PRACTICA No.

8
CINETICA ENZIMATICA
Dayra Ericastilla (201013733), Ana Rodas (201013534), Mara Buenaf
(201021321), Valerie Garca (200817018).
Departamento de bioqumica, Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia,
Universidad de San Carlos de Guatemala, Carrera Qumica Farmacutica
INTRODUCCIN:
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones bioqumicas. Este
estudio se basa en la velocidad de cambio que tiene lugar en la concentracin
de reactivos o bien en la concentracin de productos por unidad de tiempo,
midiendo por tanto la concentracin de desaparicin o aparicin de reactivos y
productos, respectivamente en un tiempo determinado. (Tejion, J; p.206)
Conocer la cintica de las enzimas es de gran importancia, ya que
prcticamente todas las funciones de la clula requieren la presencia de
enzimas para que ocurran a una velocidad adecuada. El objetivo principal de la
prctica es determinar los datos cinticos de la fosfatasa alcalina del suero
humano, a partir de los valores obtenidos experimentalmente. Se pretende
que el estudiante obtenga la habilidad de calcular cualquier concentracin de
producto liberado por la enzima.
METODOLOGA
La cintica enzimtica est
determinada
por
dos
parmetros
cinticos
caractersticos de cada enzima
la Vmax y la constante de
Michael,
las
cuales
fueron
determinadas en la prctica
para la fosfatasa alcalina. La
importancia de la Km radica en
que
es
un
ndice
muy
aproximado de la afinidad de la
enzima respecto a su sustrato.

DISCUSIN DE RESULTADOS
Las propiedades qumicas de las
protenas vienen dadas mediante
reacciones especficas para la
deteccin e identificacin de las

(Pena, A; p. 198). Otro mtodo

utilizado para evaluar Km y
Vmax es el de Lineweaver-Burk.
Para fines prcticos la ecuacin
de Mihcaelis- Menten presenta
complejidad, por lo que se han
desarrollado otras ecuaciones
que
convierten
esta
curva
exponencial en una lnea recta,
como la grafica linewevaerBurk. (Gomez, G; p. 69).

mismas. Estas propiedades se

determinaron mediante diversas
reacciones.
La prueba de Biuret es utilizada
para la determinacin de uniones

peptdicas por medio de la reaccin

del sulfato de cobre con compuestos
que tengan dos o ms enlaces
peptdicos la cual se evidencia por
medio de la formacin de un
complejo
de
color
violeta
(Bioqumica,
pp.31),
los
resultados obtenidos indicaron que
las muestras analizadas dieron un
resultado positivo confirmando as
la presencia de enlaces peptdicos,
a excepcin de la glicina debido a
que esta no presenta enlaces
peptdicos por ser nicamente un
aminocido libre.
La prueba xantoproteica tiene lugar
por medio de la nitracin del anillo
bencnico,
este
evidencia
un
cambio de color de amarillo a
naranja,
al observar la tabla
nmero uno se evidencia un
resultado negativo para glicina y
peptona, indicando la ausencia de
tirosina o triptfano en la estructura
de las muestras. (Prcticas de
bioqumica descriptiva pp.168).
Las pruebas para la identificacin de
carbohidratos vienen dada por la
reaccin
de
Molisch,
por
consiguiente
reacciona
con
glicoprotenas, estas experimentan
reacciones
de
deshidratacin
sucesivas catalizadas por cido
sulfrico concentrado produciendo
furfural, hidrolizando as a los
monosacridos
correspondientes
dando positiva esta prueba para
casena,
gelatina
y
albmina
mientras que la glicina y peptona no
pudo ser hidrolizada ms all por la
ausencia
de
carbohidratos.
(Qumica de alimentos pp.10).
tambin se hizo la prueba con

reactivos alcaloidales, que son

ciertos cidos como el pcrico, el
fofotungstico,
el
tannico,
el
metafosforico,
etc.,
donde
se
observa
un
precipitado
al
combinarse el radical acido del
reactivo con la forma cationica de la
protena que predomina en el lado
acido de su punto isoelctrico. Se
forma entonces un precipitado que
podramos llamar, por ejemplo:
tannato de protena, fofotungstato
de protena, tricloroacetato de
protena.
(Prcticas
de
bioqumica descriptiva pp.180).
En la tabla 1 se observa que la
casena y la albumina dieron
positivo a la prueba, dando como
resultado un precipitado, estas dos
protenas son globulares, las cuales
son solubles en agua pero en medio
acido o lcali la solubilidad decrece.
Por ltimo se realizo la prueba con
cidos
minerales
fuertes,
que
desnaturalizan ciertas protenas y
causan que se vuelvan insolubles en
soluciones acuosas. En la tabla se
puede
observar
que
solo
la
albumina dio positiva a la prueba,
en donde se pudo observar un
precipitado, dicho precipitado se
debe a que la albumina es una
protena globular y al aadirle acido
fuerte las cadenas de la protena se
desenrollan, sin romper los enlaces
que unen una cadena con otra.
La razn por las cuales las protenas
precipitan es que la protena es una
molcula cargada tanto positiva
como negativamente. Las protenas
pueden
presentar
tres
interacciones:
protena-protena,
protena-agua,
protena-iones

pequeos. Si la interaccin protenaprotena es grande y la interaccin

protena-agua
es
pequea,
la
protena tendera a ser insoluble, si
la situacin es la contraria, entonces
las protenas tienden a ser solubles.
En el punto isoelctrico de la
protena, la carga neta es cero,
favoreciendo
entonces
la
precipitacin, por ser ese el punto
de menor solubilidad en el agua.
Prcticas
de
bioqumica
descriptiva pp.180).
Se observa que en las pruebas
antes descritas, estas se reportan
con un comportamiento esperado
por lo cual puede inferirse que
dichas
pruebas son
de
vital
importancia para la identificacin de
diversas propiedades qumicas de
las protenas.

3. La precipitacin de algunas
protenas
se
debe
a
diferentes factores como el
tipo de protena, el tipo de
interaccin de la protena con
el solvente y el punto
isoelctrico.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

CONCLUSIONES
1. Se establece una relacin
existente
entre
los
aminocidos que constituyen
la
protena
y
sus
caractersticas
qumicas
debido a que dependiendo de
los
aminocidos
constituyentes as cambiaran
las propiedades qumicas de
las mismas.
2. En base a las reacciones
llevadas a cabo se establece
una clasificacin de protenas
dependiendo sus
enlaces
peptdicos,
si
poseen
carbohidratos,
grupos
aromticos, o bien si se
desean
desnaturalizar o
precipitar.

Bray,
D.
et.al.
(2006).Introduccin
a
la
Biologa
Celular.
Mxico:
Medica Panamericana. P.120124
Cozzone, A. (2002). Protenas:
Propiedades
Qumicas
Fundamentales. Washington,
DC: Enciclopedia de la Vida
de la Ciencia. Pp. 34 46).
Lehninger,
A.
(2009).
Principios
de
Bioqumica.
Espaa: Ediciones Omega.
p.78.
Quesada, S. (2007). Manual
de
experimentos
de
Laboratorio para Bioqumica.
San Jos, Costa Rica: EUNEO.
Pp. 30, 90.
Vjar, I. (2005). Prcticas de
bioqumica
descriptiva.
Sonora, Mxico: UniSon. p.
168 y 180.
Herrera, C. et.al. (2003).
Qumica de alimentos manual
de laboratorio. universidad de
Costa Rica pp. 10.