chambre
par un cran E.
noire par o pntre le rayon R; BB,
fond de la chambre noire sur lequel
s'talent les franges; O, zone d'ombre

Fig. 36.

pure.

Figf, '61.

Franges intrieures

extrieures

corps

trs

produites
mince CC.

par

et

un
Ori-

ginal.

Original.

lantes et sombres. Ce sont les franges de diffraction


un phnomne d'interfrence (fg. 36).

elles sont

dues

couleurs du spectre peuvent donner naissance ces franges,


sont d'autant plus troites que le rayon color est plus
rfrangible. En outre, si on fait pntrer dans la chambre noire un faisceau de lumire blanche, au lieu d'un faisceau monochrome, la lumire
sera dcompose par diffraction et on apercevra sur Je second cran des
franges irises. Les franges de chaque couleur seront spares cause
de leur ingalit et les spectres obtenus prsenteront le rouge en dehors
et le violet en dedans.
On obtient les mmes phnomnes en plaant, sur le trajet du rayon
lumineux, non plus un cran opaque, mais un corps trs troit, tel qu'un
cheveu. On observera alors des franges intrieures, places dans Fombre
du cheveu, et des franges extrieures en dehors de l'ombre (fig. 37,).

Toutes

mais

les

celles-ci

Cette thorie repose sur une distinction


fondamentale qu'tablit Abhe, entre Timage des corps lumineux

Thorie d'Abbe.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

62

eux-mmes
mmes.

par

el

celle

des

corps

non

lumineux

Image des corps lumineux par eux-mmes.

par

En ce

eux-

qui

premiers, chacun de leurs points constitue un centre


d'branlement indpendant. Il en rsulte que seuls les rayons parlant d'un mme point produisent entre eux des phnomnes
d'interfrence. Au contraire, les ondes lumineuses qui parlent des

concerne

les

diffrents points de ces objets sont en


les unes vis--vis des autres, et leurs

vent interfrer entre

quelque sorte incohrentes


ondes lmentaires ne peu-

elles.

L'image d'un point lumineux fournie par une lentille sera donc
forme d'un point central trs lumineux, entour de cercles de
diffraction dont Tinlensit lumineuse dcrot trs rapidement.
L'tendue de ces cercles dpend de l'angle d'ouverture de la lentille et du diamtre du diaphragme. Gomme les longueurs d'onde
sont des fractions de millime de millimtre, avec

un diaphragme

de quelques millimtres de diamtre, l'image de diffraclion sera


si petite qu'elle donnera l'impression d'un point lumineux, o

ne pourra distinguer les cercles de diffraction.


s'agit d'un ohjet et non plus d'un i)oint, chaque point de
cet ohjet donnera lieu de mme une image entoure de cercles

l'il

S'il

de diffraclion excessivement petits. Nous savons que les ondes


lumineuses mises par chacun de ces points sont indpendantes et
ne peuvent interfrer entre elles. l*ar consquent, l'image de

chacun des points d'un objet se forme indpendamment, sans


que ces images lmentaires puissent influer les unes sur les
autres et donner naissance des phnomnes d'interfrence ou
de

diffraction.

Donc, d'aprs Abbe, dans le cas des corps lumineux par euxmmes, l'image se forme point pour point, suivant les lois de
l'optique gomtrique.

non lumineux par eux-mmes ou image


Ahbe nomme image ^^econdaire l'image des corps
non lumineux par eux-mmes. Ces corps, pour donner une
image, doivent tre clairs par une source lumineuse, mais ils

Image

des corps

secondaire.

agissent par absorption, rfraction et diffraction sur les rayons


fournis par cette source.

Les conditions de formation de l'image sont ici toutes diffChaque point de l'image de l'objet est form par la convergence de rayons provenant de tous les points de la source

rentes.

OBJECTIFS

63

lumineuse clairant Tobjet. Ces rayons sont indpendants Fun de


l'autre et ne peuvent, comme dans le cas prcdent, former une
image de diffraction d'un point de Tobjet. Au contraire, les rayons
qui proviennent des diffrents points de Tobjet microscopique
peuvent interfrer entre eux.
D'aprs la thorie d'Abbe l'objet agit sur les rayons parlant de

source lumineuse comme un rseau de diffraction^ et donne


d'abord de cette source une image de diffraction. De cette dernire
image partent des rayons, dont l'interfrence produit une image
Ja

de

l'objet.

donn

la

donc un phnomne secondaire, suborproduction de l'image de dilTraction, d'o le nom

Celle-ci est

d'image secondaire donn par Abbe. Cette image prsente des


dtails d'autant plus fins que l'image de diffraction pntre plus
compltement dans l'objectif. Nous pouvons dire ds maintenant

que

le

pouvoir rsolvant, ou pouvoir de rendre visibles les strucdpend en premier lieu de l'angle d'ouverture de

tures fines,

V objectif. Plus cet angle est grand, plus sera grande la portion
de l'image de diffraction, produite par la structure donne, qui
pntrera dans le microscope.

Au point de vue optique, un rseau est constitu par une srie d'espaces alternativement transparents et opaques, excessivement rapproclis les uns des autres et rg-ulirement distribus. 11 faut qu'il y ait
au moins 40 divisions par millimtre. La lumire, en traversant un tel
rseau, produit des phnomnes de diffraction caractriss par l'apparition de spectres trs purs qui prsentent un caractre particulier
en
effet le violet y est moins dvi que le rouge, aussi, ces spectres sont-ils
violets en dedans et rouges en dehors.
On peut se rendre compte d'une manire trs simple de ce qu'est un
rseau; il suffit pour cela de rapprocher les paupires de manire
entrecroiser les cils. Ces derniers forment alors un vritable rseau. Si,
dans ces conditions, on regarde la llamme d'une bougie ou d'une lampe,
on apercevra une lueur horizontale due aux rayons diffracts et on
pourra mme voir ds spectres assez nets. Un autre exemple de rseau
est fourni par le Pleiirosigma angiilatum (fig. 103), Diatome qui sert de
test-objet, dont nous aurons parler frquemment dans la suite. Si on
place une prparation de Pleurosigma entre l'il et une source lumineuse
en ayant soin de l'incliner convenablement, on voit apparatre successivement toutes les couleurs du spectre au fur et mesure qu'on loigne
oa qu'on rapproche l'il. Chacune de ces Diatomes couvertes de fines
stries fonctionne comme un rseau et fournit des spectres de diffraction.
Les irisations de la nacre et des plumes de certains Oiseaux sont dues
aussi des phnomnes de diffraction.
:

Images de

diffraction.

En

ce

qui concerne

le

micros-

cope, on peut tudier ces phnomnes d'une manire prcise en

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

64
se servant

titue par

de
ii

la

lame de

diffraclion d'Abbe. Cette

lame

est cons-

lamelles circulaires, dont une face est argente et

lixe sur une lame porte-objet. Dans la mince coucbe d'argent,


on a grav, au moyen d'un diamant et de la machine diviser,
des rseaux constitus par des systmes de lignes parallles. Dans
le rseau reprsent fig. 38, il y a deux systmes de ces lignes
au millimtre, Tautre en posparallles; Tun renferme 70 stries

sde

double, soit 140. Ce rseau est bien conforme la dfique nous avons donne plus haut il est form d'espaces

le

nition

38.
Reprsentation simplirie
de la lamelle centrale de la lame de
diffraction d'Abbe.
Oriyinal.

Fig.

Image de diffraction produite


par les stries parallles de la lame
de diffraction d'Abbe.
Original.

Fig. 39.

alternativement transparents et opaques, les premiers constituant


des fentes trs troites. Si on regarde une bougie travers ce
rseau, on aperoit des franges de diffraction. Pour observer au

microscope les phnomnes de diffraction produits par cette lame,


on emploie un objectif trs faible, tel que le^aa ou le A de Zeiss
(donnant un grossissement de 30 diam. environ). On a soin de
choisir

un

fort clairage et

de donner au diaphragme une faible

On met

au point, comme d'habitude, avec Foculaire,


En
puis on enlve ce dernier et on regarde dans le tube (tig. 39).
examinant la partie du rseau renfermant 70 stries au milhmtre,
on aperoit au centre du champ une image blanche et circulaire
ouverture.

reprsentant l'ouverture du diaphragme. Cette image est lorme


se trouvent
par les rayons centraux non diffracts. De cliaque ct

images irises disposes perpendiculairement aux lignes du


Ces images sont des spectres trs purs, dans lesquels le rouge

test.

OBJECTIFS

65

en dehors d'aprs ce que nous avons dit plus haut, elles


prsentent tous les caractres des images par des rayons dilracts.
Si on examine de la mme faon la partie du rseau renfermant

est plac

140

stries

diffraction

au millimtre, on ne verra plus que deux spectres de


de
chaque

ct de l'image centrale

du diaphragme. Ce rseau, qui possde deux


fois

plus de lignes, donne

moins de spec-

deux

fois

tres

de diffraction

la

distance qui spare ces


spectres est en raison in-

verse de

spare
seau.

la

les

distance qui
lignes

du

r-

exprience nous
nettement la
production de l'image de
diffraction de la source luCette

montre

^'

Image de diffraction produite par le


Pleurosigma an/ulatum.
/rf, faisceau direct:
r. partie rouge des spectres
i', partie violace
de diffraction.
Oriyinal.

Fig. 40.

trs

mineuse par une structure


fine. A dfaut de la lame de
diffraction d'Abbe, on peut
tudier l'image de diffraction Taide du Pleurosigma
angiilatam

On met

(fig. 103).

au point une de ces Diatomes avec un fort objectif


sec ou avec un ob.jeclif
immersion, puis on enlve
l'ocu laire e t on regarde dans
le tube. En refilant convenablement l'ouverture du
diaphragme, on voit au
centre du

champ une image

blanche

circulaire

et,

Fig 41.
Reprsentation schmatique du faisceau direct {dd) et des faisceaux diffracts
(r, r, produits par le Pleurosigma angulatum.

Original.

priphrie du champ,
6 spectres de dilfraction dont les couleurs sont d'autant plus nettes que
l'ouverture du diaphragme est plus petite (lig. 40). Bien entendu ces
spectres sont rouges la priphrie. Les trois systmes de stries du
Pleurosigma agissent comme un rseau de diffraction; ces trois systmes,
en se coupant, donnent des figures hexagonales qui se traduisent par
la

6 spectres,

correspondant deux par deux aux

Images secondaires.

cope, est produite, d'aprs


M. L.\NGEROx.

la

trois

systmes de

L'image de Tobjet, dans


thorie

le

stries.

micros-

dWbbe, par Tinterfrence des

Prcis de Microscopie.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIIIES

66
rayons mis

par les spectres de diffraction que

Le calcul permet

nous venons

que, pour obtenir une


image exactement semblable l'objet, il faut que Tobjeclif puisse
embrasser la totalit de l'image de diffraction produite par cet
objet. Par contre, on ne percevra aucun dtail d'une structure
d'tudier.

d'tablir

ne pntre pas dans l'objectif au moins un spectre de diffracen plus de l'image blancbe directe de la source lumineuse.
s'il

tion

Reprenons l'exemple du Pleurosigma an g ula tiim ei examinons


41 qui schmatise le parcours des rayons diffracts. Le

la figure

faisceau

dd reprsente

les

centrale de la figure 40.

rayons directs, formant l'image blanche


se trouve un faisceau dif-

De chaque ct

les rayons violets v sont les moins d\is,


rayons rouges r se trouvent la priphrie. Un
objectif dont l'ouverture serait trop petite pour admettre d'autres
rayons que ceux du faisceau central ne montrerait aucun dtail de

fract,

tandis

dans lequel

que

les

structure. D'autre part, l'angle que les faisceaux dilTracts forment avec l'axe optique est d'autant plus ouvert que la structure

par consquent l'objectif devra avoir une ouverture


d'autant
plus grande pour rsoudre cette structure. Il
numrique
faut en outre que le cne clairant soit assez large pour que les
est plus fine

spectres de difraclion soient entirement compris dans le champ


c'est alors que l'image aura son maximum de nettet et de clart.
:

Un cne plus large ne fera que rendre l'image indistincte en faisant pntrer dans l'objectif des rayons autres que ceux qui prol'objet. Nous trouvons ici une nouvelle preuve de l'utidu diaphragme-iris qui permet de rduire le cne d'clairage

viennent de
lit

aux dimensions ncessaires

(p. 40).

dmontrent plus facilement au moyen des rseaux


de la plaque de diffraction d'Abbe et des diaphragmes particuliers
qui l'accompagnent. On visse entre l'objectif et le tube un anneau
spcial possdant une ouverture latrale qui permet d'introduire
Ces

lois se

diaphragmes spciaux et de les placer exactement dans le plan


de l'image de diffraction fournie par l'objectif aa de Zeiss. Cet
anneau est tournant et permet par consquent de faire tourner
les

les

diaphragmes dans un plan horizontal.

Examiner comme prcdemment la lamelle centrale


r^ exprience.
la plaque de diffraction. Insrer dans l'anneau un diaphragme en
forme de fente troite qui ne laisse passer que l'image blanche directe
de la source lumineuse. Orienter les bords du diaphragme paralllement
de

OBJECTIFS

67

aux lig-nes du rseau. L'oculaire tant enlev, on ne voit que les faisceaux centraux blancs, sans aucune trace de rayon diffract. L'oculaire
tant replac, Timaie du rseau apparat comme une surface claire, sans
qu'aucune ligne soit visible. Pour faire apparatre ces lignes, il faut

la

Premire exprience avec


lame de dirt'raction d'Abbe. Sans

Fig. 42.

oculaire.

Original.

la

Premire exprience avec


lame de diffraction d'Abbe. Avec

Fig. 43.

oculaire.

Original.

diaphragme perpendiculairement aux lignes du rseau, car


on admet ainsi les rayons diiracts.
2^ exprience.
Prendre un diaphragme form d'une fente plus large,

orienter le

la

Deuxime exprience avec


lame de diffraction d'Abbe. Sans

Fig. 44.

oculaire.

Original.

Fig. 45.
la

Deuxime exprience avec


diffraction d'Abbe. Avec

lame de

oculaire.

Original.

permettant d'admettre, entre les faisceaux centraux, les deux premiers


spectres de diffraction, correspondant au rseau de 70 stries au millimtre. On verra alors ces stries, mais la zone correspondant au rseau

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

68

de 140 Stries restera uniformment brillante puisque aucun des faisceaux


de diffraction qui leur correspondent n'a t admis. En faisant tourner
le diaptiragme et en l'orientant perpendiculairement aux lignes du
rseau, on admet d'autres rayons dilfracts et on voit apparatre les
deux rseaux.

Ces deux premires expriences dmontrent de

la faon la plus
des
de
plus en plus
employant
diaphragmes spciaux
troits, qui diminuent l'angle d'ouverture de l'objectif, on diminue
en mme temps le pouvoir rsolvant du microscope. Cette dimi-

nette qu'en

nution est due


rsolvant disparait

la
si

su4)pression des rayons diJTracts. Le pouvoir


on n'admet pas au moins deux faisceaux dif-

Donc, ainsi que nous le disions plus haut, le pouvoir


rsolvant dpend en premier lieu de l'angle d'ouverture de l'obfracts.

jectif.

5* exprience.
Prendre le diaphragme trois fentes rectangulaires,
et l'orienter comme plus haut, paralllement au rseau. La fente cen-

trale laisse passer l'image directe de la source lumineuse. Les fentes


latrales laissent passer le premier spectre du rseau le plus fin (140)

69

OBJECTIFS

netlel de
prendrait pour la reprsentation d'une structure relle. Cette apparence est d'ailleurs conforme la thorie et poucette imaize et la

prvue d'aprs les deux premires expriences.


Pour s'assurer de l'origine de cette image fictive, il suffit de faire
tourner l'anneau et d'orienter le diaphragme perpendiculairement aux
stries du rseau. On voit alors apparatre une image conforme la ravait tre

lit

des choses.

W- exprience.

Employer encore un diaphragme

trois fentes rec-

4 spectre du
tangulaires, mais disposes de manire laisser passer le
deux
gros rseau et le 2^ speclre du rseau fin, on verra alors apparatre
fois plus de lignes que dans l'exprience prcdente, c'est--dire que le

Quatrime exprience avec


lame de diffraction d'Abbe. Sans

Fig. 48.
la

oculaire.

rseau

fin

la

Quatrime exprience avec


lame de diffraction d'Abbe. Avec

Fig. 40

oculaire.

Ot-irjinal.

paratra doubl et

le

Oriijinal.

gros rseau quadrupl,

un champ uniformment couvert de

le tout

donnant

fines stries.

Ces deux dernires expriences nous montrent donc l'apparition


de stries

fictives, tandis

que

les

deux premires

faisaient disparatre

des stries relles. Ces deux sries s'accordent pour vrifier l'exactitude de la thorie des images de diffraction d'Abbe. La seconde
srie doit mettre

d'optique dont

micrographes en garde contre les illusions


peuvent tre victimes.
des expriences analogues avec les rseaux qui se
les

ils

On peut faire
trouvent tracs sur les deux autres lamelles de
tion.

Ces rseaux sont des rseaux

losangiques,

l'autre de

mailles

la

croiss, l'un

rectangulaires.

lame de

diffrac-

form de mailles

Au moyen

de

diaphragmes convenablement choisis, on peut faire disparatre


l'un ou l'autre des systmes de stries, modifier la forme des
mailles du rseau ou mme faire ajparaitre des stries entirement
fictives.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

70

La conclusion gnrale de ton les ces expriences est que les


rayons centraux sont incapables de fournir seuls une image exacte
des structures fines. Les rayons diflracts sont absolument indispensables pour la rsolution de ces structures. Plus l'objectif
admettra de rayons diffracts, plus la structure fine en question
sera reprsente fidlement.

Des

objets dont la structure est identique peuvent donner des


images di-^semblables si on ne recueille pas le i>lus grand nombre

possible de rayons diffracts. Par contre des objets de structure


trs diffrente pourront donner des images semblables, si on ne

pas intervenir tous les rayons diffracts dans la formation de


l'image, comme le montrent bien les expriences 3 et 4.

fait

Ces considrations montrent Timporlance capitale de la thorie


et Tinterprtation des structures fines.

d'Abbe pourTtude
Il

n'en est pas de

mme

c'est--dire dpassant de

pour

les objets

beaucoup

d'onde des rayons lumineux (voir

les

p.

relativement volumineux,

dimensions de

60

la

longueur

de ces longueurs
suffisent former

la table

Dans ce cas, les rayons centraux


l'image qui est constitue suivant les lois de l'optique gomtrique. Un bon exemple de ces objets nous est fourni par les
chambres humides gradues qui servent la numration des glo-

d'onde).

bules sanguins. Le volumineux rseau qui y est trac forme une


image microscopique sans intervention des rayons diffracts. Si on
prend une structure un peu plus fine, les rayons diffracts seront

nombreux et localiss dans un troit espace autour du faisceau


un objectif de faible ouverture pourra les recevoir tous et
central
fournir une image exacte. Enfin, pour une structure trs fine, les
rayons diffracts seront moins nombreux et plus loigns les uns
:

des autres (voir p. 63 l'tude de la formation des images de difil


faudra donc que l'objectif ait un grand angle
fraction)
d'ouverture, de manire recueillir le plus possible de ces rayons
;

diffracts.

Nous n'avons
les lois

tudi jusqu'ici que des rseaux rguliers, mais


d'tablir s'appliquent aussi bien aux struc-

que nous venons

tures irrgulires, quelles qu'elles soient.

Il
peut tre difficile d'tades images ll'tendue
de
la
et
tels
pour
disposition
objets,
mentaires de ditraction; mais il subsiste toujours, comme rgle
gnrale, que le faisceau de diffraction doit faire, avec le fais-

blir,

ceau direct, un angle d'autant plus grand que la structure est


plus fine. Ces structures irrgulires ne peuvent tre rsolues.

OBJECTIFS

71

c'est--dire perues dans l'image fournie par un objectif, que si ce


dernier reoit au moins le premier des spectres de diffraction fourni
par la structure observe.

Nous sommes donc amens

noncer

une

fois

de plus

cette loi

pouvoir rsolvant d'un systme de lentilles


dpend surtout de son angle d'ouverture.
Avant la publication des travaux d'Abbe on connaissait dj
fondamentale

le

empiriquement Timportance de Tangle d'ouverture, mais on n'arrivait pas comprendre pourquoi, dans certains cas, il fallait, pour
obtenir des images plus parfaites, employer des cnes lumineux
relativement troits.

Il

semblait que, dans ce cas,

lement de l'ouverture de

une

l'objectif tait susceptible

partie seu-

de fonctionner

Ce fait paraissait en complet dsaccord avec la ncesd'un grand angle d'ouverture pour obtenir une bonne rsolution. On sait maintenant que les faisceaux de diffraction tombent
utilement.

sit

prcisment dans celte portion de l'ouverture de l'objectif dite


espace obscur (p. 37), qui n'est pas claire directement. Or ce
sont ces faisceaux de ditTraction qui jouent un rle capital dans
la

formation de l'image microscopique des structures fines. La

thorie d'Abbe explique parfaitement cette apparente anomalie.


Maintenant que nous connaissons la vritable nature du pouvoir

rsolvant, nous pouvons

comprendre sans peine que

cette qualit

indpendante du grossissement. 11 est facile de prouver exprimentalement qu'un objectif donnant un grossissement considrable
peut rsoudre moinsbienles fines stries qu'un autre objectif de grosest

sissement plus faible, mais d'une meilleure rsolution. Par exemple

avec un

bon objectif donnant 300 diamtres, on pourra mieux


distinguer une fine structure qu'avec un mauvais objectif donnant
600 diamtres. La grandeur de l'image fournie par un microscope
ne

donne donc pas

la

optiques.

mesure de

la

valeur des

combinaisons

Limites de la rsolution.
La thorie de l'image secondaire
nous amne rechercher quelle peut tre la limite du pouvoir
rsolvant, c'est--dire

la

Umite extrme au del de laquelle on ne

peut plus percevoir Tcartement de deux lignes.


Prenons le cas le plus simple, qui est celui de stries parallles. On
peut calculer la valeur du sinus de l'angle que forment les faisceaux
dilracts avec le faisceau direct. Cette valeur est gale au rapport
qui existe entre la longueur d'onde des rayons lumineux et Fcar-

tement des

stries.

On

peut donc, pour une longueur d'onde donne,

LE MlCKOSCOPh: ET SES ACCESSOIUES

72

calculer les diffrentes valeurs de l'angle pour les diverses dislances

qui sparent les raies.


Nigeli et

Schwendener ont

moyenne de 0,5

[jl

table

est

celte

qui

suivre.

CARTEMENT EN
DES STRIES A RSOUDRE
[i.

tabli

pour une longueur d'onde

valeur de cet angle. Nous reproduisons


ncessaire l'intelligence de ce qui va

la

OBJECTIFS

73

C'est ainsi ([ue la photographie permet d'employer les rayons ultraviolets, dont la longueur d'onde est de 2.750 A, et d'obtenir des dtails

que l'il ne peut percevoir avec ies rayons de g-rande longueur d'onde
auxquels il est seulement sensible (mthode de Khler i). On peut arriver
ainsi abaisser la litnile de rsolution de
5
4. lltons-nous
de dire que ce procd est plus thorique que pratique et qu'il n'est pas
sans prsenter de grandes difficults, sur lesquelles nous reviendrons
plus loin (p. 79). Mentionnons ds maintenant la ncessit de se servir
uniquement de lentilles, de lames et de lamelles en quartz, car le verre
ne laisse pas passer les rayons ultra-violets. La source lumineuse doit
tre une tincelle lectrique jaillissant entre des lectrodes de cadmium
ou de magnsium ou une lampe vapeur de mercure en quartz. La
mise au point se fait l'aide de verres fluorescents, qui rendent visibles
les ravons ultra-violets.
En outre, on ne peut employer qu'une zone dtermine du spectre
ultra-violet, car, au-dessous d'une longueur d'onde de 2.000 A, les rayons
ne peuveni traverser l'air.
[jl,

\j.,

11
y a un moyen beaucoup plus simple de diminuer la longueur
d'onde des rayons lumineux. Il consiste les faire passer, avant
leur entre dans Tobjectif, non dans Pair, mais dans un milieu plus

rfringent. Ce procd est ralis dans les objectifs immersion


dont nous aurons parler plus longuement. On sait que la longueur d'onde et la vitesse de translation des rayons lumineux sont

inversement proportionnelles Tindice de rfraction du milieu


travers. L'indice de rfraction de l'air tant gal Tunit, si, par
exemple, l'indice de rfraction du liquide d'immersion est 1,5, la

longueur d'onde des rayons qui traverseront ce liquide sera raccourcie de deux tiers. Pour des stries distantes de
u, 5 il suffira
d'un angle de 42 pour que le premier faisceau de dilraction
pntre dans l'objectif. En employant comme liquide d'inmiersion

monobromure de naphtaline, dont lindice de rfraction est trs


lev (i,H6), et en clairant la prparation avec des rayons de
4000 A (Ou., 40) de longueur d'onde, l'extrme limite de rsolution
le

sera abaisse t-Vt

'J-?

24.

On

'

pourra donc, dans ces condi'

1,DD
lions, arriver distinguer des stries distantes de

Emploi
Un bon moyen d'augmenter

d'artifices d'clairage.

a, 24.

a) clairage oblique.
puissance de rsolution des
objectifs est d'employer l'clairage oblique. Si, au moyen de la
crmaillre reprsente fig. 26, on dplace latralement le porte-

diaphragme de
1.

Zeitschrift.

f.

l'appareil

iciss.

la

d'clairage,

on peut arriver

Mikroskopie, XXI. p. 129-165, 273-304, 1904.

rgler

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

74

que le faisceau lumineux direct qui traverse Tobjel soit tangent au diaphragme de robjeclif aprs rfraction parla lentille. Dans ces conditions, il pntre encore dans le
microscope, et sous le mme angle, un faisceau de diffraction.
l'clairage de telle sorte

L'angle que forment entre eux la faisceau direct et le faisceau


diffract est double de ce qu'il serait avec Tclairage central.

La diffrence fondamentale entre l'clairage central et l'clairage


est donc la suivante. Avec l'clairage central, l'image

oblique

blanche du faisceau direct se trouve au milieu de l'image de diffraction et est entoure des

deux

de

cts

diffraction.

l'clairage

Au

spectres de
contraire, avec

oblique,

l'image

blanche du faisceau direct se


trouve

au

bord

du champ

spectres de diffraction qui se trouvent sur

visuel;

les

un des

cts

s'tendre sur

Fig. 50.
Aspect des spectres de diffraction fournis par le Pleurosigma angulatum
en lumirre oblique; d, faisceau direct.

fois plus grand. L'clairage


oblique double donc le pouvoir rsolvant d'un objectif.

Original.

peuvent donc
un espace deux

Il

est

d'observer

facile

phnomnes

soit

avec

de diffraction d'Abbe,

ces

la

lame

soit

avec

une prparation de Pleurosigma angulatum. On met au point comme


avec l'clairage central, puis on enlve l'oculaire, on
regarde dans le tube et on fait jouer la crmaillre de l'clairage
oblique. En faisant tourner le porte-diaphragme autour de son axe,
on voit se dplacer le spectre trs pur et trs complet que donne
l'clairage oblique. Pour une tude plus approfondie de l'inlluence de
l'clairage oblique sur le pouvoir rsolvant, un des meilleurs objets est
le Pleurosigma balticum, dont les stries transversales et longitudinales
sont relativement fortes. On choisit un objectif dont l'ouverture numd'habitude,

rique soit assez grande pour qu'avec l'clairage central le premier faisceau de diffraction tombe en dehors du champ, mais pour qu'il apparaisse
ds qu'on passe Tclairage oblique. On commence par retirer l'oculaire pour se rendre compte de l'apparition et de la disparition de l'image
de diffraction, suivant que l'clairage est oblique ou central. Ensuite on

on remet l'oculaire et, en regardant la prparation, on ne distingue aucun des deux systmes de stries. Si, maintenant, on dplace le cne lumineux, dans une direction perpendiculaire
aux stries longitudinales, de faon ce que le premier faisceau de diffraction pntre dans l'objectif, on voit immdiatement apparatre les

rtablit l'clairage central,

7o

OBJECTIFS
stries

longitudinales. Tournons maintenant

nous verrons disparatre

le

porte-diaphragme de

90,

les stries longitudinales et apparatre les stries

transversales. Ramenons le porte-diaphragme dans une position


moyenne, de faon permettre aux faisceaux de dilraction produits par
les deux systmes de stries de pntrer dans l'objectif, nous verrons
apparatre en mme temps ces deux structures.

b)

L'clairage central obtenu avec un


clairage central.
cne lumineux permet, avec des objectifs bien corrigs,

trs large

de rsoudre certains dtails de structure qui, avec un cne lumitroit, ne seraient visibles qu'en lumire oblique. En effet,

neux
dans

le

cas d'un cne trs large, les rayons

peuvent pntrer dans robjectif


image de la structure tudie.

et

marginaux

diffracts

produire par interfrence une

On peut donc, en employant un


cne lumineux qui remplit compltement l'ouverture de l'obla mme puissance de rsolution qu'avec l'clairage
jectif, obtenir
oblique.

Quelle sera l'extrme limite de rsolution qui pourra tre


au moyen de ces artifices d'clairage? Nous avons vu
qu'avec l'clairage central, l'immersion au monobromure de
atteinte

naphtaline

et la

stries distantes

lumire violette on pouvait arriver rsoudre des


de

u, 24.

Avec

l'clairage oblique, cette limite

u., 12. Ce chiffre est d'ailleurs tout thopourra tre porte


ne
tre
atteint dans les conditions ordinaires.
et
saurait
rique

D'ailleurs l'emploi d'un clairage avec des rayons de faible lon-

gueur d'onde prsente de grandes difficults pratiques.


1 11 est vident, d'aprs cette tude
Conclusions pratiques.
sommaire des phnomnes de ditraction, que les objectifs

grande ouverture numrique sont indispensables pour la rsolution


des fins dtails. Ils sont donc ncessaires non seulement pour
l'tude des Diatomes, mais encore, et surtout, pour les travaux de
protistologie et de cytologie, car ce genre de recherches eAige
le

m.aximum de rsolution

-et

de dfinition. C'est dans ces condi-

apochromats pourront rendre de rels services, en


de
voir nettement des dtails que les objectifs ordipermettant
naires feraient seulement souponner. C'est aussi dans ces cas
tions

que

les

particuliers qu'il y a intrt pousser la rsolution ses dernires


limites.
2*^ Pour le travail courant, au cours
duquel il n'est pas question
de rsoudre les plus fins dtails de structure, mais plutt de/econnalre leur forme, des lments histologiques ou des tres de trs

76

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

pelile

dimension,

En

ncessaires.

grandes ouvertures numriques ne sont pas

les

elTet,

un grossissement

les

faible,

fins dtails

fournis par l'objectif ne seraient pas perceptibles -lVil.

11

faut

donc rechercher plutt les objectifs grande longueur focale,


champ trs tendu et dous d'un certain pouvoir de |>nl ration,
permettant d'tudier des coupes ou des objets un peu pais. De
bons objectifs achromatiques, tels que ceux qu'on fabrique
l'heure actuelle, sont parfaitement suffisants pour ce genre de
recherches.
3

dfaut de la lame de diffraction d'Abbe,

le

IHeurosigma

de se procurer dans toutes les maisons de microscopes, fournit un moyen trs simple de contrler le
pouvoir rsolvant des objectifs puissants. Ce test devra montrer,
en enlevant l'oculaire aprs la mise au point, six spectres de difqu'il est trs facile

angulatum,

fraction correspondant
la

figure 40.

aux

Mme

trois

si

systmes de

comme

stries,

l'in-

est insuffisant ])Our

le

dique
grossissement
bien distinguer les stries, la prsence de six spectres et la rgularit de leur disposition permettront de conclure la qualit de
l'objectif.

CLASSIFICATION DES OBJECTIFS


Il

y a trois catgories d'objectifs microscopiques

les objectifs

apochromatiques et les objectifs


monochromatiques. Dans chacune de ces catgories, on distingue
encore deux groupes lesobjeclifs sec et les objectifs immersion.
achromaliques,

les

objectifs

Objectifs achromatiques et

apochromatiques. Comme

nous l'avons dj dit plus haut (p. 57), ces deux catgories d'objectifs ne diffrent que par une correction plus ou moins parfaite des
aberrations de

sphricit

cette correction est

et

de rfrangibilit. Nous savons que

obtenue au moyen de

lentilles

composes,

for-

mes de verres spciaux, possdant des pouvoirs rfringent et dispersif appropris. On arrive ainsi diminuer dans une large mesure
systmes de lentilles.
Malheureusement, ces deux ordres de correction ont une tendance
s'annuler rciproquement. Aussi est-on oblig de sacrifier un peu
l'aberration de sphricit dont les inconvnients sont moins grands

les aberrations des

si le

champ

est

par l'emploi de

chromatique

un peu trop courbe, on peut toujours y remdier


la

nuit

micromirique. Au contraire, l'aberration


beaucoup au pouvoir dfinissant, par la zone
vis

77

OBJECTIFS
irise

donc

ou spectre secondaire dont


elle

Dans

entoure

elle

les

images.

C'est

surtout qu'on s'attache corriger.

les

achromatu/ues^

objectifs

correction du spectre

la

secondaire est ralise en runissant en un

mme

point deux rayons


de couleur diffrente, choisis autant que possible dans la partie du
spectre qui renferme le plus de rayons lumineux, c'est--dire entre

D (jaune) et F (vert-bleu). De plus cette correction s'tend


difficilement toute la surface de la lentille; elle n'est gnrale-

les raies

ment

ralise que pour une seule zone de l'objectif. L'aberration


de sphricit n'est corrige que pour une seule couleur. L'emploi
des verres nouveaux (phospho et borosilicales) permet pourtant de

fabriquer ces objectifs dans des conditions de perfection qui les


rendent pratiquement gaux aux apochromatiques. Certains constructeurs y font entrer des lentilles en fluorine qui en augmentent

encore

les qualits

d'achromatisme.

Dans les objectifs apochromatiques on arrive faire converger,


en un mme point de Taxe, trois rayons de couleurs dilrenles et
,

cette correction de l'aberration

chromatique

est

uniforme pour toutes

zones de l'objectif. Ces systmes ralisent donc un achromatisme


d'ordre suprieur. En outre, l'aberration de sphricit est corrige
les

pour

deux rayons de couleur

diffrente. Les

nouveaux verres

d'acide borique ou pliosphorique ne suffisent pas pour


obtenir des corrections aussi parfaites. lia fallu pour cela employer
des lentilles de fluorine (fluorure de calcium, spath-fluor).
base

Ce minral prsente les avantages suivants 1 une grande transparence; 2^ un indice de rfraction trs faible (1,4339); 3" une
:

dispersion relative trs faible (reprsente par 97, alors que les
verres utiliss en optique n'ont pas moins de 66,5 67) ^ Il remplace donc avantageusement l'ancien crown-glass. En combinaison
le flint ordinaire, il produit une dviation secondaire exacte-

avec

ment oppose
conditions, une

celle

du spectre secondaire ordinaire. Dans ces

lentille

forme de fluorine

et

de

flint

pourra cor-

riger compltement
spectre secondaire d'un systme ordinaire
de lentilles. De plus, en associant la fluorine avec un flint trs
peu rfringent, on obtient une combinaison qui corrige trs bien
le

l'aberration de sphricit. Enfin la nature du pouvoir dispersif de


permet de l'associer des flints d'une dispersion exac-

la fluorine

tement proportionnelle.
1.

Voir pour ces chiffres Behrens, Tabellen

zum Gebrauch

Arbeitei, 4^ dit.. 1908, cf. tab. 42 et 43. p. 50 et 51.

bei mik7^oskopischen

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

78

C'est ainsi qu'on arrive

subsiste plus

qu'un spectre

qui ne nuit en rien

faible,

supprimer
tertiaire
la

spectre secondaire

cFun clat

il

ne

trs

nettet des images.

rsuite de cet achromatisme

Il

le

trs petit et

ces

suprieur que

objectifs

fournissent des images peu prs galement nettes pour tous les
comme toutes ces images ont pratiquement
rayons du spectre
:

mme

foyer, elles se superposent exactement et donnent


peu prs
une image gnrale d'un clat particulier. Les couleurs
naturelles des objets sont rendues trs exactement et l'image est
peu prs aussi nette sur les bords qu'au milieu du champ. En
le

ainsi

correction plus

la

outre,

parfaite

des deux aberrations permet

compltement l'ouverture de l'objectif, puisque la


il en rsulte
correction est faite pour toute l'tendue du champ

d'utiliser plus

une augmentation du pouvoir rsolvant. Ace point de vue, lesapochromals se comportent comme si leur ouverture numrique
tait

augmente. Enfin, l'image fournie par ces

un grossissement par
les objectifs

objectifs supporte

l'oculaire bien plus considrable

que pour

achromatiques.

Les apocliromats prsentent pourtant quelques inconvnients. Par


leur forte ouverture numrique et de leur grande distance
focale, le champ est toujours un peu courbe, surtout dans les objectifs
puissants. Il ne faut donc pas s'attendre, avec ces derniers, avoir une
nettet absolue sur toute l'tendue du champ. Ce dfaut est facilement
compens par l'emploi de la vis micromtrique; il a d'ailleurs peu d'importance, car on n'emploie gure ces objectifs pour avoir des vues d'ensuite de

semble.
et,

On

dans ce

En

pour l'tude des dtails difficiles rsoudre


on n'tudie jamais la fois qu'un champ trs limit.

les rserve

cas,

outre ces objectifs prsentent deux dfauts qui ne peuvent

simultanment. D'abord il subsiste toujours une


aberration de sphricit pour des longueurs d'onde autres que les
longueurs moyennes c'est ce qu'Abbe a nomm diffrence chrotre corrigs

matique de raberration de sphricit. Puis, malgr la concidence presque parfaite des rayons de diffrentes couleurs, il y a
toujours des carts entre les distances focales de ces couleurs.
Pour attnuer
rieures

et,

le

pour

On

premier dfaut,

effacer le second,

il
il

faut corriger les lentilles supfaut modifier les lentilles inf-

on conserve une
non achromatique, de manire ne pas diminuer
l'ouverture du systme. Il en rsulte que les images bleues sont
un peu plus grandes que les images rouges par consquent les
rieures.

choisit la premire alternative et

lentille frontale

OBJECTIFS

/9

champ seront un peu colors et les objets opaques paracette zone, entours d'un lisr bleu en dedans et jaune
dans
tront,
rougetre en dehors. Pour obvier cet inconvnient et compenser
ce reste d'aberration chromatique, on se sert d'oculaires particubords du

compensateurs (p. 95), qui possdent une aberration


chromatique exactement oppose, c'est--dire qui grossissent un
peu plus l'image rouge que l'image bleue. C'est ainsi qu'on arrive
obtenir un achromatisme aussi parfait que possible.
Malheureusement ces objectifs sont d'un prix trs lev, nous
dits

liers,

dirons
et

de

mme excessif,

la raret

en outre de
secondaire

de

par suite des difficults de leur construction

la tluorine

utilisable pour l'optique. Il importe


remarquer que, malgr la correction du spectre
beaut des images, ces objectifs ne possdent pas un

faire

et la

bons objectifs achromatipouvoir rsolvant suprieur celui des


bien
sont
derniers
ces
construits, ils suffisent parfaiques. Lorsque
tement pour tous les travaux courants. iMme pour la microphotoun clairage monochrographie, o on emploie presque toujours
tout
malique, les objectifs achromatiques donnent des rsultats en
courcomparables ceux qu'on obtient avec les apochromats; la
bure du champ est mme, ce point de vue, un inconvnient des

numros forts de ces derniers.


Nous conseillerons donc toujours l'emploi des bons
achromatiques
trs

spciaux

comme

objectifs

parfaitement suffisant, sauf dans des

cas

*.

Les objectifs monochromatiques, calculs par Rohr et Ivhler, et fabriqus par Zeiss, sont uniquement destins la photographie en lumire
ultra-violette, avec des rayons de longueur d'onde de 2750 A (0 p., 275). Nous
avons dj indiqu (p. 72) l'emploi des rayons de faible longueur d'onde
comme un moyen de reculer les limites du pouvoir rsolvant des objectifs. Les monochromats de Zeiss possdent une ouverture numrique
maxima de 1,25, mais, grce l'emploi des rayons ultra-violets, le plus
celui
puissant de ces systmes possde un pouvoir rsolvant gal
d'un objectif ordinaire dont l'ouverture numrique serait de 2,5, chilre
d'obtenir actuellement. Ces objectifs sont dits
qu'il est impossible
monochromatiques, parce qu'ils sont corrigs pour des rayons d'une seule
moins
longueur d'onde. Ils ralisent pour ces rayons un aplantisme au
gal celui des apochromatiques.
Ces objectifs sont d'un prix excessivement lev (le plus fort systme
immersion vaut 750 francs). Les lentilles sont en quartz fondu -,
seule substance qui soit permable aux rayons ultra-violets. Les ocu1.
Se mfier des objectifs dits semi-apochromatiques ou panachromatiques
annoncs dans certains catalogues. Ces dnominations, qui n'ont rien de scientiil est bon d'tre mis en garde.
fique, ont un caractre de rclame contre lequel
'2.

On ne peut employer

le

quartz naturel cause de sa birfringence

il

est

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

80

du condensateur, les lamelles et les lames doivent


en quartz. Le Ii(iuide d'immersion doit tre un mlange de
glycrine et d'eau, possdant un indice de rfraction particulier.
Les rayons ultra-violets sont obtenus en dcomposant, par des prismes
de quartz, la lumire fournie par une forte tincelle lectricjue jaillissant
entre des lectrodes de cadmium ou de magnsium. Les rayons de longueur d'onde convenable sont runis par un collecteur et envoys dans
le condensateur, par l'intermdiaire d'un prisme rflexion totale.
La mise au point se fait au moyen d'un chercheur, forte loupe qui
permet d'examiner l'image rendue visible par un cran fluorescent.
L'avantage de la photographie en lumire ultra-violette est de doubler
le pouvoir rsolvant des objectifs et de rvler, sur des prparations non
colores, des difl'rences de transparence correspondant de trs fins
dtails de structure, et dues l'absorption ingale des dilrents lments
histologiques pour les rayons ultra-violets. Il en rsulte que ces prparations non colors, fraches ou fixes, se comportent exactement comme
le font, en lumire blanche, les prparations colores.

laires, les lentilles

tre aussi

2 Objectifs sec et objectifs


sec el les objectifs

interpos entre
objet.

Dans

la lenlille

l) est

immersion.

Les

dilrent par la nature

objectifs

du milieu

frontale de Tobjectif et la lamelle couvre-

milieu est Tair, dont l'indice de

les objectifs sec ce

rfraction (n

immersion

trs

dilrent de Tindice

moyen du

verre

Au

contraire, dans les objectifs dits immersion, le


milieu qui spare la lentille frontale du couvre-objet est un liquide
dont l'indice de rfraction est aussi voisin que possible de celui
(n

l,5).

du verre. Ce liquide peut tre de l'eau distille (n= 1,33) ou


mieux de l'huile de cdre, dont l'indice de rfraction (n=::: 1,515)
est presque identique celui du verre.
Dans le cas des objectifs sec, tous les rayons dont l'inclinaison
par
l'air.

rapport

l'axe

dpasse

une certaine valeur subissent

la

au moment de leur passage de la lamelle dans


Nous avons tudi plus haut (p. 48) la rflexion totale et

rflexion

totale

nous avons vu que la valeur de


l'angle limite qui la dtermine
cet angle s'oppose ce que l'angle d'ouverture de l'objectif dpasse
:

une certaine valeur

(82).

L'interposition d'eau distille entre la

lamelle permet de doubler la valeur de


l'angle limite et de porter l'angle d'ouverture 12^. Les rsultats sont encore meilleurs lorsque le liquide d'immersion a le mme
lentille

frontale et

la

indice de rfraction que le verre.


el la rfraction sont

ncessaire de

le

Dans ce

cas, la rflexion totale

entirement supprimes

rentre amorphe par

Zeitschr. fur phys. C/teHue.

XLVI.

1903).

la fusion

tous les rayons pn-

(procd de Herschkowitsch,

OBJECTIFS
treiit

celles

81

dansTobjeclif, el Tangle crouverture n'a d'autres limites que


qui sont imposes par les dilTicultes de la construction.

L'avantage des objectifs immersion est donc de diminuer ou


rfraction des rayons lumineux par Tair entre la
lamelle et l'objectif: j)ar suite, la luminosit de l'image est consi-

d'viter la

drablement augmente, tandis (|ue, dans les objectifs sec, elle


diminue en proportion du carr du grossissement. En outre, l'admission des rayons marginaux permet d'utiliser des cnes lumineux
beaucoup plus tendus et de faire pntrer dans l'objectif les
rayons obliques, dont Timporlance est si grande pour la production des images de diffraction (p. 65).
L'emploi de Timmersion

augmente donc l'angle d'ouverture de l'objectif et permet ainsi


une meilleure rsolution, par suite de l'admission d'un plus grand
nombre de rayons dilracts. Enfin, nous avons vu (p. 73) que le
passage des rayons lumineux travers un milieu trs rfringent
diminuait leur longueur d'onde et favorisait ainsi la rsolution.
Voici, d'aprs Francotte ', un moyen trs simple de dmontrer la supdes objectifs immersion sur les objectifs sec. On prend une
les
prparation dans laquelle se trouvent deux groupes de Diatomes

riorit

unes sont montes sec, dans l'air, simplement entre lame et lamelle;
les autres sont montes dans le baume. On peut ainsi passer facilement
d'un groupe Tautre. Examinons-les avec un objectif immersion: il
est clair que, pour le premier groupe, l'objectif immersion fonctionnera comme un objectif sec, puisque dans ce cas, grce la prsence
de Tair entre la lame et la lamelle, cette dernire fonctionnera en ralit,

comme

si elle tait la face infrieure de la lentille frontale. En passant


d'un groupe l'autre, nous transformerons donc notre objectif immersion en ol)jeclif sec et rcipro(iuement. Enlevons Toculnire, aprs avoir
mis au point, et examinons la pupille d'mergence, nous verrons, pour

Diatomes montes au baume, un cercle lumineux large

les

Faissons glisser la prparalion et amenons dans

montes dans
devient un

et

immdiatement

le

champ

les

et brillant.

Diatomes

pupille d'mergence se rtrcit


petit cercle entour d'une couronne obscure. Voil donc
l'air,

la

mme objectif qui reoit beaucoup plus de rayons quand


ploy avec immersion.

le

il

est

em-

La figure 51 rend parfaitement compte de la marcbe des rayons


lumineux dans l'air et dans l'huile de cdre, au sortir de la
lamelle. Elle reprsente une coupe verticale travers la lentille
frontale d'un objectif immersion homogne et d'un objectif sec

de

1.

mme

puissance.

On

a figur

deux demi-lentilles pour runir

Francotte, Manuel de technique microscopique,

M. Lan'geron.

Prcis de Microscopie.

cf. p. 46.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

82

les deux cas en une mme ligure. Soil un rayon lumineux ABCD,
il est rfract, se
pntrant en B dans la prparation
rapproche
ainsi de la ligne mdiane MM' et suit dans le verre la direction BG.
:

En G

il
quitte le verre pour passer dans l'air et est de nouveau
rfract dans la direction GD. Il ne peut donc atteindre la lentille

frontale de Tobjectif sec. Le rayon EBG'FG qui possde exactement la mme incidence n'est rfract qu'une fois, son entre

dans

la

prparation, en B.

Il

continue ensuite sa marche en ligne

droite travers l'huile d'immersion et

la

lentille

frontale,

pour

Marche schmatique dos rayons lumineux dans Tair et dans l'huile


Fig. 51.
de cdre, dans le cas d'un objectif immersion homogne et d'un objectif sec
de mme puissance.
Original.

Un rayon lumineux encore


HBIJK peut encore tre recueilli par

contribuer la formation de l'image.


plus oblique, qui suit le trajet
la lentille frontale. Un rayon
rflexion totale au

On

moment

de

mme

incidence

de son passage de

la

LBM

subit la

lamelle dans

l'air.

voit donc, par cette figure

schmatique, que les objectifs


immersion peuvent admettre un cne lumineux trs large et que
leur ouverture numrique est trs suprieure celle des objectifs
sec de

mme

puissance.

L'emploi de l'immersion n'est possible qu'avec les objectifs


courte distance frontale, par consquent fort grossissement. G'esl
d'ailleurs

pour ceux-l seuls qu'elle prsente un avantage, car les


lumineux. Au del d'un gros-

faibles objectifs sont toujours assez

sissement de 700 800 diamtres, l'emploi des lentilles immer-

OBJECTIFS
sio devient absolument ncessaire

samment lumineuse

83

pour avoir une image

suffi-

car les systmes sec n'admettent


de
assez
ncessaires
plus
rayons obliques
pour une bonne rsoluet nette,

tion.

Classification des objectifs immersion.


On tablit,
parmi ces objectifs, aulantde catgories que de liquides d'immer-

Nous distinguerons donc les objectifs immersion eau,


huile de cdre et monobromure de naphtaline.

sion.

Les objectifs immersion Veau ne remplissent qirimparfaitemcnt le


but de ces instruments, cause de l'indice de rfraction de l'eau
(n=l,33) trop diirent de celui du verre (n
1,52). Nanmoins ces
objectifs, l'poque oii ils furent invents, constituaient djiin progrs considrable. Ils ne sont plus gure employs maintenant. Il est
rare qu'on puisse se permettre le luxe de cet accessoire. Pourtant ils
peuvent rendre des services pour suivre la marche de la diffrenciation,
au cours de certaines mthodes cytologiques. Dans ce cas, on peut les
employer sans lamelle. Ils peuvent aussi tre commodes pour l'examen
de petits animaux aquatiques. Le liquide d'immersion doit toujours tre
de l'eau distille, de faon ce que son vaporatioti ne laisse pas, la
surface des lentilles, de dpt susceptible de les rayer.

Les objectifs immersion


immersion homogne parce que
prs

de cdre, ayant

trs

peu

mme

indice de rfraction que le verre, les rayons lumitraversent un milieu optiquement homogne. L'indice de

le

neux

rhiiile de cdre sont dits aussi


l'huile

n
1,515; celui du verre des
de l,oi5; celui du verre des lames et lamelles
est environ de 1,520. Pourtant les huiles de cdre de diverses
rfraction de l'huile de cdre est

lentilles est aussi

provenances ne sont pas identiques; il y a toujours entre elles


quelque diffrence. Il est donc prfrable d'employer l'huile de
cdre fournie par le constructeur de l'objectif et pour laquelle les
lentilles ont t corriges

Ces
les

objectifs

immersion

sont, l'heure actuelle, de

beaucoup

plus employs.

Nous ne signalerons que pour mmoire les objectifs immersion au


monobrornure de naphtaline. L'indice de rfraction de ce corps est n^= 1,06;
il permet de porter l'ouverture numri([ue 1,63. Malheureusement ces
objectifs n'ont gure d'utilit pratique, car, outre leur prix fort lev,
Voir p. 445 Temploi de l'huile de paraffine comme liuile d'immersion. Le
Joyeux m'a indiqu, en outre qu'en cas de ncessit, il avait eu de bons
rsultats avec l'huile de Ricin officinale. Ces particularits sont intressantes pour
les voyageurs et explorateurs.
1.

D''

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

84

ncessitent des prcautions particulires. L'objet doit tre mont


dans un milieu* excessivement rfringent tel que le monobromure de
naphtaline, le biiodure de mercure, etc.; les lamelles doivent tre en
llint trs lourd et avoir une paisseur particulire. Le cne clairant
doit avoir une ouverture numricjue de 1,40 et tre fourni par un conls

flint. Les lames elles-mmes doivent tre en flint, alors


lames et les lamelles ordinaires sont en crown. Ces objectifs
sont donc plutt des curiosits scientifiques, servant dterminer les
limites de la visibilit microscopique au moyen de Diatomes difficiles

densateur de

que

les

rsoudre.

Emploi des

objectifs

immersion.

Nous donnerons plus

loin, en parlant de l'emploi du microscope (p. 163), quelques conseils pratiques sur la manire d'employer les objectifs immersion-

Nous devons simplement examiner

ici dans (|uels cas on doit se


immersion de prfrence aux objectifs sec.
Nous avons dj dit que pour un grossissement suprieur
oOO diamtres il tait prfrable d'employer les objectifs immersion, qui sont plus lumineux et donnent une meilleure rsolution.

servir des objectifs

o les forts objectifs sec sont plus comdispensent de l'emploi du liquide d'immersion. Un
micrograpbe exerc saura tirer parti de l'appareil d'clairage et
obtiendra, avec un bon objectif sec, d'aussi bons rsultats qu'avec
rimmersion. Nanmoins l'emploi de l'immersion est conseiller
Pourtant

il

modes, car

est des cas

ils

majorit des travailleurs et des dbutants, car il est assez diffide trouver de trs bons objectifs sec puissants et encore
plus difficile de s'en servir utilement.

la

cile

Nous devons mentionner ici un dernier avantage des objectifs


c'est de permettre Femjdoi de
immersion sur les objectifs sec
:

lamelles d'paisseur quelconque, sans ncessiter de correction-.


Ceci nous amne tudier l'intluence de l'paisseur de la lamelle
et les objectifs correction.

Pour
Influence de la lamelle. Objectifs correction.
de la lamelle a une importance beaucoup plus grande qu'on ne le croit gnralement. Ces
les objectifs sec puissants, l'paisseur

objectifs sont en effet corrigs pour une rfraction produite par


des lamelles d'une paisseur dtermine, gnralement 170 a. Si
on emploie des lamelles })lus paisses ou plus minces, l'image est
mdiocre. Voici pourquoi.

La figure 52 reprsente une bimelle deux fois plus paisse gauche


qu' droite. 00 est le plan ({ui limite la lentille frontale de l'objectif. P
est un point de l'objet d'o part un cne lumineux. Les rayons qui for-

85

OBJECTIFS

ment ce cne traversent la lamelle, puis en sortent par les plans AA et


HB pour passer de nouveau dans Tair et de l dans l'objectif 00. Tous
ces milieux font subir des rfractions aux rayons qui les traversent. Il
en rsulte que les rayons qui pntrent dans l'objectif ont tous une
direction dilfrente.
Si on vient prolonger ces rayons en arrire, aprs leur sortie du

couvre-objet, on remarque qu'ils coupent l'axe optique en des points


difTrents, et d'autant plus rapprochs de la lentille frontale que leur
inclinaison ou leur obliquit est plus forte. De plus ces rayons viennent

^ig.

5-2.

Influence de

l'paisseur de

la

lamelle sur la raarclie des rayons

lumineux (d'aprs Zimmermann).

couper Taxe en des points d'autant plus loigns les uns des autres que
lamelle est plus paisse
c'est ce que montre l'vidence la comparaison des deux moitis de la (igure.

la

Il

rsulte de ceci que, pour les objectifs puissants, dont

le

foyer

court, l'image de l'objet est forme non par un point,


mais par une srie de points superposs le long d'une ligne verticale d'autant plus longue que la lamelle est plus paisse et que
est trs

Touverture de Tobjeclif

est

plus grande.

Les

rayons

externes

du point le plus lev et Teffet dfinitif est de


donner une image dpourvue de nettet, exactement cotiime si
Tobjectif tait corrig par excs pour l'aberration de sphricit.
Pour compenser cet inconvnient, on utilise la proprit que
paraissent partir

possde l'loignement des

lentilles

On

que,

de corriger l'aberration de

dans un objectif corrig par


dfaut (fig. 30) les rayons marginaux coupent l'axe optique en un
point plus rapproch de la lentille que les rayons centraux. Si,
par la pense, nous intervertissons les rles, c'est--dire si nous
sphricit.

sait

en

elfet

considrons l'image comme l'objet et l'objet comme l'image, il


devient vident que ce systme, corrig par dlaut, peut runir en
un point le faisceau de rayons superposs le long de Taxe. Il suffira

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

86

la dformation due Tpaisseur de la lamelle,


correction par dfaut, d'autant plus que l'paisseur

donc, pour corriger


la

d'augmenter
de la lamelle est plus grande.

munis de ce qu'on appelle


de
au
de
une bague
correction,
moyen
laquelle on peut dplacer,
d'une quantit donne, les lentilles suprieures et les loigner
ainsi des lentilles infrieures. La figure 53 reprsente un objectif
ce but, certains objectifs sont

Dans

muni de

sa bague de correction. Cette bague porte des divisions

dont chacune correspond un dplacement


d'un centime de millimtre. Un trait grav
la partie fixe de
la monture
permet
d'arrter la bague un chiffre correspondant

sur

l'paisseur de la lamelle

pour laquelle on

veut corriger l'objectif. La


tre

correction

doit

les

faite

pour
toujours
objectifs qui
[)Ossdeid la bague de correction. Une ngligence ce point de vue altrerait considrablement l'image

une

Fig. 53.
Objectif
correction de Zeiss.

En tournant

la

et ferait jierdre Tobjectif

partie de ses qualits.

.
xj
uj
n
Mensuration de 1 paisseur des lamelles.
Pour effectuer la correction, il est ncessaire de

connatre exactement l'paisseur de la lamelle.


11 existe un appareil spcial, dit calibre-cadran,
sorte de pince ressort qui saisit la lamelle,
suprieureet la paire
dont l'paisseur est indique par une aiguille
de leninfrieure
actionne par la pince et parcourant un cadran
gradu. Un autre appareil plus simple est
form d'une vis pourvue d'un tambour gradu.
Ces appareils sont gradus en centimes de millimtre.
A dfaut de ces instruments il y a plusieurs mthodes qui permettent
de trouver assez facilement l'paisseur des lamelles, mme pour des
prparations dfinitives, dont on ne peut les retirer.
Le moyen le jilus simple est de mesurer l'paisseur du paquet et de
diviser par le nombre de lamelles.
On peut aussi trier les lamelles d'aprs le son qu'elles rendent en
tombant sur une table. Toutes les lamelles qui donnent le mme son
ont peu prs la mme paisseur. On superpose les lamelles ainsi

bague de correction
on

varier lcartemcnt entre la paire


fait

tries,

on mesure l'paisseur du paquet

nombre de lamelles.
Une autre mthode consiste

par

et

on divise l'paisseur obtenue

le

employer les divisions graves sur la


micromtrique. Ces divisions, nous l'avons
vu plus haut (p. 19), permettent, au moyen d'un index, de mesurer de
trs faibles dplacements verticaux de l'appareil optique. On met successivement au point la face suprieure et la face infrieure de la lamelle,
en ayant soin de tourner la vis micromlrique dans le mme sens. Pour

tte

ou

le

tambour de

la vis

87

OBJECTIFS

mise au point, il suffit de quelques grains de poussire


sur les deux faces de la lamelle. Pour viter l'erreur due l'accommodation il est bon de se servir de l'oculaire micromtrique; grce la prsence de l'chelle dans le plan focal, on sera sr de ne pas suppler
la mise au point en accommodant. La diffrence entre les deux lectures
correspond, pour un objectif sec, l'paisseur d'une couche d'air reprsentant Tobjet. Pour connatre l'paisseur relle d'une substance autre
que l'air, il faut tenir compte de l'indice de rfraction (p. 190, fig. 114)
de l'objet qu'on mesure. La formule suivante
D
nd. donne une valuation trs approche de cette paisseur. D est l'paisseur cherche,
n l'indice de rfraction de l'objet, (/ la diffrence entre les deux lectures.
Connaissant l'indice de rfraction, on peut avoir l'paisseur relle et
inversement, connaissant l'paisseur, on peut calculer l'indice de rfraction. Pour le verre des lamelles on peut prendre 1,3 comme valeur
faciliter celte

approche de n.
Enfin Czapski
a indiqu une mthode trs prcise pour valuer
exactement l'paisseur de la lamelle d'une prparation. On prend,
comme terme de comparaison, trois ou quatre lamelles, dont on a
dtermin l'paisseur exacte au moyen du calibre. On les mesure au
moyen des divisions de la vis micromtrique, sans s'occuper de la
valeur de ces divisions, puis on divise l'paisseur relle de ces lamelles
par les chiffres obtenus pour chacune d'elles. La moyenne des quotients
donne un coefficient qui servira pour corriger toutes les mesures faites
avec la mme combinaison optique, la mme longueur de tube et le
'

mme

clairage.

on ne peut connatre l'paisseur de la lamelle, on tablit la correction par ttonnement en tournant lentement la bague dans un sens ou
dans l'autre, tout en regardant dans l'oculaire. On arrive ainsi trouver
le point ({ui donne pour
l'image le maximum de nettet.
Si

Les montures correction sont rserves aux objectifs sec ou


Peau. Les objectifs immersion homogne se font

immersion

toujours monture fixe. En effet, cause de l'homognit du


milieu que traverse la lumire (verre-huile de cdre- verre), la nettet de Timage est
peu prs indpendante de Tpaisseur de la
lamelle. D'autre part,
tilles

une modification dans rcartement des

pourrait nuire

la

len-

correction des aberrations. Si l'pais-

seur anormale du couvre-objet ncessitait une compensation, on


du tube du microscope.
Nous avons vu plus haut (p. 18)
Emploi du tube tirage.
que le tube tirage du microscope porte une division millimaurait recours au tirage

trique.

Ce

tirage n'est pas destin

comme beaucoup

de dbutants

le grossissement,
mais bien complter

augmenter

le croient,

la correction des
objectifs. Dans le cas des objectifs sec, le tirage
sert particulirement compenser l'paisseur des lamelles
on le
:

Czapslvi, Die Bestimmung von Decliglasdicken


f. wiss. Mikr., V, p. 482-484, 1888.

Zeitschr.

an

fertigen

Prparaten,

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

88

raccourcit dans le cas de lamelles trop paisses (lamelles de 200


250 [j.) et 011 rallonge dans le cas contraire
(lamelles de

100

120

a).

L'emploi du tirage est surtout important


avec les objectifs immersion. Ces appasont corrigs ])our une longueur de
tube dtermine, gnralement 170 mm.,
dont il faut retrancher Tpaisseur du revolver
reils

ou du changeur coulisse. Une diffrence


de 10 mm. suffit pour donner des images
mdiocres.

trs
Il

ne faut pas confondre avec

nisme des bagues


^'dc ztis7- E^Tai^sant
tourner la bague RR
on lve la paire superieure de lentilles
(Z.)
z:/

dans

la

indique

position

par

la

mcamonture

le

spciale de certains objectifs faibles, tels que


dc ZcisS (flg. 54). CcS objCCtifs SOUt
constitus par dcux Icntillcs doublcs rnrune
i

le a*

luobile

bague

les

^q^^j.

traits pointills (grand.


nat.}.

correction

^^-^

permet d'carter et de rapproaiusi une srie de u


ffros-

obtient

sissemenls varis qui, pour un


vont gnralement du
laire,

mme

ocu-

simple au
double. Ces objectifs sont trs prcieux pour les dessins qui doivent tre excuts un trs faible grossissement.

NOTATION DES OBJECTIFS


Les objectifs achromatiques sec sont gnralement dsigns
par des numros arbitraires, 1, 2, 3, ou par des lettres, A, B, C.
Les objectifs achromatiques immersion sont dsigns par leur
distance focale exprime en pouces anglais. Les chiffres 1/10,
1/12, 1/15, 1/18, que portent les montures de ces objectifs, signifient donc que leur dislance focale est de 1/12, 1/15 de pouce
anglais, etc. Le pouce anglais vaut 25 mm. 4. Les objectifs I/IO,
1/12, 1/15, 1/16, 1/18 ont donc 2 mm. 5, 1
mm. 6, 1 mm. 4 de distance focale.

mm.

9, 1

mm.

8,

Les objectifs apochromatiques sont tous dsigns par leur distance focale exprime en millimtres et fractions de millimtre.

On

dit,

1,5

mm.

par exemple, un apochromatique de 16, 8, 4, 3, 3, 2,

La connaissance de

la

distance focale permet de calculer facile-

89

OBJECTIFS

ment

le

c'est--dire ramplilicagrossissement propre de l'objectif,


employ seul, sans oculaire. On obtient ce

tion qu'il donnerait,

cbiffre 250, qui correspond


grossissement propre en divisant le
la distance de la vision distincte, parla valeur de la distance focale.

Par exemple, pour un apochromatique de 4

250
le

grossissement propre est gal ^V-

On

est quelquefois

trs

mm. de

distance focale,

^ 62,5.

embarrass pour tablir une concor-

des divers constructeurs. Voici quelques


indications ce sujet. La plupart des constructeurs franais et
des chiffres
trangers dsignent leurs objectifs achromatiques par
arbitraires, le n" 1 tant le plus faible et le plus fort tant le n 8

dance entre

ou

le

les objectifs

n 9, suivant les maisons. Les

numros d'ordre des

objectifs

franais ne correspondent pas exactement ceux des objectifs


allemands ou autrichiens, surtout pour les systmes puissants.

Ainsi

le

4 de Stiassnie et de Leitz sont peu prs identiques,

et le

correspond plutt au 6 de Stiassnie.


Les objectifs achromatiques de Zeiss sont dsigns par des
lettres minuscules et majuscules suivant leur puissance. Le a}
correspond peu prs au 2 de Stiassnie, le C au 4 et leDD au 6;
tandis

que

le

7 de Leitz

voir ce sujet la table de concordance de la p. 91.

Le

1 a toujours

les dissections

et

un

trs

long foyer:

dissociations, les

il

convient pour rentomologie,

dessins

un

faible

grossis-

sement (/j-,2(? 6^ir/??2^/re6').


Le 2 a encore un long foyer nanmoins

il
peut dj tre associ
revolver des objectifs plus forts. 11 faut
;

commodment sur un

quand on passe au 3 ou au 4, mais d'une quantit qui


permet de trouver ra[)idement la mise au point. C'est un objectif
abaisser le tube

commode pour

et

qui notre avis doit

faire partie

Il

donne des grossisse-

les tudes topographiques


d'un microscope bien compris.
ments de ^0 60 diamires.

Le 3 et le 4, surtout ce dernier, allient l'tendue du champ


un grossissement suffisant [100-200 diam.) pour permettre la
recherche des ufs d'Helminthes dans les djections, l'tude
prparatoire des coupes

et,

en gnral, tous

les

travaux de topogra-

de reprage qui exigent un grossissement moyen avec un


phie
champ aussi tendu que possible.
Le 5, notre avis, ne fournit pas des images suffisamment
et

Nous prfrons beaucoup le 6 ou le 7, suivant les construcon


teurs;
[leut avec ces objectifs et un jeu d'oculaires obtenir

grossies.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

90

lacilemcnl des grossissements de 300 500 diamtres qm sont


courants, pour toutes sortes de travaux zoologiques et

les plus

botaniques.
Nous ne conseillons pas remploi des numros 8 et 9. Ces objectifs sont
toujours peu lumineux et donnent souvent des images

mdiocres, quoique trs grossies. Ils supporlent mal les oculaires


forts, qui leur enlvent la plus grande partie de leur luminosit
dj trs faible.
Au del de 500 diamtres

il est
prfrable, en gnral, d'employer les objectifs immersion. Il faut cboisir un numro fort
parmi ces derniers, 1/lSJ au moins. Le 1/15 est prfrable et le
.

Objectif faible
sec de Leitz.

Fig.o.

Fig. 56.

Objectif puissant sec de Leitz.

Objectif immerFig. 57.


sion homogne de Leitz.

1/16 est encore d'un emploi trs pratique. Nous reviendrons d'ailleurs sur celte question, en traitant du choix d'un microscope.
Les figures 55 57 reprsentent la section de trois types d'objectifs achromati({ues.

Dans

sec d'un type faible ou

la

figure

moyen

il

55 nous voyons un objectif


form de lentilles doubles

est

on obtient la correction des aberrations.


La figure 56 reprsente un objectif sec puissant la lentille fron-

ou

triples par lesquelles

tale

les

hmisphrique produit presque elle seule le grossissement


deux lentilles double et triple servent aux corrections. De
:

mme, dans la
sion

figure 57 qui reprsente

homogne,

hmisphrique
entre

la

un type

d'objectif

immer-

le

grossissement

est produit par la lentille frontale

et

par

la lentille

en forme de mnisque, intercale

frontale et les lentilles de correction. Cette disposition,

invente par les Amricains Spencer et Toiles et encore employe


aujourd'hui, se nomme duplexeront. Les autres lentilles doubles et
triples sont des lentilles correctrices.

OBJECTIFS

Table de concordance
des objectifs de Zeiss, Leitz et Stiassnie.

Numro
I

Longueur
focale.

oc

a"

Ouv. numrique.

Numro

Longueur
focale.

Ouv. numrique.

Numro

Longueur
Longue
focale

91

92

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

Table de concordance
des oculaires de Zeiss, Leitz

et

Stiassnie.

CHAPITRE

OCULAIRES
L'oculaire du microscope est form de deux lentilles, simples
ou composes, gnralement spares par un diaphragme, et montes aux deuxextrmitsd'un tube, glissant frottement doux dans
la partie suprieure du tube du microscope.

L'oculaire sert observer l'image relle et renverse fournie


Il exerce sur cette
image une double action

par robjeclif.
1

Il

Tagrandit en

la

transformant en une image virtuelle, mais

toujours renverse;
2 Il aplanit et claircit

le

champ

optique, ou plan circulaire

clair dans lequel l'objet parat plac.


La lentille suprieure se nomme lentille oculaire; c'est elle qui
agrandit l'image relle. La lentille infrieure se nomme lentille

collectrice ou

verre de champ, c'est elle qui aplanit et claircit


en
restreignant le grossissement de la lentille oculaire.
l'image
Pour se rendre compte de l'action de cette lentille, [trenons un

champ et examinons de
nouveau l'image microscopique. Nous verrons que le grossissement est beaucoup plus fort, mais que le champ a diminu dans
les mmes proportions. On ne voit plus qu'une minime partie de

oculaire d'Huyghens, enlevons le verre de

l'objet et

du

il

champ

faut dplacer l'il pour apercevoir les diffrentes zones


primitif, fourni par l'oculaire complet. En outre,

l'aberration de sphricit dforme considrablement l'image.


Les oculaires ordinaires appartiennent deux types, l'un dit
ngatif, ou oculaire

d'Huyghens,

l'autre dit positif

ou oculaire de

oculaires compensateurs constituent un troisime


type d'oculaires.
Ce sont les oculaires em})loys
Oculaires d'Huyghens.
couramment avec les objectifs achromatiques. Ils sont forms de

Ramsden. Les

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

94

deux
de

lenlilles

l'objectif.

plan-convexes, dont

Ces deux

lentilles

la

convexit est tourne du ct

ne sont pas achromatiques, mais

donnent pourtant une image peu prs achromalique, parce


que leur cartement est peu prs gal la demi-somme de leurs
longueurs focales. En outre, la longueur focale de la collectrice
elles

peu prs double de celle de la lentille oculaire.


Le foyer infiieurse trouve plac entre les deux lentilles, tandis
que le foyer suprieur est un peu au-dessus de la lentille oculaire. L'image se forme donc entre les deux lentilles, d'o le nom
d'oculaire ngatif. Le diaphragme destin limiter le champ
esl

optique se trouve dans le plan de l'image.


Il rsulte de cette construction
que ces oculaires ne peuvent
servir de loupe, puisqu'on ne peut placer l'objet entre le foyer et

Par contre, on peut les faire fonctionner comme loupe


retournant et en regardant par le verre de champ; malheureusement le foyer est excessivement court. Les oculaires dits

la lentille.

en

les

aplantiques, orthoscopiques, priscopiques, etc., sont construits


avec des lentilles oculaires corriges par excs, de faon ce que
leur foyer soit plus allong aux bords qu'au centre. Grce cet
artifice,

l'image ne parait pas bombe

c'est ainsi

qu'on obtient

une plus grande planit du champ.

Dans ces oculaires, les deux lenlilles ont


Oculaires de Ramsden.
leur face plane tourne en deliors et leur face convexe tourne en
dedans. Les deux foyers se trouvent en deliors de l'oculaire, qui peut
ainsi servir de loupe sur ses deux faces. L'image se forme en avant des
deux lentilles, d'o le nom d'oculaire positif. Le diaphragme se trouve
donc aussi en avant des lentilles et non entre elles, comme dans l'oculaire

d'Huyghens.
les anciens oculaires du type Ramsden, on obtenait l'achromatisme en calculant les foyers des deux lentilles, de faon ce qu'ils
soient gaux entre eux et l'cartement des deux verres. Mais cet
achromatisme est toujours imparfait, aussi l'oculaire de Ramsden est-il
peu prs abandonn.
L'image relle de l'objectif doit se trouver en dehors de l'oculaire et
en dedans de son foyer, de telle sorte que cet oculaire fonctionne
comme loupe simple. Au contraire, dans l'oculaire d'Huyghens, l'image
relle de l'objectif doit tomber entre les deux lentilles. La pupille
d'mergence se trouve au voisinage du foyer suprieur.
Nous avons vu que le diaphragme se trouve en avant des lentilles,
dans le mme plan que l'image relle. Cette particularit permet d'utiliser l'oculaire de Ramsden comme oculaire micromtrique et lui donne
une supriorit, ce point de vue, sur l'oculaire d'Huyghens. En effet,
dans l'oculaire de Ramsden, l'chelle est place dans le diaphragme,
en avant des deux lentilles, et se trouve grossie galement par tout l'oculaire, tandis que, dans l'oculaire d'Huyghens, l'chelle est place dans

Dans

OCULAIRES

95

diaphra^-me, entre les deux lentilles, et n'est grossie que par la lentille
oculaire; il en rsulte des aberrations (jui nuisent la prcision des

le

le dispositif de Ramsden est-il gnralement adopt pour


micromtriques de prcision, tambour gradu.

mesures. Aussi
les oculaires

Oculaires compensateurs.
comme nous lavons dit })liis haut
de grossissement pour

les

Ces oculaires sont destins,

(p. 79),

compenser

l'ingalit

diverses couleurs (diffrence chroma-

tique du grossissement, p. 57) dans les objectifs apochromaliques.


Nous savons que ce dfaut est d, pour ces objectifs, la lentille
frontale non achromatique ncessaire pour augmenter Touverture
Il en rsulte
que les diverses images colores qui se
superposent pour former l'image complte de l'objet n'ont pas
exactement les mmes dimensions; Timage bleue dpasse lgrement l'image rouge. Si on regarde cette image avec un oculaire

numrique.

ordinaire,
color, qui

on

voit que les contours sont marqus d'un lisr


augmente mesure qu'on s'approche de la priphrie

du champ. D'ailleurs, les constructeurs donnent


ment leurs apochromatiques un certain degr de

intentionnelle-

ce dfaut, afin

le corriger entirement au moyen des oculaires compensateurs. Ceux-ci sont calculs pour prsenter au mme degr
le dfaut contraire, par consquent pour compenser le dfaut
d'achromatisme des objectifs. Ces oculaires donnent donc pour

de pouvoir

rayons rouges une image plus grande que pour les rayons
bleus; il est facile de s'en rendre compte en regardant travers
les

un numro fort on aperoit le diaphragme bord d'une marge rougetre. L'image microscopique totale sera aussi pure que possible,
c'est--dire exempte de contours colors jusqu'aux bords du champ.
:

Ceci ex}lique pourquoi les oculaires compensateurs donnent en


gnral de mauvais rsultats avec les objectifs achromatiques
sec; c'est parce que ces derniers ne prsentent pas la mme diffrence chromatique de grossissement. Il n'en est pas de mme des
objectifs achromatiques immersion dont la dilTrence chroma-

tique est gnralement assez forte pour leur permettre de sup-

porter les oculaires compensateurs.


La construction de ces oculaires varie suivant leur grossissement
propre. Tantt le foyer infrieur se trouve au-dessus de la col-

comme

dans

les oculaires

reconnatre, d'aprs la

d'Huyghens, tantt au-dessous,


de Ramsden. La position est facile
situation du diaphragme qui se trouve tou-

jours son voisinage.

En

lectrice,

comme

dans

les

oculaires

gnral, le type

Huyghens

est celui des

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

90

numros

type Ranisden celui des

faibles, le

dans ces derniers, est une

collectrice,

Dans certains numros


de

forls

la

achromatique.

suprieur est assez loign


ncessaire de marquer, par un

forts, le foyer

oculaire pour qu'il soit

la lentille

numros

lentille triple

la position de l'il de l'observateur. Ces


grandes
variations dans la hauteur du foyer infrieur auraient pour cons-

autre diaphragme,

quence de modifier considrablement la mise au point chaque


changement d'oculaire. Pour obvier cet inconvnient, on munit
la monture des numros forls d'une bague, calcule de faon que
le foyer infrieur de tous les oculaires d'une mme srie tombe
au mme point dans le tube du microscope. De cette manire, la longueur optique du tube, c'est--dire la dislance entre le foyer postrieur de l'objectif et le foyer infrieur de l'oculaire, reste constante.
L'avantage des oculaires compensateurs est de permettre de

En

grands carts de grossissement.

effet, les objectifs

apochroma-

li(}ues supportent des oculaires trs forts, sans que la nettet et la


clart des images soient intluences dans de trop grandes limites.

Nanmoins, pour le travail normal, il sera bon de s'en tenir aux


numros faibles ou moyens, par exemple le 6 ou le 9, avec lesquels la fatigue de l'il est moins grande.

NOTATION DES OCULAIRES


1

"

Oculaires d'Huyghens.

Les oculaires d'Huyghens sont

toujours dsigns par des chiires arbitraires arabes ou romains

5 ou I, II, III, lY, V, voir la table de concordance


11, 3, 4,
page 92). En effet leur grossissement propre ne peut gnralement pas tre exprim en nombres entiers, par suite des dis(0, 1,

de

la

tances focales des types courants. Dplus, leurs foyers antrieurs


ne se trouvent pas au mme niveau.

Les numros forts sont gnralement dfectueux, car ils sont


obtenus en rduisant autant que possible l'action de la lentille de

champ.

ont donc

Ils

un champ

trs troit,

une aberration sph-

rique trs accentue et une faible luminosit, car, pour diminuer


la dformation de l'image, on est oblig de rtrcir fortement le
faut

donc

diaphragme.

Il

et

n'employer

moyens

et

se limiter l'emjdoi des


les

numros

est indispensable d'obtenir l'talement

une numration ou un dessin

la

forts

maximum

chambre

numros

que dans
claire.

faibles

les cas

il

de l'image, pour

'

OCULAIRES
2^ Oculaires

compensateurs.

Il

n'en est pas de

97

mme

compensateurs, qu'on dsigne par la valeur de


leur grossissement propre pour la distance de la vision distincte,

pour

les oculaires

250 mm. Les

18 indiqueront
oculaires
est de 2, 4, 6,
de
ces
grossissement propre

c'est--dire

donc que
8, 12, 18

le

fois.

chiffres 2, 4, 6, 8, 12,

Outre que cette notation

est parfaitement rationencore l'avantage de permettre de calculer


grossissement total d'une combinaison d'oculaire et

nelle, elle prsente

rapidement

le

de multiplier le numro de l'oculaire par


grossiss^ement propre de l'objeclif.
G le grossissement cherch;
Soient
suffit

d'objeclif. Il

le

grossissement propre de l'objeclif;


g' le grossissement propre de l'oculaire,
Nous aurons G =: gg'

le

de diviser le nondue 250, reprsendistance de la vision normale, par la distance


focale de l'objectif exprime en millimtres. Soit /* cette distance,

Pour dterminer

7,

en millimtres

la

tant

nous aurons

il

suftt

250

g =z -j-

M. Langeron.

Prcis de Microscopie.

CHAPITRE

VI

FORMATION DE L'IMAGE
MICROSCOPIQUE
Maintenant que nous connaissons les dtails de structure de la
et de la partie optique du microscope, nous
partie mcanique
la marche des rayons dans cet instrument et nous
tudier
pouvons
rendre compte de la faon dont se produit Timage virtuelle que
nous voyons lorsque nous examinons une prparation.
Prenons d'abord le cas le plus simple (fig. 58), en supposant
que Foculaire et Tobjectif sont forms chacun d'une seule lenL'objet 00' se trouve un peu au del du foyer de l'objectif
en 0^0^ une image relle et fortement grossie
(Obj.) qui donne
Cette
cet
de
image se forme en dedans du foyer de l'ocuobjet.
tille.

laire qui fonctionne

comme

loupe et donne une image 0^0de la vision normale.

vir-

et situe la distance

agrandie
Derrire l'objectif se trouve un diaphragme DD dont l'ouverture est en dd' Nous savons que l'image de ce diaphragme reprsente la pupille d'entre du microscope et que l'angle p
p' est
tuelle,

La pupille d'mergence
du microscope correspond l'image du diaphragme DD fournie
par l'oculaire comme ce diaphragme est trs loign, son image ee'
se formera dans le plan E E, trs prs du foyer /' de l'oculaire.
On voit que le cne lumineux qui sort du microscope a son
d'ouverture de l'objectif.
gal l'angle

minimum

de largeur au niveau de

la

pupille d'mergence. Donc,

plus possible de rayons, il faut que sa


pupille d'entre vienne concider avec la pupille d'mergence du

pour que

l'il recueille le

microscope.

Supposons maintenant que


dans un microscope complet

la

(tig,

marche des rayons

se produit
avec
miroir
condenM,
plan
59),

FORMATION DE L IMAGE MICROSCOPIQUE

G G avec diaphragme D D,

sateur

objectif obj

el

99

diaphragme dd,

oculaire de Huygheiis avec lentille collectrice coll, lentille oculaire oc et diaphragme do. Pour plus de clart dans la figure, nous

ne reprsenterons qu'un demi-objet 00' de faon n'tudier

la

marche des rayons


d'un
seul
que
ct. L'image
de

relle

l'objet

serait projete par

en 0,0\

l'objectif
si

n'tait pas

elle

rfracte en 020^2,

par la collectrice
sous forme diine

image plus

petite,

qui se trouve ainsi

0,'

en dedans du foyer
de

la lentille

ocu-

laire. Gelle-ci agit

comme
donne

loupe
la

et

grande

image virtuelle
Ofl'^ la distance
la vision nor-

de

male. Gette image

perue

virtuelle,

par

vient

l'il,

former sur

la

tine la petite

image

r-

relle 0,0',.

La pupille d'entre

se

trouve,

ment, en

ee',

plifi

Marche des rayons dans un microscope sim(une seule lentille oculaire d'aprs Zimmermann).

Fig. 58.

comme prcdem-

der-

diaphragme dd de l'objectif, qui limite la pntration


des rayons lumineux. L'angle d'ouverture de l'objectif est donc

rire le

gal l'angle e
limite par l'image

La pupille d'mergence du microscope est


du diaphragme de l'objectif fournie par l'ocu-

e'.

dans la figure 39, elle concide avec la pupille d'entre de l'ceil.


Gette pupille d'mergence est beaucoup plus petite que la pupille

laire;

100

LE MlCllOSCOPE ET SES ACCESSOIRES

-VO

Fig. 59.

Marche des rayons dans

teur, objectif

une

le

lentille, oculaire

microscope compos complet (condensa deux lentilles (d'aprs Zimmermann).

FORMAXrON DE L'IMAGE MICROSCOPIQUE


A\e

crenlre,

ost

mme

plus

101

que Taugle d'ouverture

petite

(le l'il.

L'api)areil

(['clairage envoie

lumineux qui remplit


Le champ du microscope

e(jne

loculaire, exacte-

ment au
se

plan de Tobjet

00' un

est

dlimit par le diaphragme do qui

point o

forme l'image

OgO
la

le

dans

trouve

se

dans

tout l'angle d'ouverture de l'objectif.

fournie par

2,

lentille

collec-

trice.

La

ligure

reprsente
marche

m icroscope
Zeiss.

la

relle des

dans

rayons

60

un
de

Ce micros-

muni de
cope
la
nouvelle mise
est

au point micromtriqiie et de deux


objectifs,

un

ob-

jectif faible sec

(AA.)etun objeclif
immersion ho-

mogne
le

viss sur

revolver.

clairage
duit par

L'-

est

promiroir

un
un conplan
densateur deux
'

Fig. OU

Marche

et

lentilles. L'objet

est plac entre

du microscope.
La figure I montre
de l'objet situ dans

la

rayons clans un microscope


de Zeiss.

relle des

lame

et

lamelle sur la platine

marche des rayons qui traversent un point


plan focal antrieur du microscope la

le

figure II reprsente les rayons limitant le

champ.

L'image relle de l'objet forme par l'objectif tondre dans le


plan 0*, mais la lentille collectrice la reporte dans le plan du diaphragme de l'oculaire 0**. Gamme l'il est cens accommod ou

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

i02

corrig pour rinfini, les rayons provenant de cette image relle,


vue travers la lentille oculaire, sont parallles (fig. I). Les
limites de ce faisceau sont dtermines par l'ouverture suprieure
de Tobjectif qui joue le rle de diaphragme et dlimite Tangle

d'ouverture.

Ces rayons parallles vont former sur

l'observateur

une image

aussi, dans

relle, petite et

renverse

la
:

ils

rtine de

forment

du microscope

entier (F'),
plan
Cette
du
l'oculaire.
de
fournie
rimage
diaphragme
par
Tobjectif
image correspond au petit cercle lumineux, situ un peu au-dessus de l'oculaire et auquel nous avons donn le nom de pupille
le

focal postrieur

d'mergence on de cercle oculaire, ou encore de cercle d Diot ou


Ramsden. Tous les rayons venant de Timage microscopique

de

ont ce cercle pour base. Si


dans le plan de ce cercle

la

pupille de l'observateur est place

si elle a le mme diamtre, l'il


recevra tous les rayons provenant de l'image microscopique.
Pour comprendre la formation de cette image, suivons (lig. il)

et

rayons mans de trois points diffrents de l'objet. Ces rayons


sont d'abord parallles, puis se coupent dans le plan focal postrieur (F'I) de l'objectif. Ils passent ensuite par le diaphragme de
il en
rsulte qu'aprs avoir tral'oculaire qui limite le champ
trois

vers la lentille oculaire, les deux rayons marginaux limitent aussi


l'angle sous lequel sera vue Fimage microscopique. Or la grandeur

de cette image est prcisment dtermine par cet angle. L'image


virtuelle et renverse dfinitive fournie par l'oculaire est localise
le plan 0**\ La distance enlre ce plan et le plan focal postrieur du microscope entier est gale la distance de la vision distincte (S
250 mm.). C'est pour celte distance que sont calculs

dans

grossissements des combinaisons optiques.


La distance T, qui spare le point d'appui de l'oculaire du
point d'appui de l'objectif, reprsente la longueur relle du tube.
est de
Cette longueur varie suivant les constructeurs
elle

les

160 mm. chez Zeiss et


Dans cette longueur doit
changeur d'objectif,
la lentille oculaire.

et

Stiassnie, de

170

mm.

tre comprise l'paisseur

chez Leilz,

du

etc.

revolver, du

des appareils micromtriques qui relvent

La distance A reprsente la longueur optique du tube, c'est-dire la distance entre le foyer postrieur F'* de l'objectif et le
foyer antrieur F- de l'oculaire. Cette longueur diffre suivant les

combinaisons d'objectifs achromatiques et d'oculaires, mais


sensiblement constante pour les objectifs apochromatiques

elle est
:

aussi

FORMATION DE LIMAGE MICROSCOPIQUE

103

la mise au point n'est-elle pour ainsi dire pas modifie quand


on change d'oculaire.
Dans la figure I, les rayons provenant de la source lumineuse
se croisent, aprs rflexion sur le miroir et rfraction dans le condensateur, dans le point de Tobjet situ sur l'axe o})tique. Les

rayons provenant de

la

source lumineuse sont donc parallles, mais

ce paralllisme n'est pas ncessaire, car dans le cas o la source


lumineuse est suffisamment tendue, il n'est pas indispensable
d'en projeter une image nette dans le plan de l'objet. Les traits
pointills reprsentent les faisceaux

diffracts

extrmes qui peu-

vent pntrer dans l'objectif.

Dans

la figure II,

rflexion,

les

rayons qui, aprs

du diaphragme-iris, ce dernier
d'une source lumineuse trs loigne.

le rle

jouant

on n'a reprsent que

croisent au niveau

se

Nous pouvons concrtiser

ces notions thoriques en cherchant

voir, par l'observation directe, les

images que nous venons de

construire schmatiquement. Pour cekj il suffit de prendre une


prparation d'un objet assez gros, par exemple le test d'Abbe
(p. 173) ou, plus simplement, un micromtre objectif grav sur

verre (p. 179).

par exemple

le

On met au

un

point avec

6 de Stiassnie ou

le 7

objectif assez puissant,

de Leitz.

Pour voir V image relle fournie par V objectif (OjOY), on


dvisse les deux lentilles d'un oculaire et on place, sur le diaphragme de cet oculaire, une rondelle de papier dcalquer bien
transparent et grain aussi fin

que

d'aprs la figure 59, se forme

relle,

possible.

Comme

l'image

un peu au-dessus du

dia-

phragme de l'oculaire, il ne faut pas enfoncer compltement ce


dernier dans le tube du microscope pour apercevoir l'image qui
vient se peindre sur le papier transparent. Il faut avoir soin, en
outre, d'loigner l'il jusqu' la dislance de la vision normale. Si
on ap})liquait l'il l'orifice du tube de l'oculaire, on ne distin-

guerait rien.

Pour

voir

Vimage

relle fournie

par

la lentille collectrice

(0,0,') on visse cette lentille au tube de l'oculaire, on installe ce

dernier dans
petite

le

tube du microscope et on aperoit une image plus

que l'image

construction de

la

relle de l'objectif,

ce qui est conforme la

figure 59.

Enfin, pour se rendre compte de l'troitesse de la pupille


d'mergence^ oq visse les deux lentilles de l'oculaire et on le met
en place, puis on met au point comme d'habitude. On
prend ensuite

LE MTC1105C0PK ET SES ACCESSOIRES

lO't

uiMcrre drpoli ou un

cai'i

de papier transparent

l'oculaire.

En

grossissement de l'oculaire.

On

et

on

le lient

tlonnanl, on Huit par


trouver une position telle qu'on aperoit nn tout petit cercle lumineux trs net, c'est la pupille (rmcrgence; son diamtre varie

verticalement an-dessus

suivant

le

voyant pour

la

(le

premire

Ibis Ttroitesse

est toujours surpris

en

de ce faisceau mergent.

THORIE DE LA MISE AU POINT DU MICROSCOPE


pour obtenir une mise an point
forme
Toculaire
doit se trouver exactement
correcte, Tiniage
par
la distance de la vision distincte. Nous savons (voir p. 18) que
Il

rsulte de ce qui pri'cdeque,

au point se fait en dplaant de haut en bas Tensemble


du systme optique renferm dans le tube du microscope; on
augmente et on diminue ainsi la dislance qui spare Tobjet de la
lentille frontale du microscope. Lorsqu'on descend le tube, pour
celte mise

rapprocher

l'objectif

de Tobjel, limage de ce dernier s'loigne de

rapproche de la lentille oculaire qui donne une


image dfinitive moins grossie. De trs faibles dplacements verlicaux du tube modifient considrablement la situation et les dimenla collectrice et se

sions de l'image microscopique.

peu de chose prs

la

mme

La mise au point

est

donc

trs

pour un il normal, myope ou hyper-

mtrope.
Si on vient modifier

la longueur du tube, par exemple


mise
au
l'allonger,
point sera change et il faudra faire descendre tout l'appareil optique pour obtenir de nouveau la netlel
la

de l'image.

de

En

effet,

l'allongement du tube nous oblige loigner


par ce deinier, de faon ce

l'objectif l'image relle fournie

qu'elle

soit

projete

au

mme

niveau que prcdemment dans

l'oculaire.

Ces considrations thoriques nous amnent une fois de plus


conclure que, pendant l'observation microscopique, la vis micromtrique doit tre sans cesse en mouvement pour explorer les
divers plans de la prparation et

modation de

l'il.

mnager

le

mcanisme d'accom-

CHAPITRE VU

MICROSCOPES DE VOYAGE
L'essor de la uidecine coloniale et de la parasitologie a donn,
depuis quelques annes, une importance inattendue aux microscopes de voyage. L'absolue ncessit du microscope pour le diagnostic des maladies parasitaires, rend ces instruments indispensables

tout mdecin apj^el

exercer dans les rgions inter-

tropicales.

Pour rendre

les

services

que

Ton

doit

attendre

d'eux, les

microscopes de voyage doivent runir un certain nombre de qualits

qui sont quelquefois contradictoires. C'est ainsi que la lgdeux conditions incompatibles et qu'il faut

ret et la stabilit sont

sacrifier un peu de la premire pour donner


importance suffisante.

la

seconde une

Examinons quelles doivent tre les qualits essentielles requises


par un microscope de voyage.
Rn premier lieu, il doit se prtera l'emploi de tous les grossissements

et

en particulier des objectifs

immersion

II

faut

donc

qu'il

possde un condensateur Abbe avec diaphragme iris. Il est ncessaire qu'd ait, outre le mouvement micromtrique, une crmaillre
mouvement rapide et un revolver deux objectifs au minimum.

La platine

doit tre large et susceptible de recevoir

une platine

chariot, indispensable pour l'examen mlhodique des lames de


sang. Ces exigences excluent un volume trop restreint et un poids

minime. La partie suprieure de la monture tant assez


le pied devra tre suffisamment lourd pour assurer la
stabilit. C'est prcisment la forme du pied qui rend dfectueux
trop

charge,

un

nombre de modles de nncroscopes de voyage. Quelcherchant avant tout rduire le volume de


constructeurs,
ques
la monture, ont ado|t un pied pliant, form de deux branches
certain

106

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

pouvant s'carter angle aigu. Gnralement ces deux branches

Fig. 61.

Microscope

Fig.

de voyage de Stiassnie (voir

6^2.

fig. 9,

l'appareil mont).

Microscope de voyage de Leitz.

ne sont pas assez lourdes

et leur

cartement est insuffisant pour

MICROSCOPES DE VOYAGE

107

rinstrument nne parfaite stabilit. Pourtant, certains


modles rcents sont conus d'une faon plus pratique et rpondent

donner

aux desiderata que nous venons d'exprimer. Tel

est le grand
microscope de voyage de Leitz, muni de la nouvelle vis micromtrique (fig. 62). D'autres constructeurs renoncent plier les deux

--^i:u;;iiii;iiiiiiiii;iii)iiiiiijui:tiii;ii

Fig. 62 bis.

Microscope de voyage de Zeiss.

branches du pied, redresser la platine verticalement et loger


ainsi Finstrument dans une boite trs plate. Ils
plient le microscope, par divers dispositifs, au niveau de sa charnire dinclinaison.
Un des meilleurs modles est celui de Stiassnie, qui est reprsent par la ligure 61.

Une

fois

pli,

il

tient

avec son revolver,

ses oculaires et ses objectifs dans une caissette cubique qu'il est
facile de loger dans une valise ou une cantine.

Le microscope
trs portative

62 bis) se loge dans une bote


rien dmonter, ce qui est une

tabli par Zeiss (fig.

sans

<{u'il

ait

excellente garantie pour la dure

du centrage de

toutes les pices.

CHAPITRE

LOUPES

ET.

VIII

MICROSCOPES

A DISSECTION
Les modles de microscopes que nous venons d'Uidier ne peuvent gnralement convenir que pour Fexamen d'objets }trpars,
c'est--dire dissocis dans un liquide, rduits en coupes minces, etc.

Ces objets sont monts dans un liquide conservateur, entre lame


puis ports sur la platine du microscope pour tre

et lamelle,

observs un grossissement appropri.

Pour

ces prparations, pour la manipulation et


objets,
faible.

il

est

la

la

confection de

dissection de petits

souvent ncessaire d'oprer un grossissement trs


la dilacration sous le microscope est gn-

La dissection ou

ralement une opration difficile, car


une grande habitude pour

exige

aiguilles ou scalpels. De plus,


trs courte des objectifs est

un

le
le

renversement des images

maniement

correct

des

distance frontale gnralement


obstacle qu'il est difficile de sur-

la

monter. Enfin les mains de l'oprateur ne trouvent pas, sur


platine, l'appui ncessaire pour la sret de leurs mouvements.

la

existe des instruments qui rpondent ce besoin. Ce sont les


loupes dissection, loupes montes ou microscopes simples et
Il

les microscopes binoculaires primes redresseurs. 11 existe un


grand nombre de modles de microscopes simples, de construction
plus ou moins conq^lique et perfectionne. Nous ne saurions les

dcrire

ici.

Qu'il nous suffise de dire que ces instruments doi-

vent possder une bonne loupe, susceptible d'tre mise au point


cominodment, une lai'ge platine et des appuie-bras confortables.

Les loupes qu'on adapte ces instruments sont des loupes de


il en existe
toute une

Sleinheil ou des doublets achromatiques;

LOUPES ET MICaOSCOPES A DISSECTION

109

6 40 diamtres. L'emploi des numros forts


srie, grossissant de
n'est pas conseill, cause de l'troitesse du champ e( de la

Au del de 20 diamtres, il est


bien prfrable d'employer le microscope binoculaire. D'ailleurs,
ce dernier instrument, les microscopes
depuis la cration de
brivet de la distance frontale.

et de leur utilit.
simples ont perdu beaucoup de leur impoilance
il
diffrence
avons
Nous
dj indiqu (}). 1) quelle
y a, au
de vue optique, entre le microscope compos et la loupe ou

point

microscope simple. Nous savons que le premier est compos de


deux svslmes de lenlilles, tandis que le second ne com|)rcnd
lentille ou une combinaison de lentilles fonctionnant
([u'une

comme

lentille

simple.

Nous savons

aussi (voir p.

4)

que

la

positive, biconvexe ou plan-convexe, qui


loupe
donne une image virtuelle d'un objet plac
_
Si
entre la lentille el un de ses foyers (fig. 5).
est

une

lentille

Les loupes sont alTectes des

mmes

aberrations

L'aberration de sphricit
est surtout accentue dans des loupes formes d'une
simple lentille biconvexe. Aussi est-il prfrable,
pour avoir des images bien planes et non dformes, de prendre une lentille plan-convexe, dont

que

les autres lentilles.

Fig. 63.
Loupe
dissection de Leitz.

l'objet la face plane (voir p. .d1).


peut aussi construire de bonnes loupes en montant deux lentilles
plan-convexes aux deux extrmits
d'un tube; un diaphragme limine les

on tourne vers

On

rayons marginaux. Les deux faces


le
planes tant tournes vers l'objet,
est trs plan. La figure 63
1
2
3
reprsente une excellente loupe de ce
64. 1, Loupe cylindrique
construite
fois
et
10
Fig.
genre grossissant
2; loupe de Brewster; 3, loupe de
par Leitz; son champ trs large
Coddington. Oriyinal.
(20 mm.) et son long; foyer permettent
de dissquer facilement.
Pour obtenir des grossissements plus considrables, on a recours aux
de
loupes dites cylindri(iues, tailles dans un bloc
la loupe cylindrique ordinaire
verre. Ce sont
dont les extrmits n'ont pas la mme
(tig-. 64, t)

champ

courbure, la loupe de Coddington (fig. 64, 3) et la


loupe de Brewster (fig-. 64, 2) toutes deux chancres dans leur portion mdiane pour liminer les
rayons marginaux. L'inconvnient de ces trois
formes de loupe est d'avoir un foyer trs court et
un champ trs troit. Elles ne peuvent donc convenir que comme loupes main, pour l'examen

sommaire de
section.

petits objets,

Fig. 65.

Lo-upe dti

type de Steinheil.

mais ne se prtent pas aux travaux de

dis

HO

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

Le meilleur procd pour construire des loupes aplantiques et achromatiques consiste employer des lentilles composes de deux ou trois
lentilles concaves et convexes. On obtient ainsi la loupe dite de Steinheil, gnralement forme d'une lentille biconvexe de crown-glass et
de deux lentilles concaves-convexes de llint-glass (tig. 65). La correction
ainsi obtenue est presque parfaite. Ces loupes peuvent grossir jusqu'
40 diamtres.

On nomme doublets des loupes formes de deux lentilles


doubles, comprenant un lment biconvexe et un lment planconcave. Tantt ces loupes sont construites sur le type de

_J

Fig. 66.

Doublet de Leitz mont en loupe


main.

Fig.

Doublet de
du type Ramsden.

67.

Leitz

Toculaire de Ramsden (fig. 67), avec les deux faces planes


tournes en dehors, tantt les deux faces planes sont tournes en

dedans

(fig.

La loupe

66).

dite

(type oculaire de

de Briicke est d'une construction tout fait diffrente


Ramsden). Ce n'est ni un microscope compos ni une

loupe, mais bien une vritable lunette de Galile distance focale raccourcie. Elle est constitue par un tube, portant une extrmit un
objectif form d'une lentille biconvexe et l'autre extrmit une lentille

biconcave fonctionnant comme oculaire. L'objet doit tre plac au del


du foyer de l'oculaire, qui donnerait ainsi une image relle de l'objet,
si la lentille divergente ne coupait pas ces faisceaux convergents, de
manire les rendre divergents et former une image virtuelle et agrandie de l'objet. L'avantage de la loupe de Briicke est d'avoir une grande
distance frontale et de se prter ainsi aux dissections et dissociations.

Depuis que Temploides microscopes binoculaires

s'est rpandu
que leur fabrication s'est perfectionne, l'importance des
microscopes simples a beaucoup diminu en tant que loupes
montes ou instruments de dissection. Par contre, leur utilit en
tant que loupes main ou loupes de poche est reste la mme.
La loupe sera toujours la fidle compagne du naturaliste sur la
table du laboratoire, en excursion, la loupe doit toujours tre

et

porte de la main; c'est elle qu'on consulte

la

premire,

mme

LOUPES ET MICROSCOPES A DISSECTION

111

pour examiner certaines coupes. Dans les travaux de systmatique,


chacun sait que la loupe a une importance capitale et
qu'elle
seule permet de reconnatre commodment
les

caractres

dlicats.

Il

est

bien

rare

pas toujours une


loupe dans sa poche.
Le meilleur grossissement, pour une
naturaliste

qu'un

n'ait

loupe de poche, est 12 ou 15 diamtres. On


un instrument de petite dimension,
permettant d'tudier de fins dtails. La
a ainsi

Fig.

68.

de

Loupe

poche.

plupart des constructeurs montent dans ce


but des loupes de Steinheil telles que celle que reprsente les
figures 68 et 69 bis. On tablit aussi des biloupes de poche, trs

commodes parce

qu'elles

donnent

deux grossissements diffrents.


Pour le laboratoire, on fait des

manches
tant

trs

d'utiliser

maintes

pratiques permetcomme loupe

des microscopes
simples. Enfin, pour les travaux
qui exigent des observations prolentilles

longes, on emploie des pieds


porte-loupe, munis de bras permettant toutes les inclinaisons.
Il

nous

est impossible

de d-

crire toutes les loupes et tous les

pieds porte-loupe.

i-

Fig. 69.

COG

Bras porte-loupe de Gogit.

Nous ne pou-

vons cependant passer sous silence un bras porte-loupe qui nous a


rendu de grands services (fig. 69). Cet instrument est construit par
Gogit (Paris)

il

est

en aluminium et trs
lger. C'est un simple bras form d'une
barre aplatie, fixe

l'une de ses extrmits, par

une

vis,

une pice courbe,


calcule pour em-

Fig. 69 bis.

Loupes achromatiques de Leitz,


modles de poche.

brasser la circonfrence du tube d'un microscope et pouvant tre


fixe solidement ce tube au moyen dune vis de pression. La

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

112

barre peiil s'lever ou s'abaissera voloiil, eu louiuaiil aulour de


son autre extrmit, elle supporte un anneau

soupoiut d'allache

porte-loupe qui, lui aussi, peut tourner aulour d'nn axe horizoutal
Ce porte-loupe peut recevoir la loupe de la fig. 63, une loupe de
Steinheil ou un doublet. Le grand avantage de ce porte-loupe est

de permettre d'utiliser,

pour

la

mise au point,

le

mouvement

rapide du microscope. On incline plus ou moius le bras, suivant


la hauteur o se trouve Tobjet examiuer; on place la loupe bien
horizonlalemeut, grce rarliculation de l'anneau porte-loupe, et

on achve

la

Pour ceux

mise au point avec la crmaillre du microscoi)e.


(jui ne possdent pas de uiicroscope binoculaire, cet

trs lger et }eu encombraut remplace


microscopes dissection et les pieds porteloupe souvent trs dfectueux. Il permet mme de dessiner la
chambre claire, avec ou sans grossissement.

appareil

trs

siuiple,

avantageusemeut

les

CHAPITRE

IX

MICROSCOPES
A PRISMES REDRESSEURS
e

Ces

sont

caractriss par Finterposition, entre


d\in
Toculaire,
systme de prismes qui redressent
mme temps, la monture de ces microscopes est

microscopes

l'objectif et

l'image. En
construite spcialement en vue de la dissection ou

du dessin

ces

instruments ne donnent que de faibles grossissements, qui ne


dpassent gnralement pas 70 diamtres.
Les microscopes prismes redresseurs se divisent en deux
catgories, suivant qu'ils sont monoculaires

ou binoculaires.

Les premiers conviennent surtout pour dessiner de grandes


prparations la chambre claire, de trs faibles grossissements.

Pour

les

travaux

de

dissection,

leur

emploi est bien

moins

commode que
donnent

celui des microscopes redresseurs binoculaires, qui


la vision stroscopique et qui sont en outre beaucoup

plus clairs.
Il

ne faut pas confondre

les

microscopes binoculaires avec

les

un microscope
quelconque. Dans ces derniers, Fimage est produite par un seul
objectif. Le faisceau lumineux est alors partag entre deux oculaires, par rflexion partielle sur une mince couche d'air place
Fune des deux portions est ensuite reprise
entre deux prismes
par un prisme rflexion totale.
Dans les microscopes binoculaires dissection (fig. 70), deux
images distinctes sont produites par deux microscopes redresseurs distincts. Dans le modle que nous figurons, les objectifs
sont monts par paires sur un patin commun qui glisse dans
une coulisse porte par le double tube. Celui-ci est surmont par
dispositifs binoculaires

que

l'on peut adapter sur

M. Langeron.

Prcis de Microscopie.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

114

deuv tambours J"enfermanl les prismes redresseurs, ou i)rismes de


Porro. Les tambours peuvent tourner autour d'un axe vertical,
ce qui permet de rgler la position des oculaires qui les surmontent
pour tous les cartements des veux. Ce rglage est tout fait

indispensable pour obtenir retet stroscopique. La mise au point


se fait au moyen de la crmaillre. Une autre mise au point est

==

X.*

>

.lfA

Contre le pied du microscope on


Microscope binoculaire de Zeiss.
Fig. "70.
voit la paire d'objectifs immersion l'eau; droite so trouve le fer cheval
en bonite qui sert monter le dermatoscope qu'on voit droite en haut.

quelquefois ncessaire, lorsque les deux yeux de Tobservateur


n'ont pas la mme accommodation. Dans ce cas, on visse ou on

un des deux

un pas devis dans ce but.


deux images, on
qu'on
immobilise l'objectif au moyen d'une bague de pression. La
platine de ces microscopes porte simplement une ouverture
dvisse

Une

fois

objectifs qui porte

obtenu

la

nettet parfaite des

centrale sous laquelle on peut amener, par la rotation d'un boulon,


mtallique mi-partie noire et blancbe. L'clairage

.une plaque

MICROSCOPES A PRISMES REDRESSEURS


))ar

transmission s'obtient au

moyen d'un

115

miroir deux faces,

peuvent tre recouvertes d'un carton Liane


une lumire trs diffuse. Ce miroir est trs

})lanc et convexe, qui


et rflcliir

aiiisi

La platine peut tre munie latralement


sont
d'appuie-mains qui
indispensables pour les dissections Unes.
L'clairage }ar rtlcxion s'obtient au moyen d'une lentille qui
concentre un faisceau sur l'objet.
mobile en

tons sens.

Cet appareil est susceptible de recevoir cinq paires diffrentes

combins avec deux paires d'oculaires, donnent


(maximum 70 diam.). Le plus

d'objectifs, qui,

toute

une

de grossissements

srie

puissant de ces objectifs est destin observer des objets immergs


dans l'eau. C'est un objectif immersion l'eau, long foyer,
trs

commode pour

les jietils

les

recberches sur

le

plankton

et

pour tudier

animaux aquatiques.

Non seulement
beaucoup

les

ce microscope binoculaire stroscopique facilite

dissections

fines,

mais

encore

il

rend

les

plus

grands services pour l'tude des Insectes, des Champignons microscopiques et, en gnral, de tous les objets qui devaient autrefois

examins

En un mot,

le binoculaire est devenu le


du
complment indispensable
microscope.
Si Ton dvisse les deux boulons qui se trouvent en arrire de la
potence, au-dessus de la platine, on spare facilement de cette
platine, l'appareil optique du microscope binoculaire. Cette partie

tre

la

loupe.

tre tenue la

main

explorer des objets


des surfaces cutanes, on
visse la place de la platine une pice en bonite en forme de fer
cheval (fig. 70). On transforme ainsi le microscope en un der-

peut

alors

volumineux. Pour

faciliter

et servir

l'examen

matoscope.
On jteut encore se servir du binoculaire sans monture, en tenant
la main la partie optique. On peut suivre ainsi des parasites trs
mobiles (Puces, etc.) dans le pelage des animaux, condition de
ne pas prendre un trop fort grossissement. Avec un peu d'habitude, on devient trs adroit.

CHAPITRE X

APPAREILS A DESSINER
Quels que soient
phie,
la seule

les

progrs accomplis par la microphotogra-

dessin des prparations microscopiques restera toujours

le

mthode qui })ermette de reprsenter un ohjet d'une faon


et prcise. La microphotographie fournit des documents

complte

irrfutahles,

compltement indpendants de toute interprtation

si parfaites que soient les photographies, elles


ne peuvent reprsenter qu'un seul aspect d'un objet, qu'un seul
plan d'une coupe. Les limites de la nettet sont trs troites, tant
en profondeur qu'en surface
aussi la confection de bons clichs

personnelle. Mais,

photographiques exige-t-elle des prparations trs minces et parfaitement planes. Plus le grossissement augmente, plus le champ
de nettet diminue la fois en tendue et en profondeur. En
outre, en raison des difticults techniques et du temps ncessit
par les manipulations, la microphotographie ne saurait tre d'un
emploi constant au cours du travail micrographique.

l'heure actuelle, nous devons donc considrer les microphotographies comme insuffisantes, elles seules, pour illustrer un travail scientifique. Elles sont indispensables,

en tant que documents,

pour montrer

l'aspect rel de la prparation, la place des dtails


et la faon dont ils se prsentent l'observateur. Mais ces docu-

ments doivent

un dessin
Ce dessin montrera

tre complts par

scrupuleusement

fidle.

les objets tels que


comprend il mettra en lumire les
que les montrent la transparence de la

l'observateur les voit et les


dtails

de structure

tels

interprt, quoique

prparation et les variations infiniment dlicates de la mise au


point. Le dessin fera la somme de la multitude de coupes optiques
que l'observateur fait chaque instant et qui, seules, dans la

APPAREILS A DESSINER
vision microscopique, arrivent

de

la profondeur.
Ceci expliquera

microscopique

donner

la

117

sensation du relief et

que nous attachons au dessin


dveloppement que nous donnons la des-

l'importance

et le

Aucun exercice n'est plus utile


on peut dire qu'on
dessin pour le micrographe dbutant
n'a pas bien vu une prparation tant qu'on ne l'a pas dessine.
Une quantit de fins dtails, que le dessin oblige rendre,
passent souvent inaperus, mme pendant une observation
cription des appareils dessiner.

que

le

attentive.

Sans parler du croquis ordinaire, qui, pour lre exact, exige une ducation de dessinateur, on peut arriver dessiner rigoureusement les
objets microscopiques sans l'aide d'aucun instrument. Il suffit pour cela
de regarder d'un il dans le microscope et de l'autre la surface sur
laquelle on dessine.

On

arrive ainsi suivre les contours du l'image

microscopique avec la pointe du crayon. Malgr sa simplicit, cette


mthode est rarement employe, car elle exige beaucoup d'exercice et
produit gnralement une grande fatigue. Outre une galit parfaite
dans la puissance et l'accoutumance des deux yeux, il faut encore que
l'image microscopiijue et le papier dessin soient clairs avec la mme
intensit. L'avantage que pourrait prsenter cette mthode consiste en
ce que l'il n'est nullement gn pour regarder l'image microscopique
et qu'il peroit cette image sans aucun intermdiaire.

Nous ne mentionnons

cette

mthode que pour mmoire, car on

pour dessiner les objets microscopiques,


aux appareils dessiner, ou chambres claires.
Le but de ces appareils est de faire concider sur la rtine les
a gnralement recours,

rayons mans de l'image microscopique et du plan sur lequel


on doit dessiner. Ce rsultat est obtenu par des combinaisons de
et de miroirs,
L'il peroit donc en

prismes

qui agissent par rflexion ou rfraction.

mme

temps l'image de la prparation et


de la feuille de papier. Il est facile de suivre sur cette dernire, avec la pointe d'un crayon, les contours des dtails les

celle

plus dKcats on peut obtenir ainsi un croquis trs exact, avec la


mise en place de tous les points importants; on peut complter
ensuite ce premier dessin en enlevant la chambre claire et en
;

regardant directement l'image microscopique.


Les appareils dessiner se divisent en deux groupes, suivant
qu'ils utilisent une moiti du faisceau lumineux mergeant du

microscope ou ce faisceau tout entier. Les premiers se nomment de


prfrence chambres claires, les seconds reprsentent les appareils

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

118

dessiner piopremenl dils.

Ce

sont ces derniers que nous allons

tudier tout d'abord.

Signalons auparavant deux autres catgories un peu diffrentes


ce sont d'abord la chambre claire d'Oberd'appareils dessiner
:

hauser dont

la

construction est exactement inverse de celle des

appareils prcdents, puis d'autres appareils, destins uniquement

aux

dans

trs faibles grossissements, et qui projettent,

le

plan de

de papier, une image relle de l'objet dessiner. Ces


derniers appareils ne sont d'ailleurs pas destins tre adapts
la

feuille

au microscope compos.

APPAREILS

I.

DESSINER

Prenons pour exemple lappareil

MIROIR

dessiner d'Abbe construit

^
par Zeiss (fig. 71) il est constitu essentiellement par un miroir
fix l'extrmit d'un bras horizontal et par un petit appareil
;

plac au-dessus de l'oculaire et

nomm

form de deux prismes isocles angle

cube d'Abbe. Ce cube


droit.

est

La face hypotnuse

\\

Fig. 71.
A, cube d'Abbe; B,
Principe de l'appareil dessiner d'Abbe.
miroir; xy, rayon lumineux provenant du microscope; abcci, rayon lumineux
de
b
la
c.
surface
du
et
rtichi
en
et
dessin
provenant
Orif/inal.

du prisme suprieur
mdian, de 1 ou 2

est argente, l'exception

d'un petit cercle

mm.

de diamtre, travers lequel l'image


microscopique est perue, presque sans subir aucune perle de
lumire. Pour cela, cette ouverture doit concider avec la pupille

d'mergence du microscope, point au niveau duquel

les

rayons

Czapski, Ueber einen neuen Zeichenapparat und die Construction von


Zeichenapparaten im allgemeinen. Zcitschrift f. viss. Jlikr., XI, p. '?89-i?98,
1.

18'J4.

APPAREILS A DESSINER

119

un trs petit espace (p. 102).


pupille d'mergence tant variable avec les ocuest indispensable de rgler la hauteur laquelle se trouve

issus de roculaire sont condenss dans

La position de
il

laires,

la

cube d'Abbe, de manire utiliser tous les rayons lumineux et avoir un champ aussi vaste et aussi clair que possible.
Ce rglage se fait en lixant tout Tappareil une hauteur convenable sur le tube du microscope, au moyen de la bague de
le

plac

serrage K

Les rayons provenant du papier sont rflchis par le grand


miroir sur la face hypotnuse argente du prisme suprieur, puis
rflchis de nouveau par cette surface dans la direction de Fil.
Ces rayons viennent former sur la rtine une image qui se superpose celle de Timage microscopique. Comme la face argente
du prisme est incline de 45, il est indispensable que le miroir

mme

inclinaison pour qu'on puisse dessiner sans dformaune surface horizontale.


La longueur du bras varie suivant Tlendue de Timage dessiner. Ce bras doit loigner le miroir une certaine distance du
microscope, car le centre du miroir doit tre perpendiculaire au

ait la

tion sur

centre du

champ du dessin, puisque le rayon axial ou droit qui


centre du miroir au centre du dessin est vertical. En effet

joint le

plan du dessin doit toujours tre })erpendiculaire cette droite,


aprs la doubic rllexion des rayons lumineux. Or la direction de cette droite dpend de Tangle que font entre elles les deux

le

mme

surfaces rtlchissantes; en

jdan du dessin doit


que
de celui que ces surfaces
le

il

on dmontre gomlriquement
avecThorizontale, un angle double

effet,

faire,

font entre elles.

Lorsque

celles-ci sont

doit tre horizon lai. ce qui est le cas

pour Tappareil
dessiner d'Abbe. La direction du plan du dessin est donc tout
fait
indpendante de Fangle que les surfaces rllchissanles
peuvent faire avec la verticale.
parallles,

Outre ces raisons d'ordre gomtrique,


doit

tre d'autant

plus

la

longueur du bras

champ embrasser est


pouvoir excuter un dessin sans modifier
grande que

le

plus vaste, de manire


la position du miroir et par
consquent sans dformer l'image.
Dans ce cas, on dplace le miroir le long du bras, au moyen d'une
glissire
1.

En

dont

il

est

quelquefois muni, ou bien

ou emploie un

principe, l'appareil dessiner d'Alil)e est tabli pour un seul oculaire,


est-il prfrable, autant que possible,

gnralement l'oculaire n" 2 ou n 3. Aussi


de ne remployer qu'avec cet oculaire.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

120

oculaires grand chanip,


appareil spcialement construit pour les
avec bras de 125 mm. de longueur (Zeiss).
Il

ment

que Tinclinaison du miroir soit assure exacteun arrt automatique ou par un trait de repre

est ncessaire

45 par

tout fait essengrav sur Taxe de rotation. Cette condition est


tielle pour viter la dformation de Timage. Il faudra donc rejeter
ou modifier les appareils dans lesquels on ne peut contrler Fin-

clinaison

du miroir.

Nous

figurons, titre d'exemple, le grand appareil dessiner


de Zeiss (fig. 72). On le fixe sur le tube du microscope, la hau-

teur voulue, au
l'oculaire,

moyen d'une bague de

on place

la

serrage.

bague, puis on carte

On

le

enlve d'abord

cube d'Abbe, de

Grand appareil dessiner d'Abbe.


A, miroir destin envoyer
Fig. 12.
l'image du papier et du craj^on sur la surface rflchissante du prisme B, disque
portant les verres fums destins rgler l'clairage de l'image microscopique
G, bouton permettant de faire varier l'inclinaison du miroir; II, vis de centrage
;

du cube d'Abbe pour

le

dplacement antro-postrieur; K, bague pour

la fixa-

tion de l'appareil dessiner sur le tube du microscope; L, vis de centrage du


cube d'Abbe pour le dplacement latral; R, bonnette portant les verres fums
destins rgler l'clairage du papier dessin S, vis de serrage de la bague
:

axe autour duquel tourne l'ensemble du cube d'Abbe, du disque et de


bonnette; P, cube d'Abbe interchangeable.
Z,

faon replacer l'oculaire dans

le

tube.

la

Le centre de l'ouverture

ronde, pratique dans l'argenture du prisme, doit concider avec

Taxe optique du microscope. Dans certains modles simples, cette


concidence a lieu automatiquement. Dans le modle que nous
le centrage exact est assur par les deux vis L et H,
dans deux directions perpendiculaires. Le miroir se

dcrivons,
agissant

trouve plac droite du microscope. Le papier est dispos sur une


surface horizontale, sous le miroir, ct du pied du microscope.

APPAREILS A DESSINER
Plusieurs

conditions

doivent

tre

121

ralises

pour assurer

la

deux images. Nous avons dj vu que


la direction du plan du dessin avait une grande influence sur la
dformation de Timage. La distance de ce plan l'il de l'observateur et YgaUt d^clairage des deux images n'ont pas moins
nettet et la visibilit des

d'importance pour leur

Pour

visibilit.

tre perus nettement, l'image

du dessin doivent
distincte,

microscopique et le plan
normale de la vision

se trouver la distance

c'est--dire

environ 250

mm.

de

l'il.

Bien qu'on

puisse dessiner sur la table qiii supporte le microscope, il est prfrable d'lever le papier dessin au niveau de la platine ou
mme un peu au-dessus, la distance de 25 cm. environ de

chambre claire, de faon viter que l'il soit


de
faire
des
efforts d'accommodation. Il existe pour cela de
oblig
nombreux dispositifs, depuis la pile de livres jusqu'aux tables
l'ouverture de la

dessiner que nous dcrirons plus loin (fig. 84 et 85). Les myopes
devront dessiner avec des lunettes ou intercaler un verre correc-

teur sur le trajet des rayons lumineux, de faon n'tre pas obligs
d'approcher le plan du dessin trop prs de l'teil.

L'gaht d clairage de l'image microscopique et du plan du


dessin a aussi une importance capitale. C'est l un des cueils sur
lesquels les dbutants chouent le plus frquemment, car les
conditions raliser sont trs variables, suivant la puissance des
objectifs et la nature de la prparation. L'image microscopique est
d'autant plus lumineuse que le grossissement est plus faible. Il
faudra donc, avec les objectifs faibles, diminuer l'clat de l'image
le jeu du diaphragme-iris ou l'emploi de verres
contraire, avec les objectifs forts, on donnera au
microscope le maximum d'intensit lumineuse compatible avec la
dlinition, et on rduira la luminosit du plan du dessin par des

microscopique par

fums;

au

verres fums ou des crans convenablement disposs.


Les appareils dessiner d'Abbe sont toujours munis de verres

fums, au moins sur

Dans

le

modle

trs

rayons rflchis parle miroir.


la
de
complet
figure 72, il y a deux sries de
le

trajet des

ces verres fums. La srie suprieure, destine rgler l'intensit


lumineuse de l'image du papier, est dispose autour d'une bonnette R, place sur le cube d'Abbe. Cette bonnette porte six
ouvertures circulaires, dont cinq sont garnies de verres fums
1. Les myopes doivent travailler au microscope sans lorgnon, sauf lorsqu'ils
dessinent la chambre claire.

LE MICKOSGUP ET SES AGCESSOIUES

122

plus OU moins opaques. On place Tune ou l'autre de ces ouvertures


sur le trajet des rayons rllchis par le miroir; elle y est maintenue par un cran qui pntre dans une encoche correspondant

chaque ouverture. L'clat de Timage microscopique peut tre


modifi au moyen du disque tournant B, qui porte six ouvertures
semblables celles de

la

bonnette.

Ce modle possde aussi deux cubes d'Abbe interchangeables,


dont les ouvertures sont respectivement de 1 et 2 mm. Le cube de
2

mm.

est destin

aux

-Ai

faibles grossissements;

il

permet

(l'iilihser

%..23^

Grand appareil dessiner d'Abbe.


Figure montrant la manire
Fig. 7o.
d'carter du champ optique l'ensemble form par lo cube d'Abbe et les deux
systmes do verre fums. Mmes lettres que pour la figure 73.

toute rtendue du faisceau mergent.

Le changement des cubes

se fait trs facilement, en enlevant la bonnette i)ortant les verres

fums

la monture du cube dans ses rainures


Le
du cube est efteclu ensuite au moyen
exact
(fig. 72).
centrage
des deux vis H et L dont nous avons ])ari pour qu'il soit parfait,
il faut
que le petit cercle lumineux, correspondant Timage de
l'ouverture de l'objectif donne par Toculaire (pupille d'mergence),

et

en faisant glisser

concide avec l'ouverture circulaire du prisme.


Pour carter du champ le cube d'Abbe et rendre libre l'oculaire,

il

sufhl de faire tourner

la

partie suprieure de l'appareil

autour de l'axe Z. L'image en pointill


velle position

que

l'on obtient ])ar ce

(fig.

73) reprsente

la

nou-

mouvement.

L'appareil dessiner de lieichert (fig. 74) tient le iniliou entre celui


d'Albe et les ctiambres claires ordinaire-^. Il possde le grand miroir
du premier et a un pelit prisme triangulaire la place du cube d'Abbe.

APPAREILS A DESSINER
Goinine

123

face rtlchissante dp ce petit prisme est incline de 45",

la

le

Principe de Tapparcil dessiner de Reichcrt. P, prisme rflexion


M, miroir; xy. rayon lumineux provenant du microscope; abcd, rayon
lumineux provenant de la surface du dessin et rflchi en 6 et f
Original.

Fig. 71.

totale;

miroir devra avoir la rnme direction elle dessin sera excut sur une
surface horizontale.

CHAMBRES CLAIRES PROPREMENT DITES

II.

La chambre claire angle variable de Malasscz


coiistraite par Sliassiiie, est

constiUie essentiellement

(fig.

75),

})ar

deux

prismes, renferms dans une bote mtallique portant sa face


suprieure une ouverture dont une moiti est

couverte par Tangle d'un des prismes.


Cette ouverture doit concider avec

la

pu[)ille

pour ce l'aire, on
tube du microsle
du
dplace rajipareil
long
il est iix
une
cope, auquel
|ar
bague ressort.

d'mergence du

microscope

L'image microscopique est vue directement,


travers la moiti de l'ouverture qui n'est pas couverte
est

jiar

l'arte

perue

deux

du prisme. L'image du papier

travers

cette

arte,

aprs

Fig. 75.
claire

Chambre

variable de

angle

Ma-

lasscz.

avoir

des prismes.
Cet appareil est construit sur le principe de l'ancienne chambre
il est form de deux prismes
claire de Doyre et Milne-Edwards

suivi

rflexions

totales

sur

les

faces

77)

(fig.

1.

C.

Iriangulaires,

B. Soc.

biol..

XXVir,

angle droit.

p. 277--279, 1885.

Le

pelil ]>risme

est plac

124

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

au-dessus de

1
oculaire, le grand prisme est fix lalralement.
La figure 77 montre que les surfaces rflchissantes de ces
prismes ne sont pas parallles; il est donc ncessaire, pour viter
une dformation de l'image, que le plan
du dessin soit inclin suivant un certain

angle.

Les deux principaux inconvnients de


ce dispositif sont
1^ Tobligation de dessiner sur un plan dune inclinaison
:

2" Tingalit d'clairage


diffrentes zones des deux images,

des

donne;

Manire de desFig. 76.


siner avec la chambre
claire

galit

due

ce

que

la

in-

moiti de la pupille

est couverte par Farte

d'mergence

du

de

Malassez, le
grand prisme et le microtant
inclins
45.
scope

prisme.
Cette

chambre

ploye

claire

avec

ou avec

le

peut lre em-

microscope

ver-

microscope inclin.
Il suffit
pour cela de faire varier
l'angle que forme son axe optique
tical

JC
II

i^:

le

avec celui du microscope, en tournant un bouton dont l'axe porte

un index, indiquant deux

\
'3/

positions

extrmes du grand prisme, 18


et 45. Lorsqu'on dessine avec
le microscope vertical, on donne
au prisme Tinclinaison de IS'^. La

chambre
^
\

Fig. 77
Principe de la chambre
claire de Malassez.
O, prisme
-

oculaire; P, grand prisme; xy,


rayon lumineux provenant du miabcd, rayon lumineux
croscope
provenant de la surface du dessin.
;

Original.

claire

doit

alors

tre

tourne du ct droit du micros-

cope

du

papier dessin plac

et le

mme

ct.

Pour

viter

les

dformations, il est indispensable


que ce papier repose sur une
planchette

exemple

incline

la

de Malassez

de 18, par

planchette dessiner
qui convient parti-

culirement pour l'emploi de cette chambre claire. Le sommet


de l'angle d'inchnaison doit tre dirig du ct du microscope.
Lorsque la nature de la prparation permet d'incliner le microscope,

il

est

beaucoup plus commode de donner au prisme un angle


la chambre claire en arrire du

de 45. Dans ce cas, on tourne

APPAREILS A DESSINER
microscope

et,

scope 45.

au lieu crincliner

On

le

25

papier, on incline le micro-

commodment

peut ainsi dessiner

dans une situation analogue celle qui

est

sur

la table,

reprsente par

la

figure 76.
Si on veut interrompre le dessin pour examiner l'image microscopique, il suffit de rabattre la chauibre claire qui tourne autour

d'une

charnire

horizontale.

L'instrument

autant de fois qu'il est ncessaire,

il

peut

tre

dplac
reprend toujours sa position

primitive.

L'emploi de cette chambre claire est agrable, car

d'mergence du microscope arrive directement

lopil,

le faisceau

sans avoir

subi ni rflexion, ni rfraction; l'image microscopique n'est donc


ni dforme, ni obscurcie. L'image du papier et du crayon ne

prsente pas de double contour. Grce au petit volume du prisme


plac au-dessus de l'oculaire, on peut apercevoir tout le champ

du microscope.
ISanmoins, il faut une certaine habitude pour bien se servir
de cet appareil. Gomme le faisceau d'mergence est divis par
l'angle du petit prisme, il est ncessaire, pour voir nettement la
fois l'image microscopique et la pointe du crayon, que le centre
de l'ouverture pupillaire de l'observateur concide avec l'arte

du

petit

prisme. Si

la

pupille dvie tant soit peu droite ou

que
prparation ou que la pointe du crayon.
grave dfaut de cet appareil est de ne possder aucun dispositif permettant de raliser
l'galit d'clairage des deux champs.

gauche, on ne

voit

la

Un

La chambre claire de Dumaige ne

diffre

de celle de Malassez

que par la prsence d'un miroir la place du grand prisme P.


Elle donne un champ remarquablement tendu et bien clair.
G'est un des meilleurs appareils qui existent pour dessiner de
faibles grossissements

ou

mme

directement.

La chambre claire de Nachet


79) R, auquel

est

forme d'un prisme rbom-

est coll latralement, par sa face

hypoprisme triangulaire angle droit P. G'est ce


petit prisme qui est plac au-dessous de l'oculaire, auquel il prsente un des cts de son angle droit. Le faisceau mergent du

bique

(fig.

tnuse,

un

petit

microscope traverse donc ce petit prisme, ainsi que l'arte du


prisme rhombique. Les rayons mis par la surface du dessin sont
rflchis en b et en c et suivent alors la

mme

direction

que

le

faisceau xy.

Ces deux prismes sont enferms dans une

bote

mtallique

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

126
78j.

(fig.

Deux

orifices

correspondent aux points d'entre

et

de

du rayon xy; une partie de la lace infrieure du prisme


rliombique est libre pour laisser pntrer les rayons mis par le
dessin. Un verre fum, port par un anneau mobile autour d'un
sortie

Principe de la chambre claire


de Nachet.
R. grand prisme rhom-

Fig. 79.

Fijj;.

IS.

Chambre

bique; P, petit prisme triangulaire. Les


antres lettres comme dans la figure "77.

claire

de Nachet.

Original.

axe excentrique, peut obscurcir volont le cbamp du microscope


on ralise ainsi Tgalil d'clairage de ces
ou celui du dessin
:

deux cbamps.
Lorsque les deux faces rilcbissantes du prisme rbombique
sont parallles, on peut dessiner sur

une surface borizontale. Cet appareil


son
deux inconvnients
:

prsente

sa

est troil et

cliamp

cause de

faible

la

luminosit est

perle de lumire

qui se produit, par rflexion,

le

au

rayon xy pntre dans

prisme rbombique.
h'oculaire dessiner de
appartient
il

truments;

Fig. 80.

des rayons
oculaire

l'arte

Zeitschrift

f.

^.\^^yq

cet

Leitz

catgorie d'ins-

quelques
nous allons tudier.

une simple cbambre


oculairc
cst uu
appareil
^
^

combmc

dessiner de Leitz.

coup par

mme

grand

se distingue par

particularits que
Au lieu d'tre

- Marche

lumineux dans

la

moment
le

avcc

11

prismc rboiubique

Le faisceau mergent est


fig. 80).
du prisme, comme dans les appareils prc-

wiss. Mikr.,

XIL

P- 289, 1895.

APPAREILS A DESSINER
dnis, mais

comme

ici

dans

la

127

l'image du papier est rHcliie par ce seul prisme,


chambre claire de Nachel.

Cet oculaire est fabriqu en deux modles, suivant qu'il doit


servir avec le microscope vertical
ou avec le microscope inclin
45".

L'oculaire

avec
est

deslin

dessiner

microscope vertical (fig. 8)


tourn du ct droit du microsle

papier est plac du


cot, sur une planchette
incline de 12, car les deux faces
le

cope;

mme

du prisme rhomhique ne sont pas parallles. Au


contraire, avec l'oculaire deslin
rflchissantes

dessiner au microscope inclin


45, le papier doit tre plac

horizontalement, derrire le pied


ilu
microscope. L'oculaire est

tourn dans cette direction, ainsi

lit

montre

figure 76. L'gadeux champs


des
d^clairage

(juc le

la

Oculaire dessiner do
Fig. SI.
Leitz. Modle destin servir avec
le microscope vertical. A gaucho
vis de pression, droite la Lote
et les deux bras articuls
portant des verres fums.

du prisme

peut tre ralise, dans les deux


modles, au moyen de disques de verre fum, fixs au-dessous
du prisme deux bras mobiles (lig. 81).

III.

AUTRES APPAREILS

DESSINER

Nous ne mentionnerons que pour mmoire la chambre claire d'Obercet instrument a t trs employ autre.'"ois, mais il a d cder
la place aux appareils miroir cause de son incommodit. Il est construit sur un principe exactement inverse de celui des autres chambres
claires
le plan du dessin est vu directement, tandis que l'image
microscopique subit deux rflexions avant de parvenir Til de l'obhauser

servateur.

La chambre claire d'Oberhauser est forme de deux cylindres placs


angle droit. Le cylindre vertical pntre dans le tube du microscope,
la place de l'oculaire qui doit tre enlev. Les rayons qui proviennent
de l'objectif sont rflchis par un premier prisme et envoys dans un
oculaire plac dans le cylindre horizontal (fig. 82), puis ils sont rflchis
une seconde fois par un petit prisme qui les envoie dans la direction
de l'il de l'observateur. Ce petit prisme est fix au centre d'un anneau

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

128

mtallique travers lequel Tobservateur voit en


du dessin.

Comme

mme

temps

le

plan

deux surfaces rflchissantes sont parallles et inclines


de 45", le plan du dessin doit tre horizontal.
L'appareil d'Edinger ne saurait tre dcrit ici, car il n'est pas destin
tre install sur un microscope. Cet instrument est destin projeter
les

dessiner de grandes prparations un faible grossissement. La


prparation est fortement claire par une lampe et un systme de

et

P, grand prisme p,
Principe de la chambre claire d'Oberhauser.
petit prisme; O,- oculaire; T, tube vertical a:'?/, faisceau mergent rflchi en
P et p; ab, faisceau provenant du plan du dessin.
Original.

Fig. 82.

miroirs et de lentilles. L'objectif projette son image sur


ou au foyer d'une chambre noire photographique.

IV

EMPLOI DES APPAREILS

le

plan du dessin

DESSINER

La seule difficult du dessin la chambre claire consiste


un clairage gal de la prparation et du papier sur lequel

obtenir

on dessine, de manire ce que les deux pupilles soient galement


En effet, avec les objectifs faibles, l'image microscopique

dilates.

le papier et rend la pointe du crayon


tandis qu'avec les objectifs forls le papier est
et les contours de l'image microscopique sont

est plus

claire

presque

invisible,

trop

lumineux

que

peine perceptibles.

On
le

arrive raliser cette galit d'clairage en intercalant, sur


des rayons mans de Tune ou de l'autre source, des

trajet

verres plus ou moins colors.

En

ce qui concerne l'image micros-

copique, on a encore la ressource du diaphragme-iris. Une fois


qu'on a obtenu l'galit des deux clairages, on doit voir avec
une gale nettet la pointe du crayon et l'image de la prparation.

Lorsqu'on a dtermiu le point de la prparation qui doit tre


dessin, on installe la chambre claire sur le tube du microscope,

APPAREILS A DESSINER
puis on dispose

la

suivant

le

arrire,

129

de papier ct du microscope ou en
modle de Tappareil dessiner. Le plan du
feuille

dessin doit se trouver la distance de la vision normale, c'est-dire environ

250 mm. de
ne

celui-ci

que

hypermtrope.

soit

ne

Il

ni

l'il

myope,

de l'observateur, en supposant
ni

a.

pas, en
soient ga-

.O/

suffit

c^fT

que les deux champs


lement clairs, pour qu'on peroive
nettement et sans fatigue l'image de
effet,

prparation et celle du crayon. Il


que ces deux images se

la

faut encore

trouvent

la

ta

mme

distance, de faon

deux yeux n'aient pas


que
effectuer des efforts d'accommodation

ce

les

pour deux distances diffrentes. Or le


microscope est construit de telle faon
102) que l'image microscopique
forme un peu au-dessous

(p.

0"

dfinitive se

b'

platine (lig. 60), 250 mm. de


la rtine. Le plan du dessin sera donc

de

la

tabli la

mme

faut

hauteur.

encore

En

ra-

obtenir

images,

la

superposition exacte des


que la distance de l'il

l'image

la

microscopique
longueur a' cd b'.

donc, par ttonnements,


plan du dessin, de

du

mieux

le

soit

On
la

gale
rglera

hauteur

il

Schma

du dessin 0"0"'

et de l'image
00', assurant
superposition exacte de
l'image du crayon et de l'image
de l'objet; ab, distance de l'il
l'image de l'objet; a'cdb',
distance de l'il au plan du

microscopique
la

dessin.

Original.

manire

jiossible cette

des efforts d'accommodation. Si

normale,

d'un microscope muni de Tappareil dessiner


d'Abbe, montrant les
rapports de hauteur du plan

Fig. 83.

faut

il

assurer

tenir

compte
du trajet effectu par les rayons
lumineux dans la chambre claire. La
figure 83 montre en effet que, pour
lit,

il

concidence et pargner l'il


la vue de l'observateur n'est pas

faudra se servir de verres correcteurs.

Les pupitres dessiner, tel (jue celui que reprsente la figure 84, sont
parliculircment commodes pour raliser ce dispositif. Ce pupitre, dit
pupitre de Bernhard i, peut tre lev volont jusqu' la hauteur de
1.

Bernhard, Ein Zeichentisch fur mikroskopische Zwecke. Zeitschr.

Mikr., IX,

p. 439-445, 1892, et

M. Langeron.

XI, p. 298-301, 1894.

Prcis de Microscopie.

f.

tciss

130
17

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

cm. au-dessus du plan de

la table.

La

tablette suprieure peut tre

incline jusqu' 35", lorsqu'on emploie des chambres claires sans miroirs.
En outre, la planche qui supporte le pupitre et le microscope peut s'incliner aussi vers l'observateur, pour lui permettre de dessiner commodment avec le microscope inclin en arrire. Aucune dformation du
dessin n'est craindre, puisque le microscope et le plan du dessin sont

dplacs

solidairement. Enfin un

appuie-bras

permet

d'viter

toute

fatigue. La figure 84 montre l'appareil de Bernhard dispos avec le microscope inclin en arrire et la planchette dessiner incline par rapport

Fig. 84.

Pupitre dessiner de Bernhard (Zeiss).

l'horizontale. En effet, bien que la chambre claire d'Abbe permette


de dessiner sur un plan horizontal, condition que le miroir soit inclin
45, il arrive, dans ce cas, qu'une partie de l'image n'est pas projete
sur le papier, surtout si on dessine au niveau de la table, ct du pied
du microscope. Pour pouvoir dessiner toute l'tendue du champ, il faut
modifier l'inclinaison du miroir; mais alors, pour viter la distorsion
de l'image, il faut incliner aussi le plan du dessin. C'est ce cas particulier que reprsente la figure 84. La planchette doit tre incline de telle
sorte que, pour une position donne du miroir, la droite (jui joint le
centre du miroir au centre du champ dessiner soit perpendiculaire au
plan du papier.
Il
y a plusieurs moyens de s'assurer que rinclinaison
dessin est correcte et que l'image est exempte de distorsion.

du
Le

APPAREILS A DESSINER

131

plus simple consiste dessiner le contour du champ du microson doit obtenir un cercle parfait, ce dont on s'assure en
cope
:

mesurant deux diamtres perpendiculaires. Si on trouve une


ellipse c'est que Tinclinaison est mauvaise; il faut la modifier
jusqu' ce qu'on obtienne un cercle. Une mthode plus prcise
consiste employer le micromtre objectif (p. 179); on en dessine
les divisions en plaant successivement l'chelle
gradue dans deux
directions perpendiculaires. Les traits
tre quidistants sur toute la surface du
tifier

que

l'on dessine

champ, sinon

doivent
faut rec-

il

l'inclinaison de la planchette. Cette opration doit tre faite

avec un grossissement assez fort (au moins 200 diam.), afin que
les traits soient spars

Fig. 85.

par une distance suffisante.

Comme

ces

Pupitres dessiner de Leitz.

traits ont une certaine paisseur, il faut suivre avec le


crayon soit
leur partie mdiane, soit un des bords.

La figure 8.0 reprsente d'autres pupitres dessiner plus simples, dont


l'un est inclin de 12" et est destin dessiner avec l'oculaire-chambre
claire de Leitz; l'autre, tabli d'aprs Giesenhagen, est susceptible de
fournir toutes les hauteurs et toutes les combinaisons.

Si on ne possde pas de table dessiner spciale, rglable

tous

sens,

livres, etc.,

on

installe

une

tablette,

une

au moyen desquels on rgle

la

boite,

une

hauteur

pile

et

en
de

l'incli-

naison du papier dessin. Le tout doit avoir la plus grande fixit


possible, car le moindre dplacement et mme les vibrations nuisent Texactitude du dessin. Le papier devra donc tre
dement au support, par exemple au moyen de punaises.
On doit employer du papier blanc, pais, grain

fix soli-

trs

fin,

supportant bien la gomme effacer (papier bristol et papier Whatman). Les crayons seront de la meilleure quaht, de prfrence
en graphite, mais, en ce qui concerne leur duret, les avis sont

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

132

numros les plus durs, d'autres


des
mines
cela dpend surtout de la
tendres
plus
prfrent
lgret de la main. Personnellement, je prfre les crayons trs
durs, tels que le 6 H de Faber ou de Hardtmuth, taills en pointe
partags. Les uns emploient les

fine et

trs

allonge; je reproche aux numros plus tendres de


vite, de ncessiter un taillage trop frquent et de

s'mousser trop

trait plus tal et moins prcis. Pour aiguiser la pointe


du crayon, le mieux est d'employer une lime spciale ou encore
du papier de verre ou d'meri trs fin. On trouve dans le commerce

donner un

des petits blocs de papier de verre trs commodes pour cet usage.
Les meilleures gommes effacer sont celles qui sont souples et
molles, par exemple la gomme lphant de Hardtmuth. Il existe

une gomme, dite gomme mie de pain, qu'on peut


de forme quelconque; nous recommandons

lettes

qui ne tache jamais le papier, n'attnue pas les


permet de faire des boulettes pointues, trs
corriger de petits dtails.
Lorsque

les

ptrir

en bou-

celte

gomme

traits l'encre et

commodes pour

contours doivent tre suivis avec une grande exactitude,

est prfrable de dessiner la plume, dont la pointe ne s'mousse


pas comme celle du crayon. Le trait Tencre est plus visible que le

il

de crayon, travers l'image microscopique, parce qu'il laisse une


trace noire et mate. Ce procd n'est pas la porte de tout le monde;
il faut une main trs sre et trs exerce pour dessiner directement

trait

la

plume.
Les meilleures plumes dessin sont les plumes Brandauer (de Birmingham) n 518 on peut employer aussi les plumes Joseph Gillott
n" 291. L'encre sera toujours de l'encre de Chine liquide.
:

Dans certains

cas, lorsqu'il s'agit de prparations trs fonces,

il

y a

avantage dessiner sur du bristol noir, avec un crayon jaune ou blanc,


dont on peut suivre plus facilement la pointe. Il est plus simple encore
de placer sur le papier dessin une feuille de papier noir dcalquer,
immobilise par un poids ou par des punaises. On suit alors les contours de l'image microscopique avec une fine pointe blanche, par exemple

une grosse aiguille mousse sur une pierre aiguiser et emmanche sur
une tige de bois. On dessine lgrement les contours et les principaux
on enlve
manire ordinaire.

dtails, puis
la

le

papier dcalquer

et

on achve

le

dessin

Quelle que soit l'habilet du micrographe, la chambre claire


ne peut donner que le contour de l'image et la mise en place des
principaux dtails. L'achvement dfinitif ne peut tre fait la

chambre

claire;

tivement

la

la

on terminera donc

le dessin en regardant alternaen s'efforant de rendre, avec


et
papier
prparation
plus scrupuleuse exactitude, l'as^^ect de l'image microscopique.

et le

APPAREILS A DESSINER

133

dessins excuts la cliambre claire constituent


des documents prcieusement conservs. Lorsque le dessin doit tre
reproduit pour une publication scientifique, il est prfrable de le calquer sur papier transparent avec un crayon demi-tendre. On reporte
ensuite ce calque sur bristol, en intercalant une feuille de papier bleu
dcalquer, ou simplement une feuille de papier pralablement frotte
de crayon bleu. Le tout est bien immobilis au moyen de poids ou de
punaises. On passe alors sur les traits du calque une pointe fine et bien
lisse en mtal, en buis ou en ivoire. Lorsque le dcalque est termin,
on enlve les deux papiers minces et on excute le dessin la plume.
Les traits bleus ont l'avantage d'tre invisibles sur la reproduction photographique en zincographie, c'est pourquoi nous conseillons de dcal-

Gnralement,

les

quer en bleu. Bien entendu, un gommage s^oigneux doit


grande partie de ces traits '.

faire disparatre

la plus

La lumire du jour est celle qui est la plus favorable au dessin


chambre claire, du moins pour les grossissements faibles el

la

moyens.

Lorsqu'il s'agit de dessiner des objets trs fortement


que des Protozoaires, des Bactries avec flagelles, etc.,

grossis, tels

souvent avantage clairer le microscope la lumire artificielle, de manire galiser plus facilement l'clairage des deux

il

champs. Quel que soit le mode d'clairage, il faut disposer des


abat-jour ou des crans (fig. 95 et 98) de telle sorte que les yeux
reoivent aussi peu que possible de lumire trangre, c'est--dire
autre que celle qui ])rovient du microscope et du papier. Dans
certains cas,

il

est ulile

de diminuer considrablement

manire gale lclairage des deux champs.

On

et

d'une

obtient ainsi

meilleure dfinition des objets et un largissement de


qui facilite la perception des lins dtails.

la

une

pupille

La mensuration des dessins et la dtermination du grossisseseront tudies au chapitre des mensurations microscopiques.

ment

Notons simplement ici l'impoiiance de cette dtermination qu'on


ne devra jamais ngliger, sons peine d'avoir des documents de peu
de valeur. 7'out dessin doit tre accompagn d'une chelle
reprsentant la valeur de 4
(p. 179).
;jl

1. Le cadre de cet
ouvrage ne nous permet pas de nous tendre sur le dessin
micrographique; on consultera avec fruit sur ce sujet Husnot, Le dessin d'histob'e naturelle, in-8 de 19 p., 6 pi., 1900. Chez Tauteur Cahan, par Athis, Orne.
Extrait du Bull. Soc. linnenne de Normandie, 5" srie, III, 1900.
:

CHAPITRE

XI

CHOIX D'UN MICROSCOPE


Nous ne pouvons donner ici que des indications trs gnrales
en ce qui concerne le choix d'un microscope. 11 serait beaucoup
trop long d'numrer tous les modles des maisons srieuses
Les exemples que nous avons choisis
du microscope, pourront donner

franaises et trangres.

dans

la partie

descriptive, traitant

une bonne ide des modles les plus appropris aux divers genres
de travaux micrographiques.
Pour le travail de haute ])rcision et pour les recherches sur
des groupes difficiles, tels que les Protozoaires, ou sur des questions de cytologie fine,

monture

munie

il

est hors

de doute qu'il faut choisir une

des

perfectionnements les plus complets et


pourvue d'objectifs, dont un au moins, immersion, doit tre

apochromatique. En effet, pour ces observations trs dlicates,


de petites diffrences dans la correction des objectifs, dans leur
pouvoir dfinissant et
de temps et de fatigue

rsolvant,

peuvent pargner

beaucoup

permettre de voir nettement des dtails


qu'on ne saurait prciser avec des instruments moins parfaits. Ces
petites diffrences, dont l'avantage est insensible pour le travail
et

courant, peuvent favoriser considrablement le chercheur et lui


permettre "des dcouvertes et des interprtations impossibles avec

des objectifs mdiocres. De mme, pour


perfection de la partie mcanique et de

la

microphotographie,

la partie

la

optique est une

condition indispensable de russite.

Nous avons dit que, pour le travail courant, les objectifs achromatiques sont parfaitement suffisants. Nous allons donc indiquer
quels sont les grossissements qui, notre avis, sont les plus favorables et dcrire le modle
qui nous parat le plus pratique pour
tous les travaux.

CHOIX d'un microscope

135

Il
faut d'abord se procurer une
Choix d'un modle.
monture qui permette l'emploi de tous les objectifs et de tous les
Mme si on dispose de fonds limits et si on
appareils accessoires.

que de combinaisons optiques

n'a besoin d'abord

On

travaux.

tous les
la

trs simples,

un modle grand ou moyen, permettant

faut acheter

il

d'effectuer

pourra toujours, dans l'avenir, complter


et mesure des besoins, tandis
que si

au fur

partie opti(|ue,

on achte un

petit microscope, on se trouve, au bout de quelques


annes, possesseur d'un instrument insuffisant et quelquefois inutilisable. De l double dpense et perte d'une somme qu'on aurait

mieux employe complter les combinaisons optiques. On choisira donc un grand modle ou un moyen modle, qui devra satisfaire aux conditions que nous allons numrer.
Il faut choisir, autant que possible, un microscope inclinant.
Bien qu'on soit oblig, la plupart du temps, de travailler avec le
microscope vertical, il est bon de disposer du mouvement d'inclinaison pour effectuer sans fatigue des examens prolongs.
La platine devra tre fixe; sa forme ronde ou carre a peu
d'importance, pourvu qu'elle soit de grandes dimensions et munie
vraiment pas pourquoi les constructeurs
des platines tournantes, mcanisme de
centrage m par deux vis de rappel. La platine tournante a sa
raison d'tre dans les statifs destins la microphotographie et
d'un chariot. Je ne

sais

fabriquer

s'obstinent

plus encore dans les

minralogiques. Pour le travail couEn effet, on ne se sert pour ainsi

statifs

rant elle est trs insuffisante.

du mouvement tournant quant au mcanisme de


est videmment trs commode pour pratiquer des
centrage,
mensurations ou pour amener au centre du champ un dtail par-

dire jamais

il

Mais

ticulier.

mme

trs

arrt par le

dplacer

cement

on tente de
de

la

l'utiliser

pour explorer une surface,


on est tout de suite

prparation,

peu d'amplitude du mouvement. On ne peut en effet


que dans deux directions obliques, et ce dpla-

la platine

est limit

par

la

trs faible

longueur des

vis.

En

ralit,

prparation des arcs de cercle qui se coupent


au hasard, sans qu'il soit possible de parcourir mthodiquement
une rgion, si peu tendue qu'elle soit, ni de pouvoir retrouver un

on

si

restreinte,

fait

dcrire

la

point dj vu. Je considre donc la platine tournante comme une


complication tout fait superflue, dont un des multiples incon-

vnients est d'augmenter inutilement le prix du microscope.

La vraie

platine microscopique est la platine chariot,

deux

LE MICKOSCOl'E ET SES ACCESSOIUES

136

mouvements

rectangulaires, permettant d'explorer compltement


mthodiquement toute la surface d'une lame porte-objet.
Quelques constructeurs en ont enfin compris la ncessit et se
sont dcids crer des modles grands ou moyens avec platine
chariot, fixe ou amovible. Sans parler de la grande platine
et

chariot de Zeiss, dcrite et figure plus haut (p. 13), je citerai le


grand modle platine exploratrice de Stiassnie (fig. 8), puis, du
mme constructeur, le microscope n IV (modle Calmelte), platine exploratrice et le

microscope moyen (modle Malassez),

}>la-

line carre chariot.

dfaut d'un de ces modles, on devra choisir un statif platine


fixe, sur laquelle on fera adapter un chariot amovible. Tous les bons constructeurs ont un ou deux modles de
carre et

ces chariots, qu'on peut mme adapter aprs coup au microscope platine carre, si on n'a pu faire de suite la dpense d'un

L'conomie qu'on ralise en supprimant la platine tournante reprsente une partie du prix du chariot; le supplment
de dpense occasionn par ce dernier est amplement compens

chariot.

par les services rendus.


prix trs abordable, par

dont

le prix est

On

trouve d'ailleurs des chariots d'un

exemple

le petit

modle de Leitz

(fig.

13),

de 63 francs.

Vappare'd d'clairage

est

d'une inq>ortance capitale.

Il est

indispensable de possder un condensateur Abbe


grand modle, avec diaphragme-iris. Par contre, les dispositifs
comi)liqus des constructeurs allemands, comprenant la crmail-

absolument

lre

pour l'clairage oblique,

le

condensateur charnire

diaphragme-iris coupole, sont

mouvements indispensables sont


mise au point du condensateur

le

peu prs

inutiles.

et le

Les seuls

dplacement vertical pour la


le dplacement latral pour
condensateur hors de l'axe optique, au

carter

et

rapidement le
de l'emploi des objectifs trs faibles. Ces mouvements
peuvent tre excuts au moyen d'une crmaillre, d'une vis
d'Archimde ou mme d'un levier bascule (Stiassnie). Le dia-

moment

phragme-iris coupole, destin rgler Tclairage par


seul,

est

un organe coteux

et superflu.

D'aprs

nous avons poses pour l'clairage du microscope,

employ seul qu'avec

les

l'emploi d'un diaphragme

objectifs trs faibles,


iris ou cylindre est

le

miroir

les rgles
le

que

miroir n'est

pour lesquels

compltement

inutile.

Quel que

soit le dispositif

du condensateur,

il

doit permettre

CHOIX d'un microscope


d'installer facilement

un condensateur

de polarisation. C'est

137

fond noir

ou un

ai)pareil

une condition indispensable.

La mise au point devra, de toute nfcessit, possder le mouvement rapide par crmaillre et le mouvement lent par vis micromtrique. Un des avantages les plus srieux de la nouvelle mise
au point avec axe horizontal, mouvement dmultipli et vis sans
fin, est de permettre de saisir le microscope par la potence, sans

exposer la vis micromtrique une usure rapide comme dans les


anciens modles. En effet lorsqu'on saisit par la potence un ancien
microscope, tout le poids de la portion infrieure de 1 instrument
vis micromtrique, par l'intermdiaire de la colonne
creuse.
C'est principalement cette considration (|ui
prismatique

porte sur

la

nouveau mouvement micromtrique.


Le tube devra tre tirage et ])orter une graduation millimtrique; nous avons ai)pris en connatre la ncessit pour corriger

fera prfrer le

l'paisseur des lamelles.

Le revolver porte-objectifs est de la plus absolue ncessit.


Nous conseillons vivement de prendre un revolver pour quatre

objectifs. Une longue exprience nous a appris que le revolver


trois, qui a mallieureusement la prfrence des constructeurs, est
})ratiquement insuffisant. Mme si on n'achte au dbut que deux
c'est l une
objectifs, il faut prendre un revolver (juatre places
:

prcaution que nous ne saurions assez recommander. On a toujours se repentir de faire adapter a}rs coup un autre revolver
sur un ancien

stalif.

La composition optique noimale d'un microscope doit comprendre, notre avis, quatre objectifs et au moins deux oculaires.

Un microscope complet doit possder quatre


dont
trois

sec et un immersion. Ce dernier sera choisi


objectifs,
suffisamment })uissant, il faut viter les immersions 1/10 ou 1/12,
Les objectifs.

qui peuvent suflire pour la bactriologie, mais qui ne permettent


pas les recherches de protozoologie et ncessitent presque toujours
l'emploi de trs forts oculaires. La puissance de ces objectifs varie
du reste, suivant les constructeurs, pour une mme distance focale.

C'est ainsi que le 1/12 achromatique de Zeiss correspond peu prs


au 1/15 de Stiassnie et au 1/16 deLeitz (p. 91) ces trois types sont
de bons exemples d'objectifs immersion propres tous les travaux.
:

Les objectifs sec devront comprendre un numro faible, un


moyen et un fort. Les grossissements qui, notre avis, sont les
plus avantageux, corres[)ondent 40, 125,

300 diamtres (pour

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

138

un

oculaire faible)

voici trois

susceptibles de les fournir

exemples de combinaisons optiques

objectifs 2, 4, 6, de Stiassnie, 2, 4, 7,

de Leitz, A, G, E de Zeiss. Avec un oculaire moyen, le plus fort


objectif sec de ces trois combinaisons donne un grossissement
suprieur 500 diamtres, parfaitement suffisant pour toutes les
observations qui n'exigent pas l'emploi des objectifs immersion.
Je ne conseille pas l'emploi courant d'objectifs sec plus forts,
surtout pour les dbutants. En effet les systmes sec trs puissants sont gnralement peu lumineux, ce qui ncessite un
ti's habile de l'appareil d'clairage. De plus le choix de
ces objectifs doit tre trs svre, car ils sont souvent mdiocres,

emploi

mme

dans

les

meilleures maisons.

Deux oculaires suffisent pour le travail ordiLes oculaires.


ou 1 et
naire. Dans les oculaires d'Huyghens, on choisira un n*^
un

no 3.

Certaines

maisons, par exemple Stiassnie, fabriquent


achromatiques des oculaires d'une construction plus soigne, dont la lentille oculaire, au lieu d'tre simple,
est forme d'un systme de lentilles destin corriger la diff-

pour leurs

objectifs

rence chromatique du grossissement

(p. 57). Ces oculaires sont


oculaires compensateurs, car les
vritables oculaires compensateurs sont construits exclusivement

dnomms un peu improprement

pour

les objectifs

apochromatiques

(p. 95).

Quoi

qu'il

en

soit, les

meilleurs numros des oculaires compensateurs sont le 6 et le 9.


Les oculaires trs forts tels que le type Huyghens n 5 ou le

type compensateur n 18 peuvent tre utiles dans certains cas,


pour faire des numrations et grossir un dlail, mais ne sauraient

convenir pour le travail courant, cause de leur faible luminosit


de la fatigue oculaire produite par le peu de nettet de l'image.
L'oculaire micromtrique, du type
Appareils accessoires.

et

reprsent figure 108, ou au moins un micromtre oculaire amovible (fig. 109), est indispensable pour les mensurations. Il devra

un micromtre objectif grav sur verre, ncestalonner


l'oculaire micrometrique et pour tablir le
pour
grossissement des dessins.
tre complt par
saire

La chambre claire devra tre prise chez le mme constructeur


le microscope. Tous les modles de chambre claire que j'ai

que

dcrits sont bons

je les ai tous

expriments longuement

et je suis

certain qu'un oprateur, bien exerc au maniement d'un de ces


appareils, obtiendra toujours des dessins trs exacts. Le point le

plus important est d'avoir une chambre claire

bien adapte au

CHOIX d'un microscope

139

microscope, c'est pourquoi je conseille vivement de


chez le mme constructeur.

la

prendre

Pour prciser ces indications, je vais donner la composition de quelques types de microscopes, appropris divers ordres de recherches
microg-raphiques. Chacun de ces types est simplifi autant que possible
et reprsente le minimum indispensable pour chaque genre de travail.
1

Microscope permettant tous

les

travaux,

mme

les

plus dlicats.

Monture grand modle ou moyen modle inclinante platine


Platine chariot adhrente au microscope ou amovible;
Appareil d'clairage d'Abbe grand modle;
Revolver 4 objectifs
Objectifs

fixe.

numros sec et un immersion homogne;


trois numros dont un trs fort;

trois

Oculaires
Oculaire micromlrique;
:

Micromtre objectif;

Chambre

claire.

2 Microscope plus simple,

mais permettant encore d'aborder tous

les

travaux.

Monture moyen modle, inclinante, platine fixe;


Appareil d'clairage d'Abbe grand modle;
Revolver 3 objectifs;
deux numros sec et un immersion homogne;
Objectifs
deux numros;
Oculaires
Oculaire micromtrique;
:

Micromtre objectif;

Chambre

claire.

Microscope pour travaux de systmatique, ne permettant pas la bactriologie, et peine la protozoologie et la mycologie.
Monture moyen modle, platine fixe;
Appareil d'clairage d'Abbe;
Revolver 2 (ou 3) objectifs;
deux (ou trois) numros sec;
Objectifs
Oculaires deux numros;

Accessoires comme plus haut.


4 Microscope de voyage pour naturalistes et mdecins.
Monture aussi peu complique que possible;
Platine chariot amovible;
3"

Appareil d'clairage d'Abbe grand modle;


Revolver 4 objectifs;
trois numros sec et un immersion
Objectifs
Oculaires
deux numros
Oculaire micromtrique;
:

homogne;

Micromtre objectif;

Chambre

claire.

que ces devis d'appareils, combins avec les descriptions que


j'ai donnes de chacun des organes du microscope, suffiront pour guider
le choix du dbutant. Il existe trop de bonnes maisons de microscopes
pour qu'il me soit possible de citer tous les modles qu'on peut conseiller
je prfre donc n'en indiquer aucun. Toutes ces maisons envoient leurs
en rapprochant les donnes du catalogue des
catalogues sur demande
Je crois

indications que je viens de fournir,

il

sera facile de rdiger la

commande.

CHAPITRE

XII

ENTRETIEN DU MICROSCOPE
L'eiilrelien du microscope consiste le prserver de la poussire
des vapeurs acides et du contact des ractifs.
Pour le prserver de la poussire, il faut, lorsqu'on travaille

par intermittences, le remettre dans son armoire aprs chaque


sance. Les armoires, dans lesquelles sont livrs les microscopes

grands

et

moyens, sont construites de

introduire Tinstrument tout mont,

telle

muni de

sorte qu'on

peut y

ses objectifs et de sa

platine chariot. Rien n'est donc plus facile que de y ranger


on le retrouve prt servir lorsqu'on en a besoin.
Un trs bon procd consiste recouviir le microscope d'une
:

cloche de verre, mais

il

l'entre de la poussire,

une paisse plaque de

faut alors, pour empcher compltement


que rinsliumenl et la cloche reposent sur

feutre.

Les vapeurs acides sont encore plus dangereuses que la poussire; il


minier des ractifs pouvant dgager
ces vapeurs au voisinage du microscope et mme dans la salle o il se
trouve. H ne faut jamais i)lacer le microscope, mme enferm dans son
armoire, dans un placard o se trouvent des ractifs pouvant dgager des
vapeurs acides ou ammoniacales. Cette prcaution est trs importante,
car les dgts causs par ces manations ne se rvlent gnralement
que lorsqu'ils sont devenus irrmdiables.
faut donc viter absolument de

Un peu

de soin suffit pour prserver le microscope, et particuliredu contact direct des ractifs liquides. Lorsqu'on
elTectue des ractions microchimiijues, il faut se servir de larges lamelles
22 mm) et n'employer qu'une faible quantit de ractifs. On ab(22
sorbe l'excs de liquide avec des bandelettes de buvard pais qu'on doit
toujours avoir sa disposition sur la table de travail. Si, malgr toutes
les prcautions, l'objectif vient tre souill, il faut l'essuyer immdiatement avec un linge fin ou un peu de papier Joseph. Au besoin, laver
l'eau distille, avec le linge ou le papier buvard, puis scher avec soin.
Je crois inutile d'ajouter qu'il ne faut jamais toucher le microscope

ment

les

objectifs,

ENTRETIEN DU MICROSCOPE

141

avec les doigts souills de colorants ou de ractifs, ni dvisser ou dmonter


aucun de ses organes. A part les cas que nous allons indiquer, il faut
s'adresser au constructeur ds qu'on constate une dfectuosit dans le
fonctionnement de la partie mcanique ou de la partie optique.
Nous allons passer en revue les soins que ncessite chacune des parties

du microscope.

Oculaires.

Un

point essentiel est de laisser toujours un


du microscope, surtout lorsque les objectifs
tube ou sur le revolver. On comprend en effet

oculaire dans le tube


sont visss sur le

qu'en Tabsence d'oculaire,


viendra souiller

la

poussire tombera dans le tube et


de l'objectif. Or cette len-

la

lentille postrieure

tille est
gnralement assez difficile nettoyer. Mme lorsque le
tube ne porte pas d'objeclil, il est essentiel de le prserver de la
poussire, car celle-ci s'altacbe la paroi interne et peut ensuite
donner lieu des jeux de lumire ou tomber sur l'objectif. Adop-

tons donc pour rgle de laisser


toujours

tube

un oculaire

datis le

du microscope.

Le nettoyage des lentilles de l'oculaire doit tre fait avec un


vieux linge trs doux et autant que possible non pelucheux. La
lentille oculaire est trs souvent salie
par la poussire et le contact
cils ou des
doigts; elle exige donc un nettoyage frquent.
Les poussires qui peuvent se trouver sur la face infrieure de
lentille oculaire ou sur la collectrice
apparaissent dans le

des

la

champ du microscope. Pour


il

suftit

de faire

aussi, dvisser et
laire. Si

on dvisse

marquer

quelle extrmit

Objectifs.

ment
peut

salie

par

mme

le

s'assurer qu'elles sont dans l'oculaire

tourner ce dernier. Si les poussires tournent


nettoyer la lentille collectrice ou la lentille ocu-

La

lentille frontale des objectifs

baume,

dire que,

deux lentilles, avoir bien soin de


du tube doit se trouver la collectrice.

la fois les

la

l'huile

de cdre,

plupart du temps,

l'image microscopique est cause par


frontale.

Nous engageons donc

est trs facile-

les luts liquides, etc.

la

la

on

mauvaise qualit de

souillure de la lentille

dbutant porter son attention


mauvaise qualit du microscope, de
le

sur ce point, avant d'accuser la


ou de la prparation. Lorsque la prparation est simplement monte dans un milieu liquide et n'est pas lute, il peut
arriver que ce liquide dborde la lamelle et vienne mouiller la
l'clairage

lentille frontale.

L'image devient immdiatement indistincte

et

il

faut se hter de nettoyer l'objectif, surtout


lorsqu'il est souill
par une solution acide ou alcaline. Le mme accident peut se

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

142

produire avec riiuile de cdre, lorsqu'on reprend avec un objectif


faible une prparation qui a t examine avec un
objectif

On enlvera Thuile de cdre comme il est indiqu


164.
p.
Les avis sont trs partags sur la manire dont on doit nettoyer
les lentilles des objectifs. Ranvier recommande la surface d'une

immersion.

cassure frache d'un morceau de moelle de sureau. Dans les labo-

o on n'emploie pas cet objet, on pourra se contenter d'un


vieux linge trs doux. Pour enlever les taches, on humectera ce
linge avec un dissolvant appropri (eau, alcool, tolune), en ayant
ratoires*

bien soin de ne pas inonder les lentilles et d'essuyer immdiatement aprs avec un autre linge bien sec. Souvent, il suffit de projeter l'haleine la surface de la lentille, puis d'essuyer

Pour enlever

les

pousires qui ont pu tomber sur

trieure de l'objectif, on emploiera soit

un pinceau

un morceau de moelle de sureau frachement


une allumette l'extrmit de laquelle on
tampon de vieux
Quel que soit

doucement.
la

face pos-

trs

taill

doux,
en pointe,

a attach

un

soit
soit

petit

linge.
le

procd de nettoyage adopt, deux prcau-

tions sont indispensables


1" Eviter de rayer les
:

lentilles,

pour cela n'employer

ni

linges neufs, ni peaux, mme les peaux de chamois, ni chiffons


souills de poussire. Pour enlever les poussires, employer de

prfrence un pinceau doux avec lequel on a moins de chance de


produire des raies.
2 viter de mouiller les lentilles, lorsqu'on emploie un dissolvant pour enlever les taches. Celte prcaution est surtout importante pour les hydrocarbures (benzne, tolune, xylol) qui, en

pntrant dans

la

baume du Canada
rsulterait

monture de

l'objectif,

peuvent dissoudre

qui colle les lments de ces lentilles.

une grave dtrioration. Voir page 164

les

Il

le

en

prcautions

spciales prendre pour enlever l'huile des objectifs immersion.


3'^

Ne jamais

dvisser les

lentilles.

Celte recommandation

demande tre bien comprise. Ce qu'il ne faut dvisser sous


aucun prtexte, c'est l'assemblage des lentilles des objectifs moyens
cet assemblage est d'ailleurs viss de telle sorte qu'il est
presque impossible d'y toucher, car il n'y a pas de molettes et le
nickelage a gnralement t fait aprs le montage. Mais on remar-

et forts

quera
parties

que
:

la

les

objectifs

moyens et forts sont diviss en deux


munie d'une molette, renferme le

partie infrieure,

ENTRETIEN DU MICROSCOPE

143

systme optique; la partie suprieure est un simple tube, garni ou


non de diaphragmes, destin donner l'objectif la longueur
voulue. On peut sparer sans danger ces deux parties, de manire

nettoyer la face postrieure de l'objectif.


les objectifs faibles,

pour
ou les

lentilles

pour

Il

en

est

de

mme

dont on peut gnralement dvisser

la

les nettoyer.

Une rgle trs simple


munies de molettes. On

consiste ne dvisser

que

les

parties

sera sr ainsi de ne rien dtriorer.

Un

dvissage intempestif peut modifier le centrage des objectifs et les

endommager irrmdiablement.

Conservation des objectifs.


Lorsqu'on ne doit pas se servir des objecpendant un certain temps, il faut les enfermer dans leurs botes de
laiton. C'est le seul moyen de les prserver de la poussire et de l'humidit. On a renonc peu prs dfinitivement aux crinsqui les garantissaient trs incompltement. Si, au cours du travail, on a besoin d'un
nombre d'objectifs suprieur au nombre de places du revolver, on contifs

servera, sous

une

de verre, ceux qui ne servent pas

petite cloche

momen-

tanment.
Eviter avec soin

les chutes et les chocs qui dcentrent les lentilles et


dtriorent gravement les objectifs.
Altrations des lentilles.
Ces altrations, qui se manifestent par l'apparition d'un trouble ou d'une opacit, ne surviennent gure que sous les
tropiques et sont dues trois causes
1" Altration du verre des lentilles (jui se tache et se dpolit sous l'influence d'une atmosphre chaude et humide;
2 Vitrification duhaume du Canada qui unit les lentilles, sous l'influence
d'une temprature trop leve
3 Condensation de fines gouttelettes d'eau entre les lentilles. Ce dernier
accident est rare avec les objectifs bien monts. Il se rduit gnralement une bue qui recouvre les faces accessibles des lentilles. Cet

accident se produit aussi en hiver dans les pays temprs, lorsqu'on


passe le microscope d'une pice froide dans une pice chauffe, ou simplement par condensation de l'haleine au contact d'un microscope froid.
Les altrations dues aux climats tropicaux sont de moins en moins
craindre, car les objectifs modernes sont construits de manire tre
peu sensibles la chaleur humide. J'ai vu un certain nombre de microscopes revenir intacts aprs une longue campagne, par exemple en Afrique occidentale. D'ailleurs les maisons srieuses rparent toujours gratuitement les lentilles qui viennent se troubler par l'effet du climat.

Appareil d'clairage.

Le miroir

et les lentilles

du condensa-

teur seront nettoys, comme les autres lentilles, avec un vieux linge
bien propre et imbib au besoin d'un peu d'alcool ou de tolune.

Une propret
pour

la

parfaite de l'appareil d'clairage est indispensable


la bonne dfinition des images. Quelquefois,

luminosit et

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

14i

dans les micioscopes munis d'un condensateur indpendant du


miroir, on voit apparatre, dans le cliamp optique, des poussires
qui ne tournent pas avec l'oculaire et qui ne proviennent pas de

un lger dplacement vertical


Tobjeclif
sont
qu'elles
dposes sur le miroir.
:

du condensateur montre

On peut essuyer les


Entretien de la partie mcanique.
une peau, mais jamais avec un linge mouill

parties ternies avec

d'alcool ou de tolune qui dissoudraient le vernis et feraient des


taches indlbiles. La platine se nettoie avec une trace de vaseline.

ou la vis micromtrique ont besoin d'tre


une
trace de vaseline bien neutre ou mieux
graisses, employer
encore une trace d'huile d'os sans acide.

Lorsque

les crmaillres

CHAPITRE

XIII

L'OBSERVATION MICROSCOPIQUE
Les chapitres qui prcdent nous ont fait connatre la structure
et la manire d'employer chacun de ses organes. Il

du microscope
tait

ncessaire d'tablir ces notions fondamentales, car elles co-

nomisent beaucoup de temps et de ttonnements. Certains auteurs


affirment qu'on ne peut fixer de rgles pour l'emploi du microscope

que l'habitude seule doit enseigner la manire de disposer


l'clairage et de mettre en valeur les dtails des prparations. Je
et

ttonn mes
j'ai moi-mme longtemps
de

dcouvrir
des procds
beaucoup
temps
pass
d'observation que je ne trouvais dans aucun livre. J'estime donc,
au contraire, qu'il faut tracer le plus possible de rgles prcises,
ayant pour bases scientifiques les proprits physiques du micro-

ne suis pas de cet avis

dbuts

et

scope et de ses divers organes. L'application correcte de ces rgles


est bien une affaire d'exercice et de pratique mais leur connaissance est indispensable au micrographe. Si elles font dfaut
de refaire toute la srie d'expriences,
souvent infructueuses, qui ont permis ses prdcesseurs de tirer
l'lve, celui-ci est oblig

du microscope tous

les services qu'on est en droit d'en attendre.


Aussi allons-nous traiter maintenant de l'ob&ervation microsco-

la perception oculaire des images fournies


microscope, de la manire de raliser cette perception sans
fatigue et dans les meilleures conditions, enfin des erreurs et

pique, c'est--dire de

par

le

illusions d'optique auxquelles elle peut

I.

CONDITIONS
il

lieu.

DE LA VISION MICROSCOPIQUE

Pour interprter correctement


scope,

donner

les

images fournies par

le

micro-

faut bien connatre la nature de la vision microscopique.

M. Langeron.

Prcis de Microsopie.

10

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

146

Si on se rend bien compte que c'est une vision spciale, une


manire d'apercevoir les objets toute diffrente de celle laquelle
nous sommes habitus, on s'pargnera beaucoup de difficults et

d'erreurs.

une vision binoculaire qui nous donne la


du relief. Cette sensation est due la
superposition des deux images rtiniennes et la fusion des deux
perceptions correspondantes. Ces deux images ne sont pas

La

normale

vision

est

sensation de la distance et

identiques, elles diffrent d'autant plus que l'objet est plus que
rapproch; aussi la sensation de relief diminue-t-elle au fur et

mesure de Tloignement de cet objet. Au contraire, la vision


microscopique est une vision monoculaire nous devons donc, en
regardant au microscope, faire abstraction de l'ducation primitive

de

l'il et

apprcier par d'aulres moyens

le relief et l'paisseur

des corps.

Dans

la vision

le

normale,

mcanisme de l'accommodation nous

permet de voir nettement, l'un aprs l'autre, mais non simultanment, des objets situs diverses distances. Dans la vision microscopique, le 772cr/7?7e de V accommodation n entre pas en jeu^
nous ne percevons la fois qu'un seul plan trs mince de l'objet

examiner et, pour voir les autres plans, nous devons faire
varier la mise au point du systme oplique. Nous ne voyons donc
jamais qu'un seul de ces plans la fois et, pour nous faire une

ide

exacte de l'objet,

nous devons superposer par la pense


chacun de ces plans.

toutes les images lmentaires fournies sur

le grossissement du microscope est fort, plus grand est le


nombre de plans que nous devons mettre au point successivement,

Plus

et le relief d'un corps.


autre diffrence importante entre la vision ordinaire et la
vision microscopique rsulte de la nature de V clairage. Les objets
qui nous entourent sont vus par rflexion, grce la lumire

pour apprcier l'paisseur

Une

qu'ils

rations

diffusent.
est

transparence;
jouent un

Au

microscope, l'immense majorit des prpaen lumire transmise, c'est--dire par

examine
il

en

rsulte

que

les

rle bien plus considrable

phnomnes de rfraction
que dans la vision l'il nu.

ce point de vue, nous devons diviser les images microsco))iques


en deux groupes. Les unes sont fournies par des prparations
colores^ (jui agissent sur les rayons lumineux par absorption^
ces images ne montrent que la couleur et les contours des objets.
Les autres sont fournies par des prparations incolores-^ c'est le

l'observation microscopique
cas. des organismes

examins

l'tat trais, sans

147
coloration.

Ces

rayons lumineux par rflexion el


montrent non seulement les contours des objets,

prparations agissent sur les

rfracLion\ elles
mais encore les dtails de leur structure, simplement par des diffrences de rfringence ou par des contrastes de lumire et d'ombre.

La

vision microscopique diffre encore de la vision normale par


Touverture considrable du cne qui sert Fclairage

suite de

des prparations. Les dimensions de ce cne lumineux intluent


beaucoup sur la nature des phnomnes de rfraction.

Enfin

microscopique diffre essentiellement de la vision


nature du milieu dans lequel Laignenl les objets.

la vision

iiormale par

la

Nous sommes habitus

voir

autour de nous des corps plongs

dansFair: au contraire, au microscope, les prparations doivent


presque toujours tre montes en milieu liquide. En effet, d'une
part, le montage dans l'air est gnralement impossible, cause
des phnomnes de dessiccation et de racornissement qui l'accompagnent; d'autre part. Tinlroduction de l'air dans les interstices

des objets ou des tissus produirait des phnomnes de rfraction


tels qu'aucune structure ne serait discernable. Il faut donc monter
les objets

dans un milieu liquide, qui


de rfraction soit

tion et dont l'indice

les plus tins dtails.


Mais l'aspect des objets

les

prserve de

tel (ju'il

la

dessicca-

permette de distin-

guer

rfraction

du milieu. Si

milieu dans lequel

le

est plus rfringent

trs diffrent

est plong,

il

le

que

milieu,

suivant

l'indice

de

mme

l'objet a le

il
il

indice de rfraction que


devient invisible. Si l'objet

prsente les caractres d'un

moins rfringent que le milieu, il prend


apparences d'un corps creux. Ranvier a propos un excellent

corps solide; enfin,


les

est

s'il

est

On prend trois flacons


renfermant lespectivement de l'eau, du sulfure de
carbone et du baume du Canada; on plonge une baguette de
verre dans chacun de ces trois flacons. Dans le premier, la baguette
exemple pour concrtiser ces phnomnes.
semblables,

parat solide, parce


le

second,

gent que

que

le

verre est plus rfringent que l'eau dans


parce que le verre est moins rfrin;

elle parait creuse,


le

sulfure de

disparat, car le
de rfraction.

Voici donc

un

carbone; enfin,

baume du Canada

et le

dans

le

verre ont

troisime, elle
le

mme

indice

[premier exemple, trs grossier, qui nous montre

jusqu' quel point l'apparence des corps peut tre modifie par
la rfringence du milieu qui les baigne. Pour mieux
comprendre

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

148
les

se produisent

phnomnes qui

dans

la vision

microscopique,

nous allons tudier deux corps d'une forme bien dtermine, trs
il faut
frquents dans les prparations microscopiques et dont
bien connatre les proprits optiques. Ce sont les bulles d'air et
les

globules graisseux.
1

Bulle d'air dans eau.

On emprisonne quelques bulles d'air entre lame et lamelle


dans une gouttelette d'eau ou de salive. On choisit une bulle assez
soit pas comprime et qu'elle garde bien
petite pour qu'elle ne

On

forme sphrique.
condensateur.

sa

a soin de diaphragmer assez fortement le

l'objectif au point, de faon ce que la circonbulle soit bien nette (tig. 86, B) nous verrons alors
centre form d'un cercle trs brillant, entour d'une zone

Mettons d'abord
frence de
le

la

concengristre, puis d'un large anneau noir zbr d'anneaux


diffraction.

de
des
clairs
et
minces,
correspondant
franges
triques
Si on enfonce l'objectif, de faon mettre au point la partie
infrieure de la bulle, le cercle blanc central devient plus petit et
plus clair; il est aussi plus net et a perdu sa bordure grise.
L'anneau noir qui l'entoure est plus large, flou au bord et pourvu

la priphrie de plusieurs

Enlin,

anneaux de

voit le cercle blanc central

diffraction (fig. 86, A).

suprieure de la bulle, on
augmenter d'tendue. En mme temps

on met au point

si

la partie

apparaissent autour de lui de larges cercles gris, entours d'un


noir beaucoup plus troit que prcdemment. Cet

anneau

anneau noir

est travers, sur son

bord externe, par de nombreux

cercles de diffraction (fig. 86, G).

Ces apparences s'expliquent ( part les anneaux de diffraction)


le phnomne de la rflexion totale (p. 48). Le faisceau

par

lumineux qui traverse la bulle d'air peut tre considr comme


form de rayons parallles. Parmi ces rayons, ne pntreront
dans

le

microscope

que ceux dont l'inclinaison par rapport


ne dpassera pas, d'une part, la valeur de

l'axe, aprs rfraction,

l'angle limite
part,

la

pour

le

passage de l'eau dans l'air (48^^) et, d'autre


d'ouverture de l'objectif, mesur par

moiti de l'angle

rapport l'eau. Tous les autres subiront la rflexion totale; c'est


pourquoi les bords de la bulle d'air paraissent obscurs. La
figure 87 rend compte de ce phnomne, en mme temps qu'elle

L'OBSERA'ATION mtcroscopioue
les

variations

149

de dimension de Panneau obscur.

Les
explique
rayons a el a" pntreront seuls dans l'objectif, dont l'angle
d'ouverture n'est pas suffisant pour recueillir le rayon a'". Quant
au rayon a"\ il subit la rflexion totale, car il dpasse l'angle

E^J^KlNAUDj^m

E.

SALLE

1. Bulle d'air dans l'eau. Mise au


A. sur la partie profonde;
Fig. 86.
point
-2.
Bulle d'air dans le
B, sur la partie moyenne; C, sur la partie suprieure.
du
baume
Canada. Mme signification pour les lettres.
3. Globule-e graisse

dans

l'eau.

limite.

Mme

signification pour les lettres (d'aprs Ranvier).

Supposons maintenant que nous mettions

l'objectif

au

plan a?f/, passant par l'quateur de la bulle dair; le


cercle clair central aura pour diamtre G a".,, puisque Toeil peroit
point sur

le

le

rayon a" dans la direction suivant laquelle il est rfract. Au


si nous mettons au
point sur la partie infrieure de la

contraire,

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

150

nous ne percevons plus qu'un troit cercle clair, ayant


pour diamtre C, ",. Enfin, en mettant au point sur la partie
suprieure de la bulle, le cercle clair sera beaucoup jdus large

bulle,

(G, a\).

Pour cbacune de ces

positions

de Tobjectir,

la

zone

obscure correspondra la partie de la bulle situe en dehors du


rayon a". En un mot, la bulle d'air agit comme une lentille biconcave et transforme le faisceau parallle en un faisceau divergent.

En comparant
thoriques

Fig. 87.

86

les figures

correspondent

Marche des

le

on verra que ces donnes


peu prs exactement aux rsultats
et 87,

ra3'ons lumineux dans une bulle d'air examine


dans l'eau.
OrirjinaL

fournis par l'exprience.

nous voyons que

En

effet,

en examinant

la

bulle d'air,

bord n'est pas absolument obscur; cela tient

les rayons qui subissent une rfraction trop grande pour


vers l'intrieur de
dans
pntrer
l'objectif, sont en partie rflchis
la bulle et sont ainsi en
partie perus par l'il de l'observateur.

ce

que

C'est ce

phnomne supplmentaire qui explique pourquoi

la

zone

zone obscure ne sont pas toujours exactement limites.


nous
avons constat la prsence de nombreux anneaux de
Enfin,
diffraction. Ceux-ci sont dus ce que la zone obscure de la bulle

claire et la

agit sur le faisceau

lumineux comme un diaphragme et produit


Ces anneaux seront d'autant plus

ainsi des
franges de diffraction.

nombreux que

le

diaphragme, c'est--dire

le

cercle clair, sera

l'observation microscopique

151

leur nombre augmente donc au fur et mesure qu'on


met au point sur une partie plus profonde de la bulle. Ils sont
d'autant plus distincts que l'angle d'ouverture du faisceau clairant

plus troit

est plus petit.

Il
il

Bulle d'air dans le

trs facile

est

suffit

pour

Nous savons

baume du Canada.

d'emprisonner des bulles d'air dans

diffrence entre l'indice de rfraction des

Par

grand.

le

baume

cela de l'agiter avec une petite baguette de verre.


que l'angle limite est d'autant plus petit que la

consquent, dans

le

deux milieux

est plus

baume du Canada,

beaucoup plus rfringent que l'eau,


tombant trs prs du ple de la bulle

il

qui est
n'y aura que les rayons

d'air qui

pourront parvenir

l'il de l'observateur.

La figure 86 montre en effet, en A', que le cercle clair, aperu


en mettant au point le fond de la bulle, est beaucoup plus petit
qu'en A. Il en est de mme pour les figures B' et G', l'une
correspondant la mise au point sur le plan mdian et l'autre
la

mise au point sur

On
de

agite,

la

partie suprieure de la bulle.

Globule de graisse dans l'eau.

daus un flacon, une goutte d'huile avec une dizaine


cubes d'eau. On prlve une goutte de cette

centimtres

mulsion
choisir

et

on l'examine entre lame

un globule assez

en ayant soin de
pas dtorm par la

et lamelle,

petit pour qu'il ne

soit

pression.

En

la partie infrieure du globule, on


86, A") une masse gristre trs floue, prsentant
trois zones concentriques une extrieure plus claire, une moyenne

mettant au point sur

aperoit

(fig.

une centrale grise.


En mettant au point le centre du globule, on voit ce dernier
limit par un troit anneau noir trs net, zbr de cercles de
diffraction. Le reste du globule apparat en gris clair.
Enfin, en mettant au point sur la partie suprieure, on voit
fonce

et

l'anneau noir s'largir et devenir flou et gristre sa priphrie.

Au

centre, apparat

un cercle

Ces apparences sont, on

trs brillant et

le voit,

nettement dUmit.

exactement opposes celles

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

152

que donne une

l)iille

crair

dans Teaii ou dans

le

baume

obscure

au

la zone
diminue

lieu

d'aug-

menter, lorsqu'on
abaisse peu peu
robjectif.

La figure
montre que
rayons a
sont

88
les

a\ a

en

dvis

sens inverse de

de

Tobservaleur

donc

verra

les

dans
a\,

la

Lil

87.

figure

1'/

direction

la

On

a"\.

a'\,

comprend immdiatement
le

quoi
clair
Fig. 88.

Marche des rayons lumineux dans une goutde graisse examine dans l'eau. Original.

telette

pourcercle

diminue

lors-

m et

au

qu'on
point

le

ple su-

prieur du globule de graisse Celui-ci agit comme une lentille biconvexe et


transforme le faisceau parallle en un faisceau convergent.

H.

CONSQUENCES PRATIQUES
1

Ces

trois

Phnomnes de

rfraction.

expriences nous ont appris connatre les bulles


ne pas les confondre avec des

d'air et les globules graisseux et

lments histologiques, dorigine animale ou vgtale. Elles nous


montrent aussi la diffrence qui existe entre les corps plus rfringents

ou moins rfringents que

le

milieu dans lequel

ils

sont

plongs.

Les corps jo/ms rfringents que le milieu (gouttes d'huile dans


une partie centrale d'autant plus claire et plus

l'eau) prsentent
troite,

entoure d'un anneau obscur d'autant plus large, qu'on

153

L OBSERVATION MICROSCOPIQUE

examine un point plus rapproch de leur surface suprieure.


se comportent

Au

comme

Ils

des lentilles biconvexes.

les corps moins rfringents que le milieu


dans l'eau) prsentent une partie centrale d'autant
plus troite, entoure d'un anneau obscur d'autant

contraire,
d'air

(bulles

plus claire

et

plus large, qu'on examine un point plus rapproch de leur surface infrieure. L'effet est d'autant plus accentu que la diff-

rence entre
d'air

dans

comme

les

deux indices de rfraction


ou dans

l'eau

comportent

la

comme

comme

lumire

concaves

les objets

comportent
second cas

objets conveaxs et plus rfringents que

les

Inversement,

grande (bulle
se

des lentilles biconcaves

milieu agissent sur


l'eau

est plus

baume). Ces corps

le

les globules graisseux

le

dans

moins rfringents que le milieu se


dans Teau. Un bon exemple du

et

les bulles d'air

nous

fourni

est

Mammifres, examins

Nous savons que

les globules
sanguins
entre lame et lamelle.

par

l'tat frais,

des

ces globules sont des disques biconcaves leur


d'un rebord convexe. Si on met au point

partie centrale et bords


la

face infrieure de la partie centrale, on apercevra un disque


entour d'un anneau gristre. Si on met au point la face

clair,

suprieure, le

centre parat

gris

fonc,

entour

d'un anneau

clair.

Ces phnomnes ont une grande importance pour l'interprmicroscopique des corps cylindriques pleins ou creux et

tation

des ornements qui peuvent exister

pourvu

objets,

considrablement

la

la

surface ou l'intrieur des

dimension de ces lments dpasse


que
d'onde
de la lumire employe.
longueur

toutefois

Nous savons, par

la

des

l'tude

bulles

d'air

et

des

globules

qu'un corps sphriquc, plong dans un milieu plus


rfringent, agit comme une lentille concave, tandis que, dans un
milieu moins rfringent, il agit comme une lentille convexe.
graisseux,

Donc, pour apprcier


lorsqu'on
s'agit

peroit

le relief

un aspect

d'une surface convexe;

l'objectif

des objets,

brillant,
si,

pour percevoir cet aspect

au

il

suffit

de savoir que

en

relevant l'objectif, il
contraire, il faut abaisser

brillant,

il

s'agit

d'une surface

que nous venons d'apprendre


les
distinguer
gouttelettes graisseuses, qui peuvent tre considres
comme des corps sphriques pleins, des bulles d'air qui se comconcave.

portent

Pour

C'est

comme
l'tude

d'ailleurs

ainsi

des corps sphriques creux.


des proprits des corps cylindriques (fibres).

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

154
prenons

comme exemple

de trs

fins filaments

creux.
1

Filaments pleins

rfringent

(air

on eau),

(fig.

ils

89).

de verre pleins

et

Dans un milieu rnoim

prsentent une large surface brillante


quand on met au point
^p-..
sur la partie mdiane,
brillante
une
surface
troite quand on relve
Tobjectif et une surface

obscure uniforme quand


on l'abaisse. Au contraire,

CL

tude d'un filament plein, en lumire


Fig. 89
centrale.
a, mise au point sur le plan
mdian; 6, sur la face suprieure; c, sur la
iace infrieure (d'aprs Dippel).

Enfin, dans

un milieu de

mme

dans un

milieu

plus rfringent (monobromonaphtaline ou biiodure de mercure), les


apparences sont inverses
et le filament plein parat

comme un

corps creux
le liquide.
dans
immerg

rfringence (baume du Canada),


le

filament

plein prend

d'une

Taspect

bande

aplatie.
est

Il

donc

connatre

capital de

diffrence

la

de rfringence du milieu
elde l'objet, pour pouvoir

une ide exacte

se faire

de

forme

sa

relle.

Il

faut souvent aussi exaCL

miner

tude d'un filament creux en lumire


Fig. 90.
centrale.
, mise au point sur le plan
mdian; 6, sur la surface suprieure; c, sur
la surface infrieure (d'aprs Dippel).

fine pipette

de verre remplie
nous obtenons

de

dans des

rfringence

diffrente.

2
(fig.

une

l'objet

milieux

d'air. Si

Filaments creux
Examinons

90).

nous mettons au point

le mme aspect que pour un


tube plein, avec cette diffrence que nous voyons en plus le double
contour des deux parois. Mais en mettant au point successivement les

sur

la

partie mdiane,

deux surfaces, nous observons des phnomnes inverses du cas

l'observation microscopique
en relevant

le

tube

155

la raie brillante
disparait,

puis elle
tube pour mettre au point la concavit infrieure. Ces apparences se retrouvent dans les
poils creux,
les fibres creuses, les canalicules creuss dans une substance

prcdent
reparat

quand on abaisse

le

sillons ou cannelures demi-cylindriques


fig. 93) agissent
des lentilles concaves, quel que soit le ct par lequel on
les observe. Si la concavit est dirige du ct de l'observateur, il

Les

solide.

comme

faut relever le tube pour voir la raie brillante et l'abaisser dans le

cas contraire.
Si le filament est

rempli de liquide, deux'cas peuvent se prun indice de rfraction gal ou suprieur

senter. Si le liquide a

du milieu environnant,

celui

quement comme

(ilament creux se comporte opti-

le

filament plein; on ne peut le distinguer de


ce dernier que par la prsence du double contour. Au contraire,
si le liquide qui rem])lit le filament est moins
rfringent que le
le

milieu environnant, ce filament se comporte peu prs comme


s'il tait
rempli d'air. Mais ici, il faut encore tenir compte de la
rfringence des parois du tube capillaire;
rfringent que

les

dans

le

creuse

deu\ liquides,

si

celui-ci est

la paroi fait l'effet

muins

d'une cavit,

milieu le plus r-,


fringent.

En

lumire

oblique^ les rsul-

obtenus

tats

ne

pas en
principe; les raies
lumineuses
sont
diffrent

seulement dplaces suivant l'inci-

dence

du
cne
Pour les

clairant.

filaments

pleins

91), la ligne
brillante est dvie
(fig.

du ct d'o vient
la

lumire,

lors-

CL

Fig. 91.

tude d'un

ment

plein en lumire
oblique, dirige de droite

gauche.

92),

il

, taise

au

point sur la surface suprieure; b, sur le plan


mdian (d'aprs Dippel).

qu'on relve l'objectif; au contraire, pour


(fig.

les

tude d'un nia


ment creux en lumire

Fig. 92.

oblique, dirige de droite

gauche.
, mise au
point sur la surface suprieure

6,

sur

le.

plan

mdian (d'aprs Dippel).

filaments creux

faut abaisser l'objectif,

eu
lla

et

les

rainures

pour obtenir cette apparence

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

156

du ct oppos

celui d'o vieut la lumire.

En

relevant ou en

un

peu plus Tobjectif, l'objet prsente une moiti


une moiti claire, places inversement suivant que le
filament est plein ou creux.

abaissant

sombre

et

Ornements en creux ou en relief.


Les rainures demicylindriques creuses dans une membrane (fig. 93) se comportent
comme des lentilles concaves et paraissent brillantes quand on
3

abaisse l'objectif. Des paississemeuts de mme forme produisent


Teffet inverse -et paraissent brillants quand on

relve l'objectif. Enfin, lorsque des paississemeuts alternent avec des


i

llili'

dpressions,en formant une


surface ondule (fig. 94),
il

les

est facile

parties

de distinguer
concaves des

parties convexes d'aprs les

mmes
Fig.

93.

pais-

Fig.

94. paississe-

sissements ou

ments

et

dpressions demicylindriques (d'aprs Dippel).

sions

demi

driques

dprescylinalternants

(d'aprs Dippel).

rgles

les

unes

sont obscures pendant que


les autres sont brillantes ou

inversement, suivant
de la mise

variations

les

au

point.

Dans

le

cas o une mince

membrane, d'paisseur uniforme,

prsente une surface ondule, il est plus difficile de distinguer


concaves des parties convexes, puisque toutes agissent
sur la lumire comme des lentilles concaves. Pourtant, on distinles parties

guera les dernires l'abaissement plus considrable de l'objectif,


ncessaire pour les faire apparatre brillantes.
Les parties plus ou moins paisses
4 paisseur des objets.

des parois des olqets se comportent comme les ornements que


nous venons d'tudier. Pour bien apprcier ces diffrences d'pais-

seur

et les distinguer

ornements,

il

srement des structures produites par des


Dans le

faut se servir de liquides trs rfringents.

premier cas, on aperoit les mmes apparences qu'en examinant


dans l'eau; dans le second cas, l'image est trs diffrente. Si
l'image parat plus brillante quand on abaisse l'objectif, il y a un
paississement dans le cas contraire, il y a une dpression.
;

L'OBSERVATION MICROSCOPIQUE

Phnomnes de

157

diffraction.

Les stines de diffraction peiivenl tre la source d'une illusion


d'optique et tre prises par Tobservateur pour une structure vritable.

Il

nature

a plusieurs moyens de reconnatre leur vritable


tous se ramnent voir si ces stries peuvent tre exa-

on peut modifier leur cartement. En cas de rsultat


bien des stries de ditraction. Pour cela on rduit,
au moyen d'un diaphragme, la section du cne clairant, ou bien
on observe la prpaiation en lumire monochromatique jaune.
gres et

si

positif, ce sont

Dans

le premier cas, les stries sont d'autant plus distinctes


que le
diaphragme est plus petit dans le second, ralis au moyen d'une
lampe sodium ou, plus simplement, en intercalant un cran de
verre jaune dans le porte-diaphragme, les stries de diffraction sont
;

exagres

et.

cartes.

Nous avons

tabli,

fondamentale entre

au dbut de ce chapitre, une distinction

images des objets colors, produites par


d'absorption, et les images des objets non
colors, dues des phnomnes de rflexion et de rfraction.
Ces dernires sont, comme on vient de le voir, trs compliques
les

des phnomnes

et leur interprtation

peut tre excessivement

difficile; les

zones

claires et fonces et les franges de diffraction

pour des membranes ou des

stries

peuvent en imposer
vritables. Il faut donc tre mis

Au contraire, les images


sont
fidles
et reprsentent exactebeaucoup plus
par absorption
en garde contre ces illusions d'optique.

ment

les

contours des objets. Leur interprtation est donc beausujette des erreurs, car on n'est pas oblig de tenir

coup moins

compte des phnomnes de rfraction ou de

3
1 Obscurit

diffraction.

Causes d'insuccs.

du champ.

Elle provient d'un mauvais centrage

du miroir, la hauteur du condendu diaphragme-iris qui peut tre trop ferm ou


dcentr, surtout dans les montures qui permettent l'clairage
oblique. Se reporter (p. 34) aux rgles concernant l'clairage du
de l'clairage. Vrifier

la position

sateur, la position

microscope.
Une obscurit partielle du champ peut tre due au revolver,
qu'on n'a pas tourn jusqu'au cran d'arrt ou qui a t pouss

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

158

au

del. L'objectif n'est centr

que lorsqu'on

de ce cran d'arrt.
2

Manque de

persiste, aprs

le

point attentive,

il

a)

La

nettet de

Vimage.

Si

ce

a senti la rsistance

manque de

nettet

mise au
rglage soigneux de l'clairage et une
faut en rechercher mthodiquement la cause.

prparation. Elle peut tre

salie sur

une de

ses

deux

faces; on le reconnat ce que les stries et les ombres se dplacent


en mme temps que la prparation. Nettoyer avec un linge fin,
imbib d'alcool ou de xylol. Enlever notamment avec soin les traces
d'huile de cdre, de baume ou de lut. Ce nettoyage doit tre fait

avec prcaution, de manire ne pas comprimer l'objet plac sous


la lamelle. viter de poser les doigts sur la lamelle, car il reste
l'observation. Ne pas
toujours des traces graisseuses qui Iroublenl
oublier que la prparation peut tre retourne par mgarde et que

lamelle peut tre trop paisse. Dans ces deux cas, on ne peut
mettre au point les objectifs forts (voir plus loin, p. 165).
on s'en assure en le faisant tourner, on
est sali
h) L'oculaire

la

doit voir les

comme

il

corps trangers tourner en

a t dit plus

haut

mme

temps. Nettoyer

(p. 111).

sont

Objectif lorsque l'clairage, la prparation et l'oculaire


La
corrects, la cause d'insuccs vient gnralement de l'objectif.
lentille frontale peut tre souille de baume, d'huile de cdre ou
:

c)

d'un autre liquide; la lentille postrieure peut tre couverte de


manire d'y remdier.
poussire. Voir plus haut (p. 142) la
Lorsqu'on se sert des objectifs immersion, l'huile peut tre
ou trop paisse. Dans le premier cas, les corps trangers font
ombre; dans le second, la lamelle peut adhrer fortement la
sale

lentille frontale. Elle se soulve lorsqu'on relve l'objectif, ce

Il

qui

mise au point impossible et peut dtriorer la prparation.


faut se servir d'huile suffisamment fluide et ne jamais la laisser

rend

la

scher sur l'objectif ou sur les prparations.


d) Appareil d'clairage. Le trouble peut provenir de l'appareil
lui-mme dfaut de centrage, poussires ou taches sur le miroir
et les lentilles du condensateur. Il peut provenir d'objets ext:

rieurs

sur

barreaux de fentres, objets interposs accidentellement


des rayons lumineux.

le trajet

Dans

les

deux

cas,

dplaant lgrement

on

voit

le

immdiatement

vient le mal.

on s'assure de

la

condensateur, au

nature du trouble en

moyen de

l'clairage s'amliorer et

la

crmaillre

on reconnat d'o

L'OBSERVATION MICKOSGOPIQUE

lo9

Ils sont dus ce


qiroii nomme les
Ce sont des images de corpuscules incolores, arrondis, en chapelet ou en forme de filaments, qui paraissent
se dplacer dans le champ du microscope. Avec un peu d'habitude,
en dplaant lgrement la prparation ou en modifiant la mise

3" Troubles subjectifs.

mouches volantes

au point, on voit que ces formations sont indpendantes de l'objet


examin et du microscope. Ce sont gnralement des dbris cellulaires qui flottent dans le corps vitr et projettent leur ombre
sur

Les images auxquelles ils donnent lieu ont donc leur


dans
Til de l'observateur. Ces mouches volantes sont
origine
on n'arrive s'en dbarrasser, au
quehjuefois trs gnantes
la rtine.

moins momentanment, que par


4'^

Courants

et

mouvement

le

repos.

broivnien.

Les courants

se }ro-

duisent surtout dans les prparations non montes ils sont dus soit
la position incline du microscope, soit la dessiccation
progres:

sive, soit Taddition de liquides sur les bords de la lamelle. Ils


sont particulirement gnants dans les examens de sang l'tat
frais, entre lame et lamelle. On y obvie en lutant les prparations
et

en ayant soin de les faire aussi minces que possible; en


il
y a de liquide, moins les courants sont sensibles.

effet,

moins

Le mouvement brownien ou mouvemement molculaire

est

une

sorte de

trpidation qui agite sans cesse les corps de trs petites


dimensions. Il faut viter de le confondre, notamment lorsqu'il
s'agit

de Bactries, avec des mouvements

n'est pas toujours facile et

actifs.

Cette distinction

rclame une attention minutieuse.

CHAPITRE XIV

EMPLOI DU MICROSCOPE
Les conseils que nous allons donner succinctement pour l'emploi du microscope ne sont point superflus. Les rgles les plus
lmentaires du maniement du microscope sont souvent ignores,
mme par des travailleurs dj exercs, qui, par des manuvres

imprudentes, compromettent la dure de leur instrument ou se


privent de ressources qu'il est capable de fournir.

MANIERE

DE SAISIR
ET DE TRANSPORTER LE MICROSCOPE
I.

Ce point

est trs

la vis micrommunis du nouveau mouvement microm-

important pour ne pas lser

trique. Les nncroscopes,

trique horizontal, doivent tre pris par la potence en forme de


poigne. Les anciens modles, mouvement micromlrique vertical et

prisme, doivent tre

personnes

les

prennent par

la

saisis

par

le

Beaucoup de

pied.

potence qui supporte

le

tube

c'est

une pratique dplorable, qui amne tt ou tard la dtrioration de


la vis micromtrique. En effet, en saisissant ainsi le microscope,
tout le poids de l'appareil repose sur la vis, dont les

filets

sont

peu

mousss. Certains constructeurs, par exemple Reichert,


ont eu la bonne ide de munir ces anciens modles d'une poigne.

peu

Il

y a longtemps que ce petit perfectionnement devrait tre gn-

ralis,

on conserverait

cale toute sa

douceur

ainsi l'ancienne vis

micromtrique

verti-

et toute sa prcision.

Je crois inutile de dire qu'un microscope ne doit jamais tre


pris par la platine, ni plus forte raison par le tube.

EMPLOI DU MICROSCOPE

II.

461

INSTALLATION DU MICROSCOPE

Le microscope, tant saisi correctement, est sorti de son armoire


sur une table en face d'une fentre. Pour assurer sa stabilit et empcber qu'il ne glisse, il est bon de le poser sur une
plaque de feutre ou sur un cahier de papier Joseph. On visse
et plac

alors les objectifs sur le revolver, en ayant soin de les placer suivant l'ordre de leurs puissances. Il est bon de visser de suite

tous les objectifs, de faon les avoir sa disposition suivant les


besoins de l'observation Ceci fait, amener dans l'axe optique un
.

objectif faible.

Avant de placer

l'oculaire, rgler l'clairage,

comme

il

a t dit

plus haut (p. 42), en dirigeant le miroir vers la source lumineuse


et en mettant au point le condensateur. Complter l'clairage

aprs avoir introduit dans

le

tube un oculaire faible.

une fentre, de prfrence e?.'pos^e au nord, soit devant une lampe, avec ou sans
interposition d'une lentille condensatrice. viter avec soin les

Le microscope

doit tre install soit devant

rayons solaires directs qui sont dangereux pour la vue pourtant,


dans les pays temprs, on pourra tamiser les rayons solaires par
:

un rideau de cretonne blanche tissu trs serr; on obtient


une lumire diffuse qui peut remplacer celle des nuages.

LU.

ainsi

MISE AU POINT DU MICROSCOPE

Aprs avoir choisi un sige de hauteur convenable, permettant


de regarder sans fatigue dans le microscope vertical, on met une
prparation sur la platine. On doit avoir, au dbut, devant les
yeux, un petit tableau donnant les dislances frontales et le grossissement des objectifs. Avant de placer la prparation sur la
le tube du microscope, avec la
une
hauteur
crmaillre,
plus grande que la distance frontale
de l'objectif faible. Ceci fait et une portion bien visible l'il nu
de la prparation tant mise au centre de l'ouverture de la platine,
on applique l'il l'oculaire et on abaisse trs lentement le tube
au moyen de la crmaillre mouvement rapide. Ds que l'image

platine,

on a donc soin de relever

apparat,

mme

confuse, on quitte la crmaillre pour prendre le


lequel on parfait la mise au poinl.

mouvement micromtrique, avec


M. Langeron.

Prcis de Microscopie.

It

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

62
Il

faut avoir bien soin, lorsque la vis inicrom 'trique, ancienne

ou nouvelle, n'est pas vis sans fin, de toujours la tenir peu prs
au milieu de sa course' et de ne lui faire subir que des dplacements peu tendus. Si on la laisse arriver fond de course, on
s'expose soit ne pouvoir mettre au point, soit, en insistant,
arracher les filets, ce qui serait un grave dommage.
Si rimage n'apparat pas, le dbutant doit agir avec une grande

prudence pour ne pas heurter


le

exagrant

amener

l'objectif contre la prparation,

mouvement de descente du

le bris

de

la

prparation et

en

tube. Cet accident peut

endommager srieusement

la

rien n'apparat, s'assurer, en regardant


le microscope de ct, qu'on n'a pas dpass la limite de la distance fi'onlale. Si c'est le cas, il faut remonter le tube, pour
lentille frontale.

Donc,

recommencer ensuite

si

le

mouvement de

descente. Si rien n'appa-

faut dplacer lgrement la prparation,


pour l'amener exactement dans Taxe optique. Si la prparation ne
renferme que de rares lments trs loigns les uns des autres,
rat encore,

c'est qu'il

on peut chercher mettre au point, soit sur une bulle d"air, soit
le bord de la lamelle. On arrive ainsi trouver la distance
frontale de l'objectif faible et, en dplaant mthodiquement la
sur

tarde pas amener un des lments au milieu


prparation, on ne
du champ. En combinant ces mouvements, on arrive prompte-

ment

mettre au point avec l'objectif faible.

Grce au revolver, rien n'est plus

un

objectif plus puissant.

suffit

de tourner

le

Lorsqu?

revolver

et

le

facile alors

microscope

que de passer
est bien rgl,

de modifier lgrement

la

il

mise au

point avec la vis micromtrique.


En suivant ces indications, le dbutant est sr de ne jamais

endommager

ni ses prparations, ni ses objectifs. C'est d'ailleurs

marche que devrait suivre tout micrographe digne de ce nom.


Ds qu'on a un peu d'habitude, ces mouvements se font trs
la

vite

c'est

seulement en s'astreignant, des

le

dbut, les effec-

tuer qu'on apprendra faire l'examen mthodique d'une prparation. Combien de fois n'ai-je pas vu commencer examiner une
coupe avec un grossissement de 300 ou 400 diamtres, ou mme
avec l'objectif immersion! C'est ce manque de mthode
que sont dues les erreurs grossires qui tent certains toute

confiance dans les donnes du microscope.


1.

Pour

les

Au

contraire, en

com-

anciens microscopes, la vis micromtriquo est au milieu de sa course

lorsqu'on voit le prisme la base de la colonne sur une hauteur de 3

mm.

'

environ.

EMPLOI DU MICROSCOPE

163

la prparation avec un grossissement faible,


mise au point, on prend une vue d'ensemble de la
topograpbie de robjet et on centre sans difficult les points intressants. C'est alors qu'on entreprend l'examen de ces derniers

menanl rexamen de
on

la

facilite

avec

IV.

des objectifs plus puissants.

la srie

MISE AU POINT DES OBJECTIFS A IMMERSION

L'emploi de ces objectifs demande quelques mots d'explication,


car, pour les mettre au foyer, il ne suffit pas de tourner le
revolver. Il faut lout d'abord s'assurer, avec un objectif faible^

quil y a quelque chose dans


indispensable, car

il

immersion

objectifs

le

champ;

est trs difficile

cette prcaution est

de chercher

l'objet

avec les

cause de leur faible distance frontale

et

de l'troitesse de leur champ. L'objectif faible est d'ailleurs indispensable pour rgler l'clairage.

Donc, une

fois l'clairage et

l'objet

examiner bien centrs,

amener l'objeclif immersion dans l'axe optique,


puis dposer une goutte d'huile de cdre au milieu de la prparation. Cette huile sera autant que possible celle qui est fournie
relever le tube,

par le fabricant de l'objectif et dont l'indice de rfraction est calcul pour la correction des lentilles ^

Ceci

on abaisse

fait,

le

mouvement

tube avec le

rapide, en

microscope de ct, de manire amener la lentille


frontale en contact avec la goutte d'huile. Celle-ci doit avoir conregardant

le

ne faut donc pas attendre qu'elle se soit


prparation, sinon en remettre un peu. Ds que le
tabli, ce dont on s'aperroit immdiatement au chan-

serv sa convexit;

il

tale sur la

contact est

la goutte, on relve lgrement le tube, sans


cependant perdre le contact. On met alors l'il l'oculaire et on
abaisse trs lentement le tube avec le mouvement rapide; ds que

gement de forme de

l'image apparat,

mme

confuse, on achve

la

mise au point avec

la vis

micromtrique.
Lorsque l'observation

est

termine,

il

est

indispensable

de

mouvement

rapide, de manire loigner


la lentille frontale de la prparation. C'est seulement alors qu'on

relever

le

tube avec

le

pourra retirer cette dernire, sans craindre d'endommager Tob1.

p. 445 l'emploi de l'huile de paraffine et p. 83 celui de l'huile de ricin


huiles d'immersion.

Voir

comme

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

164

joclif par frottement contre la lamelle. Celte prcaution est tout


aussi ncessaire avec les forts objectifs sec.

Nettoyage des objectifs immersion.


vation est termine,

une

il

Ds que Fobser-

faut enlever Tluiile adhrente la lentille

mauvaise pratique que de laisser celte


huile se desscher d'un jour l'autre; on risque, en voulant l'esfrontale.

C'est

trs

suyer, de rayer la lentille ou de faire pntrer dans l'objectif une


du dissolvant qu'on est oblig d'employer en excs. 11 faut
donc essuyer doucement l'huile avec un peu de papier Joseph,
partie

puis achever le nettoyage avec un vieux linge trs lgrement


imbib de xylol ou de tolune. Ne jamais tremper l'extrmit de
c'est une pratique trs dangereuse,
l'objectif dans ces liquides
:

qui peut amener le dcollement des lentilles.


Je ne sais par suite de quelle aberration certaines personnes conseillent d'enlever l'huile de cdre avec de l'alcool. Ce liquide ne
dissout pas l'huile de cdre jiaissie, avec laquelle il forme un
pais prcipit blanc. Donc ne jamais employer d'alcool, mme

absolu, pour

V.

le

nettoyage des objectifs immersion.

CAUSES D'ERREUR DANS

LA MISE AU POINT

malgr toutes les prcautions, on


mettre l'image au point; cet accident se produit
surtout avec les objectifs forts et peut tre d deux causes (voir
Il

arrive quelquefois que,

n'arrive pas

plus haut, p. 157, les autres causes d'insuccs).


1 Le revolver est mal centr.
Dans ce cas on ne peut retrouver, au fort grossissement, un objet (jui avait t mis au milieu du

champ avec un grossissement

faible.

Cet accident se produit sur-

examine de trs petits organismes pars dans une


Dans
ce cas, pour obvier au dfaut de centrage, inhprparation.
rent aux revolvers les mieux construits, il faut reprer l'objet par
tout lorsqu'on

des centrages successifs, d'abord avec un objectif trs faible, puis


avec un moyen; on a bien des chances alors pour le retrouver

avec un objectif puissant. Ces centrages successifs permettent


aussi de voir de quelle quantit il faut dplacer la prparation pour
la

centrer dfinitivement, aprs le })assage d'un objectif faible un


fort. Les changeurs d'objectifs coulisse (p. 24) ont })our

numro

but d'obvier cet inconvnient.


2

La prparation

est retourne.

Ce

petit accident arrive

EMPLOI DU MICROSCOPE
beaucoup plus souvent qu'on ne
exercs;

il

croit et

se produit surtout avec les

rations au

baume bien

s'aperoit pas

sches.

de Terreur

et

Au

mme

165
des micrograplies

lames de sang
faible

on est tout

et les prpagrossissement on ne
tonn de ne pouvoir

mettre au point avec robjectif immersion ou mme avec un fort


En etel, partir d'un grossissement de 300 diaobjectif sec.

mtres environ, la distance fi'onlale des objectifs est trop courte


pour qu'on puisse mettre au point un objet plac sous une lame
mais on doit
porte-objet. Dans ce cas, il ne faut jamais insister,
relever de suite le tube et s'assurer que la prparation est bien
en-dessus. Gnralement, on constate alors qu'elle est

face

retourne. Pour viter ce dsagrment,

de vrifier avec

le

faut prendre l'habitude

il

doigt la saillie de la lamelle avant de poser la

en
prparation sur la platine. Pour les lames de sang, on s'assure,
regardant
en haut.

la

prparation par rflexion, que le ct mat est dirig

Il se
produit alors le mme
prparation est retourne. La lentille
frontale vient buter contre la lamelle et l'image n'apparat pas ou

La lamelle

est trop paisse.

phnomne que lorsque

la

reste confuse.

Cet accident est beaucoup moins frquent qu'autrefois, car les


frontale suffisante
objectifs, mme puissants, ont une dislance

pour empcher cet inconvnient. Les lamelles qu'on trouve actuellement dans le commerce ont aussi une paisseur plus rgulire.
Toutefois, lorsque la prparation est trs paisse,

qu'on ne puisse mettre au point


les objectifs actuels.

nuer abaisser

le

Il

les plans

il

profonds,

peut arriver
mme avec

faut bien se garder d'insister et de conti-

tube, car on serait certain de faire clater la

lamelle, d'craser l'objet et peut-tre de dtriorer irrmdiablement la lentille frontale. x\joulons qu'avec les nouveaux mouvements micromtriques le bris de la lamelle est beaucoup moins

craindre, car la vis cesse gnralement d'agir sur


l'objectif entre en contact avec la lamelle.

le

tube ds que

VI. MAN'UVRE DE LA VIS M C R O M ET R QU


ET OBSERVATION MICROSCOPIQUE
I

Pendant l'observation au microscope, un il


une main manuvre continuellement

l'oculaire,

est

appliqu
inicrom-

la vis

166

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

trique et l'autre dplace lentement


commande du chariot.

prparation au

la

moyen des

pignons de

Examinons successivement

rle

le

de

l'il

mains.
1

De quel il doit-on regarder au microscope?

et

le

Les

rle

des

avis sont

partags ce sujet la majorit des thoriciens pose en principe qu'on doit observerde Til gauche. On donne, comme raison
trs

de cette prfrence, que l'il droit doit rester


avec ou sans chambre claire.

libre

pour dessiner

En

pratique celte rgle est rarement observe. D'abord beaude


coup
personnes prouvent une grande difficult regarder au
microscope de l'il gauche plutt que de s'imposer la gne d'une
:

rducation, pnible surtout au dbut des tudes microscopiques,


on prfre naturellement observer avec l'il droit. Personnelle-

ment je suis dans ce cas et j'ai toujours travaill de l'il droit


j'estime donc qu'on peut observer indiffremment avec l'un ou
l'autre il, suivant la convenance personnelle. Ceux qui peuvent
:

travailler allernativement avec les

avantage qui leur permet d'viter


culaire.

deux yeux possdent un grand


de l'observation mono-

la fatigue

Je suis d'accord avec la plupart des


fermer un il ?
auteurs pour recommander d'observer au microscope avec les
deux yeux ouverts. Il est trs fatigant, pour une observation un
peu prolonge, de tenir un il ferm la contraction des muscles
2 Doit-on

pression exerce sur le globe de l'il d'autre part,


produisent promptement de la fatigue et mme de la douleur oculaire et de la cphalalgie. On peut trs bien s'habituer observer

d'une part,

la

avec les deux yeux ouverts; au bout de peu de temps on arrive


ne percevoir que les images fournies par l'il appliqu au microscope. Il est pourtant une condition essentielle, c'est que la table sur
laquelle repose l'instrument ne soit pas plus claire que le champ

optique; si donc cette table est blanche (lave maille) ou de couleur claire, il faudra la recouvrir d'un papier fonc ou noir. De
cette manire,
faible quantit

Filquine sert pas l'observation ne reoit qu'une


de rayons lumineux et fournit des images trop peu

claires pour pouvoir troubler la perception de l'autre il.

Ecrans oculaires.
Lorsqu'on doil faire des observations prolonges,
de forts grossissements, il est trs avantageux de protger les deux
yeux contre les rayons lumineux trangers, c'est--dire autres que ceux
qui proviennent du microscope. C'est dans ce but qu'ont t invents

EMPLOI DU MICROSCOPE

167

les crans oculaires S destins la fois empcher des images de se


former dans l'il qui n'observe pas et protger i'uil (jui observe contre
les rayons rflchis par la monture du microscope, ou provenant directement de la source lumineuse.
Le plus simple de ces crans peut tre excut avec une mince feuille
de carton noirci dcoupe suivant la forme indique par la figure 95. On
le
tube du microspasse
cope dans l'orifice circulaire.
L'chancrure sert introduire
le
nez.
Avec celte forme
d'cran trs simple on peut

dessiner

la

chambre

claire,

Fig,

95.

cran

Fig.

96.

Ecran

oculaire anglais.
oculaire. - Oripuisque tout un ct du microsginal.
cope reste libre
On trouve dans le commerce
des crans oculaires simples ou doubles. La figure 96 reprsente un cran
oculaire simple fabriqu par divers constructeurs anglais (Baker, Flatters
and Garnett, etc.); il est form
de deux pices mtalliques
"-.

un anneau qui emtube du microscope


et une paletle dont on rgle
la position suivant l'cartement des yeux.
Stiassnie fabrique un cran
double (fig. 97) recouvert de
peluche verte. Cet appareil
noircies

brasse

le

rv^/~y
Fig.

97.

cran oculaire

de

Stiassnie.

Original.

est trs commode et permet de regarder avec l'un ou l'autre il; son
seul dfaut est d'empcher le dessin la chambre claire, car il occupe
la fois les deux cts du microscope. On le fixe
au moyen de la bague sur le tube du microscope.

Ces crans oculaires, pour protger suffisamment


de la lumire trangre, ont besoin d'tre complts par un grand cran en carton noirci mont
sur un pied. Un moyen trs simple de fabriquer ces
crans consiste prendre un petit support entonnoirs en fer. Sur un des anneaux, qu'on a soin de
Grand
tourner verticalement, on fixe au moyen de fil de
Fig. 98.
cran mont sur
laiton une grande feuille de carton noirci ou recousupport en fer.
vert de papier noir 3. En dplaant l'anneau le long
Original.
de la tige verticale du support on rgle volont la
hauteur de l'cran. Je recommande vivement l'emune lumire
ploi d'un cran de ce genre, surtout lorsqu'on travaille avec
artificielle intense. 11 permet aussi, lorsqu'on dessine la chambre claire,
de rgler plus facilement l'clairage du papier. Des crans de ce genre,
surface plus ou moins courbe, existent dans le commerce.

Peisor, Ein Mikroskopierschirm. Ztschr. f. wiss. Mikr., XXI, p. 467, 1901.


Voici les dimensions de l'cran que j'emploie 16 cm. de longueur sur 9 cm. 5
de largeur. L'chancrure nasale a 2 cm. de largeur dans sa portion profonde,
elle s'vase ensuite progressivement. L'orifice circulaire est 5 mm. du bord
1.

2.

ne pas gner la chambre claire.


Dimensions de l'cran 30 sur 25 cent.

droit, de faon
3.

168

Li:

Manuvre

MICdOSCOPK ET SES ACCESSOIRES

de la vis micromtriqiie.

Nous avons

dj

mainles reprises que, pendant l'observation microscopique,


niain droite devait mouvoir conlinuellemenl la vis microm-

dit
la

Nous savons en effet que le microscope ne i)eut nous monnettement qu'un seul plan des objets, et mme, cause de
Tinvitable courbure du champ, nous ne pouvons pas voir avec
trique.
trer

nettet,

au

mme

solides

coupe,

les

instant,

toute

la

surface

de ce plan.

Or,

si

que nous examinons sont des corps


trois dimensions; mme lorsque nous tudions une
lments figurs qui la constituent prsentent une cer-

petits qu'ils soient,

les

objets

paisseur. Nous ne pouvons donc prendre connaissance de


et des rapports de ces
objets qu'en superposant, par la
toute
une
srie
de
])ense,
coupes oj>tiques que nous aurons perues
taine

la

forme

successivement en manuvrant

La

nettet

de celte

la vis

micromtrique.

perception peut tre assure

moyens la mise au point du systme optique


commodation de Wv'. Disons tout de suite que

par deux

pouvoir d'acce dernier ne doit


et le

absolument pas entrer en jeu dans l'observation microscopi^pie.


En effet, si la mise au point est insuffisante et si, par voie rflexe,
l'il s'efforce

d'y remdier par des modifications de sa courbure,

en rsulte rapidement une fatigue intense des muscles accommodateurs. Au contraire, en modifiant continuellement la mise au

il

point par la manceuvre de la vis micromtrique, l'il fonctionne


comme s'il tait au point sur l'infini, c'est--dire ({u'il donne sur

une image nette de l'objet, sans que son mcanisme


accommodateur soit mis en action.
Nous voyons donc que la mana^uvre continuelle de la vis
microm trique est ncessite par deux raisons

la rtine

au point successivement les diffrents plans de l'objet


de prendre connaissance de sa forme par la superposition de

1 Mettre
afin

coupes optiques infiniment minces;


2 Assurer la nettet de ces images rtiniennes successives,
sans que le mcanisme d'accommodation ait entrer enjeu.
Aussi ne saurait-on assez recommander aux dbutants la

manuvre

correcte

de

la

vis

micromtrique, car

c'est le

seul

d'observer sans fatigue, sans danger pour l'il et d'viter


les erreurs provenant d'une exploration insuffisante des
plans

moyen

successifs des objets.


4 Manuvre de la
platine mobile.
l'observateur, aprs avoir rgl l'clairage

La

main gauche de
au moyen de la cr-

EMPLOI DU MICROSCOPE
niaillre et

du diaphragme-iris, dplace

du double chariot de

la

platine mobile.

la

En

prparation, par fractions successives, d'avant en arrire

chaque fraction

69

prparation au moyen
principe on dplace la
(p. 14)

est tu-

die sur toute sa largeur

au moyen du

ment

latral.

dplacedfaut de

platine mobile, la prparation est saisie par ses

deux grands

cts, entre

pouce et l'index reposant sur la platine fixe,

le

le

Marche suivre pour parcourir mthodiqucmenl une prparation avec la platine

Fig. 99.

ciiariot.

mdius prenant un point

Original.

d'aipui

sous

la

On peut
en explorer

platine.

ainsi faire glisser la prparation sans trop d'-coups et

toute rtendue.

VII.

CHOIX DES OBJECTIFS ET DES OCULAIRES

Nous avons dit qu'on doit toujours examiner une prparation


avec une srie de grossissements d'abord faibles, puis de plus en
plus forts. Nous savons que l'image perd en tendue et en
mesure que le grossissement augmente. Cette
du
augmentation
grossissement doit tre obtenue au moyen
il est mauvais, en
principe,
d'objectifs dplus en plus puissants

clart au fur et

de chercher l'obtenir au moyen des oculaires. En effet l'oculaire


ne fait qu'agrandir l'image fournie par l'objectif plus l'oculaire
est fort, plus cette image perd en nettet, en clart et en tendue.
:

On

devra donc, pour

faibles et

moyens

et

courant, se contenter des oculaires


ne chercher augmenter le grossissement

le travail

qu'en employant des objectifs puissants. Les oculaires forts seront


rservs pour des cas particuliers il faut bien avoir prsent l'esprit ce fait qu'ils diminuent la dfinition et qu'ils n'augmentent pas
;

Nous avons dj dit plus haut (p. 71) que la grandeur de l'image fournie par une combinaison optique n'est pas une
preuve de sa valeur au point des pouvoirs rsolvant et dfinissant.

la rsolution.

CHAPITRE XV

DTERMINATION DES CONSTANTES


OPTIQUES DU MICROSCOPE
Sous

le

nom

de constantes optiques, on comprend

le grossisse-

distance frontale, la position des plans


d'ouverture
et enfin les pouvoirs dfinissant et
focaux, l'angle
rsolvant.

ment,

la distance focale, la

Nous

laisserons de ct la dtermination des distances focale et

frontale, des plans focaux et de l'angle d'ouverture, car il est trs


rare que le micrographe ait les effectuer. D'ailleurs, dans les

catalogues actuels des bonnes maisons de microscopes, ces donnes sont indiques avec prcision pour chaque objectif. Nous
nous contenterons donc d'tudier la dtermination pratique du

grossissement, ainsi que

la vrification

des pouvoirs dfinissant et

rsolvant.

I.

DTERMINATION DU GROSSISSEMENT

Le grossissement du microscope, pour un observateur donn,


exprim par le rapport entre le diamtre de Tobjet et le diamtre de l'image microscopique la distance minima de la vision

est

250 mm. Il est ncessaire de prciser ces


conditions car, de toute vidence, le grossissement dpend de la
distance laquelle est vue l'image virtuelle. Si cette image est

distincte, c'est--dire

recueillie sur l'oculaire

mme,

elle est trs petite; si elle est prise

au niveau de la table, elle est beaucoup plus tendue. On s'accorde


donc aujourd'hui pour a]>prcier le grossissement peu prs au
niveau de la platine du microscope, c'est - dire la distance de la
vision distincte, soit

250 mm.

Il

faut bien savoir

que

c'est seule-

DTERMINATION DES CONSTANTES OPTIQUES

171

ment dans ces conditions que les grossissements sont comparables.


Ce qui nous intresse, ce n'est pas le grossissement propre de
Tobjeclif, mais le grossissement total de la

combinaison

oculaire, afin de savoir dans quelles conditions

Ce grossissement

objectif-

nous travaillons.

donn par les constructeurs, dont


une
table indiquant, pour chaque
catalogues
objectif, le grossissement obtenu avec les divers oculaires. Mais
est toujours

renferment

les

ces chiffres sont forcment approximatifs, surtout en ce


qui concerne les objectifs forts, car ces derniers ne sont
jamais absolument identiques. Nous allons donc indiquer des procds simples
et rapides

pour dterminer le grossissement total du microscope.


il est bien entendu
que le grossissement doit tou-

Auparavant,

jours tre calcul pour une mme longueur de tube, 160 mm*, ou
170 mm. suivant les constructeurs. C'est une condition absolu-

ment indispensable pour que

les rsultats soient

comparables.

Pour les objectifs apochromatiques, combins avec les oculaires compensateurs, le grosisseraent est facile calculer; en effet le foyer infrieur de ces derniers tombe toujours au mme niveau, dans le tube du
microscope. Il en rsulte qu'avec les divers oculaires, l'image donne
par l'objectif a toujours les mmes dimensions. Il suffit donc, pour connatre le grossissement total, de multiplier le chiffre indiquant le grossissement propre de l'objectif par le numro de l'oculaire qui correspond
toujours au grossissement propre de ce dernier. Or le grossissement
propre d'un objectif est gal au quotient de la distance de la vision normale (250 mm) par la distance focale de cet objectif, calcule en millimlres. Soit un apochromat de 4 mm.; son grossissement propre sera
250
4 == 62,5. Si on combine cet objectif avec un oculaire compensa:

teur n

6, c'est--dire

binaison sera de 62,5

grossissant 6

fois, le

grossissement total de

X 6 = 375. Le mme calcul peut tre

la

com-

effectu avec

les objectifs achromatiques et les nouveaux oculaires


d'Huyghens, construits de manire ce que les foyers infrieurs soient tous la

mme

hauteur.

Ce procd trs simple ne peut tre employ pour les combinaisons


achromatiques et des anciens oculaires d'Huyghens. En effet,
le foyer infrieur de ces derniers ne tombe jamais au mme
point;
d'objectifs

aussi l'image relle fournie par l'objectif varie de dimensions, suivant


l'oculaire employ, ce qui rend le calcul beaucoup plus compliqu.

Nous

allons indiquer maintenant les procds empiriques qui


permettent, dans tous les cas, de connatre rapidement le grossis-

sement du microscope, pourvu qu'on opre toujours avec


longueur de tube.
1" Procd de

chambre

la

claire l'image

chambre

claire.

d'un micromtre-objectif

On
(p.

la

mme

dessine
179),

la

la dis-

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

172

250 mm. On

lance exacte de

a soin de tenir

tnalion de celte distance entre

11

d'il

et

la

la

chambre

claire,

comme

il

compte, dans Fvade papier, du

feuille

par les rayons lumineux entre

electu;''

trajet

chissantes de

les

surfaces rtl-

a t dit p.

129

(fig.

83).

va sans dire qu'on a eu soin de s'assurer, par une inclinaison

convenable dn plan du dessin, que le trac obtenu ne sera pas


dform. On dessine ainsi uncertain nombre de divisions du microobjectif, jiuis on mesure leur cartement sur le dessin avec
une rgle gradue en millimtres. Le rapport entre le chiffre ainsi
obtenu et Tcartement rel donne immdiatement le grossissement.
Au cas o la longuenr occupe par une division du micromtre ne
correspondrait pas un nombre entier de millimtres, il faudrait
mesurer un certain nombre de divisions, 2, 3, 4, jusqu' ce qu'on
trouve un nombre entier de millimtres. Alors, par une rgle de

mtre

trois,

on connatra

la

longueur exacte d'une division.

On

dtermi-

grossissement en mnllipliant par 100 le chiffre obtenu,


puisque les divisions reprsentent des centimes de millimtre.
Su})posons, par exemple, que 5 divisions micromtriques dessi-

nera

le

nes correspondent exactement 16 mm. une division mesurera


5
3 mm. 2 et le grossissement sera de 320. Si on
trouve immdiatement un nombre entier de millimtres pour

16

une

division,

lorsque, sur
est de 600.

il

le

suffira

de multiplier ce nombre par 100. Ainsi,


division vaut 6 mm. le grossissement

dessin, une

Pour les grossissements trs faibles, on peut se contenter de


dessiner une chelle ordinaire divise en millimtres ou en demimillimtres. Quelle que soit l'chelle employe, il faut avoir soin,
lorsque les traits sont fortement grossis, de dessiner le milieu de
ces traits ou

un de

leurs bords choisi toujours

du

mme

ct.

2 Procd du micromtre oculaire.


Ce procd, beaucoup moins prcis,
ne peut tre employ qu'avec le micromtre oculaire nmbile, dcrit
p. 184 (lig-. 109). 11 faut, en elet, que le grossissement puisse tre apprci
avec tous les oculaires et non pas seulement avec l'oculaire micromtrique, du type reprsent par la figure 108. On superpose les images des
deux divisions et on cherche combien une division du micromtre objectif recouvre de divisions du micromtre oculaire. Supposons que rchelle
de ce dernier reprsente des diximes de millimtre et soit grossie 10 fois,

ce qui est le cas des oculaires micromtriques courants. Une division


vue travers cet oculaire vaudra 1 mm. Pour connatre le grossissement, il suffira donc, dans ce cas, de multiplier par 100 le nombre de
divisions couvertes par une division du micromtre objectif. Je ne conseille pas cette mthode, car elle ncessite remploi de deux chelles et

DETERMINATION DES CONSTANTES OPTIOUES

173

connaissance exacte du grossissement du micromtre. Or cette dernii^re ne peut (Hre dtermine commodment qu' la chambre claire. Le
rsultat n'est ({u'approximatif et ne donne que des chiffres ronds, car il
est difficile d'valuer exactement une fraction de division du micromtre oculaire.
Ja

II.

VRIFICATION DU POUVOIR DFINISSANT

Nous savons que

le

pouvoir dfinissant, ou facult de fournir

des images parfaitement nettes, dpend en trs grande partie de


rdijectif, parce qu'il r.jsulte de la concidence plus ou moins
exacte des rayons lumineux qui ont travers ce dernier. La dfinilion est donc sous la dpendance troite de la correction des aberrations sphrique et chromatique. Aussi, la vrification
cope ce point de vue se ramne la vrification des

du micros-

objectifs.

En

pratique on se sert, pour cette vrification, soit du test


(PAbbe, soit de prparations repres et bien connues de l'observateur

l-^
Le test d'Abbe est un porte-objet sur lequel
Emploi du test d'Abbe.
sont colles une ou plusieurs lamelles argentes leur face infrieure;

dans

couche d'argent on a grav des groupes de lignes parallles


Comme la couche d'argent est extrmement mince, les bords
des traits constituent un test trs dlicat, mme pour les objectifs les
plus puissants. En effet la couche d'argent est compltement opaque,
aussi les stries paraissent-elles excessivement nettes, avec des bords
finement dentels qui permettent une mise au point
la

trs fines.

trs exacte.

Dans les tests plusieurs


lamelles (fig. 100), celles-ci
sont au nombre de six et
d'paisseur dilTrente,

me-

surant respectivement 90,


J20, loO, 180, 210 et 240 [x-

Dans

FifT.

100.

une seule lamelle

Test d'Abbe six lamelles.

celle-ci est longue et


son paisseur augmente
lgrement et progressivement d'une extrmit l'autre. Les deux faces
ne sont donc pas parallles, mais forment entre elles un angle trs aigu.
La valeur de l'paisseur est indiciue, en centimes de millimtre, par
une chelle trace sur la lame porte-objet. Cette chelle, qui varie
ncessairement un peu pour chaque test, commence aux environs de
Dans les deux sortes de tests, on
90 a et se termine au del de 200

les

tests

troite; elle

est

taille

de

telle

(fig.

sorte

101),

({ue

(j,.

trouve donc toutes les paisseurs correspondant aux lamelles du commerce et aux corrections des objectifs.
Examinons d'abord un objectif de y rande ouverture, muni d'un oculaire
fort, au point de vue de la correction sphrique. Il suflit de le mettre au

174

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

point sur les dilrentes parties du test et d'examiner, dans la partie cendu champ, la qualit des images, en se servant alternativement
de l'clairage central et de l'clairage oblique. Nous avons vu, en tudiant l'appareil d'clairage (p. 29), qu'on produit l'clairage oblique en

trale

dcentrant le porte-diaphragme au moyen d'un pignon particulier ce


dplacement doit tre fait perpendiculairement aux lignes du test. On
s'assure de la direction des rayons lumineux et de l'ouverture du cne
clairant, en enlevant l'oculaire et en examinant dans le tube la rpartition de la lumire. Toute l'ouverture de robjectii' doit d'abord tre
claire; on diaphragme un peu ensuite, si c'est ncessaire.
Si l'aberration sphricjue est parfaitement corrige, pour une paisseur
de lamelle correspondant un endroit donn du test, les stries doivent
rester parfaitement nettes, dans la partie centrale du champ, sans bords
:

Abk's
Test-Platte

DTERMINATION DES CONSTANTES OPTIQUES

175

ne dpend plus uniquement de la correction des aberrations. Elle est


alors influence par les diffrences de grossissement entre les difrentes
zones de l'objectif. C'est ce qu'on a dsign, bien tort, sous le nom de
dfauts de courbure. Nous avons vu plus haut (p. 57) que les meilleurs
objectifs ne peuvent tre exempts de ces dfauts lorsque leur ouverture
est grande.
Ces expriences dmontrent de

numrique

de la dfinition

la

faon la plus nette que la qualit


valeur des corrections.

est proportionnelle la

dWbbe, on pourra se servir, pour apprcier


des objectifs, de prparations prsentant des dtails
Chacun les choisira suivant les tudes particulires

dfaut des tests

la dfinition

trs

fins.

les poils de Souris,


Citons par exemple
vaisseaux
des
les traches des
des
Conifres,
ponctuations
Insectes, les fibres musculaires stries des Insectes ou des Vert-

auxquelles

se livre.

il

les

ailes des Moustiques, les cailles des ailes


carapaces de Diatomes ornements bien
dfinis, les granulations des leucocytes, les Trypanosomes ou les

brs, les cailles des

de Papillons ou

parasites

les

du paludisme colors au Romanovsky, les Infusoires


le formol, etc. Personnellement, pour prouver la

conservs dans

dfinition des objectifs, j'examine successivement les cailles des


ailes du Ciilex pipiens, les traches du siphon des larves de

Culex^le tout mont au baume, puis un 7'n/panosoma Lewisi ou


Brucei et un Plasmocliumvivax colors au Romanovsky, et enfin

un Infusoire,de prfrence

le

Balanlidium

coli,

conserv dans

le

formol.

On

doit distinguer avec la plus

grande nettet les stries des


de Culex; les tours de spires des traches du

cailles des ailes

siphon de

la

larve

le

blpharoplaste, le noyau et

de

les

Schffner du

granulations
Trypanosome,
vivax, les stries longitudinales hrisses de

cils

le

flagelle

du

Plasmodium

du Balantidium.

m. VRIFICATION DU POUVOIR RSOLVANT


Nous savons

(p.

58) que

les objectifs

le pouvoir rsolvant est la proprit


de montrer les dtaifs des fines struc-

que possdent
tures, par exemple de permettre de distinguer nettement les unes
des autres des stries trs dlicates. Nous avons vu que ce pouvoir
tait directement proportionnel l'ouverture numrique; mais,
bien entendu,

il

dpend aussi de

aussi faut-il savoir

exclusivement

la

le

la

perfection des corrections,


sans s'en rapporter

vrifier pratiquement,

valeur de l'ouverture.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

17f>

On se sert pourcela, soil


soit

(le

d'un

en res})ce les plaques


gnralement une Dialome de
prsentant des stries d'une grande finesse.
truii tesl artificiel,

test naturel,

Nobert,
structure trs dlicate et

Les plaques de Nobert sont des porte-objets sur lesquels le constructeur traait 19 systmes de raies, distantes, pour le premier systme, de
un millime de ligne (2 [x 23) et, pour le dernier, un dix-millime de
ligne (0 [X 22). Dans les derniers systmes, les raies sont donc si rapproches qu'on n'arrive pas les distinguer nettement, mme avec les plus
forts objectifs. Nous n'insisterons pas sur ce genre de
test dont l'emploi ne saurait tre courant.

Les

tests naturels les

plus faciles se procurer

plus frquemment employs sont les cailles


des ailes de V Epinephele janira et surtout,
parmi les Diatomes, Pleurosigma angidatum
et Surirelln gemma. Il est rare que les constructeurs ne livrent pas avec le microscope une pret les

paration

de

Pleurosigma
suivant

la

ou

puissance

de

Surirella^

des

objectifs.

1" Epinephele janira.


On choisit de
prfrence des cailles de la femelle,
qui conviennent pour prouver peu
prs tous les grossissements. A 50 diamtres, on doit percevoir des stries
longitudinales (fig. 102, i) dont l'cartement est d'environ 2 a; 300 diamtres,
ticaille de l'aile de
ces stries sont devenues de larges lignes,
Fig. 10-2.
V Epinephele jftnira. 1, x^O;
entre
on voit apparatre
lesquelles
300
1000.
X
X
3,
2,
(fig. 102, 2) de trs fines stries transversales distantes de 1
environ;
800 ou lOJO diamtres, les stries longitudinales forment de larges bandes
obscures, sur lesciuelles se dtachent des corpuscules arrondis; les stries
transversales apparaissent comme des lignes doubles, spares par des
ranges de corpuscules arrondis aux angles et contigus (fig. 102, 3). En
lumire oblique, ces derniers corpuscules donnent l'impression d'autres
stries longitudinales. Les stries longitudinales correspondent au premier
groupe de Nobert et les stries transversales au quatrime.

\).

Ce

test, qui correspond au huitime


groupe de Nobert, convient pour les grossissements de 200 diamtres et au-dessus. On doit voir trois systmes de stries (fig. 103).
Le premier systme est perpendiculaire la nervure mdiane

2" Pleurosigma angulatum.

les

deux autres sont obliques par rapport

verses

TuR par rapport

Tautre

et

se

cette nervure, in-

croisent sous

un angle

DTERMINATION DES CONSTANTES OPTIQUES


d'environ 08. Ces stries sont distantes d'environ

;j.,

177

Avec un

3.

donnant 500 diamtres, on ne voit bien ces trois systmes qu'en employant l'clairage oblique. Avec un bon objectif
immersion, on doit arriver
objectif sec

les rsoudre avec l'clai-

rage central.

En ralit, la carapace
de ces Diatomes parat,

un

trs

fort

grossisse-

ment, couverte de perles


rondes et brillantes, qui
correspondent probablement des cavits. C'est
l'ordonnance rgulire de
ces perles qui

donne aux

les

sparent
l'apparence de stries. Les
espaces qui

perles paraissent brillantes


ou obscures suivant qu'on

relve

ou

abaisse

qu'on

rol)jectif.

3 Surirella

Cette

gemma.

dont

la

Diatome,

structure est extrmement


dlicate, ne convient

que
pour l'examen des objectifs immersion. A un faible
grossissement

(fig.

104),

on aperoit une nervure


mdiane, de chaque ct
de laquelle partent des nervures

transversales

irrFig.

gulirement disposes.
Entre ces nervures et

elles

103.

Pleuro-

Fig.

104.

Surirella

gemma.

sigma

angiclatum.
Original.

se

paralllement
trouvent de trs fines lignes transversales, distantes d'environ
a 44. Avec les plus forts objectifs, ces stries se rsolvent

en ranges de perles ovales, mesurant

lumire

oblique,

mdiane, on

dirige

voit apparatre,

M. Langeron.

[x

perpendiculairement
en outre, de trs fines

Prcis de Microscopie.

a 38. En

44 sur
la

nervure

stries longi-

12

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

178

liulinales assez irrgulircs.

Cette apparence est due ce que les

perles sont ordonnes suivant le sens transversal, mais non suivant


le sens longitudinal. Le Surlrella gemma correspond, comme
difficult de rsolution,

au dixime groupe des plaques de Nobert.


(jue les objectifs forts ne doivent

Remarquons, pour terminer,


pas tre apprcis au

Pour

mme

point de vue que les objectifs faibles.

au pouvoir rsolvant,
par consquent cboisir parmi les objectifs grande ouverture
numrique. On peut dire en quebjue sorte Tinverse des objectifs
les

premiers,

il

faut surtout s'attacber

leur ouverture

numrique est trop considrable, lesavons


nous
que
signals p. 57 pour la zone marginale
deviennent trs apparents. D'ailleurs, pour ces objectifs de faible
faibles

si

dfauts

puissance, le pouvoir rsolvant a beaucoup moins d'importance.


Certains constructeurs, par exemple Zeiss, fabriquent deux sries
d'objectifs sec possdant des ouvertures numriques diffrentes

(A et AA, D et DD); il y a quelquefois avantage, pour le travail


courant, choisir ceux dont l'ouverture numrique est plus faible.

IV. VRIFICATION DE L'TENDUE


ET DE LA PLANIT DU CHAMP ET DES
DFORMATIONS DE L'IMAGE

L'tendue du champ dpend en grande partie de l'oculaire. La


courbure du champ ne peut pas tre totalement supprime tant
que ce dfaut ne dpasse pas certaines limites, il prsente peu
:

d'inconvnients; il suffit, pour y remdier, de faire varier la mise


au point. Un dfaut beaucoup plus grave est la dformation de
l'image dans la zone marginale pour vrifier un microscope ce
point de vue, il faut examiner, avec les divers objectifs, un micro:

mtre quadrill ou un micromtre ordinaire. Les traits doivent


on est oblig de
rester parallles sur toute l'tendue du champ
mettre au point successivement la zone centrale et la zone mar:

ginale, mais le paralllisme ne doit pas tre altr. Si on constate


une dformation, celle-ci peut tre due soit l'objectif, soit l'oculaire, soit tous

deux.

CHAPITRE XVI

MENSURATIONS MICROSCOPIQUES
Les mensurations microscopifjues peuvent s'appliquer aux trois
dimensions des objets et Tvaluation de leurs angles. Nous n'tudierons ici que la dtermination des trois dimensions des objets,
c'est--dire les mensurations dans un plan horizontal et dans les
plans parallles Taxe du microscope. Nous laisserons compltement de ct la mesure des angles, qui est exceptionnelle au cours
des recherches biologiques et qui ncessite des appareils parti-

culiers.

I.

MENSURATION DANS UN PLAN HORIZONTAL

mensurations microscopiques ne
directement, c'est--dire en superposant une
rgle gradue l'objet mesurer. On les pratique d'une manire
indirecte, en comparant une chelle type l'objet, par l'interm11

est

bien vident que les

peuvent tre

faites

diaire d'un dessin

ou d'une autre chelle

est variable suivant le grossissement.

arbitraire, dont la valeur

Nous

allons tudier succes-

sivement ces diverses mthodes de mensuration.


L'talon-type, qui est la base de toutes les mesures microscopiques, est le micromtre objectif. C'est une lame de verre de la
dimension d'un porte-obje-t, sur laquelle une longueur de 1 mm.
a t divise en

100

parties,

graphis. Ces traits sont

centime de

au moyen de

traits

gravs ou photo-

donc spars par un espace gal un

mm. ou 10

millimes de

mm. Comme

l'unit de

micron ou millime de mm.,


la
lettre
qu'on dsigne par
grecque a, l'intervalle qui spare deux
divisions est donc ofal 10 microns ou 10 a.
mesure, en micrographie,

est le

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

180

Les micromtres gravs au diamant sur verre prsentent plus


de garanties d'exactitude que les micromtres pliotographis,
mais ils ont l'inconvnient d'tre presque invisibles sous l'huile

d'immersion, lorsque
matire colore.

les

divisions

ne sont pas remplies d'une

A dfaut de micromtre, on peut employer les chambres gradues des compte-globules, dont les divisions sont gnralement
distantes de un dixime de millimtre ou 100 a. On peut aussi
comme

prendre
connues

et

talon

invariables,

l'Homme, dont

le

un
tel

objet

que

microscopique de dimensions
globule rouge du sang de

le

diamtre est de 7 8 a, mais

obtenues sont toujours approximatives.

mesures

les

ainsi

1 Procd de la chambre claire.


L'objet mesurer est
dessin autant que possible un fort grossissement, de manire
rendre l'approximation plus exacte. On a soin de prendre toutes

prcautions indiques p. 130, de manire ce que le dessin ne


pas dform. Une fois celui-ci effectu, on remplace la prparation par le micromtre objectif dont on dessine quelques divi-

les

soit

sions, aussi

exactement

exactement que possible, en s'attachant relever bien


milieu des traits ou un de leurs cts, toujours le

le

mme.
Pour

effectuer la

mensuration,

il

suffit

de comparer l'chelle

dessine au dessin de l'objet, soit par superposition directe, soit au

moyen d'un compas.


Le procd par superposition ncessite

la confection pralable

les combinaisons
toutes
correspondant
d'objectifs et d'oculaires. On les dessine sur le bord d'une lan-

d'une

srie d'chelles,

guette de bristol fort ou on les reporte sur verre, soit l'aide d'encre
de Chine silicate, soit, ce qui est beaucoup mieux, avec un dia crire. On remplit les traits du diamant avec de l'encre et
recouvre d'une goutte de baume et d'un couvre- objet. En
employant les chelles sur verre, il faut avoir soin de superposer

mant

on

au dessin
la

le ct

du couvre-objet,

afin d'viter les erreurs

dues

rfraction.

Le procd du compas ne ncessite pas absolument


de ces chelles, puisqu'il suffit de prendre
l'objet dessin et de comparer ce diamtre
tion

le

la

confec-

diamtre de

l'chelle

des-

sine.

Dans
qu'

l'un et l'autre cas, les divisions obtenues ne


correspondent
Pour obtenir la valeur en

des centimes de millimtre.

MENSURATIONS MICROSCOPIQUES
microns,

faut

il

se servir d'une

181

formule ou d'une chelle frac-

tionne.

de

La formule ncessite la dtermination du grossissement par la mthode


la chambre claire (p. 171) et la confeclion du dessin la mme hau-

mme tirage de tube. Connaissant le grossissement de


combinaison optique et le diamtre en millimtres du dessin obtenu,
suffit de diviser ce diamtre par le grossissement pour connatre le

teur et avec le
la
il

(^

50

10

100

150

250

200

300

Exemple d'chelle pour un grossissement de 300 diamtres.


et mesure 3 mm.
Oriyinal.
Chajue division vaut 10

Fig. 105.

;jl

diamtre rel. Supposons qu'un lment, dessin un grossissement


de 500 diamtres, ait un diamtre de 6 mm., son diamtre rel sera
6

500

mm.

012

= 12

u..

Vchelle fractionne permet, au moyeu du compas, de dterminer directement le diamtre rel, avec une approximation qui
dpend de la consti'uction de Tchelle. Voici comment on peut
construire cette chelle fractionne.
lo

sion

On prend pour ordonne (fig. 106) ox, la longueur d'une dividu micromtre dessine avec une comhinaison optique donne.

JS-"

Fig. 106.

chelle fractionne pour un grossissement de 1000 diamtres.


ox et o'a ont un centimtre et valent 10 ;a.

ax sera d'autant plus longue que l'approximation


cherche sera plus exacte. Prenons une abscisse de 10 cm., divise
en centimtres et en millimtres, puis traons la diagonale o'x.
L'abscisse

Gomme

l'ordonne ox correspond un centime de millimtre ou

l'chelle, correspondant un centimtre,


permettra d'valuer sur le dessin une longueur correspondant
1 [K et chaque millimtre une longueur correspondant i dixime
de a (0 ai). Supposons, par exemple, que le diamtre d'un l-

10

(x,

chaque division de

ment, mesur au compas, concide exactement avec la hauteur de


coordonne n*^ 7, cet objet aura un diamtre de 7 ;x; si le dia-

la

mtre

est

compris entre

les

coordonnes 7

et 8,

on peut l'valuer

LE MICllOSCUPE ET SES ACCESSOIRES

182

moyen d'nne

chelle millimtriqne,
sur notre chelle, d'valner
une appro.ximalion de un demi-micron. En doublant la longueur
de Tabscisse, on aurait une a}tproximation encore plus prcise.
Pour effectuer une mesure, on suit Tabscisse ax avec une des

en diximes de micron, an
mais il snlil gnralemeni,

comme

compas et on s'arrte lorsque Tantre pointe concide


exactement avec un point de la diagonale; il suffit alors de lire le
chiffre de la coordonne la plus voisine.
2 l*our les trs forts grossissements on peut dessiner une

pointes du

chelle

(tig.

107), permettant de mesurer jusqu' l'approximation

9
8
7
6
5
3

2
1
.

au

ce

o.c et
Echelle fractionne pour un grossissement de 2000 diamtres.
Fig. 107.
a ont deux centimtres et valent 10 ;a. Les fractions de ox et de o a valent
1
;x; les fractions de ax et de oo' valent
;/,l.

mm. OOOUo), sans


05 ou
une abscisse Iroj) longue. Pour cela, au lieu de tracer une
seule diagonale, on divise les ordonnes ox et o', reprsentant
mm. 01, en 10 parties, correspondant chacune nn micron, puis
on trace les 10 diagonales. L'abscisse sera divise en centimtres

de un demi-dixime de micron (0

;j.

avoir

ou en demi-centimtres de faron permettre d'valuer commodment la moiti de rintcrvalle entre deux coordonnes. Pour effectuer une mesure, on relve au compas le diamtre de l'lment
dessin, puis, comme prcdemment, on applique une des pointes

du compas au

point as*; la position de Taulre pointe, sur l'ordonne


ox^ donne immdiatement le nombre de microns. Pour connatre

les

fractions

s'arrter

de micron,

quand

il

l'autre })ointe

On lit alors le
comme prcdemment, que
de

la

diagonale.

suffit

de

suivre l'abscisse

ax

et

de

du comj)as concide avec un point


chiffre
la

de

i)oinle

la

coordonne. Su}q30sons,

du compas tombe sur

la

MENSURATIONS MICROSCOPIQUES

183

entre les divisions 7 et 8. Nous suivons Fabscisseavec

Ja
ligne o.r,
pointe infrieure et nous nous arrtons quand la pointe suprieure
rencontre la diagonale n 7. Si cette rencontre a lieu au niveau

de

la

coordonne n"

diamtre rel est de 7 a 6; si la renle diamtre rel est de

6, le

contre a lieu entre les coordonnes 6 et 7,


7

[X

65.

Dans

divisions de

la

ox correspond 10 a et chacune des


ax est divise en 10 parties, cora 1 la moiti de chacune de ces divi-

figure 107,

oxk

1 a; Tabscisse

respondant chacune
u. 05
sions vau t

Quelle que
rations

soit la

dpend de

la

mthode employe, Texactitude des mensuprcision avec laquelle le dessin de l'objet


Il faut donc avoir soin
d'employer

de Tchelle aura t excut.

et

un crayon
tracer

trs

que des

dur,
traits

taill

en pointe

de manire ne

trs fine,

dhcats.

Lorsqu'on a beaucoup de mesures effectuer,


tous les dessins avec la

mme

faudra excuter

il

longueur de tube

hauteur; on pourra alors se servir avec avantage,

et

la

soit

du

mme
calcul,

des chelles fractionnes. Toutefois il suffit, sans autre prcaution, de reproduire, au coin de chaque dessin, quelques divisions du micromtre pour pouvoir ultrieurement mesurer les
soit

objets et dterminer le grossissement

du dessin, sans qu'on

ait

s'occuper de la longueur (hi lubc et de la hauteur laquelle le


dessin a t pris. Le grossissement obtenu dans ce cas n'est pas
celui

du microscope,

tel

([ue

nous l'avons

dfini p. 170, mais sim-

plement celui du dessin, pour une longueur de tube

et

une hau-

teur quelconque, puisqu'on n'a pas pris les prcautions que nous

avons indiques, en traitant de

au moyen de

la

chambre

la

dterminalion du grossissement

claire.

Pour viter Tcnnui de ritrer exactement


250 mm. chaque fois (ju'on excute un dessin,

la
il

dislance
est

de

beaucoup

plus simple de dessiner une hauteur quelconque et toujours la

mme, par exemple au niveau de

la platine ou de la table, et de
relever chaque fois l'chelle micromlrique. Cette opration ne
prend que quelques instants et donne toute garantie pour l'appr-

ciation de la dimension des objets dessins. De mme, tout dessin


publi devrait tre accompagn d'une chelle, indiquant au moins
la

longueur correspondant 10 u.. Beaucoup d'auteurs croient


en indiquant les numros de la combinaison optique

tre prcis

employe pour excuter le dessin. En ralit ce renseignement


aucune valeur
non seulement il oblige le lecteur, s'il veut

n'a

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

184

connatre le grossissement, se reporter au catalogue du construcsont tout fait


teur, mais encore les indications ainsi obtenues

des catalogues sont gnralement


approximatives, car les tables
leur
En
supposant mme une exactitude suffisante,
peu prcises.

on n'a pas dessin avec la lonpeuvent tre inutilisables si


et la hauteur voulue. Combien de fois n'arrive-t-il
le tube ou que, faute de temps et de
pas qu'on oublie de tirer
on
dessine
matriel,
simplement au niveau de la table. Le plus sr

elles

gueur du tube

est

donc, pour viter tout calcul et aussi toute indication insuffisante, de figurer une portion du micromtre
sur

to.us les

Le procd de menchambre claire est le seul

dessins.

suration la

qui donne des rsultats prcis, lorsqu'il


mesurer des lignes courbes ou
s'agit de

des corps filiformes et enrouls.


luation de la longueur se fera au

L'va-

moyen

d'un compas ou d'un bon curvimlre,


que ceux qui servent mesurer les

tels

dis-

tances sur les caries lopographiques.


2 Procd de rociilaire microm-

trique.
Fiff.

Oculaire

108.

La mthode de

plus simple

et

la

mensuration

la

plus rapide consiste

employer l'oculaire micromlrique. Cet instrument (fig. 108) est un oculaire d'Hiiyghens ou un oculaire compensateur dans lequel, la place du diaphragme, se trouve une chelle gradue. Nous savons qu'en ce point
se forme l'image fournie par la lentille collectrice (p. 94 et fig. 59)
micromtiique.

l'image de l'objet
mme temps sur

et

du micromtre se projettent donc en

celle

la rtine

de l'observateur, mais avec des gros-

sissements diffrents. Les divisions de l'chelle mesurent gnralement un dixime de millimtre. La lentille oculaire est monte

un tube frotteaient, de manire


ment au point sur l'chelle.

sui"

pouvoir tre mise exacte-

L'oculaire micromtrique peut encore tre ralis d'une faon


plus simple on se sert pour cela du micromtre oculaire (fig. 109),
petite lame de verre ronde, portant la division micromtrique. On
:

introduit cette lame, face en dessous, dans l'oculaire, aprs avoir


dviss la lentille suprieure. Elle vient reposer sur le diaphragme.

Au

cas

l'chelle

ne

serait

pas vue distinctement, on peut


nombre de tours.

dvisser la lentille oculaire d'un certain

185

MENSURATIONS MICROSCOPIQUES
Il

avons-nous dit, de tourner vers l'objectif le


du micromtre. Autrement, les stries pourraient paratre

est ncessaire,

ct grav

doubles, par suite de rflexions la surface de


lame. En outre, la rfraction travers celte
lame n'aurait plus la mme valeur pour les

la

rayons qui forment Timage de Tobjet et celle


du micromtre, ce qui nuirait l'exactitude
Il faut donc, lors de Tusage
de ce micromtre ou lors du dmontage d'un

des mensurations.

soit

Quel que

le

micromtre employ,

objectif, la va-

chaque

109.

Fig.

Micro-

mtre oculaire.

oculaire micromtrique, avoir bien soin de placer


le ct grav du micromtre face en dessous.

faut tablir,

il

M^

sif-<>s*i*f>n>**'t'?-5

>

>

pour

bi<<K;M*:.i.l jA. ^slg*'

leur en microns d'une


-4VA^AwW'tvvi^jt*.>+<-*>*ff^^*r**''***^*>-MV'**^

division

de

l'chelle.

Si on se sert

*Wj V -^<^!^^^>^^M-

^tefW^^^M!^^V^^'^ ^i

du

petit

micromtre amovible,
il faut dterminer cette

aBTfjW-HJliC''^

tnavVff<i>W>S^'<*t>>*<*<* rr i it W fc:.>< *

valeur

pour chaque
combinaison d'oculaires et d'objectifs. Pour

!.<'/H-'>VlWt<W<!fiJ^fri<|J- < ?> Ji V' M h ijag;;;^


'

Fig.

ce faire, on installe le

micromtre objectif sur


la

platine
cope et on

110.

Aspect des

deux chelles microm-

triques superposes, un grossissement de


700 diara. 7 divisions du micromtre oculaire correspondent ? divisions (20 x) du micromtre

du microsmet au point

objectif.

Le

coefficient sera 2

857.

;ji.

de manire superposer les images des deux chelles


et 111). On cherche
7^j.yf^'^tjft%^

Original.

(fig.

110

zz^z

combien de divisions
du micromtre objectif

'!/t^ie^K*}^<^*^'^^^^^^M^t

sont recouvertes exac-

tement par une ou pludu mi-

^^j^ift^f^iii^j^z^i^

sieurs divisions

cromtre oculaire.
doit

On

Fig. 111.
Aspect des deux chelles micromgrossissement de
triques superposes, un
1200 diam. 6 divisions du micromtre oculaire
correspondent 1 division (10 ;x) du micromtre

tablir la conci-

dence

des

traits

du

micromtre oculaire
avec

le

milieu des

du micromtre objectif
ou avec un de leurs
plus

le

grossissement

666. Remarquer
Le coefficient sera
concidence de l'chelle oculaire avec le milieu
des traits de l'chelle objective.
Original.
1

objectif.

la

traits

bords,

est

;j.

toujours

considrable,

le

mme.

plus ces

En

traits

effet,

parais-

LE MICIIOSCOI'E ET SES ACCESSOIRES

186
seul rpais. Il
oculaire (|ui

des

rails

objectif

du

n"

5,

l'aiil

donc

choisir ceux

des

exactement

concident

micromtre

Si,

objectif.

micromtre oculau-e vaudra

sions

pour chaque

des objets

relles

du micromtre

mm.

divis en 100 par01), une division du

=0 mm.
^

rA"
UUo

inkromtrique. La

par

le

le

=o
"

a.

Le

dimensions

nombre de

coefficient

r*

table de ces

calculer les

de multiplier

oculaire

moyenne

exemple, avec un
oculaire recouvrent

jry

objectif sert

suffit

il

microiulre

partie

objectif,

mm. Do

chiffre constitue le coefficient

coeflicienls

la

par

10 divisions du micromtre

exactement 5 divisions du micromtre


lies de 1 centime de millimtre (0

du

traits

avec

de

divi-

l'objectif

employ.

On peut encore se servir du grossissement des diverses combinaisons


suffit alors
optiques, lorsque celui-ci a t dtermin avec prcision. 11
de dterminer la valeur d'une division au moyen du micromtre objectif
pour un seul objectif. On calcule les coefficients des autres objectifs en
sachant qu'ils sont inverses du grossissement. Soit 4 y. 8 le coefficient
trouv pour un objectif. Pour un autre systme grossissant 2,5 fois
autant que

le

premier,

le

coefficient micromtn(iue sera .t^

1
[j.

90.

mthode est moins sre que la prcdente.


Ces coefficients sont utilisables pour un observateur quelconque, car
le dplacement de la lentille oculaire, ncessaire pour mettre au point
de
l'image de l'chelle, ne modifie pas le rapport entre le grossissement
de
l'objet et celui du micromtre. En effet, ce rapport ne dpend que
la longueur du tube du microscope, pourvu que la dislance entre la
collectrice et Tchelle reste constante. Aussi faut-il rejeter tout systme
de mise au point de Tchelle bas sur le dplacement vertical de celte
dernire, car on aurait alors des variations continuelles dans le rapport
des grossissements du microscope et du micromtre.
Cette

Pour
])ar

faire

une mensuration, on remplace l'oculaire ordinaire

Foculaire micromlrique et on cherche combien de divisions

correspond la longueur, la largeur ou le diamtre de Tobjel


mesurer. Il ne reste })lus qu' multiplier ce nombre de divisions

par le coefficient micromtrique trouv pour l'objectif employ.


Bien entendu, il faut toujours oprer avec la mme longueur de
tube.

Pour

faciliter les calculs, je

recommande

d'tablir

une

fois

pour toutes une table donnant, pour chaque objectif, les valeurs
de 1 10 divisions du micromtre oculaire. Si on fait les mensurations au moyen du micromtre oculaire amovible, on fera autant
de tables qu'on possdera d'oculaires.

MEXSURATIONS MICROSCOPIQUES
Exemple d'un tableau donnant les valeurs
micromtriques pour 1 9 divisions du micromtre

187

oculaire.

LE xMICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

188

avons indique, car les


des diffrences inditoujours
prsentent
viduelles qui intluent sur la valeur micromtrique.
suivant la mthode que nous

objectif,

objectifs et les oculaires

La mtliode du micromtre oculaire o.sL rapide et commode; elle


fournit des rsultats trs exacts, pourvu qu'on ait soin de se conformer
aux prescriptions que nous venons de formuler, do ne pratiquer les
mensurations qu'au milieu du champ et de surveiller rig-oureusement
la mise au point des objets, ainsi que le contact de leurs bords avec les
a propos
divisions de l'chelle. Pour faciliter ce contact, Gebhardt
les traits sont reml'emploi d'chelles micromtriques dans lesquelles
manire se toucher par leurs
placs par de petits carrs, placs de

angles

AAA

AA.A.A

A.A.A.

^^^^^^^P^^^P^^^P^r^^
Fig.

chelle micromtrique
de Gebliardt.

11-2.

(flg.

112).

Cet

permet d'valuer sans

artifice

difficult

valeur d'un demi-intervalle


entre deux divisions. 11 double
donc la prcision du microla

mtre. En outre, lorsqu'il s'agit


de mesurer des objets incolores
ou de dterminer l'cartemenl de stries trs dlicates, cette chelle est
beaucoup plus visible que celles (jui sont formes de traits parallles
Ces micromtres sont fabriqus par Zeiss.

L'exactitude des mensurations est proportionnelle au grossisdu microscope. En effet, plus Fimage de Tobjet est grande,
de faire concider exactement les divisions du
il est facile
plus
micromtre avec les bords de cette image et plus les erreurs de
seliient

lecture deviennent petites.


laire

amovible prsente

d'oculaires

Tobjet

et,

trs

forts

ce point de vue, le micromtre ocu-

grand avantage de permettre l'emploi


qui, d'une part, grossissent l'image de

d'autre pari,

le

augmentent l'tendue des divisions de

On

peut alors apprcier plus facilement les fractions


de ces divisions. Il est mme possible, dans ce cas, d'tablir la

l'chelle.

chambre claire des chelles fractionnes, analogues celles que


nous avons conseilles pour l'emploi du micromtre objectif.
la lecture directe les subdivisions de
vient de proposer tout rcemment un oculaire micromtrique vernier intrieur. C'est, comme toujours, un vernier au 10",
grav sur la face infrieure d'une lame glissant sur celle de l'chelle

Pour permettre d'apprcier

l'chelle, Vls

Le mouvement se produit au moyen d'une vis de commande et


d'un ressort antagoniste. D'aprs l'auteur, cet instrument est plus prcis
que les oculaires tambour et son maniement est beaucoup plus rapide.
fixe.

1. Gebhardt, Ueber neue leicht sichtbare Mikromotcrteilungen, Ztschr. f. wiss.


Mikr., XXIV, p. 366-369, 1907.
2. F. Vls, Sur un micromtre oculaire vernier intrieur. C. B. Soc. bioL,

LXXVII,

p. 537-538, 1909.

MENSURATIONS MICROSCOPIQUES

189

La mthode du

micromtre oculaire, quand elle est applique


avec soin et avec un bon instrument, est certainement une des
plus
prcises, mais elle ne convient que pour mesurer les diamtres
ou des objets recliligaes. Des corps de forme irrgulire ou complique, tels que des Pilaires ou d'autres Nmatodes, ne peuvent
tre mesurs avec rapidit et
le
de la
prcision

que par

chambre

claire et

du curvimlre

Oculaires microratriques
mesurer avec prcision des

procd

(p. 184).

tambour

Ces oculaires sont destins

images trs tendues, occupant


une grande partie du champ.
Le principe de ces appareils
faire concider un
index avec une des extrmits
de l'objet mesurer, puis
dplacer cet index, au moyen
d'une vis micromtrique mise
consiste

en mouvement par un tambour


gradu,
atteint

jusqu' ce qu'on
extrmit

l'autre

ait

de

Le tambour porte, par


exemple, 100 divisions, comme
dans le micromtre de Leitz
(flg. 113), et chaque rvolution
l'objet

complte dplace l'index d'une


Oculaire micromtrique
Fif?. 113.
longueur de un demi-millimtre
tambour.
qu'on peut lire sur une chelle
divise en millimtres et demimillimtres, place entre les deux lentilles de l'oculaire. Dans ce cas,
une division de tambour correspond un dplacement de l'index sur
une longueur de 5
Bien entendu, il faut tablir, au moyen du micromtre objectif, la valeur micromtrique absolue d'une division du
tambour pour chaque objectif.
Nous ne ferons que mentionner la platine micromtrique, destine
mesurer avec prcision les objets trop grands pour entrer dans le champ
du microscope. L'objet est dplac par un chariot command par une
vis micromtrique tambour divis. On peut ainsi mesurer des objets
ayant environ 1 cm.
3" Procd de mensuration directe.
Ce procd est trs simple,
mais trs fatigant; il consiste regarder d'un il l'image microscopique
et la projeter de l'autre sur la platine du microscope, o on la mesure
au moyen d'un compas.
Pour obtenir des rsultats prcis, il faut, d'aprs Harting, observer les
on donne la platine une plus grande surface
prcautions suivantes
en y plaant un carton recouvert de papier blanc, de manire pouvoir
poser commodment les pointes du compas et les apercevoir nettement. L'il doit tre tenu parfaitement immobile. Enfin il faut que
l'paisseur du carton soit gale celle du porte-objet et la distance de
\)..

ces objets l'il de l'observateur doit tre toujours la

mme.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

190

Celte mlhode

est trs prcise,

prcautions minutieuses et

malheureusement

ncessite des

elle

occasionne une grande fatigue. Aussi,


rarement employe car, pour donner de

elle

malgr sa simplicit, est-elle


bons rsultats, elle exige un long exercice.

11.

Pour

MENSURATION DES PAISSEURS

effectuer cette mesure,

au point successivement

la

il

suffit,

en apparence, de mettre

surface suprieure et la surface infrieure de l'objet et

de

sur

lire,

duation
la tte

la gra-

que

de

porte

la vis

mi-

dans

cromtrique,
les

grands

statifs,

les

chiffres

corres-

aux deux

pondant

de

positions

En

jectif.

Topration

l'ob-

ralit
est

un

peu plus complique. D'abord il est


assez

difficile

dterminer
Fig.

ment le plan suprieur et le plan infrieur d'une coupe

Mesure de l'paisseur d'une lamelle.


Correction ncessite par la rfraction.

114.

de

exacte-

d'un objet microscopique. On en comprendra la raison


se reportant ce que nous avons dit plus haut (p. 58) du pouvoir pntrant des objectifs. Les mesures dans un plan vertical
sont donc beaucoup plus difficiles effectuer que dans un plan

en

ou

En

horizontal.

outre,

il

faut tenir

compte de phnomnes de

rfraction lorsqu'on se sert d'objectifs sec


tte

de

la vis

entre les deux plans que si


faisait en milieu
homogne.

le

les chiffres lus


la

sur la

distance relle

parcours des rayons lumineux se


le cas contraire, Terreur due

Dans

la rfraction est d'autant


plus

pose entre

micromtrique ne reprsenteraient

grande que

la

couche

d'air inter-

lamelle et l'objectif est plus paisse.


Supposons par exemple, lig. 114, que nous voulions dterminer
l'paisseur d'une lamelle avec un objectif sec. La partie gauche
la

MENSURATIONS MICROSCOPIQUES

191

de la figiHv nous montre Tobjeclif mis an {loinl sur E, dans le


plan suprieur de la lamelle. Pour mettre ensuite au point sur le
plan infrieur, il semblerait qu'on doive l'abaisser de la quantit
dplacer de

la
quantit ED' car,
paraissent suivre le trajet
BD'. Pour connatre Ppaisseur rellede la lamelle (p. 187), il faut
multiplier la diffrence des deux chiffres lus sur la vis micromdu verre de cette lamelle. Dans
Irique par Pindice de rfraction

ED, mais en

ralit

il

suffit

de

le

aprs rfraction, les rayons partis de

immersion homogne, l'paisseur est gale


si le
liquide d'immersion a un
indice de rfraction (n') dilTrent de celui du verre (/?), il faudra
le

au

cas d'un objectif


chiffre primitif;

au contraire,

11

multiplier le chiffre primitif par

CHAPITRE XVII

EMPLOI DE LA LUMIRE POLARISEE


Nous ne nous occuperons, dans ce chapitre, que des appareils
de polarisation qu'on peut adapter aux microscopes ordinaires
pour tudier en lumire polarise des objets ou des tissus animaux
ou vgtaux. Nous laissons compltement de ct les microscopes
des minraux
polarisants, construits spcialement pour Ftude
en lumire polarise convergente et pour Tobservation des anneaux
d'interfrence.

I.

NOTIONS SUR

LA

LUMIRE POLARISE

comme

et
point de dpart la thorie des ondulations

un
mouvedus
sont
lumineux
admettons que les phnomnes
ment ondulatoire de Tther, milieu hypothtique qui remplirait

Prenons

tout l'espace et pntrerait tous les corps.

d'onde de ces vibrations

On

elle oscille entre

connat

0,4

et

la

longueur

0,7 a.

On

sait

vibrations par
rapidit est de 450 700 billions de
seconde. Les vibrations de Fther sont perpendiculaires la direcaussi

que leur

tion de propagation

naire

ou naturelle

du rayon lumineux; dans la lumire ordiproduisent uniformment dans tous

elles se

les sens.

Au

contraire, dans la lumire polarise, les vibrations ne sont


pas gales dans Ions les sens, les plus fortes se produisent dans

une direction dtermine

et

les

plus

faibles

dans une autre

direction, ou bien encore toutes se produisent dans le

mme

sens.

La lumire polarise est donc un mouvement ondulatoire bien


plus simple que la lumire ordinaire. C'est ce que montre la

EMPLOI DE LA LUMIRE POLARISE


figure 115 emprunte Rinoe ^

Soil

R un

193

rayon lumineux

ordinaire, les diamtres de l'anneau D, D..., vu en


perspective,
reprsenteront une infinit de plans, suivant lesquels s'effectuent
les vibrations. Au contraire,
pour le rayon polaris R', les vibrations n'ont lieu que dans le
plan D'D'.

On

peut produire de la lumire polarise par rtlexion d'un


de
lumire naturelle, sur une lame de verre convenablement
rayon
oriente. Mais la polarisation
i
2
ainsi

obtenue

incom-

est

plte et insufllsante

les

pour

^R

ludes microscopiques; les


corps birfringents produisent

une polarisation beau-

coup plus parfaite.


Pour bien comprendre
polarisation

par

birfringents

la

>-'

les

corps
considrons

un ravon de lumire naturelie, se

propageant travers

un milieu qui

prsente, dans

tous les sens, la mme rsistance au cheminement des


particules d'tlier.

Nous

Schma reprsentant la direction


Fig. 115.
de vibration d'un rayon de lumire naturelle
et d'un rayon de lumire polarise R' R'. Dans la lig. 1, le rayon est

RR

le plan du papier. Dans la lig. -2,


rayon est perpendiculaire au plan du

dans
le

papier. D'aprs Rinne.

di-

rons que ce milieu possde une lasticit optique gale dans toutes
directions. Suivant la nature de celte lasticit, la lumire

les

naturelle

se

modifie.

Au

dans tous

propagera plus ou moins


contraire,

si

les sens, les vibrations

plus gales

et la

vile,

mais ne sera pas


uniforme

cette lasticit optique n'est pas

des particules d'ther ne seront

lumire sera polarise.

Corps isotropes et anisotropes.

Les corps dont

l'lasticit

optique est gale dans tous les sens sont dits isotropes ou monorfringents. En traversant ces corps, les rayons lumineux peuvent
subir le phnomne de la rfraction (p. 2), qui traduit simplement un changement dans la vitesse de propagation, lorsque la
lumire passe dans un milieu de densit diffrente. Ces corps ne
polarisent pas la lumire. Tous les corps amorphes, non comprims,
sont isotropes. Il en est de mme des cristaux du systme
1.

Le microscope polarisant. Trad. Perviiiquire, Paris, 1904. Voir


Ambronn, Bcnutzung des Polarisationsmikroskop bei hisiologischen Untersu-

F. Rinne,

aussi

chungen, Leipzig, in-S de 59

M. LAXGF.nox.

p..

pi., 1892.

Prcis de Microscopie.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

194

culique, parce

que leur symtrie optique

une

est reprsente par

sphre.

On nomme
ticit

optique

Fig. 116.

anisolropes ou birfringents
est

ingale.

les corps

dont

Prenons couime exemple

l'las-

le

spath

A, monorfringence; B, birfringence; n, normale au point


dence; /, rayon incident; i% ?', rayons rfracts. Original.

d'inci-

si on
regarde travers un mince prisme de cette
substance une petite ouverture ronde lumineuse, on verra deux

d'Islande^;

cercles

Le rayon

clairs.

incident unique a t rem-

deux

par

plac

rayons

rfracts distincts, chemi-

nant

avec

des

La

ingales.

montre qu'
ce corps,

le

s'est divis

rfracts.

de

Triage des rayons lumineux par


birfringents d aprs Rinne.
R, R' rayon de lumire naturelle vibrant en
R dans toutes les directions. En R' on ne
retrouve que les vibrations parallles aux
fils tendus suivant AB et CD.

Fig. 117.

les corps

ces

^i^^-^^^^

vitesses

116

figure
la

rayon incident

en deux rayons

En

liminant un

deux rayons, on
^^.^^

p^^^^,g

^^^

et

1^

lumire Compltement po,^^:^^^_


^
j^^^jg^^^ ^^^
^
tropcs Comprennent
autres
cristaux

les

ceux du systme cubique

de

sortie

un certain nombre de corps

tous

que
iso-

tropes ayant subi des efforts mcaniques (traction, compression).


1. Le spath d'Islande est une varit
trs pure de calcite (carbonate de
calcium rhombodrique), remarquable par l'nergie de sa double rfraction, visible
l'il nu.

EMPLOI DE LA LUMIRE POLARISE


Suivant

la

comparaison

195

de Rinne, ces corps se

trs ingnieuse

comme un tamis, dont les fils seraient placs angle


ce tamis opre le triage des rayons et ne laisse passer que
ceux qui sont parallles aux deux systmes de fils perpendicucomportent

droit

laires (fig. 117).

La notion de VelHpse

d'lasticit sert figurer, dans

un

plan,

d'isotropie et d'anisotropie. Supposons un point


l'intrieur d'an corps et rayonnant dans toutes

les

phnomnes
lumineux plac

corps est isotrope, c'est--dire si son lasticit


optique est gale dans tous les sens, les rayons rencontreront
partout la mme rsistance et arriveront tous au mme instant

les directions. Si le

la

surface d'une sphre, dont le centre sera le point lumineux.

C'est le cas des cristaux


Si,

au contraire,

le

treront pas partout la


le

mme

du systme cubique.

corps est anisotrope, les rayons ne rencon-

mme

rsistance; aussi [)arcoureront-ils dans

temps des chemins

droites perpendiculaires, le

optique. Le point o

d'une

Reprsentons, par deux

diffrents.

maximum

et le

se rencontrent ces

ellipse, dite ellipse d'lasticit',

minimum

d'lasticit

deux droites sera le centre


les deux droites seront les

axes de cette ellipse ou oxes d'lasticit.

L'exprience du cube de glatine permet de concrtiser ces


notions thoriques. Un cube dcoup dans une masse de glatine
solidifie est isotrope; sa surface d'lasticit est une sphre. Si on
vient

comprimer deux faces opposes,

sphre, inscrite dans le cube, deviendra

il

un

vident que la
ellipsode de rvoluest

tion. En effet, la masse de glatine manifeste alors, dans certaines


conditions, les proprits d'un corps birfringent. On obtient les
mmes effets en exerant une traction sur une lame de glatine.

On

distingue plusieurs sortes de


rectihgne, elliptique, circulaire, suivant la nature
polarisation
des vibrations des particules d'lher.

Polarisation rectiligne.
:

ISous ne nous occuperons

dans laquelle

mme

ici

que de

la polarisation rectiligne,

rayon lumineux reste toujours dans un seul et


plan de polarisation, les vibrations de l'ther ayant

le

plan, dit

toujours lieu dans le mme sens.


Le meilleur moyen d'obtenir de

la lumire polarise en
ligne
un rayon de lumire naturelle un
prisme de spath d'Islande. Nous savons qu'aprs ce passage le
rayon naturel est dcompos en deux rayons polariss, vibrant
dans deux directions perpendiculaires. En effet, tout rayon qui

droite, est de faire traverser par

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

196
pntre dans

nn

cristal

parallle l'axe optique

birfringent,

du

cristal, se

dans une direction non


trouve, par suite de Tin-

de Tlasticit optique, divis en deux rayons polariss en


anims de vitesses ditrentes. En outre, les vibra-

galit

ligne droite et

de ces deux rayons se produisent dans deux plans perpendiTun l'autre. Pour obtenir de la lumire polarise dans

tions

culaires

un

il suffit de
supprimer un de ces deux rayons on
gnralement ce rsultat l'aide des prismes dits de

seul plan,

obtient

Nicol.

APPAREILS DE POLARISATION

II.

Un prisme de Nicol est construit avec un


Prismes de Nicol.
rhombodre de spath d'Islande, choisi de manire ce que sa
longueur soit environ le triple de son paisseur. Les faces terminales sont uses, de
faon leur donner une forme losangique et
un angle de 68, par rapport aux angles des
grands cts; puis on coupe ce prisme en

deux

moitis, suivant la direction de son axe

longitudinal. Les
sont polies, puis

deux surfaces de section


recolles au baume du

Canada.

Nous savons qu'un rayon lumineux, pntrant dans

ce prisme par une des petites


118), est dcompos en deux rayons
qui ne se propagent pas avec la mme vitesse.
Ils n'ont donc
pas le mme indice de rfracfaces

(fig.

tion et leur vitesse est en


la

prisme de Nicol.
Ijc,
plan de section
occup par une couche de baume du

Canada

ordinaire (RO,

ment

rayon

sur
(v.

le

p.

et n'a

ordinaire.

Original.

baume

48).

Il

rfract

L'autre est dit

RE, rayon
RO.

extraordinaire;
O'

raison inverse de

donc

le

plus fortement

rfract est celui qui se dplace le


plus lentement. L\in de ces rayons est le
rayon

Marche
des rayons dans un

Fis:.

valeur de cet indice

fig, 118), toujours unifoi-msuivant la loi de Descartes.

rayon extraordinaire (RE)

pas un indice de rfraction constant.

Dans le cas qui nous occupe, le rayon


ordinaire est plus fortement dvi et arrive
sous un angle suprieur l'angle limite

subit

donc

la rflexion

totale

et

est

absorb par

EMPLOI DE LA LUMIKRE POLARISE


moulure noire du prisme. Le rayon

la

rfrangible,

ment

traverse

baume

le

et

sort

197

extraordinaire,

moins

du prisme complte-

11 vibre dans la direction de la


petite diagonale de
terminale losangique du prisme. Le plan de polarisation
est toujours perpendiculaire au plus petit diamtre de la section

polaris.

la lace

du prisme. Il est ncessaire de connatre la position de ce plan,


aussi est-elle toujours indique sur la monture des prismes de
Nicol. On peut, avec Rinne, comparer le prisme de Nicol un
tamis en grillage

(fig.

119), form de

fils

jiarallles,

ne laissant

rayons dont le plan de vibration est parallle ces fils.


passer que
Nous voici donc en possession
Polariseur et analyseur.
les

le prisme
d'un faisceau de lumire polarise dans un seul plan
qui nous la fournit se nomme polariseur. Dans le microscope, ce
:

prisme est fix entre le miroir et la platine, la place ou au-dessous du condensateur ^ Mais cet appareil, employ seul, ne nous
donnerait que des renseignements trs incomplets, sur la faon
dont les objets microscopiques agissent sur la lumire polarise.
C/est tout au plus si on peut observer le plochrosme, c'est-dire la pro])rit des cristaux d'absorber la lumire d'une faon
diffrente suivant les directions.

Pour reconnatre

si

un corps

principal de notre tude,


et voir s'il polarise

il

est birfringent, ce qui est le but


faut placer ce corps entre deux niois

lui-mme

la

lumire.

Eludions donc ce qui va se passer lorsque nous superposons


deux niois. Le second nicol, nomm analyseur^ se place, dans le
microscope, au-dessus de l'oculaire: il est dispos dans une bague
molete (lig. 120), de faon pouvoir tourner autour de l'axe
optique. Le polariseur tant mis en place et le miroir orient, faisons tourner l'analyseur d'un tour com])let, soit de 360. Nous

remarquerons que l'clairage du champ est modifi quatre fois;


passe deux fois par un maximum d'clairage et deux fois par un

il

maximum

d'obscurit. Lorsque les plans de polarisation des deux


il
y a clairement, lorsqu'ils sont croiss il y

niois sont parallles


a obscurit.

En
sort

effet, le

rayon extraordinaire polaris en ligne droite, qui

du polariseur, traverse l'analyseur sans


Pour

tre modifi, lorsque

observations avec des grossissements faibles et moyens, il faut


enlever le condensateur, de faon avoir des rayons bien parallles. Pour les
trs forts grossissements, si l'clairage est trop insuffisant, on peut intercaler le
condensateur entre le polarisateur et la prparation. Pratiquement, le rsultat
est le mme qu'avec des rayons rellement parallles.
1.

les

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

198

deux prismes sont parallles. Mais si Tanalyseiir est lgrement


tourne par rapport au polariseur, le rayon est dcompos en deux
le second nicol. Si
rayons, dont un seul, Textraordinaire, traverse
les

Tangle des deux prismes atteint 90" les deux rayons sont compltement rfracts et n'arrivent plus Til de l'observateur.
On voit donc qu'en tournant l'analyseur de 360, on passe deux
fois par une position o les plans de polarisation des deux niois
sont parallles (clairement maximum), et deux fois par une position o ces plans sont croiss angle droit (obscurit complte).

Pour concrtiser ces

reprenons

faits,

comparaison de Rinne

la

sont

lages

mme

sens

second
p
Fig.

119.

l'analj'seui'

Relations du polariseur et de
1.
niois
d'aprs Rinne.

parallles; 5, niois croiss.


seur; P, polariseur.

deux niois
reprsents par deux grillages forms chacun de fils
parallles. Si ces deux grilles

supposons

A, analy-

orients dans

le
le

119, 1),

(fig.

laissera

passer

les

rayons polariss, tamiss par


le premier et orients dans
le

sens

les

des

grillages

fils.

sont

Mais

si

croiss

119, 2), la lumire sera


teinte par le second grillage, dont les fils se trouvent dirigs
perpendiculairement au plan de vibration des rayons polariss.
(fig.

Examen en lumire
objet transparent sur
les niois

champ

croiss.

la

Pour tudier Faction d'un


polarise.
lumire polarise, il faut l'examiner entre

Deux

cas peuvent se prsenter

reste obscur ou bien

il

s'claire plus

ou bien

le

ou moins.

le champ reste obscur, il faut faire tourner l'objet dans


plan de la platine. Si l'obscurit persiste pour toutes les posi-

Lorsque
le

que l'objet est isotrope ou monorfringent. Si, en faisant tourner l'objet, on voit reparatre la lumire c'est qu'on a affaire
un corps anisotrope ou birfringente En effet, l'interposition de
tions, c'est

ce corps modifie le rayon extraordinaire issu du polariseur; il le


partage en deux rayons, dont l'un donne, dans l'analyseur, un
raj^on extraordinaire qui rtablit l'clairement. En faisant tourner
l'objet,

on

doit le voir s'teindre et 5'c/aire?" quatre fois.

Chacune

1. Il ne faut pas oublier


que si un corps birfringent est orient de telle sorte
qu'un de ses axes optiques concide avec celui du microscope, il reste obscur

dans toutes les positions.

EMPLOI DE LA LUMIRE POLARISEE

199

de ces quatre extinctions correspond au moment o les axes d'lasticit de Tobjel sont parallles aux plans de polarisation des niois.
Les quatre phases (Fclairement maximum correspondent aux

moments o

ces axes sont exactement perpendiculaires aux plans

de polarisation des niois.


Couleurs d'interfrence.

Les objets birfringents, examins


la lumire blanche, entre les niois croiss, ne sont pas seule-

ment

clairs mais prsentent encore de vives colorations, dont les

sont

teintes

les

mmes que

celles des bulles

de savon ou des

minces. Ces teintes ne sont pas autre chose


que des couleurs d'interfrence, appartenant Tchelle de NeAvton.
Voici comment elles se produisent. Nous venons de voir que le

couches d'huile

trs

corps birfringent agit sur la lumire polarise, en dcomposant de


le rayon extraordinaire polaris en deux autres
rayons.

nouveau

Si le corps est trs mince, ces deux rayons ne se sparent pas la


l'un d'eux est moins ra})ide que l'autre et se trouve en
retard d'une certaine quantit. Ce retard se nomme diffrence de
sortie

marche

produit linterfi-ence. Nous savons (v. p. 60 et fig. 34


que lorsque deux rayons lumineux suivent le mme chemin,
peut reconnatre leur prsence, par suite des phnomnes
et

et 35)

on

d'interfrence qui se manifestent par le renforcement, Taffaiblissement ou mme l'extinction totale de la lumire. Lorsque ces deux

rayons ont une diffrence de marche gale leur longueur d'onde,


se renforcent rciproquement (tig. 34); au contraire, lorsque la

ils

diffrence de

marche

est

d'une demi-longueur d'onde,

les

deux

vibrations s'annulent (fig. 33). Les couleurs

pour lesquelles cette


diffrence quivaut aune demi-longueur d'onde sont donc teintes
par l'analyseur, qui ne laisse passer que le rayon extraordinaire.
Les

autres

mme

couleurs

compltement

subsistent
incolore,

l'tat

de mlange

et l'objet,

sera vivement color de teintes,

d'autant plus intenses que l'angle form par le plan de vibration


de l'objet et celui du nicol sera plus voisin de 45. En outre, les

couleurs que prend l'objet entre les niois parallles sont compl-

mentaires de celles qu'on aperoit lorsqu'on l'examine entre les


niois croiss. Bien entendu, en faisant tourner l'objet de 360,
dans le plan de la platine, les couleurs apparaissent quatre fois et

lame de gypse donnant le


deux fois rouge, deux fois
vert clair et quatre fois obscur, pendant une rotation complte de
l'analyseur ou de la lame de gypse.
s'teignent quatre fois. x\insi, avec la

rouge de

l'^''

ordre, le

champ

parat

LE MICllOSCOPE ET SES ACCESSOIRES

200
Entre

les

niois

croiss,

cliaqne couleu;- aura

un maximum

d'inlensit, dans les conditions indiques, lorsque la diffrence de

marche sera un multiple

pair de la

demi-longueur d'onde

et

un

maximum

d'obscurit lorsque cette diffrence sera un multiple


de
la
demi -longueur d'onde. Entre les niois parallles les
impair
conditions sont inverses.

Ces couleurs peuvent, jusqu' un certain point, servir la


dtermination des objets, surtout lorsqu'il s'agit de minraux ou
de corps

En effet, elles dpendent de la valeur de la


de l'paisseur du corps examin. Donc, paiscorps les plus birfringents s'illumineront des cou-

cristalliss.

birfringence et

seur gale, les


leurs les jdus vives. D'autre part, rfringence gale, plus la
lamelle est mince, plus les colorations sont vives; plus elle est
paisse, pins les couleurs plissent et s'eflacent,

dans une luminosit blanche.

pour

se fondre

En

tudiant, en lumire polarise,


des lamelles de gypse d'paisseur croissante, on constate que les

couleurs se succdent par groupes, qui commencent par un ton


du rouge. Les pre-

violac ou bleutre et se terminent tous par

miers groupes vont du bleu lavande ou du pourpre au rouge, en


passant par tout<^ une gamme de verts et de jaunes. Dans les derniers groupes, on ne trouve jjIus qu'une alternance de jaune verdtre et de rouge ple. Ce sont ces groupes ou ordres, au nombre
de six, qui servent distinguer les couleurs de polarisation. On
dira rouge de

1"

ordre, rouge de

2*^

ordre, etc.

Usage des couleurs d'interfrence. Le rouge de i" ordre a une


grande importance, cause de la sensibilit avec laquelle il passe soit
au bleu, soit au jaune. Il existe, dans le commerce, des plaques de
gypse qui donnent les ronges des divers ordres. Plaons, entre l'analyseur et Tobjet (soit sous l'analyseur, soit au-dessus de l'objectif), une de
ces plaques donnant le rouge de 1" ordre
entre les niois croiss.
Gomme les couleurs d'interfrence varient suivant l'paisseur du corps
examin, il est vident que l'interposition d'un objet birfringent va
modifier la coloration fournie par la lame de gypse.
Plusieurs cas peuvent se prsenter. Si les deux rayons, issus de l'objet
birfringent, sont parallles ceux qui sortent de la lame de gypse et
orients de telle sorte que la diffrence de marche de ces rayons soit la
mme pour l'objet que pour le gTPse, il est vident que l'ensemble se
comportera comme une lame de gypse augmente de l'paisseur de
l'objet. Le rouge se transformera donc en une couleur d'ordre supi

rieur,

correspondant cette paisseur nouvelle. La coloration ainsi

1. Ces
plaques sont montes de telle faon que leurs axes d'lasticit sont
dirigs 45" du plan de polarisation des niois croiss.

EMPLOI DE LA LUMIERE POLARISEE

201

obtenue sera dite addltive ou d'addition, ou bien encore on dira que la


teinte monte.
Au contraire, si les deux rayons mis par l'objet, tout en restant parallles ceux de la plaque de gypse, sont orients de telle sorte que leur
de marche soit inverse, le rouge se transformera en une
coloration d'ordre infrieur, car, au point de vue optique, tout se passe
comme si la lame de gypse, avait diminu d'paisseur. La teinte obtenue
baissera, descendra ou. bien encore sera dite soustractive ou de soustraction.
Enfin, si les rayons sont orients 45'' la coloration n'est pas modifie.
difTrence

La connaissance de ces phnomnes est trs utile pour les examens


en lumire polarise. Un corps birfringent, plac entre les niois
croiss, au-dessus d'une lame de gypse donnant le rouge de l'"' ordre,
prsentera les aspects suivants, pendant la dure d'une rotation de 360".
On verra apparatre 4 fois le rouge de T' ordre et, entre ces quatre
apparitions, on verra deux fois une couleur d'addition (par exemple le
violet ou le bleu de 2^ ordre) et deux fois une couleur de soustraction
(par exemple l'orange ou le jaune de T'' ordre).
Cet examen avec la lame de gypse sert deux fins d'abord dterminer la direction des axes d'lasticit. Quand la teinte monte, l'axe de
plus petite lasticit de l'objet correspond l'axe de plus grande lasticit de la lame de gypse
c'est l'inverse lorsque la teinte descend.
Plus l'objet est mince, plus les teintes sont basses et plus le changement est facile apprcier. En outre, la lame de gypse sert dceler
les faibles birfringences (p. 205); en elTet, le changement de teinte
:

est plus facile reconnatre que les alternatives d'clairement et d'extinction qui, pour les corps faiblement birfringents, sont peine perceptibles.

mica,

On peut encore employer dans ce but des lames


comme nous le verrons plus loin (p. 200).

de quartz ou de

Voici, titre de document, la succession des couleurs d'aprs les six


ordres de l'chelle de Newton, avec les teintes complmentaires entre
les niois parallles.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

202

G ordres,

le 5* et le

quera aussi que, dans

les couleurs sont trs

peu distinctes. On remar-

ordre les jaunes dominent, dans le 2* ordre


le spectre est complet, dans le 3* ordre les verts sont en majorit et
enfin, dans le 4* ordre, que les teintes commencent se fondre dans le
gris. Dans les ordres suivants, le blanc gristre efface de plus en plus
les couleurs et on arrive ainsi au blanc dit d'ordre suprieur.
le P'

m. MICROSCOPE POLARISANT
Il n'est
question ici que du microscope ordinaire, transform
en microsco]x; polarisant par l'addition de deux niois; nous lais-

Fig. 120.

Appareil de polarisation de Leitz.

A, analyseur; P, polariseur.

sons compltement de ct la description des microscopes minralogiques. Pour transformer un microscope ordinaire en micros-

cope polarisant,
analyseur.

il

suffit

donc de

le

munir d'un polariseur

et

d'un

Lepolariseur(fig. 120, P) est form d'un nicol dont les faces terminales sont obliques par rapport Taxe optique il est serti dans
une monture qui se place gnralement dans le porte-diaphragme
;

de Tiris de l'clairage Abbe. Il faut avoir soin de retirer auparale condensateur ou de l'carter hors de l'axe, suivant la con-

vant

du microscope.
L'analyseur est un nicol dont les faces terminales sont normales
Taxe. C'est gnralement un prisme du type Hartnack-Prazmowski. Il est mont de telle sorte qu'il puisse se placer sur l'ocustruction

laire; la
(fig.

monture est donc gnralement divise en deux parties


Tune qui se fixe sur le tube du microscope et dans

120, A)

EMPLOI DE LA LUMIRE POLARISEE

203

laquelle on introduit rociilaire, cette partie porte aussi


fixe; l'autre partie s'applique
et porte,

frottement doux sur

outre le nicol analyseur,

un

un index

la

premire

cercle gradu en

360\ En

saisissant Fanalyseur par la bague moletle, on peut le faire tourner autour de Taxe du microscope et observer les alternatives
d'clairements et d'extinctions que nous venons de dcrire. On

rserve gnralement, dans la monture de ranalyseur, une chancrure dans laquelle on peut introduire la lame de gypse donnant
le

rouge de

IV.

1'"''

ordre.

EMPLOI DU MICROSCOPE POLARISANT

Le microscope polarisant renseigne sur les proprits optiques


des corps, au point de vue de la birfringence. Il peut donc servir,
soit dterminer la nature de ces proprits optiques, soit, celles-ci
tant connues, dterminer ou vrifier la nature de l'objet. Le
microscope polarisant trouve un de ses principaux emplois dans
Tlude des rocbes dbites en plaques minces dans ces coupes, on
reconnat la nature des minraux constituants, par la forme des
:

cristaux et par les couleurs brillantes dont ils s'illuminent entre


les niois croiss. Cette tude n"est pas de notre domaine, mais

nous pouvons en

tirer d'utiles

enseignements, pour l'application du

microscope polarisant l'bistologie animale ou vgtale.


Il est certain
que ce moyen de recherche est malheureusement
trop peu employ. Il est pourtant susceptible de mettre en vidence certains lments des tissus, avec une nettet qu'aucune

mthode de coloration ou d'imprgnation

n'est capable

de fournir.

mme

rvler des dtails de structure qui n'apparapourrait


traient autrement, ni par leur rfringence particulire, ni par

Il

absorption de radiations colores, ni par aucune mthode de coloration.

Prcautions prendre.

Par

suite des phnomnes de


deux niois, il est vident
qu'il y a une grande perte de lumire. Nous avons vu en effet que
les rayons lumineux sont ddoubls deux fois, lorsqu'on examine
un corps birfringent entre les niois croiss; il ne parvient donc
gure l'observateur qu'un quart des rayons lumineux rflchis

rfraction qui se produisent dans les

par le miroir. Aussi est-il ncessaire, pendant les observations en


lumire polarise, de se garantir contre toute lumire trangre.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

204

Nous ne saurions donc trop recommander l'emploi des crans


dont nous avons parl page 167. Le meilleur cran sera une grande
feuille de carton noir, assez haute pour cacher toute la tte de
l'ohservateur et prsentant sa partie infrieure une chancrure,

par laquelle les rayons de

source lumineuse parviendront au

la

miroir.

En outre, pour les recherches trs dlicates, sur des corps trs
faiblement birfringents, il faut s'assurer que les lames et les
lamelles ne prsentent aucune trace de birfringence. Pour cela,
on

les

examine avec

sensible.

Il

la

la lame de quartz
birfringence des ocu-

lame de gypse ou avec

est plus rare d'tre

gn par

la

laires et des objectifs.

Pour Texamen des


saire

d'en examiner

prcipits cristallins desschs, il est ncesune partie sec et l'autre partie dans le

baume du Canada, qui


rence. Zimmermanu
lamelle avec une trs

fait

mieux

ressortir les couleurs d'interf-

dans ce cas, de mouler sous


quantit de baume, de faon ce

conseille,
jietite

qu'une partie des cristaux soient dans l'air.


Recherche de la birfringence entre les niois croiss.
Installer le {)olariseur et orienter le miroir com.me d"ha])itude

placer Tobjel sur la platine, puis mettre l'analyseur sur l'oculaire.


S'assurer de la mise au point exacte entre les niois parallles,

puis tourner l'analyseur de 90, de faon ce que les niois soient


11 est
plus commode que, dans cette position, le plan de
vibration de l'analyseur concide avec le jdan sagittal du microscope; celui du polariseur, tant perpendiculaire, se trouvera paral-

croiss.

au plan frontal du microscope.


Les niois tant croiss, faire tourner lentement Tobjet dans le
plan de la platine, autour de l'axe optique du microscope. Ici deux

lle

cas peuvent se prsenter si le microscope est muni d'une platine


tournante, celle-ci doit tre centre trs exactement (p. 15) c'est
:

cette seule condition qu'elle pourra tre utilise; autrement, pendant la rotation de la i)latine, l'objet sortira du champ optique. Si
le

microscope n'a pas de platine tournante, on

ration la
et

avec un

main sur

la platine,

})eu d'habitude,

ce

({ui,

aux

fait

tourner

la

prpa-

faibles grossissements

ne prsente pas de grandes difficults.


dites centrables, sont en

La plupart des platines tournantes,


ralit trs difficiles centrer.

trage approximatif au

Il

faut d'abord effectuer

un cen-

moyen des vis de rappel; puis, prenant


d'abord un trs faible grossissement, examiner un porte-objet sur

EMPLOI DE LA LUiMIRE POLARISE

205

lequel ou a trac, Tencre ou au diamant, une croix ou un petit


cercle de 1 millimtre de diamlre. Amener cet objet bien au

milieu du

ment

et le fixer avec les valets, puis lourner lenteInvitablement l'objet sort du champ; il faut Ty

champ

la platine.

maintenir en

le

dplaant la main et en combinant ces mouvevis de rappel. En ttonnant, on arrive faire

ments avec ceux des


accomplira

la platine

une

rotation complte, .sans

que Tobjet

sorte

un grossissement plus fort qui permet,


au moyen des mmes manuvres, de parachever le centrage. A
partir de ce moment, ne plus toucher aux vis de rappel.
La platine tant centre et l'objet tournant entre les niois
croiss, sous Til de l'observateur, deux cas peuvent se prsenter.
du chanqj. Passer

alors

Si l'objet s'teint quatre fois et s'claire quatre fois, dans des positions qui sont 45 l'une de l'autre (ce

qu'on peut vrifier au

moyen du cercle gradu de

il

l'analyseur),

est

videmment bir-

ne faut pas oublier que, pour des objets trs minces


ou trs peu anisotropes, l'clairement peut tre excessivement
fringent.

Il

reste obscur

pendant toute la dure d'une rotanous devons ensivager trois hypothses.


Le corps est pourtant birfringent, mais mal orient. En

faible. Si le

champ

tion complte de la platine,


1*^

effet, si

son axe concide avec celui du microscope,

comme un

corps isotrope. Dans ce cas,


soit faire une autre prparation.
2

duire

il

il

se

comporte

faut, soit dplacer l'objet,

Le corps est birfringent, mais trop faiblement pour proun clairement. Dans ce cas, passer l'examen avec la lame

de gypse ou de quartz sensible.


3 Enfin le corps est bien isotrope
tion et la plaque de

dans toutes

gypse laissent

le

le

changement

d'orienta-

champ compltement obscur

les positions.

Recherche d'une trs


assurer rclairage

faible

maximum

de

la

Il
faut d'abord
birfringence.
prparation, en employant une source

lumineuse intense. En outre, on s'aide soit de la plaque de gypse donnant le rouge de i" ordre, soit de la plaque de quartz teinte sensible,
donnant le violet sensible n" 2 de 3" ordre. Des corps birfringence
trs faible, peu ou pas visible entre les niois croiss, exercent pourtant

une action sur


cause de

les couleurs fournies par ces lamelles, dites sensibles,

la facilit

avec laquelle

les

corps birfringents modifient leur

teinte de polarisation. On place les lames sensibles sous l'analyseur,


dont la monture doit porter une chancrure spciale. On fait tourner

on observe le changement de teinte; avec la lame de gypse,


soit au bleu, soit au jaune; avec la lame du quartz, le
passe soit au rouge, soit l'indigo.

l'objet et
le

rouge passe

violet

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

206

On peut encore employer une plaque de mica, dite mica quart d'onde,
c'est--dire taille de telle sorte que les deux rayons polariss sortent
de cette lame avec une dilTrence de marche d'un quart d'onde. Les
didreuces do marche, produites par l'objet et le mica, s'ajoutent ou se
retranchent, comme pour les autres lames sensibles, et la teinte monte
ou descend.
Avec toutes ces lames sensibles et pendant la dure d'une rotation
complte, un corps birfringent apparat quatre fois de la couleur de la
plaque, deux fois avec une couleur plus haute et deux fois avec une
couleur plus basse.
11 est bien entendu que, pour obtenir la teinte que doivent fournir les
lames sensibles, celles-ci doivent tre orientes en diagonale par rapport aux niois croiss, de telle sorte que l'axe de plus faible lasticit,
c'est--dire correspondant l'indice de rfraction maximum, soit 45"
des plans de polarisation des niois. Gnralement cette direction est
marque sur la monture des lames sensibles. Par exemple, pour la lame
de gypse, il faut qu'entre les niois croiss on obtienne un rouge bien
franc, qui se change en vert entre les niois parallles.
Nous bornerons l nos tudes sur la polarisation au microscope. Nous
laissons intentionnellement de ct la dtermination des axes d'lasticit, des corps uniaxes et biaxes, des corps positifs et ngatifs. Nous
renvoyons pour ces recherches aux ouvrages spciaux.

Examen

des grains d'amidon en lumire polarise.


grains d'amidon sont certainement ceux qui se prtent le mieux aux tudes en lumire

Parmi

les objets d'origine vgtale, les

Ce mode d'clairage constitue mme un trs bon procd de diagnostic spcifique des diverses sortes d'amidon.
Entre les niois croiss, les grains d'amidon se comportent
comme des sphro-cristaux ils prsentent une croix noire sur
polarise.

fond clair. Les bras de

la

croix concident avec les plans de

vibration des niois et leur point d'intersection

marque

le bile

du

grain d'amidon. Par consquent, dans les grains d'amidon de


Pomme de terre, la croix sera trs excentrique; avec l'amidon de
Bl ou de Lgumineuses, on apercevra une belle croix noire dont
les bras partent

du

bile central.

Si on glisse dans Tanalyseur la plaque de gypse donnant le


rouge de l*"'" ordre, les espaces clairs se colorent immdiatement

deux d'entre eux prennent une couleur complmentaire de


deux autres. La croix devient rouge ou verte, suivant la

et

celle des

situation des

niois

et

les

espaces

clairs

sont

alternativement

bleus et jaunes.

Les grains d'amidon sont donc birfringents.


fait

par leur nature cristalline.

Ils

se

On

explique ce
comportent comme des

sphro-cristaux, composs d'aiguilles cristallines (trichites), dispo-

EMPLOI DE LA LUMIRE POLARISE

207

ses en sries radiales, formant des couches concentriques. Dans


rgne vgtal, les grains d'amidon sont seuls prsenter cette

le

structure

les

sphro-cristaux d'inuline et de phosphate de calles mmes phnomnes, mais ces forma-

cium produisent bien


tions

ne prennent naissance qu'aprs

le

sjour dans Talcool de

certains tubercules (Dahlia).

Examen des ufs d'Helminthes en lumire polarise.


Voir ce sujet p. 568 o on trouvera indiqus les lments birfringents des matires fcales (certains dbris alimentaires et
certains

ufs d'Helminthes).

Recherche du pigment paluden.


Plochrosme.

On

dsigne, sous

Voir
le

nom

p.

521.

de plochrosme,

des variations de coloration particulires aux corps birfringents


colors et produites, non plus par interfrence, mais par absorption ingale des rayons polariss, suivant diverses directions

dpendant de

la

constitution optique de l'objet.

Pour observer le plochrosme, on retire l'analyseur et on ne


se sert que du polariseur. (3n fait tourner l'objet comme il a t
pri'-cdemment indiqu et on note les changements de coloration.
Parmi les objets qui permettent d'tudier le plus facilement le
les cristaux colors de la carotte qui, pendant
une rotation complte, paraissent deux fois presque incolores et
deux fois colors en rouge intense. En effet, ces cristaux de Caroline laissent passer, dans une direction, presque tout le spectre et

plochrosme, citons

dans l'autre seulement des rayons rouges. Les membranes cellulosiques, colores en violet par le chlorure de zinc iod (p. 726),
prsentent aussi de trs beaux phnomnes de plochrosme.

CHAPITRE XVIII

CLAIRAGE A FOND NOIR


ET ULTRAMICROSCOPIE
L'clairage normal

du microscope

est

produit

par

lumire

rayons mis par la source lumineuse pntrent directement dans Tappareil, aprs avoir travers
Tobjet qui agit sur eux par absorption, rfraction et diffraction.
Au contraire, dans les appareils fond noir^ aucun rayon lumi-

transmise

autrement

dit, les

neux lie jjntre directement dans le microscope; ils


trent indirectement aprs avoir t rflchis, rfracts
fracts par Tobjet.
Il

s'est tabli

une certaine confusion dans

les esprits

y pnou difau sujet

de Tclairage fond noir et de Tultramicroscopie. On a pris la


mauvaise habitude, notamment dans le monde mdical, d'appliquer
tous les appareils fond noir, indistinctement, le nom d'ultramicroscope. Bien que tous ces instruments soient bass sur le

mme

})rincipe,

il

y a pourtant quelque diffrence entre

le

fond

noir et l'ultramicroscope. Tout ultramicroscope ncessite un fond


noir, mais tout appareil fond noir n'est pas un ultramicroscope.
h'
ultramicroscope est destin rendre visibles des corps rellement ullramicroscopiques,' c'est--dire dont les dimensions sont
au-dessous des limites du pouvoir rsolvant du microscope et de
la visibilit

maniement

de

l'il

dlicat,

humain. C'est un inslrument compliqu, d'un


ncessitant

presque

toujours l'emploi d'un

clairage lectrique trs intense.


1. Voici
quelques dfinitions qu'il est bon de connatre pour bien comprendre
ce qui suit
ultramicvoscopique s'applique seulement aux corps dont les dimensions sont au-dessous du pouvoir rsolvant maximum des objectifs microscopiques (0 lA. 23 environ). Ces corpuscules sont dits submia^oscopiques, quand on
peut arriver les clairer et les rendre visibles, amicroscopiques dans le cas
contraire.
:

CLAIRAGE A FOND NOIR ET ULTRAMICROSCOPIE


Il

en

est tout

209

autrement de Yclairage fond noir. C'est un

permet de voir sans coloration, sans manipulations


des
objets de dimensions microscopiques, c'est--dire
chimiques,
susceptibles d'tre vus aussi avec les microscopes ordinaires. Le
dispositif qui

Tond noir permet simplement de les trouver et de les observer


commodment. Ce procd de recherche est entr dans la

plus

pratique courante, parce qu'il est d'application trs simple, facile


de tous les travailleurs.

installer, la porte

PRINCIPE DE L'CLAIRAGE

I.

FOND NOIR

L'clairage fond noir n'est pas une nouveaut, comme cerC'est une mthode connue depuis longtemps
sans remonter plus loin qu'une vingtaine d'antains le croient.

nes, tous les grands microscopes des maisons


srieuses possdaient dj, parmi leurs acces-

un diajjhragme fond noir. C'tait une


diaphragme toile (fig. 121) qu'on
plaait au-dessous du condensateur, au niveau
de l'iris. Le rsultat ainsi obtenu tait assez
soires,

sorte de

.,

P
m pariait.
^

L'essor qu'a pris

d'examen

est

rcemment

cette

mthode

Fig. 121. Diaphragme pour fond


noir.

des causes multiples, dont

perfectionnement des sources lumineuses,


dcouverte du Trponme et enfin les travaux sur les vritables

les principales sont le


la

objets ullramicroscopiques.
L'clairage fond noir ncessite

une source lumineuse intense.

Aussi, tant qu'on en a t rduit l'emploi des grosses lampes


arc, celte mthode de recherches ne pouvait rellement entrer
la pratique courante. L'apparition des petites lampes arc
surtout de la lampe de Nernst, ainsi que des brleurs gaz

dans
et

manchon

(type droit ou renvers), donnant une lumire clatante,

a permis d'installer, commodment et sans grands frais,


rage trs suffisant pour les observations fond noir.

un

clai-

a provoqu la recherche d'un


de
diagnostic facile, rapide et sr. Il faut, pour colorer
procd
convenablement ce parasite et le dcouvrir dans une prparation,

La dcouverte du Trponme

une ducation technique que n'ont malheureusement pas tous les


Pour un oprateur un peu exerc et avec les mthodes

praticiens.

M. Langeron.

Prcis de Microscopie,

14

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

210

plus de cinq minnles pour colorer un


encore trop long lorsqu'on a de nombreux
malades examiner. L'emploi du fond noir est beaucoup plus

frottis

ne

il

actuelles,

iaiil

nanmoins

])as

c'est

rapide et tout aussi sr. Aussi l'usage universel qui en a t fait


jiour le diagnostic de la syphilis a-t-il grandement influ sur le

perfectionnement

et la simplificalion

des appareils. D'ailleurs tous

perfectionnements taient corrlatifs des progrs accomplis


dans le domaine de l'ultramicroscopie pure, qui est du ressort
de la physique et de la chimie. Les sciences biologiques ont
ces

profit des

lement

perfectionnements raliss dans l'tude des objets rel-

invisibles.

Dans

l'clairage fond noir, les objets api)araissent

sur

points brillants

comme

des

ciel constell

par une nuit claire et sans lune. On conoit que des


petits, trs difficiles colorer ou peu rfringents,

d'toiles

objets

un fond obscur, comme un

trs

deviennent
Voici

trs

facilement visibles grce cet

comment on

arrive le raliser.

arrter tous les rayons

On

ai tifice.

s'arrange de manire

lumineux qui pourraient pntrer direc-

On y

l'objectif.
parvient au moyen d'un diaphragme,
diamtre correspond l'ouverture de l'objectif et qui est
interpos, sous le condensateur, sur le trajet des rayons lumi-

tement dans
dont

le

neux. Par contre, l'objet examiner est clair viveuient par les
rayons qui traversent la zone annulaire entourant le prcdent
diaphragme. Cette zone est situe au del des limites de l'angle
d'ouverture de l'objectif.

Il

ne parvient donc, dans ce dernier,

aucun rayon lumineux direct; aussi le champ est-il parfaitement


obscur. De son ct, l'objet est clair par des rayons latraux
trs obliques qui subissent la rflexion totale (p. 48);

marche de ces rayons en

la

les

fait

les rfractant et

en

il

modifie

les dilractant et

pntrer ainsi dans l'objectif; cet objet parat donc brilclair sur le fond obscur. Le phnomne est analogue

lamment

celui qui se produit, lorsqu'un rayon de soleil pntre dans une


et illumine les poussires invisibles qui flottent

chambre obscure
dans

l'air.

faut donc, pour obtenir


les deux conditions suivantes
Il

dans

un bon clairage

fond noir, raliser

Empocher qu'aucun rayon du

faisceau clairant ne pntre

l'objectif;

2 Eclairer l'objet par des rayons latraux aussi intenses


que
possible.

ECLAIRAGE A FOND NOIR ET ULTRAMICROSCOPIE

214

Ces deux conditions sont ralises grce au phnomne de la


fondement de la mthode du

rflexion totale, qui se trouve tre le


fond noir.

II.

AP^PAREILS POUR L'CLAIRAGE A FOND NOIR

Nous n'tudierons
la

pratique

Toutefois,

complet,

ici

que

les appareils

fond noir applicables

courante.

tre
pour
nous dirons

nn mot des ullramicroscopes.


1

Diaphragme

fond noir.

Le plus

simple de tous ces appareils

est le

qui

se

diaphragme

place

condensateur

et

sous

le

qui

est

un perfectionnement de
l'ancien

diaphragme que
nous venons de dcrire
121). Le diaphragme

(fig.

fond noir de Zeiss est

construit exclusivement
Fig. 122.

pour tre associ des


condensateurs dont Tou-

Diaphragme fond noir de Zeiss avec


condensateur ordinaire de 1,10.

verture numrique n'est pas infrieure


appareil sur l'iris compltement ouvert

On

place

cet

installe d'abord

un

1,40.

on

disque toile, dont le bouton central doit tre tourn vers le


puis, sur ce premier disque, on centre un second disque de
plus grand diamtre. Ce centrage est le point dlicat de l'emploi
de l'appareil s'il n'est pas fait trs exactement, le fond noir ne se

haut

produit pas, parce qu'il arrive dans l'objectif des rayons lumineux
directs.

2"

Condensateur parabolique de Siedentopf

fig.

123):

Cet instrument, construit par Zeiss, est form d'une


(P) de verre, i)lan-convexe, dont la courbure est un parabolode de rvolution et dont le foyer se trouve en 0, au niveau
paisse len-

tille

du

porte-objet. Le

diaphragme B intercepte tous

les

rayons dont

LE MICUOSCOPE ET SES ACCESSOIRES

Cl

rouverUire numrique est infrieure 1,1- On obtient ainsi un


le fond noir par rflexion
clairage latral annulaire qui produit
totale des

rayons lumineux sur

celle des

l'air,

condensateurs

s})liriques,

Condensateur
I,

carts de

est plus

facile

manier que

les

parce qu'il supporte plus facilement des

P, parabolode
parabolique (Zeiss).
huile de cdre; O, prparation.

B, diaphragme

mise au point, c'est--dire des prparations plus ou

moins paisses.
Ce condensateur
place

du couvre-objet. La

rayons diffracts par Tobjet est reprsente en pointill.

Le condensateur parabolique

Fig. 123.

la sortie

clairants est indique par des traits pleins,

marcbe des rayons

s'introduit,

du condensateur ordinaire.

dans l'appareil d'clairage, la


doit tre remont au maximum,

Il

reli la face infrieure du porte-objet par


une goutte d'huile de cdre, condition indispensable pour que

de manire tre

l'clairage fond noir se produise.

En

effet,

dans

le

cas contraire,

rayons subiraient la rflexion totale avant de pntrer dans la


prparation et ne pourraient clairer les objets Cette couche de
les

liquide d'immersion est indique par la lettre I dans la fig. 123.


Les autres prcautions sont les mmes que pour le diaphragme

fond noir.
Les objectifs
leurs rsultats,

interceptant les

forts,

sec ou immersion, donneront de meil-

lorsqu'ils seront

munis d'un diaphragme

rayons marginaux.

central

ECLAIRAGE A FOND NOIR ET ULTRAM[CROSCOPIE


3

Ce

Condensateur miroirs concentriques de Jentzch.

condensateur est construit par Leitz.

rflchissantes,
(fig.

convexe

une interne

Il

et

possde deux surfaces


une externe concave

126).

Cet appareil s'emploie


forts, soit avec des

immer-

munis

d" un dia-

objectifs

sion

213

phragme
spcial

soit

avec des objectifs sec moyens ou

intrieur

(fig. 1^27),

de

faon arrter les

rayon marginaux

di-

rects et ne laisser

pntrer dans l'il


de l'observateur que
les

rayons

diffracl es.

Le condensateur
de Leitz existe sous

Fig.

1-2-4.

(Leitz).

Coudensateur miroirs concentriques


Grand modle pour la sous-platine.

deux formes. L'une


(fig.

124) s'introduit sous la platine, dans l'appareil d'clairage,


du condensateur ordinaire. Elle est munie de vis de

la place

centrage qui permettent un rglage parfait. L'autre

Fig.

1-25.

Condensateur

miroirs concentriques (Leitz).


sur la platine.

Petit

125)

est

modle, se

fixe

(fig.

monte sur une plaque qui se pose simplement sur la platine du


microscope, o on la fixe au moyen des valets. Le centrage se fait
la main; il est facilit par deux petits cercles
gravs la surface du condensateur (fig. 129). On met au point ces
petits cercles
avec des objectifs de |)lus en plus forts et on arrive ainsi, par ttonnements, un centrage suffisant. Un levier permet d'lever ou

244

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

(rabaisser lgrement le condensateur et ^ramener ainsi le


foyer au
centre de la prparation, pour les diffrentes
de
lames.
paisseurs
Chacune de ces deux formes

condensateur prsente des


avantages particuliers. Le grand
condensateur convient pour les
de

microscopes grands
peut

tre

centr

et

moyens;

facilement

il

et

avec prcision, grce aux trois vis


de rappel. Il permet, en outre, de

grands dplacements de la prparation et ne s'oppose pas Tusage


des platines chariot. Le petit condensateur

peut

tre

plac

sur

un microscope quelconque, mme


ne })Ossdant pas l'clairage Abbe.
Il

est plus diflicile centrer exac-

tement

et

on a de

Marclie des l'ayons dans


Fig. l'26.
le condensateur miroirs concentriques de Leitz.

dplacer, sans modifier

la prparation maintenue
des
valets et par Fadhrence
par
de rhuile de cdre. Nanmoins

trage,

ce condensateur peut rendre de grands services

de voyage

et

pour

peine
ce cen-

la

comme

appareil

les diagnostics rapides.

RElViRQUES CONCERNANT
TOUS LES APPAREILS A FOND NOIR
lit.

Dans tous ces appareils, sans


1 Production du fond noir.
aucune exception, le fond noir est produit par rflexion totale
des rayons, au moment o ils sortent de la lamelle pour passer dans
Tair. Ce phnomne est d ce que les rayons qui ont travers l'espace annulaire entourant le diaphragme ont pris, par
suite des rtlexions ou des rfractions, un angle suprieur l'angle
limite (v. p. 48).
2" Ncessit de

l'immersion du condensateur.

De

rsulte la ncessit absolue de relier la face infrieure de la


et la face

lame

suprieure du condensateur par une goutte d'huile de

cdre. Si on nglige cette prcaution,

la

rtlexion totale se produit

CLAIRAGE A FOND NOIR ET ULTR AMICROSCOPIE


la sortie
ration,

du condensateur

l/huile d'immersion

et

il

n\v a plus clairage de

doit tre

la

21

">

prpa-

trs fluide,

parfaitement
limpide et exemple de bulles d'air. On peut trs bien employer,
au lieu (rhuile de cdre, de Ihuile de paraffine, de la glycrine

mme

de Teau. Avec les condensateurs placs sous la idatine, il


pour viter les bulles d'air, d'abaisser le condensateur, de
mettre une goutte de liquide sur la lentille suprieure, une autre
sous la prparation, puis de remonter le condensateur avec la cr-

ou

suffit,

maillre, de faon obtenir

le

contact des deux gouttes.

Les appareils fond noir sont


paisseur des lames.
calculs de telle sorte que leur foyer se trouve 1 mm. environ
au-dessus de leur surface suprieure. Cette distance correspond
rpaisseur moyenne d'une lame. Il est donc ncessaire, pour
3"

obtenir des images parfaitement nettes, de se servir de lames dont


rpaisseur ne s'loigne pas trop de celle pour laquelle a t construit l'appareil.

Avec

condensateurs fond noir qui se placent

les

on peut remdier aux diffrences d'paisseur des


ou abaissant lgrement le condensateur, au
en
remontant
lames
la crmaillre. Parmi les condensateurs qui se fixent
de
moyen
sous

la

platine,

la platine, le }>etit modle de Leitz possde le grand avantage d'avoir un levier, permettant ces lgers dplacements verticaux. Avec tous ces appareils, on peut donc se servir de lames

sur

quelconques d'{)aisseur moyenne.


Au contraire, avec des modles plats,

tels

que ceux de Reichert,

qui ne peuvent se dplacer verticalement, il est indispensable de


n'employer que les lames calibres, livres avec l'appareil.
4

Minceur des prparations.

de dire dcoule

la

ncessit de ne faire

De ce que nous venons


que des prparations trs

minces. Si elles sont trop paisses, les parties qui se trouvent en


la zone focale ne peuvent tre mises au point et donnent

dehors de

lieu des reflets qui

gnent l'observation.

paisseur des lamelles.

Elle a

la

dans l'observation microscopique ordinaire


se sert de prfrence d'objectifs assez forts,

mme

importance que

84). Comme on
ne faut pas ngliger

(p.
il

compltement ces variations d'paisseur qui peuvent nuire la


nettet des images'. Il faut donc employer, autant que possible,
des lamelles de 170 a d'paisseur.
1. Ou trouvera des r^jles prcises pour dceler et
compenser les ditfrenccs
Siedentopf, Ueber mikroskopische Beobachtungen
d'paisseur des lamelles dans
bel Dunkelfeldbeleuclitung. Zeitschr. f. iviss. Miki:, XXY, p. -T/S-SS, 1908.
:

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

216

Les objets
6^ Milieu de montage des prparations.
examiner doivent tre monts dans l'eau ou Thuile de cdre, mais

jamais dans Vair,

ni

dans un milieu optiquement trouble; cette

ncessit dcoule des rgles prcdentes. Si Tobjet est mont


sec, dans Fair, il est clair que la rflexion totale aura lieu avant
d'arriver Tobjet et qu'on n'obtiendra

aucune image.

Si le milieu

optiquement trouble, les particules en suspension s'illumineront et masqueront la prparation.


est

et

Mentionnons ce propos Tinfluence perturbatrice des poussires


des bulles d'air. Il faut donc s'assurer de la propret mticu-

leuse des lames et lamelles, qui doivent avoir t laves Talcool


et soigneusement essuyes avec un cbiffon non pelucbeux.

Les petits grains de poussire, inclus dans la prparation, forment


autant de points lumineux qui peuvent tre une source d'erreurs.
Il en est de mme des bulles d'air. Dans la prparation elles s'illuminent; au contraire, lorsqu'elles se trouvent dans le liquide
d'immersion qui runit la lame au condensateur, elles causent des
voiles plus

ou moins notables, en dviant une partie des rayons

lumineux.
7o

Choix des objectifs.

Il

ressort des considrations tho-

riques sur l'clairage fond noir que les meilleurs objectifs


employer pour ces observations sont les sys-

tmes

sec

numrique

moyens ou

forts,

dont l'ouverture

n'est pas trop grande. Plus cette

ouverture est leve, moins

le

fond est noir,

parce que l'objectif admet alors un certain


nombre de rayons qui n'ont pas subi la
rflexion totale. Aussi, avec les objectifs

numimmer-

sec trs puissants grande ouverture


rique, et surtout

avec

les objectifs

sion, est-il ncessaire d'liminer les rayons

marginaux, en introduisant un diaphragme


particulier dans la monture de l'objectif

Fig. 127.
Diaphragme
intrieur pour objectif

immersion.

rants,

intrieurs doivent
(fig. 127). Ces diaphragmes
gnralement tre ajusts par le constructeur; ils sont amovibles ou non suivant
les cas.

Pratiquement, et pour les travaux couon emploiera donc les objectifs sec, associs des ocu-

laires trs puissants,

pour augmenter

le

plus possible

le

grossis-

CLAIRA.GE A FOND NOR ET ULTRAMIGROSCOPIE


sment. Si on veut employer les objectifs immersion,
dans leur tube un diaphragme amovible.

217
il

faut

faire placer

En outre, pour chaque appareil, on aura soin de se conformer


aux indications donnes par le constructeur, en notant bien que
l'emploi des apochromats est rserv aux recherches tout fait
dlicates.
8'^

Choix des oculaires.

Pour rgler l'clairage

mettre au

et

mais, pour observer, on devra


recourir aux oculaires les plus puissants, de manire compenser
le grossissement insuffisant des
objectifs.
point, on se sert docalaires faibles

90

Choix de

rants,

source lumineuse.

la

arc

les

lampes
d'ailleurs maintenant de
nent avec

les

Pour

les

ne sont pas indispensables


petites

lampes

travaux cou-

on construit

main qui fonction220 volts. Nanmoins

arc

courants ordinaires de 110 et

sources lumineuses les plus pratiques, au laboratoire, sont les

les

lampes de Nernst et les brleurs gaz intensifs manchons'. La


lampe de Nernst est une lampe lectrique, filament form
d'oxyde de zirconium et de thorium, donnant une lumire blanche
trs intense et trs fixe.

Il

faut savoir

que

cette

lampe ne s'allume

pas immdiatement; il est ncessaire que le fil de platine soit


d'abord port au rouge avant que lincandescence se produise.

Aprs un usage plus ou moins prolong, il peut mme arriver que


lampe ne s'allume plus seule dans ce cas, on dvisse le globe

la

avec prcaution,

rement

et,

le filament

aprs avoir tabli

dans

le

courant, on chauffe lg-

flamme d'un bec Bunsen l'incandesproduire et on remet de nouveau la lampe


la

cence ne tarde pas se


dans son globe. Toutes ces manipulations doivent tre excutes
avec beaucoup de soin, car cette lampe est trs fragile les secousses
:

dsagrgent rapidement les oxydes, font


poussire et la lampe devient inutilisable.

ne faut

tomber

Pour

la

fonctionner cet appareil que pendant


tement ncessaire pour ces oprations.
faire

Cette lampe est

le

filament en

mme
le

assez coteuse (20 fr.), mais elle

raison,

temps

il

stric-

consomme

relativement peu d'lectricit. Elle se fait en plusieurs modles,


suivant la nature et le voltage du courant (110 ou 220 volts).

Les brleurs gaz peuvent tre du type droit (genre Auer) ou


Ce dernier esl le plus commode, car il donne une source

renvers.

lumineuse plus intense


1.

La lumire

branche sur

le

troide

et

plus condense.

de Dussaud est conomique et pratique. L'appareil se

secteur lectrique.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

218

En

du laboratoire

dehors

notamment en voyage, on

el

procds de iorlnne que Fingniosil de chacun lui


Je
vais pourlaul en signaler quelques-uns, dont j'ai pu
suggrera.

emploiera

les

exprimenter

l'efficacit.

Un bon modle de hrleur

incandescence

est la petite

lampe

de projection
elle
marche au moyen d'une soufflerie en caoutchouc, genre thermocautre. Le manchon est petit, mais trs lumineux et en donnant

alcool qui est

au moyen de

employe pour

la

poire

une

les appareils

facilement transporlable

on arrive obtenir une

forte pression,

incandescence parfaite. Ce manchon,


il

sufft

mme

usag, peut devenir

pour cela de

le

tremper dans

nomm

un

soline qui lui reml sa rigidit et sa solidit


liquide
Les
premires.
lampes actylne de tous modles sont encore
plus })ratiques et donnent une excellente lumire. Notamment, les

lanternes de bicyclettes donnent de trs bons rsultats, elles sont


surtout recommander en plein air ou sous la tente. Pour l'intrieur des maisons,
portatifs,

il

est prfrable

moins sujets aux

de choisir d'autres modles

fuites.

A dfaut de ces appareils, on peut trs bien faire fonctionner le


fond noir avec une lampe ptrole ordinaire, pourvu quon se
place Vobsv.urit. Une grosse loupe ou un petit ballon rempli
d'eau suffit pour clairer le miroir. Avec ce dispositif trs simple,
on peut faire d'excellentes observations dans une chambre

obscure.
10''

Installation et centrage de la source lumineuse.

Ces oprations sont de premire importance, car le meilleur clairage donnera des rsultats trs mdiocres s'il n'est pas soigneuse-

ment centr.
Le centrage

s'effectue en

deux temps

on centre d'abord

rage, puis le condensateur fond noir.


a. Centrage de la source lumineuse.

de

lentille condensalrice, le

ne se sert pas

soumis aux mmes rgles


commence donc par centrer avec

centrage est

que pour le microscope. On


ou sans condensateur ordinaire, comme

il

a t dit p. 43. Puis,

microscope, ni la source lumineuse, on installe


condensateur fond noir. Employer le miroir plan.

sans dplacer
le

Si on

l'clai-

Si

on se sert d'une

lentille

condensalrice (ou d'une boule rem-

faut rgler les positions de la lam]>e, de la lentille et


microscope, de manire ce que toute la surface du miroir

plie d'eau)

du

le

plan

soit

il

parfaitement claire.

Il

est

notamment indispensable

ECLAIRAGE A FOND NOIR ET ULTRAMICROSCOPIE


les

que

219

bords du miroir soient clairs trs uniformment. Pour

la lentille ou la boule de verre 15 ou 20 centimtres


du microscope. Le miroir de ce dernier tant inclin 45", il est
ncessaire que la lentille lui soit parallle et soit
place peu prs au niveau de la platine. La
-j

cela

on place

lumineuse

source

de

environ

Fig. 128.

la

est

:20

place

lentille,

centimtres

exactement son fover

clairage du condensateur fond noir avec une lampe de Nernst et


une lentille condensatrice.

juincipal (p. 45). Elle est place

un peu haut, de

telle sorte

que

lumineux soit dirig, de la lampe au miroir,


trajet des rayons
suivant une ligne droite, faisant un angle de 45" environ avec le
le

plan de

la

table (fig. 128).

boule d'eau de Zeiss ou celle qu'on peut raliser plus


simplement avec un gros ballon de verre de un

Avec

la

ou deux
colore

litres,

en bleu

rempli d'eau trs lgrement


par une petite quantit de

sulfate de cuivre,

une hauteur

il

vienne se former sur

le

suffit d'lever la

suffisante
le

pour que

lampe

son image

miroir plan.

Pour contrler l'clairement du miroir on


recouvre d'un morceau de carton blanc. On

approche ou on loigne

le

Fig. 129.
Aspect
des cercles de re-

pre des condensateurs fond noir.

microscope, jusqu'
surface du papier, correspondant au
miroir, soit exactement couverte d'un cercle lumineux bien uniformment brillant. Par quelques ttonnements on rgle ensuite
ce

la

que

la

du miroir.
Centrage du condensateur fond noir.

position dfinitive
h.

La plupart des

condensateurs portent, gravs sur leur face suprieure, un ou

deux

petits cercles (fig. 129).

Il suffit,

aprs avoir rgl l'clai-

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

220

rage, d'amener ces cercles bien au milieu du champ

^,

d'abord

avec un objeclif faible, puis de parfaire ce cenlrage avec des


on s'efforce, avec un
objectifs plus forts. A dfaut de cercle grav,
objectif trs faible, de mettre au milieu

du champ l'espace circu-

obscur qui correspond au diaphragme de l'appareil. Lorsqu'il


sur les vis de centrage
s'agit d'un condensateur conique, on agit
avec un condensateur platine, on fait subir cette platine de
laire

dplacements antro-postrieurs
du centrage.

petits

tion

IV.

et latraux

jusqu' obten-

TECHNIQUE DE L'EXAMEN SUR FOND NOIR

Cette technique est des plus simples. L'objet examiner est


gnralement une srosit ou un liquide de l'organisme, dans
lequel on recherche des lments figurs, parasitaires ou non.
L'examen sera donc toujours fait dans un liquide, de manire

empcher

la

rflexion totale des rayons avant

que ceux-ci n'ar-

rivent l'objet. Si le prlvement du liquide organique est insuffisant, on diluera donc avec de l'eau distille, de la solution

physiologique ou du srum naturel. Dans d'autres cas, l'objet sera


plong dans un milieu plus rfringent (huile de cdre, baume du

Canada,

etc.).

soit le hquide employ, la prparation devra tre


mince, de manire viter autant que possible les reflets

Quel que
trs

qui peuvent gner l'observation.

Mise au point.

La prparation tant acheve et au besoin


convenablement lute, on la porte sur la platine. On a eu soin de
mettre une gouttelette d'huile de cdre bien fluide au milieu de
la

face

infrieure de

la

lame

une autre gouttelette sur

et

le

condensateur. Le contact de ces deux gouttes assure la continuit optique et, grce cet arlifice, on vite la formation de
(voir plus liant p. 215). On met alors au point
d'abord avec un objectif faible (obj. 3 et oculaire 0). Si le miroir
est bien orient, on doit apercevoir une tache au milieu du

bulles d'air

champ. Cette tache, qui correspond l'image de la source lumineuse, doit tre rendue aussi petite que possible par de lgers
mouvements verticaux du condensateur. On remplace alors l'ob1. Ces cercles ne sont visibles
que
recouverte d'huile de cdre.

si

la

surface du condensateur n"cst pas

ECLAIRAGE A FOND NOIR ET ULTRAMICROSCOPIE


par un objectif puissant, combin avec

jectif faible

laire. Si le contraste n'est

un

fort

221

ocu-

on ramliore par de lgers


miroir, verticaux pour le condenclairs uniformment, sans fais-

pas parfait,

mouvements, latraux pour

le

sateur. Les objets doivent tre


ceaux dvis, ni franges colores.

Lorsque

Aspect du champ.

sont corrects, on aperoit, sur


points

ou

le

centrage et la mise au point


noir, des taches et des

un fond

lumineux mobiles

immobiles.

faut

Il

savoir reconnatre,

parmi

ces taches, celles qui sont


dues aux dfauts du verre

aux grains de pouspour cela, on examine une prparation faite


et

sire

simplement en mettant
une goutte d'huile de
cdre entre lame et lamelle.

Parmi
biles,

les

les

lments mo-

uns sont sim-

plement entrans par des


courants dus la capillarit et la dessiccation

les
autres
progressive
sont rellement anims de
,

mouvements

propres.

Il

Fig. 130.
Aspect de la srosit d'un chancre
syphilitique, examine avec l'clairage fond
noir.

faut alors savoir distinguer le

mouvement

brownien de certaines particules des mouvements vritables des


organismes mobiles.
Nous indiquerons, en traitant des mthodes spciales, la
manire d'examiner sur fond noir les divers lments figurs.

V.

INDICATIONS

DE L'EMPLOI DU FOND NOIR

L'clairage fond noir est trs sduisant par son apparente


simpheit, aussi a-t-il donn lieu, particulirement dans le monde
mdical, un vritable emballement. Ce procd rend videm-

ment de grand
courante,

il

services; mais, en

doit rester

ce qui concerne la pratique


une mthode de diagnostic et ne peut sup-

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

222

mthodes de recherche. En

planter les autres

ce

effet,

mode

d'clairage ne produit pas une augmentation du pouvoir rsolvant


(p. 58), mais seulement une amlioration de la visibilit^ par
suite

du contraste entre

obscur.

En

outre,

les ohjets

fortement clairs

pour interprter correctement

et le

les

fond

images

faut connatre d^avance la strucmthode, loin de dtrner les


anciens procds optiques, suppose au contraire une connaissance
parfaite du microscope et notamment une longue pratique de

donnes par le fond noir,


ture de Vobjet tudi

il

cette

l'examen

hou

l'tat frais,

sans coloration, en lumire ordinaire.

d'insister sur ce point, car des observateurs

un peu

11

est

superfi-

ont une tendance prconiser l'examen sur fond noir au


lieu et place de toute autre mthode. Entre des mains habiles, le

ciels

fond noir est apjtel rendre des services importants et montre


des dtails que l'clairage central ordinaire est impuissant
rvler.

i\lais le

dbutant doit tre mis en garde contre

les

sources

d'erreur trs nombreuses, caches sous la sim})licit trompeuse


de cet artifice d'clairage. Meyer a publi rcemment ', sur ce
sujet,

une critique svre, mais

juste, dont la lecture est

recom-

mander.
Ces rserves

faites,

tique du fond noir

disons que

est la

la

principale application pra-

recherche, dans les liquides organi-

ques, d'lments trs petits, peu rfringents et trs dissmins,


qui seraient peu distincts ou mme invisibles avec l'clairage ordinaire et qui deviennent facilement visibles lorsqu'ils sont vivement
clairs sur fond obscur.

Le type de

sent par le diagnostic de

la

cette

syphilis,

recherche est repr-

que nous dcrivons en

dtail p. 513.

Pour tout le reste, il faut user du fond noir avec circonspection,


s'exercer d'abord avec des objets parfaitement connus, bien dcrits
dans les livres et dont on a tudi soigneusement la structure en
lumire centrale. C'est alors seulement qu'on pourra se risquer
examiner des objets plus difficiles on arrive ainsi aux confins d'un
:

domaine accessible seulement une

lite, et dans lequel le fond


noir est certainement ap}el rsoudre beaucou}) de difficults et
tendre notablement les hmites de la visibilit.

Un
ment
1.

des cueils de cette mthode est

Meyer, Aussehen der Bakterien

Uuhde,

la

part qui revient forc-

l'interprtation jtersonnelle dans l'tude

XXIV,

p. 76, 1911.

iiu

de prparations

Ullramikroskop. Avchiv

f.

Prolisten-

CLAIRAGE A FOiND NOIR ET ULTRAMICROSCOIME

223

vivantes et mobiles, dont il ne reste rien lorsque Tobservatioa est


termine. Ces conditions rendent le contrle et la critique des

de
particulirement difficiles, puisque rien
de
document
servir
ne
subsiste,
justificatif
qui puisse
permanent
et de matriel de comparaison.

obtenus

rsultats

prudent en interprtant les rsultats


obtenus par ce genre d'examen, et n'accueillir qu'avec beaucoup
de rserves les publications qui ne se prsentent pas avec la
11

faut

donc

tre

trs

garantie d'une comptence indiscutable.


Pour })rouver combien sont difficiles les recherches qui sortent
de la pratique du diagnostic, je mentionnerai, par exemple, outre
cits plus haut, ceux de K. Reichert sur les
les travaux de

Meyer

Bactries

cilies

En

montrent que ce sujet dpasse dj la


chercheurs bien

Ils

technique courante

n'est accessible qu' des

et

de ces cils ne dpend ni des prodes proprits osmotiques du liquide dans


des
lequel on les examine, mais bien des proprits chimiques
renmilieu
Il
faut
le
dissolution.
tient
en
substances qu'il
que

entrans.

la visibilit

effet,

prits optiques,

ni

une substance collode qui favorise la coarende ainsi plus visibles. Les non-lectrocils invisibles, tandis que les acides
lytes et les bases rendent les
et les sels sont les corps les plus favorables. Le meilleur milieu
ferme un leclrolyte

lescence des

et

cils et les

pour l'observation des

cils

des Bactries se trouve tre Teau de

glose ou la glatine nutritive, dilue avec son


volume de bouillon. Les mordants, tels que le liquide de Zeltnow,
trs visibles et aussi
produisent le curieux effet de rendre les cils

condensation de

nets

que dans

concerne

la

les

meilleures prparations colores. P^n ce qui


Duboscq estime que l'clairage fond

les Protozoaires,

noir peut rendre des services considrables, par exemple pour la


la nature des mouvesystmatique des Spirochtes, chez lesquels
ments fournit de bons caractres dislinctifs. Certains dtails des

ne peuflagelles, cils, pseudopodes, etc.,


vent tre rvls par le fond noir. Mais, ici encore, nous touchons
des questions trs dlicates, accessibles seulement aux cher-

membranes, myonmes,

cheurs
1.

trs spcialiss.

und die GeisselCentralblatt fur Bakteriologie, Orig., LU, p. 14-94, 1909.

K. Reichert, Ueber die Sichtbarmachung der Geisseln

bewcgung dor Baktericn.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

224

VI.

NOTIONS SUR

L'

U LT R AM C R
I

OSC O P

L'ultramicroscope est destin rendre visibles les objets trop petits


pour lre vus avec les grossissements microscopiques dont nous disposons actuellement. C'est donc un instrument bien diffrent du fond
noir, qui sert observer des objets dj visibles au microscope. Michaelis i a montr en effet que rultramicroscope donne, avec ces objets, des
images dont les contours ne sont pas nets, mais entours de nombreux
anneaux de diffraction. 11 donne comme exemple les leucocytes et les
hmaties. Gaidukov insiste sur le mme inconvnient et dclare que
l'ullramicroscope ne peut convenir pour le travail courant.
Pour dfinir l'objet ultramicroscopiques, il faut connatre la limite
de visibilit des objets microscopiques. Cette limite dpend, d'une part,
du pouvoir rsolvant du microscope, d'autre part de la constitution de
il est vident
l'il humain. Parlons de ce dernier
que, pour apprcier
:

qui spare deux points, il faut que cette distance soit plus
grande que l'espace qui spare deux lments sensibles de la rtine.
Nous ne pourrons donc pas distinguer les limites d'un objet, si ces
limites sont comprises dans un espace d'tendue infrieure cette
donne anatomique. En ce qui concerne le microscope, nous avons dit
(p. 71) que ce qui importe n'est pas le grossissement linaire, mais le
pouvoir rsolvant, et nous avons tabli les limites de la rsolution des
meilleurs objectifs. Nous savons que, praliquement, celte limite est de
5 et que, dans certaines conditions particulires, elle peut tre diminue de moiti et porte
25, soit un quart de micron. Ce dernier
chiffre ne peut tre obtenu qu'avec l'clairage monochromatique ultraviolet et l'image ne peut tre vue que par l'intermdiaire de la plaque
photographique (p. 73 et 79).
Il faut
non seulement envisager ces conditions, mais encore la
la distance

[j,

ij.

manire dont se forment les images microscopiques. Nous avons vu


que l'optique gomtrique n'en donne pas une explication complte. Il faut encore tenir compte du mouvement ondulatoire des rayons
lumineux, mouvement (jui se traduit par des phnomnes de diffraction.
En effet, pour un point suppos lumineux par lui-mme, l'image obtenue
n'est pas un point, mais une tache circulaire, forme par les cercles de
diffraction. Lorsque le point est trs petit, l'image devient une petite
tache ple et diffuse, dont la nettet n'augmente pas avec le grossissement du microscope. De plus, au-dessus de la limite de rsolution que
nous avons indique (0 25), la tache cesse compltement d'tre visible.
Or les objectifs actuels ont t tellement perfectionns, qu'on est arriv
atteindre la limite thoricjue impose par la constitution mme de la
(p. 62)

[j,

lumire, quelles que soient les radiations employes. Aussi, pour voir
ultramicroscopiques, c'est--dire celles dont les dimensions sont une fraction de micron, qui peut mme descendre au millionime de millimtre, a-t-il fallu chercher un procd dtourn.
On est arriv rendre visibles ces particules au moyen de l'clairage
les particules

1.

Michaelis, Ultramikroskopische Untersucliungen. Virchow's Archiv,

p. 195-208, 1905.
. Cf. p. 208, note 1.

CLXXIX,

CLAIRAGE A FOND NOIR ET ULTRAMICROSCOPIE

225

par un procd analogue celui du fond noir. Mais il faut Lien


savoir que cette visibilil est d'une nature toute spciale et qu'elle
exclut absolument toute lude morpliolog-ique. C'est l ce qui constitue la
latral,

diffrence fondamentale entre le fond noir et l'ulirainicroscope. Dans le premier, l'objet est encore dfini morphologiquement, on peut le recon-

Dans le second, l'objet n'est


pas dfini; son existence nous est simplement rvle par illumination, sans que nous ayons aucune notion de sa forme. Nous ne voyons
pas l'objet qui est et restera toujours au del de notre visibilit, mais
nous percevons les rayons difi^racts par lui. Ce phnomne est tout
fait analogue celui qui nous permet de voir facilement, l'il nu, des
toiles dont les plus puissants tlescopes ne nous pernieltent pas de
dterminer la forme et les dimensions. Il suffit que ces toiles mettent
une quantit de lumire capable d'impressionner la rtine. Elles sont
d'autant plus visibles que le fond du ciel est plus obscur.
Il ne peut tre question de dcrire ici les ultramicroscopes. Nous nous
contenterons de mentionner les principaux dispositifs.
Le condensateur cardiode i
Ultramicroscope cardiode de Zeiss.
ressemble beaucoup au condensateur splirique de Leitz; on l'emploie
avec l'arc lectrique, pour l'tude des mouvements browniens et des collodes liquides. L'avantage de cet appareil rside dans sa simplicit
relative. Les prparations sont faites entre lame et lamelle. L'inconvnient rsulte des attractions exerces par la lame et la lamelle sur les
natre et l'tudier, quoique imparfaitement.

particules ultramicroscopi([ues, ce qui trouble la fois Tclairage et la


concentration du collode. On obvie ce dernier inconvnient par
l'emploi de chambres en quartz.

Le condensateur est remUltramicroscope de Cotton et Mouton -.


plac par un bloc de verre de forme paralllipipdique. La lumire
pntre dans ce bloc par une face oblique, normale la direction des
rayons, puis est rflchie totalement par la face infrieure. Une nouvelle
rflexion totale se produit la face suprieure de la lamelle, de telle
qu'aucun rayon lumineux ne peut pntrer dans l'objectif. Cet
appareil a l'avantage d'une grande simplicit. Mais il prsente, ou point
de vue de la prparation, les mmes inconvnients que le cardiode. Le
faisceau dilTract n'est ni dans l'axe du faisceau clairant, comme dans
sorte

les

condensateurs sphriques, ni perpendiculaire cet axe,

les appareils fente.

comme dans

Dans cet
Ultramicroscope fente de Siedentopf et Zsigmondy.
appareil, le liquide examiner n'est plus enferm entre lame et lamelle,
mais dans une cellule de forme particulire. Cette cellule est claire
par un faisceau lumineux qui traverse d'abord une fente rglable, puis
un objectif qui projette une image trs rduite de celte fente. On arrive
ainsi raliser, dans les liquides ou les solides, des coupes optiques
trs

minces. Cet appareil est

le

seul qui permette l'examen des collodes

solides.

Les ultramicroscopes proprement dits n'ont encore rendu que bien


peu de services aux sciences biologiques, du moins au point de vue
1. La surface rUcchissaule concave de ce condensateur devrait tre, tlioriquement, une courjjc cardiode, d'o le nom donn cet instrument pour le distinguer
des autres condensateurs sphri([ues.
2. Cotton et Mouton. Les uliranncroscopes, Paris, Masson, 1906.

M. Langehox.

Prcis de Microscopie.

15

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

226

La cause en

est surtout dans l'impossibilit de dterminer la


observs. Ce grave inconvnient est irrmdiable,
puiscju'il rsulte du principe mme de la mthode. Il s'opposera toujours l'tude approfondie des ])arasites, dits invisibles, dont le rle
apparat dj comme trs considrable en pathologie Par contre,, l'ultramicroscope a fait faire quelques progrs nos connaissances sur la
structure du protoplasme, en nous rvlant la constitution des collodes
inorgani(jues et en nous permettant ainsi d'aborder l'tude de la matire
collodale vivante. L'ultramicroscope nous a difi aussi sur la nature des
particules animes du mouvement brownien; il nous a appris que ces
corpuscules sont de dimensions ullramicroscopiques. Si nous les apercevons quelquefois, dans les prparations claires par un faisceau central ordinaire, c'est qu'elles sont illumines par des rayons obliques et
deviennent visibles par diffraction, sans que nous percevions leur forme
vritable. Il faut bien connatre la nature de ces particules, animes
parfois d'une trpidation intense et de vritables mouvements de loco-

pratique.

forme des objets

motion

il

ne faut pas

figurs vivants, dont les


les agents fixateurs.

Quoi

qu'il

en

soit,

les

les

confondre avec de vritables organismes


arrts par

mouvements sont immdiatement

ultramicroscopes sont encore en dehors du

domaine pratique des travaux de microscopie.

Si nous en avons parl


avec ({uelques dtails, c'est pour bien montrer quelle diifrence il y a
entre ces appareils et les systmes fond noir et remdier aux confusions qui se sont produites ce sujet.

CHAPITRE XIX

APPAREILS ACCESSOIRES

la

Je serai trs bref au sujet de ces appareils, car je considre


que
}luparl d'entre eux sont superflus, surtout pour le travail

courant.
Je signale, sans le dcrire, V opak-illuminator C'est un
dispoqui permet d'examiner des objets opaques en lumire rtlchie,
.

sitif

mme

avec de puissants objectifs court foyer;


moyen d'un prisme rflexion

il

consiste

clairer l'objet au

qui se trouve dans la monture de l'obau-dessus des lentilles. Ce prisme reoit


latralement l'clairage de la source lumineuse.
totale

jectif

Cet appareil est surtout employ dans

la

mtal-

lographie microscopique.
Un accessoire trs important, pour les micrograplies qui sont obligs de se livrer l'ensei-

gnement, est oculaire indicateur (fig. 131)


Le principe en est trs simple c'est un oculaire
:

Oculaire
Fig. 131.
indicateur.

ordinaire, dans lequel se trouve, dans le plan


du diaphragme, une aiguille indicatrice. Avec cette aiguille,

on

peut montrer l'lve un point prcis d'une prparation. Grce


cet accessoire, on peut pargner un temps considrable dans les
l'lve a compris, en lui
sur
point
lequel on l'interroge.
Le plus simple de ces oculaires est celui de van Walsem
le construit, au moyen d'un oculaire quelconque, en perant un

dmonstrations
faisant

et

on peut s'assurer

montrer avec

si

l'aiguille le

^On

petit orifice

cetorihce on
1.

dans
fait

Van Walsem,

Zeitschr.

du diaphragme. Dans
une
passer
pingle qu'on peut enfoncer plus ou
le

tube, juste au-dessus

Uebcr

eiu

cint'aehstes

wiss. iMilcr.^XXl, p. 171,

1904.

fakultalives

Demonstratiousokular.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

228

moins. R. de Sinty
place au-dessus du diaphragme un mince
anneau de lige, dans lequel il pique une trs fine aiguille.
Les conslrucleurs fabriquent presque tous des oculaires indica'

leurs plus ou moins conqdiqiis. Les meilleurs sont naturellement


est mobile, ce qui pei'uiet d'atteindre tous les

ceux dont Taiguille


points

du cbamp optique, en combinant

avec un
Leitz

mouvement de

la

manuvre de Taiguille
Nous figurons celui de

rotation de l'oculaire.

131), dont on man(puvre Taiguille au moyen d'un levier.


est destin reprer exactement la position des

(fig.

Le marqueur

objets dans une prparation. Nous savons


dj effectuer ce reprage au moyen des
verniers de la platine chariot, mais nous
avons fait remarquer (p. 16) que ce procd
n'tait

pas toujours fidle et ne pouvait

que pour un seul microscope. Le


marqueur permet de tracer sur la prparation elle-mme un petit cercle visible

servir

y a beaucoup de ujoiJles de
marqueurs un des meilleurs est celui qui
possde une pointe de diamant (fig. 132).
l'il

nu.

11

v^

Marqueur
Fig. 1.3'2.
pointe de diamant.

On

On le visse la place de Tobjeclif, dont il


a la forme, et, en faisant tourner la pointe,
on trace un petit cercle sur la prparation.

du champ optique.
dfaut de marqueur, ou aura recours, pour retrouver un

a eu soin de mettre l'objet bien au centre

point dans

une

pri)aration,

aux

petits

moyens

trs simjdes

que

on
suggrera. En voici quelques-uns
sur
la
tracer
un
cercle
avec
une
et
de
l'encre
lamelle,
peut
plume
indlbile (p. 455), en se servant d'un ol)jectif faible. Pour les

l'ingniosit de

chacun

lui

frottis, on peut tracer ce cercle sous la lame ou, plus sim[dement


encore, dans le frottis lui-mme, avec un crayon trs dur ou une

On peut aussi faire une marque l'encre, sur


lame, en face du point intressant. Pour faciliter

aiguille.

de

la

le

le

bord
trac

exact et l'utilisation conscutive de ces signes, on peut graver, avec


une pointe d'acier, un ou plusieurs traits de repre sur la platine
et faire
la

ploi,
1.
.

concider avec ces traits les signes inscrits sur le bord de


la platine carre et fixe dont
je recommande l'em-

lame. Avec

on

trace

une ligne mdiane, antro-postrieure, ou deux

Strasburger. Das botanische Practicum. .Tona.

684.

Fischer.

4''

cdit.,

1902.

cl'.

229

APPAREILS ACCESSOIRES

mieux encore quatre lignes se coupant 45,


mthode de Vesco\ . Pour tracer exactement ces lignes,
Ciirreri- conseille de les dessiner d'abord sur un carr de papier
de la dimension de la platine. Pour centrer le papier, on perce au
oy
lignes eu croix
suivant

la

milieu un trou avec une fine aiguille et on centre avec un objectif


moyen. On marque alors, sur la platine, des points correspondant
aux extrmits des lignes; il ne reste plus qu' runir ces points.

Pour centrer

la jdatine

Fig. 133.

On

de nouveau, on emploie

le

mme

artifice.

Platins chauffante de Malassez.

repre les prparations au

moyen de

trois points

correspondant

trois lignes contigus.

Enfin, rap}areil dit chercheur Mallawod et les appareils simipourront rendre des services. Thoriquement les verniers

laires

des platines chariot devraient suffire au reprage. Malheureusement, comme il a t dit (p. 16), leur emploi est peu pratique et
les indications qu'elles donnent n'ont de valeur que pour un seul

microscope. On })eut faire de mme avec les platines tournantes,


mais il faut les centrer soigneusement chaque fois, si on veut
utiliser les repres.

11

est vident que, sans cette prcaution,

on

n'arrivera pas retrouver le point cherch.

Les platini's chauffantes peuvent rendre de rels services dans


examens l'tat frais, aussi je ne puis les [)asser sous silence.

les

1. De Vcsoovi, Un
semplicissimo marcatoro goomctrico per micrografia. Zool.
Anzeiyer, XV, p. 203, 180-2.
2. Curreri, Metodi vecchi e uuovi por dctcrniinare e ritrovare la posizione di
uno o pi piuiti iateressanti di jircparati microscopici. Richcrche lahor. anat. noi-m.
Roma, XII, p. 53-85. pi. III, 1906. Trs important mmoire o tous les appareils
de l'eprage sont passes en revue. Bibliographie trs complte.

LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

230

La plus simple est celle de Malassez ((ig. 133). Elle se compose


d'une plaque mlalliijue surmonte (Tune petite chambre, mtallique aussi. On introduit la prparation latralement et on la fixe
'

au moyen de deux petites portes coulisse. On peut aussi glisser


un thermomtre dans !a chambre. Le chauffage se fait par conau moyen d'une lamelle mtallique articule, qu'on
chauffe directement et dont on peut modifier la longueur suivant
la temprature dsire. La source de chaleur sera une
lam[)e-

ductibilit,

alcool ou

un bec Bunsen

petite

flamme.

La platine de Schullze est base sur le mme principe, mais elle


est un peu moins pratique. La jjrparation n'est pas enferme
dans une cham])re, aussi

Parmi

celles de Pfeiffer,

1.

le

chauffage est-il moins rgulier.


me bornerai citer

les platines circulation d'eau, je

de Strickcr

et

de Ranvier.

C. n. Soc. biol, 7 juillet 1886; Arch. de physiol., p. 271-273, 1886.

DEUXIME PARTIE
r

METHODES GENERALES

CHAPITRE PREMIER

BUT DE LA TECHNIQUE
MICROSCOPIQUE
L'tude du microscope nous a montr que les objets, observs
avec cet instrument, doivent tre trs minces et trs transparents.
Nous savons, en efet. que. dans l'immense majorit des cas, ces
objets sont examins en lumire transmise. L'emploi de la lumire
rflchie est trs rare; il ne s'applique gure qu' Ttude des

Arthropodes, pour laquelle on se sert de prfrence de loupes ou


de microscopes binoculaires.

On

ne peut donc observer au microscope, en lumire transmise,


des
que
prparations suffisamment minces pour permettre la
lumire de les traverser et aussi pour ne pas empcher l'emploi
d'objectifs puissants, courte distance frontale.

La plupart des objets ne pourront donc tre observs tels


si on les examine l'tat frais, il faudra
qu'ils soient

Mme

quels.
disso-

ou rduits en tranches minces, pour permettre de les enferet lamelle.


Nous devrons donc tudier tout
d'abord les procds cVexamen Vtat frais^ soit des objets tels
cis,

mer

entre lame

quels, soit aprs dissociation ou dilacration.


Mais cet examen ne saurait nous donner des prpai'ations dfi-

MKTIIODES (JKNIIALES

232
nilives, susce|li!)les

(r^lrc conserves on eoUeclion

il

esl

lmi

outre insuffisaiU pour nous montrer tous les dtails de Forganisalion. Nous savons (juc la })lu|)arL des objets doivent tre
colors,

de faon

donner une image par absorption, beau-

coup moins sujette aux


rfraction et

diffraction

vitales, qui rentrent

illusions d'optique
(p.

157).

dans Texamen

tudier les diverses mthodes de

que

les

Aussi, outre les


l'tal frais,

images par
colorations

devrons-nous

coloration qui constituent

base de la technique microscopique moderne.


Ces colorations ne peuvent tre faites que

la

sur du matriel

convenablement tu, fix, et ventuellement rduit en tranches


ou coupes t's minces. Nous devrons donc tudier successivement

maniire de tuer les animaux, les procds de fixation, la


mthode des coupes et les mthodes de coloration, auquelles se
joignent les mthodes d'imprgnations mtalliques. L'objet, une
fois color, doit tre plong, pour l'observation, dans un milieu
la

qui l'imprgne compltement et dont l'indice de rfraction soit tel


de voirie plus possible

qu'il permette, sans nuire la transparence,

de dtails de structure. Nous devrons donc consacrer un chapitre


particulier

aux

mthodes de montage

et

aux divers milieux

ou mdiums.

La technique microscopique est donc l'ensemble des procds


permettent d'tudier un organisme vivant, d'examiner des

(jui

tissus frais, puis de les fixer, de les rduire en

tranches minces,

monter en ])rparations dtnitives. Chacune


de ces oprations s'effectue grce des mthodes physiques ou
chimiques, dont l'ensemble constitue la technique moderne. Ainsi
que nous l'avons dit dans l'introduction, nous tudierons d'abord
les mthodes gnrales, qui peuvent convenir la
grande majorit

de

les colorer et

des cas

Dans

la

de

les

et avec lesquelles l'lve devra d'abord se familiariser.


troisime partie, nous dcrirons les mthodes spciales

chaque groupe d'tres organiss. Ds maintenant, nous pouvons


dire que les mthodes gnrales sont applicables la fois aux
vgtaux et aux animaux. Il n'y a pas, en ralit, une technique
botanique et une technique zoologique; les mmes procds gnraux de technique microscopique peuvent tre appliqus ces

deux groupes

d'tres. 11 n'y a de diffrences que pour les procds


spciaux dont nous traiterons sparment.
Nous ne saurions trop rpter ici ce que nous avons dit dans
notre introduction, savoir que la
technique est un moyen et non

BLT DE LA TECHNIQUE iMICIlOSCOPlQUE


une

lin.

La

lin, c'est

avant tout

la

connaissance exacte de

233
la

struc-

ture intime de Fobjet tudi, en tant que cette structure nous


permet de connatre et de comprendre les phnomnes biologiques.

La prparation,
soit, n'est que

bien excute et

si
agrable regarder qu'elle
de
parvenir cette lin. Voil ce qu'il
moyen
ne faut pas oublier, si on veut faire de bonne besogne scien-

tifique.

si

le

CHAPITRE

II

LA PRPARATION MICROSCOPIQUE

Faire une prparation microscopique consiste, le plus souvent,


l'o])jet examiner entre deux lames de verre \ De ces

enfermer

deux lames, Fune


plus simplement

sert supporter
l'objet,
la

lame

c'est

ce

c'est le porte-objet

dernier vocable

emploierons toujours. L'autre sert couvrir l'objet, elle


trs mince et se nomme
couvre-objet ou lamelle nous

ou

qne nous
est en verre

la dsignerons toujours par ce der:

LA PRPARATION MICROSCOPIQUE

23^

dernires sont plus lgantes et permettent d'employer la tournette pour faire des bordures bien rgulires. Pourtant, j'ai

toujours vu la majorit des travailleurs employer des lamelles


ce sont celles dont je me sers toujours el dont je recomcarres
:

On proportionne les dimensions de la lamelle la


surface de Tobjet recouvrir. Les deux formats carrs conviennent
pour des objets isols ou des lments en suspension dans un
mande

l'usage.

liquide. Les grandes lamelles rectangulaires s'emploient surtout


les

pour

coupes.

Un

point important est l'paisseur des lames et des lamelles.


fera bien de s'en tenir, pour les unes et les
autres,

un

cliiffre

moyen. Une paisseur

On

trop

sans grand bnfice


augmente
au point de vue optique. Pour les lamelles, il
faut se rapprocher autant que possible du chiffre

faible

la fragilit,

moyen pour
corrigs.

lequel les objectifs puissants sont


avons vu (p. 84) rintluence

Nous

^-^-^-^^,^.,

fcheuse que des lamelles trop paisses ou trop


minces peuvent
exercer sur la nettet des
'
.

,.

pig. 135.

mme

temps

^^"^^ raicooi.

principaux procds permettant de mesurer


l'paisseur des lamelles (p. 86).
les

Nous indiquons plus


lames

el

loin (p.

236)

les

des lamelles. Notons bien

ici

ne

Bocaux

pour eonserver les lames


et
les
lamelles

images. Nous avons nidique en

^^'^i^s

procds de nettoyage des

mme

que,

neuves, elles

quelles. Toujours elles sont


peuvent
employes
il est donc indissouilles de poussires et de matires grasses
pensable de leur faire subir au inoins une immersion pralable
tre

telles

dans

l'alcool.

Lames

d'o on les sort au

el lamelles seront

moment de

conserves dans ce liquide


on les essuie alors

s'en servir

avec un linge propre, doux et non pelucheux. On placera donc,


sur la table de travail, les lames et les lamelles dans une srie de

bocaux droits (hg. 135), bouchs Fmeri


bocaux au fur et mesure des besoins.

on puise dans ces

L'objet peut tre mont entre lame et lamelle, soit dans l'air, ce qui
cas le plus rare, soit presque toujours dans un milieu liquide.
Parmi ces derniers, les uns sont solidifiables, soit par refroidissement,
soit par vaporation, les autres sont des solutions aqueuses. Dans le

est le

cas, il suffit de laisser refroidir ou scher la prparation; dans


second, il faut que la prparation soit ferme hermtiquement, pour
viter Tvaporation du liquide et la dessiccation de l'objet. Cette fermeture s'excute en runissant la lamelle la lame au moven d\m

premier
le

METHODES GENERALES

236
cimeiil ou

lui.

Nous tudierons en

ces procds

dtail

de fermeture

(p. 447).

La prparation, une

termine, doit tre tiquete. Vtiquetle sera


la prparation. Si celte tiquette ne
suffit pas pour consigner tous les renseignements, on en collera une
autre droite. Ces tiquettes porteront le nom de Tanimal ou de la
plante, celui de Torgane, Tindication ventuelle du mode de fixation,
de coloration et de montage, et enfin la date de la prparation.
Nous ne pouvons numrer ici toutes les variantes des prparations
microscopiques nous les tudierons mthodiquement et compllement
dans les chapitres (jui vont suivre.

colle de prfrence

fois

gauche de

Ajoutons quelques mois sur la ncessit dr la lamelle. Les


dbutants sont quelquefois tents de ngliger son emploi, surtout
dans les examens Ttat frais, et sont tout tonns de ne pouvoir
obtenir une image distincte, mme avec les objectifs faibles. Il n'y
a qu'un cas dans lequel la lamelle ne soit pas indispensable, c'est

pour l'examen des

frottis dessclis,

mais

il

faut avoir soin de les

de cdre, non seulement pour l'emploi des


objectifs immersion, mais encore pour donner la prparation

recouvrir d'huile

une transparence suffisante et une homogr^nil optique ncessaire


la bonne marche des ravons lumineux.
tous les autres cas, l'objet doit lre mis entre lame et lamelle
la prparation ait une planit suriisanlc et pour que la lentille frontale des objectifs forts ne plonge pas dans le liquide. La planit de la prparation a une grande importance, tant au point de vue
de la facilit de la mise au point (|ue de la qualit des images. On Sfiil
une goutte de licjuide, place sur
^([ue, par suite des actions ca|)illaires,

Dans

pour que

verre, peut s'taler rapidement ou former une calotte sphrique, suivant (|ue le verre est mouill ou non. Dans le premier cas, le
liquide s'tale et l'objet n'est plus couvert; dans le second, il y aura
des jeux de lumire dus des ingalits de rfraction et de rilexion.

nne lame de

La lamelle a pour elfel de retenir le liijuide, sous forme de tranche


d'paisseur convenable, surfaces planes et entourant compltemenl
l'objet. Il faut, autant que possible, que la lamelle soit bien horizontale
et parallle la lame. Pour les objets un peu pais ou irrguliers, on
obtient cette horizontalit au moyen de cales de diverse natur^ (p. 242).

Lamelles en glatine.

Pranter

eu

l'ide

ingnieuse de

substituer, dans certains cas, des feuilles de glatine aux lamelles


de verre. 11 utilise les feuilles trs minces et parfaitement trans-

parentes dont on se sert pour envelopper certaines denres alimentaires (pain d'pices, etc.). Ce procd ne peut convenir que pour

des coupes deshydrates


1.

et

Pranter, Ein billigcr Ersatz

p. 159, 1901.

montes au baume ou
fiir

Dcckglascr. Ztsclir.

f.

la trbenthine
wiss.

Mikr., XVIII,

LA PUPARATION MICROSCOPIQUE

237

de Venise, car les feuilles de glatine se dissolvent dans Teau, la


le laclophnol el tous les milieux aqueux. En outre,
glycrine,
les prparations ainsi montes n'ont pas une dure absolument
indfinie. Pourtant le bon march de ces lamelles peut les rendre
les travaux pratiques d'lves
prcieuses pour renseignement, pour
de
Elles supportent trs
surface.
les
et pour
grande
prparations

bien riiuile dimmersion, ainsi que le nettoyage au tolune, mais


elles craignent la chaleur et riuimidit, qui les font plisser.

Nettoyage des lames et des lamelles.


1.

pour

Lames neuves.
les froUis

Pour

de sang,

Pour
il

travaux dlicats

les

est prfrable

el

notamment

d'employer des lames

qui ncessitent des lames sches, on


dgraisse ces lames neuves dans dePalcool ammoniacal 5 p. 100
et, au sortir de ce liquide, on les essuie avec un linge fin. non

neuves.

les

frottis,

On peut, avant l'essuyage, les passer dans un second


bain d'alcool pur. Lorsqu'on fait ce nettoyage Favance, il faut
envelop]ier les lames, par paquets, dans du papier blanc ou du

pelucheux.

On les garde ainsi Fabri de la poussire et


paquets qu'au moment de s'en servir.
Pour coller les coupes, on peut employer des lames sortant de

papier dit hyginique.

on n'ouvre

les

l'eau et

supprimer
toujours un peu

ainsi les inconvnients de l'essuyage, qui graisse


le verre et jtrend du temps. Voici comment

on plonge les lames neuves


dans un mlange parties gales d'alcool 90 et d'acide chlorhydrique, puis on les lave plusieurs eaux. Finalement, on les
plonge dans l'eau distille et on ne les en sort qu'au moment de coller

P. Masson conseille de procder

les

coupes. Le dgraissage est parfait et l'adhrence remarquable.


faciliter l'talement des liquides destins coller les

Pour

coupes, rappelons la faciht avec laquelle les liquides s'talent sur


le verre pralablement naml) (p. :244). Ce qui est un inconvnient pour les cultures cellulaires devient ici
flambage peut donc servir l'occasion pour

un avantage. Le
le

nettoyage

des

une flamme non fumeuse.


Leur nettoyage est plus difficile. On y
2. Lames usages.
arrive assez facilement avec de l'eau chaude et du savon, pour les

lames

il

doit tre fait dans

et lamelles sur lesquelles il n'y a ni liaume, ni rsine, ni


huile de cdre. Pour les prparations au baume, surtout anciennes,

lames

il

est souvent jdus

conomique de

jeter les lames plutt

que de

les

METHODES GNRALES

238

nettoyer, car le temps qu'on y passe et les ractifs ncessaires


cotent plus cher que le verre. Pourtant, lorsqu'on dsire les faire

on

resservir,

les fera

mlange suivant

tremper pendant plusieurs jours dans

100 gr.
100
1000

Bicliromate de potassium
Acide sulfurique

Eau
puis on les lavera grande eau

dans Falcool.

que ponr

les

et,

finalement, on les conservera

Les procd's de nettoyage sont les mmes


lames, mais il faut tenir compte de leur fragilit,

Lamelles.

3.

le

aussi faut-il prendre des prcautions particulires pour Tessuyage.


Quelques auteurs recommandent de les essuyer d'une seule main,

entre le pouce et l'index; je trouve qu'on peut, sans inconvnient,


essuyer deux mains, en les tenant par la tranche entre le

les

pouce

et l'index

gauche.

est plus ncessaire encore que pour les lames de les laver
l'alcool acide, car elles sont souvent recouvertes d'un enduit blanIl

chtre adhrent.

On

jusqu'au moment de

les

conserve ensuite dans l'alcool ordinaire,

l'emploi.

Altrations des lames et des lamelles.

En Europe,

les

lames

et

lamelles se conservent assez bien, pour-

tant ces dernires se dpolissent quelquefois au point de devenir


inutihsables, lorsqu'on les conserve dans leurs botes d'origine.

Dans

pays tropicaux ces altrations sont beaucoup plus


au contact de l'atmosphre chaude et humide, la dvitrification peut tre assez intense pour rendre la surface du verre
les

rapides

les lamelles,
opalescente et mettre hors d'usage non seulement
les lames.

mais encore
Il

vnients

peu de moyens pratiques pour lutter contre ces inconil faut d'abord choisir des lames et lamelles en verre de

premire qualit, aussi peu altrable que possible. On peut aussi


enduire les lamelles d'essence de girolle ou d'huile de paraffine.
mais il ncessite un nettoyage ultrieur
de
quelquefois impossible, si on ne dispose pas
dissolvants appropris. La conservation en botes mtalliques
hermtifjues donne de bons rsultats.

Ce moyen

trs

est trs efficace

soigneux

et

CHAPITRE

III

EXAMEN A L'ETAT FRAIS


L'examen

Tlat frais est la

mthode

liistologique la fois la

plus ancienne; c'est aussi une de celles qui ont


donn lieu aux plus grandes dcouvertes.

plus simple et

la

Sans parler des organismes des fermentations trouvs par Pasteur au


cette simple mthode nous pouvons citer, comme acquisitions
capitales de la science, la Bactridie charbonneuse, le Bacille de la
fivre typhode, le Spirochte de la fivre rcurrente, les Plasmodies du
paludisme, les Pilaires du sang-, les Champignons des teignes, les Trypanosomes qui, tous, ont t dcouverts sans l'aide d'aucun colorant, par
l'examen l'tat frais du sang- ou des produits pathologiques.
Une mthode qui a fourni des dcouvertes aussi capitales, ayant vritablement rvolutionn les sciences mdicales, ne saurait tre nglige,
quels que soient par ailleurs les perfectionnements de la technique histologique moderne. Cette mthode est absolument indique toutes les
fois qu'il faut rechercher, dans un liquide organique, la prsence d'un
organisme parasitaire ou d'un corps figur, ou qu'il faut mettre en vidence une manifestation de la vie telle que les mouvements, contrac-

moyen de

courants protoplasmiques, phnomnes de digestion intracelluOn emploiera l'examen l'tat frais, non seulement pour ces
divers ordres de recherches, mais encore pour l'examen prliminaire
du sang et des autres liquides organiques, la recherche de certaines
Bactries, des Champignons microscopiques et parasites, et enfin, d'un
bon nombre de parasites animaux.
tions,

laire, etc.

Cette

mthode

a pour elle l'avantage d'une extrme simplicit;


donc gnralement d'un emploi trs facile et, en outre,
ne produit aucune modification dans les objets examins. Notamment elle nous montre, avec une parfaite exactitude, la forme et les
elle

est

mouvements des organismes. Malheureusement son emploi


restreint par d'troites limites. Elle
trs

minces

et

est

ne s'applique qu' des objets

transparents; elle ne permet pas des observations

trs prolonges, et

enOn

elle

ne dmontre qu'une trs faible partie

METHODES GENEIULES

240
des

(l('lails

de

slriictiire. Poiirlant,

on peut arriver
lescenlrosomes Bresslau
:

en choisissant convenablement

voir des dtails cytologi([ues tels

les objets,

les

observe Ttat

frais,

dans

les

que
ufs

de Mf'sosloma Ehrenbergi, Turbellari qui vit dans les marcages peu profonds (20 30 cm.), fond d'humus et de feuilles
mortes, de prfrence dans les endroits ombrags.
L'examen Ttai frais ncessite certaines prcautions. Etudions
sont d'ordre optique. Comme il s'agit de pr[)ase reportera ce qui a t dit ce sujet
clairera la prparation avec des faisceaux aussi troits

d'abord celles
rations

146.

p.

fjui

non colores, on

On

possible, qu'on obtient en rtrcissant convenablement l'ouverture du diaphragme iris, de manire ne pas noyer les dtails

que

dans une lumire trop intense. L'clairage joue ici un rle considrable car il s'agit le plus souvent d'objets dont l'indice de
rfraction

dilre

peu

de

du milieu dans lequel on

celui

les

examine.
L'emploi du fond noir'

examens

les

(p.

des lments figurs de petite

I.

taille et trs

dissmins.

LIQUIDES D'EXAMEN

y a deux catgories de liquides pour l'examen

Il

uns servent

les

208) peut rendre des services dans

l'tat frais, surtout lorsqu'il s'agit de rechercher

examiner

les

organismes

l'tat

l'tat frais

vivant, les

autres sont destins rendre ces organismes plus visibles, grce


leur rfringence, mais sans respecter leur vitalit.

Nous dsignons ainsi les


les organismes
conservent
liquides,
qui
vivants et dans des conditions aussi rapproches que possible de
1"

Liquides physiologiques.
naturels ou artificiels,

l'tat

naturel.

On

les

nomme

encore liquides indiffrents, parce

pour ainsi dire aucune action modificatrice sur


lments figurs. Le plus facile obtenir et conserver est la

qu'ils n'exercent
les

solution de chlorure de sodium 9 p.

000,

dite solution

physiologique"^.
1.

Bresslau, Uelicr die Sichtbarkeit der t'eiitrosomen iu lebeiiden Zellen. Ein

Hinweis auf Mesostoma Ehrenberf/i als Ohjekt zu cj^tologischen Untersuchungen.


Zool. Anz., XXXV, p. 141-145, 1900.
2. La vritable solution isotonique pour l'IIonimc et les autres Mammifres
doit renfermer
gr. 9 p. 100 de chlorure de sodium. Cf. Engelmann, Einiges ber
die sogenannto physiologische Kochsalzlsung. llcnlsche med. Woch., XXIV,
p. 64-65, 193.

EXAMEN A L'TAT FRAIS


Elle suffit la plupart du

241

temps mais, pour des recherches trs dlicates,


il est prfrable d'employer les milieux naturels o vivent les cellules.
Ces milieux naturels sont le srum sanguin, olilenu par coagulation ou
centrifugation, le liquide d'ascilc, le liquide amnioliciue, l'humeur
aqueuse. Les meilleurs rsultats seront obtenus avec un liquide provenant de ranimai sur le({uel les lments examiner ont t prlevs.
Pour avoir du liquide amniotique, il faut se procurer un utrus gravide,
l'abattoir ou chez le boucher. Le mieux est de le ponctionner avec
un trocart. S'il faut inciser, on aura soin de bien laver la paroi utrine
avant d'ouvrir les membranes, de manire viter le mlange avec
;

le sang-.

Vhuineur aqueuse, sera extraite d'yeux de Lapin ou de Buf.


dfaut de ces liquides naturels, on pourra encore employer

le

srum

de Frey, ainsi compos.

Eau

135

distille

Blanc d'uf
Chlorure de sodium

Pour
pour

cm^

15 gr.
0,20 gr.

on prendra du liquide de la cavit gnrale


animaux marins, simplement de l'eau de mer.

les Invertbrs

les

et,

Ces liquides produisent gnra2 Liquides additionnels.


lement la mort des organismes qu'on y plonge, mais ils peuvent
rendre de grands services, en rendant visibles certaines parties des

Leur emploi constitue un procd interm-

objets non colors.


diaire entre Texamen

aprs fixation;

il

l'tat

frais

consiste traiter

proprement dit et l'examen


extemporanment les objets

par un liquide qui modifie leurs proprits optiques et

les

rend

plus apparents.

Ces liquides sont des solutions alcalines, acides, ou des liquides


rfringents et claircissants miscibles avec l'eau. Comme exemples,
solution de potasse qui dtruit la plupart des
je citerai la
lments anatomiques
tiques,

les

et

permet de reconnatre

les fibres

Facide

Champignons (p. 714), etc.,


met le noyau en vidence

claircit les cellules et

las-

actique qui
milieux de

les

Amann

(p. 575) qui fixent, gonflent, claircissent et font trs


bien ressortir certaines structures. L'emploi de ces ractifs se fait

extemporanment il suffit gnralement d'en dposer une goutte


sur une lame, d'y plonger l'objet et de recouvrir d'une lamelle;
on chauffe lgrement s'il y a lieu, puis on examine immdiate:

ment.
Nous pouvons mentionner ici l'emploi de Vencre de Chine que nous
tudierons plus fond en parlant des prparations sches (p. 7U0). On
M.

I^iANGERON.

Prcis de Microscopie,

16

METHODES GENERALES

242

Chine liquide trs fine, de prfrence celle qui est


vendue spcialement pour ce genre d'examens. Les lments ligures

choisira de Tencre

dty

y sont plongs api)araissent comme des taches claires sur le fond


noir de l'encre et leurs contours sont particulirement nets. C'est un
bon moyen de rendre jtlus visibles des organismes incolores et trs peu
rfringents, qui seraient invisibles ou trs diffu:ilcs apercevoir sur les
milieux ordinaires. L'cuicre de Chine n'tant pas une teinture, mais une
([ui

suspension de particules charbonneuses trs fines, ne pntre pas dans


on
les objets. On emploiera l'encre dilue comme il est dit page 700
mlange cette encre une goutte du liquide renfermant les lments
tudier et on recouvre d'une lamelle.
:

11.

MTHODES D'EXAMEN

Le principe de celte
Examen entre lame et lamelle.
mlhode consiste examiner l'objet vivant enli-e lame et lamelle,
dans des conditions qui se rapprochent autant que possible de
celles de son milieu naturel. Le i)rocd le plus simple se rduit

un peu du liquide renlermanl en suspension les objels qu'on veul tudier. On dpose celte
et on recouvre d'une lamelle bien
goutte sur une lame propre
d'une pipette effile,
prlever, Taide

la gouile ne soit trop volumineuse,


essuye, il faut viter que
autrement une partie des organismes serait chasse en dehors de
la prpai^alion. S'il y a trop de liquide, il faut donc, avant de
recouvrir d'une lamelle, en aspirer une partie avec une eftilure

de pipette ou avec du papier Joseph.


Pour viter que des objets trs dlicats ne soient crass soit par le
d'actions capillaires, appliquant fortepoids de la lamelle, soit par suite
ment la lamelle sur la lame, on a soin d'interposer, entre ces deux dernires, des corps dont l'paisseur sera proportionne celle des objets
examiner. Les Allemands emploient beaucoup l'artifice qui consiste
soutenir les quatre angles de la lamelle par quatre gouttelettes de cire.
On emploie le mlange suivant (ju'on fait fondre sur un feu trs doux
:

Cire (blanche de prfrence)


Trbenthine de Venise

...

2 parties
1

en poids.

partie.

Cette masse doit s'amollir facilement entre les doigts et se ptrir en


boulettes de formes varies.
Sur une lame bien propre on fixe, en des points convenables, quatre
petites masses pralablement ptries entre les doigts. On installe l'objet

avec une goutte de liquide et on applique la lamelle, garnie en dessous


d'une goutte du mme liquide, de manire viter les bulles d'air.
Cette lamelle doit reposer par ses angles sur les quatre boulettes de
cire. On rgle alors l'paisseur de la prparation par des pressions

EXAMEN A L'ETAT FRAIS

243

mtliodiques exerces sur les angles de la lamelle, eu ayant soin


d'appuyer successivemenlsur deux angles placs en diagonale. S'il y a un
excs de liquide, on l'absorbe progressivement avec des bandes de buvard.
Grce cet artifice, on arrive non seulement rgler l'paisseur de
encore
la prparation, de manire ne pas craser l'objet, mais
excercer au besoin sur ce dernier une pression constante et modre et
l'immobiliser pour qu'il ne puisse sortir du cbamp. C'est donc un procd employer, toutes les fois qu'on voudra observer l'tat vivant de
petits organismes trs mobiles.
11 y a encore d'autres moyens d'empcher l'crasement de l'objet. Ils
consistent introduire, entre la lame et la lamelle, des corps solides
poils, cheveux, filaments de verre
d'paisseur convenablement choisie
tir, fragments de lamelles, bandelettes de carton.
:

soit

quelque lemps, il faut Lorder


pour l'empcher de se desscher. On recouvre donc
avec de la vaseline applique au pinceau, soit avec de

fine

ou du

Si robservalion doit durer


i-alion

lui solide

appliqu au fer chaud,

comme

il

la

prpabords

les

la paraf-

est dit p.

448.

- Dans d'autres cas, il faut au contraire


Compresseurs.
exercer sur Tobjet une compression plus ou moins forte, de
manire l'aplatir suffisamment pour le rendre transparent, mais
sans

ni

l'craser

le

tuer.

On

em[doi8 dans ce but des instruments iiarticuliers, dits compresseurs, il en existe beaucoup de
modles, donl les uns agissent
par des ressorts, les autres par
des vis de pression. Certains appa'

reils

trs

,..

,.,..
r ly. lob.

'

_,

compliqus,

tels

^
,^
Gompresseui' de tourment
modifi par Brumpt.

que

permettent d'tablir une circulation d'eau. Un


modle trs simple et trs pratique est le compresseur de Fourmenl
celui de Ziegler,

modifi par Brumpt (fig. 136 1. Il a t calcul pour servir avec des
lamelles carres de 22 mm. sur lesquelles il exerce une pression
trs

uniforme

Examen

et facile rgler.

des

animaux

En choisissant des animaux

vivants.

transparents et, autant que possible, aquatiques, on peut arriver


aussi voir admirablement la circulation, la contraction des

muscles somatiques ou intestinaux,


(emploi

des colorations

vitales).

la

Citons

digestion et

l'excrtion

comme exemples

les

certains petits Trmatodes (flammes


petites espces de Sangsues,
cilies de l'appareil excrteur) les petits Crustacs aquatiques, les

Rotifres, les Ttards

Nous aurons

peu pigments,

etc.

l'occasion de revenir sur l'examen l'tat frais en

METHODES GENERALES

244

Irailant des techniques spciales, notaminenl en ce qui concerne


les Protozoaires (p. 468) et le
sang p. 623.

Examen en chambre huPour une observation


mide.
un peu prolonge, ce procd

Lame concavit
l'examen en goutte pendante.

Fig.

137.

pour
Ori-

r/inal.

suprieur au

trs

est

prc-

on nomme examen en goutte pendante.


On peut employer une cellule forme d'un porte-objet creus

dent. C'est encore ce qu

en son milieu d'une concavit

sur

137),

(iig.

laquelle on renverse une lamelle charge d'une


goutte du liquide examiner. Il faut avoir soin

An138.
neau de verre

Fig.

pour

cellule.

que

la

vient en

goutte soit trs petite, autrement elle


contacl avec un point de la cavit et

alors elle

s'tale

immdiatement. En outre,

si la

goutte est trop grosse, les organismes tombent


sa partie infrieure et on ne peut les apercevoir un fort grossissement. Notons enfin, comme l'a dj fait remarquer M. Nicolle
et

comme nous

l'avons souvent

observ, que le flambage des


lamelles favorise singulire-

ment l'talement de

Cellule

en verre pour examen


en goutte pendante.
Original.

Fig. 139.

11

donc

faut

ment

la goutte.

les laver simple-

l'alcool.

Une

fois

la

goutte pendante correctement


installe,

Un

on lute

la vaseline

ou

la paraffine.

autre genre de cellule, encore plus simple, est celle qu'on


- rahse en collant sur
1

anneau

une lame

un

de

Ces anneaux

vei^re.

se

(fig.

138)

tout

prpars

commerce. On

trouvent

dans

le

les fixe

au moyen de baume du
Canada, de lut solide

ou simplement de paraffine. On vaseline le bord


suprieur, sur lequel on

lame charge d'une goutte de liquide (Iig. 139). Si cette


goutte est assez petite, on ])eutobserver aux plus forts grossissements.
renverse

la

EXAMEN A L'TAT FRAIS

245

A dfaut d'anneau de verre, on peut dcouper, dans une feuille de


carton un peu paisse, un fragment carr, de la dimension de la lamelle.
On le perce en son centre d'une ouverture circulaire ou carre, on imbibe

142.

Fig.

Chambre humide de Ranvier.


central;

6,

c, cellule
rigole circulaire.

en verre;

s,

disque

d'eau cette cellule de carton (flg. 141). Au besoin on la strilise par bulli11 suffit de la maintenir humide
pendant la dure de l'observation.

tion.

y a une autre catgorie de chambres humides, dont l'emploi


un peu plus dlicat, mais se prte mieux Tusage des forts
grossissements, c'est la chambre humide de /Janvier. Elle est
constitue par une forte lame de verre (fig. 142), creuse en son
Il

est

centre d'une rigole circulaire, limitant un disque

dont l'paisseur est infrieure de un dixime de


millimtre celle de

la

,.,,..,

..:.. ........,
.

...._.

143. Coupe mdiane de


humide de Ranvier, montrant

Fig,

d'paisseur entre le
lule.
Original.

la

la

chambre
diffrence

disque central et la cel-

lame. C'est sur ce plateau

qu'on dpose la
goutte de liquide, on
recouvre ensuite d'une
lamelle qu'on lute

la

vaseline ou la paraffine.

La goutte

se trouve

prisonne entre

la

em-

Schma de la chambre humide de


Ranvier. Le disque central est ligure en poin-

Fig. 144.
till.

Original.

face

suprieure du plateau et la face infrieure de la lamelle. Elle forme


donc une couche de liquide de un dixime de millimtre d'paisseur, prsentant deux faces parallles. On conoit que l'observation,
un fort grossissement ne sera pas trouble par les phnomnes

de rilexion
la

surface

et

dune

de rfraction qui se produisent invitablement


goutte sphriqne^.

p. 519 la mthode de Biti qui permet aussi les


en couche trs mince de trs forts grossissements.
1.

Voir

examens

l'tat frais

M KTIODES

240

KNKRALES

Ce genre de prparation, pour oti'o irnssi, exige certaines prcanlions. La goutte doit tre assez petite pour ne ])as dborder le
plateau aprs application de la lamelle. Dans le cas contraire, elle
rpand dans

se

rigole ou

la

mrne sur

la

lame

et les

organismes

du champ. Pour a|}di(]uer correctement la lamelle,


on la saisit avec une pince par un bord et on met le bord oppos
en contact avec la lame, puis on abaisse d'un seul coup. La gouttelette doit s'tendre uniformment la'surface du plateau, sans le
disparaissent

dpasser. La rigole doit rester pleine d'air, destin h entretenir


quelque temps la vie des organismes.

Aux clTambres liumides, se rattaclieiit les appapeut tre construit


microaquariums. Celui de Schaudinn
en taillant, sur le grand ct
d'une lame, une chancrure
=S(i
.i^!

Microaquariums.
reils

nomms

'

rectangulaire dei820 mm.


de ct. Sur les deux faces
de la lame on colle des
lamelles de 22 mm. Dans

'^1

</
Fig. 145.

-/i

compris entre ces


deux lamelles, on introduit
l'espace

Micro-aquarium

le

Sciiaudinn.

l'eau et les animaux exapeut encore, plus simplement, coller sur une lame des bandes
dcoupes dans une autre lame et limiter ainsi un espace carr, ferm
sur 3 cots (fig-. 145); on recouvre cet espace avec une lomelle colle sur
les bandes de verre. Ces aquariums restent ouverts sur un ct, mais
l'eau ne se rpand pas, car elle est retenue par la capillarit. On peut
introduire avec les animaux quelques filaments de Spirogyres qui servent arer l'eau. Pour coller les pices de ces aquariums on emploiera
soit du baume du Canada, soit du lut la colophane (p. 447).

miner.

On

Examen sur la platine ctiauffaute.


Lorsqu'il s'agit d'organismes
parasites des Vertbrs sang chaud, il peut tre indispensable, pour
les conserver vivants, de les maintenir, pendant la dure de l'examen,
la temprature de leur hte. Un procd imparfait consiste placer
les prparations dans une tuve rgle la temprature voulue et les
sortir au moment de les examiner. 11 est prfrable d'employer les
platines chaulantes. Voir p. 229 la description de ces appareils.

en

III.

INDICATIONS

On

trouvera, au

DE L'EXAMEN

L'TAT FRAIS

cours de l'tude des mthodes spciales, de


l'tat frais. Je mentionnerai

nombreuses indications de l'examen


seulement
1.

F.

ici

les principales.

En

gnral, on examinera par ce

Schaudinn, Ein Mikroaquarium, welches auch zur Paraffineinbettung


/. mas. Mikr., XI, p. 3-2G-0-29, 1891.

kleiner Objeckte benutzt werden kann. Zlschr.

EXAMEN A L'ETAT FRAIS

247

procd, tous les lments cellulaires isols l'tal vivant, que ce


soient des Prolozaires ou des cellules isoles des Mtazoaires (sang
leucocytes, etc.). Celte mthode esl particulirement
indique jionr la recherche des parasites du sang, Texamen des
urines, des matires fcales, des pulpes d'organes, le diagnostic

lymphe,

et

Ftude des Champignons para-ites,

esl indispensable toutes les

l'ois

etc.

L'examen Ttai frais


un organisme

qu'il s'agit d'tudier

ou un lment figur mobile. Ajoutons enfin qu'en botanique celle


mthode esl encore plus employe qu"en zoologie et qu'elle
s'applique tous les vgtaux microscopiques, aux spores, aux
grains de pollens et

mme

aux coupes d'organes.

CHAPITRE

IV

COLORATIONS VITALES
Nous avons reproch la technique d'examen Ttat frais de
ne pas nous montrer les dtails des ohjets. La mthode des coloun procd intermdiaire entre cette
des
colorations
aprs fixation. Elle a pour but
technique
de faire apparatre certaines parties de la cellule, telles que le
rations

vitales

constitue

et celle

novau ou

les

inclusions, sans toutefois causer de modifications

physiques ou chimiques pouvant amener la dformation, Taltralion et finalement la mort de Flment examin. Celui-ci finit
bien par mourir, mais non pas uniquement du

fait

de

la coloration.

Les colorations vitales permettent de dmontrer la ralit de l'existence de certaines inclusions cellulaires qui pourraient tre prises pour
des prcipits colors, autrement dit pour des artifices de prparation.
Cette existence relle ne sera prouve qu'autant que la coloration aura
eu lieu sans que la vie de la cellule soit arrte. C'est ainsi qu' l'aide
du roug-e neutre, on a dmontr le rle digestif des granulations et des
vacuoles de beaucoup de Protozoaires. On a dcouvert, grce cette
mthode, des phnomnes intra-cellulaires d'oxydation et de rduction
qu'on met eu vidence par la dcoloration de certains ractifs (p. 2.52). Il
faut savoir en outre que, parmi les inclusions cellulaires, tout ce qui se
colore n'est pas vivant des pigments divers et des cadavres de Bactries
se colorent souvent trs intensment. Enfin, dans beaucoup de cellules,
surtout chez les Protozoaires, les noyaux sont bien plus difficiles
:

colorer que les inclusions.


La valeur des colorations vitales est trs contestable et trs conteste.
Des techniciens de premier ordre, comme Galeotti, Lee, Mayer, arrivent

conclure que les rsultats obtenus ne constituent pas de vritables

colorations. Le colorant peut diffuser dans la cellule vivante, mais ne


produit pas une vritable teinture. Gnralement le noyau et, particulire-

ment

chromatine, ne se colorent pas si la coloration se produit, c'est


est morte. Les meilleures colorations vitales sont celles
des granulations du protoplasma
mais justement ceux de ces corps
qui se colorent le mieux ne font pas partie intgrante du cytoplasme. Ce
sont gnralement des matriaux nutritifs ou des produits d'changes.

que

la

la cellule

249

COLORATIONS VITALES

la coloration est compas'agil donc de savoir si le phnomne de


tible avec la vie, si un lment vivant peut rellement se colorer ou si la
teiniure ne se produit qu'aprs sa mort. Un fait est certain, c'est que
les lments vivants peuvent ragir chimiquement sur les matires
colorantes. On sait, en ce qui concerne le bleu de mthylne, que ce
Il

corps peut tre fix par certains lments (terminaisons nerveuses,


cylindres-axes) et rduit par d'autres lments (parenchyme rnal). Ces
deux ractions sont videmment compatibles avec la vitalit de la cellule. D'autre part, les travaux de Przesmycki ', pour ne citer qu'un
exemple, ont montr que, chez certains Infusoires, Rotifres, Vers et
Crustacs, le noyau peut fixer des matires colorantes et continuer
ensuite vivre et se diviser.
On pourrait citer beaucoup d'autres exemples, car cette question com-

une littrature trs toulTue 2. Contentons-nous de remarquer que,


parmi toutes ces observations, aucune ne se rapporte un vritable
phnomne de teinture. Il ne s'agit en ralit que de phnomnes d'imbibition. Les animalcules de Przesmycki, transports dans de l'eau pure,
se dcolorent rapidement; leur mort amne aussi leur dcoloration.
Chez les animaux qui ont reu du bleu de mthylne dans la circulation, il faut se hter de mettre le systme nerveux nu et en contact
avec l'oxygne atmosphrique, si on ne veut pas voir la coloration disparatre par suite des phnomnes de rduction. Pour conserver ces
porte

colorations,
Il y a donc

il

faut les fixer par des liquides oxydants (procd de Bethe).

une vritable dfense cellulaire, qui se manifeste par des


phnomnes de rduction tels, que les auteurs recommandent toujours

d'oprer le plus possible au contact de l'air.


Les colorations, dites vitales, se rduisent donc gnralement la succession des phnomnes suivants coloration des inclusions non vivantes,
action rductrice de la matire vivante, insuffisante cependant pour
empcher d'abord Vimbibition progressive, puis la mort de la cellule qui
subit alors la vritable teinture.
:

Je ne

ci'ois

pas que, sauf dans des cas parliculiers, la coloration


une mthode de travail courante. Je pas-

vitale puisse constituer

serai

donc sous silence

la plus grande partie de ces expriences,


description dans les ouvrages spciaux de
hislologique. A mon avis, les coloralions vitales ne

dont on trouvera

la

technique
peuvent trouver un emploi journalier que dans Ttude des Protozoaires et du sang, etdans certaines ractions microchimiques. On
trouvera dans les chapitres qui y sont consacrs (p.
indications suffisantes.

Colorants vitaux proprement dits.

469

et

624) des

Les colorants, dits

L Przesmycki. Ueber iutravitale Frbung des Zellkcrns. Silzungsber. Gesell. f.


Morphol. und Pliysiol. Mimchen, 1899.
2.
Par exemple A Fischel, Untersucliungen bcr vitale Frbung. Anat. Hefte,
1 Abt., XVI,
De Beaucliamp, Les colorations vitales. Anne biop. 417, 1901.
Article Colorations
logique, XI, p. 1906, 1909 et Tlise doct. se, Paris, 1909.
vitales, dans Encyklopdie d. mikr. Technik, 2'= d., 1910.
:

250

MKTIIODES liNKRALES

Vitaux^ ne devront
(les

en

})as

tre quelconques. Ils seront choisis

parmi

sul)slances peu on pas toxiques et seront toujours employs


solntions trs dilues. Ce sonten gnral les colorants basiques

qui conviennent

le

mieux. Les couleurs acides sont bien moins

favorables. D'ailleurs, cette rgle n'est pas absolue, car des corps
trs voisins et de mme raction peuvent produire des effets trs
diflerenls, sans qu'on puisse expliquer celte lection particulire
des tissus. Parmi les thories qui tentent de rendre compte de ces

phnomnes, nous ne mentionnerons que celle d'Overton \ pour


qui la facult de se prter aux colorations vitales dpend de la
solubilit des couleurs

dans

sderaient cette solubilit,

Les colorants vitaux pos-

les lipodes.

notamment

vis--vis de la cholestrine

de la lcilhine qui, d'aprs Overton, imprgnent la pellicule


protoplasmique externe des cellules.^
Les couleurs acides seraient prcisment trs peu solubles dans

et

les lipodes. C'est

pourquoi, part quelques exceptions, elles sont

peu propres aux colorations vitales.


Liste des colorants vitaux.

Les

j^lus usits

sont

Bleu de mthylne chimiquement pur de Hochst ou de Merck,


eu solution

1 p. 500,

p.

1000,

1 p.

10 000.

Bleu de Nil (sulfate ou chlorhydrate 1 p. 1000).


Bleu de crsyl brillant (Brillantkresvlblau)
(p. -469 et

p.

1000

624).

Azur I ii[ II

(i^.

Rouge neutre

389).

(p.

251, -469

Colorants indicateurs

et

625).

252).
des colorations vitales.
(p.

Technique
cipaux moyens d'employer

les

colorants

H y

vitaux.

deux prinbien on

Ou

mlange une gouttelette de la solution trs tendue, avec une


goutte de liquide renfermant les lments tudier, ou bien on
prpare des lames, en y dposant une goutte de solution colorante
qu'on laisse scher avec ou sans talement pralable (mthode de

Pappenheim, p. 624). Sur cette couche dessche, on dpose


une goutte de liquide examiner, on recouvre d'une lamelle et
on

lute

Les

pour

viter la dessiccation.

colorants

vitaux

s'emploient

toujours en solutions

trs

au mitlime pour l'examen entre lame et lamelle, au


dix-miUieme et au cent-millime pour les colorations par immer-

tendues

1. Overton, Studicn ber die Aufnahmo


der Aiiilinfarbcii
ZeUe. Jnfir/j. ivis\s. Bot.XXXW. p. CIO. 1910.

diircli

die lebcnde

COLORATIONS VITALES

251

au ceiilirnu- jioui' les injections. Ces i)iO|)oilions varient


d'ailleurs suivant les cas" parliculiers.
Le dissolvant sera de Teau pure, lorsqu'il s'agit de colorer des

sion,

hnerlbrs aquatiques. Pour les injections, on prendra toujours


de Teau physiologique et on chauffera le liquide la temprature
de l'animal.

La coloration dite posl-vitale, d'aprs Arnold, se fait en dtachant des fragments d'organes, des lambeaux de membranes ou
mme en raclant des lments cellulaires la surface des
muqueuses. Ces bhnents sont plongs dans

le

bain colorant trs

dilu et rendu soigneusement


isotoniaue.
'^
Entin, lorsque Texanien par transparence n'est pas possible, il
un temps jug suftisant, fixer la coloration par une

faut, aprs

mthode approprie (p. 658, note 1) et pratiquer des coupes.


Les deux principaux colorants vitaux sont le bleu de mthylne
rouge neutre.
Le bleu de mt/njlne

et le

(p. ^^84)

doit

tre

chimiquement pur.

On

pourra prendre indiffremment celui de Merck, de Hochst ou


de Griibler. On en fait des solutions 1 p. 500, 1 p. 1000,
1 p. 10 000, dans Teau distille \
pour l'examen entre lame et
lamelle, par exemple pour la coloration vitale des Protozoaires et
coloration post-vitale de lambeaux de membranes ou de cellules

la

isoles par raclage

d'une muqueuse. Les solutions Ip. 100 dans

solution physiologique conviennent pour certaines injections,


on
par exemple l'tude des sacs lymphatiques des Batraciens
la

peut l'administrer aussi par

la

voie digestive, raison de 10 cen-

tigrammes par kilogramme d'animal pendant une semaine.


Chez les Mtazoaires, la coloration vitale par le bleu de mthylne est surtout employe pour la recherche des terminaisons nerveuses et des cyUndres-axes.
Le rouge neutre a t dcouvert par Witt en 1879 et introduit
dans la technique microscopique par Ehrhch. C'est une poudre
de couleur fonce l'etlets verdtres, facilement soluble dans Teau
distille,

avec une couleur rouge tirant un peu sur

le violac.

On

des solutions 1 p. 1000, 1 p. iOOOO et 1 p. 100 000. Il


possde la prcieuse proprit de virer sous Tiidluence des ractifs

en

fait

acides ou alcalins.
la liqueur

Une

faible

belle couleur

trace d'un acide organique donne


rouge cerise ou l'ouge fuchsine.

Voir p. 6-^5 rexcelloiitc mTliodo de Sabrazs pour


des Protozoaires.

1.

et

une

la coloration vitalo

du sanp:

METHODES GENERALES

252

Une

trs faible alcalinit, telle

virer au jaune

que

celle

de l'eau de source, fait


et au brun rougetre

bruntre les solutions faibles

les solutions plus concentres. Ces phnomnes permettent d'tudier les ractions du cytoplasme et de ses inclusions, particulire-

ment chez

En

les Infusoires (p.

solution alcoolique,

535).

le

rouge neutre

est

brun rouge en

liqueur concentre et brun jauntre en liqueur tendue.

Ce corps

est trs

propre fournir des colorations vitales, parce qu'il

peu toxique. On peut l'administrer aux animaux par la


voie sous-cutane ou mme intraveineuse et par la voie digestive. Pour
les animaux aciuatiques, il suffit souvent de les plonger dans une solution trs dilue (Mollusques, larves de Batraciens). Pour les injections,
on emploie des solutions plus concentres (i 2 p. 100) et on peut en
inoculer chaque jour plusieurs centimtres cubes. La rsistance des
Mammifres est assez variable. Les Lapins et les Cobayes supportent
est relativement

longtemps ces injections, tandis que

trs

les Souris

meurent gnrale-

rsultats obtenus sont mdiocres. La


peau, les muqueuses, l'urine, les fces prennent bien une coloration
rouge, mais, l'examen microscopique, on trouve que le colorant n'a

ment au bout d'une semaine. Les

pntr que dans les espaces intercellulaires. Les cellules ne se colorent


dans leur noyau, ni dans leur cytoplasme, et la coloration produite par
le rouge neutre est trs fugace. Pour pratiquer des coupes sur les tissus
ainsi colors, il faut fixer la coloration par la mthode de Golovine '.
ni

Colorants indicateurs.
Les proprits indicatrices du rouge
neutre nous amnent parler d'une srie de colorants qui, sans
fournir des colorations vitales proprement dites, peuvent tre utiavantageusement, dans les examens l'tat frais, pour dter-

liss

miner la raction acide ou alcaline de certains organismes ou


lments figurs. L'tude de ces corps touche de prs la microchimie au sujet de laquelle on trouvera p. 669 des renseignements
complmentaires.

Le rouge Congo se ]rsente sous forme de poudre brun rougetre, facilement soluble dans l'eau. C'est surtout un bon ractif
indicateur qui vire au bleu avec les acides. Scholz s'en est servi le
premier pour colorer vitalement les Piotifres et mettre en vidence la raction acide du tube digestif, qui tranche en bleu sur
fond rouge de l'animal. Il est bon de savoir que ces ractions
ne sont pas toujours fidles le virage au bleu ne se produit pas
en prsence de l'ammoniaque, ou d'un coagulum albumineux

le

en outre
L

l'acide

Zeitschrift

f.

carbonique
wiss Mikr.,

est sans action.

XIX,

p.

176-185, 1902.

COLORATIONS VITALES
Les iropolines 00 (orange
de

Gas^ella)

eL II

de

Le Sudan III
tains

HiJclisl) et

rougissent immdiatement

d'alcali. Elles sont insensibles l'acide

253

avec

000 (orange .IV

la

moindre

trace

carbonique.

colore lectivemenl les graisses (p. 656) et certels que la cire, la culine et la subrine

lments vgtaux

le dimthylamidoazobenzol, s'emploie
(p. 729). Un colorant voisin,
aussi en solution alcoolique (0,4 p. 100) il colore le protoplasma
les graisses et certaines vacuoles en rouge.
en
;

jaune,

L'orang de dhntliylaniline (Goldorange, hlianthine) peut


pour l'tude de la raction du cytoplasme, au moins chez les
vgtaux. La solution aqueuse 0,01 p. 100 est d'un jaune
orang. Les acides, mmes organiques, la font passer au brun
servir

rouge d'une manire trs nette.


Le vert diazine convient pour l'tude des rductions, au cours
en deux leuco-composs (incolores), dont
desquelles il se ddouble
l'un redevient rouge par oxydation.

rgnre.

Injections intravitales.

mthylne, destines l'tude

La couleur verte

n'est jamais

Outre les injections de bleu de


du systme nerveux, je mention-

nerai les injections de poudres colores, ncessaires pour les travaux sur les cellules ou les organes phagocytaires les substances
:

les plus

employes sont l'encre de chine et le carmin pulvris.

Pour Ttude de appareil excrteur, on emploie le carminate


d'ammoniaque et le carmin d'indigo: cette dernire substance n'est
d'ailleurs pas un colorant vital proprement dit. Le carmin et
l'encre de chine servent aussi pour l'tude de la nutrition des
Amibes et des Infusoires.

On trouvera l'expos de cet important sujet au chapitre consacr


l'tude des injections physiologiques (p. 677).

CHAPITRE

DISSOCIATION.
DIGESTION ARTIFICIELLE

DCALCIFICATION
Je vais insister assez longiiemeiil sur

la

dissocialion el sur tous

procds qui s'y rattachent, parce que les dbutants sont trop
enclins aujourdMiui ngliger ces mtliodes. Sduits par la facilit

les

avec laquelle on arrive pratiquer des coupes, dans la majorit des


tissus et des organismes, ils ngligent Ttude individuelle des
lments histologiques.

On

trs fausse de la forme vritable de ces lconnat que sous l'aspect qu'ils revtent dans les
sections minces. Si on prsente l'lve la mme cellule, isole ou simplement coupe dans un sens auquel il n'est pas habitu, il ne la reconnat plus. On oublie trop que l'il humain est fait pour prendre connaissance des objets extrieurs suivant trois dimensions et que nos
thories sur les rapports et les fonctions des organismes sont bases
sur la reprsentation que nous nous faisons de ces objets dans l'espace.
Gomment comprendre la complexit des mouvements nuclaires qui
prsident la mitose ou les rapports multiples que prsentent entre eux
les lments si varis d'un organe parenchymateux, si nous en sommes
rduits nous les reprsenter sur un plan, nu moyen de coupes optiques? C'est grce une longue habitude que les micrographes exercs

se fait ainsi

ments car on ne

une ide

les

arrivent, comme nous l'avons expliqu (p. 168), superposer ces coupes
optiques, pour reconstituer loljjet entier dans l'espace. Le dbutant en
aussi n'aura-t-il qu'une connaissance incomplte et une
est incapable
ide fausse de la forme des lments cellulaires, s'il ne s'astreint pas
d'abord les tudier isolment, les faire tourner en quelque sorte
sous ses yeux, pour les voir sous toutes leurs faces. La mthode des
:

coupes lui montrera ensuite les diverses modalits d'association de ces


lments, en mme temps que, par les fixations trs parfaites qu'elle
permet, elle lui rvlera des dtails de structure qu'on ne peut dceler
sur les cellules isoles.

DISSOCIATION. DIGESTION AU TIFICIELLE. DCALCIFICATION

une base

255

par des faits bien oliservs,


Ayant acqiii:?
contrls par des dessins, il pourra leur appliquer ses facults imaii'inatives, reconstruire dans son
esprit la structure des org-anes et
l'ag-encemcnt de leurs lments, leur prter au besoin les dimensions
normales des objets qui nous environnent et arriver ainsi comprendre
leurs relations physiologiques. L lve atteindra ainsi le but de toute
bonne morphologie histologique, qui est de servir de base la physiosolide, constitue

logie et la pathologie cellulaires.

La

consisie

dissociation

isoler les lments constitutifs des

peut tre simplement mcanique^ c'est--dire pratique


d'aiguilles; elle peut tre chimique, en ce sens que la

tissus. Elle

au moyen

dissociation

mcanique

solvent les substances

de Taction de ractifs qui diset mettent en libert les

intercellulaires

Les procds mcaniques

lments.
alors

est })rcde

miques peut

mme

'agilalion interviennent

sparation. L'action des ractifs chitre plus profonde, tout en restant lective, et

pour en parfaire

la

dtruire certains lments des tissus, pour mettre les autres en


tels sont les procds de digestion artificielle et de
vidence
:

dcalcification.

DiSSOCITION MCANIQUE

I.

On

peut l'exercer soit sur des tissus

frais, soit

sur du matriel

masse. Cette opration, quoique trs simple,


dj fix et color en
elle est
demande beaucoup de soin, de jiatience et d'attention
:

excellente pour

atermir

la

main

et

lui

donner

riiabilet

qui

manque gnralement aux dbutants.


d'aiguilles.

lancole.
ils

La dissociation mcanique se pratique l'aide


Lesdeux formes utiles sont l'aiguille droite et l'aiguille
11 faut avoir une petite provision de ces instruments car

Aiguilles.

s'moussent assez vite

et,

pour obtenir de bonnes dissociations,

faut qu'ils soient toujours en parfait tat. Non seulement il faut


que les pointes soient trs aigus, mais encore il est ncessaire

il

que

la

surface en

soit

parfaitement polie.

Beaucoup d'auteurs conseillent de

emmanche dans

des |)orte-aiguilles

se servir d'aiguilles coudre, qu'on


mon avis, ces aiguilles ne valent

emmanches. D'abord la pointe n'en est pas assez fine,


conique et non longuement efllle, comme dans les aiguilles
emmanches. Ensuite elles sont trop flexibles si, pour remdier cet
inconvnient, on prend des numros un peu forts, les pointes dviennent
beaucoup trop grosses. On a bien la ressource de les user sur la pierre,
pas

les aiguilles

elle est

MTHODES GNRALES

256

puis de les polir sur un cuir, mais ces oprations sont assez longues et
on ne russit pas toujours trs bien. Je conseille donc de prfrence
l'emploi de bonnes aiguilles emmanches pointe trs effile et base
solide, non Ilexible, ou, leur dfaut, d'pingles Insectes de premire
qualit, qu'on {\xe dans un porte-aiguilles.
Pour manipuler de trs petits objets (Infusoires, Diatomes, etc.), on
peut employer, comme les anciens, une soie de Porc, ou mieux un cil de
Porc, qu'on fixe avec un peu de lut la cire (p. 447) l'extrmit d'un
petit bton.

Manuvre des aiguilles.


chaque main
gauche, une
:

droite,

une

Il

faut

deux

aiguilles,

une pour

aiguille droite qui spare les lments,

aiguille lancole qui peut fixer les fragments par le

plat et les diviser par la pointe et le tranchant.

On peut

dissocier Til nu, sous la loupe monte,

ou sous

le

binoculaire. Si on peut disposer de ce dernier, on travaillera sans


fatigue dans des conditions excellentes. A dfaut d'autre appareil,

on pourra employer le bras porte-loupe dcrit p. 111 (fig. 69), ou


encore une petite loupe trois pieds d'un modle trs courant dans
le

commerce. Qu'on

tant

que

travaille la
soit

la

loupe ou l'il nu,

convenablement

claire.

il

est

impor-

Pour cela il
on le
228)

prparation
faut disposer d'un fond mi-parlie noir et blanc (fig.
ralise au moyen d'une plaque de verre sous une moiti de laquelle
on colle du papier blanc et sous l'autre du papier noir. On peut ainsi
:

passer d'un fond l'autre, suivant la teinte de l'objet dissocier.


Il faut, en outre, que la lame sur laquelle on dissocie ne repose pas

immdiatement sur

le

fond, de manire ce

ne vienne pas obscurcir l'image de


la

l'objet.

que l'ombre projete


fera donc reposer

On

lame sur un support quelconque,' de manire

claire par rflexion.


Ptri,

ment

On

peut employer

un couvercle de cylindre Borrel ou


d'agitateur courb

deux

fois

ce qu'elle soit

une bote de
un fragdment
simj

cet effet

angle droit, de manire

former un U. Lorsqu'on dissocie sous le binoculaire, on dispose


de fonds blancs et noirs ainsi que d'un miroir (p. 113). Je ne conpas la dissociation sous le microscope cause du renversement des images et de l'absence d'ajipuie-bras.
Pour manuvrer correctement les aiguilles, il faut avoir
quelques notions sur la structure du tissu dissocier, savoir si
seille

ses lments sont parallles

ou entre-croiss.

En

effet, si

on dila-

cre au hasard, on dchire les lments au lieu de les sparer et


on les rend mconnaissables. Supposons que nous voulions obtenir

des fibres nuisculaires

nous savons que ces

fibres sont parallles,

DISSOCIATION. DIGKSTION ARTIFICIELLE. DCALCIFICATION

257

nous prendrons donc un })etit IVagment, cou}) dans le sens des


nous le sparerons d'abord en deux, puis, mellanl de ct

fibres;

une moili, nous diviserons l'autre, et nous rpterons cette oprade manire obtenir des filaments de plus en plus fins. Dans
ce cas, on dissocie dans le sens de la longueur, en appliquant les

tion,

aiguilles

une extrmit des fragments, toujours

la

mme, pour

limiter les traumatismes, et en cartant progressivement les


moitis pour les sparer.

Emploi des liquides.

deux

est vident

que cette opration ne


peine d'altrer irrmdiablement les
tissus. Les fragments dissocier seront donc maintenus en suspension dans un liquide, mais en quantit juste suffisante pour
peut se

faire

sec,

II

sous

empcher les lments de se desscher et d'adhrer la lame.


Pour les tissus frais, on emploiera la solution physiologique ou un
des liquides indiffrents indiqus p. 240.

La

imagine par Ranvier, s'applique au tissu conform d'lments entre-croiss de telle sorte qu'il s'tire en tous
sens sans se dclnrer. En talant ce tissu sur une lame de verre et en
lui faisant subir un commencement de dessiccation, on arrive faire
demi-dessiccation,

jonctif,

adlirer certaines parties

la

lame

et

obtenir

la

sparation des

lments.
Vagilation de fragments ou de tranclies d'organes avec une petite
quantit de liquide, dans un tube essai bouch, donne quel([uefois de

bons rsultats'.
Le raclage ou grattage avec un scalpel permet d'isoler facilement les
lments superficiels d'une mu({ueuse ou d'une tumeur.
Le brossage avec un petit pinceau trs fin convient pour les organes
lympboides on chasse ainsi les leucocytes et on peut tudier plus facilement les cellules fixes et la trame conjonctive. Ce brossage s'opre
sur des tranches minces, dans une goutte d'eau physioloi:i(iue.
La compression ou lcrasement modrs peuvent faciliter la dissociatrs

tion des cellules nerveuses. Un fragment de substance grise d'une corne


antrieure de la moelle, trs lgrement cras dans un peu d'eau
physiologique entre lame et lamelle [)eut montrer de beaux lments
(p. 659). Signalons ici un petit tour de main inditju par Ranvier et ([ui
consiste laisser tomber une goutte d'eau sur les objets dissocis et
sparer ainsi des lments (ju'on dchirerait infailliblement avec les
aiguilles.

Le procde du tapotement sera tudi page 20 1.


Mentionnons enfm la mtliode des injections interstitielles, qui, lorsqu'elle est bien excute, donne de bons renseignements sur le tissu
conjonctif. Ce procd, imagin par Ranvier, consiste produire une
boule d'dme en injectant de la solution physiologique dans le tissu
1. .Te

ne puis

(jue mentionner le ti's cui'icux procd


cf. CR. Soc. bioL, V, p. 797, 1888.

du diapason lectrique de

Bovier-Lapierre;

M. Langeron.

Prcis de Microscopie.

17

METHODES GENERALES

258

sous-cutiu; on sectionne rapidement une tranche de cet


lnie et on l'enferme entre lame et lamelle. La russite de cette opration exige une grande dextrit. On opre soit sur l'animal lui-mme,
soit sur un morceau de pe:iu prlev par biopsie.
cellulaire

IL

DISSOCIATION CHIMIQUE

Nous dislhiguerons
sant la dissociation.

trois catgories d'agents

Ce sont

les dissocialeurs

ferments solubles produisant


dcalcificaleurs.

la

chimiques produi-

proprement

dits,

les

digestion arliilcielle et enfin les

Il est
impossible de citer tous les
la dissociation ou macration. Je
de
produire
corps susceptibles
me contente d'indiquer les plus usuels et les plus faciles

Agents dissocialeurs.

employer.

eau chaude

ou bouillante, applique pendant dix quinze


des rsultats pour la dissociation de la peau,
donner
minutes, peut
des muscles et des tendons. On peut oprer par bullition directe
ou mieux au baiLi-marie.

Valcool au

tiers,

imagin par Ranvier, convient surtout pour

l'tude despithliums.
cils vibratiles.

On

le

Il

permet d'tudier

prpare en mlangeant

trs bien les cellules


:

Alcool 90

Eau

distille

vol.

Les objets qu'on y plonge doivent tre trs petits et on les y


au moins vingt-quatre heures. On peut l'employer aussi
les cellules ganglionnaires de la moelle pinire, et
isoler
pour

laisse

pour l'tude des lments des organes glandulaires. Pour ces derniers, on prolonge l'action du ractif pendant plusieurs jours.
Mann recommande vivement rem|)loi de l'alcool au tiers, modifi
selon Flix en

le

saturant d'acide salicylique.

On

double

d'immersion indiqu par Ranvier. Ce liquide est


l'tude du systme musculaire de la Grenouille

le

temps

pour
muscles

parfait
:

les

deviennent blancs, tandis que les tendons restent transparents.


Les alcalis caustiques (potasse et soude), en solution concentre,
n'allrent pas les cellules et dissolvent bien le ciment intercelluAu contraire, en solutions faibles, ils dtruisent les lments

laire.

On emploiera donc des solutions 30 ou 40 p. 100, frachement prpares avec de la potasse ou de la soude en pastilles,.

figurs.

DISSOCIATION. DIGESTION ARTIFICIELLE. DCALCIFICATION


qui sont faciies peser et se conservent

Tmeri bien boucbs.

trs

2o9

bien en (laons

On

emploie ces liquides pour l'lude des


muscles stris du cur et des muscles lisses qui rsistent trs
bien; on s'en sert aussi pour Tisolement des fibres lastiques, qui
sont respectes tandis que les autres lments
conjonctifs dispa-

bon d'oprer sur le


porte-objet ou dans un verre de montre. On examine les lments
dans le liquide dissociateur ou dans du formol 10 p. 100
mais
raissent. L'action est trs rapide, aussi est-il

faut bien se garder d'ajouter de l'eau


qui, en abaissant la concentration, amnerait la dissolution immdiate des lments figurs.
Le traitement par le formol permet de laver l'eau et de colorer.
il

Les solutions alcalines

faibles

ne peuvent convenir que pour

l'tude des lments corns, poils et ongles.

Les

minraux les plus employs sont l'acide chlorhydrique et


chlorhydrique pur isole bien les canalicules urinifres en quinze vingt heures. L'acide azotique trs fort, 40 p. 100,
produit le mme efet, en trois quatre heures; en solution 20 p. 100,
il est excellent
pour dissocier les muscles qu'on y laisse vingt-quatre
heures et qu'on agite ensuite dans l'eau.
Aprs les acides, on peut sans inconvnient laver les lments
grande eau pour les examiner dans la glycrine.
acides

l'acide azotique. L'acide

Les agents fixateurs^ convenablement modifis^ peuvent produire d'excellentes macrations. On peut donc, en combinant les
concentrations, les faire agir isolment ou successivement comme
fixateurs

et

comme

ncessaire de n
car,

employer qu'une

mme aux

Dans ce dernier

volume

est

cas,

il

est

trs petite quantit de liquide^

faibles concentrations,

fixateurs, lorsque leur

de

dissociateurs.

ils

peuvent agir

comme

considrable par rapport celui

la pice.

Vacide osmique

dissocie de 0,05 0,20 p.

100

et fixe partir

de 0,5 p. 100.

Le sublim dissocie jusqu' 0,15 p. 100 et


0,25 p. 100.
Les bichromates alcalins dissocient de 0,1 1
partir de 1 p. 100.

fixe

p.

partir de

100

et fixent

Vacide chromique
0,25 0,50

p.

dissocie de 0,01 0,20 p. 100, fixe de


100, dissocie de nouveau aux environs de 1 p. 100

puis devient destructeur partir de 2 3 p. 100.

L'acide azotique se comporte inversement,


puisqu'il dissocie
p. 100 et fixe de 1,5 3 p. 100,

de 3 40

METHODES GENERALES

260

Les liquides chromi(|ues conviennent jiailicnliremenl pour


systme nerveux.

le

Cette mtliode difi're de la dissoDigestion artificielle.


ciation simple en ce qu'elle est capable de dtruire certains
lments pour en mettre d'autres en vidence. On opre avec la

pepsine ou avec

la

pancratine.
On peut
employer

Pepsine.
une fistule gastrique, ou

par

(1 })artie

la

suc gastrique naturel, extrait


macration d'estomac de Porc

le

en poids pour 20 parties d'HCl (),i p. 100). Il est plus


de la pepsine en paillettes qu'on dissout

commode de prendre

dans de l'acide chlorliydrique 0,2 p. 100. [,e litre de cette solution de pepsine peut varier de 0,1 0,5 p. 100, suivant la puissance du produit et l'effet qu'on veut obtenir. On opre la
temprature de 37^ ou mieux de 40 et on surveille attentivement,
pour arrter l'opration au moment o le rsultat dsir est obtenu.

On })eut ajouter un cristal de


tions bactriennes.
Une bonne formule de suc
celle

de Jousset

(p.

thymol pour empcher

les pullula-

gastrique artificiel antiseptique est

695).

Ce ferment agit en solution alcaline. On en


une solution de 0,2 0,5 p. 100 dans de la soude caustique
0,2 p. 100, on fait agir 37-40 en ayant soin d'ajouter un
Pancratine.

fait

cristal

de thymol.

La digestion peptique convient pour Ttude des muscles et du


tissu lastique. Elle est excellente pour isoler les parties chitineuses et pour obtenir, l'tat de libert, certains parasites animaux
(Gysticerques p. 551, Trichines p. 558, etc.)

La digestion pancratique

est employe en histologie pour isoler


rseaux collagnes et, en gnral, pour l'tude du
tissu conjonctif. Elle convient trs bien pour la prparation des
lments calcaires ou chitineux des animaux.

les fibrilles et les

Pour les recherches histologiques, il est bon d'prouver la


puissance des solutions, au moyen d'albumine cuite ou de (ibrine
frachement extraite du sang, avant de soumettre les objets de
recherche leur action.

la

digestion artilicielle se rattachent les mthodes de recherche

du

bacille de la

(p.

694).

tuberculose par finoscopie, l'anliformine, etc.

Traitement des objets dissocis et digrs.


Ces objets
doivent subir encore un traitement mcanique, destin achever

2G1

DISSOCIATION. DIGESTION ARTIFICIELLE. DCALCIFICATION


la

sparalioa des lmeiils. LfiyiUiti/i dans

uii

petit tube,

aux

deux tiers rempli du dissocialeur, donne un liquide trouble dont


on prlve une goutte avec une }iipette. On peut encore, lorsqu'il
les saisir avec une pince pour les agiter
s'agit de membranes,
dans

liquide, soit dans le tube, soit

le

simplement sur

la

lame.

L'emploi du pinceau peut rendre de grands services. La dilacration proprement dite avec les aiguilles est quelquefois ncessaire. Enfin la percussion ou le tapotement entre lame et lamelle
donnent souvent de meilleurs rsultats que toutes les autres
mtbodes. Ce procd demande beaucoup de lgret de main

et

ne doit pas tre confondu avec l'crasement des tissus sous

la

lamelle. Cette dernire doit donc tre soutenue par une cellule en
les
papier dcoup ou par quatre boulettes de cire places sous

de
242). L'objet est plac sur la lame avec un peu
On
sur
ses
recouvert
la
lamelle
supports.
par
pose
liquide
ou
tapote alors doucement au-dessus de l'objet avec une aiguille

angles

(p.
et

une

petite tige

de verre ou de bois.

les pitbliums,

une sparation

On

obtient ainsi, surtout pour

trs parfaite des lments.

sparation des lments a t suffisante dans le liquide


peut tre ncessaire de les runir de nouveau pour les
laver, les colorer et les monter en prparations dfinitives. Cette runion
peut tre ed'ectue par sdimentation naturelle ou par centrifugaiion. La
sdimentation se lait de prfrence dans de petits tubes bouchs
on dcante le liquide clair qu'on remplace par de l'eau ou de
(fig-. 205)
l'alcool, puis par le colorant et enfin pnr les liquides intermdiaires et
le milieu de conservation dfinitif. La ccnlrifugation (p. 647) donne les
mmes rsullals avec une grande conomie de temps.

Lorsque

la

(lissociateur,

il

Les lments

trs dlicats, isols par tapotement sur la lamelle,


de
grandes prcautions pour tre monts en prparation
exigent
dlinitive. Toutes les oprations doivent tre effectues sous la

lamelle. Celle-ci est supporte aux quatre angles par des boulettes
et on fait passer sous elle tous les liquides successifs des-

de cire

la fixation, la coloration, au montage, etc. Ces


sont
introduits
d'un ct avec une pipette (tig. 146), tandis
liquides
Tautre
de
ct le liquide prcdent, au moyen de
aspire
qu'on

tins

au lavage,

bandelettes de papier buvard.

Pour ne pas dranger

l'objet et

ne pas dplacer

la lamelle,

il

ne

faut pas introduire plus de liquide qu'on n'en relire. Les bandelettes de buvard, pour agir efficacement, ne doivent pas tre

dchires au
ciseaux.

Il

hasard,

faut leur

mais

donner

dcoupes
la

rgulirement avec

largeur du petit ct de

la

des

lamelle

METHODES GENERALES

262
et

une longueur peu prs double.

On

doit les tenir inclines et

mettre leur tranche seule en contact avec

on

dpose sur

le

bord de

la

lamelle.

lame, celle-ci se trouve mouille par le


ce
entre
autres
inconvnients, produit des phnoqui,
liquide,
mnes de capillarit qui peuvent tre gnants. Le liquide aspir
Si

doit

les

la

monter lentement dans rjjaisseur du buvard. 11 faut aussi


un nouveau liquide qu'aprs avoir aspir

avoir soin de n'ajouter

une partie du prcdent, surtout lorsqu'il y a entre eux une diffrence de densit. Autrement le nouveau liquide, au lieu de pn-

Fig. 146.

Manire de traiter un objet par des liquides successifs, sans dranger


la lamelle.

Irer sous la lamelle, se

rpandra tout autour. Lorsque l'objet est


il faut,
pour ne pas le dplacer,

parliculirement dlicat et mobile,

l'entraner et le perdre, aspirer mthodiquement sur les quatre


cts de la lamelle et procder avec beaucoup de prudence.

La pntration des liquides s'electue facilement avec les j)etiLs objels,


que des Protozoaires ou des cellules dissocies. Elle est beaucoup
plus lente avec les objets larges et plats comme les Trmatodes, les
fragments de membranes, etc. en effet, les liquides ne sont en contact
avec ces objels que par une trancbc trs mince et passent autour d'eux
sans les pntrer autrement que sur leurs bords. 11 faudra donc prolonger leur action et la suivre au microscope. Si des liquides trs
mobiles et trs peu denses, tels que Talcool ou le xylol, viennent mouiller
tels

la face

suprieure de

avant de continuer

la lamelle,

les

il

faut avoir soin de bien les essuyer

oprations.

va sans dire que cette mthode, longue et dlicate, n'est


employer que dans des cas exceptionnels. On l'vite la ])lupart
du temps par l'emploi des frottis secs ou humides (p. 626 et 628).
Il

III.

Cette

opration

imprgnent

DCALCIFICATION

consiste

les os, les dents et,

dissoudre

les

en gnral, tous

sels

calcaires

qui

les tissus calcifis.

DISSOCIATION. DIGESTION ARTIFICIELLE. DECALCIFICATION

263

mthode des coupes.


qui
possdent tous la
Chimiquement,
fonction acide, dplacent les sels de chaux unis la substance
manire pouvoir

de

les

les

tudier par

la

liquides dcalcilianls,

combinent k eux pour les transcollagne du tissu osseux, et se


former en

sels solubles.

Du

cut

du

une neutralisation progressive par

il se
produit donc
bases terreuses.

dcalcifiant,
les

ce qui concerne la composition de la solution acide, il faut viter


une dissolution trop lente des sels calcaires et une altration des lments figurs du tissu dcalcifier. Aussi la dcalcification

En

deux cueils

ncessile-t-elle les prcautions suivantes


1 Ne dcalcifier que du matriel pralablement bien fix,
:

du matriel

mais jamais
on emploiera un liquide trs pn liminer tel que le picroformol de Bouin (p. 284), ou
formol 5 p. 100, surtout s'il s'agit de grosses pices.

Comme

frais.

trant et facile

fixateur,

simplement le
2" Ne jamais employer

les acides minraux forts (except l'acide azotique), sans addition d'une substance destine empcher le gonflement

du collagne.
plus possible la dissolution des sels calcaires et, pour
cela, employer un trs grand volume de dcalcifiant, suspendre l'objet
dcalcifier au milieu du liquide et changer frquemment ce liquide si

ou

la gliflcation

Acclrer

l'os est

le

volumineux.

aprs la dcalcification, de neutraliser les tisssus,


par action chimique ou par lavage.
4

Il

est indispensable,

On

comme

dcalcifiants, un grand
ceux
qui forment des sels
parmi
solubles avec les bases alcalino-terreuses. Remarquons que tous
les fixateurs acides agissent plus ou moins comme dcalcifiants,

Dcalcifiants.

nombre de corps

mais celte action

Le meilleur
l'emploie,

(Mayer),

a propos,

acides, choisis

est trs lente et insuffisante.

dcalcifiant est certainement

V acide azotique.

On

pur, en solution aqueuse (Schaffer) ou alcoolique


additionn de substances qui empchent son action

soit
soit

la phlorogonflante et parmi lesquelles la plus importante est

glucine.
i Solution aqueuse (F acide azotique 2-15 p. JQO d'aprs
Schaffer. Cette solution se prpare en ajoutant 3-23 volumes
d'acide azotique concentr, de densit J,4, la quantit d'eau
distille ncessaire pour faire 100 volumes. Ses avantages sont les
elle dcalcifie plus vite que tous les
suivants d'airs Schaffer *
autres acides (12-24 heures) et elle ne gonfle pas le collagne,
:

l. Schaffer, Article Knoclien


v.nd Ziihne in Encyclopadie der mikroskopischen
Technik; pour les mthodes de Retterer, cf. Journal de V Anatomie et de la physioSoc.
de
logie, XLI. Ifi05 et C\R.
biologie, janvier 1906.

2G4

MCTIIODRS GENKRALES

condilioii

(le

pas mettre

jias descendre au-dessous de 1,6 p. 100 el de ne


(issu en contact avec de l'eau pure, pour liminer

110

le

l'acide aprs dcalcification.

SchalTer conseille de ne rien ajouler pour empcher

ment
nient

le fonfle-

toutes les formules proposes ont, d'aprs lui, Tinconvde relarder beaucoup la dcalcification i (sauf la phloro-

glucine-).

L'limination de l acide ne doit jamais se faire par immersion


dans l'eau pure. Il faut commencer par un lavage de vingt-quatre
heures dans l'alun de potasse 5 p. 100. On peut ensuite laver
dans l'eau sans inconvnient.
2 Solution d'acide azotique 5 p. 100 dans l'alcool 90" (Maycr). D'aprs
Mayer, contrairement ce que dit Schaier, Talcool azoti({ue ne produit
jamais d'altration ou de gondement sur les os pralablement bien
fixs. Ce liquide agit beaucoup plus lentement que la solution aqueuse
(2 3 semaines). On lave, d'aprs Thoma, pendant huit quinze jours,
dans de l'alcool tenant en suspension un excs de carbonate de calcium
prcipit (ol)tenu en prcipitant une solution de chlorure de calcium
par une solution de bicarbonate de sodium et lavant bien le prcipit),
jusqu' ce que le liquide resle neutre au papier de tournesol.

L'acide sulfureux
aussi ra]nde

est aussi

un

excellent dcalcifiant, presque


moins nuisible au collagne

l'acide azotique et

que
mlanges la phloroglucine. Son emploi a t rgl j^ar
Ziegler, dont la mthode est recommande par Schaffer, Mayer et
Mann.
On hxe d'abord les fragments dans le formol, puis on les plonge
dans une solution aqueuse d'acide sulfureux commercial
5 p. 100. Le phosphate Iricalcique insoluble est converti en mono-

que

les

phosphate

trs soluble,

de

telle

sorte

qu'un humrus de Cobaye

adulte peut tre dcalcifi en douze heures

humains en une semaine (Mann). On


courante
fine

et

-f-

3o et de gros os

longuement l'eau
on dshydrate graduellement pour inclure la paraflave

ou au collodion.

1. Pourtant Malassez obtenait de trs bons rsultats avec une sohition aqueuse
sature d'acide picrique, additionne de -2 p. 100 d'acide azotique.
2. D"aprcs xVndecr et
Haug, la phloroglucine prserve les tissus de l'action destructive des acides et permet de les employer en solutions concentres. Haug
dissout 1 gr. de phloroglucine dans 10 gr. d'acide azotique pur, en chautiant lgrement, puis ajoute 50 gr. d'eau. On complte le volume de 300 cm^ avec de
l'acide 20 p. 100 ou moins fort. L'action est trs rapide. Ensuite on lave deux
jours l'eau courante.

GIlAl>ITHi-:

VI

THORIE DE LA FIXATION
Les mlhodes (rexamen rtal irais ne donnenl que des renseignements insnllisanlssnr la cellule vivante, parce que les lments
qui la constituent possdent tous peu prs le mme indice de
rfraction. La nature des rayons auxquels Til humain est sensible ne permet pas de surmonter cet obstacle par des procds
optiques et d'arriver ainsi distinguer nettement les dtails de
structure du noyau et du cytoplasme. Nous avons vu (p. 80) que
l'emploi des rayons ultra-violets permet, jusqu' un certain point,
de rvler ces dtails sans colorations, mais c'est une mthode

})urement photographique, sans intrt pratique. Il faut donc,


pour tudier la structure de la cellule, la colorer, afin de suppler
aux diffrences de rfringence par des diffrences de coloration.

Nous savons que

celte coloration est peu prs impossible k Tlal


vivant et que, pour la prali(iuer avec succs, il faut tuer la cellule.
C'est l le rle de la fixation.

La

cellules,

en

Dfinition de la fixation.
lion

destine tuer les

po&sible, dans

bonne

l'tal

fixation doit, en

elles se

quelque

donc une opraconservant, autant que

fixation est
les

trouvaient pendant

sorte,

immobiliser

la

Une

vie.

la cellule,

con-

server exactement toutes ses parties constituantes et ne pas faire


apparatre artificiellement de nouveaux dtails de structure. Cette
fixation exacte est impossible raliser avec les procds actuels.

Une

action prompte et nergique du ractif

empche bien

les

modifie aussi plus


ou moins profondment la structure cellulaire. Les meilleurs de
nos fixateurs sont ceux qui, tout en agissant raiiidemenl, |roduialtrations spontanes j^ost

morlem, mais

elle

le moins possible de modifications secondaires ou artifices,


susceptibles de nous donner une ide trs fausse de la morphologie interne des cellules.

sent

MTHODES GNRALES

266

En

quoi consiste donc essentiellement la fixation

? Il

est certain

masse

cellulaire, forme cralbuminodes, ne peut tre


que
conserve exactement que par un procd qui la solidifie. Or, en
la

mettant part

la

la dessiccation, cette solidification

conglation et

ne peut tre obtenue que par coagulation ou prcipitation.

Mann

a trs bien fait ressortir la diiTrence qui existe entre ces deux
la coagulalion (bien distincte de la solidification par le
refroidissemenL), est produite par les agents physiques, tandis que la
prcipitation, toujours accompagne de modifications chimiiiues, est produite par les agents chimiques. Le vritable but de la fixation est donc
de produire une coagulalion ou une prcipitation aussi compltes que
possible de tous les albuminodes cellulaires, en leur conservant un
aspect correspondant leur nature amorphe (cytoplasme), granuleuse

phnomnes

(grains de scrtion, mitochondrics), filamenteuse (ergastoplasme, appareil rticulaire),

etc.

Ces rserves faites sur Timperfection thorique de la fixation et sur


sa nature, nous pouvons envisager pratiquement en quoi elle consiste.
Elle a d'abord pour but de tuer les lments anatomiques, avec une rapidit suffisante pour qu'ils n'aient pas le temps de modifier leur forme
et leur structure.

Elle doit les durcir suffisamment pour leur permettre de rsister, sans
dformation, toutes les manipulations subsquentes (dshydratation,
inclusion, coupes, etc.). il faut bien savoir que le durcissement est une
la plupart des fixateurs actuels duropration distincte de la fixation
:

cissent suffisamment les tissus, mais la rciproque n'est pas vraie et les
anciens liquides durcissants ne sont pas pour cela des fixateurs. C'est

que leur usage tombe de plus en plus en dsutude.


peut tre ncessaire, dans certains cas, de faire suivre la
fixation par un durcissement conscutif.
La fixation doit produire, en mme temps, V insolnbilisation des lments
constitutifs des cellules et des tissus. Il est, en effet, de toute ncessit
que les dtails de structure, conservs par le fixateur, ne soient pas
dtruits ensuite par l'action des liquides de lavage ou les solutions

pour

cette raison

Pourtant,

il

colorantes. Celte insolubilisation peut tre produite par dshydratation,


coagulation et surtout par combinaison chimique du ractif fixateur
les albuminodes cellulaires.
Le lavage des pices, aprs la

avec

fixation, devra tre rgl suivant la


nature de ces combinaisons, d'ailleurs trs mal connues, mais dont la
stabilit et l'insolubilit varient avec les fixateurs.
Certaines de ces combinaisons jouissent aussi de la proprit de se
coml)iner avec certaines matires colorantes. Elles peuvent donc mordancer les tissus et permettre des coloralions caractristiques, qu'un ne
pourrait raliser autrement. Mais elles peuvent aussi tre rfractaires

d'autres colorations.
De ces diffrentes ractions peut rsulter aussi

une vritable

diffren-

ciation optique. En effet, la coagulalion ou la prcipitation du


de la cellule amne des modifications plus ou moins grandes

contenu
dans la

rfrangibilit de ses diverses parties. Il en rsulte que des dtails, invisibles l'tat vivant, parce que leur indice de rfraction tait trs

voisin de celui de l'eau, apparaissent nettement aprs que l'action des

THORIE DE LA FIXATION
fixateurs a notablement lev cet indice,
suivant la nature de chacun d'eux.

267

mais de (juantils variables

Un tissu bien fix montrera donc des cellules pleines, non


vacuolises, ni gonfles, ni ratatines, mais prsentant beaucoup
de dtails de slructure fine.
Ncessit de la fixation.
nous venons de

pour en

faire

morlem,

jjost

Il

est

superflu, aprs ce

que

dire, d'insister sur la ncessit de fixer les tissus

l'tude microscopique.
la difficult

La rapidit des

des examens

l'tat frais et

altrations

de la colo-

non fixs, en sont des preuves suffisantes.


peut donc dire que la fixation est la jjierre angulaire,
fondement de toute bonne histologie.

ration des objets

On

La valeur des faits observs au microscope


tire dpend entirement des procds de

en

et

le

des conclusions qu'on

fixation.

Si ces

mthodes

ont rellement pour rsultat d'immobiliser la cellule telle qu'elle est


l'tat vivant ou, au moins, d'une fagon adquate et de mettre en vidence
ses parties constitutives, nous pourrons acqurir des notions exactes sur
la structure des tissus et de leurs lments. Si, au contraire, l'action des
fixateurs fait apparatre des prcipits dans le noyau et le cytoplasme,
ces formations artificielles pourront tre confondues avec de vritables
org-ancs cellulaires.
Valeur de la fixation.
qu'il faut faire

Quelle est donc, dans la fixation, la part


artificielles? A la suite d'expriences
sur difi'rents albuminodes, Fischer est arriv

aux productions

excutes in vitro,
admettre que la coagulation du protoplasma est toujours due un phnomne de prcipitation. Chaque albuminoide cellulaire aurait sa figure
de prcipitation et chaque fixateur produirait sa fig-ure de fixation. Les
prcipits obtenus peuvent tre plus ou moins loigns de l'aspect vital
dans certains cas, ils peuvent tre purement artificiels
des lments
et constituent alors des artifices de prparation, dont il faut toujours se
:

dfier.

Les recherches de Fischer ont eu une grande influence et une porte


considrable, mais on peut leur adresser beaucoup de critiques.
Celles-ci ont t trs heureusement prsentes par Mann dans son
admirable ouvrage i. Nous ne saurions trop en recommander la lecture
ceux qui dsirent se documenter sur les phnomnes physico-chimiques qui prsident aux manipulations histologiques.
D'abord, il ne faut pas conclure de ce qu'on observe in vitro ce qui
se passe dans l'intimit des cellules vivantes. Ensuite, la plupart des
lments de la cellule (noyau, centrosome, grains de scrtion, protoplasmes spcialiss) peuvent tre vus l'tat frais, dans certaines conditions, et leur existence ne saurait tre rvoque en doute.
Pour les autres dtails, qui ne nous sont rvls que parles fixateurs,
le meilleur moyen d'en apprcier la valeur est de soumettre les cellules
1,

d.e

histolGQxj, inelhods and theory, Oxford, Clarendon Press,


Voir aussi ce sujet Boites Lee et Henneguy, Trait des mcthodes techniques

Mann, Physiological

190-2.

Vanatoinie microscopique, o" dit., Paris, Doin, 1002.

268

MTHODES GKNKI'.ALES

rnclion de

une

toule

srie de ractifs.

Si le

lsullal est iderili(|ue

dans tous les cas, il est corlain (|ue l'objet rvl prexistait rellement
et ne nous tait invisible qu' cause de ses
proprits optiques. Il reste
savoir si la fixation nous montre cet objet dans son tat naturel ou si
nous ne le voyons jamais que modifi. L'emploi des fixations convergentes, suivant l'expression de Henaut, c'est--dire du plus grand nomltre
de fixateurs possibles, appliqus au mme objet, peut seul permettre de
formuler une opinion sur l'aspect morpbologique rel le plus probable.

Dans

l'emploi des lixalions convergentes il faut, avec Apathy, distingnraux qui permettent d'obtenir une fixation peu
prs homogne de tous les lments et les fixateurs diffrentiels qui
mettent en vidence certains dtails au dtriment des autres.
Remarquons enfin, que le pouvoir de prcipitation n'est pas proportionnel

guer

\es fixateurs

au pouvoir fixateur
l'acide osmi({ue, qui est un fixateur trs puissant
(p. 272) a un indice de prcipitation trs faible. D'autre part, le tannin,
qui prcipite nergiquement tous les albuminodes, n'a aucune proprit
fixatrice. Les fixateurs ne produisent pas tons des prcipits; il y en a
qui donnent des congulations homognes. Nous aurons occasion de
revenir sur ces particularits en tudiant les diffrents agents fixateurs.
Nous pouvons donc conclure la haute valeur de la fixation, pourvu
qu'elle soit accomplie dans certaines conditions bien dfinies, au
moyen d'agents possdant des qualits parliculires.
:

Qualits des fixateurs.


conservei'ait la cellule clans

un

Le lixaleur idal

serait celui

lal identique Tlat

(jtii

vivant, en

gardant ses lments conslitutifs Tintgi^il de leui^s caractres


morphologiques. Nous savons que ce fixateur idal n'existe pas
encore

et que les meilleurs


agents que nous possdons doivent
runir un ensemble de (|ualits ncessaires pour rduire autant
que possible les artifices de prparation.

La

premire qualit d'un bon fixateur


pntration^ au moins en ce qui concerne

est

la

puissance de
de manire

les tissus,

ce
la

que le liquide puisse fixer aussi bien les zones profondes que
couche sujieriicielle. Le tannin est un fixateur di)lorable,

tnalgr son remarquable pouvoir de prcipitation, parce que son


pouvoir de diffusion est trs faible; les cellules ont le temps de se

ncroser avant d'tre atteintes par

Le fixateur

doit produire

le ractif.

une coagulation totale des albumi-

nodes, mais cela ne veut pas dire que la coagulation doive tre
Il faut, au contraire,
que la coagulation soit
en quelque sorte fractionne afin d'viter les contractions. Von
Tellyesniczky a bien montr que, dans les mlanges base d'acide

violente et instantane.

acticiue, qu'il considre

comme

les

meilleurs fixateurs, ce ractif

coagulation totale, en acidifiant les protoplasmes et en


les prcipitant en
partie. Les autres agents qui fout partie du

prpare

la

THORIE DE LA FIXATION

269

mlauge (acide osmi(|ue, bichromale de potassium, elc.), dilusent


plus lentemenl et n'arrivent au contact des cellules que lorsque
celles-ci ont t tues et en i)arlie prcipites par Tacide actique.
La rapidit d'action d'un fixateur doit donc avoir pour objet de
la prcipitation totale, au
le plus vite possible les cellules
contraire, doit se produire secondairement, de faon ne pas produire de contractions. Pour rsumer d'un mot ces proprits, nous
dirons que la mort des cellules doit tre immdiate et que leur

tuer

coagulation doit tre mdiate. 11 ne faut pourtant pas que la diffusion soit trop leule, sous peine de caus5r des altrations dans
des parties profondes.
L'acidit du fixateur est donc une qualit indispensable. L'acide
la plupart des fixateurs en
actique est l'acide le ])kis employ
les cellules

p. 100. Ce cori)S agit non seulement comme


cliromaline, mais surtout en neutralisant ou acidifiant

renferment de
fixateur de la

En effet, la puissance de coagulation ou de prcipitation


plupart des fixateurs no peut s'exercer qu'en milieu neutre
ou acide; un milieu alcalin la paralyse presque compltement ^

les tissus.

de

la

Uona

et

Golodetz- ont montr que tous

les

bons fixateurs sont des

oxydants acides, qu'ils neutralisent b's proprits rductrices des


tissus,' et qu'ils favorisent ainsi les colorations (}). 271).
Visotonie est une qualit plus discutable. 11 semble que son
importance, invoque

}tar

Sjobring, soit plutt tborique.

En

eiet

liquide, isotonique pour un tissu donn, cessera de l'tre ds le


premier contact et n'atteindra les couclies profondes ([u'aprs

un

11 ne faut pas oublier non


plus qu'une
ou
une
diminution
de concentration peuvent i)roaugmentation
duire une surfixalion de la priphrie des objets, ou nuire la

avoir perdu son isotonie.

rapidit de la diffusion. L'emploi des liquides isoioniques a t


repris un autre point de vue par Dekhuyzen (p. 297) et par

Rubenthaler

(p.

296).

Notons enfin qu'un bon fixateur ne doit pas ratatiner les tissus,
ne pas les noircir ni les rendre cassants et friables, enfin ne pas
gner

les colorations ultrieures.

Pourlaul V.

Bariial.io aurait obtenu de trs bous rsultats liistologiques et


cytologiques (systme nerveux, testicule), avec des fixateurs ulcalvts renfermant
parties gales de chlorure de sodium et de sublim et alcaliuiss par le bicarbonate de soude. Pour obtenir des fixations encore plus fines on ajoute du formol.
1.

Bull, dlia Soc. zool. ital., XIII, p. 198-v>00, 1904 et

Je

XIV,

pas essay ces mthodes.


Unna et Golodetz, Die Bedeutung des Saucrstoll'es

p. 139-1419

205-i>ll, 1905.

n'ai

2.

Studien, XXII,

191-2.

in

der Frbcrei. iJcrmat.

GHAPITHE

VII

AGENTS FIXATEURS
Les agents fixateurs peuvent tre d'ordre physique ou d'ordre
chimique. Nous allons tudier sparment les uns et les autres.

Le froid ne peut exercer une action fixatrice.


durcit les tissus et suspend les altrations cellulaires dues la ncrose
et l'auto digestion. Aux tempratures ne dpassant pas 0, cet agent
ne saurait donc tre qu'un adjuvant, par exemple dans la mthode de
Borrel (p. 281). La conglation des tissus frais parat tre, a priori, un

Agents physiques.

Il

l'augmentation de volume des liquides


qui remplissent les lments et la formation d'aiguilles cristallines ne
peuvent manquer de produire de vritables dlabrements. Son seul

dtestable procd iiislologique

est

avantage

Nous aurons

de ne pas prcipiter les albumines et de ne pas les altrer.


revenir sur cette question propos des procds de

coupes par conglation (p. 329).


La chaleur exerce une action bien diffrente, suivant qu'elle est applique des objets humides ou secs. La fixation par l'eau bouillante peut
rendre des services pour les Invertbrs et pour les recherchs microchimiques. Von Tellyesniczky pense que l'action successive de l'acide
acli(iue et de l'eau bouillante peut donner de bons rsultats, mais cette
mthode ne parat pas devoir se gnraliser. La chaleur sche est un
elle ne peut s'appliquer qu'aux frottis
agent fixateur 1res important
desschs (p. 630).
:

Ceci nous

amne

parler de la dessiccation dont le rle est

et de beaucoup de Protozoaires, Nous


capital dans l'tude du sang
V reviendrons propos de la mthode des frottis desschs (p. 626).
Au point de vue microchimique, cette mthode serait trs pr-

cieuse

si

elle

pouvait tre applique pratiquement aux tissus


elle prsente de grandes difficults tech;

malheureusemement
niques

(p.

365).
ici l'emploi de la narcotisation comme adjuvant de
Ce procd a t employ par Rubenthaler (p. 296) pour les
est d'usage courant (p. 537 et 619) pour les petits animaux

Nous mentionnerons
la fixation.

tissus et

il

aquatiques.

AGENTS FIXATEURS

271

Pour Tlude des lissus, les fixateurs


/igents chimiques.
chimiques so:il prfrables tous les autres. Nousallojis passer en
revue les principaux agents, puis nous tudierons les mlanges
fixateurs les plus employs.

Cristaux rouges trs dliquesAcide chromique (CrO^).


cents, conserver en flacons bien bouchs Tmeri, ou mieux

en solution

100 dans Teau

1 p.

distille.

Son action

fixatrice

ne

solutions trs dilues (0,1 1 p. 100) car, en


solutions plus concentres, c'est un dissociateur puissant (p. 259)
quoiqu'il fixe bien les noyaux. Ce corps est rarement employ
il
seul cause de ses nombreux inconvnients
manque de pn-

s'exerce

qu'en

tration et

produit, dans

il

cytoplasme, des rseaux

le

quelquefois trs rguliers et trs trompeurs;

donne lieu
protoplasmes. Par contre

il

certaines colorations, parce qu'il

la

de chrome dans

il

les

artificiels,

empche en outre
formation d'oxyde
partie de nom-

fait

breux mlanges, dont le type est le liquide de Flemming et dans


lesquels il joue un rle trs important. D'aprs Unna et Golodetz,
il cde facilement de
l'oxygne et, employ avec d'autres acides
qui forment des chromtes solubles avec l'oxyde de chrome mis
en libert par rduction, il augmente la colorabilit des tissus.

Acide actique cristallisable.

Liquide incolore,

cristalli-

sant au

dessous de-f-17. Ractif des plus importants, faisant


tant que fixateur
partie de presque tons les mlanges fixateurs en
de la chromaline et lment acide trs pntrant. D'aprs Unna
et

Golodetz,

il

augmente

des oxydes mtalliques

augmente

la colorabilit

les

et,

empche

contrastes,

la

sparation

mlang avec des acides oxydants,

de tous

les tissus.

Employ

seul (en solu-

100), il met en vidence le noyau des Proau


des examens extemporans, mais ne peut
cours
tozoaires,
servir de fixateur proprement dit, car il conserve trs mal le
tion

aqueuse

cytoplasme

1 p.

et ses

enclaves.

Acide picrique ou trinitrophno.

Petits cristaux jaunes,

qu'on emploie en solution aqueuse sature ou en solution alcoo0,6 p. 100, beaucoup plus
lique ^ Solubilit froid dans l'eau
:

soluble chaud.

Pour prparer

la

solution sature froid, mettre

1. L'acide picrique fait des taches indlbiles sur la laine et la soie. Sur le
linge les taches s"effacent au lavage. Les taches des doigts s'enlvent trs facilement avec une solution de carbonate de lithium. .Jellinek (Z^sc/ir. f. wiss. M'ikr.,
XI, p. 243, 189-2i a montr que ce sel forme avec l'acide picrique une combinaison
trs soluble. On peut proliter ventuellement de cette proprit pour dcolorer

rapidement

les tissus jaunis

par les fixateurs picriques

(p. 348).

272

MTHODES GNRALES

au Tond (un gvimd llacon, bouclu' an lige ou

IVuiicri,

uue

paisseur de un cenlimlre d'acide picrique; verser par-dessus

Teau

d(^

chaude, agiter et laisser reposer au moins douze


heures. Quand on prlve une partie de ce liquide, on la remilace
distille

un gal volume d'eau distille, de manire avoir toujours


une provision de solution sature. Ce liquide est inaltrable.
Eviter de chauffer feu nu les cristaux avec l'eau, cause des
par

proprits explosives de l'acide picrique.


Ne s'en)|tloie seul qu'en histologie vgtale.

En

histologie ani-

male, l'acide picrifjue, qui est un des ractifs les plus pntrants,
fait partie de
mlanges dont le type est le liquide de Bouin (p. 284).
Bichromates.
L'action de ces sels est bien connue grce aux

recherches de Burchardl^ Cet auteur

de strontium
les

noyaux.
de

et

Au

de zinc fixent bien

le

en deux groupes
AzH', Mg) et mme ceux
cytoplasme, mais dtruisent
les divise

certains bichromates alcalins (K, Na,

contraire les bichromates de

baryum, de calcium

bien les mitoses, mais non le cytoplasme.


Burchardt et von Tellyesniczky ([). 282) ont montr qu'on peut
et

cuivre

fixent

corriger ce dfaut par l'addition d'acide actique

et

(ju'on obtient

ainsi d'excellents fixateurs.

Le plus employ de ces sels est le bichromate de potassium


(K-Cr-0'), gios cristaux d'une belle couleur rouge orang, facilement solubles dans l'eau (12,4 |). 100). Celte solution se conserve
bien, de prfrence en flacons l'meri.

Bichlorure de mercure ou Sublim corrosif


Petits ci'islaux blancs trs toxiques, solubles dans
p. 100, l'biillition 54 p. 100), trs solubles

(llgCl-j.

eau ( froid

dans

l'alcool

(33 i>. 100). Pour prparer la solution aqueuse sature froid, on


dissout chaud 10 p. 100 de ce sel et on laisse refroidir. Il se

dpose do belles aiguilles cristallines


au fur et mesure des besoins.

et

on dcante

le liquide clair

Ce corps est un fixateur de premier ordre, mais il est ncessaire


de l'liminer compltement des tissus, ds que la fixation est termine, pour viter la formation de cristaux. Il est bien entendu
qu'aucun objet mtallique ne

doit entrer

en contact avec

les solu-

tions de sublim, sous peine de prcipitation immdiate.


Acide osmique (Os 0'').
Ce corjis devrait tre nomm plus

exactement ttroxyde d'osmium, parce


1.

qu'il

ne possde pas en

Burchardt, Bichromate und Zellkcrn. La Cellule, XII.

p.

.'537,

1897.

AGENTS FIXATEURS

273

de proprits acides et ne fait pas virer le tournesol. Il se


On le vend dans de
prsente sous forme de cristaux jauntres.
renfermant des quantits variant de
petits tubes de verre scells,
ralit

gr. 1

La manipulation
des diflicults [)articuliies. Il est
met sans cesse des vapeurs extrmement irritantes;

gr.

se mfier des erreurs de pesage).

de ce corps prsente en
trs volatil et
il

effet

faut bien se garder de respirer ces vapeurs et de

sV

exposer, car

peuvent dterminer des conjonctivites trs graves ^ Ce corps


est d'ailleurs un oxydant trs nergique; aussi est-il trs rapidement rduit par des traces de matire organique. De ces partielles

ncessit de prendre des prcautions sppour prparer la solution. Le titre babituel est de 1 ou

cularits
ciales

dcoule

2 p. 100;
1 p. lO'O.

mieux

elle

peut tre

comme

encore,

la

faite

dans de Teau

distille

l'indique Bolles Lee, dans de l'acide

Sous

celle dernire

et se prte

on mieux

cbromique

conserve beaucoup
fixation par les vapeurs osmielle se

forme,

parfaitement la
des mlanges chromo-actiques.

On peut
encore, d'aprs Gori, ajouter la solution aqueuse une trs petite
quantit de permanganate de potassium, sufiisante pour produire

ques

et la fabrication

une coloration

On

renouvelle cette quantit si la solution


peut enfin, d'aprs Pintner et Mayer, ajouter
100 cm^ de solution aqueuse 10 gouttes de solution de sublim
se dcolore.

rose.

On

5 p. 100.

On

peut employer sans inconvnient un flacon en verre blanc, pourvu


bien boucli Tmeri, 3olles Lee a montr que la lumire
ne rduit pas la solution, pourvu qu'on la tienne l'abri de la poussire.
L'essentiel est de nettoyer le flacon avec le plus grand soin, d'abord
avec une solution de permanganate de potassium, puis avec de l'acide
azotique et enfln de l'eau distille. On nettoie aussi le petit tube qui
renferme l'acide osmique en enlve l'tiquette et toute trace de colle
par un lavage minutieux. On donne alors un trait de lime sur le tube,
on le laisse tomber dans le flacon, on bouche et on agite pour briser
le tube. Ds que ce rsultat est obtenu, on ajoute la quantit de liquide
les dbris du tube restent au fond du flacon. L'acide osmique
voulue
se dissout assez lentement froid, mais il faut bien se garder d'employer de l'eau cliuude qui pourrait le dissocier.

qu'il

soit

Les solutions d'acide osmique doivent tre manipules avec des


Non seulement les vapeurs qu'elles mettent

soins particuliers.

1. Les avis sont


partages ce sujet. Mais, tout en tenant compte des idiosyncrasies, on fera bien de prendre des prcautions, parce que l"aition de ce rcactit'
sur les yeux ne se fait pas sentir immdiatement, comme pour d"autrcs substances,

telles f[ue le formol

M. Laxgeron.

ou l'ammoniaque, dont

les

vapeurs sont intolrables.

Prcis de Microscopie.

18

MTHODES GNRALES

274

sonl dangereuses, mais il laut les prserver avec soin de la poussire qui les rduit trs rapidement, avec formation d'un
prcipit
noir. Comme c'est un prodiii[ 1res coteux, on a intrt
emp-

cher autant que possible cette rduction qui rend les solutions
inutilisables. Il faut donc essuyer avec soin le pourtour du bouchon et du goulot avant d'ouvrir la bouteille, ne jamais y reverser

un liquide dj employ,

mme

})our fixer par les vapeurs, et

ne

jamais y puiser avec une pipette.

osmique ne forme pas de

L'acitle

sels,

mais seutement des composs

d'addition ou d'oxydation. Ce n'est pas un lectrolyte et les composs


d'addition (ju'il forme avec les tissus, ne sont pas lectrolysables; aussi
peut-on dire avec Mann que ce corps tient, parmi les composs mtal-

mme place que l'aldhyde formique parmi les composs orgaGomme lui,
fixe sans prcipiter, c'est--dire d'une toute autre

liques, la

niques.

manire

il

({uo les sels mtalliques.

11

lue rapidement les cellules et lixe

cytoplasme, mais moins bien le noyau. Il donne aux lments


une apparence homogne, qui nuit la bonne diffrenciation optique
des lns dtails de structure. De plus, il a grande tendance se rduire
dans les tissus et les noircir, surtout Iors([u'iIs renferment beaucoup
de cellules adipeuses. Son plus grand dfaut est d'tre trs peu dilfusiblc, et par consquent trs peu pntrant, de sorte que les couches
superficielles des pices sont surflxes (p. 280) bien avant que le ractif
n'ait pntr dans la profondeur. La surllxalion donne aux lments
des couches superficielles une grande fria!)ilit et une apparence
bien

le

homogne.
Ces inconvnients se prsentent surtout avec la solution aqueuse,
aussi l'emploie-t-on trs rarement isolment. On l'associe gnralement
aux acides chromique et actique dans les mlanges du Ivpe Flemming
(p. 280).

Au contraire, Ttat de vapeurs, c'est un llxateur parfait, mais


ne convient qne pour des objets trs petits ou trs minces, tels
que les Protozoaires ou les frottis de sang. Pour le faire agir sous

il

cette forme, le
col,

bouch

mieux

Tmeri

est
(fig.

de prparer un bocal large goulot sans


135), dont on garnit le fond de billes de

verre, pour augmenter la surface d'vaporalion. Sur ces billes, on


verse quelques centimtres cubes de solution 2 p. 100. Pour
des Protozoaires en suspension dans une goutte d'eau, on pose
pendant 30 40 secondes la lame renverse sur l'orifice du bocal.

Pour

les

frottis

humides ou desschs, on procde plus simplela lame tout entire dans le bocal qu'on
L'exposition dure de 30 secondes

ment, en introduisant
ferme immdiatement
1 minute.

Alcool thyliqiie.

Ce corps ne peut

servir

de fixateur

AGENTS FIXATEURS

275

l'lat isol que sous orme d' alcool absolu K Aux autres concentratious, l'action dshydratanle Temporle sur raction fixatrice et pro-

duit des contractions nergiques. Au contraire, Talcool bien absolu


peut donner des fixations excellentes, surtout pour le systme

nerveux.

Dans
l'alcool
siste

Il fixe

aussi trs bien les frottis desschs (p. 630).

bonnes maisons de produits chimiques, on trouve de


suffisamment absolu. Un bon moyen de s'en assurer conles

verser quelques gouttes de cet alcool dans

demi plein de tolune ou de xylol;

louche,

ne

mme

s'il

trs lger, Talcool est absolu.

signifierait rien car le xylol se

mlange

un tube

essai

ne se produit aucun

L'preuve contraire
avec un excs

trs bien

On peut encore employer


carbure de calcium, qui dgage de l'actylne au contact de la

d'alcool 90, sans produire de trouble.


le

moindre trace d'eau.

On peut arriver dshydrater de l'alcool insufPisamment absolu, en


l'additionnant d'une certaine quantit de sulfate de cuivre calcin. Ce
dernier existe aussi dans le commerce, mais il est bon de le calciner
de nouveau, au rouge, dans une capsule de porcelaine ou un tt de
brassant avec un fil de fer ou de cuivre, jusqu' ce
poudre bien blanche. Sous cette forme, le sulfate de
extrmement avide d'eau, dont il s'empare en bleuissant. On rptera donc le traitement de l'alcool, par addition de poudre
calcine et dcantations successives, jusqu' ce que le sulfate de cuivre
ne bleuisse plus.
terre poreuse,

en

le

(|u'on obtienne une


cuivre est un corps

On ne

saurait trop rpter

que

la fixation })ar l'alcool

seul est

d'un emploi dlicat sauf pour la grosse anatomie vgtale. L'oubli


de ce principe est trop souvent la cause de trs mauvaises fixations.

On

ne tient pas compte de ce que


or.
p. 100 d'eau

ferment environ 80

la

plupart des tissus ren-

on n'emploie pas une


grande quantit d'alcool, le titre de ce dernier baisse immdiatement et, au lieu d'une fixation vritable, on obtient simplement
une dshydratation, plus ou moins complique de macration.
:

si

Lorsqu'on emploie l'alcool bouillant, il tant opi'er au bainmarie (l'alcool thylique bout 4- 785) et avec prcaution,
cause de l'infiammabilil des vapeurs.
D'aprs Kittsteiner-, on pourrait employer l'alcool dnatur par
1. i^a fixation par des alcools de concenlratiou croissante, trs
employe par les
anciens liistologistes, est tout au plus bonne pour conserver leur forme aux objets
destins aux recherches de systmatique.
2.
Kittsteiner. Untersuchungen ber die Einwirkuug
des denaturierten
Alkohols auf tierische Organe und seine Vorwendbarkeit in der mikroskopischer
Technik. Zlschr. f. miss. Mikr., XXVI. p. 191-192. 1909.

MTHODES GNRALES

76

la pyridine, dans les ninies conditions que Falcool 90'\ c'est-dire comme constituant de mlanges fixateurs et comme liquide
de lavage, mais jamais comme fixateur unique, parce que les bases

pyridiques contractent les noyaux et en dissolvent certaines parties. L'acide actique neutralise cette action.

Alcool mthyliqiie.
des

frottis

desschs

Actone.

{\).

Ractif

trs

important dans

la

technique

-411 et 630).

Ce corps

i)eut

constituer, dans certains cas,

un

fixateur assez passable pour les frottis desschs (p. 411) mais il
n'est pas recommander pour les tissus, car il cause encore plus

de contractions que
tation (p. 303).

nom

un agent de dshydra-

Ce corps est un gaz, dont la solution aqueuse


de formaline ou de formol. Toutes les fois que nous

Formaldhyde.
porte le

l'alcool. C'est surtout

parlerons de formol pur, nous aurons en vue


ciale 40 p. 100.

la

solution

commer-

Le formol a pris en technique une importance considrable


cause de son prix peu lev et de la facilit de son emploi. 11 a
mme t Tobjet d'un vritable engouement, dont on tend d'ailleurs revenir.

On

notamment abus de

ce produit

comme

liquide conservateur, mais on n'a pas tard s'apercevoir qu'il


prsente, dans certains cas, les plus graves inconvnients (p. 432).

Comme

fixateur,

il

joue un rle important cause de son pou-

voir coagulant et de sa remarquable puissance de pntration. 11


importe de dire que ces proprits ont t signales pour la pre-

par un Franais, rillat, en 1892^ et non par Blum,


publication est postiieure d'une anne ^. Ce corps a fait
depuis Tobjel d'un grand nombre de travaux, parmi lesquels il
convient de citer ceux de Hermann" et de Sjobring'.

mire

dont

fois

la

Le formol du commerce

est

un

liquide incolore, mettant des

mais

vapeurs
beaucoup moins dangereuses que
celles de l'acide osmique. 11 est fort dsagrable de manipuler des
pices imbibes de formol, cause des violents picotements qu'on
trs

irritantes

ne tarde pas ressentir dans, les yeux l'action sur la muqueuse


pituitaire est peut-tre moins sensible, mais ])lus durable, et l'olfac:

tion peut finir par se trouver sensiblement diminue.


Acud. des Se, CXIV,

1.

C.

2.

Ztschr.f.

3.

Anot. An::., p.

li.

Il

faut viter

p. 1278, 1802.

"

4.

Sjobrins:,
p. 273, 1900.^^

loiss.

Mikr., X, p. 313, 1893.


112, 1893.

Ueber das Formol,

als

Fixirungs Flussigkcit. Anat.

An:;.,

XVII,

277

AGENTS FIXATEURS

aussi de mellre les doigts en contact avec les solutions renfermant

du formol, car lpiderme se trouve rapidement fix


manire fort dsagr^^able.
Il faut
adopter une convention pour formuler le

et

durci d'une

titre

des dilu-

pour nous, le pourcentage visera toujours la solution commerciale 40 p. 100. Ainsi on prparera une solution 5 p. 100
tions

en mlangeant o cm-^ de formol avec 95 cm"^ d'eau. Quand on relve


une formule dans un mmoire, il faut avoir soin de s'assurer si la
teneur est indique en formol commercial ou en aldhyde formique. Exemple

formol 4 p. 100 veut dire mlange de 4 cm-^

de formol avec 96 cm-^ d'eau, tandis que formaldhyde 4 p. 100


veut dire mlange de 10 cm^ de formol avec 90 cm=^ d'eau. Dans
le

premier cas on prend

p.

2i de formol, dans

le

second cas

1 p. 9.
!.a

solution commerciale prsenle quelquefois une altralion particumanifesle par une apparence laileuse et par la formation

lire, qui se

d'un prcipit blanc, plus ou moins abondant, de paraformol. Le froid


semble jouer un grand rle dans ce phnomne. J'ai vu des flacons
entiers, rapports par Nevcu-Lemaire de son exploration des hauts plateaux de Bolivie, compltement transforms en une masse blanche
glatineuse. Personnellement, j'ai observ que, pour une mme solution, des portions exposes aux froids assez considrables des hivers
jurassiens taient partiellement transformes en paraformol, tandis que
d'autres portions, conserves dans une cave, restaient inaltres.
Thoriquement, la formaldhyde est un non-lectrolyte, par consquent incapable de former des sels, mais pouvant donner des composs d'addition. Elle agirait comme rducteur. En pratique les choses
se passent autrement, parce que les solutions renferment toujours de
Pacide formique, si bien que Sjbring considre en dlinitive le formol
comme un oxydant, car son action est trs semblable celle de l'acide
osmi(iue.

Le formol seul, pur ou dilu, est un mauvais fixateur cytologique il


produit un certain gonllement des tissus et vacuolise les cellules ou
l)ien leur donne l'aspect surfix, homogne, vitreux, qu'on observe la
priphrie des objets traits par l'acide osmique. EnOn, il rend trs
difhcile la coloration par Posine des lments acidophiles et il diminue
beaucoup les contrastes colorants entre le noyau et le cytoplasme.
Pour attnuer ces inconvnients, on peut, d'aprs Mann, neutraliser
:

sodium (employer le
papier de tournesol comme indicateur), et surtout employer, comme
lifiuide de dilution, la solution physiologique (sauf pour les yeux entiers
qui exigent la dilution dans l'eau pure, sous peine de se contracter).

l'acide formicjue par des traces de carbonate de

Pratiquement, le formol, mme dilu dans Teau ordinaire, peut


rendre d'immenses services en voyage ou en exploration, lorsqu'on
n'a pas d'autres fixateurs sous la main. Il conserve suffisamment

MTHODES GNRALES

278

pour ])ei'iietlre de bonnes tudes lopographiques, ainsi


recherche des Protozoaires parasites. Les pices conserves

les tissus
la

que
dans

l'alcool,

dans

mmes conditions, sont gnralement macLa meilleure dilution est 5 p. 100, c'est-partie de formol pour 20 jtarties d'eau pure ou

les

res et inutilisables.
dire renfermant 1

physiologique.

Dans

les

organes

souvent des pren imposer pour du pigment.


de traiter les coupes par la

trs vasculariss, le formol produit

cipits noirtres trs gnants, qui peuvent


Pour s'en dbarasser, Verocay^ conseille

potasse alcoolique trs dilue

Potasse (en pastilles)


Alcool 80

p.

100

1
.

25

cm-^

pendant 10 minutes. Laver deux fois dans Peau, cin([ minutes chaque
passer dans Palcool 80" pendant cinq minutes, puis laver de
nouveau. Aprs ce traitement, les hmaties se colorent trs bien par
fois,

Posine.

Le formol fait partie d'un grand nombre de mlanges fixateurs.


ces divers titres, c'est un des ractifs les plus importants de la

technique moderne. Nous tudierons plus loin

comme
1.

J.

(p.

452) son rle

liquide conservateur.

Verocay

Beseitigung der Formol-Niederschlage aus

Schnitten, Centralbl.

f.

aihj.

Pathol.

u.

pathol. Anat.,

XIX,

mikroskopisclieii

p. 769-774, 1908.

CHAPITRE

VIII

MLANGES FIXATEURS
Le bref

ex)3os de la thorie de la iixalioii et des proprits des

principaux agents fixateurs, nous a montr qu'aucun de ces derniers n'est capable de runir k lui seul les qualits que doit possder un bon fixateur (p. 268). Dans la technique moderne, il est
les tissus, d'employer un agent
presque exclusivement de mlanges,
combins de manire complter l'action d'un fixateur par un

donc

trs

du moins pour

rare,

fixateur unique.

On

se sert

autre, ou contrebalancer les actions nuisibles.


diffrentes

les

cellules

cellules d'un

tissu

et

De

les divers

cette manire,
lments de ces

peuvent tre conservs aussi parfaitement que

iossible.

Je crois prfrable de classer ces mlanges par grou})es, caractriss par l'lment le plus actif.

1.

FIXATEURS

BASE D'ACIDE OSMIQUE

Pour obvier aux inconvnients des solutions d'acide osmique,


on

en compltent et en
Les principaux sont les acides actique et
chromique el le chlorure de platine. Il faut en exclure a priori les
agents rducteurs tels que l'alcool. L'acide actique ralise l'acia tent d'y adjoindre d'autres ractifs qui

modrent

l'action.

du milieu, ncessaire pour une bonne fixation fp. 269): il


augmente la })nlration, lixe la chromatine nuclaire et attnue
la surfixation du cyto}lasme, tout en amliorant la diffrenciation
dit

optique. L'acide chromique contribue la fixation de la chromatine


et diminue le noircissement des tissus. Le chlorure de j)latinc

possde un pouvoir

comme mordant
safranine et

le

coagulant considrable

nergique pour
bleu de toluidine.

et,

en outre,

les colorants basiques, tels

agit

que

la

.METHODES G KNEIIALKS

280

nombreux mlanges qui ont t proposs, nous ne


retiendrons que ceux de Flemming, d'Hermann et de Lindsay
Parmi

les

Johnson.

Mlange de Flemming ou chromo-aclo-osmique.


deux formules,

existe

Il

Nous ne

donnerons que

dites
celle

mlange fort
du mlange

comme

d'excellents rsultais. D'ailleurs,

l'a

et

faible.

mlange

fort^

qui

fournit

montr Carnoy,

les

proportions peuvent varier un peu sans inconvnient. Pour viter


la rduction de l'acide osmique ])ar l'acide actique, on fait
part
les deux solutions suivantes
:

Solution A. Acide ctiromi(iue

Eau

\).

100

11

distille

Acide aelique cristallisable


Solution B. Acide cliromique
p. 100
Acide osmique cristallis

100 cm^.

2 gT.

Au moment de
Si

vol.

l'emploi, on mlange 4 parties de A avec une partie de B


on dsire un fixateur plus faible, on ajoute 4 y parties d'eau distille.

Le mlange de Flemming est un lixateur cylologique de premier


un ractif universel. Aussi ne convient-il pas

ordre, mais non


le travail

pour

courant des recherches topographiques ou patho-

logiques.

ne peut tre emplov que pour de trs petits objets ou de


fragments d'organes. En effet, son pouvoir de pntra-

Il

trs [tetits

osmique, qui en est l'agent fixateur le


gure sentir son influence au del de 5
G couches de cellules. Aussi les fragments doivent-ils avoir au
plus 2 3 millimtres d'paisseur. Malgr ces prcautions, la partie
tion est trs faible
actif,

plus

ne

l'acide

fait

vraiment utilisable

et

bien fixe est trs faible, cause des phno-

mues de surfixation ou action priphrique qui

se produisent

couches superficielles Ceux-ci se manifestent, comme


nous l'avons dit p. 274, par une apparence homogne et vitreuse du
contenu cellulaire, trs nuisible la bonne diffrenciation optique.

dans

les

Les opinions sont encore partages sur la cause de cette surtixation


nous ne pouvons discuter ici cette question qui est traite
:

fond dans les ])ublications de

Fischer^, lAiann-, von Tellyes-

niczky ^ etc.
1.

Bau
2.

3.

Anat.

Anzc'ifjcr, IX, p. &l, 1891 et X, p. 769, 1895.


Fixierung, Fiirbung nnd
des Proloplnsmas, 1899.
methods
and
Physiological hislology,
theonj, Oxford, Clarendon Press, 1902.
EncyklopCidie der mikroskopischen Tec/inik, 2'- dit., 1910; article Fixation.

MLANGES FIXATEURS
Le volume du
menls
et

et la

281

liquide doit tre environ 4 fois celui des tiagla fixation de vingt-quatre heures au moins,

dure de

de quaranle-liuil heures au plus. Pour

le

lavage des pices ainsi

fixes voir p. 294.

Le mlange de Flemming ne permet pas de bonnes colorations


par les laques d'hmaloxyline. Par contre, il se prte trs bien
la safranine et des couleurs d'aniline, par exemple le

remploi de

Irichromique de Cajal

Mlange de
Ce mlange

(p.

126).

Hermann

on plalino-acto-osmiqae.
de celui de Flemming- en ce que l'acide ctiromiqiic est reinplac par du clilorurc de plaline. On prend par exemple
dilTre

Ghlonire de plaline a 1 p. 100


Acide actique cristallisable
Acide osmique 2 p. 100

15 vol.
1

Il
est bon de ne pas prparer la fois de grandes quantits de ce
mlange. Le mode d'emploi est le mme que pour le Flemming.
La valeur de ce liquide a t trs conteste par certains auteurs.
ses deux principaux drivs sont les
Aussi a-t il l souvent modifi
mlanges de Borrel et de Lindsay Johnson.
:

Mlange de Borrel.
Acide osmique
Chlorure de plaline
Acide chromique
Acide actique cristallisable

Eau

On

fixe

heures.

2 gT.
2
3

20
350

distille

de trs petits fragments la g:lacire, pendant vingt-quatre


colore au trichromique de Cajal.

On

Mlange de Lindsay Johnson.


Bichromate de potassium 2,5
Acide osmique 2 p. 100
Chlorure de platine 1 p. 100
Acide actique ou formique

p.

100

....

70 vol.
10
15
5

On n'ajoute ce dernier ractif qu'au moment de l'emploi, pour viter la


rduction de l'acide osmique.
Ce dernier mlange est trs vant par Lee et Henneguy. Ce serait un
des meilleurs ractifs pour lixer le cytoplasme et ses inclusions.
Pour
fixer, la

tous les fixateurs de ce groupe, le

dure de

des pices fixes sont

volume des

mode de lavage,
exactement les mmes.

la fixation, le

objets

la colorabilit

MTHODES GNRALES

282

II.

FIXATEURS

BASE DE CHROME

Nous savons que Tacide cliromiquc

et les bichromates, emjiloys


ne constituent pas (Je bons fixateurs ;p. 271 et 272). Mlangs
avec Tacide actique, Facide osmique ou le bichlorure de mer-

seuls,

cui'e, ils

on ne

donnent

la facilit

Tous

les

meilleurs ractifs que Ton connaisse. Jamuis


substances rductrices, cause de

doit leur adjoindie de

les

lesquels

il

avec laquelle ils cdent une partie de leur oxygne.


mlanges d'acide chromique et de bichromates dans
entre de Talcool ou du formol (liquide de Perenyi ', de

Graf, etc.) doivent tre proscrits

comme

irrationnels.

Mlange bichromate de von Tellyesniczky.


seul qu'il soit utile de signaler

Ijichromate de potassium
Acide acti({ue cristallisable

Eau
constitue

Il

gr.

cm

100

un

conserve

la fois le

actique).

On

C'est le

'

excellent fixateur trs ralionnel (p. 268) qui

cytoplasme (bichromate) et les noyaux (acide


peut y plonger des objets petits ou moyens, mais ne
on
dpassant pas autant que possible 5 millimtres d'paisseur
les y laisse un ou deux jours ou mme plus longtemps sans incon:

On lave Teau courante pendant


et
on passe lentement par les alcools
heures
(p. 29i)
vingt-(|ua[re
en commenant })ar rab'ool 15 p. 100. Les rsultats sont anavnient, suivant leur volume.

logues ceux du liquide d^ Zenker. Les objets supportent peu


de vue, les fixateurs chromoprs toutes les colorations ce point
actiques tiennent le milieu entre les mlanges osmis et les
:

ce sont ces derniers


liquides base de sublim ou de formol
les plus belles et les plus faciles.
les
colorations
qui permettent
:

III.

FIXATEURS

BASE DE SUBLIM CORROSIF

On

em}loie rarement la solution aqueuse pure. 11 est prfrable


d'y ajouter au moins une certaine quantit d'acide actique.
Je rappellerai, pour mmoire, que le mlange de Perenyi doit tre rang
les formules surannes et irrationnelles. Il tait en effet compos d'alcool,
d'acide nitrique et d'acide chromique
ces corps ragissent entre eux. do telle
sorte que, tinalement, on n"a plus qu'un mlange d'ther azotique, d'oxyde de
chrome, d'alcool et d'acide d'azotique. Autrement dit, c'est un alcool nitrique, trs
1.

parmi

mdiocre fixateur (Mayer).

MLANGES FIXATEURS

283

Sublim actique.
Solution aqueuse satare de sublim
Acide actique cristallisable

Sous

celle

forme

le

^,

subiim

est

95
o

un excellenl

cni-^

lixaleiir

peu

prs universel, convenant trs bien pour tons les travaux courants.

Il

pntre vite

et

ne gne pas

les colorations,

mais

il

ne faut

longtemps, sous peine de rendre les objets


friables
il faut donc les retirer ds
qu'ils ont pris jusqu'au
centre une teinte blanchtre opaque, indiquant qu'ils sont

pas

le laisser
agir trop
:

pntrs.

Sublim alcoolique de Schaudinn.


Solution aqueuse sature de sublim
Alcool absolu

vol.

'Ce ractif joue un rle trs important dans l'tude des Protozoaires.
l'emploi froid, ou chauff 60"-7.
Je ferai deux remarques son sujet
on peut le prparer avec de
Tacool 90, les rsultats sont exactement les mmes. En outre, ce

On

allemande, n'est pas suprieur, aucun


point de vue, aux mlanges de Bouin et de Duboscq-Brasil (p. 284 et 285).

fixateur, trs vant par l'ccole

1. C'est dessein
que je n'indique pas, dans le texte, la formule du ml-oif/e
de Dorainici au sublim iod et formol. Ce lxateur a donn d'excellents rsultats
entre les mains de Dominici et de ses lves. Personnellement je ne le trouve
pas suprieur aux formules courantes et je lui fais le grand reproche d'tre

et instable, puisqu'il est constitu par deux corps chimiquement


incompatibles, incapables de donner naissance des composs stables et dfinis.
Aussi, sans nier la valeur do ce mlange, je n'eu conseille l'emploi ni pour les
dbutants, ni pour le travail courant. D'aprs Doiniiiici et son lve Rubens
Duval voici comment ce liquide doit tre prpar
une solution de sublim
sature 40 (obtenue en refroidissant 40", puis dcantant la solution sature
aux environs de 60'') on ajoute goutte goutte, et en agitant, de la teinture d'iode,
jusqu' teinte jaune orang, sans toutefois produire ni un prcipit, ni une teinte
rouge. Il se forme ainsi, d'aprs les auteurs, de l'iodo-chlorure de mercure iode.
On ajoute alors, 100 volumes de cette solution. 12 volumes de formol 40 p. 100.
Au besoin verser quelques gouttes de teinture d'iode si le liquide a trop pli ce
mlange ne se conserve pas, il faut le prparer au moment de l'emploi. Les
pices y restent de 2 4 ou 1-2 heures. On peut acidifier par p. 100 d'acide

irrationnel

actique. Laver l'alcool ou l'eau et inclure le plus tt possible.


Au fond, on ne connat pas la composition du mlange et je doute qu'il y reste
du sublim, car ce corps, sous l'action de l'iode, donne du biodure de mercure,
soluble dans un excs de ractif, de l'iodochlorure de mercure, compos mat dfini,
et du chlorure d'iode, soluble dans l'eau en la colorant en jaune. Peut-tre ce
dernier corps joue-t-il une rle dans la fixation.
Consulter ce sujet
Doniinici, Sur un i)rocd de technique histologique
appliqu l'tude des cellules conjonctives. Folia hxmatoloi/ica, II, p. 219-226,
1905.
Rubens Duval, Cytologie des inflammations cutanes. Thse de la Fac. de
:

rad. de Paris, lOOS. Cf. p. 15-18.

METHODES GENERALES

284

Mlange de Gilson.

On

dissout du sublim saturation dans

le-

mlange suivant

Alcool absolu

Acide actique cristallisable


Chloroforme

Ce fixateur
des objets

est

trs

un dos plus pntrants


difficiles

fixer

',

(cls

([ui

vol.

existent et convient pour


les

que

ufs de Nmatodes

{Ascaris, p. G06,\

Mlange de Zenker.
Bichlorure de mercure
Bichromate de potassium
Sulfate de sodium

Eau

5 gr.

100 cm-^
5
2,5
1

distille

Acide acliiiue (ajouter au

moment

de l'emploi).

Ce ractif, trs vant, convient assez bien pour le travail courant.


Personnellement, je ne le trouve pas suprieur au Bouin ou au Tellyesniczky et il prsente, en outre, l'inconvnient d'exiger un lavage soigneux et prolong, d'abord l'eau pour liminer le bichromate, puis
l'alcool iod pour liminer le sublim.
Sa vogue est probablement due ce qu'il est une anilioralion du
vieux liquide de MiUer, devenu par trop insuffisant et dmod, mais
dont l'emploi est extraordinairement enracin.

Pour

le

mode d'emploi de

fixation, se reporler

lY.

ces mlanges
aux pages 288 el 29i.

FIXATEURS

et

pour

le

lavage aprs

BASE D'ACIDE PICRIQUE

Nous savons que Tacide picrique seul, en solution sature,


aqueuse ou alcoolique, n'est pas uu bon fixateur des tissus animaux, bieu qu'il possde une grande puissance de pntration et
de prcipilatiou. Aussi l'emploie-t-on toujours enmlauge.

Picroformol de Bouin.
Solution aqueuse sature d'acide picrique.
Formol 40 p. 100

30 vol.
10

Acide actique cristallisable

liquide, extrmement ])ntrant, peut tre considr comme


fixateur universel. A mon avis, il peut convenir ])our toutes

Ce
un

1. Dans ce but, on peut employer le mlange de Carnoy ou de van Geliuchten,


qui est galement un fixateur, des plus pntrants
:

Chloroforme
Alcool absolu
Acide actique cristallisable

3 vol.

6
1

Ml'XANGES FIXATEURS

mme

sortes de travaux,

emploi

pour

est des plus faciles

les

285

recherclies de cytologie.

Son

parce qu'on peut y plonger des objets

un temps quelconque (3 jours


au moins, 8 jours au plus d'aprs P. Massonj. En outre, il ne
ncessite pas de lavage particulier aprs la fixation (voir p. 271,
assez volumineux et les y laisser

note 1, et p. 348, procd rapide de Jellinek pour Flimination).


Il suffit de
transporter les pices dans Talcool 90" qu'on change

deux ou trois fois (p. 295). C'est le fixateur que je recommande le


plus chaudement pour Tusage courant. Avec lui, les dbutants
n'auront jamais d'insuccs.

Mlange de Duboscq-Brasil.
Ce mlange

nomme

se

encore Bouin alcoolique, hquide de

Bouin-Duboscq, ou de Brasil.

On peut dire que ce mlange complte heureusement celui de


Bouin, en lui donnant des qualits encore plus pntrantes. Aussi
convient-il parfaitement, d'une part pour les frottis humides
(p.

173). d'autre part

pour

les objets difficiles fixer, tels

que

les

Arthropodes ^
150 cm'.
00

Alcool 80
Formol 40 p. 100
Acide ocliquc cristallisablc
Acide picrique

Mlanges au sublim

15
t

gr-

et l'acida picrique.

Ces mlanges, prconiss d'abord par Mann et RabI, puis par Branca,
Bouin, etc., sont aussi d'excellents fixateurs universels.

Mlange de Mann.
Bichlorure de mercure

Eau

2,5 gr.
100 cm^

bouillante

Aprs dissolution, ajouter acide picrique.

Au moment

de l'usage, ajouter formol.

...

gr.

20 cm-'

On

peut lxer dans ce liquide des objets assez volumineux, pourvu


ne soient pas trop pais ils peuvent y rester plusieurs jours. On
lave ensuite l'alcool iod (p. 294) pour liminer la fois Facide picrique
et le sublim.
qu'ils

Mlange picronitique de Mayer.

Eau

distille

Acide azotique 25
Acide picrique

p.

100

100
5
q.

cm3

s.

pour saturer.

1. Pour
les travaux trs dlicats, Bouin et Duboscq recommandent d'viter
l'emploi de l'alcool absolu. On passe de l'alcool 00" d'un mlange parties
absolu et do chloroforme, puis au chloroforme pur. On imprgne
d'alcool
gales

de paraffine basse temprature et on enrobe dfinitivement dans la paraffine dure.

286

MKTHODES GNRALES

Ce mlange

est destin

remplacer Tancien mlange picro-sulfurique


rsultats au moins aussi beaux et possde
l'avantage de ne pas former de ciistaux de sulfate de calcium, dans les
organismes renfermant du carhonale de calcium. Il convient surtout
pour les Arthropodes, mais, ninie ce point de vue, ne prsente pas de
supriorit sur le mlange de l)u!)osc(i-Brasil. Ce dernier, grce la
prsence de l'acide picrique pntre trs bien la chitine.
<le

11

Kleinenberg.

donne des

FIXATEURS

V.

Le formol

est

BASE DE FORMOL

rarement employ seul,

comme

fixateur hislolo-

gique, car il gonfle et vacuolise les cellules. Pourtant il convient


trs bien pour Ttude du systme nerveux central, sous forme de
solution 10 p. 100.
Comme ce corps est

un puissant rducteur, il ne faut jamais le


oxydants tels que l'acide chromique. Les
principaux mlanges au formol ne sont autre chose que des
mlanges picriques (liquides de Bouin, de Duboscq-Brasil, de
Manu, etc.). Mentionnons encore lalcool-formol (|ui convient trs
mlanger

des corps

bien pour

le

systme nerveux

Alcool

Formol

Vl.

9U vol.
100

FIXATEURS

Nous savons que

la

658)

Oi)

a 40 p.

10

BASE D'ALCOOL

l'alcool diffrencie

trs

mal

le

noyau

et le

274) parce qu'il se comporte comme rducil


prsente l'avantage de ne pas agir chimiquecellule, mais seulement comme dshydratant; il

cytoplasme (voir
teur. Par contre,

ment sur

(p.

p.

ne modifie donc pas

la colorabilit

des lments cellulaires.

Il

se

comporte ce point de vue comme l'alcool mthylique, l'actone


et l'ther. Ces deux derniers ne constituent pas proprement
parler des fixateurs.

Nous savons que

l'actone n'est qu'un agent


dshydratant. Quant l'ther, on ne peut l'employer seul cause
de sa trs faible solubilit da:;s l'eau. Associ l'alcool (alcool-

ther)
(p.

il

630),

beaucoup.

peut convenir pour la fixation des frottis desschs


mais non pour celle des lments frais qu'il contracte

CHAPITRE

IX

CHOIX D UN FIXATEUR
Je m'efforcerai, dans ce chapilre, de guider le choix du dbuLe travailleur exerc counal les fixa leurs qui conviennent

lant.

le mieux chaque cas, mais le dbutant est toujours dsorient


au milieu de ces multiples formules. Bien que j'en aie rduit
considrablement le nombre, j'ai t oblig de mentionner certains mlanges clbres, dont Temploi est conseill dans beaucoup

d'ouvrages

et

Aucun de

qui doivent (igurer dans un prcis de technique.


ces mlanij^es ne fixe i^alement bien toutes sortes

Le liquide de Bouin lui-mme, qui

d'objets.

est

pourtant

le

type

du

fixateur universel, ne convient gure pour l'histologie vgtale et fixe assez mal le rein et le testicule des Mammifres. Le

choix du fixateur dpendra donc de la nature de


qu'on se propose.
Le dbutant, qui veut se familiariser avec

l'objet et

la

du but

mthode des

coupes et tudier topographiquement toutes sortes d'organes,


devra se servir uniquement du mlange de Bouin. Par ce moyen,
il

sera sr de n'avoir

aucun insuccs

et d'obtenir des pices tou-

jours suffisamment fixes pour y retrouver

les dtails histologi-

ques essentiels.

En

cas \irrjence ou en voyage, si on n'a pas de liquide fixala main, il faut employer le formol 5 p. 100, dans

teur sous

lequel on peut laisser indfiniment les pices, mais jamais l'alcool.


En effet, le formol donne toujours des rsultats utilisables tandis

que

1.

s'il n'est
pas em])loy en grande quantit, macre
rend toute tude histologique impossible ^

l'alcool,

tissus et

C'est tout le contraire

systmalique.

formol

et

s'il

s'agit de la conservation morpholofji^jue pour l'tude


loin (p. 152) qu'il faut alors rejeter absolument le

Nous verrons plus

n'employer que

les

l'alcool.

MKTHODES GENERALES

288

Lorsqu'on esl un peu familiaris avec la mlliode des coupes,


on peut employer tous les fixateurs en les adaptant aux divers
genres de tissus et de recherches. Nous pouvons diviser ces
recherches en

trois

groupes.
d'histologie gnrale, (pion peut encore nommer
travaux topographiques. On employera le mlange de Tellyesniczky (p. 282), le sublim actique (p. 283), le mlange de Zenker
1.

mManges au sublim-formol-acide picrique (p. 285)


mlange de Houin (p. 284).
11 faut
Travaux cytologiques.
distinguer ici les tissus

284), les

(p.

et

Travaux

surtout
2.

le

parenchymateux ou facilement pntrables (glandes, testicules, etc.)


et les matriaux difficiles fixer, tels que certains ufs [Ascaris).
Dans le premier cas, on peut employer les mlanges osmis,
appliqus de trs petites pices (mlange de Flemming, p. 280)
ou les fixateurs base d'acide picrique (picroformol deBouin,p.284,

ou mlanges au picroformol-sublim, p. 285). Ce sont ces deux


catgories de fixateurs qui se prtent le mieux l'emploi des
colorations dites cytologiques (trichromique de Cajal,

mthode de

Prenant, hmaloxyline ferrique).


Dans le second cas, il faut avoir recours des fixateurs excessi-

vement puissants

et dous d'un grand ])ouvoir de pntration.


C'est alors qu'on utilisera les mlanges de Gilson (p. 284) et de

Carnoy
3.

(p.

284, note

1).

Recherches microchimiques.

Dans

cet ordre de tra-

vaux,
que dans l'analyse chromatique proprement dite,
c'est--dire dans la recherche de l'affinit des lments pour les
colorants acides, basiques ou neutres, il faut modifier le moins
ainsi

possible les proprits des cellules. Aussi, dans ce cas, faut-il


avoir recours aux fixateurs chimiquement indiffrents \ dont le

type est l'alcool absolu, ou, lorsque cela est possible, aux agents
phvsiques tels que le froid (p. 329), la chaleur et la dessiccation.
(p.^270).

Bien entendu, ces indications n'ont qu'un caractre trs gnral elles
nous servent simplement classer les fixateurs en grands groupes et
orienter le dbutant dans le ddale des formules. En ralit, il faut,
pour chaque cas particulier, choisir le fixateur le mieux appropri;
;

Pourtant, d'aprs les rocliorches de M"*' Asvadourova, la recherche du fer


les cellules pigmentaircs des Amphibiens a donn des rsultats beaucoup
plus prcis aprs fixation dans le Flemming ou le Bouin. Cf. Prenant, Mthodes
et rsultats de la raicrochimie, Journ. de l'anat. et pinjs., XLVI. p. 395, 1910.
1.

dans

CHOIX

d'l'N

fixateur

289

quo le Bouiii donne des rsultats imparfaits avec le testicule


Pour le premier, le sublim actique est prfrable, tandis
second est trs bien fix par le mlange de Carnoy (p. 284).

c'est ainsi

et le rein.

que

le

A un

autre point de vue, l'inclusion la paraffine exige des fixations


une des raisons pour lesquelles les mlanges
fixateurs trs puissants ont pris une importance prpondrante.
Il faut tenir compte aussi de la coloration qui sera employe. Nous
savons que les fixateurs pnent certaines colorations et en favorisent
d'autres. Ainsi les mlanges osmis rendent difficile l'emploi de l'bmatotyline et du carmin, tandis (|u'ils s'allient trs bien la safranine et

trs solides. Aussi est-ce

aux couleurs d'aniline. Les mlanges picriqus prparent admirableles colorations l'hmatoxyline. Le sublim se prle toutes les

ment

teintures.
11 sera donc ncessaire de complter plus loin ces indications, dans le
chapitre des mthodes spciales, et d'indiquer, pour chaque catgorie
d'objets, le fixateur qui convient le mieux.

M.

ii.vx.-iERON.

Prcis do ^iicrosc<5pii

10

CHAPITRE?X

PRATIQUE DE LA FIXATION
Aprs avoir

fait

choix d'un lixaleur, nous devons dlerminer de

quelle manire il doit tre appliqu aux tissus, pour donner les
meilleurs rsultats. Nous laissons de cl les procds physiques
(dessiccation, chaleur), dont Ttude sera mieux place dans les
mthodes spciales. Nous ne nous occuperons que du traitement

des tissus par les mlanges fixateurs.

Nous devons examiner successivement

le

mode de prlvement

des pices, le volume de fixateur empjoyer, la dure et la temprature de la fixation et enfin le traitement conscutif au lavage.

Prlvement des pices.


rence ou tu par

comme
ici

il

L'animal est saign de prfgaz d'clairage ou par le chloroforme et lix


^

le

est expliqu

ranimai ouvert

pour

les autopsies (p. 545).

et l'organe

Nous supposons

tudier mis nu. L'essentiel est

d'extraire cet organe, sans lui faire suLir de traumatisme qui puisse
Pour le librer de ses attaches conjonctives.,

altrer sa structure.

on se servira de prfrence d'un bistouri bien tranchant et on


vitera de le saisir avec les pinces dissection. Celles-ci ne sont
gaine conjonctive ou graisseuse qui entoure
l'organe isol, le traitement variera, suivant
tissu est contractile ou non contractile.

appliques que sur


l'organe.

Une

la

fois

que le
Organes non contractiles.
le

systme nerveux,

la rate,

le

rein.

les

Pour

mlange de Bouin,

Premier temps.

la

Ce sont par exemple

organes parenchymateux
travail

le

courant,

fixation doit tre faite

On coupe

tels

les glandes,

que

le foie,

notamment avec
en deux temps.

le

d'abord dans ces organes des

1.
Dans un bocal ou sous une cloche pour les petits anioiaux. dans le four
Pasteur pour les gros animaux on fait arriver le gaz par une des tubulures du
:

couvercle.

PRATIQUE DE LA FIXATION

291

une noix ou une noisette


fragments assez volumineux, gros comme
et on les jette dans le fixateur. Celui-ci sera contenu dans un
bocal large ouverture, garni au fond d'une couche d'ouate pas
trop paisse. Les
toucher.

morceaux seront disposs de faon

Deuxime temps.
c'est--dire au bout

Ds

qu'ils

ne pas se

sont suffisamment durcis,

d'une heure ou deux, on

les retire

un

un,

pour procder au second temps de la fixation. Celui-ci consiste


dbiter les morceaux en fragments dfinitifs, ayant au maximum
5 mm. d'paisseur, et les plonger dans du mlange fixateur neuf.
Ce procd en deux temps a pour luit d'obtenir des morceaux bien
rguliers et convenablement orients. En eiet, les organes frais sont
trs mous et trs difficiles couper correctement en tranches minces
:

on risque d'obtenir des fragments informes, qui se recroquevillent dans


le fixateur. Au contraire, en ayant soin de durcir la priphrie de morceaux
un peu volumineux, on peut les rduire ensuite en tranches de l'paisseur voulue. Pendant la fin de la fixation, ces tranches conservent leur
forme.

Pour couper les organes, il faut prendre une lame la fois large,
mince et bien tranchante, telle qu'un couteau cerveau. A son dfaut,
on se servira d'un rasoir rserv cet usage, cause de l'action du
fixateur sur la lame. 11 est ncessaire de poser l'organe sur une plaque
de lige, afin que les sections puissent tre compltes, franches, et que
le tranchant du couteau puisse pntrer lgrement dans le support,
sans toutefois s'mousser. Pour pratiquer les sections, il ne faut pas
appuyer la lame mais la tirer soi d'avant en arrire, de manire
diviser les tissus sans les craser. On comprend qu'un scalpel ou bistouri, mme trs affil, a une lame trop troite et trop lgre pour effectuer correctement ces mouvements.
Lorsque les tranches dfinitives sont dbites, on les porte dans un
nouveau liquide fixateur frais, sur une lgre couche d'ouate. On laisse
ainsi s'achever la fixation.

Cette mthode ne peut tre pratique avec les fixateurs base de


sublim, car il faut viter absolument le contact des instruments mtalliques avec les pices et avec le liquide.

Organes contractiles.
le

tube digestif et

sion,

afin

que

Dans

cette catgorie,

la vessie. Il est essentiel

les

de

couches musculaires ne

nous rangeons
en exten-

les fixer

dforment pas

la

muqueuse en se contractant irrgulirement.


Intestin.
On isole une anse intestinale ou une portion du
gros intestin. On ligature une des extrmits et, par l'autre, on

injecte, avec une pipette ou une seringue de verre, une quantit


de liquide fixateur suffisante pour distendre modrment la cavit
On achve de her l'extrmit par laquelle on a pratiqu finjeclion

MTHODES GNRALES

292
et

on plonge

dans

le loul

pendue par un des

le fixaleur,

en maintenant

la

pice S!is-

de ligature. Aprs fixation complte, on

fils

en rondelles.

l)eut dbiter

Estomac.

Pour

les

estomacs de petite dimension, procder

comme pour
fixer

que

Tintestin; pour les grands estomacs, dont on ne peut


des portions, voici comment il faut s'y prendre. On pr-

pare une lame de lige de la dimension convenable (4 cent, de


ct environ), de prfrence perce en son centre d'une large
ouverture (de 2 cm. de ct environ). On a soin de la tremper

dans de

paraffine dure

la

(60"),

fortement chauffe (80), de

bien imbibe. Cette prcaution est indispensable pour empcher le liijuide fixateur de mouiller le lige et
de faire diffuser le tannin dans la pice fixer.

manire ce qu'elle

soit

On dcoupe rapidement une portion de la paroi stomacale et on


retend sur le lige, sans l'tirer, en la fixant au moyen de fines
pingles mtalliques ou d'aiguillons de Hrisson, suivant la nature
du fixateur. On fait fiotter le tout sur le fixateur, en ayant soin

que

la

membrane

soit

en dessous. Si on

s'est

d'une lame

strvi

perce d'un orifice, on a soin de remplir cet espace de fixateur.


Au bout de quelques heures, la membrane est suffisamment fixe

pour qu'on puisse enlever les pingles et dbiter en tranches.


Les vessies de petite dimension seront distendues
Vessie.

modrment avee
lies

au col

liquide fixateur inject la seringue, puis

le

dans

et

le fixaleur.

plonges
Oprer
comme pour l'estomac, en ayant
normal.
pas distendre plus qu'
Poumon. y deux cas distinguer. Lorsque

Peau.

soin de ne

l'tal

Il

les

poumons

forment de vritables sacs, comme chez les Amphibiens


Reptiles, on les traite comme les anses intestinales ou les
estomacs. Pour

les

poumons des grands Mammifres,

si

et les

petits

on ne

remplir de fixateur en

les injectant par la trache, le


fragments qu'on jette dans un fixateur
alcoolique trs pntrant, de prfrence le mlange de DuboscqBrasil. En effet, dans les mlanges aqueux, les fragments sur-

peut

les

mieux

nagent
le

est d'en prlever des

incompltement. Pour l'tude fine du poumon,


de noyer dans le fixateur des ftus de petits Mammi-

et se iixent

mieux

est

fres ayant respir.

Volume des

Nous avons dj dit, propos des


pices.
osmis
trs
li(juides
peu pntrants, que les objets fixer ne devaient
pas avoir une paisseur suprieure 1 ou 2 mm. Cette rgle est

293

PRATIQUE DE LA FIXATION

commune

lous les

pntranls,

il

mme

fixateurs;

bonde

n'est pas

avec les liquides les plus


dont l'paisseur

faire des tranches

de 1 cm. d'paisseur, la fixadpasse 5 mm. Avec des morceaux


On proportionnera donc
insuffisante.
est
tion des parties centrales
des pices la puissance de pntration du fixateur
:

paisseur

Flemming, 2 mm. au maximum avec le Bouin, 5 6 mm.


au maximum. Il n'en est pas de mme pour la surface des trancelle-ci pourra tre au?si considrable qu'on le dsire.
ches
Pour les travaux topographiques, on pourra trs bien faire de
avec

le

belles li^anches ayant 2

cm. sur 3 cm., dont les coupes tiendront


32. Par contre, pour les tudes

sous une grande lamelle 22

cytologiques, on ne prendra que des fragments


manire favoriser autant que possible la fixation
la dure des manipulations.

Volume du

fixateur.

est ncessaire

Il

trs

petits,

de

et raccourcir

que

la

composi-

du fixateur demeuie aussi constante que

tion

possible, pendant
les actions osmotiques et

toute la dure de la fixation, malgr


chimiques exerces par les pices fixer.

Il

faut

donc employer

un volume de fixateur trs grand par rapport celui des pices.


Le chiffre classique est de cinquante fois, mais il pourra tre
diminu beaucoup pour les fixateurs osmis (p. 281).
Pour faciliter la pntration du fixateur et les courants de diffusion l'intrieur de l'objet fixer, il est ncessaire que ce dernier
soit suspendu dans le liquide. On y arrive, soit au moyen d'un fil
pour

les

organes ligaturs (intestin), soit en faisant flotter imemsur lige), soit en mettant une couche d'ouate

liranes piques

au fond du rcipient,

soit enfin

nouet de mousseline.

Dure de

chaque mlange
la fixation,

la fixation.
fixateur.

En

en suspendant l'organe dans un

Nous

l'avons dfinie propos de

principe,

il

vaut mieux prolonger

surtout avec les mlanges picroformols, dans lesquels

peuvent rester longtemps. Par contre, il ne faut laisser


pices dans les fixateurs osmis et dans le subhni actique

les pices
les

temps ncessaire la fixation, car ces liquides rendent


Pour le sublim, on compte une heure par
millimtre d'paisseur. Enfin cette dure est fonction de la temprature; on peut la diminuer de moiti en fixant l'tuve 40.

que juste
les

le

objets cassants.

Temprature de
on

fixe la

la fixation.

temprature ordinaire

osmis, cause de

la

trs

grande

Dans

la

volatilit

majorit des cas,

pour les mlanges


de Tacide osmiqne,

c'est la rgle

294

METHODES GENERALES

Pour les autres liquides, il y a intrt fixer


au maximum. Les courants ascendants, qui

l'luve 37"
se produisent

ou 40

dans

le

liquide chaud, mettent chaque instant des nouvelles portions


de fixateur en contact avec Tobjet. En outre, le pouvoir pntrant

augment par l'lvation de la tem})rature. Il faut avoir soin


de boucher hermtiquement les flacons, afin d'viter la dperdition
des produils volatils (formol, alcool, acide actique).
est

Les liquides bouillants ne doivent tre employs que pour des


objets trs difficiles pntrer, tels que les Arthropodes. Nous
reviendrons sur ce sujet propos des mthodes spciales (p. 555).

Le froid retarde la fixation. Son emploi n'est indiqu que dans


des cas trs particuliers, par exemple pour viter Tauto-digestion
des cellules grains de scrtion. C'est ainsi (]ue Borrel fixe la

un mlange d'Hermann modifi fp. 281).


Cette opration, souvent trop
Lavage aprs fixation.
est
d'une
les
dbutants,
importance capitale. En
nglige par

glacire avec

principe, ds que

la fixation est termine, il faut liminer le plus


substances fixatrices, parce que ces corps nuisent
coloration ultrieure et la conservation des coupes. Le dissol-

tt possible les

la

vant employ varie avec

la

nature du fixateur.

Les pices fixes par les mlanges osmis et bichromates, doivent tre
laves Veau courante ou au moins souvent renouvele. Il est essentiel que celte eau ne soit ni trop calcaire, ni slniteuse, de fagon
ne pas former de dpts adhrents la surface des pices. La dure de
ce lavage sera peu prs gale celle de la fixation. On ne transportera les pices dans l'alcool 70" qu'aprs ce lavage, de manire
viter la foimation des prcipits. Pour les pices fixes au Tellyesniczky
(p. 282) il faut d'abord passer par l'alcool 15, et n'employer l'alcool

que lorsqu'il ne donne plus de prcipits.


Les pices fixes au sublim doivent tre laves Valcool iod. En effet
l'alcool dissout le sublim beaucoup mieux que l'eau; l'iode contribue
encore rliminaliun de ce sel, en le transformant en iodure de mercure. On met donc les pices, au sortir du sublim, dans de l'alcool
70", auquel on ajoute une quantit de teinture d'iode suffisante pour
lui donner une lgre teinte brune. Au bout de quelque temps, l'alcool
se dcolore et on ajoute de nouveau de la teinture d'iode. On continue
ainsi, par additions successives et en surNcillant, jusqu' ce que l'alcool
ne se dcolore plus. On a soin de renouveler aussi l'alcool deux ou trois
fois, suivant le nombre et le volume des pices, car il faut viter la
formation, leur surface, de cristaux d'iodure de mercure.
70",

Ce lavage a une trs grande importance pour faciliter la coloration


des coupes, et pour viter la formation, dans les tissus, de fins prcipits, sous forme de poussires, d'aiguilles ou de granulations. Ces
prcipits sont dus non seulement au sublim, mais encore aux combinaisons que forme ce sel avec les phosphates alcalins des tissus ou

PRATIQUE DE LA FIXATION

295

ses transformations en sels basiques insolubles. L'emploi de l'iode a


la formation
pour but de solubiliser tous ces produits et d'empcher

des prcipits

'.

Les pices fixes dans

mlanges picriqiis doivent toujours tre


seulement une raison de plus grande
l'acide picrique ne forme pas avec les lments des tissus,
solubilit
comme les sels des mtaux lourds, des combinaisons insolubles dans
l'eau. Bien au contraire, les prcipits forms par l'acide picrique avec
les albuminoides sont facilement dtruits par l'eau et doivent tre
d'abord durcis par l'action de l'alcool. 11 ne faut pas non plus effectuer
le lavage chaud, mme avec de l'alcool (voir p. 271, note 1, et p. 348
laves Valcool.

Il

les

n'y a pas

procd de lavage de Jellinek).


L'limination de l'acide picrique n'a pas besoin d'tre complte pour
fixes au
pratiquer la dshydratation et l'inclusion. Pour les pices
Bouin et au Duboscq-Brasil, on pourra dshydrater de suite par l'alcool
90" et l'alcool absolu.
Lorsque les liquides picriques renferment du sublim, on lave d'abord
rapidement 1 alcool 70" ordinaire, pour liminer la plus grande
iod comme il a t
partie de l'acide picrique, puis on passe l'alcool
le

dit plus haut.

Conservation des pices fixes.

Aprs le lavage, les


tre gards longtemps dans ralcool 70.
objets fixs peuvent
Mais il faut bien savoir que dans ce liquide^ et plus encore dans
Talcool 90'^ les tissus deviennent friables et perdent assez rapide-

ment leur

colorabilit

notamment, par

suite de Thydrolyse des

composs phosphores de noyau, la coloration de ce dernier devient


bien moins lective. La conservation dans Talcool n'est donc qu'un
il faut, ds
qu'on le i>eut, procder sans tarder Tinclupis aller et
siondansla paraffine. Sous cette forme, les tissus peuvent se conserver indfiniment, sans aucune altration.

API^ENDIGE

MTHODES SPCIALES DE FIXATION


Nous ne pouvons passer sous silence deux mthodes particulires de
pour but une conservation des lments

fixation, qui ont l'une et l'autre

1. Les avis sont partags sur la question de savoir si on peut employer aussi la
solution aqueuse criode dans l'iodure de potassium. En tout cas, l'addition d'un
peu d'iodure de potassium l'alcool de lavage ne peut que favoriser la solubilisation des prcipits mercuriques. Mais il ne faut jamais employer l'iodure de
se dcomseul, car il donne naissance du protoiodurc de mercure qui

potassium

pose en biiodure et mercure mtalli<|uc.


et insolubles (Mayer).

Ce dernier forme des prcipits opaques

METHODES GENERALES

296

beaucoup plus parluile que celle que peut donner l'ablation des organes
immersion pure et simple dans le liquide fixateur. Nous devons
aussi dire un mot de la fixation des animaux marins.
Fixation par injection.
On trouvera dans Fouvrage de Mann la
description complte de celte mthode. Les principaux avantages sont
la rapidit de la lixation (toutes les cellules sont tues en 50 secondes),
et leur

'

la lixation parfaite des organes les plus dlicats, l'uniformit complte


de la fixation dans toute l'paisseur des organes, la conservation de la
forme de tous les organes creux.
L'appareil injection pourra tre un simple entonnoir de un ou
deux litres muni d'un long tube de caoutchouc. On emploie comme fixateur le Bouin ou le Mann, chauffs 38\ Ou commence par insensibiliser l'animal par le gaz d'clairage qui dilate les vaisseaux et relarde
la coagulation du sang. On lave d'abord les vaisseaux en y faisant passer
de la solution physiologique, puis on injecte le fixateur.
Nous ne pouvons donner ici qu'un
Mthode rationnelle de Rabenthaler.
aperu de celte mlliode. Les cylologistes dsireux de l'exprimenter
pourront trouver des dtails trs complets dans les publications de l'au-

teur

2.

Rubenthaler trouve que l'immersion pure et simple de l'objet fixer


dans le fixateur est un procd brutal, dont l'action est assez violente
pour produire de nombreux artilices sans tre a^sez puissante pour
effectuer une fixation instantane. Son procd a pour but d'attnuer
la raction cellaluire, au moment du contact avec le fixateur. On y
arrive, d'une part, en produisant l'anesthsie des cellules, d'autre part
en graduant, par des dilutions successives, l'action du liquide fixateur.
Toutes les oprations sont pratiques la temprnture .du corps de
l'animal au^iuel est emprunt l'organe fixer
pour les ^Mammifres,
on doit donc oprer l'luve 37' ou 38''.
1. Anesthsie des cellules.
L'objet, trs petit, est plac dans cent fois
son volume d'un liquide isotonique, variable avec sa nature (srum
:

sanguin pour les muscles, liquide cphalo-rachidien pour le cerveau,


liquide amniotique pour les embryons, sve ou sucs de plantes, etc.). On
a prpar, d'autre part, une solution de chlorhydrate de cocane
p. 100
dans le mme liquide. L'anesthsie est produite peu peu, en rem1

tiers le liquide isotonique par la solution de cocane, avec des


intervalles de 10 minutes.

plaant par

Opre avec trois dilutions du fixateur avec


quarts d'eau. Ces trois dilutions doivent de
mme remplacer par tiers le liquide anesthsique, avec des intervalles
de 10 minutes. On laisse ensuite le temps voulu dans le fixateur pur,
froid ou chaud.
L'anesthsie demande 30 minutes et la fixation progressive 2 heures.
2.

un

Fixation progressive.

quart,

un demi,

trois

Fixation des animaux marins.

Celle fixation exige des


teneur
leve de ces orgaprcaulions parliciilires,
nismes en substances salines; leurs liquides intrieurs doivent en
effet tre isotoniques avec Feau de mer. Il faut donc viter
Temploi
l\

1.

2.

Mann,

cause de

la

Plujsioloyical histolofj)/, p. 111-146.


Mthode gnrale de lixation

Rubentlialcr,
artefacts. Ztschr.

f.

uss. Mikr..

XXIV,

ayant pour but de restreindre

p. 133-13^,

1907.

les

PRATIQUE DE LA FIXATION

297

de fixateurs qui produiraient des prcipits, soit leur surface,


soit dans Tintimit des tissus et gneraient les manipulations.

La premire prcaution jtrendrc est de bien goulter les ani})our cela, on les dpose sur
maux, quand on ne peut les ouvrir
un linge ou sur plusieurs doubles de papier Joseph. En effet, s'ils
:

sont imprgns et mouills d'eau de mer, il peut se produire k


leur prii)hrie des prcipits qui empcheront la pntration ultrieure des liquides.

que l'alcool acidul


ou azotique, ou encore le mlange picronilriquede Mayer. Les mlanges picriqus et formols conviennent
Il

faut employer des fixateurs acides, tels

par les acides actique

aussi trs bien pour le travail courant.


Les animaux trs contractiles doivent tre d'abord anesthsis

on y arrive en mlangeant l'eau dans laquelle ils se trouvent du


chloroforme, de Thydratc de chloral (mthodes de Rubenthaler,
de l'alcool, du chlortone
p. 296, et de de Beauchamp, p. 019),
(Randolph'), de l'eugnol (l^chlegel -). Ces produits sont ajouts
peu peu par petites quantits, de manire immobiliser les ani-

maux en

extension.
a

Dekhuysen

marins calcaires

On

les fixe

propos deux
et

ds que ce rsultat est obtenu.

liquides isotoniques pour les

non calcaires

animaux

3.

Liquide A, pour tous les tanimaux sauf les Tlostens, bas sur le fait
la pression osmolique des Invertbrs et des Slaciens est gale

que

celle

de l'eau de mer.

Bichromale de polassium

2.

p. 100.

Acide azotique 6,3 p. 100


Acide osmique 2 p. 100
Liquide B,

non

acide, pour les objets dont on

250 cm'^
25
54

veut conserver les for-

mations calcaires.

On

d'abord une solution de 12 gr. 5 de bichromate de potassium


fondu dans 500 cm^ d'eau de mer. On mlange 17.3 cm'^ 1
de cette solution avec 26 cm-^ 9 d'acide osmique 2 p. 100. Pour avoir
tout TefTet de ce mlange, il faut fixer la glacire et encore on
fait

recristallis et

n'arrive pas
et

compltement viter

l'acidit

qui rsulte de l'hydrolyse

de la mise en libert d'ions H.

Quel que soit le fixateur employ, les lavages doivent tre trs

comsoigns et excuts avec de l'alcool faible, de manire liminer


pltement les sels et empcher leur dpt la surface des objets.
1.
2.

3.

Zool. Anzeiger, XXIII, p. 136, 1900.


Bull. Soc. zool. de France, XXXV, p. IIG, 1910.
Dekhiivzen, Liquides fixateurs isotoniques avec l'eau de mer. C.

Se, CXXXVII,

p. lir,-117;

115-117. 1903.

/?.

Acad. des

CHAPITRE

XI

MTHODES D'INCLUSION
La grande majorit des objets fixs doivent tre traits par la
mthode des coupes; c'est le cas des organes et tissus qui font
Tobjet du travail courant. Que ces pices soient colores en masse,
avant Tinclusion, ou sur coupes aprs inclusion, la mthode est
la

mme.

lames

Aussi,

comme

la

mthode de coloration des coupes sur

est la plus habituelle, traiterons-nous d'abord

Vinclusion

est

une opration qui

dans une masse plastique qui le


la
profondeur des lments

On

deTinclusion.

pour but d'enfermer l'objet


pntre intimement, jusque dans
a

cellulaires

les

plus

dlicats.

obtient ainsi des blocs facilement maniables, renfermant des

mmes

trs petites,
parfaitement orientes pour tre
un
dans
dtermin.
De plus, les tissus acquirent
sens
coupes
une consistance (|ui permet de les dbiter en tranches d'une

pices,

extrme minceur, sans modifier en rien la forme et les rapports


des organes et des lments cellulaires.
L'inclusion se distingue de Y enrobage simple en ce que ce
fait qu'englober la pice dans une matire plastique qui
soutient de tous cts, mais sans la pntrer ou l'intiltrer.

dernier ne
la

Il

est inutile d'insister

sur rulililet

la

ncessit de l'inclusion.

C'est le seul procd qui permette d'obtenir de coupes suffisam-

ment fines, pour les travaux d'histologie animale et de cytologie, et


de conserver les rapports des parties, dans les tissus non homognes
ou

les

animaux

entiers.

Il

y a pourtant deux autres procds qui

sont encore employs l'heure actuelle et rendent de grands services dans des cas particuliers. Ce sont la mllwde des coupes par

conglation pour les tissus animaux et la mthode des coupes


leve ou au microtome main pour l'histologie vgtale.
les dcrirons dans des chapitres spciaux.

main
Nous

iMETHODES D'INCLUSION

299

Les substances employes pour l'inclusion se nomment masses dlnckision. Pour pntrer les objets, elles doivent tre Ttat de fusion ou de
dissolution. Aprs refroidissement ou vaporation, elles doivent avoir

une consistance approprie la faJ)rication des coupes. Il y a deux


grands groupes de musses d'inclusion, les masses aqueuses et les
masses anhydres. Les masses aqueuses permettent d'infiltrer les objets
tels sont le savon, la gomme arabique, la glasans les dshydrater
tine. Leur emploi est actuellement limit des reclierches spciales de
physiologie et de microchimie.
Les masses anhydres ncessitent la dshydratation pralable des objets
et leur imprgnation par un dissolvant de la masse choisie. Il y a deuxl'inclusion la paraffine et Tinclusion au collodion ou la
procds
cellodine. Ces deux procds sont d'importance gale et rpondent l'un
et l'autre des besoins particuliers. Pourtant, la mthode la paraffine
doit tre considre comme la mclhode gnrale d'inclusion. En eifet,
cette substance permet d'obtenir des coupes de toutes les paisseurs,
avec toutes espces d'objets. Elle est facile manier, elle permet des
manipulations trs rapides et enfin elle assure la conservation indfinie
des objets.
La mthode au collodion rpond des exigences plus particulires elle
permet d'excuter des coupes de trs grand diamtre, sans aucun risque
de les voir se tasser ou se fendiller, comme il arrive quelquefois avec
la paraffine. Le collodion convient aussi pour les objets peu homognes
ou prsentant de grandes cavits; pour les matriaux durs ou fibreux
:

(x\rthropodes, os dcalcifis, fibromes); pour les tissus qui supportent


mal la temprature de l'inclusion la paraffine (tissu nerveux). Enfin le
collodion prsente des avantages dans les pays chauds, o il est quel-

quefois difficile de faire de bonnes coupes la paraffine.


Un procd mixte, collodion et paraffine est quelquefois trs utile.

I.

La

INCLUSION

paraffine, dont le

(parurii affinis), est

nom

LA PARAFFINE

indique les faibles

affiiiils

chimiques

un mlange d'hydrocarbuiTS saturs

solides,

extraits par refroidissement des huiles lourdes de ptrole

ils

des paraln\v a pas une paraffine, mais

sont dissous. Eii ralit, il


iines constituant des mlanges trs varis, caractriss par leur
65. Les
point de fusion. Celui-ci varie gnralement de 35

de
fusion
lev
sont
dites
dures,
par
paraffines
point
parafilnes
opposition aux paraffines tendres dont

le

est bas.
point de fusion

Ces corps se prsentent, dans le commerce, sous la forme de


pains ou plaques d'une substance blanche, inodore, obscurment
cristalline. On peut reconnatre approximativement la duret de
le
par le contact du doigt, par la trace de Tongle et par
son que rendent les plaques, lorsqu'on les laisse tomber sur une
la paraffine

METHODES GENERALES

300

table
les paraffines dures donnent un son clair et lev, les
paraffines tendres un son sourd et bas.
Il fanl savoir
que le i)oint (rbuUition des paraffines est aux
environs de 300 et que leurs vapeurs s'enflamincnt facilement,
:

pour brler avec une ilamuie trs clairante.


Pendant la fusion, la paraffine ne suit pas du tout

la loi

pby-

sique qui veut que tant qu'il reste une portion non fondue, la
temprature ne s'lve pas au-dessus du point de fusion. Cette
loi n'est

que pour les corps homognes, mais non pour les


donc prendre de grandes prcautions et bien
temprature, si on est oblig de faire refondre de la

vraie

mlanges.

Il

surveiller la

faut

paraffine renfermant des pices.

La
le

paraffine est insolulile dans l'eau, trs peu solublc dans Talcool
dans Tactone, beaucoup plus soluble dans

100 environ), peu solulile

(i p.

chloroforme

p. 100), le

tolune (10 p. 100),


d'inclusion

le xylol (17 p.

100), etc.

plus parfait, cause


de sa structure molculaire qui permet l'excution de coupes exlraordinairemcnt Unes. L'emploi de ce procd est absolument indispensable
pour les recherches d'histologie fine et de cytologie. C'est aussi le seul
qui permette d'obtenir facilement et rapidement des rubans de coupes
sries, indispensables pour les ludes topographiques et embryoloC'est incontestablement le milieu

le

giques.
Les inconvnients reprociis au procd la paraffine (altrations des
tissus et du contenu des cellules) proviennent presque toujours d'une
mauvaise technique. On les vitera srement en suivant la marche que
nous allons indiquer.

La paraffine tant insoluble dans Peau et dans Talcool, il faut,


pour en imprgner un objet, que celui-ci soit d'abord dshydrat,
puis pntr par un dissolvant de la paraffine destin chasser
Talcool.

Nous devrons donc

effectuer successivement

1 La dshydratation par la srie des alcools


2 L'imprgnation par un dissolvant de la paraffine
;

3 L'imprgnation par la paraffine

^
;

4 L'inclusion dfinitive.

Dshydratation.
L'objet, fix et lav, est port successivement dans des alcools de concentration croissante et finalement
dans l'alcool absolu. Pratiquement, pour les objets courants, on
1.

n'emploie que les alcools 70", 90 et 100". Ainsi, les pices


au Bouin et au Duboscq-Brasil sont laves rapidement dans

fixes
].

Ces doux premires oprations peuvent tre remplaces par un traitement

l'actone

("p.

303).

METHODES D INXLUSION

30i

Talcool 90', chang deux ou Irois fois, puis plonges dans


Talcool absolu. Le matriel conserv dans l'alcool 70" ou 90 peut

dans Talcool absolu.


passer directement

da

Valcool absolu doit Ttrc rellement. 11 est


dans les bonnes maisons de produits
chimiques ou de micrographie. Nous avons indiqu p. 275 la manire de
vrifier pratiquement sa qualit i. 1! est conseiller de ne se faire livrer
ce produit que par llacons de 230 grammes au maximum. Si on tait
Prparation

alcools.

d'ailleurs facile de s'en procurer

d'entamer un litre entier, il faudrait rpartir de suite cette quandans des petits fiacons de 100 200 grammes, bien bouchs avec
uu lige fin et souple. 11 ne faut jamais laisser en vidange un flacon de
grande contenance, sous peine de voir le titre baisser, par suite de
l'absorption de la vapeur d'eau atmosphrique. Bien entendu, il ne faut
jamais laisser dbouch un flacon renfermant de l'alcool absolu.
L'alcool 90' se trouve tel que dans le commerce. Pratiquement, il
remplace les alcools 91, 93", 90" indiqus dans certaines formules.
C'est cet alcool qui sert prparer les dilutions plus faibles. Il ne faut
jamais diluer de l'alcool absolu qui cote au moins deux fois plus cher
oblig-
tit

que

l'alcool 90".

Alcools faibles.

On les

prpare en diluant avec de l'eau de l'alcool

00, suivant les indications de la table suivante

Table de dilution de

l'alcool.

02

METHODES GENERALES

Voici comment on se sert de cette table. Nous voulons faire de l'alcool,


nous cherchons dans la colonne verticale
70 avec de l'alcool 90
correspondant au titre 90 le chifre correspondant la ligne horizontale du titre 70 obtenir. Soit 31,03 ce chilTre. Donc 100 volumes
d'alcool 90, il faut ajouter 3 1,05 volumes d'eau pour obtenir de l'alcool 70:

Pour l'usage courant, voici une table donnant, en chiffres ronds, les
dilutions faire pour l'alcool 90.

Alcool obtenir

303

MTHODES d'inclusion

Elle varie suivant le volume


Dure de la dshi/di'alation.
des pices. Vingt trente minutes suffisent pour chaque bain
avec des pices de dimensions moyennes (1 cm. carr sur 5 mm.
90 et trois bains d'alcool
d'paisseur) avec deux bains d'alcool
absolu, la dshydratation durera en moyenne deux heures et
;

demie

trois

heures.

reconnat qu'une pice est dshydrate en versant du xylol


dans le tube, aprs avoir bien goutt le dernier alcool absolu. Si

On

le

Si le moindre
xylol reste limpide, la dshydratation est bonne.
il faut effectuer un nouveau passage par Falcool

louche apparat,
absolu.

Les anatomo-pathologistes tendent


Dshydratation par l'actone.
de plus en plus remplacer l'alcool absolu par Vactone pour la dshydratation des pices. Thoriquement, l'actone prsente sur l'alcool de
l'eau et
grands avantages en eiet ce corps est miscible la fois avec
avec la paraffine, il dispense donc de l'emploi de liquides intermon passe directement de l'actone la paraffine.
diaires
:

indispensable que l'aclone soit anliydre. On s'en assure,


l'alcool absolu (p. 275), en versant (juclques gouttes d'actone dans un tube essai bien sec, - demi plein de xylol. Pour que
Si on
l'preuve soit dcisive, il faut qu'il y ail un grand excs de xylol.
voit apparatre un louche, mme trs lger, l'actone ne peut servir
est

Il

comme pour

pour l'inclusion.
la valeur exacte de ce procd.
11 est difficile de se prononcer sur
L'actone parait donner de bons rsultats et ne pas altrer les tissus.
Nanmoins, pour des recherches trs dlicates, la dshydratation classique par l'alcool absolu reste la mthode de choix.
i^'rsonnellement, je ne vois ce procd que l'avantage de Tconomie.
est certain que l'actone dissout mal la paraffine; comme, d'autre
Il
dans les
part, sa volatilit est extrme, il doit se produire des dgts
tissus au moment de l'immersion dans le bain de paraffine, par suite du

dpart brusque de l'actone, non compens par une pntration quivalente de la paraffine.
Pavlov i conseille, aprs fixation
Dshydratation par la crosote.
et lavage l'eau, de dshydrater par un sjour de 4 24 heures dans
la crosote de Htre, suivant les dimensions de la pice. Aprs un
second bain de 2 3 heures, on essuie au buvard, et on passe au bain

de paraffine, soit directement,


pas essay cette mtliode.
2.

soit

aprs

un bain de

tolune. Je

n'ai

Imprgnation par un dissolvant de la paraffine.


un dissolvant de la paraf-

Celte opration consiste chasser, par


fine,

Talcoolqui imprgne l'objet dshydrat. Beaucoup d'auteurs


temps de l'inclusion le nom cV claircissement,

donnent ce

1.

Ztschr.

f.

iciss. iVik,-.,

XXII,

p.

ISG-IS":.

195.

METHODES GiNERALES

304

parce que les liquides euij)loys sont gnralement des hydrocarbures ou des essences aromatiques, dous d'une haute rfrin-

gence et qui rendent


Les dissolvants de
le

le

les tissus transparents.

paraftine les plus employs sont le benzol,


de bois de cdre ^ Le benzol et le

la

xylol cl l'essence

loluae,
sont les plus volatils, par consquent les plus faciles
liminer; ce sont aussi les moins chers. Le xylol ne prsente pas
lolun.',

il

d'avautage particulier,

normment

est

beaucoup plus cher

les objets, aussi je

jours conseill. On trouvera les


le tableau suivant

dans

et

il

durcit

ne vois pas pourquoi il est toupoints d'bullition de ces corps

Points d'bullition en degrs centigrades.


Etlier

34"

lenzol

46

Actone

oG"

Tolune
Acide actique.

Gliloroforme
Alcool mtliylique
Alcool tliylique

01"

Xylol

Sulfure de carlone.

80"

111"

...

66"

Essence de cdre.

78"

Glycrine

119"

140"
.

237"
290"

L'essence de bois de cdre est, d'aprs Bolles Lee, le meilleur


intermdiaire. Elle pntre rapidement, conserve les structures
les plus dlicates et ne rend jamais les objets cassants. Un autre

avantage prcieux est de ne pas gner la confection des coupes,


lorsqu'elle n'a pas t compltement limine par le bain de paraffine.

Enfin

elle

supporte que

la

dshydratation soit faite avec de


de grands avantages.

l'alcool 95, ce qui prsente quelquefois


Il

ne faut pas confondre l'essence de bois de cdre avec l'huile


immersion. Cette dernire ne

de cdre paisse pour objectifs

peut convenir, parce qu'elle produit avec l'alcool absolu un abondant ])rcipil blanc. Au contraire, l'essence fluide deboisde cdre
est

parfaitement

miscible,

en toutes proportions,

avec l'alcool

absolu.
Je ne dirai qu'un mot du chloroforme et du sulfure de carbone. Le
il pntre difficilement les objets
premier prsente deux inconvnients
et, lorsqu'il en reste des traces dans la paraffine, celle-ci devient friable
et se coupe 1res mal (voir cependant p. 285, note 1). Quant au sulfure
de carbone, trs vant par Ileidenbain, sou odeur dsagrable et son
inflammabilit ne sont pas compenses par des avantages suffisants
:

pour qu'on puisse conseiller son emploi.


1.

Lorsqu'on veut conserver la graisse dans les tissus fixs par les mlanges
il faut
employer le chloroforme ou mieux l'lher de ptrole (voir p. 656).

osmis,

MTHODES D INCLUSION
Pour

travail coiiraiil

le

On

tolune.

rservera

le

j('

conseille donc

procd

trs petites pices.

305
d'imprgner par

-le

l'essence de cdre pour les

Je considre,
Technique de l'imprgnation.
plupart des histologistes, les mlanges successifs

la suite de la

d'alcool absolu

d'hydrocarbures comme des complications inutiles. Pour la


grande majorit des pices, il suffit de dcanter le dernier alcool
absolu et de verser sur la pice une petite quantit de tolune,
et

suffisante
c'est

que

pour
la

la

bien recouvrir. Si ce liquide ne se trouble pas,


a t bien faite.

dshydratation

En employant

les i)elits tubes

bouchs que nous recommandons,

on n"a pas craindre de dtriorer les pices avec les pinces, ni


de les voir surnager daus l'hydrocarbure et se desscher la surface. Aussi dconseillons-nous compltement l'ancien procd, qui
consistait transporter les pices

fermant

dans des verres de montre ren-

les liquides successifs.

Pour l'essence de cdre il est prfrable d'employer le procd suivant,


d Maycr et Giesbrcclit. On verse au fond d'un tube une quantit
d'essence de cdre proportionne au volume de l'objet, soit un ou deux
centimtres de hauteui". Sur cette essence, on dpose, au moyen d'une
pipette, un volume gal d'alcool absolu. En oprant avec prcaution, la
diffrence de densit des deux li([uides suffit pour les empcbcr de se
de
mlang-er '. On introduit doucement l'objet dans l'alcool absolu
cette manire, il pntre peu peu dans la couclie d'essence de cdre,
en se dbarrassant progressivement de son alcool. Lorsqu'il est tomb
au fond du tube, l'imprgnation est termine. On retire alors, avec une
pipette, l'alcool et le mlange d'alcool et d'essence qui surmontent
l'objet. Au besoin, on traite encore ce dernier par un bain d'essence de
:

cdre pure.

Dure de t imprgnation.
On n"a pas s'en proccuper
avec l'essence de cdre, car les objets }ieuvenl y sjourner presque
iudfiniment sans s'altrer. 11 n'en est pas de mme pour les
hydrocarbures qui durcissent beaucoup

les pices et les

rendent

cassantes.

Avec l'essence de cdre, l'imprgnation est finie lorsque la pice


tombe au fond du tube et parat bien transparente. Avec le

est

tolune,

il

doit devenir transparent

1.

On peut

chaque bain doit


volume de l'objet. 'Celui-ci

faut renouveler trois fois le liquide et

durer de 10 30 minutes suivant

le

ou au moins translucide.

aussi introduire rcsseiicc sous l'alcool, au

M. Langerox.

Prcis de Microseopic.

moyeu

d'une pipette.

-0

METHODES GENERALES

306

La meilleure paraffine esl celle qui


Je conseille de Teinployer toujours parce qu'elle
la rendent propre tous les
prsente un ensemble de qualits qui
3.

fiul

Bain de paraffine.

^o"

'.

de faire de bonnes
usages. VAle permet, dans les pays temprs,
coupes de toutes les paisseurs et n'a pas rinconvnient de sou-'
mettre les pices une temprature trop levje. La paraffine
trs fines (de 6
trop tendre ne permet pas d'obtenir des coupes

[/.),

tandis que la paraffine trop dure risque de cuire les pices

coupes en rubans. Pourtant, dans les


pays chauds, on peut tre oblig de se servir de paraffine 60;
mais, l encore, on peut tourner la difficult en faisant l'imprgnation 53 et en ne prenant la paraffine 60'' que pour Tincluet fournit difficilement des

sion dfinitive.

Quelques auteurs conseillent l'emploi de la paraffine surchauITe qui


donnerait une masse plus liomogne, sans tendance la crislallisalion.
Je ne vois pas d'avantage particulier remploi de celte parafdne.
Les pains de paraffine renferment quelquefois de l"oau emprisonne
mcaniquement. Il faut absolument liminer cette eau qui est trs nuisible aux pices et aussi la paraffine. En effet, celle-ci, chauffe au
contact de l'eau, finit par en absorber une petite quantit, prend une
odeur dsagrable et forme, en se solidifiant, une masse molle et blanchtre, absolument impropre faire des coupes. Pour liminer l'eau, il
l'eau se rassemble au fond
suffit de faire fondre lentement la paraffine
en grosses gouttes et on dcante la paraffine pure. Pour la fillralion voir
:

p. 309.

Chauffage de
doit

la

paraffine
fusion. Cette

Pendant toute

la dure du bain,
exactement son point de
absolument indispensable pour

la paraffine.
tre maintenue

prcaution

est

viter la cuisson des pices et leur dtrioration dfinitive. Pour


assurer la constance de celte temprature, on ne peut cbauffer la

paraffine feu nu.

11

faut se servir d'une luve ou d'une plaque

mtallique.
L'tuve sera d'un trs petit modle

On trouve

commerce des

2,

car

il

suffit

que ses

trois

dimen-

paraffines fondant tontes les tempratures comprises entre 35 et 75". Les points de fusion vont gnralement de 10 en
10'\ Pour vrifier le point de fusion d'une paraffine, en aspirer un
peu dans un
fragment d'effilure de pipette et laisser solidifier; attacher ce tube capillaire au
rservoir d'un thermomtre, plonger le tout dans un vase rempli d'eau et chauffer
lentement. Faire la lecture au moment exact o la paraffine commence couler
du tube capillaire.
2. U existe dans le commerce un grand nombre de modles d'tuves
paraffine'
plus ou moins compliques. Une des plus pratiques est le bain-marie dit deiS'aples. Bien entendu, il faut proscrire absolument les bains-marie ordinaires,
car la paraffine ne doit jamais tre en co,:it ict. avec de Veau, ou de la vapeur d'edu1.

clans le

METHODES D INCLUSION

307

on se sert gnralement de
sioas intrieures soient de 15 20 cent.
petites tuves en cuivre, douille paroi remplie d'eau. Il est indispenceux qui sont
sable que cette tuve soit munie d'un thermomtre
:

suspendus dans l'tuve indiquent souvent une temprature infrieure


la temprature relle de la paraftine, aussi est-il prfrable de faire
tremper le rservoir dans un des rcipients paraffine. L'tuve sera
chauffe par un moyen quelconque
lectricit, gaz, lampe essence
de ptrole, veilleuse huile, etc. Quelle que soit la source de chaleur
:

(sauf l'lectricit), il n'est pas indispensable d'avoir un rgulateur de


temprature, car ces derniers fonctionnent gnralement trs mal. Les

rgulateurs mercure, en verre, du type Ghancel, ne valent rien, car


ils donnent facilement des carts de plusieurs degrs. Les rgulateurs
mtalliques, du type Roux, sont thoriquement parfaits; pratiquement
les grands modles seuls donnent des rsultats satisfaisants et encore
faut-il qu'ils soient construits par une maison srieuse. A dfaut d'un
bon rgulateur, on obtiendra un rglage suffisant en combinant le
volume de la flamme et sa distance au fond de l'tuve. Les pieds de
cette dernire seront donc assez levs pour permettre de caler le
brleur la hauteur convenable. L'tuve paraffine ne doit servir
qu' cet usage. Ne jamais y introduire ni eau ni solutions aqueuses.

Celte tuve n'est pas indispensable.


en chauffant la paraffine

inclusions

On

peut l'aire d'excellentes


par Tintermdiaire d'une

plaque mtallique, de cuivre


ou de laiton. Celte plaque
sera de prfrence courbe

en S

(fig.

147), de manire

fournir toute

une

gamme

de tempratures. Le chauffage se fera,

comme

}rc-

demment, avec une veilleuse


"
gaz, essence

ou

Pour contrler

la

lure de la

l'huile.

^.

Fig.

,.

14

tempraparaffine, on dis-

^
Etagre ou platine chautfante
de Maassez.
,-,

pose d'un signe infaillible lorsque la paraftine fondue est recouverte en partie dune pellicule solidifie, on est sr de ne pas
:

avoir dpass le point de fusion.

Il

faut donc, lorsqu'on opre

une

platine chauffante, rgler la temprature de


manire avoir cette pellicule ou au moins un anneau solidifi
l'air

libre sur

bord du rcipient.
existe des modles perfectionns de platine chauffante, tels que
la platine de Radais et celle de Gatin. Ces instruments ne sont
sur

le

Il

pas indispensables.
Rcipients pour Vindusion.

On

peut

faire fondre la paraffine

dans un

308

MTHODES GNKIALES

rcipient (|uelcon(iue, en porcelaine, en verre ou en mtal. Je ne conseille pas l'emploi des verres de montre (jui man({Lient de profondeur
et se renversent trop facilement. Les petites botes de Ptri et les petits
cristallisoirs en verre de Bohme ou, encore, les couvercles de cylindres
Borrel (fiii'. 107) conviennent trs bien pour l'tuve. Pour la platine

chaulante, je prfre les petits rcipients mtalliques, meilleurs conducteurs de la chaleur et ncessitant par consquent une temprature
moins leve pour produire la fusion de la paraffine, ce qui diminue les

chances de dpasser ensuite

le point de fusion. Les capsules d"lain,


couvrir les eoulots des bouteilles, sont excellentes pour cet
usage. On peut prendre aussi de petites casseroles en fer-blancs.
Les capsules de porcelaine prsentent d'assez graves inconvnients
elles sont mauvaises conductrices, peu stables, mme avec un fond plat,
et se brisent 1res facilement, lorsqu'on les rchauffe sans prcautions
pour fondre la paraffine qu'elles renferment.

servant

Dure du bain de paraffine.


ce sujet,

mais

les

opinions

les

Les

avis sont

plus auloi'ises

li-s
partags
s'accordent sur

deux points 1 la dure du bain doit tre aussi courte que possible pour les objets faciles pntrer et couper, ou qui durcissent ("acilement (centres nerveux, l'oie); 2 il n'y a aucun inconvnient prolonger la dure du bain pour les objets peu permables,
:

tels

que
Dans

la

peau.

le

])reniier

30 minutes
et la

cas,

dure du bain de

la

heure ou 2 heures, suivant

tendance qu'il peut avoir durcir.


le second cas, on pourra laisser

Dans

la

le

i^aralline sera

volume de

pice dans la parat'line

pendant 10 12 heures ou mme plus, pourvu que


lure ne dpasse pas le point de fusion.

Technique du bain de paraffine.


comme absolument superllus

considrer

de

l'objet

Ici

les

la

tetnpra-

encore, nous devons


bains pralables dans

des mlanges de paraffine et de dissolvant ou dans une paraffine


molle. On doit transporter directement les objets du liquide
d'imprgnation (tolune ou essence de cdre) dans la ])araffine

en

fusion.

Il

n'y

pas

mme

craindre d'altrations,

pour

plus dlicats, surtout quand ces derniers sortent


ol)jets
de l'essence de cdre. Bien entendu, ce transport sera fait avec
les

les

prcaution,

})our ne

pas

endommager

contenu du tube sera vid dans un

les

petit

pices

dlicates.

Le

ciistallisoir et l'objet

sera saisi avec des pinces ou transport avec une spatule de mtal
ou de carton lger. Il faut avoir bien soin que l'objet baigne imm-

diatement dans
rait

des

la

dommages

pai^afiine,

sans surnager, accident

irrparables par suite de

la

(jui

amne-

dessiccation. L'ti-

309

MTHODES D'INCLUSION
quelle,

crite

objets dans

au crayon ou

l'encre

les divers liquides, doil les

de Chine,

(jui

a suivi les

accompagner eucore dans

la

paraffine.

Pour assurer

l'liniinalion

Tessence de cdre,

il

faut

complte du dissolvant, surlout aprs

employer deux baius successifs. Suppo-

le
sons un objet qui doive resler une heure dans la paraffine
de
la paraffine ayant dj servi, durera trente
dans
bain,
premier
:

minutes. Pendant

de

la

seconde demi-heure, Fobjet sjournera dans

paraffine neuve.
Avec les dissolvants
la

la
mme paraffine peut servir
bain

la rigueur, on pourra mme


longtemps pour
premier
ne donner que ce seul bain. Au contraire, avec l'essence de cdre,
il faudra
jeter la paraffine qui a servi deux fois.

volatils,

le

L'objet est sorti du dernier bain


un moule rempli de paraffine
paraffine et transport
fair, puis sous feau.
d'abord
le
tout
est
refroidi
fondue;
4.

Inclusion dfinitive.

dans

de

La paraffine qui sert l'inclusion dfinitive ne doit jamais


avoir servi pour les bains et ne renfermer aucune Irace de dissolvant. Dans le cas contraire, elle forme en se solidiliant une masse
pteuse et blanchtre, avec laquelle il est impossible d'obtenir des
coupes. 11 en est de mme, lorsqu'elle a t chauffe longtemps en
contact avec de Peau ou de la vapeur d'eau.

Par contre, la paraffine provenant d'anciens blocs ou de rognures de


blocs est excellente pour l'inclusion dfinilive. Il sufllt seulement de la
purifier par filtration, de fa(;on ce qu'elle ne renferme en suspension
ni corps trang'ers, ni poussires qui pourraient brchcr le rasoir. Cette
fillralion se fait sur papier fillrer ordinaire et de prfrence Ttuve

paraffine ou encore dans un entonnoir double paroi, dit filtrations


Un autre procd, plus simple mais moins bon, consiste
laisser la paraffine en fusion sjourner quelque temps la surface d'une
certaine quantit d'eau
les impuret'^s tombent au fond de l'eau et le
refroidissement fournit un disque de paraffine propre. Si on a soin de
ne pas trop chautTer, la parafllne n'absorbe pas d'eau.

chaudes.

Il

y a diverses sortes de moules. Les verres de montre fond

plat sont
les

commodes pour

les trs petites pices,

faire flotter la surface

de l'eau.

Il

en

capsules cVtain. Pour inclure de grandes


de se servir des barres de Leuckart ou

est

parce qu'on ])eut


de mmo pour les

])ices,

il

est prfrable

d'un moule analogue

(lig. 148). Ces moules sont constitus par deux pices mtalliques
rectangulaires, qu'on pose sur une lame de verre et qu'on rapproche plus ou moins, suivant la dimension du bloc obtenir, lis don-

MTHODES GNRALES

3iO
lient

de trs beaux blocs cubiques,

Fi"-. 118.

faciles

manipuler

et

ranger.

Barres de Leuckart.

Enfin on peul se servir de botes en papier ou en feuilles d'lain qu'on


fabrique facilement soi-mme d'aprs les schmas suivants. On prend
une feuille de fort papier mesurant 10 cent,
3
sur 0,3 cent, pour les g'randes boites et 5 cent,
sur 3 pour les petites. On plie d'abord (fi^. 149)
suivant 1 et 2, 3 et 4. On dplie et on plie de
nouveau suivant 5 et 6, 7 et 8. Ensuite (fig. 150)
on abat les angles A B G D, en ayant soin
,

Fabrication
149.
d'une bote en papier
ou en tain. Trac des
lignes de pliage.

Fig.

Original.

Fabrication
Fig. 150.
d'une bote en papier
on en tain. Premier

pliage et abattage des


Original.
angles.

de bien plier angle droit.


dehors les cts 5, G, 7, S.

Il

En

Fabrication
d'une bote en papier
ou en tain. Rabattement des cts.

Fig. 151.

Original.

ne reste plus

(fig. 151) qu' rabattre en


tirant sur ces cts, la bote se forme
toute seule et prend l'aspect de la

fig.

152.

Certains auteurs recommandent

de glycriner lgrement le moule.


Je trouve que c'est une. complicalion inutile. Les barres de Leu-

Bote en papier ou en
Fig. 152.
tain termine.
Oriyi)iul.

paraffine.

Quand aux

dtachent toujours trs


facilement; les capsules d'tain se
dchirent pour mettre nu la

ckart se

objets en verre,

lgrement pour en dtacher

il

suflit

la paraffine

si

de

elle

les chauffer trs

est adhrente.

MTHODES d'inclusion

On remplit
Technique de l'inclusion.

311
le

moule de paraffine

fondne au point de fusion el tenue en rserve dans une casserole,


on sort la pice du bain de paraffine
puis, sans perdre de temps,
et
on la porte dans le moule. Celte
chaule
une
avec
pince

manuvre demande une

certaine

dextrit,

ou Tobjet, ce dernier
masse du bloc.

trop refroidir la paraffine

si

car,
est

on

laisse

mal inclus

et

pas corps avec la


11 ne suffit pas de dposer Tobjet dans le moule, il faut encore
Vorienter, c'est--dire le disposer de telle sorte que la surface

ne

fait

du moule.
qui doit tre coupe concide avec un ct dtermin
Pour cela on se sert encore de la pince chauffe. L'objet est facile
immobiliser dans une bonne position, car la paraffine se solidifie
rapidement sur

le

fond

et les faces

du moule, formant une masse

^
pteuse, dans laquelle on enfonce l'objet en bonne place
L'orientation termine, il faut refroidir la paraffine. La
trs
majorit des auteurs recommande d'oprer ce refroidissement

rapidement, de manire viter

la cristallisation

de

la paraffine.

Il
semble, en eiet, que cette substance, refroidie trop lentement,
forme des masses lamelleuses, cristallines, non homognes, de couleur
blanchtre, irrgulirement rparties dans le bloc. Personnellement, il
m'est arriv d'obtenir d'excellents blocs, en les laissant refroidir sur la
table et d'avoir de trs mauvaises inclusions malgr un refroidissement
rapide dans l'eau. La cristallisation et le dfaut d'homognit de la
paraffine sont donc dus d'autres causes.
La premire est la prsence, dans la masse, de traces du dissolvant.
Ces traces suffisent provoquer la formation de zones molles et blan-

chtres remplies d'aiguilles cristallines. Une autre a t rcemment


lucide par les recherches de Carozzi 2, c'est le refroidissement lent
l'air. Sous cette influence, il se produit non des cristaux, mais de petites
cavits entre les sphrites ou godes qui constituent la paraffine solide.
Le bloc est alors form d'une masse blanchtre (|ui se coupe mal et se
comporte comme si elle tait souille de dissolvant.
1. Il est souvent
avantageux do disposer ensemble plusieurs fragments du mme
on
objet qui seront coups en mme temps. Pour les orienter convenablement,
rchauffe la pince plusieurs reprises, de manire entretenir la fusion de la
de
Il
existe
paraffine et empcclier la formation d'une pellicule la surface.
nombreuses mthodes d'orientation pour les petits objets. Nous ne pouvons les
ncessiindiquer, parce qu'elles ne sont pas en usage dans le travail courant et
teraient de longs dveloppements. On trouvera quelques indications ce sujet,

propos des cas particuliers d'inclusion et p. 539 propos des coupes


Mentionnons seulement la mthode de Patten modifie par Hoffmann,
Ztsckr. f. wiss. Mikv., XV, p. 314, 1899, la mthode de Woodwurth, Bull. Mus.
compar. Zool. Harvard Collge, XXV, p. 16-47, 1893 et celle de Lcaillon, Thse
sciences Paris, 1898, cf. p. 44.
wiss. Mikr., XXVI,
9. Carazzi, Zur Abkiihlung des Paraftins. Zeitschr.
f.

p. 31-2,

d'Infusoires.

p. 530, 1909.

312

MlhllOD!:S GKNKIALI-S

Au

contraire, lorsque la masse de paraffine est refroidie sous l'eau,


tide ou froide, il se forme des sphrites trs petits et trs serrs, dont
les intervalles sont remplis par des feuillets, sans (|u'il existe aucune
cavit.

On

obtient ainsi des blocs parfaits, mme; dans de l'eau oO ou

35". D'ailleurs la

temprature de l'eau importe peu.

Voici donc comment on devra pi^aliquer le refroidissement de


la paraffine. On pri)are nn cristallisoir plein d'eau et, ds que
Toi-ienlalion est termine, on lait flotter le moule, si sa forme et

son

j)oids le

permet (en t. C'est

Dans

facile

avec

les verres

de montre et

on attend simplement
la
d'une
assez
surface
soit
couverte
que
paisse, dont on
pellicule
acclre Tappariiion en ventant le moule. Ds que ce rsultat est
les capsules d'lain.

le cas contraire,

obtenu, on immerge doucement. Cette immersion demande quelques prcautions, autrement la paraffine, encore liquide, pourrait
tre

}rojele

travers la pellicule, accident qui amnei^ait la

formation, dans le bloc, de cavits remplies d'eau. On laisse les


pices dans Teau de vingt minutes une demi-beure, plus encore
pour les blocs volumineux. Aprs refroidissement complet, on

dmoule comme il a t dit plus liant.


Au cas o le bloc prsenterait des bulles ou de:? cavits, on
pourrait les faire disparatre avec un fil de fer cliauff. Cette
opration doit tre effectue avec prcaution et pour peu que le
bloc paraisse dfectueux, il vaut mieux recommencer Finclusion.

La mtbode que nous venons de dcrire ne


fragments assez volumineux pour tre manis commodment. Pour de trs petits objets on procde autrement on les sort
du bain de paraffine, on les goulte et on les laisse refroidir sur une
lame. On a prpar, d'autre part, au moyen d'un moule, un bloc rectangulaire. Sur un des petits cts de ce bloc, on creuse une cavit suffisante pour recevoir l'objet qu'on oriente convenablerncnl. 11 ne reste
plus (ju' faire fondre la parafline tout autour, au moyen d'une aiguille
cbaulTe, de manire complter l'inclusion sans rien dranger. On
Cas

particuliers.

s'api)lique qu'aux

refroidit sous l'eau et le bloc est prt couper.


petits, tels que des Infusoires, on procde
oprations de fixation, coloration, dsbydratation,
imprgnation, ayant t ell'ectues au moyen du centrifugeur, on inclut
le culot dans le tube mme qui a servi centrifuger et, aprs refroidissement, on casse le tube. On peut aussi verser le culot dans un petit
tube fond rond ou dans un verre de montre; de manire rassembler
les objets dans le plus petit espace possible. On casse le tube pour avoir
le cylindre de paraffine: pour dtacber plus facilement du verre de
montre la lentille de paraffine, on a eu soin, avant d'y couler cette dernire, de l'enduire trs lgrement de glycrine ou d'essence de girolle
(pour des dtails plus complets voir p. 530, technique des coupes d'Infu-

Pour des objets encore plus

autrement. Toutes

soires).

les

313

MTHODES D'INCLUSION
5.

Insuccs.

1.

Paraffine molle

et

blanche. Cet accident

arrive lorsqu'on emploie de la paraffine souille de dissolvant.


Recommencer Finclusion dlinilive avec de la }aratTme neuve.
2. Cavits remplies de paraffine molle et blanche. Cet accident est produit, soit par des traces de dissolvanl, soit par un refroidissement trop lent Tair. Recommencer Tinclusion dfinitive.
3. Cavits remplies cVeaii. Le bloc a t immicrg trop tt et
trop rapidement daus feau. Aspirer feau au buvard et remplir
les cavits au fer cbaud (fig. 181).
4. Cavits remplies cfair.
Bloc refroidi troj vile. Remplir

ces cavits avec le


6.

fil

de

fer

chaud

Conservation des blocs.

paraffine,

procd

se

(\\\\

181).

(fig.

Les

tissus, bien

imprgns de

conservent indfiniment sans altrations. C'est ce


est

de beaucoup

le

meilleur ponr constituer une

collection de rserve de pices histologiques. Nous avons dit. en


effet (p. 295), qu'aucun liquide n'est rellement conservateur, au

point de vue de la colorabilit du cytoplasme et du noyau. L'alcool


absolu rend les tissus cassants, au point d'empcher compltement
la

confection des coupes. Dans l'alcool 60' ou 70 ou dans les


foi'moles, il se produit assez rapidement des phno-

solutions

mnes d'hydrolyse qui modifient

les

lments cellulaires

et les

rendent difficilement colorables. Rien de tout cela n'a lieu avec

une inclusion bien

faite.

Les blocs de paraffine prsentent encore d'autres avantages


ils ne sont
pas fragiles et ils ne craignent rien de la dessiccation.
Toutefois, pour plus de prcaution, il faut plonger rapidement dans
:

la

de
paraffine fondue la surface de section des blocs entams, afin

mettre les tissus l'abri de

On

l'air.

dans de petites boites de carton, |)ar


exemple des botes lamelles, en ayant soin d'y joindre une
tiquette. On peut, avec une pointe dure, graver sur chaque
bloc un numro correspondant l'tiquette. 11 existe dans le
conserve

commerce des

les blocs

botes compartiments, trs

mthodiquement

II.

les collections

INCLUSION

L'inclusion au collodion ou

commodes pour ranger

de blocs.

la

AU COLLODION
celluidine,

par certains auteurs, perd de jour en jour

du

quoique
terrain.

trs

vante

A mon

avis,

METHODES GENERALES

314
elle

lre

prsente plus crinconvnienis que (Favanlages rels el ne doit


employe qu'en cas d'absolue ncessit.
d'abord

incontestable

qu'elle est beaucoup plus longue et


ne peut donner des coupes minces, car,
il ne faut plus compter avoir des sections rgulires.
au-dessous de 10
Enfin, elle se prte trs mal la prparation des coupes sries et
exige alors des manipulations interminables et trs dlicates.
Ce sont l des inconvnients dont il est difficile d'attnuer la gravit.
Passons nux prtendus avantages de la mthode. On a soutenu qu'il
tait impossible de couper correctement la paraffine des pices de
c'tait peut-tre vrai autrefois, mais, avec les
grandes dimensions
microtomes et les rasoirs actuels, on peut dbiter, en tranches de moins
de 10
des blocs rectangulaires mesurant 2 cm. sur 4 5 cm., ce qui
est dj une jolie taille. Cette linute, qui est celle des lames de format
courant, peut trs bien tre dpasse. La difficult d'inclusion de ces
grosses pices est illusoire; on la tourne en diminuant l'paisseur, sans
est

11

beaucoup plus

dlicate. Elle
;j.,

rj,,

rien retrancher la surface.


On a prtendu aussi que certains tissus, tels que les centres nerveux,
le foie, la peau, durcissaient dans la paraffine au point de ne pouvoir

exprience personnelle me permet d'affirm.er le concerveau, le cervelet bien inclus se coupent admirail suffit
blement
de prparer des tranches minces et de raccourcir
autant que possible le bain de paraffine. Pour la peau, on doit prolonger
la dure de ce dernier (p. 662).

tre coups.
traire.

Le

Mon

foie,

le

On

a enfin reproch l'inclusion la paraffine d'altrer les tissus


vue l'inclusion au collodion. L'ensemble des travaux cytologiques modernes, tous effectus avec des
matriaux inclus dans la paraffine, est l pour faire justice de cette
dlicats et prconis ce point de

allgation.

Nous devons donc considrer finclusion au collodion comme


un procd de secours, utile dans des cas trs particuliers
:

Pour couper des objets prsentant dans leur intrieur de


grandes cavits ou lacunes, qui pourraient s'effondrer avec la
1'^

paraffine
2' Pour les objets renfermant des parties de consistance trs
;

que les Arthropodes.


Dans ces cas, l'avantage du collodion

diffrente, tels

est

de

donner une

On n'est
masse transparente, permable tous les colorants
donc pas oblig de Tliminer comme la paraffine et on arrive ainsi
.

conserver toutes les parties


rapi)orts

de

l'objet

avec l'intgrit de leurs

Pour couper des

des cerveaux entiers

objets de trs grande dimension, tels

que

4 Lorsque les conditions


ploi de la paraffine, par

du milieu rendent

exemple dans

les

trs difficile l'em-

pays chauds.

MTHODES d'inclusion
La cellodine (de Schering)

se trouve

3lb

dans

le

commerce eu

renfermes dans des botes de fer-blanc. Chaque tablette


pse environ 200 grammes et correspond 40 grammes de cellodine sche. Ce produit n'est pas autre chose que du coUodion trs
tablettes

masses plus transparentes que le collodion


ordinaire; aussi a-t-on peu prs abandonn ce dernier, bien qu'il
puisse fournir d'aussi bonnes inclusions ^ On dissout la cellodine,

pur, qui donne des

comme

le

fulmicolon, dans un mlange parties gales d'alcool

On

peut employer la cellodine telle quelle,


d'eau
mais, suivant x\pathy, il est prfrable,
charge
dcouper d'abord en lanires qu'on fait scher et qu'on

absolu et d'lher.
c'est--dire

de

la

On obtient ainsi un liquide parfaitement priv


d'eau qui donne une masse d'inclusion plus transparente. Par
contre, la cellodine sche a rinconvnienl de se dissoudre len-

dissout ensuite.

tement.

Technique de rincliision au collodion.

Cette inclusion

Les objets, bien dshydrats, sont pntrs d'abord


forte.
par une solution faible de cellodine, puis par une solution
Ds que la pntration est acheve, la masse et l'objet sont verss
se fait froid.

et on procde au durcissement du bloc, qui peut


ensuite tre conp. Nous allons tudier chacune de ces oprations.
On peut les faire sans peser,
1. Solutions de cellodine.
en dissolvant la cellodine non sche dans le mlange parties

dans un moule

d'un liquide
gales d'alcool absolu et d'ther, jusqu' obtention
la solution forte qu'on tend de deux
C'est
et
sirupeux.
pais
la solution faible.
cellodine sche suivant Apathy, on peut procder
et la
par pese. La solution faible sera, par exemple, 4 p. 100

volumes dalcool-ther pour avoir

Avec

la

solution forte 10
2.

on

p.

Prparation de

le

100.
l'objet.

Aprs dshydratation

pntre pendant quelques heures par

le

absolu-ther.
3.

complte,

mlange alcool

Imprgnation par la mthode ordinaire.

L'objet

pendant une semaine, et dans


la solution forte pendant une autre semaine, au moins, car,
pour les pices volumineuses, il faut quelquefois des mois de

sjourne dans

la

sohilion faible

pntration.
1

On

a prconis

rcemment

remplacer le collodion et
p. 28*, 1" juillet 1911.

l'emploi du cellulod dissous dans l'actone, pour


Secheyron, Aixli. md. de Toulouse, XVIII,

la cellodine.

MTHODES GNUALES

316
va sans

Il

diic

que ces

elTecLues clans des

sont

oi)ratioiis

Uibes bien bouchs.

Mthode de choix, imprgnation par

A.

(d'aprs Gilson et HollesLee).


d'alcool-lher, est

ordinaire avec de

mthode rapide

la

L'objet,

dshydrat et imprgn
mis dans un tube essai ou nn tube fond plat

la

cellodine trs claire.

On

plonge

le

Inbe dans

un bain de paraffine fondue, de manire produire TbuUition


du mlange et son vaporation rapide. Celte bnllition est sans
inconvnient puisqu'elle se produit basse temprature. Ds que
le mlange est devenu sirupeux, on procde
au durcissement par le chloroforme.

5.

Enrobage.

On verse

la

cellodine paisse

dans un moule de papier (fig. 152) de forme rectangulaire ou mieux de forme ronde (fig. 153).
on
Ces derniers sont trs faciles faire
:

prend un bouchon de lige de forme cylindrique et de taille approprie celle de l'objet.


Fig. 153.

Support
en lige et bote on
papier pour inclusion au collodion.

On

l'entoure d'une collerette de papier fort,


(ju'on fixe avec une pingle. Ce procd, d

BoUes Lee,

est trs

commode,

est facile fixer sur le

soin de couvrir le

car le bouchon

microlome.

bouchon

et

couche de cellodine qu'on

le

11

faut avoir

papier d'une

ceci pour
laisse scher com})llement
des
bulles
la
d'air
dans
cellodine.
ne
viennent
se
que
loger
peut aussi prendre comme moules les petits tubes de verre
;

viter

On

fond ]dat qui servent

la

dshydratation.

Quel que soit le procd employ, on a soin d'orienter l'objet


dans une direction dtermine et d'liminer les bulles d'air avec
une aiguille, ou par l'exposition aux vapeurs d'lher dans un vase
bien clos.

Durcissement.

Mthode

Valcool.

Lorsque la surmoule a pris, par vaporalion, une consistance un peu ferme, on transporte le tout avec
prcaution dans de l'alcool 80". Lorsque la masse est compltement durcie, ce qui est assez long, le bloc est retir du moule. Si
on s'est servi du procd du bouchon (fig. 153), il suffit de drouler
6.

face de la cellodine contenue dans le

papier et la pice est prte couper. Les blocs sont conservs


dfinitivement dans l'alcool 70''. Le procd l'alcool convient
le

les objets volumineux. Si on a


pris un moule impermable,
faut en retirer la masse ds qu'elle est assez ferme, de manire

pour
il

317

MTHODES D'INCLUSION
ce qu'elle soit pntre de toutes parts. Pour

la retirer

facilement,

on glisse un scalpel le long des parois du moule.


Mthode de choix au chloroforme et l'essence de cdre,
La masse contenue dans le moule est
d'aprs Bolles Lee.

est
expose, eu vase clos, aux vapeurs de chloroforme. Ds qu'elle
devenue assez rsistante, on la sort du moule (si c'est un moule en

papier on le dveloppe) pour faciliter l'action des vapeurs. Aprs


durcissement, on claircit dans un mlange de une partie de chloroforme pour deux parties d'essence de cdre'. Lorsque l'objel

on laisse vaporer le chloroforme, en ajoutant de


un
en
temps
peu d'essence de cdre. Les blocs deviennent
temps
du verre; on peut les conserver sec, dans
comme
transparents

est bien pntr,

un

flacon bien bouch, et les couper sec, ce qui est

un avantage

considrable.

LA

III. INCLUSION MIXTE


PARAFFINE ET AU COLLODION

Getlr mtliodc no rentre pas dans le cadre du travail courant, mais il


faut la connatre, puisqu'elle peut rendre de grands services pour ltude
des Arthropodes, uotanirni'nt dans les recherches parasitologiques sur
les Diptres piqueurs. Elle periuet en eiet d'ohlenir des coupes trs

avec des objets trop fragiles et de consislance trop ingale pour


se prter l'inclusion la parafline pure. Les blocs ainsi obtenus se
coupent comme les blocs de paraffine et donnent des coupes en rubans.
Quel que soit le procd, la marche est toujours la mme l'objet est
fiaes,

d'abord imprgn de cellodine, puis inclus la paraffine. Le bloc


couper est donc en paraffine et donne des rubans comme la mthode
ordinaire la paraffine.
De nombreux procds ont t proposs. Nous n'en retiendrons qu'un

nombre.
Breckuer- emploie un

petit

[)roc{''d driv de ceux de Kultschitzky et de


de l'alcool absolu, les pices sont plonges dans une
solution de 5 gr. de cellodine (sche) pour 200 gr. de mlange alcoolther. On durcit dans le chloroforme pendant cini[ dix heures, on
passe au benzol, puis dans une solution de paraffine dans le benzol,

Ryder.

Au

sortir

puis dans la paraffine 43" et enfin dans la paraffine .32". Dans le


traitement ultrieur des coupes, viter l'emploi de l'alcool absolu, ([ui
dissout le collodion et le remplacer, soit par un mlange parties gales
d'alcool et de chloroforme, soit par du xylol phniqu I p. 3.
l'our les petits animaux et le plankton, durcir par le chloroforme
dans une masse de cellodine ([u'on inclut ensuite la paraffin. Le
1. Comme pour l'imprgnation avant la paraffine fp. 304), il faut })rcudre l'essence
de cdre et non 1 huile d'immersion, qui donne avec le chloroforme un mlange

trouble.
2.

iciss.

Breckner, Zur doppelten Einbettung in Cellodin und Parafriu. Ztschr.


Mikr.,

XXV,

p. 29, 1909.

f.

MTHODES GNRALES

318

])lanklon se manipule de prfrence dans un tube de 10 inillini. de


diamtre, ferm par de la soie bluter.
GandoKi dsliydrale par l'alcool absolu, imprgne dans un mlange
parties gales d'alcool al)Sohi et de tolune, el passe dans une solution
un peu paisse de cellodine dans ce mme mlange (consistance
d'huile immersion). Aprs trois h sept jours d'imprgnation, durcir
'

dans du chloroforme, au((uel on ajoute quelques gouttes d'lhcr et un


peu de paraffine. Au bout de (juinze minutes (pas plus), porter dans la
paraffine 50".

oprent encore plus simplement. Aprs


Stephens et (Ihristoi)hers
dshydratation, les objets restent un jour ou deux dans la cellodine
dans la cellodine 3 p. 100. On porte
1 p. 100 et un jour ou deux
ensuite dans l'huile de cdre et on imprgne une heure dans la paraffine.
Cette dernire mthode convient surtout pour les Moustiques; voir ce
2

sujet d'autres procds (p. 578).

mthode de Fidd et Marlin'^ (j[ui est un peu


une inclusion simultane et non combine. On passe
dans un mlange parties gales d'alcool absolu et de tolune, puis on
imprgne dans une solution de cellodine dans ce mme liquide (consistance d'essence de girofle), sature de paraffine en copeaux une
temprature qui ne doit pas dpasser 20 23"C. Ds que l'objet est bien
pntr (ce qui est assez rapide), durcir par une solution sature de paraffine dans le chloroforme ou le tolune et inclure finalement la paraffine

Nous devons

diierente

citer aussi la

c'est

pure.

lY

AUTRES MASSES D'INCLUSION

Je ne mentionnerai d'autres mthodes d'inclusion ((u' titre de renseignement, car elles ne sont pas d'usage courant. La gomme glycrine est
un mlange de trois parties de solution sirupeuse de gomme aral)ique et
elle sert inclure froid des objets trs
de une partie de glycrine
:

durs, tels que des poils ou des organes chitineux. On laisse paissir
en couche mince, renfermant l'objet, justiu' consistance suffisante.
La glatine glycrine (mthode de Nicolas '^) peut rendre des services

pour l'tude d'organes ou d'organismes trs dlicats et trs riches en


eau, car elle permet d'inclure des objets non dshydrats. On trempe
d'abord les pices, pendant un ou deux jours, dans de la glatine 3 ou
4 p. 100 maintenue 25", puis, pendant le mme temps, d'abord dans
une solution 10 p. 100 et finalement dans une solution 20 ou
25 p. 100, additionne de 8 10 p. 100 de glycrine et maintenue 35".
ds que la masse a
L'inclusion dfinitive se fait en botes de papier
fait prise, on la porte dans du formol 1 p. 7 d'eau. On peut couper
aprs durcissement suffisant ou conserver dans le formol faible. Cette
masse se coupe comme la cellodine, mais i)rend les colorants plasmatiques. Les coupes se montent trs bien la glycrine, mais plus diffici:

lement dans le baume le mieux


et de les taler dans du crsylol.
:

1.

Gandolfi,

XXV,
2.
3.
4.

Ueber

cin

est de les

dshydrater avec prcaution

kombinicrtc Einbettungsmethode. Ztschr.

f.

uiss. Mikr.,

p. 4-21, 1908.

Stephens et Christophers, Practical Study of Malaria,


Bull. Soc. Zool. France, XIX, p. 48, 1894.
Bibliographie anatomique, p. 274, .1896.

3*^

dit., p. 115.

1908.

CHAPITRE

XII

MTHODES POUR EXCUTER


LES COUPES
La mthode des coupes a pour but de rendre les objets et les
eu les rduisant en tran-

tissus propres l'tude microsco])ique,

ches assez minces yiour tre examines par transparence.


Il
y a plusieurs mthodes pour excuter les coupes. La plus
simple consiste couper Tobjel tel quel, frais ou durci dans
l'alcool

c'est la

mthode des coupes main leve. Ces mmes


un microtome mcmi^ qui permet

objets peuvent tre fixs dans

dj d'excuter des coupes plus rgulires et d'une plus large


surface. Avec la mthode de la conglation, des coupes peuvent
tre faites, sans inclusion })ralable, dans des objets frais ou fixs.
les mthodes des
coupes la paraffine et au collodion

Enfin

vritables procds histologiques. Nous allons tudier


successivement ces diverses mthodes.

sont les

La plupart d'entre

elles ncessitent l'emploi d'instruments sprnicrotomes, destins rgler plus ou moins automatiquement l'paisseur des coupes et guider la marche du
rasoir. Nous tudierons ces microtomes au fur et mesure, car

ciaux,

ils

nomms

sont gnralement adapts des emplois particuliers.


est au contraire un instrument, })lus important encore

Il

que
microtome, souvent trop nglig, et sans lequel il n'est pas de
bonne coupe possible. C'est le rasoir. Sans qu'il soit besoin d'inle

sister,

on comprendra que, mme avec le meilleur microtome, il


de bonnes coupes si le rasoir ne coupe pas

est impossible d'avoir

bien.

Toute

la

mthode des coupes repose donc sur

l'entretien des rasoirs.


1.

Forme du

rasoir.

Elle diffre

suivant

la

la

qualit et

nature des

METHODES GENERALES

320
coupes excuter.

Pour

les

coupes main leve, nu rasoir

barbe ordinaire peut suffire; mais il est prfral)le d'employer


une lame vide seulement du cat suprieur et plane sur le ct
qui est en contact avec Tobjet (fig. loo x). Il y a avantage prendre

un

rasoir

un

|)eu

et

Rasoir de ^Valb pour coupos

Fig. 151.

lourd

volumineux, qui
mieux en main que
modles lo-ers Pour

est
les

les

coupes au microtome
main et au microtome

paratiuc.

Rocking, les mmes rasoirs peuvent servir; mais, pour les grands
microtomes, il faut des rasoirs si)ciaux. Les microtomes glissire du type Jung sont toujours accompagns de leurs couteaux
de grande
particuliers,
dimension. Le choix est
difficile
pour les
microtomes genre Minot,

plus

Les deux principaux types do lames


Fig. 155.
de rasoirs; a^, pour objets mous, y, pour paraffine et objets durs.

l'orme est, notre avis, celle

sent par
la figure

la

figure loi. (Test

il existe un
nombre
de types
grand
de lames. La meilleure
du rasoir de Walb (jui est lepr-

une

forte

pour lesquels

lame

faces planes,

doid

loo [y) reprsente une seclion elle est munie, chaque


extrmit, d'une j^oigne trs commode |)Our laigui:

sage. Avec une lame de ce genre, on peut couper


toutes espces d'objets, aussi bien dans la }araffine

que dans

Fig.

15G.

Schma du
tjiseau fa-

cettes

des

le collodion.

En ce (jui concorne l'paisseur de la lame et du tranchant, on peut i;uider son clioix sur les considrations
suivantes. Les lames du type x (lig-. 155), Irau-liant trs
uiince, conviennent pour les objets tendres et dlicats,
tandis que les lajiies du type j (lig. 155), plus paisses,
(ranchant en forme de triangle isocle, sont ncessaires

rasoirs

pour couper les objets durs et rsistants. Les lames du


premier type sont trs lionnes pour les coupes main
leve ou au microlone main, tandis (jue les solides
lames, dos trs larg-e, du second type sont les meilleures pour les
coupes la paraffine et, en gnral, pour tous les travaux courants.
La forme du tranchant peut varier aussi. Ou bien les deux faces de
la lame se rapprochent, en formant un angle plus ou moins aigu,
comme dans les couteaux ordinaires, ou bien le tranchant forme un
paraffine.

biseau facettes, comuK^ la fig'ure 156 le reprsente sch('mati(juemenl.


Cette dernire disposition est la plus 'commode pour le repassage; on

321

MTHODES POUR EXCUTER LES COUPES


comprend de
forme,

faut

il

second cas,
lite

il

beaucoup

suite que, pour entretenir la rgularit de la premire


user toute la surface de la lame, tandis que, dans le
suffit de repasser les deux facettes du biseau, ce ([ui faciles oprations.

2. Repassage du rasoir. Nous venons (p. 325), eu tudiant


mode d^aclion du rasoir, qu'on peut le considrer comme un coin

le

seront d'autant
pntrant dans les tissus pour les diviser. Les coupes
le tissu moins altr que ce coin sera plus mince et
minces
et
plus
et l'paisseur de la lame, il fau t
plus poli Quelles que soient la forme
donc que le tranchant, biseaut ou non, prsente un poli parfait.
Moins il y aura de stries mici^oscopiques, plus le coin pntrera
facilement dans les tissus et moins il y causera de lsions. En
.

que laisse dans Tacier un repassage imparde pntrer et se terminent par des
tranchant
empchent
dents et des crans microscopiques qui dchirent les cellules et
effet, les petites stries

le

fait

des rayures qui peuvent


produisent, dans les rubans de coupes,
bandelettes
en
longitudinales.
complte

aller jusqu' la section


'

Pendant la confection des coupes, le tranchant du rasoir


s'mousse, s'brche ou se recourbe s'il est trop mince. Ce dernier accident est rare avec les rasoirs paralTme dont nous recommandons l'emploi, mais l'angle que forment les deux biseaux du
de moins en moins aigu, des crans
a
microscopiques apparaissent et le poli diminue. Le repassage
but de rendre au tranchant sa forme et son poli primitif.

tranchant

tend

devenir

pour
Il

faut

donc enlever d'abord une mince couche d'acier, de manire

rectilier la

forme des

facettes, puis les polir aussi parfaitement

que possible.
Le repassage a cess
Nouvelles mthodes de polissage.
d'tre une pratique empirique, exerce par certains professionnels. Il est devenu un procd scientifique et tout micrographe
doit pouvoir maintenir ses rasoirs dans un tat de poli suffisant.

Disons tout de suite que les anciens procds de repassage sur


cuir ont fait leur temps et ne sont qu'un pis aller. Un aiguisage
rationnel doit tre calqu snr les mthodes de polissage usites
on arrive ainsi
en
et en mtallographie microscopique
:

optique

obtenir des surfaces assez parfaites,

pour qu' 750 diamtres on

ne distingue aucune strie.


Le repassage idal est donc celui qui est pratiqu suivant les
mthodes optiques et mlallographiques. Comme ces procds ne
sont pas la i)orte de la majorit des micrographes, il sera prfM. Langehon,

Prcis de Microscopie.

^i

MTHODES GNRALES

322

rable d'envoyer ses rasoirs une maison spciale d'optique ou de


niicrotomes. Il faut bien savoir que le poli parfait et le tranchant

rigoureusement rectiligne ain-i obtenus sont trs durables. En


mnageant le rasoir et en ayant soin de ne pas Tbrcher sur des
objets durs on pourra le conserver trs longtem})s en bon tat. 11
aprs usage, de l'essuyer avec un linge fin, imbib de tolune
d'alcool, suivant la nature des objets coups
pour entretenir
on
trs
sur
un
cuir
trs
fin
et trs doux
poli,
passe
lgrement

suflit,

ou
le

en

se

gardant bien d'employer aucune pte^

Anciennes mthodes d'afftage.

Nous devons

dcrire ces

mthodes, car, toutes itnparfaites qu'elles sont, elles seront long-

temps encore en usage chez

les

micrographes qui ne savent o

faire

aiguiser scientifiquement leurs rasoirs, et qui sont obligs de se

contenter des instruments de repassage qu'on trouve dans

le

com-

merce.
L'afftage
pierre et le

ordinaire- consiste employer successivement la


La pierre sert enlever les brchures et

cuir.

redresser un tranchant trop arrondi le cuir sert parfaire l'aiguisage obtenu sur la pierre et raviver le tranchant lorsqu'il est
;

mouss, mais non brch.

Appareils d'afftage.
Quel (jLie soit le mode de repassage, pierre ou
condition essentielle raliser est de conserver au rasoir la

cuir, la

forme et l'inclinaison de
son tranchant. Pour cela,
il
faut que ce tranchant
pendant le repassage,
une inclinaison convenable
ait,

par

rapport

la

surface

polissante. Avec les rasoirs


dos trcs large, comme

ceux dont je recommande


Tcuiploi i)Our les coupes
Appareil cVafftagc
Fig.
de
araffine (rasoirs
^^
a faces planes.
-,^ ,,
,.,..,
Walb, hg. i54j, aucuneprecaulion n'est ncessaire. 11
suffit d'appuyer le rasoir bien plat, en le tenant appliqu sur la pierre ou
le cuir. Pour les rasoirs ordinaires dos troit, il faut tenir le dos du rasoir un
157.

1.

On trouvera dans

pour rasoirs

le

mmoire de Funck, A propos de

l'aiguisage des ra-

soirs mici'otome {Coviptes rendus Assoc. des Anatovtistes, Run. 10, p. 294, 1009)
des renseignements trs complets sur la manire de pratiquer soi-mme l'afftage
d'Arkansas et d'une dalle do
scientifique, par l'emploi successif de la pierre
glace, combin avec une pte d'alumine calcine et lvige.
2.

Cette mthode est longuement dcrite par W. Ssobolow. Thorie und Praxis
1909.
f. miss, Mikr., XXV, p. 05-79,

des Schleifens. Zlschr.

MTHODES POUR EXECUTER LES COUPES


aigu.

Comme

323

manire ne pas donner au tranchant un

peu relev, de
il

est difficile d'obtenir la

main

anile trop
cette inclinaison, on se

Ces appareils sont de deux sortes


pour les
conglation, dont le tranchant forme un angle

sert d'appareils d'afftage.

rasoirs paraffine et
assez ouvert, on doit

augmenter l'paisseur du dos. On emploie alors


une sorte de cylindre creux (fig. 157) portant une rainure dans laquelle
on engage le dos du rasoir. L'paisseur de ce cylindre donne au rasoir

il suffit de repasser en appllcjuant sur la pierre le


tranchant et le cylindre. Pour les rasoirs plans sur une face et concaves
sur l'autre face, on relve le ct plat avec un appareil form d'une

l'inclinaison voulue;

tringle mtallique.
Pierres aiguiser.

L'tude prcise des pierres aiguiser est assez


parce que les dnominations vulgaires s'accordent mal avec la
nomenclature ptrographique et minralogique. Aussi n'en dirons-nous
que quelques mots. En principe, une bonne pierre aiguiser doit avoir
des grains trs fins (de 1 3 \j), bien ciments, trs uniformes et aussi
durs que l'acier. Les grains trop gros ou ceux qui se dtachent produisent dans le tranchant des crans ou cbrchures. Par suite, la pierre
lithographique est mauvaise, car son grain est calcaire, trop tendre et se
dtache du ciment, d'o usure rapide et ingale. La pierre du Levant, ou
pierre l'huile, est mauvaise aussi, parce que son grain est trop dur. La
meilleure pierre est la pierre d'Arkausas, sorte de phyllade de couleur
jaune ambr, grains trs fins (l [i environ) et bien ciments.
Il ne faut jamais repasser sur une pierre
sche,
Liquide employer.
parce ({ue les particules d'acier ne tardent pas remplir les espaces
difficile,

qui sparent les grains et ceux-ci n'agissent plus qu'imparfaitement et


irrgulirement. Le liquide sert donc tenir en suspension les particules
d'acier et les dbris de la pierre.
Les liquides les plus employs sont l'eau, l'eau de savon, l'huile de
ptrole, riiuiie de vaseline, l'huile d'olive. Plus le liquide est pais,

adhre la pierre, qu'il rend plus fine en s'insinuant entre les


en diminuant leur, paisseur. Une mme pierre peut donc
donner deux elfets, suivant qu'on la recouvre d'eau ou d'huile. Les
rasoirs de microtome seront de prfrence repasss avec de l'huile.
Les pierres l'eau doivent tre bien essuyes aprs l'usage et prserves de la poussire et des taches de graisse. Ces dernires s'enlvent
avec du savon. Les pierres l'huile doivent rester lgrement imbibes
on les prserve soigneusement des poussires et on les
de ce liquide
essuie avant l'usage.

mieux

grains

il

et

Sur la pierre, le tranchant du


Repassage sur la pierre.
On saisit donc le
rasoir doit toujours tre dirig en avant.
rasoir par son manche ou par ses deux extrmils, suivant sa
forme. On applique sur la pierre d'abord le dos du rasoir, puis le

tranchant, pour tre sr de ne pas mousser ce dernier par un


mouvement imprudent. On tire alors obliquement la lame vers
soi, le

de

la

tranchant en avant, de manire utiliser toute la longueur


une face du rasoir. Arriv l'extrmit, on

pierre pour

retourne

la

lame, on l'applique sur

la

pierre avec les

mmes pr-

METHODES GENERALES

324

pousse le tranchant en avant. Pour les rasoirs


on
manche,
repasse toujours de la hase rextrmit de la lanic;
rasoirs
extrmits symtriques, on commence par l'une
les
pour
caillions, el

on

la

de ces extrmits, toujours


Il

la

mme.

faut appu^^er trs lgrement et

mineux,

le

poids de

la

lame

suffit

mme, avec
assurer

important de passer les deux cts de


de fois sur la pierre.
trs

Morftl.

Il

la

le

les rasoirs volu-

repassage.

lame

11

est

mme nomhre

le

faut arrter l'action de la pierre avant l'apparition

on nomme ainsi une trs mince plaque d'acier qui


du morfil
se forme des deux cts du tranchant. Ce morfil est impossihle
:

enlever sur

la pierre,

cause de son lasticit

ferait

qu'augmenter. Pourtant, lorsqu'il y


paratre, on ne s'occuj)e pas du morfil.

Polissage sur le cuir.

Ce polissage

en insistant,

il

ne

a des dents faire dis-

est indispensahle, car le

pierre prsente toujours un peu de morfil,


stries
et
des
des
dentelures microscopiques. Ces dlauts
que
disparaissent avec le cuir.

tranchant ohtenu sur

la

ainsi

Sur

le

cuir,

avant.

jtart cela, les

le

dos du rasoir doit toujours tre dirig en


prcautions sont

les

mmes que pour

pierre; on se sert des apj)areils d'afftage et on


longueur du cuir pour chaque ct de la lame.

utilise

On

la

toute la

appuie trs

peu et on passe rapi(h:;ment. Les couteaux lourds seront retourns


en les faisant hasculer sur le dos, afin de ne pas ahmer le tranchant ni

le cuir.

L'action du cuir rsulte de son lasticit;

il

se

dprime sous

le

poids du couteau, ce qui permet au morfil de se hriser et de disparatre. En outre le tranchant devient uni, poli et durahle.
y a ijeaucoup de modles de cuirs rasoirs. Un des meilleurs est
cuir carr quatre faces de Zimmer (fig-. 158). Une des faces sert de
pierre, deux autres sont enduites de ptes Fmeri, noire grain
11

le

Fig. 158.

Cuir qiiatro faces de Zimmer.

Fis. 159.

Cuir de Wall).

moyen, rouge grain trs lin. Le quatrime ct est un cuir propre,


doit servir au polissage dtinitif. Certains cuirs deux faces
possdent une face en moelle de sureau trs commode pour enlever le

([ui

morfil; l'autre face sert au polissage. Enfin les cuirs de

sont

commodes pour

les

grands rasoirs.

Walb

(fig. I.i9)

MTHODES POUR EXECUTER LES COUPES


Quel que

soit le

modle de

il

cuir,

faut bien savoir

325

que

le polis-

sage dfinitif ne peut se faire que sur un cuir non enduit de pte
en effet ces dernires agissent exactement comme la pierre et ser:

vent enlever les dents el asprits du tranctiant. Aussi faut-il


avoir bien soin, en passant de la pierre au cuir et d'une face

Tautre du cuir, d'essuyer soigneusement le rasoir.


Ne jamais passer sur le cuir une lame brche, sous peine de
dchirer irrmdiablement.

le

Aprs le repassage sur li pierre, il faut essayer


tranchant il y a pour cela beaucoup de procds. D'aprs Ssobolew,
le meilleur consiste poser le dos de la lame sur quatre doigts de la
main gauche et passer lg;rement la pulpe du pouce sur le tranchant.
On peut aussi le poser plat sur la paume de la main, sans appuyer,
ef voir s'il coupe les saillies pidermi(jues. Un bon moyen consiste
aussi, en tenant le dos de la main devant le joui', a essayer de couper
un i)oil de cette rgion.
Essai du tranchant.

le

3.

Mode

d'action du rasoir.

diffrentes, snivant qu'on


-dire lastiques

ou non,

Le

rasoir agit de

deux faons

coupe des objets humides ou secs,

suivant qu'on opre


Pour excuter les coupes
et

la

c'est-

main ou au
la main ou

microlome mcanique.

dans des objets lastiques (Idocs de cellodine), le rasoir est tir


obliquement, tandis que, dans les microlomes paraffine, il agit
perpendiculairement
pntre

comme un

d'allonger

et

coin

la
:

d'amincir

surface couper.

Dans

les

deux

cas,

il

oblique a seulement pour but


section de ce coin. La plupart des

la position
la

auteurs sont d'accord maintenant pour admettre que le rasoir agit


toujours comme un coin et non comme une scie, quelle que soit son
obliquit. En effet chaque point de
que par un point du tranchant du

l'objet

rasoir.

n'est

jamais attaqu

En

plaant le rasoir
obliquement, on augmente simplement la distance de la base au
tranchant, ce qui donne en ralit ce dernier un angle plus aigu.
Avec les objets lastiques, susceptibles de se courber sous la

pression du rasoir, celui-ci doit agir obliquement, de manire


pntrer dans l'objet plus facilement et sans le courber. Au contraire,

avec les objets durs, on

une de

})eut

attaquer

le

bloc normalement

ses faces.

I.

COUPES

MAIN LEVE

Cette mthode n'est plus gure employe que pour l'histologie


vgtale, car les tissus animaux sont gnralement trop mous i)our

326

METHODES GENERALES

tre coups

Les inslrumenls ncessaires sont

ainsi.

une

un bon

des baguettes de moelle de


Sureau, pralablement prives de leur cuticule qui renferme des
particules 1res dures.
rasoir, possdant

l'ace

})]ane,

et

Suivant sa consistance, Tobjet est coup tel quel, Ftat frais,


ou seulement aprs fixation (alcool pour les tissus vgtaux). On
en prlve une trancbe d'paisseur convenable. On coupe un

fragment de baguette de moelle de Sureau


entre les
la

et

on

le divise longitu-

compltement, soit simplement par une feule,


deux lvres de laquelle on insinue Tobjet. Pour couper

dinalement,

soit

moelle de Sureau, on prend un scalpel lame trs large et bien


ou mieux un vieux rasoir, ou encore une petite scie

affile,

Fig. 160.

Tenue du

rasoir et de l'objet pour les coupes

main leve.

dcouper 1res fine. Si l'objet est cubique ou cylindrique, on creuse


une petite cavit dans les deux moitis du fragment de moelle de
Sureau, ou bien on dprime simplement la moelle avec le manche
d'une aiguille.

On

peut couper en comprimant le tout entre les doigls, mais il


encore plus commode d'assurer cette compression, soit par
quelques tours de fil, soil avec une pince linge en bois, une

est

pince de Bunsen pour tuyaux de caoutchouc, etc.


Une fois la pice incluse dans la moelle de Sureau, on saisit
tout entre le pouce et l'index de la main gauche et on prend

le

le

l'indique la figure 160. Ou peut


couper d'avant en arrire (tranchant du rasoir tourn contre soi)
ou d'arrire en avant le premier mouvement parait plus naturel,

rasoir de la

main

comme

droite,

mais

second permet de mieux voir

le

et aussi

couper
Quoi qu'il en
l'objet el

il

d'appuyer
soil,

le

faut utiliser

la

le

tranchant

el

l'objet

lame du rasoir sur l'ongle du pouce.

rasoir doit
la

toujours attaquer obliquement


plus grande longueur possible du tran-

chant pour chaque coupe. Le rasoir doit donc avancer

chaque

MTHODES POUR EXECUTER LES COUPES


fois

de gauche droite, de

secousses et

la

d\m mouvement

base l'extrmit de

uniforme.

On

la

peut
si

de

l'objet.

le tailler

Pour

faciliter l'attaque

lame, sans

s'efforce d'obtenir les

tranches les plus minces possibles, tout en intressant


totale

327

la

surface

du cylindre de moelle, on

pralablement en biseau.

Si l'objet est de bonne consistance, on peut couper sec; mais


ce sont des tissus dlicats, ou si l'objet menace de se desscher

rapidement, on doit tremper frquemment le bloc de moelle de


Sureau dans de l'alcool 70 et mouiller chaque coupe la lame
du rasoir, avec ce liquide qu'on tient s porte dans une soucoupe.
cas, les coupes doivent tre recueillies dans un
rempli d'alcool. On s'aide d'une aiguille ou d'une
pince pour les dtacber du rasoir sous le liquide, de manire ne
pas les dchirer. En posant le cristallisoir sur un carton ou une

Dans

les

deux

petit cristallisoir

fond mi-partie noir et blanc (fig. 228), il


sera facile d'liminer les fragments de moelle de Sureau et de
choisir les coupes les moins paisses pour les colorer et les

plaque de verre

monter.

La moelle de Sureau ne convient pas toujours pour l'enrobage on


peut employer aussi du foie pralablement durci ou du lige. Le foie
employer sera du foie amylode ou simplement du foie de Buf ou de
Veau durci dansTalcool; on en dcoupe des lames plus ou moins
paisses, entre lesquelles on enrobe l'objet, aprs creusement d'une
cavit si c'est ncessaire. Le lige convient pour les objets trs durs,
on choisit un bouchon de lige trs fln, on le divise
qu'on coupe sec
en deux avec un vieux rasoir ou une petite scie dcouper et on enrobe
comme avec la moelle de Sureau.
:

La mthode des coupes

main leve donne d'excellents

rsultats

entre des mains exerces, mais elle ncessite beaucoup d'habilet


et de sret. Son principal avantage est sa grande simplicit. Elle
tait

trs

employe autrefois

certains botanistes clbres pou-

vaient dbiter ainsi un sac embryonnaire en tranches presque aussi


belles

que

celles

11.

que donnent

les

microtomes automatiques.

COUPES AU MICROTOME

MAIN

Les microtomes main donnent les mmes rsultats que la


mthode des coupes mainleve, mais ils permettent de faire trs

METHODES GENERALES

328

facilement des coupes rgulires. Le type de ces appareils est le


microtome de Rauvier. Cet instrument com])rend essentiellement

un cylindre surmont d'une


dans

le

cylindre, aprs l'avoir

large plate-forme; on place l'objet

enrob dans

la

vis micromtrique,
piston, actionn par une

petites quantits.

Le

rasoir

la

que

finesse

fait

Un

monter robjet de

coupe tout ce qui dpasse

forme. Avec ces instruments,


limites

moelle de Sureau.

la

la platefinesse des coupes n'a pas d'autres

du tranchant

cl

la

perfection

de

la

vis

micromtrique. Le modle primitif de Ranvier, dans lequel


fallait caler l'objet avec de la moelle de Sureau et faire gontler

il

le

tout dans l'alcool faible, ou encore

pratiquer un enrobage

la

paraf-

heureusement modifi.
microlome main de Leitz,

fine,

a t

Dans

le

par exemple (lig. 161), le cylindre


de moelle de Sureau est maintenu
par une |)ince intrieure;

Ficr.

161.

!\Iicrotome

main

de Leitz.

la tte

de

la

vis

et

porte 50 divisions, dont chacune

micromtrique

est trs large

correspond un centime de millimlre. On peut donc, avec un bon


rasoir, faire des coupes de 10 a et

mme

de 5 a, car

les divisions sont

assez larges pour qu'on puisse en apprcier la moiti avec prcision. Comme les coupes sont trs rgulires, on peut trs bien
leur donner jusqu' 15 mm. de diamtre ^

Pour

se servir de cet instrument,

rasoir plan sur u;i

gauche,
tenu de
le

tire

la

la

ct.

il

un
main

faut absolument avoir

Le microtome

est saisi pleine

plate-forme reposant sur le pouce et l'index; le rasoir,


droite, est pos bien plat sur la plate-forme. On

main

trs

obliquement en appuyant lgrement avec

le

pouce

Pour obtenir un mouvement bien rgulier, sans saccades, l'avant-bras et la main doivent
former un ensemble rigide et le dplacement du rasoir doit tre
produit uniquement par des mouvements du bras.

droit pos sur la face suprieure de la lame.

On coupe

sec

ou en mouillant

le rasoir et

l'objet,

suivant la

nature du tissu. Dans les deux cas, on recueille les coupes dans un
cristallisoir plein d'eau ou d'alcool. On peut, auparavant, li1. Le microtoinc main de Peltrisot, serrage central,
bonne modification du microtome Ranvier.

est aussi

une

trs

329

MTHODES POUR EXCUTER LES COUPES


miner sur

rasoir les

le

dbris de moelle de

Sureau avec une

aiguille.

Aux microlomes

main

se rallache

un excellent inslrnment qui

microtome du type Lelong (iig. 162). Cet appareil, trs


d'un louid bloc rectangulaire
simple et trs solide, se compose
un
plan inclin, sur lequel glisse le chariot
mtallique renfermant
Ce
chariot, qui pouse exactement la forme du plan
porte-objet.
on disest
inclin,
pourvu d'une pince, entre les mors de laquelle
est

le

pose l'objet dans

la

moelle de Sureau. Le tout est dplac, sur

Fig. 162.

Microtome

le

de Lelong.

plan inclin, par une vis micromtrique dont

la tte

porte un

Le rasoir est guid par deux glissires de verre


tambour
bords du bloc mtallique. On coupe, comme
les
qui garnissent
avec le microtome main, en appuyant lgrement le rasoir sur
les glissires par sa face plane. Grce son poids, ce microtome a
divis.

beaucoup de

pas besoin d'tre tenu.

stabilit et n'a

Il est,

mon

avis, trs suprieur aux microtomes main pour les coupes dans
on peut trs bien couper aussi dans le collola moelle de Sureau
dion. Au besoin, on inonde d"eau ou d'alcool la pice et le rasoir
:

et,

une

fois les

coupes termines, on essuie soigneusement

l'ins-

trument.
III.

COUPES

Je ne mentionnerai que

PAR CONGLATION

pour mmoire ce procd qui donne

d'excellents rsultats, dans des cas i)articuliers, et peut

mme

tre

METHODES GNRALES

330

indispensable pour certaines recherches de microchimie, mais qui,


mon avis, ne saurait constituer une mthode courante de travail.
Ces coupes peuvent tre obtenues avec un microtome quelconque,
pourvu qu'il possde un porte-objet creux spcial. Dans la cavit de cet
instrument, on fait vaporer un li(iuide trs* volatil tel (|ue l'tber, le
clilorure d'tliyle, ou bien encore on fait dtendre un gaz liqufi comme
l'acide carjjonicjue.

On

peut congeler des tissus frais, en collant la pice sur le portemoyen d'un peu d'eai. Ce procd, trs expditif et (jui dispense de toute fixation ou inclusion, est quebiuefois employ dans les
services de chirurgie pour le diagnostic rapide des tumeurs. Naturellement, le rsultat ainsi obtenu ne peut lre que trs mdiocre, car le
froid ne constitue pas une mthode de fixation. La conglation rapide et
bratale des tissus dtermine la formation d'aiguilles de glace et produit
des dchirures cellulaires.
Il est gnralement prfrable de congeler des tissus dj fixs. C'est
sous cette forme que la mthode peut rendre le plus de services. Pourtant,
je crois (ju'il faut la rserver pour des cas trs limits, car l'avantage de
la rapidit et de la simplicit est fcheusement compens par des
altrations invitables et par la difficult de manipulation des coupes.
Celles-ci peuvent tre transportes une une, la spalule, de li(iuide
en liquide, dans des verres de montre, ou mieux encore colles sur
lames. On emploie pour cela le procd d'Anilschkov i. Les coupes,
durcies dans de l'alcool 50% sont tales sur la lame enduite d'albumine de Mayer (p. 345). On appuie avec du buvard, pais on porte dans
objet au

les alcools 95" et 70", puis dans l'eau. Pour colorer les graisses, on
plongera d'abord dans de l'alcool-formol (alcool 50, 50 cm^ et formol
7,5 cm^j, puis dans de l'eau.

Le procd la paraffine donne des coupes bien plus lisibles et,


quand on sait s'arranger, on peut obtenir d'excellentes prparations en
peu d"heures. Pour une pice prleve le matin, on peut donner un diagnostic le soir mme ou, au plus tard, le lendemain matin et aprs un
examen autrement complet que celui que permettent les coupes la
conglation.

IV.

COUPES

LA PARAFFINE

Pour excuter ces coupes, il est indispensable de possder un


microtome automatique. Les microtomes main ne conviennent
ce genre de li:avail, car ils ne fournissent que
pas du tout pour
des coupes fortement enroules, trs difficiles manipuler. Quant
aux instruments bon march, du type microlome d'tudiant, le
mieux

est

de

les

passer sous silence. Pour faire de bonnes coupes

la paraffine et au collodion, il faut un microlome srieux et


bien construit, lien est de cet instrument comme du microscope :
1.

Anitschkov, Ueber die Methoden zur Aufklebung von Gefrierschoitten auf

die Objekttrager. Ztschr.

f.

loiss.

Mikr.,

XXVII,

p. 71, 1910.

METHODES POUR EXECUTER LES COUPES


c'est

une dpense qu'on

fait

une

fois

331

pour toutes, aussi

faut-il

acheter un objet de premire qualit. Pour 200 250 francs, on


peut avoir un excellent microlome genre Minot, avec lequel on
excute du travail parfait.
appris considrer la mthode la paraffine comme
hislologique fondamental, aussi nous tendrons-nous

Nous avons
le

procd

particulirement sur
blocs de pai'affine ^

Rasoirs.

la

manire d'obtenir des coupes avec

Nous avons donn

p.

320,</