You are on page 1of 2

Prevalensi dan karakterisasi molekul Listeria spp.

dan Listeria
monocytogenes diisolasi dari ikan, udang, dan dimasak siap-untuk-makan
(RTE) produk akuatik di Iran
Listeria monocytogenes adalah mikroorganisme patogen menular kepada manusia sebagian
besar melalui makanan. patogen ini bertanggung jawab untuk listeriosis manusia, penyakit parah yang
dapat menyebabkan meningitis, ensefalitis, septicemia, atau aborsi, dengan angka kematian yang
cukup besar (. Laksanalamai et al, 2012?.; V azquez-Boland et al, 2001) tingkat. L. monocytogenes
memiliki kapasitas untuk pertumbuhan di berbagai pH nilai-nilai (4.1e9.6), aktivitas air rendah, dan
konsentrasi garam yang tinggi (10%) (Paul et al., 2014). Hal ini juga dapat ditemukan pada dimasak
siap-untuk-makan (RTE) peralatan pengolahan makanan, karena kemampuannya untuk membentuk
biofilm (Ferreira, Almeida, Delgadillo, Saraiva, & Cunha 2015).
Wabah listeriosis telah dikaitkan dengan konsumsi siap-untuk-makan produk makanan
(Nelson et al., 2004). Selama 1998e2008, 24 wabah listeriosis dikonfirmasi dilaporkan di Amerika
Serikat (Cartwright et al., 2013). Jumlah listeriosis kasus di Uni Eropa meningkat 19,1% pada tahun
2009 (n = 1645) dibandingkan tahun 2008, dan tetap hampir pada tingkat yang sama pada tahun 2012
(N ¼ 1642). Akibatnya, di Eropa, listeriosis telah menyebabkan besar kekhawatiran tentang kesehatan
masyarakat karena tingkat kematian yang tinggi (15e30%, dengan sekitar 198 kematian pada tahun
2012 karena dibandingkan dengan 61 kematian karena salmonella), dengan discernable keparahan
klinis di tingkat rawat inap,> 90% (EFSA & ECDC 2014). Oleh karena itu, Kehadiran serotipe
patogen L. monocytogenes adalah salah satu masalah yang paling penting dari industri makanan laut
dan kesehatan masyarakat lembaga.
Listeria serotipe telah dilakukan selama bertahun-tahun dan mempekerjakan ekstensif dalam
penyelidikan epidemiologi. Namun, klasik serotipe dengan metode aglutinasi memiliki beberapa
kelemahan, seperti tingginya biaya antisera dan kehadiran nontypeable isolat. Untuk mengatasi
masalah ini, beberapa molekul teknik telah diusulkan (Chenal-Francisque et al, 2015.; Doumith,
Buchrieser, Glaser, Jacquet, & Martin, 2004; Kerouanton et al., 2010) untuk identifikasi cepat L.
monocytogenes genoserogroups. Pendekatan ini lebih sensitif, spesifik, dan biaya efektif untuk
diskriminasi L. monocytogenes genotipe, dan dapat digunakan sebagai karakterisasi tingkat pertama
L. monocytogenes, terutama dalam penyelidikan epidemiologi dan monitoring keamanan pangan
program.
Banyak penelitian telah melaporkan kejadian L. monocytogenes di buah-buahan dan sayuran
(Hadjilouka, Andritsos, Paramithiotis, Mataragas, & Drosinos 2014; Montero et al., 2015), produk
susu (Dalzini et al, 2015;. Karthikeyan, Gunasekaran, & Rajendhran, 2015; Soni, Singh, Singh, &
Dubey, 2013), daging (Hadjilouka et al., 2014; Kovacevic, Mesak, & Allen, 2012; Montero et al.,
2015), ikan (Chou & Wang, 2006;. Kovacevic et al, 2012;. Wang et al, 2013), produk makanan laut
(Boerlin, Boerlin-Petzold, Panji, Bille, & Jemmi, 1997; Li et al, 2015.; Miya, Takahashi, Ishikawa,
Fujii, & Kimura, 2010; Momtaz & Yadollahi, 2013), dan pengolahan makanan lingkungan (Chen,
Pyla, Kim, Silva, & Jung, 2010;. Li et al, 2015). Namun, terjadinya L. monocytogenes dalam
makanan laut memiliki kurang mendapat perhatian di Iran dan informasi yang sangat terbatas
tersedia pada prevalensi dan kontaminasi tingkat Listeria spp. dan L. monocytogenes.
Dalam penelitian ini, metode molekuler digunakan untuk serogrup L. monocytogenes strain
diisolasi dari ikan yang terkontaminasi secara alami, udang, dan produk air dimasak. Selain itu, PCR
multipleks dipekerjakan untuk mendeteksi gen secara bersamaan virulensi terkait dalam makanan dan
isolat klinis.
2.1. strain bakteri
Strain standar L. monocytogenes PTCC 1163 diperoleh dari Persia Koleksi Budaya Tipe,
Teheran, Iran, dan digunakan dalam PCR tes. strain diaktifkan kembali dari budaya saham gliserol.
Dengan dua transfer berturut-turut, bakteri diinokulasikan ke dalam 15 ml Tryptic Soy Broth (TSB;
Liofilchem, Italia) dan diinkubasi di bawah gemetar (150 rpm) selama 24 jam pada 37? C.
Staphylococcus aureus dan tujuh monocytogenes L. Klinis strain, sebelumnya terisolasi oleh
Lotfollahi et al. (2011), diperoleh dari Mikrobiologi Departemen Iran Universitas Medis Ilmu,
Teheran, Iran.

Setelah 7.3 g SDS. reaksi katalase. 5 menit. ikan kilka (Caspian tyulka. bakteri (500 ml) pellet dan diresuspensi dalam 300 ml buffer lisis (3. nugget ikan.5 ml dingin etanol (96%) dan disimpan di? 20? C selama 24 jam. Konfirmasi dari isolat dilakukan dengan uji laboratorium rutin. Kemudian. DNAwas genom diekstraksi dari bakteri berbudaya melalui dimodifikasi fenol-kloroform protokol ekstraksi. Secara singkat. Konsentrasi DNA ditentukan di 260/280 nm menggunakan spektrofotometer. dan 30 hari inkubasi. dan 0. Hemolisis dari isolat positif diuji pada domba agar darah (uji CAMP). Setelah inkubasi. Pengayaan. pada 7? C). dan aditif.2. Kemudian supernatan yang disuspensi kembali dalam volume yang sama kloroform dan campuran.036 g dasar Tris. Itu tabung diinokulasi diinkubasi pada 37? C selama 24 jam. monocytogenes yang disimpan di? 20? C di TSB þ25% gliserol.0141 g MgCl2 di 30 ml air suling). uji oksidase.6% ekstrak ragi). Isolat L. Semua sampel diinkubasi pada 4? C (pengayaan dingin). untuk mengidentifikasi kehadiran L. n ¼ 5. dan fermentasi gula. 0. 3 M natrium asetat ditambahkan. uji motilitas.4. The DNAwas dimurnikan dilarutkan dalam air suling 50 ml steril. ekstraksi DNA Spesies terisolasi yang diambil dari saham gliserol. n ¼ 5). Italia). Koloni muncul hitam yang dianggap dugaan Listeria spp. The microtubes yang disentrifugasi (1200 rpm. sebuah program sampling adalah dilakukan sebagai bagian dari studi ini di Karaj dan Teheran. pada 7? C) dan supernatan yang benar-benar dihapus. dan 20 permukaan penyeka dari lantai. 2. Selanjutnya. Koloni dari masing-masing strain diinokulasi ke dalam 7 ml tsb. dan penggorengan (Tabel 2) dikumpulkan dan dipindahkan ke laboratorium. tabung dikeringkan pada suhu kamar. dan supernatan didekantasi dan dibuang. Tabung disentrifugasi (1200 rpm. monocytogenes dalam sampel makanan laut.27 g sukrosa. dimasak produk akhir RTE. aliquot (100 ml) dari budaya diperkaya melesat ke piring Listeria Oxford Agar (Liofilchem. suhu kamar). Sepersepuluh volume supernatan dikumpulkan. yang supernatan dipindahkan ke microtubes baru (2 ml). 5 menit. 100 ml etanol (70%) ditambahkan ke microtubes. Berikut sentrifugasi (8000 rpm. The microtubes kemudian diisi dengan 1. n ¼ 6. Italia) dan diinkubasi pada 37? C selama 48 jam. 2. Tanpa menggunakan enzim. 2 menit. Semua sampel disimpan di bawah 4? C dan ditransfer ke laboratorium mikrobiologi dari University of Iran Ilmu Medis. konveyor. 0. Iran. dan identifikasi biokimia dan morfologi 25 g sampel makanan laut yang homogen dan diinokulasi dalam 225 ml TSBYE (Tryptic Soy Broth þ 0. Sampling pada tingkat ritel Dari Oktober 2014 hingga Agustus 2015. microtubes diguncang pusaran mixer dan diinkubasi pada 65? C selama 30 menit. Clupeonella caspia).2. . dan dikultur pada Mueller-Hinton agar (Liofilchem. termasuk Gram pewarnaan. supernatan dikumpulkan dengan sentrifugasi pada 8000 rpm selama 5 menit dan tersuspensi dalam volume yang sama dari fenol equilibrated. 2. yang microtubes disentrifugasi (8000 rpm. 14. disimpan di ? 20? C. baku dikemas udang. 10 menit. Sampling pada pabrik pengolahan Enam belas sampel dari bahan yang dapat dimakan dari tanaman seafood (raw ikan dan udang. Setelah agitasi cepat dalam mixer vortex. Akhirnya. dan rainbow trout (Oncorhynchus ciumanku). Sebanyak 201 sampel makanan laut dikumpulkan dari 14 toko ritel makanan termasuk nugget udang. suhu kamar).3.5.