INTRODUCTION

Modulasi respon imun untuk meringankan penyakit telah menarik selama

bertahun-tahun berdasarkan terkait prinsip dan konsep 'Rasayana' (Patwardhan
et al., 1990). Rasayana, terdaftar sebagai kelas dalam teks-teks tradisional India
literatur kedokteran, terdiri dari sejumlah tanaman terkenal untuk meningkatkan
kesehatan fisik dan mental, meningkatkan mekanisme pertahanan tubuh dan
meningkatkan umur panjang. Selain itu, sejumlah obat tanaman sebagai
Rasayanas telah diklaim memiliki aktivitas imunomodulator. Beberapa Obat
rasayana sebagai agen imunomodulator seperti sebagai Withania somnifera,
bratawali, Asparagus racemosus dan Mangifera indica (Dahanukar dan Thatte,
1997; Dhuley, 1997; Davis dan Kuttan, 2000; Makare et al., 2001) baik dikenal
untuk keperluan tradisional. Selanjutnya, tanaman obat yang digunakan untuk
immunomodulation

bisa

memberikan

alternatif

potensi

untuk

kemoterapi

konvensional untuk berbagai penyakit, terutama ketika mekanisme pertahanan

host harus diaktifkan di bawah kondisi gangguan respon imun. Penggunaan
produk tanaman dalam sistem obat-obatan tradisional sebagai imunomodulator
memang

dapat memodulasi sistem kekebalan tubuh,

misalnya berbagai

tanaman derivatif seperti polisakarida, lektin, peptida, flavonoid dan

tanin telah dilaporkan memodulasi sistem kekebalan tubuh dalam
berbagai in vivo model (Shivaprasad et al., 2006). Dalam sistem tradisional
terdapat sejumlah obat herbal dan formulasi yang tersedia untuk menahan stres
dan ketegangan hidup tanpa mengubah fungsi fisiologis tubuh (Nirmala dkk.,
1999). Trikatu umum digunakan pada persiapan herbal di Pengobatan Ayurveda.
Trikatu ini terdiri dari tiga simplisia kering yaitu buah lada hitam (Piper nigrum
Linn.), cabe yang dikeringkan (Piper longum Linn.) dan rimpang jahe kering
(Zingiber officinalis Rosc) dalam rasio (1: 1: 1; w:w). Trikatu adalah Bahasa
Sansekerta yang berarti "tiga acrids". Ini merupakan sebuah unsur penting dari
berbagai formulasi dan resep obat Ayurvedic, digunakan untuk berbagai
penyakit. (Dash dan Junius, 1987, Johri dan Zutshi, 1992,). Trikatu memiliki
peningkatan dari tingkat darah dari obat-obatan seperti vasicine, sparteine,
fenitoin, propanolol, teofilin, sulfadiazin dan tetrasiklin ketika diberikan bersama
trikatu atau piperine (Bano et al., 1987). Trikatu dianggap sebagai rasayana
penting dalam kedokteran ayurveda. Obat dari kelompok rasayana diyakini
meningkatkan kesehatan, kekebalan, dan umur panjang. Menurut Ayurveda,

mereka memperkuat semua jaringan tubuh, mencegah penuaan, meningkatkan

kecerdasan, dan mencegah penyakit.
Pertimbangan Penelitian:
Dalam

literatur,

ditemukan

beberapa

sumber

tentang

sifat

imunomodulator trikatu maupun ramuan konstituennya. Namun, terdapat

sumber lain yang menyatakan bahwa campuran 3 bahan herbal ini digunakan
untuk skrining farmakologi sebagai imunomodulator. Karena ada efek sinergis
atau potensial untuk terapi ketika bahan herbal alam yang sama dicampur.
Dalam kesempatan ini, hal itu dianggap layak untuk mengevaluasi aktivitas
imunomodulator trikatu dan korelasinya dengan uji aktivitas antioksidan. Studi
yang penting seperti itulah yang mendukung hal yang berkaitan dengan trikatu
di teks kuno Ayurweda.
Bahan dan Metode:
Hewan: penggunaan hewan sebagai uji coba telah disetujui oleh Bansal College
of Pharmacy, Bhopal, MP, India ( Reg No 1252 / ac / 10 / CPCSEA ) dan berada
sesuai dengan Standar Internasional tentang perawatan dan penggunaan hewan
percobaan. Enam - delapan minggu dalam kondisi sehat, dalam hal ini
merupakan lama perkembangbiakkan kedua jenis kelamin tikus albino swiss,
berat 25 2g digunakan untuk penelitian ini. Mereka dipelihara di bawah kondisi
lingkungan standar dan diberi makan dengan standar diet pelet yang disediakan
oleh kaum Hindustan di India, dan diberikan air semaunya.
Bahan Tanaman dan Obat
Herbal dari trikatu (Piper nigrum, Piper longum dan Zingiber officinale)
dikumpulkan dari pasar lokal sagar, dikeringkan di tempat teduh, bubuk kasar
dan semua tiga bubuk obat tersebut dicampur dengan perbandingan 1:1:1 b/b
untuk persiapan megaHerb. MegaHerb dikenai ekstraksi soxhlet berturut-turut,
dengan menggunakan nonpolar untuk pelarut polar (Pet.ether, Benzena,
Kloroform, Etil asetat, etanol 70% dan air). Semua enam ekstrak dipekatkan
dengan cara penyulingan pelarut dan udara kering. Semua enam ekstrak
tersebut dicampur dan dibuat megaEkstrak (megaExt). megaExt menjadi
sasaran analisis kualitatif fitokimia untuk adanya berbagai kandungan seperti

Alkaloid, Karbohidrat, Glikosida, Terpanoid, Protein, dan asam amino, fenolik dan
Tanin, Flavonoid, Minyak dan Lemak, Saponin.
Solusi uji megaExt dibuat dengan melarutkan dalam akasia dengan air
suling untuk pemberian secara oral pada hewan. Siklofosfamid dalam dosis 25
mg/kg p.o digunakan sebagai acuan dalam kegiatan standar imunomodulator
(Shukla et al., 2009) untuk perbandingan dalam penelitian ini.
Keracunan akut
Trikatu megaExt disaring untuk uji keracunan akut melalui mulut menurut
OECD pedoman N0 423. Oleh karena itu 1/5 dan 1/10 memotong untuk trikatu
megaExt 100 dan 200 mg/kg berat bdan secara oral, dipilih untuk penelitian
invivo.
Eksperimental / metode
Uji karbon clearance (Cheng et al, 2005.): Hewan dibagi dalam empat
kelompok masing-masing enam tikus. Kelompok I hewan menjabat sebagai
kontrol (garam 10ml / kg b.w.p.o), kelompok II hewan diobati dengan
siklofosfamid (25 mg / kg b.w.p.o), kelompok III hewan diperlakukan dengan zat
uji (100 mg / kg b.w.p.o) dan kelompok IV hewan diperlakukan dengan zat uji
(200mg / kg b.w.p.o). Semua hewan diperlakukan seperti di atas dari hari 0
sampai hari 7. Pada hari ke-7 hewan perlakuan seluruh kelompok mendapat
suntikan intravena (0.3ml / 30 gm b.w.) dari dispersi tinta India (per hangatan
pada suhu 370C). Sampel darah dikumpulkan dari perdarahan orbital retro
dengan menggunakan kaca kapiler di selang waktu 2 menit dan 10 menit setelah
injeksi dispersi tinta. Sampel darah ditambahkan ke 4ml 0,1% larutan natrium
karbonat untuk melisiskan eritrosit. Absorbansi sampel ini diukur pada 675 nm
menggunakan spektrofotometer. Setelah 10 menit dari koleksi darah hewan.
Rata-rata indeks fagositosis dihitung dari masing-masing kelompok hewan.
Delayed Type Hypersenstivity
Pada hari ke 7, ketebalan alas/bantalan kaki belakang sebelah kanan
dapat diukur menggunakan vernier caliper. Hewan kemudian diinjeksi dengan
0.5x109

SRBCs pada bantalan kaki kanan. Ketebalan bantalan kaki diukur

kembali setelah 24 jam setelah penyuntikan. Perbedaan ketebalan bantalan kaki

antara sebelum dilakukan injeksi dan sesudah dilakukan injeksi diukur dalam

millimeter dan digunakan sebagai data pengukuran (DTH), nilai rata-rata

diperoleh dari grup yang diberi perlakuan dan dibandingkan dengan grup yang
dikontrol. Trikatu megaExt mengelola data secara oral sejak hari ke 0 hingga
perlakuan hari ke 7. Data yang diperoleh digunakan pada analisis statistic.
Analisis statistik:
Semua nilai dinyatakan dalam rata-rata SD dan data dianalisis secara
satu arah ANOVA menggunakan Graphpad INSTAT. Analisis post-hock (data
pengembalian yang diperoleh) dikeluarkan oleh Dunnets multiple comparison
tests yang selanjutnya digunakan untuk memperkirakan perbedaan yang
signifikan antara masing-masing kelompok
HASIL & PEMBAHASAN
Analisis fitokimia kualitatif
bahwa

trikatu

mengandung

Trikatu megaExt
Alkaloid,

mengungkapkan

Karbohidrat,

Glikosida,

Terpanoids, Protein dan Asam amino, Fenolik dan Tanin, Flavanoids,

Minyak dan Lemak, Saponin.
Uji Bersihan karbon
Pada aktivitas fagositosis dalam uji bersihan karbon, Trikatu megaExt
memperlakukan semua kelompok, menunjukkan indeks fagositosis yang cukup
tinggi. Indeks fagositik Dosis I dan Dosis II meningkat signifikan (p <0,001) bila
dibandingkan dengan kelompok kontrol.
Uji Hipersensitivitas Tipe Lambat (Tipe 4)
Pengaruh Trikatu megaExt pada sel dimediasi respon imun oleh DTH yang
diinduksi penyusup edema menunjukkan peningkatan DTH di semua kelompok
perlakuan bila dibandingkan dengan kelompok kontrol.
Pembahasan
Imunodulasi adalah sebuah prosedur yang dapat mengubah sistem imun
suatu organisme dengan mengganggu fungsi dan reaksi kekebalan yang
dihasilkan, ini dinamakan sebagai obat immunostimulatif yang secara utama
mengimplikasikan sistem stimulasi spesifik dan non spesifik, i.e granulosit,

makrofag, komplemen, limfosit T tertentu dan komponen senyawa efektor yang

berbeda.
Hasil dari sebuah imustimulan ampuh Trikatu megaHerb, menstimulasi
mekanisme imun spesifik dan non spesifik. Sel imunitas termediasi (CMI)
melibatkan mekanisme efektor yang terbawa oleh limfosit T dan produknya
(limfokin). DTH memerlukan pengenalan spesifik terhadap pemberian antigen
dengan mengaktivasi limfosit T, yang kemudian berpoliferasi dan melepaskan
sitokin. Yang pada gilirannya dapat meningkatkan permeabilitas pembuluh darah
yang disebabkan oleh vasodilatasi, akumulasi makrofag, dan aktivasi, memicu
peningkaran aktivitas fagositik dan peningkatan konsentrasi ensim-enzim litik
untuk membunuh lebih efektif. Ketika sel TH1 teraktivasi menghadapi antigen
tertentu, viz. SRBCs misalnya. Mereka mensekresi sitokin yang menginduksi
reaksi peradangan lokal yang disebut tipe hipersensitivitas tertunda. DTH dibagi
menjadi 2 fase, fase sensitisasi awal setelah kontak pertama dengan antigen
SRBC. Paparan selanjutnya terhadap antigen SRBCs menginduksi fase efektor
dari respon DTH, dimana sel TH1 mensekresi berbagai variasi sitokin yang
merekrut dan mengaktivasi makrofag dan mediator inflamasi non spesifik
lainnya. Keterlambatan timbulnya respon mencerminkan waktu yang dibutuhkan
oleh sitokin untuk menginduksi makrofag-makrofag yang direkrut dan diaktivasi.
Oleh karena itu, peningkatan reaksi DTH pada tikus dalam merespon antigen sel
T tergantung pada pengungkapan efek stimulasi dari mega ekstrak pada sel T
(Dashputer et al., 2010).
Peran dari fagositosis adalah penghilangan mikroorganisme dan benda
asing, sel-sel yang mati atau rusak. Peningkatan indeks bersihan karbon
mencerminkan peningkatan fungsi fagositosis dari makrofag mononuklear dan
imunitas non spesifik. Trikatu megaHerb meningkatkan fungsi fagositik dengan
menunjukkan laju bersihan karbon oleh sel-sel dari sistem retikulo endothelium.
CONCLUSION
Imunodulasi adalah sebuah prosedur yang dapat mengubah system imun
suatu organisme dengan mengganggu fungsi dan reaksi kekebalan yang
dihasilkan, ini dinamakan sebagai obat immunostimulatif yang secara utama
mengimplikasikan sistem stimulasi spesifik dan non spesifik, i.e granulosit,
makrofag, komplemen, limfosit T tertentu dan komponen senyawa efektor yang
berbeda

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, yaitu dengan uji bersihan

karbon dan uji hipersensitifitas tipe lambat yang telah dicantumkan sebelumnya
di hasil dan pembahasan, dapat disimpulkan bahwa trikatu megaExt memiliki
imunomodulator activity atau aktivitas imunomodulator. Trikatu dapat dikaitkan
dengan adanya senyawa flavonoid, alkaloid, tanin, glikosida saponin dan fenol.
Hal ini sudah diketahu sebelumnya pada senyawa fenolik yang secara alami
memiliki aktivitas imunomodulator .