Licenciatura en Ciencias Naturales

Biotecnologa
FORMOSA, SEPTIEMBRE DE 2016
Dr. Horacio Gorostegui

Gentica aplicada a la
Biotecnologa
FORMOSA, SEPTIEMBRE DE 2016

Dr. Horacio Gorostegui

LEYES DE MENDEL
Estudi metdicamente la herencia en las plantas de arvejas o
guisantes de jardn (Pisum sativum), cmo se transmiten los caracteres
de padres a hijos.

Las siete
caractersticas
morfolgicas
de los
guisantes

Primera Ley de Mendel: principio de la uniformidad de la

primera generacin filial
Cuando se cruzan dos individuos
de lneas puras, todos los
individuos
de
la
primera
generacin (F1) sern iguales
entre s (o uniformes). A estos
los denomin hbridos, y cuando
en un cruzamiento slo existe
diferencia en un solo carcter, a
ese cruzamiento y a esos
descendientes se los denomina
monohbridos.

Generacin parental y filial 1

para el carcter color de
semilla.

Fenotipos parentales

F1

Semillas lisas x rugosas

Todas lisas

Semillas amarillas x verdes

Todas amarillas

Ptalos prpura x blancos

Todos prpura

4 Vainas infladas x contorneadas Todas infladas

5

Vainas verdes x amarillas

Todas verdes

Flores axiales x terminales

Todas axiales

Tallo largo x corto

Todos largos

Segunda Ley de Mendel: ley de la segregacin de los

caracteres
Los dos alelos de un mismo gen se
segregan al formar las gametas.
Los
caracteres
recesivos
enmascarados en la F1 heterocigota
de un cruzamiento entre dos lneas
puras (homocigotas) reaparecern en
la F2 con una proporcin de 1/4.

Tercera Ley de Mendel: ley de segregacin independiente

de caracteres
Durante la formacin de las
gametas (gametognesis), la
segregacin de los dos
alelos de un gen es
independiente
de
la
segregacin de los alelos de
otro gen.

ADN, Genes y cdigo gentico

El conocimiento del ADN, su estructura y funcin, fue
determinante para el desarrollo de la biotecnologa
moderna.
El ADN, contiene las instrucciones que determinan la
forma y caractersticas de un organismo y sus funciones.
Todas las clulas, procariotas y eucariotas, contienen ADN
en sus clulas.
El cdigo gentico es universal.

Estructura del ADN y Organizacin del

cromosoma

Replicacin del ADN

El ARN y la sntesis de
protenas
Las protenas son necesarias para la estructura de la clula como
componentes importantes de la membrana y el citoplasma.
Las protenas desempean papeles importantes como hormonas y
otras molculas de sealizacin que las clulas utilizan para
comunicarse entre s.
Las protenas receptoras se unen a otras molculas, como hormonas
y protenas de transporte, permitiendo entrar y salir a diversas
molculas de las clulas.
Las protenas en forma de anticuerpos reconocen y destruyen
materiales extraos en el cuerpo.

La transcripcin de diferentes tipos de ARN

Procesamiento del ARNm

El cdigo gentico

Etapas de la traduccin

Niveles de regulacin de la
expresin gnica
Las clulas procariotas y eucariotas pueden regular la
expresin gnica de muy diversos modos. Ten en cuenta que
la regulacin de la expresin gnica puede ocurrir a muchos
niveles diferentes, comenzando por cmo se dobla la
cromatina o por las modificaciones qumicas que controlan la
degradacin o renovacin de una protena una vez que es
sintetizada. La regulacin de la transcripcin es un mecanismo
comn de control utilizado en las clulas tanto procariotas
como eucariotas.

Tipos de mutaciones

Qu es la ingeniera gentica?
La ingeniera gentica: conjunto de metodologas que permite transferir genes de
un organismo a otro y expresarlos en organismos diferentes al de origen.
El ADN que combina fragmentos de organismos diferentes se denomina ADN
recombinante.
Las tcnicas que emplea la ingeniera gentica se denominan tcnicas de ADN
recombinante.

Los organismos que reciben un gen que les aporta una nueva caracterstica se
denominan organismos genticamente modificados (OGM) o transgnicos.

Etapas para la obtencin de un organismo transgnico

Metodologa
1. Identificar un carcter deseable en el
organismo de origen
2.

Encontrar el gen responsable del carcter

deseado (gen de inters), aislarlo y
caracterizarlo.
3. Combinar dicho gen con otros elementos
necesarios (vector) para que ste sea funcional
en el organismo receptor

4. Transferir el gen de inters, previamente

introducido en el vector adecuado, al organismo
receptor.
5.
Crecer y reproducir el organismo
receptor, ahora modificado genticamente.

Caso: obtencin de maz Bt que produce una protena

recombinante que le confiere resistencia a determinados
insectos
Identificar el carcter resistencia a insectos en el
organismo de origen, la bacteria del suelo Bacillus
thuringiensis (Bt)
Encontrar al gen que lleva las instrucciones para esta
caracterstica, aislarlo y caracterizarlo.
Combinar este gen con otros elementos genticos para que
sea funcional en una planta: especialmente una secuencia
promotora (y ligarlo a un vector adecuado para transformar
plantas)
Transferir este gen a clulas de maz (organismo receptor).
Identificar las clulas de maz que recibieron el gen (clulas
transformadas) y regenerar, a partir de estas clulas, una
planta adulta resistente a insectos.

1. Corroborar que existe un gen que codifica para la caracterstica de inters.

Cuando se encuentra una caracterstica en un organismo que resulta interesante para
transferir a otro organismo debe verificarse que es producto de un gen. Se identifica el gen
de inters por medio de cruzamientos a partir de una caracterstica que se expresa, y se
verifican las proporciones mendelianas.
2. Clonar el gen de inters.
Clonar un gen significa tenerlo puro en el tubo de ensayos, o mejor an, dentro de un
vector. La tarea de clonar un gen involucra varias tcnicas: i) Extraccin de ADN; ii)
Bsqueda de un gen entre la mezcla de genes del ADN; iii) Secuenciacin; iv) Construccin
del vector recombinante.
El ADN de inters se inserta en plsmidos-vectores que son molculas de ADN lineales o
circulares en las cuales se puede guardar (clonar) un fragmento de ADN.

Las enzimas de restriccin

La clave de la transgnesis, la obtencin de un OGM, est en extraer genes de inters de un
organismo e introducirlos en otro, de modo de obtener un producto con caractersticas mejoradas.
Las enzimas de restriccin (Endonucleasas)
Cortan ADN, lo hacen en forma especfica. Esto significa que cada enzima reconoce una secuencia
particular de nucletidos. Esa secuencia especfica para cada enzima se denomina sitio de
restriccin.

Acorde a como realizan el corte, las enzimas se pueden clasificar en:

Enzimas que generan extremos romos (parejos)
Enzimas que generan extremos cohesivos (desparejos).
Las enzimas encargadas de unir los extremos de ambas cadenas se denominan ligasas.

Usos de las enzimas de restriccin

1.

Hacer mapa de restriccin de un plsmido o bacterifago.

2.

Fragmentar ADN para separacin por electroforesis.

3.

Generacin de fragmentos para ser clonados en los vectores apropiados, y crear ADN
recombinante.

3. Caracterizar el gen de inters.

A partir de conocer la secuencia del gen se puede, comparar esta secuencia
con las de genes ya conocidos para determinar a qu gen se parece, y se le
asigna una posible funcin. Una vez predicha la funcin del gen clonado, se
debe proceder a confirmar la funcin real in vivo, o sea corroborar que en un
sistema biolgico funciona acorde a lo que se prev.

4. Modificar el gen de inters.

Si as se desea se puede agregar, deletar o mutar secuencias dentro de la
regin codificante, y agregar secuencias (promotor, terminador, intrones) para
que se pueda expresar en el sistema de inters. El promotor es una regin
fundamental del gen ya que determina cundo y dnde se expresar el gen.

5. Transformacin de un organismo con el gen de inters.

Una vez hecha la construccin gentica con el gen y promotor deseado, se elige el mtodo
de transformacin ms indicado para el organismo que se desea hacer transgnico.

6. Caracterizacin del OGM.

Una vez obtenido el OGM, se lo analiza desde el punto de vista molecular y biolgico. Para
el anlisis molecular se debe demostrar, entre otras cosas, si tiene una (o ms) copias del
transgn, y cmo y en qu tejidos se expresa el gen. Para analizar en qu tejido, momento y
cantidad se expresa el gen se analiza la presencia del ARN mensajero y de la protena
recombinante codificados por el transgn.

La ingeniera gentica y los OGM

El denominado proceso recombinante utiliza un tipo de
enzimas especiales, llamadas endonucleasas de restriccin
o simplemente, enzimas de restriccin.
Estas tiene la propiedad de cortar el ADN en sitios
especficos.
Eligiendo la enzima adecuada se corta un trozo de ADN con
el gen de inters.
El gen se introduce en un plsmido, trozo de ADN pequeo
y circular, presente en algunas bacterias (procedimiento in
vitro).
El plsmido con el gen extrao se introduce dentro de una
bacteria.
La bacteria transgnica se reproduce en un medio adecuado
generando muchas copias del plsmido transformado.
El proceso recombinante fue el primero desarrollado por la
ingeniera gentica para producir individuos transgnicos
(OGM)

Qu podemos hacer con ingeniera gentica?

Imagen de la izquierda:
produccin tradicional de insulina,
a partir de pncreas de cerdos o
vacas.
Imagen de la derecha: produccin
de insulina recombinante.
La insulina recombinante es
idntica a la humana, ya que el gen
introducido en E. Coli es humano.
La insulinas animales son activas
en el hombre, pero no son
idnticas a la insulina humana y
pueden generar rechazo en
algunos pacientes.

Biotecnologa moderna en animales: los animales

transgnicos
qu es un animal transgnico? Es un animal genticamente modificado al que le transfieren un gen o
grupo de genes con el fin de obtener un producto de inters.

El primer ratn transgnico, en 1982, produca la

hormona de crecimiento de rata.

Tcnica de la microinyeccin
1.

microinyeccin del ADN en el vulo

fecundado: el ADN se introduce por medio de
un capilar, bajo el microscopio, en el ovocito
fecundado.

2.

microinyeccin del ADN en clulas

embrionarias: se utilizarn solo los animales
que tengan el gen en sus gametas y por lo
tanto lo transmitan a su descendencia. Esta
tcnica es ms fcil y eficiente que la anterior a
pesar de que se descarten animales.

La ingeniera gentica permite modificar genticamente

animales, con diferentes aplicaciones:
ayudar a los investigadores a identificar, aislar y caracterizar los genes y as entender
cmo funcionan.
servir como modelos de enfermedades que afectan al hombre y as poder desarrollar
nuevas drogas y nuevas estrategias de tratamiento.

como fuente de tejidos y rganos para transplantes en humanos.

para mejoramiento del ganado y otros animales de importancia econmica.
para producir leche con mayor valor nutricional o que contenga protenas de importancia
farmacutica (que se purifican de la leche en grandes cantidades).

Animales transgnicos

Mansa: ternera clonada y

transgnica. (2002)

Clonacin de animales

Dolly fue la primera oveja obtenida por

clonacin a partir de clulas somticas.
Fue una revolucin porque se consegua
hacer por primera vez lo que se puede
hacer con una planta, es decir regenerar
todo el organismo a partir de una clula
somtica adulta.

Cmo infecta un virus?

Esta microfotografa nos muestra una bacteria que ha sido
invadida por bacterifagos, un tipo de virus que parasita
procariotas. Obsrvese su forma hexagonal.
Los virus no pueden reproducirse por s mismos, necesitan de
la maquinaria gentica de una clula: son parsitos obligados.
Para ingresar, deben ser reconocidos por ciertas molculas que
estn en la membrana celular y que les permiten el ingreso a la
clula.
Una vez dentro, utilizan la maquinaria celular para reproducirse
Algunos virus insertan su ADN en el ADN celular, donde quedan
residiendo hasta que una seal qumica o fsica los despierte.
Esta capacidad de algunos virus de insertarse en el ADN del
hospedador, es aprovechada para utilizarlos como vectores.
Sin embargo, deben cubrir ciertos requisitos, como mantener la
capacidad de introducirse en el ADN celular, sin reproducirse,
es decir, debe perder su virulencia (capacidad de enfermar).
Estas dos condiciones no son fciles de conseguir.

El virus del HIV

Cmo infecta el virus del VIH

porqu an no existe una vacuna contra el VIH?

Mejoramiento tradicional y la biotecnologa moderna

El mejoramiento vegetal
Las plantas que hoy se cultivan son distintas de sus antepasados silvestres, ya que el hombre
ha modificado y seleccionado sus propiedades a lo largo de ms de diez mil aos en funcin
de sus necesidades. La civilizacin moderna basa su agricultura en agroecosistemas,

Veamos qu pudo pasar con el arroz rojo

En algn
momento una
planta pudo
sufrir una
mutacin en uno
de los genes

En todos estos casos la semilla sigue siendo roja

polen

vulos

La planta
original con
sus alelos
dominantes
(homocigoto)

Al menos algunas
de sus semillas
heredan esa
mutacin y
producen plantas
heterocigotas.
En sus gametas
estos genes
segregan
(polen y vulos)

Esos primeros arroces heterocigotas posen el gen recesivo

(blanco) en el 50% de sus vulos. Lo mismo podemos decir
del polen. El cuadro de arriba reproduce el resultado de la
cruza al azar de esas primeras plantas heterocigotas, como
seguramente debi suceder entonces. As, slo un 25%
de los huevos formados tendrn ambos alelos recesivos y
darn como resultado una semilla blanca.

Tcnicas tradicionales de mejoramiento vegetal

Seleccin artificial y cruzamientos selectivos.
Hibridacin (intervarietal, interespecfica, intergenrica).
Mutagnesis inducida (agentes mutagnicos).

Polinizacin y Fertilizacin in vitro.

Cultivo in vitro de clulas, tejidos y rganos vegetales.
Obtencin de haploides.
Variacin somaclonal (cultivo in vitro o a campo).

Seleccin y cruzamiento tradicional

Las diferentes variedades de maz (Dent,
Sweet, Popcorn, Flint, Pod, etc.) son producto
de procesos de seleccin artificial, sumado a
procesos de seleccin natural y mutaciones
que el hombre fue aprovechando y
seleccionando hasta llegar a domesticarlo. Este
proceso de generacin de nuevas variedades
ha sido muy til en la agricultura y ha
originado a las variedades que se cultivan hoy
en da.

 La mutagnesis
A fines de la dcada de 1920, los investigadores descubrieron que se pueden obtener
mutaciones (cambios en el ADN) exponiendo a las plantas a agentes mutgenos fsicos (rayos
X y gamma, neutrones, protones, etc.) o qumicos (etilmetanosulfonato, azida sdica, etc). Estas
mutaciones ocurren al azar en el genoma y generan una enorme variabilidad que puede dar
lugar a la aparicin de caractersticas interesantes, las que son seleccionadas por el agricultor.

La biotecnologa moderna en el mejoramiento vegetal

Las tcnicas tradicionales de hibridacin mezclaron genes durante muchas generaciones de plantas
con el fin de obtener una caracterstica deseada.

La biotecnologa acelera este proceso permitiendo a los cientficos tomar solamente los genes
deseados de una planta, logrando de ese modo los resultados buscados en tan slo una generacin.

Esta metodologa ofrece tres ventajas fundamentales:

Los genes que se van a incorporar pueden provenir de cualquier especie, emparentada o no .
En la planta mejorada genticamente se puede introducir un nico gen nuevo
Este proceso de modificacin demora mucho menos tiempo.

Perspectivas de la biotecnologa agrcola

Aumento de la productividad y calidad de los cultivos.

Resistencia a enfermedades y plagas.
Tolerancia a herbicidas, sequas, salinidad y temperaturas
extremas.

Alimentos ms nutritivos, como frutas y cereales con mayor

contenido de vitaminas.
Vacunas comestibles, como bananas que contengan la vacuna
contra la hepatitis B.
Alimentos ms saludables, como aceites con menor contenido de
cidos grasos indeseables, papas que absorban menos aceite,
frutas con ms antioxidantes y man libre de alrgenos.

Planta transgnica: tcnica de Agrobacterium tumefaciens.

Cmo se modifica una planta por

ingeniera gentica?
involucra el cultivo de clulas o tejidos in
vitro, dado que la transferencia de genes se
realiza a algunas clulas del organismo que
se quiere transformar. A partir de estas
clulas se regeneran plantas completas, que
llevan los genes transferidos, los expresan y
los transmiten a la descendencia.

Construccin de un vector

En las tcnicas de transformacin es necesario

disponer del gen de inters dentro de un vector
(vehculo) apropiado para ser transferido al tejido
que se quiere transformar. Este vector es
generalmente un plsmido al que se le inserta el
gen de inters
(porcin de ADN circular
relativamente pequeo que puede mantenerse en
el citoplasma de una bacteria u otro tipo celular).

Agrobacterium tumefaciens: un ingeniero gentico por naturaleza

Transformacin vegetal mediada por

Agrobacterium tumefaciens

Planta transgnica: tcnica de biobalstica

Este mtodo permite introducir ADN a
cualquier tipo de clula. En este procedimiento
el ADN es introducido en las clulas por medio
de partculas microscpicas (micropartculas)
aceleradas a velocidades supersnicas, que
atraviesan la pared y la membrana celular.

RESUMIENDO

ALGUNOS EJEMPLOS:
Flores con
ms
ptalos

O con colores
novedosos.

Retardo de la
senescencia
(marchitado) de las
flores
(los dos claveles de la derecha
tiene 8 das de cortados)

Soja resistente a
glifosato:
El herbicida no afecta a la
planta transgnica. Permite
combatir malezas mezcladas
con la planta adulta.

Maz resistente al
glifosato.
maz y algodn
resistentes a
insectos
Tienen incorporado un gen de
una bacteria, Bacillus
thuringiensis, que codifica una
toxina que mata a los insectos
que destruyen a esos cultivos.
De esta manera la planta
elabora su propia defensa.

Cultivo in vitro de plantas y su relacin con la

biotecnologa
El cultivo in vitro, constituye un paso
fundamental en la obtencin y regeneracin
de plantas genticamente modificadas, o
transgnicas, mediante tcnicas de ingeniera
gentica.
Involucra diferentes tcnicas de cultivo de
material vegetal diverso, incluyendo las de
protoplastos (clulas desprovistas de su pared
celular), clulas, tejidos, rganos y plantas
completas.

Las bases biolgicas del cultivo de tejidos: la

totipotencialidad celular
Pasos para generar plantas.
1) Eleccin de la planta y/o tejido donante de explantos.
2) Establecimiento: desinfeccin de los explantos y su posterior adaptacin al medio artificial.
3) Multiplicacin: generar una masa vegetal suficiente.
4) Enraizamiento: formacin de races (plntulas completas).
5) Rusticacin: aclimatacin de las plntulas obtenidas in vitro a las condiciones medioambientales ex
vitro.

Relacin del cultivo in vitro con la biotecnologa:

la micropropagacin
Micropropagacin Vegetal

Cultivo de Meristemas

Cultivo de clulas y rganos vegetales en biorreactores

ES TODO COLOR DE ROSA?

Sin dudas que no.

Ya mencionamos los reparos desde el punto de vista moral y
religioso, para ciertas prcticas de la ingeniera gentica.
En particular, los OGM han sido ampliamente aceptados en la
agricultura aunque los riesgos existen. A continuacin, algunas
cuestiones a tener en cuenta:
Riesgos de Impacto Directo: por las caractersticas propias del
OGM.

Efectos sobre la salud humana

Transferencia de genes entre especies
Efectos no intencionales sobre especies no-blanco
Impactos en el suelo, etc.

Riesgos Impacto Indirecto: Por efectos del manejo agrcola del

OGM en el agroecosistema.
Efectos por cambios en el uso de agroqumicos
Por prcticas de manejo del suelo,
Riesgo para la salud por la aplicacin de agroqumicos, etc.

Quines y cmo autorizan organismos

transgnicos en Argentina?
SENASA:

(Servicio
Nacional de Sanidad Agroalimentaria)
debe determinar la inocuidad y
aptitud nutricional del cultivo
genticamente mejorado.

CONABIA:
OBTENTORES: empresas u
organizaciones que desarrollaron el
evento y solicitan autorizacin para su
difusin y empleo.

APROBACIN
O RECHAZO

(Comisin Nacional
Asesora en Biotecnologa
Agropecuaria) evala la bioseguridad
ambiental de los OGM
en ensayos a campo y establece cmo
se realizarn los controles en dichos
campos. CONABIA es una comisin
multidisciplinaria y multisectorial,
formada por cientficos y tcnicos.

DIRECCIN DE MERCADOS
AGROALIMENTARIOS: evala el
posible impacto que la comercializacin
de ese cultivo podra tener en los mercados
de la Argentina en el mundo.

SECRETARIO DE
AGRICULTURA:
decide otorgar o
rechazar la aprobacin
comercial solicitada

Muchas gracias por su atencin