FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERÍA

MANUAL DE PRÁCTICAS:

MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

AUTOR: MSc. Orlando Pérez Delgado

CHICLAYO - PERÚ
2016

MANUAL DE PRÁCTICAS

MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

DATOS DEL ESTUDIANTES
APELLIDOS Y NOMBRES:__________________________________________________________________________

CICLO:___________________________
SECCIÓN:________________________

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MANUAL DE PRÁCTICAS

MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

PRESENTACIÓN
El avance tecnológico sobre la base del conocimiento científico se ha
desarrollado vertiginosamente, avizorándose espectaculares logros en el siglo XXI.
La Microbiología como ciencia se encarga del estudio de los
microorganismos como las bacterias, virus y hongos y la Parasitología que estudia a
los parásitos y su interacción con los hospedadores.
La aplicación e integración de los principios teóricos de la asignatura de
Microbiología y Parasitología en la práctica, implica capacidad, competencia, habilidad
que se logra cuando se cultiva un espíritu observador, que conociendo y haciendo uso
de técnicas con habilidad y destreza, muestra capacidad analítica para su aplicación.
Por ello este manual presenta un conjunto de prácticas de laboratorio, cada una de
ellas con una pequeña información teórica, descripción de procedimientos, así como
cuestionarios, a fin de incentivar a aprender y obtener sus propias conclusiones.
Autor

Página 2

MANUAL DE PRÁCTICAS

MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

ÍNDICE
Práctica 01

: Bioseguridad, manejo de residuos, material y equipos de laboratorio

Práctica 02

: Tinción bacteriológica: Tinción Gram y Ziehl-Nielsen, morfología
bacteriana.

Práctica 03

: Principios de Inmunología

Práctica 04

: Medios de Cultivo y técnicas de siembra

Práctica 05

: Prueba de suceptibilidad antimicrobiana – antibiograma

Práctica 06

: Aislamiento e Identificación de Staphylococcus y Streptococcus

Práctica 07 : Demostración toxinas y enzimas bacterianas.
Práctica 08

: Siembra de Enterobacterias y bacterias gram negativas no
fermentadoras

Práctica 09

: Identificación de Enterobacterias y bacterias gram negativas no
fermentadoras

Práctica 10

: Acción de los agentes químicos y físicos en el crecimiento bacteriano

Práctica 11

: Micología

Práctica 12

: Parasitología

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11. En caso de cualquier accidente como rasguño. 8. 4. 2.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PRÁCTICA N° 01 BIOSEGURIDAD. para luego ser autoclavados o incinerados. Todos los materiales contaminados líquidos o sólidos deben ser descontaminados antes de su descarte o neutralización. 6. 9. Para centrifugar materiales tóxicos o infecciosas usar únicamente tubos con tapa. (sistemas a gas). No se debe comer. Hacer lo mismo al finalizar la sesión. 10. Antes de cada trabajo limpiar el área con el desinfectante y luego lavarse las manos. evite que se produzcan aerosoles. 3. cortadura o quemadura reportarlo inmediatamente al profesor o responsable de laboratorio. fumar guardar alimentos y aplicarse cosméticos dentro del laboratorio. Cuando se trate de sembrar y asilar microorganismos en medios de cultivo se debe efectuar siempre en presencia de mechero para evitar su contaminación. No debe quedar algo útil sobre la mesa de trabajo. Dejar el área de trabajo en perfecto orden al momento de retirarse. Prohibido pipetear con la boca. beber. Los cultivos líquidos de microorganismos patógenos requiere de especial cuidado. Usar siempre guardapolvo dentro del laboratorio. 5. Asegurarse que las llaves del gas estén cerrados. RECONOCIMIENTO DE MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO Competencias:    Reconoce las normas de bioseguridad en el laboratorio de microbiología Identifica los principales métodos de esterilización. 7. Reconoce los materiales y equipos de laboratorio de microbiología NORMAS BASICAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA 1. En caso de producirse salpicaduras de algún material infectivo cubrir inmediatamente el área con un desinfectante apropiado. Página 4 . primero colocados en recipiente autoclavables y cerrados.

Área de tránsito limitado.Área donde se manipulan microorganismos de riesgo. Como algunos que.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA NIVELES DE BIOSEGURIDAD (GRUPOS DE AGENTES DE RIESGO) TIPOS DE ÁREAS DE TRABAJO: Área contaminada.. entre otros. de difícil y largo tratamiento. los que no producen enfermedad en el ser humano sano y de susceptibilidad conocida y estable a los antimicrobianos. Implican patología grave. con muchas probabilidades de que se propague a la colectividad y sin que exista generalmente frente a él profilaxis o tratamiento eficaz. La decisión de implementar esta modificación a las recomendaciones del nivel IV (Aquel que causando una enfermedad grave en el hombre supone un serio peligro para los trabajadores.. zona de acceso con doble puerta y penetraciones selladas). Brucella sp. El acceso del personal administrativo está terminantemente prohibido. También incluye los laboratorios de producción de biológicos y control de calidad de alimentos. se puede lograr un nivel de seguridad aceptable para la práctica de procedimientos de rutina. tuberculosis. con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo frente a él generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. microorganismos que se utilizan en la industria de la alimentación para la elaboración de quesos. Saccharomyces cerevisiae. son capaces de originar patología infecciosa humana de gravedad moderada o limitada.. Salmonella sp. El acceso del personal administrativo está terminantemente prohibido. Ejemplo: Staphylococcus epidermidis.Área en las que el tránsito está permitido sólo al personal adecuadamente protegido y autorizado. Sin embargo. entre otros) y II (Puede causar una enfermedad en el hombre y puede suponer un peligro para los trabajadores. otros). siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Área de tránsito restringido. Ejemplo: Laboratorios donde se manipulan virus. y/o al uso de sustancias químicas de bajo riesgo). debido a la presencia de agentes que corresponden a los grupos (Es poco probable que cause una enfermedad en el hombre. que pueden curar con secuelas y ocasionalmente producir la muerte. Área limpia. Normalmente son microorganismos de dosis infectiva baja y alta contagiosidad. se preparan los medios de cultivo y a la vez se realiza la formulación de la vacuna.. coli K12. Ejemplo: Arenavirus. Página 5 . producción de antígenos etc. El laboratorio debe tener características de diseño e ingeniería especiales. se reconoce que algunas instalaciones existentes pueden no presentar todas las características recomendadas para el nivel de bioseguridad 3 (por Ejemplo. medicamentos y afines. Ejemplo: M.Área donde el tránsito está permitido sólo a personas previamente autorizadas. Ejemplo: donde se mantienen los medios de cultivos celulares.Área del laboratorio donde no se manipulan microorganismos de riesgo. El mayor y más frecuente peligro que entrañan éstos es la infección adquirida a través de aerosoles y por fluidos biológicos. En esta circunstancia. debido a la presencia de agentes de los grupos III (Puede causar una enfermedad grave en el hombre y presenta un serio peligro para los trabajadores. Es decir. Coxiella burneti. embutidos. perteneciendo a la propia flora habitual del hombre. Ejemplo: E.

Mycobacterium bovis - - Treponema pallidum Vibrio Neisseria Salmonella typhi Paratyphi A Shigella Yersinia Pseudomonas Sataphylococcus Haemophylus Leptospira Virus de la hepatitis B Paracoccidiodis brasilensis Taenia solium Trypanosoma cruzi Yersinia pestis RIESGO 4 Agrupa microorganismos que provocan enfermedades graves en el ser humano. comedor y otras áreas de uso común. Tienen tratamiento. MICROORGANISMOS INFECTANTES POR GRUPOS DE RIESGO Grupo de riesgo Microorganismo infectante RIESGO 1 Agrupa microorganismos que tienen escaso o nulo riesgo de provocar enfermedades - Acanthamoeba Plasmodium Protozoarios Helmintos intestinales RIESGO 2 Agrupa a microorganismos que pueden provocar enfermedades humanas de riesgo moderado. Página 6 .MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Área libre.. Ejemplo: pasadizos comunes. Si provoca una infección al personal de laboratorio.Mycobacterium tuberculosis . Acinetobacter Aeromonas Bordetella Bartonella bacilliformis Clostridium Corynebacterium Entamoeba hystolitica Escherichia coli entoropatógena Leishmania Mycobacterium (excepto los de riesgo 3) RIESGO 3 .Histoplasma capsulatum . ésta tiene tratamiento y cura - Agrupa microorganismos que pueden provocar enfermedades humanas graves. - Virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) Virus de fiebre hemorrágica Ebola. cura y se limita.Área de tránsito libre para todo el personal.Brucella . No hay tratamiento para su cura.

De Seguridad: Rectangulares o cuadrangulares. con pictogramas de color blanco y fondo verde. con bordes y banda transversal de izquierda a derecha. con pictograma de color negro sobre fondo blanco.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA SEÑALES DE SEGURIDAD De Prohibición: Redondas. Página 7 .

De Obligación: Circulares y con pictogramas de color blanco con fondo azul. con pictograma blanco sobre fondo rojo. De Advertencia: Triangulares.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Contra Incendios: Rectangulares o cuadrangulares. con pictogramas de color negro y fondo amarillo o naranja. Página 8 .

tejidos y otros. Instrumentos y materiales utilizados en la toma de muestra de sangre. Mencione 5 tipos de residuos biocontaminados. Clasificación de los Residuos según su Peligrosidad: Clase A: Residuos Biocontaminados (Peligrosos) Tipo A 1: Atención al paciente. Clase B: Residuos Especiales Tipo B 1: Químicos peligrosos. papel. el personal del laboratorio puede estar expuesto a los efectos de las radiaciones ionizantes. Los desechos que se generan pueden estar contaminados por microorganismos o contener sustancias químicas tóxicas y peligrosas. Incluye a los generados en administración como: cartón. En menor medida. material de oficina. 3. etc. Residuos comunes: Color negra. Tipo A 4: Quirúrgicos y anatomopatológicos. La mejor manera de racionalizar los residuos es mediante una gestión integrada cuyos pilares básicos son la minimización. 2.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA GESTIÓN EN MANEJO DE RESIDUOS INTRAHOSPITALARIOS 1. segregación y eliminación. Mencione 5 Normas de Bioseguridad que usted estime conveniente debe de tener un laboratorio de prácticas. 5 especiales y 5 comunes. el cual debe ocupar los 2/3 del volumen del recipiente. Clase C: Residuos Comunes: Similares a los domésticos. en laboratorio. Tipo A 5: Animales contaminados. no olvidar que las actividades que en ellos se realizan pueden afectar a la salud comunitaria. Los casos de infecciones o intoxicaciones en el laboratorio son conocidos lo que obliga a la adopción de medidas de protección para el personal que trabaja en este ámbito. basura orgánica. Tipo A 2: Material biológico. Página 9 . Generalidades: La gestión de residuos debe ser considerada como una parte importante de la seguridad en los laboratorios. La visión que se pretende dar está sobre todo encaminada a la protección del personal de los laboratorios. 2. Tipo B 3: Radioactivos. Si los residuos son punzantes o cortantes debe utilizarse recipientes rígidos resistentes a la perforación cuyo volumen no supere los 2 L y que contengan desinfectante (hipoclorito de sodio al 10%). Manejo de Residuos Sólidos: Las bolsas de recolección de residuos sólidos se deben de diferenciar por colores: - Residuos Biocontaminados: Color roja. Tipo B 2: Farmacéuticos. ACTIVIDADES A DESARROLLAR 1. Residuos Especiales: Color amarilla. Tipo A 3: Sangre humana y productos derivados.

4.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 3. 3 de Advertencia. 5. Página 10 . Identifique las probables fuentes de que generen residuos sólidos en la USS y diseñe un sistema de gestión de dichos residuos. Señale que institución norma la Bioseguridad en las áreas de salud de nuestro país. 3 de Seguridad. Reconozca según las definiciones determinadas. 3 señales de Prohibición. 3 obligatorias y 3 Contra incendios y esquematícelas según lo establecido.

resistentes a altas temperaturas. Página 11 . Para utilizarlos.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA RECONOCIMIENTO DE MATERIAL Y EQUIPOS DE LABORATORIO Material de Vidrio: Tubos de Ensayo: Son tubos de vidrio de paredes gruesas. estos deben estar taponados con algodón absorbente y esterilizarlos. Son de diferentes tamaños y capacidad.

constituidos por una boquilla y el cuerpo de la pipeta son de dos tipos: Graduadas: Se caracterizan por presentar un número fracción donde el numerador representa el volumen total de la pipeta y el numerador las veces en que está dividida (ml). Son de diversos tamaños y se emplean para colocar en la base los medios de cultivo sólidos. Página 12 .MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Placas Petri: Son cajas cilíndricas. constituidas por una tapa y una base. de paredes gruesas. Pipetas: Son tubos cilíndricos largos. Las pipetas graduadas pueden ser terminales: cuando el vaciado del líquido a medir se realiza hasta la punta de la pipeta y las No terminales: cuando el vaciado del líquido se realiza hasta la última línea de graduación.

de diferente tamaño y capacidad una base plana. Las pipetas para ser utilizadas deben ser taponadas con algodón no absorbente en la zona de la boquilla y luego envueltas en papel para ser esterilizadas Probetas: Son recipientes cilíndricos graduados. Página 13 . Se les emplea para medir volúmenes grandes de líquidos. son fabricadas con varillas de vidrio de 4 mm x 30 ó 40 cm de longitud.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Pipetas No Graduadas: Llamadas también pipetas Pasteur.

pueden estar o no graduadas. en él se preparan soluciones y medios de cultivo. Página 14 . Cumplen la misma finalidad que el matraz. Balones: Son frascos de vidrio de forma redonda.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Matraz Erlenmeyer: Son frascos de vidrio de forma cónica de cuello corto y base plana. son de diferentes tamaños y capacidad. de cuello largo y base plana. Para su empleo se taponan con algodón no absorbente.

Frascos goteros: Son frascos de vidrio de paredes gruesas. de extremos romos. Página 15 . Ambos son importantes en la observación microscópica de los microorganismos. Los cubreobjetos son finas laminillas de menor tamaño que la lámina portaobjetos. Láminas porta y cubre objetos: Los portaobjetos son láminas de vidrio transparente de forma rectangular y pequeños grosor. algunos con tapas especiales para facilitar el vaciado del colorante. transparentes o de color ámbar. de rectangular o cuadrada.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Baguetas o Agitadores: Son varillas de vidrio compacto. se emplean para disolver sustancias en una solución.

Pinzas: Para sujetar y llevar al calor tubos de ensayo. introducir y sacar crisoles del horno. Se utiliza para coger el material a pesar. Espátulas: Es de material inoxidable. Página 16 . etc.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Material de Metal Gradillas: Sirven para colocar los tubos durante la sesión de trabajo.

inactivación de sueros.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Material de Madera Pinzas: Para sujetar y llevar al calor tubos de ensayo. por encima se encuentra una cubeta en la que se coloca el agua a calentar. Equipos de Laboratorio Baño María: Es un recipiente de forma rectangular. que permite regular temperatura. pruebas de reductasa. introducir y sacar crisoles del horno. que está constituido en su parte inferior por una resistencia que va conectado a un termostato. Página 17 . etc. Se emplea para disolver medios de cultivo. etc.

La velocidad a la cual sedimentan las partículas en un líquido de varios factores como el tamaño de la partícula. Página 18 . pero básicamente está constituido por una resistencia y un termostato que regula altas temperaturas. Tiene varias formas. Centrífugas: Son aparatos diseñados para acelerar la separación de partículas sólidas suspendidas en líquidos. la viscosidad del líquido y la fuerza gravitacional.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Horno Pasteur: Es un aparato muy utilizado en la esterilización por calor seco. el peso.

Se emplean para almacenar medios de cultivo. sueros. Las congeladoras: Se requieren para almacenamientos más Micropipetas: La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para succionar y transferir pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas analíticas. se emplean puntas desechables. p200 y p1000. admiten un máximo de 20. 200 y 1000 μl. Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos líquidos sin tener que lavar el aparato: para ello. de plástico.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Refrigeradoras y Congeladoras: Son pequeños aparatos que proporcionan temperaturas muy bajas. respectivamente. denominados p20. Página 19 . reactivos y soluciones perecederas. Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más habituales. que habitualmente son estériles.

MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA TERMOCICLADOR: También conocido como máquina PCR (reacción en cadena de la polimerasa) que es usado en Biología Molecular. Vortex o Agitador de tubo: un dispositivo simple que se usa comúnmente en los laboratorios para agitar pequeños tubos o frascos de líquido. Página 20 . En Microbiología es empleado como ayuda al diagnóstico molecular de microorganismos que están asociados como causantes de enfermedades.

. .Observar al microscopio con objetivo (40 x). Colocarse frente al mechero y empezar a trabajar según las indicaciones.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PRÁCTICA N° 02 TINCIÓN y MORFOLOGÍA BACTERIOLÓGICA Competencias: Reconoce la importancia de la tinción bacteriana Reconoce la Morfología bacteriana. Examen en fresco Gota pendiente . 3. . Determinación de motilidad: Examen en fresco: Montaje húmedo . Página 21 .Fucsina fenicada . .Mechero .Cristal Violeta .Sobre una lámina portaobjeto colocar dos gotas de cultivo microbiano.Asas bacteriológicas . . Cuando este frió.Colocar sobre la muestra una lámina cubreobjeto.Colocar rápidamente la lámina cubreobjeto sobre la depresión de la lámina escavada.Láminas escavadas.Microscopio .Observemos que la gota quede suspendida (pendiente) en la lámina cubreobjeto. láminas cubreobjeto.Láminas portaobjeto. una vez seco pasarlo por el mechero 2 o 3 veces. Colocar cerca al mechero todo el material necesario para realizar su experiencia. marcar la cara donde se hará el frotis. dejarlo secar. . .Sobre una lámina cubreobjeto colocar dos gotas de cultivo microbiano.Lugol . No olvidarse de esterilizar el asa bacteriológica antes y después de usarla.Diferenciar entre motilidad y movimiento browniano. .Alcohol-Ácido .Azul de metileno Procedimiento: 1.Láminas con preparaciones fijas .Observar al microscopio. 4. 2. Material: .Alcohol-Acetona . Limpiar el área de trabajo. Preparación de Frotis y Fijado - Limpiar con alcohol el portaobjetos donde se realizará el frotis.Láminas portaobjetos .Safranina .

Secar al aire. de tal forma que pueda tolerarlo sobre el dorso de la mano.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA - Calentar el asa de inoculación hasta que este al rojo. - Dejar secar el frotis cerca del mechero encendido durante 10 min o hasta que seque completamente. basta con colocar una pequeña gota con el asa estéril sobre el portaobjetos. debidamente marcado ***Si la muestra se encuentra en un medio líquido. - Trazar con la muestra una espiral del centro a la periferia. Extienda con el asa la gotita para obtener un frotis delgado y uniforme. - Página 22 . colocar una gotita de solución salina o agua destilada estéril sobre el portaobjetos y con el asa estéril se transfiere una pequeña muestra de bacterias en la gotita. - Tomar el cultivo del que se hará el frotis y flamear la boca de este. Tomar la porción de la muestra que se va a examinar por medio de un asa o escobillón. - Colocar la muestra sobre un portaobjetos limpio y sin grasa. ***Si la muestra está en un medio sólido. Fijar el frotis con calor suave sobre la flama del mechero. pasándolo tres veces a través de la llama con la muestra hacia arriba. - Calentar nuevamente el asa para esterilizarla.

el tercer reactivo es un decolorante que disuelve y arrastra el colorante primario.Cubrir los frotis con yodo – lugol durante 1 minuto. 6.Lavar como se indicó en el paso (4)..Preparar los frotis como en la técnica de tinciones simples. 3. epidermis.. Enseguida se utiliza una solución del yodo (lugol). 5... 9. Página 23 .MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Tinción de Gram.Lavar los portaobjetos con una corriente suave de agua.. 4. coli. Y preparación de frotis y fijado.. Consta de cuatro reactivos diferentes: el cristal violeta es el primer colorante o colorante primario que imparte color a todos los microorganismos del frotis.. 2. OB (100 X).Lavar inmediatamente como se hizo en el paso (4)..Decolorar con alcohol-cetona hasta que no escurra líquido azul. los organismos que resisten la decoloración y conserva una tonalidad azul son Gram (+).Observar al microscopio a inmersión. Ver figura Tinción Gram. E.Cubrir el frotis con safranina durante 1 minuto. entre un colorante y un sustrato ). la que actúa como mordente (que aumenta o refuerza la unión. el cuarto reactivo es el colorante de contraste la safranina que se aplica como contra tinción ya que los organismos se destiñeron con el decolorante. PASOS A SEGUIR EN LA TÉCNICA DE GRAM 1... 7.Preparar los frotis con cultivos de S. 11.. ahora toman el color rojo de la safranina denominándose gram (-).Cubrir los frotis con cristal violeta durante un minuto. 10. 8.Lavar como en el paso (4).

Lavar a chorro de agua y cubrir la muestra con azul de metileno durante 1 minuto. Observar al microscopio con objetivo de inmersión. Repetir esta operación por tres veces en un tiempo de 3 minutos. Cuestionario:         ¿Qué diferencias exite entre bacterias gram positivas y gram negativas? ¿Para qué se necesita el aceite inmersión? ¿Cuál es la estructura de la bacteria alcohol-ácido resistente? Explique. colocar una gota de la muestra y realizar el frotis. Comparar y esquematizar. Cubrir el frotis con solución de Fucsina fenicada y calentar ligeramente hasta la emisión de vapores sin llegar a hervir. Página 24 . Procedimiento: - - En una lámina limpia. del por qué calentar la muestra hasta la emisión de vapores. difícil de teñir debido a que posee grandes cantidades de lípido en su superficie. producida por Mycobacterium tuberculosis. Lavar a chorro de agua. es ácido alcohol resistente. Decolorar el frotis con alcohol-ácido. Además. ¿A qué se debe la motilidad bacteriana? ¿Por qué los colorantes básicos tiñen las células bacterianas? ¿Por qué los colorantes ácidos no tiñen las células bacterinas? Complete en los siguientes espacios en blanco. Lavar a chorro de agua y secar al medio ambiente o al calor suave del mechero.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA COLORACIÓN ALCOHOL-ÁCIDO RESISTENTE – TÉCNICA DE ZIEHL-NEELSEN Se utiliza para el diagnóstico de la tuberculosis. por lo que una vez que se tiñe no pierde la coloración.

______ m 1____ = ---------------------10-9m 1µm = --------------------.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 1µm = ---------------------.______nm Página 25 .

Seque rápidamente al aire o en una corriente de aire tibio. debe Página 26 . Formas incorrectas de extendido de frotis: Examen microscópico - En 10x examinar calidad global del frotis. Tiña el frotis con la técnica indicada en el apartado de tinciones soluciones. Paratífico A. observaremos la morfología de los glóbulos blancos en sangre periférica y calcularemos la fórmula leucocitaria.Suero Control positivo paciente con tifoidea .Colorante Wright Procedimiento: 1.Antisueros Anti – A. Formula Leucocitaria: Extensión de sangre capilar en tinción de Wright. - Hacer una extensión de sangre bien mezclada con sangre con anticoagulante EDTA o capilar con el método de atraer y arrastrar. color y distribución de células. Explicar el fundamento inmunológico de la prueba de inmunocromatografía Materiales: . Paratífico B y Brucella . . Anti – B y Anti – D. la formación de rodillos por los eritrocitos o la aglutinación de los mismos. Tífico H.Láminas portaobjetos .MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PRÁCTICA N° 03 PRINCIPIOS DE INMUNOLOGÍA Competencias: Reconoce la reacción de aglutinación Identifica la presencia de anticuerpos mediante la utilización de los antígenos.Micropipetas Vol de 5-50 µL. suero negativo . .Antisueros Tífico O.Palillos mondadientes o mezcladores de plástico .Muestra de sangre .Lancetas .

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revisarse con rapidez en busca de cualquier célula anormal grande o incluso
parásitos inesperados.
En 40x se selecciona la zona correcta del extendido donde se debe iniciar el
recuento y evaluar la morfología celular. Para ello se selecciona el área en la
que los eritrocitos estén superpuestos de 2 a 3 pero que la mayoría estén
separados entre sí.
En 100x se coloca una gota de aceite de inmersión y se enfoca con este objetivo,
se cuentan y clasifican 100 leucocitos y se informan como porcentajes de
leucocitos (valores relativos). La morfología de eritrocitos y plaquetas así como
la estimación de estas últimas se hacen también con este.

2. Prueba de Aglutinación:
Grupos Sanguíneos:
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Para determinar el grupo sanguíneo, obtener 3 gotas de sangre por punción del dedo
en una lámina portaobjetos.
Agitar los antisueros previamente y depositar una gota sobre cada una de las gotas de
sangre. Mezclar suavemente.
Realizar movimientos vaivén de la lámina durante dos minutos.
Formación de grumos gruesos, reacción positiva.
Ausencia de grumos reacción negativa.

Antígenos Séricos:
Método de Prueba Rápida en Placa
Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que se este usando.
NOTA: El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la temperatura ambiente para
comenzar la prueba.
- Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero a analizar:
0.08 mL, 0.04 mL, 0.02 mL, 0.01 mL y 0.005 mL (EL SUERO DEBE ESTAR
TOTALMENTE CLARO).
- Agitar el antígeno a utilizar para tener una suspensión uniforme.
- Añadir 30 mL de la suspensión de antígeno a cada una de las diferentes cantidades de
suero. Se recomienda utilizar pipetas automáticas (el gotero incluido proporciona
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una gota de 30-40 mL).
Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las
cantidades de suero.
- Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm) durante 2
minutos.
- Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinación
macroscópica.
- Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo.
Interpretación de los resultados
El grado de aglutinación se registra como sigue:
4+ Aglutinación del 100% de los organismos
3+ Aglutinación del 75% de los organismos
2+ Aglutinación del 50% de los organismos
1+ Aglutinación del 25% de los organismos
- Aglutinación del 0% de los organismos
-

El titulo del suero será la inversa de la dilución más alta en donde se observa una aglutinación
del 50% de microorganismos (2+)
Las diluciones del suero en la prueba en placa son aproximadamente equivalentes a las
diluciones para prueba en tubo como se muestra a continuación.
Volumen del suero titulo
(80 µL) 0.08 mL 1 : 20
(40 µL) 0.04 mL 1 : 40
(20 µL) 0.02 mL 1 : 80
(10 µL) 0.01 mL 1 : 160
(5 µL) 0.005 mL 1 : 320
3. Inmunocromatografía
- Anotar cada una de las pruebas a realizar
- Colocar una gota de muestra de suero de paciente en cada una de las pruebas rápidas
que se le proporcionan.
- Dejar que la muestra fluja a lo largo de la prueba de inmunocromatografía
- Anotar los resultados positivos y negativos.

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Cuestionario:
- ¿Cuál es la base inmunológica del rechazo del trasplante?
- ¿Cuál es la función del interferón gamma?
- ¿Qué son las interleucinas y menciones los tipos interleucinas con su respectiva
función?
- ¿Cuál es la función de los linfocitos T y linfocitos B?
- ¿A qué tipos de células se les denominas células presentadoras de antígenos?

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PRÁCTICA N° 4
MEDIOS DE CULTIVO Y TÉCNICAS DE SIEMBRA
Competencias:
- Identifica el uso de los medios de cultivo en Microbiología
- Aísla microorganismos mediantes los medios cultivos
Materiales:

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Agar Müller-Hinton
Agar Manitol Salado
Agar SS
Agar Mc Conckey
Agar Sangre
Caldo Peptonado
Placas petri
Asas Bacteriológicas
Matraces
Balones
Mechero Bunsen
Autoclave
Horno
Estufa

Medios de Cultivo:
Agar Sangre
Medio para propósitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos
microorganismos. Con la adición de sangre, el medio es útil tanto para el aislamiento y cultivo
de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una gran
variedad de muestras, como para la observación de reacciones de hemólisis.
También, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio
agar chocolate.
Fórmula (en gramos por litro)
Infusión de músculo de corazón
375.0
Peptona
10.0
Cloruro de sodio
5.0
Agar
15.0
pH: 7.3

Fundamento
La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que
permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos
nutricionalmente exigentes.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10%, aporta nutrientes
para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemólisis.

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pyogenes ATCC 19615 S. de agua y alimentos. Microorganismos Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Salmonella typhimurium Shigella flexneri Proteus mirabilis Enterococcus faecalis Colonias Rojas con halo turbio Rosadas mucosas Incoloras.1 Fundamento En el medio de cultivo. y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.0 Pluripeptona 3. las peptonas. aureus ATCC 25923 S. pneumoniae ATCC 49619 Crecimiento Abundante Abundante Abundante Abundante Abundante Hemólisis -Beta Beta Alfa Alfa Agar Mc Conckey Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo.5 Rojo Neutro 0. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro). pneumoniae ATCC 6305 S.0 Lactosa 10. Fórmula (en gramos por litro) Peptona 17.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Microorganismos E. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.03 Cristal Violeta 0. disminuye el pH alrededor de la colonia.0 Mezcla de Sales biliares 1. Por fermentación de la lactosa. pH: 7. incoloras. coli ATCC 25922 S. Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras. la absorción en las colonias. transparentes Diminutas. y la precipitación de las sales biliares. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. opacas Página 31 . lactosa en muestras clínicas. Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta disolver.0 Agar 13. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. transparentes Incoloras. transparentes Incoloras.5 Cloruro de Sodio 5. aerobios y anaerobios facultativos.001 Instrucciones Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada. aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no.

vitaminas y minerales. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos. nitrógeno. posteriormente. rodeadas de una zona del mismo color o púrpura.0 Agar 15. con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo. productos cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria. Microorganismos Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Crecimiento Exccelente Bueno Inhibido Inhibido Colonias Amarillas Rojas Inhibido Inhibido Página 32 . y el rojo fenol es el indicador de pH. las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. constituyen la fuente de carbono. Los estafilococos coagulasa negativos. producen ácidos. y pueden o no fermentar el manitol.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Agar Manitol Salado Medio de cultivo selectivo y diferencial. este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halófilas de Vibrio. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15 minutos.0 Cloruro de Sodio 75. pH: 7. En el medio de cultivo. etc. utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos. Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal. se visualizan como colonias rojas.0 Pluripeptona 10.025 Instrucciones Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada. Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color. También. Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas. sino se dispone de medios apropiados (TCBS Medio.0 Rojo Fenol 0. el extracto de carne y la pluripeptona. presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante. aunque algunas especies pueden no desarrollar.). Fórmula (en gramos por litro) Extracto de Carne 1. Medio Marino. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio. alimentos.0 d-manitol 10.4 Fundamento: Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. la prueba de la coagulasa. se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol. Las colonias sospechosas. el manitol es el hidrato de carbono fermentable. Los estafilococos que no fermentan el manitol.

Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa. alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona 5. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.025 Instrucciones Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada.00033 Rojo Neutro 0. centro negro Incoloras Incoloras Transparentes.5 Citrato de Sodio 8. y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio. Microorganismos Salmonella typhimurium Shigella flexneri Shigella sonnei Proteus mirabilis Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Enterococcus faecalis Colonias Transparentes. crecen bien en el medio de cultivo. de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar. que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. A partir de heces.5 Verde Brillante 0. centro negro Rosadas a rojas Rosadas cremosas y mucosas Incoloras. y producen colonias transparentes. Calentar a ebullición durante 2 o 3 minutos.5 Citrato férrico 1. Y de algunas especies de Shigella spp. La selectividad. está dada por la sales biliares y el verde brillante. obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Enfriar a 45-50°C y distribuir unos 20 ml por placa.0 Fundamento Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. de muy escaso crecimiento Página 33 .MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Agar SS Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp.5 Tiosulfato de sodio 8.0 Lactosa 10. pH: 7.0 Extracto de carne 5. Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa. La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro.0 Mezcla de Sales Biliares 8.0 Agar 13. Salmonella. Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar.

las zonas de inhibición en las pruebas de difusión son generalmente más grandes.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Mueller Hinton Agar Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. la metodología apropiada. Resultados Consultar en la sección “prueba de sensibilidad a los antimicrobianos”. Fundamento El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).3 ± 0. debido a una serie de factores que se detallan a continuación: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad. Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones Infusión de carne 300. pH final: 7. Además es útil con el agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes. Almidón 1. Esto es muy importante pues algunos lotes pueden variar significativamente y si las bacterias no crecen adecuadamente.5 Calentar con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto. trimetoprima y tetraciclina es bajo. la mayoría de los patógenos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo. Incubación Consultar en la sección “prueba de sensibilidad a los antimicrobianos”. Enfriar a 45°-50°C y distribuir a cajas de Petri (o Agar 15. es útil para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. quedan fuera de los límites de control de calidad y pueden dar resultados erróneos.P del NCCLS: ¨Evaluating production lots of dehydrated Mueller Hinton agar¨. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. produciendo así zonas de inhibición Página 34 . Notas: 1-Los lotes de agar Mueller Hinton Britania cumplen con las normas descriptas en el documento M6 . ex National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%. su contenido en inhibidores de sulfonamidas. la metodología apropiada.0 Suspender 37 g del medio deshidratado en un litro de Peptona ácida de caseína 17. 2-Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el efecto inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima.1 Siembra Consultar en la sección “prueba de sensibilidad a los antimicrobianos”. la metodología apropiada.0 agregar los suplementos que se desee) hasta un nivel de 4 mm sobre una superficie horizontal (25-30 ml en placas de 9 cm de diámetro). recomendó su uso en forma rutinaria para la realización del antibiograma en medio sólido.5 agua destilada.

se produce una zona clara de inhibición de 20 mm o más. Calentar agitando continuamente y hervir un minuto. a una concentración final al 5% (v/v). Para evaluar el contenido de timidina del lote de agar Mueller Hinton. smegmatis. más los aportados por el agregado de la mezcla de huevos. Es esta una base para la preparación de varios medios destinados al aislamiento. Por tal motivo.5 Sulfato de magnesio 0.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA mas pequeñas y por lo tanto informes de falsa resistencia. se pueden seleccionar micobacterias tolerantes a la sal. se utiliza la cepa control: E. constituyen un rico soporte para el crecimiento de una gran variedad de micobacterias. Fundamento Los nutrientes de este medio basal. Lowenstein-Jensen Medio Base. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.24 Citrato de magnesio 0. Agregando un 5% de NaCl. bovis es inhibido. coli ATCC 35218 Características del medio Medio preparado: ámbar. Para el control de precisión y exactitud del agar de Mueller Hinton se usan las siguientes cepas control: S.3 g del polvo en 600 ml de agua destilada y agregar 12 ml de glicerina. 4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos de control para evitar datos aberrantes debido al medio de cultivo. coli P. Mezclar asépticamente un litro de Página 35 .0 Instrucciones Suspender 37. Enfriar a 50°C aproximadamente. se prueba la cepa de control de calidad: Enterococcus faecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. aunque gran parte de M. faecalis Para evaluar ATCC 25923 ATCC 25922 ATCC 27853 ATCC 29212 el desempeño de inhibidores de beta lactamasa. se agrega sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado. El verde de malaquita inhibe a gran parte de la flora acompañante. aeruginosa E.6 Asparragina 3. aureus E. se deben cumplir los límites de control de calidad publicados por el NCCLS. 3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar Mueller Hinton es que las variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden afectar los resultados con tetraciclina. Con el agregado de glicerina se estimula el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis. como es el caso de M. cultivo y diferenciación de micobacterias. Para aquellas cepas que fallan de crecer satisfactoriamente sobre Agar Mueller Hinton no suplementado.6 Harina de papa 30. polimixina y aminoglucósidos cuando se ensayan cepas de Pseudomonas spp. En un medio satisfactorio. Fórmula (en gramos por litro) Fosfato monopotásico 2.

TSI Agar Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Microorganismos Crecimiento Características de las colonias Mycobacterium tuberculosis Excelente Grandes. pH final:4. Colocar los mismos en posición inclinada y coagular a 85-90°C durante 45 minutos. hasta un total de 8 semanas. Enfriar en pico de flauta profundo.1 Siembra Se recomienda. lactosa. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona 20. opaco.0 Extracto de carne 3. en procedimientos de rutina. Incubación A 35-37°C.0 Glucosa 1. evitando la formación de burbujas de aire y agregar al medio base. observar cada semana.2 Agar 13.3 Fundamento En el medio de cultivo.4 huevo íntegro. granulares Mycobacterium avium Excelente Lisas. en base a la fermentación de glucosa.0 Sacarosa 10.0 Lactosa 10. Distribuir en recipientes estériles adecuados y tapar herméticamente. inocular la muestra previamente decontaminada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente. Resultados Observar las características morfológicas y la presencia o ausencia de pigmento en las colonias. secas. aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar el huevo y la base hasta uniformar.2 Rojo fenol 0. pH: 7. A los 7 días de incubación. hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. sin pigmentos Mycobacterium gordonae Excelente Lisas Mycobacterium bovis ----Características del medio Medio preparado: verde pálido. el extracto de carne y la pluripeptona. se observa por primera vez si hubo crecimiento.8 ± 0. sobre la superficie del medio de cultivo. sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.0 Tiosulfato de sodio 0.MANUAL DE PRÁCTICAS Verde de malaquita MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 0.0 Sulfato de hierro y amonio 0.025 Instrucciones Suspender 62. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Página 36 .0 Cloruro de Sodio 5. amarillentas. Luego.

pero que son fermentadores de la glucosa. Los microorganismos que no producen lisina descarboxilasa. Por descarboxilación de la lisina.0 Tiosulfato de sodio 0. el cual vira al color amarillo en medio ácido. se producen ácidos. son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. El citrato de hierro y amonio.8. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico.0 Extracto de levadura 3. el sulfato de hierro y amonio.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA La lactosa. . producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo. se produce la amina cadaverina. pero a las 24hs de incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas. la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.0 Citrato de hierro y amonio 0. pH: 6. basado en la decarboxilación/desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico. El purpura de bromocresol. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable.0 Sulfato de hierro y amonio 0. sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. que se detectan por medio del indicador rojo de fenol.04 Instrucciones Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. y el tiosulfato de sodio. y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.7 Fundamento En el medio de cultivo. tiene lugar en medio ácido. Por fermentación de azúcares. El rojo de fenol es el indicador de pH. es el indicador de pH. y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas descarboxilasa y de aminasa. Fórmula (en gramos por litro) Peptona de gelatina 5. Lisina Hierro Agar Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos. La producción de sulfuro de hidrógeno. es la fuente de iones Fe3+. La descarboxilación de la lisina. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la punción.2 Agar 15. los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro. se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro.0 Lisina 10. y de color violeta a pH igual o mayor a 6. Página 37 . agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolución completa. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos. de color negro. por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. especialmente Salmonella spp.5 Glucosa 1.2. Dejar embeber unos 15 minutos. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. y el fondo amarillo. Calentar cuidadosamente.

Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.2 g del medio deshidratado por litro de agua destilada.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Las cepas de los géneros Proteus. Resultados Página 38 .Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.0 minutos y mezclar calentando a ebullición Fosfato dipotásico 1. en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa. Las sales de fosfato forman un sistema buffer. El metabolismo del citrato se realiza. 2-Desaminación de la lisina: Pico rojizo/fondo amarillo. Providencia y alguna cepas de Morganellas pp. al ser utilizados como fuente de carbono. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. el magnesio es cofactor enzimático. en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía. producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos.08 Agar 15. esto produce un ácido alfa-ceto-carbónico.0 esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 Sulfato de magnesio 0.0 Suspender 24. el cual. Providencia y algunas cepas de Morganella. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa. usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno. Enfriar en posición inclinada. Resultados 1-Decarboxilación de la lisina: .Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo) Agar Citrato de Simons Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias. y el azul de bromotimol es el indicador de pH. desaminan la lisina. Azul de bromotimol 0. Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones Citrato de sodio 2. a través del ciclo del ácido tricarboxílico. Dejar reposar 5 Cloruro de sodio 5. el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono.2 minutos. con la consiguiente producción de alcalinidad.9 Fundamento En el medio de cultivo. con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio.0 pH: 6. . Distribuir en tubos y Fosfato monoamónico 1. 3-Produccióndeácidosulfhídrico: . El desdoblamiento del citrato da progresivamente.0 durante 1 o 2 minutos. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. que vira al color azul en medio alcalino. da origen a ácidos orgánicos que. Este último. en presencia de un medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono. oxalacetato y piruvato. Esto sucede con cepas del género Proteus.

Debido a la fermentación de la glucosa se reduce el pH produciendo una condición ácida y originando que el indicador de pH púrpura de bromocresol vire a ladrillo.0 Clorhidrato de L-ornitina 5. la ornitina es el sustrato para la detección de la enzima ornitina descarboxilasa. para la realización de la prueba de lindol. que en medio alcalino es de color púrpura y en medio ácido es amarillo. con el consecuente viraje del indicador hacia el color púrpura. -Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.0 Tripteína 10. Además. el púrpura de bromocresol es el indicador de pH. otorga condiciones óptimas para la actividad de la enzima ornitina descarboxilasa. Fórmula (en gramos por litro) Dextrosa 1. se alcaliniza el medio. La presencia de acidez.0 Púrpura de bromocresol 0. Página 39 . presencia de ornitina descarboxilasa e indol. coli S. la cual descarboxila la ornitina presente.0 Peptona 10. alcalinidad. Por su composición. La reacción positiva a la ornitina está dada por un color púrpura del medio.0 Extracto de levadura 3. Distribuir en tubos y esterilizar 15 minutos a 121°C.02 Instrucciones Suspender 31 g del polvo en un litro de agua destilada. flexneri Citrato permeasa Positivo Positivo Negativo Negativo Color del medio Azul Azul Verde Verde MIO Medio Medio usado para la identificación de Enterobacteriaceae en base a su movilidad. pH: 6. Microorganismos Klebsiella pneumoniae S. altamente nutritivo debido a la presencia de extracto de levadura. la tripteína aporta grandes cantidades de triptofano. Calentar a ebullición hasta completa disolución. La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas allá de la línea de inoculación. La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable. peptona y tripteína. sustrato de la enzima triptofanasa. Por descarboxilación. actividad de ornitina descarboxilasa y producción de indol. typhimurium E.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA -Positivo: crecimiento y color azul en el pico.0 Agar 2. es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad.5 Fundamento: Medio de cultivo semisólido.

pH final: 7. Medio SIM Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad. Sulfato de hierro y amonio 0. mientras que aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.1 agua destilada.2 Siembra A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio sólido.Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.2 calentar agitando y hervir durante un Tiosulfato de sodio 0.2 minuto. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. Distribuir unos 4 ml en tubos de hemólisis y esterilizar en autoclave a Agar 3. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo. Solidificar en posición vertical. Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones Tripteína 20. Fundamento El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas. Las cepas móviles pueden apreciarse en este medio. y la punción debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie.Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra. 2-Ornitina decarboxilasa: . sembrar por punción profunda con aguja de inoculación recta (no usar ansa con anillo).Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra.2.Resultado positivo: color púrpura. Es importante que la siembra se realice en línea recta. y particularmente de la tripteína. 3-Prueba del indol: La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina. Resultados 1-Movilidad: . para originar un compuesto de color rojo. . . Se debe inocular el centro del tubo. indica un resultado positivo. que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de Kovac´s o de Erlich.-Resultado negativo: color amarillo.5 121°C durante 15 minutos. Mezclar hasta disolver. A veces se puede desarrollar un color violáceo en la superficie del medio. es producido a partir del triptófano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa.3 ± 0. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac´s o de Erlich.Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador. Página 40 .0 Suspender 30 g del polvo por litro de Peptona 6. por la turbidez que producen alrededor de la punción de siembra.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA El indol.

Luego de la incubación. Cepas indol negativas: sin cambio de color. coli ATCC 25922 K. Cepas inmóviles: el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra. que no debe confundirse con el color negro debido a la producción de ácido sulfhídrico. a 35-37 °C. enteritidis ATCC 13076 S.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Incubación Durante 24 horas. en aerobiosis. la movilidad puede ser difícil de observar. Características del medio Medio preparado: ámbar. mirabilis ATCC 43071 S. Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac´s o de Erlich. -Algunas bacterias productoras de melanina como M. agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovac´s o de Erlich. TÉCNICAS DE SIEMBRA Se siembra en medios de cultivo para hacer que las bacterias se reproduzcan con el objetivo de aumentar el número de individuos de una población. Resultados Cepas móviles: producen turbidez del medio. morganii. Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los requerimientos del microorganismo a estudiar. pneumoniae ATCC 700603 P. Página 41 . Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio. que se extiende mas allá de la línea de siembra. flexneri ATCC 12022 Movilidad Indol + - + - Producción de ácido sulfhídrico - + + - + + + - - + - Limitaciones -En las bacterias aerobias estrictas. que sólo crecen en superficie. typhimurium ATCC 14028 S. Microorganismo E. Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color. pueden dar un color parduzco.

Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. aprox. Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido.). Este método se utiliza para microorganismos aerobios. Una vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA  Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos.   Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se deja solidificar.  Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión. Página 42 . Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos .

MANUAL DE PRÁCTICAS  MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: en este caso se colocan 5 ml de medio de cultivo fundido y estéril. En profundidad con ansa de punta: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se introduce mediante punción en el medio contenido en la parte inferior del tubo. Página 43 . se inclina el tubo y se deja enfriar.

uso y finalidad? ¿Explicar. Cuestionario: ¿Cuáles son los usos de los medios de cultivo en microbiología? ¿Cómo se clasifican los cultivos según su estado físico. a que se debe el cambio de color de los medios de cultivo por determinadas bacterias? ¿A qué se le denomina medio de transporte y para qué sirve? ¿Cómo puede incubarse microorganismos anaerobios estrictos? Página 44 .MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA En superficie con ansa de aro: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se esparce el mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.

Restregar el hisopo por las paredes del tubo con la finalidad de eliminar el exceso del cultivo.Reconocer la importancia del uso de la sensibilidad antimicrobiana. Ciprofloxacina.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PRÁCTICA N° 05 PRUEBA DE SUCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA – ANTIBIOGRAMA Competencia: . . . manteniendo una distancia de 2 cm entre cada disco presionar ligeramente. .Cepa bacteriana: cultivo de 16 a 18 horas de incubación de la cepa problema.Medio de Cultivo: Placas con agar Müller Hinton . Amoxicilina. Medir los halos de inhibición y comparar con el halómetro Cuestionario: ¿Para qué es útil el antibiograma? ¿Qué factores influyen el diámetro de las zonas de inhibición? ¿A que se debe la resistencia a los antibióticos? ¿Cuándo se considera el antibiótico es sensible al crecimiento bacteriano? ¿Qué entiendes por CMI y CMB? Página 45 . Clindamicina. Cefalotina. .Discos de sensibilidad: Penicilina. . Incubar las placas a 37° C durante 24 horas. Amikacina.Colocación de los discos de sensibilidad: Una vez secado la superficie de la placa colocar los discos de sensibilidad con ayuda de una pinza.Preparación del Inóculo: Sembrar la cepa problema en tubos con caldo nutriente e incubar durante 16 a 18 horas a 37° C. Cefotaxime.Inoculación en Placa: . Ceftriaxone.Introducir un hisopo estéril en el tubo con el cultivo bacteriano.Hisopos o torundas de algodón . en caldo nutriente.Identifica la sensibilidad y resistencia del antibiótico Material: . Gentamicinas. Norfloxacina. Ácido Nalidixico Procedimiento: Método de Difusión en Agar . Ampicilina.Sembrar la cepa cubriendo toda la superficie de la placa de agar Müller Hinton. Ajustar la concentración del inóculo al tubo N° 3 de la escala de Mac Farland. . humedeciendo completamente. Diluyendo en Solución Salina.

MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA RESULTADOS Página 46 .

Agar Manitol salado . así como el tipo de hemólisis en el agar sangre. si existiera un exudado visible se debería tratar de tocarlo con la punta del hisopo y en cualquier caso se debe evitar el contacto del hisopo con el paladar o la lengua.  Con el hisopo estéril se frotan ambas amígdalas (o ambos papilares en pacientes amigdalectomizados). de Página 47 .  Los medios de cultivo por utilizar deben estar a temperatura ambiente.Muestras biológicas .Asa curva . convexas. dependiendo de la edad del cultivo. Sthaphylococcus. en ese orden y con el asa se estría por dispersión agotamiento de los cuatro cuadrantes de la placa.  Con el hisopo con muestra se rota en la lámina para la identificación de microorganismos y diferenciación celular microscópicamente para luego colocarlo en caldo tioglicolato. manitol salado. Materiales: . es por ello que resulta imprescindible ayudarse con un bajalenguas. relativamente son grandes tienen de 2 a 3 mm o más.  Una alternativa recomendada ante una emergencia se debe colocar el hisopo en un tubo estéril con unas gotas de solución fisiológica estéril o el medio de transporte. Diagnóstico de Laboratorio Las colonias de estafilococo son fáciles de reconocer.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PRÁCTICA N° 06 AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE Staphylococcus y Streptococcus Competencia: Realiza el aislamiento e identificación de las principales especies de cocos gram positivos que afectan al hombre.  Realizar la identificación bioquímica y microscópica así como a la vez el antibiograma respectivo. Las colonias son circulares.  Revisar el cultivo observando el crecimiento tanto en los medios primarios como en los diferenciales.  Los cultivos se incubaron a 37 °C en atmósfera de CO2 al 5% durante 24 -48 hs para el género de Streptococcus.Agar Sangre Procedimiento:  Colocar la cabeza del paciente en hiperextensión y se iluminan las fauces en forma conveniente. con el propósito de obtener colonias aisladas e incubar los medios por 24 horas.  La siembra se realiza rotando el hisopo con muestra en una superficie de 3 x 2 cm cerca al borde de la placa de agar sangre. Establece diferencia entre géneros de cocos gram positivos.Mechero .

se utiliza la prueba de la catalasa que permite diferenciarlos del género estafilococo. Diagnóstico de Laboratorio Las colonias de estreptococos y enterococos son variables. cremosas. el cual carece de esta enzima.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA superficie lisa. se utiliza la prueba de la catalasa que permite diferenciarlos del género estreptococo. el cual produce esta enzima. Para iniciar la identificación además de las características de crecimiento tanto en medio líquido como sólido y la coloración de Gram. Resultados: Página 48 . Para identificar especies se utilizan diferentes pruebas dentro de las cuales están las siguientes. bordes enteros. Streptococcus y Enterococcus. dependiendo de la especie. blancas o amarillas o doradas. Para iniciar la identificación además de las características de crecimiento tanto en medio líquido como sólido y la coloración de Gram.

MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Cuestionario - Defina los diferentes tipos de hemólisis. Escriba 5 enfermedades infecciosas producidos por Streptococcus Staphylococcus A que se debe el pigmento amarillento generado por Staphylococcus aureus. y Página 49 .

Colocar sobre una lámina porta objeto una gota de solución d peróxido de hidrógeno .Identifica la presencia de toxinas y enzimas bacterianas .Reactivo Oxidasa (Clorhidrato de tetrametilparafenilendiamina) .MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PRÁCTICA N° 07 DEMOSTRACIÓN DE TOXINAS Y ENZIMAS BACTERIANAS Competencias: .Colocar una asada de cultivo de Pseudomonas o Neisseria sobre el papel con reactivo.Hisopos Procedimiento: 1.Peróxido de hidrógeno .Staphylococcus aureus .Papel Filtro . .Si la reacción es de color negro o púrpura oscuro indica una prueba positiva.Realizar el mismo procedimiento con una cepa control catalasa negativa.Placas con agar sangre . 3.Pipetas automática de 1000 uL .Neisseria Material y reactivos . .Streptococcus pyogenes . . 2. . aureus. . . Prueba de la Coagulasa: Página 50 .Pseudomonas .Staphylococcus epidermidis .Observar la presencia de burbujas (liberación de oxígeno) que indican la prueba positiva.Explica la presencia de tóxinas y enzimas bacterianas Material: Cepas Bacterianas . . Prueba de la Catalasa: .Tubos con caldo plasma .Realizar el procedimiento con una cepa control negativa. Por ejemplo: todas las Enterobacteriaceae son oxidasa negativa y la mayoría de especies de Pseudomonas.Colocar varias gotas de reactivo oxidasa sobre el papel filtro. Prueba de Oxidasa: La prueba de oxidasa es una de las pruebas más significativas para diferenciar ciertos grupos de bacterias. como Neisseria son oxidasa positiva.Colocar sobre el peróxido de hidrógeno una asa de cultivo de S.Escherichia coli .Colocar sobre una lámina porta objeto o dentro de una placa petri un pedazo de papel filtro.

Observar y esquematizar. . .1ml penicilina g . observándose como un halo opaco. un anillo químico de cuatro átomos. alrededor de las colonias. epidermidis.Agregar 2 gotas de almidón.Sembrar en un placa de agar sangre una asada de un cultivo joven de Streptococcus pyogenes por el método de agotamiento por estría. . . considerándose esto como un factor de virulencia de este microorganismo.Agitar 1 minuto .Reconocer los tipos de hemólisis 5.Incubar a 37 °C durante 24 horas en aerobiosis y anaerobiosis. si permanece de color azul no hay producción de β-lactamasas. observando la formación de coágulos de fibrina.Agregar en un tubo 0.Lectura: si decolora rápidamente. . hasta obtener una suspensión turbia. la beta hemólisis se caracteriza por la hemólisis total de los glóbulos rojos. La alfa hemólisis se caracterizada por la hemólisis parcial de los glóbulos rojos. . las cepas resistentes a la penicilina se relacionan directamente con el porcentaje de cepas productoras de betalactamasa. monobactamicos y carbapenémicos (carbapenemasas). dejar reposar 1h a T° ambiente. las cefalosporinas. Realizar lecturas cada 30 minutos.Tomar una muestra de cultivo de Staphylococcus aureus. Por lo general. Todos estos antibióticos tienen un elemento en común dentro de su estructura molecular denominado anillo betalactámico. Las betalactamasas por lo general son producidas por bacterias Gram positivas en forma secretada. . hay producción de β-lactamasas.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Los stafilococos patógenos producen un enzima que tiene la cualidad de coagular el plasma sanguíneo del conejo o del humano. . .Sembrar una cepa de Staphylococcus aureus en un tubo conteniendo plasma (puede diluirse en solución salina 1:4) . Detección de β-lactamasas: Una betalactamasa (a veces usado con el guion: beta-lactamasa) es una enzima producida por algunas bacterias y es responsable por la resistencia que éstas exhiben ante la acción de antibióticos betalactámicos como las penicilinas.Observar la misma operación con otras cepas bacterianas. Las lactamasas rompen el anillo. . desactivando las propiedades antimicrobianas de la molécula. formando un halo claro alrededor de la colonia .Realizar el mismo procedimiento con la cepa de S.Incubar a 37 °C durante 1-4 horas. Demostración de hemolisinas: Las hemolisinas son toxinas que tienen actividad hemolítica y puede ser de varios tipos.Agitar 30 s. .Realizar la misma operación con las otras cepas bacterianas. 4. Página 51 .Tomar muestra de hisopado faríngeo y sembrar en una placa de agar sangre.Si no se observa coágulo al cabo de 4 horas dejarlo incubar por 24 horas.Luego agregar 1 gota de solución iodurada. . . .

MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA RESULTADOS Página 52 .

MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Actividades a desarrollar - Defina: infección. virulencia ¿Cuáles son los patrones de la virulencia? ¿Cuáles son los factores del hospedero para resistir las enfermedades? Página 53 . patogenicidad.

Cálculo de resultados: Nº de Colonias / ml: Nº colonias en 1 cm2 x 6400 Valores de referencia: Página 54 .  Realizar el recuento de colonias en UFC/ml. Se elimina el primer chorro (10 ml. Si no es posible recolectar orina en los siguientes 45 minutos.  En hombres se debe retraer el prepucio e higienizar el glande y surco balano prepucial con agua y jabón.  Se precede a analizar. y secar con toalla limpia.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PRÁCTICA N° 08 SIEMBRA DE ENTEROBACTERIAS Y BACTERIAS GRAM NEGATIVAS NO FERMENTADORES UROCULTIVO Fundamento: El urocultivo se utiliza para diagnosticar bacteriuria.  Con ayuda de una asa bacteriológica calibrada (0.) se siembra en agar sangre y Mac conkey.  En mujeres se debe higienizar la zona genital con agua y jabón. puede utilizarse una bolsa de plástico estéril colectora de orina. secar con toalla limpia.  Proceder a la identificación Bioquímica del microorganismo. de adelante hacia atrás.  Se retira las placas de la estufa. en caso de estar positiva (crecimiento de colonias).01 ml. deberá cambiarse la bolsa por una nueva.) y se recolecta en frasco estéril la fracción siguiente (10 – 20 ml.) Se recomienda orinar separando los labios mayores.) y se recolecta en frasco estéril la fracción siguiente (10 – 20 ml. La bolsa se colocará después de haber lavado los genitales adhiriéndola a la piel por medio de un anillo adhesivo.)  Se homogeniza la orina agitándose suavemente (No centrifugar). y se debe colocar un tapón vaginal (torunda de gasa o algodón). la orina constituye un método excelente para cultivar la mayor parte de microorganismos que infectan el aparato urinario Procedimiento:  Para la recolección de muestras de orina en niños. Se elimina el primer chorro (10 ml.   Dejar en incubación de 37ºC por 24 horas Después de transcurrida las 24 horas de incubación.

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y porque es en este período en el que se encuentran en número significativo en las heces.  Para un hisopado rectal se introduce el hisopo sobrepasando el esfínter anal. Salmonella-Shiguella y colocar una alicuota de heces en el Caldo Selenito. fiebre elevada. hospitales). Procedimiento:  Las muestras deben recogerse en recipientes limpios y de boca ancha en caso de las heces. pus o moco en las heces) o por la susceptibilidad del paciente (granulopenia. Shigella. Los medios a utilizar en un estudio básico de heces varían de unos laboratorios a otros. Página 56 . síndrome hemolíticourémico). las indicaciones las tendríamos en brotes epidémicos (banquetes. la única excepción la tendríamos en el crecimiento puro y abundante de Candida spp. Colocar en la incubadora por 24 horas a 37ºc. coli. XLD. guarderías. pero es necesaria la utilización de medios selectivos. Yersinia) o Agar Salmonella (Salmonella. de difícil valoración como patógenos. sida. Shigella). y de Pseudomonas spp.  Revisar el cultivo observando el crecimiento tanto en los medios primarios como en los diferenciales.  Las muestras tanto de heces como de hisopado rectal deben ser obtenidas antes de la administración de antibióticos o antidiarreicos. En cuanto a las indicaciones del estudio microbiológico podemos considerar razones tanto clínicas como epidemiológicas. Aeromonas. hospitalización. Las primeras vienen dadas por la gravedad del proceso (deshidratación.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA COPROCULTIVO Fundamento: Este examen se basa en el aislamiento de microorganismos causantes de malestares estomacales por medio de la muestra de heces. En las segundas.  Realizar la identificación bioquímica Valoración del resultado: El coprocultivo se realiza en los tres primeros días de la diarrea.  Con el asa bacteriológica estéril colectar una asada de muestra y proceder a sembrar por estriamiento en los Agares Mac Conkey. edades extremas de la vida. incluso en pacientes inmunodeprimidos con diarrea. ya que muchos organismos entéricos mueren si no se cultivan con rapidez. Cualquier crecimiento de estos enteropatógenos se valorará como positivo y se informará de la especie así como de su antibiograma. diarrea del viajero y en sospecha de posibles agentes con potencial epidémico como el cólera. como MacConkey (E.

MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ _____________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ _____________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ _____________________________________ Página 57 .

Sembrar en Citrato: superficie . Materiales: .Estufa Procedimiento: .Autoclave . crecimiento en todo el medio El reactivo de Ehrlich o Kovac toma una coloración roja Color púrpura en el fondo del medio TSI Fermentación de glucosa Fermentación de lactosa y sacarosa Prueba positiva Fondo del medio amarillo (A) Inclinación del medio amarillo (A) Prueba negativa Fondo del medio sin cambio Inclinación del medio roja (K) Producción de indol No cambia la coloración del reactivo Color amarillo en el fondo del medio Indicador de pH Púrpura de bromocresol pH neutro = morado pH alcalino = K = púrpura = descarboxilación positiva pH ácido = amarillo = descarboxilación negativa Indicador de pH Rojo de fenol pH neutro = naranja pH alcalino = K = rojo pH ácido = A = amarillo Página 58 .Agar LIA .Sembrar en MIO: 1 picadura en el centro . Interpretación y resultados de pruebas bioquímicas MIO Movilidad Prueba negativa Crecimiento sólo a lo largo de la picadura Descarboxilación de ornitina Prueba positiva Medio turbio.Agar TSI .Rotular tubos de pruebas bioquímicas: TSI.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PRÁCTICA N° 09 IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS Y BACTERIAS GRAM NEGATIVAS NO FERMETADORAS Competencias: .Asas Bacteriológicas . .Mechero Bunsen . MIO o SIM.Sembrar en UREA: superficie o en el caldo. Urea.Agar Citrato de Simons .Matraces .Balones .Sembrar en LIA: 2 picaduras + superficie .Tubos de ensayo 10 x 13 .Caldo Peptonado .Identifica el tipo de bacterias mediante las pruebas bioquímicas.Urea . LIA. Citrato.Sembrar en TSI: 1 picadura + superficie .Horno .

MANUAL DE PRÁCTICAS Producción de gas MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Burbujas o rompimiento del medio Precipitado negro en el fondo o en todo el medio Sin formación de burbujas ni ruptura del medio Sin precipitado negro LIA Descarboxilación de lisina Prueba positiva Fondo del medio color púrpura Prueba negativa Fondo del medio color amarillo Desaminación de lisina Inclinación del medio color rojo o vino Inclinación del medio color morado Producción de gas Burbujas o rompimiento del medio Precipitado negro en el fondo o en todo el medio Prueba positiva El reactivo toma una coloración roja Color azul en la tira reactiva Prueba positiva Inclinación del medio color azul Ausencia de burbujas o rompimiento del medio Ausencia de precipitado en el fondo o en todo el medio Prueba negativa No cambia la coloración del reactivo Ausencia de coloración Prueba positiva Prueba negativa Producción de H2S Producción de H2S Caldo peptonado Producción de indol Oxidasa Citrato de Simmons Utilización del Citrato como única fuente de carbono UREA DE CHRISSTENSEN Prueba negativa Inclinación del medio color verde Gas = producto de la fermentación de la glucosa H2S = reacción enzimática con el tiosulfito de sodio y citrato férrico para formar un precipitado negro Indicador de pH Púrpura de bromocresol pH neutro = morado pH alcalino = K = púrpura = descarboxilación positiva pH = ácido = A = amarillo = descarboxilación negativa Púrpura de bromocresol pH neutro = morado pH alcalino= R = rojo = desaminación positiva pH ácido = A = amarillo = desaminación negativa Gas = producto de la fermentación de la glucosa Indicador de pH Presencia de la enzima citocromo oxidasa Indicador de pH Azul de bromotimol pH neutro = verde pH alcalino = azul = utilización del citrato como única fuente de carbono Indicador de pH Página 59 .

MANUAL DE PRÁCTICAS Hidrólisis de la Urea MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Inclinación del medio color rosa Inclinación del medio sin cambio de color o amarillo Rojo de fenol pH neutro = amarillo o ligeramente rosa pH alcalino = rosa = hidrólisis de la urea positiva pH ácido = amarillo o sin cambio = hidrólisis de la urea negativa Resultados: Especie bacteriana: TSI CITRATO LIA UREA MIO Especie bacteriana: TSI CITRATO LIA UREA MIO Página 60 .

MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Especie bacteriana: TSI CITRATO LIA UREA MIO Especie bacteriana: TSI CITRATO LIA UREA MIO Página 61 .

Formol al 10% . 60 minutos.Sembrar las cepas bacterianas en tubos con caldo nutriente e incubar a 37 °C durante 18 a 24 horas.Lejía (Hipoclorito de sodio al 5%) .Exponer las placas (retirando la tapa) a la acción de la luz Ultravioleta a una distancia de 30 cm. Formol al 10%. .Lámpara de Luz UV Procedimiento: 1. . Acción de la temperatura: .Caldo Nutritivo .Mezclar y someterlas a diferentes periodos de tiempo: 5.Agar Nutritivo . luego agregar a cada tubo 0.5 mL de las soluciones desinfectantes. . 15 y 30 minutos.Identifica las bacterias con resistencia a los agentes físicos y químicos. Acción de los agentes químicos: . 15. 5.Leer los resultados. . . Alcohol al 70%.Incubar los cultivos durante 18 a 24 horas. 60.Cultivo de Cepas Bacterianas . Acción de la luz ultravioleta (UV): .Después de cada exposición de tiempo. repicar los cultivos en placas de Agar nutriente . . Material: . 3.Demuestra la acción de los agentes físicos y químicos sobre las bacterias. . durante diferentes periodos de tiempo: 30. Fenol al 1% y Lejía.Marcar y llevar los cultivos a incubar a 37 °C durante 18 a 24 horas.Después de cada exposición repicar los cultivos sobre placas con Agar nutriente.Leer los resultados 2. Página 62 .Alcohol 70% .MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PRÁCTICA N° 10 ACCIÓN DE LOS AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS SOBRE EL DESARROLLO BACTERIANO Competencias: . .Colocar en tubos de ensayo 0.Leer los resultados.Tapar las placas e incubarlas a 37 °C durante 24 horas.Someterlos a temperatura de ebullición durante los siguientes periodos de tiempo: 1. .Baño maría . . 120 y 240 segundos. 30.Fenol al 10% .5 de mL de un cultivo bacteriano .Sembrar las cepas bacterianas en Agar nutritivo.

6 y 10. .Leer los resultados.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA 4.Incubar los tubos a 37 °C durante 24 horas . RESULTADOS Página 63 . Acción del pH: .Sembrar las cepas bacterianas en tubos con caldo nutritivo a diferentes concentraciones de pH 3.

Mencione aplicaciones de la Luz UV en con el control microbiano.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Actividades a desarrollar Mencione el fundamento de la acción de cada uno de los agentes físicos y químicos sobre el desarrollo bacteriano. Página 64 .

se deberá obtener la muestra aséptica (escamas.Observar y describir las características de las colonias de hongos cultivados en placas y tubos de Agar Sabouraud. etc. pinzas y asa micológica Laminas y laminillas Mechero Microscopio Procedimiento: a.Realiza aislamiento de diferentes tipos de hongos.Para cultivar hongos patógenos. secreciones u otros fluidos. pelo. uñas tejidos vegetales.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PRÁCTICA N° 11 MICOLOGÍA GENERAL Competencias: . . Estudio de la morfología Celular de los hongos: .Los hongos unicelulares deben observarse al microscopio con lentes objetivos de inmersión . la siembra se realiza con el asa bacteriológica por el método de estriado. Las levaduras patógenas desarrollarán después de 24 horas de incubación.Luego incubar a 23 °C o temperatura ambiente durante 7 a 14 días .Cuando se trata de esputo. . Cultivo de hongos: . pan otros afectados por hongos Agar Sabouraud Hidróxido de potasio al 10% y 40% Azul de algodón lactofenol Bisturí. . .Reconoce las características morfológicas de los hongos.Esquematizar . . Materiales: - Láminas fijas Muestra vegetales. .Para cultivar hongos ambientales se deberá exponer una placa petri con agar sabouraud al medio ambiente y dejar 5 minutos.Observar y esquematizar Página 65 . .Observar las características de las colonias y estudiar su morfología celular.Se observarán láminas fijas al microscopio utilizando lentes objetivos secos.) y colocar una porción de la muestra con la ayuda de una pinza o el asa micológica sobre una placa petri con agar sabouraud. Estudio macroscópico de las colonias de hongos: .Esquematizar c.Se preparan montajes en fresco con azul de algodón o hidróxido de potasio a partir de muestras conteniendo hongos.Incubar las placas a temperatura ambiente y a 37 °C durante 7 días.Esquematizar b. frutos. . .

MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ _____________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ _____________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ _____________________________________ Página 66 .

¿Qué se entiende por patógenos oportunistas? ¿A qué se de la acción patógena de los dermatofitos? Página 67 .MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA ACTIVIDADES A DESARROLLAR Diferencias entre levadura y moho.

OBSERVE trofozoitos y quistes en preparaciones microscópicas de heces humanas. vacuolas y flagelos. Se distingue el citoplasma o citosol.Reconoce la morfología de principales helmintos de importancia clínica.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PRÁCTICA N° 12 PARASITOLOGÍA Competencias: . microscópicos constituidos por una célula. Diferencie el trofozoito con un núcleo del quiste que posee de 1 a 4 núcleos y barras cromidiales. de los parásitos. Entamoeba coli. flagelada y ciliada. sumamente integrada. Reconozca el núcleo esférico con cariosoma central y cromatina fina adosada a la pared interna de la membrana nuclear. provista de membrana celular. Identifique quistes provistos con más de 4 núcleos. que es una unidad biológica compleja. . PROTOZOOS Son organismos eucariotas. lipoproteica. estructuras sin color. los flagelados. Materiales: Láminas o portaobjetos Laminillas o cubreobjetos Lugol Solución salina Placas esto Microscopio Procedimiento: Técnica de diagnóstico coproparasitológico: Solución Salina Fisiológica: Observación microscópica: Formas móviles. en cambio la reproducción sexual es propia de los esporozoarios. flagelos o cilios que cumplen funciones importantes. teñidas con Hematoxilina férrica. Página 68 . La reproducción binaria es característica de amebas. parte importante en el que se encuentran estructuras fibrilares y vacuolas nutritivas o excreticias y el núcleo. diferencie en este el cariosoma excéntrico y la cromatina gruesa adosada a la membrana nuclear. los ciliados y los esporozoarios. que cumple un papel esencial en el control de las concentraciones intracelulares. Lugol: Observación de detalles finos de los parásitos: núcleo. Algunas especies presentan organelos especiales como citostoma. Los protozoos importantes para el hombre son las amebas. conteniendo cromosomas en los que está presente el material genético (ADN).Identifica los principales endoparásitos del ámbito de salud. OBSERVE en preparaciones coloreadas y en nuestra preservadas trofozoitos provistos de un núcleo. AMEBAS: Entamoeba histolytica. en número de uno o más.

Página 69 . Vacuola Digestiva n. de forma redondeada o irregular con doble membrana y gránulos periféricos entre las dos membranas. cariosoma f. Ectoplasto end. núcleo ect.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA K. Endoplasma Blastocystis hominis: es más frecuente observar quistes de 5 a 10 micrones.

solitarias o gusanos redondos. principalmente duodeno del hombre y de algunos animales.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Giardiosis: Infección parasitaria causada por Giardia lamblia. Las helmintiasis son enfermedades parasitarias en las que una parte del cuerpo está infestada de gusanos. se usa sobre todo en parasitología. músculos y otros órganos. para referirse a especies animales de cuerpo largo o blando que infestan el organismo de otras especies. como lo son las lombrices intestinales. Se transmite durante la relación sexual. Trchomoniasis: La tricomoniasis es causada por un protozoo unicelular llamado Trichomonas vaginalis. HELMINTOS El término helminto. protozoo flagelado que tiene por hábitat el intestino delgado. Ascariosis Página 70 . Comúnmente los gusanos residen en la vía gastrointestinal pero también se pueden encontrar en el hígado. que significa gusano.

caracterizado por su forma lanceolada. una bucal y otra ventral. pero con menos precisión.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA La ascariosis es una infestación parasitaria provocada por el helminto o lombriz intestinal Ascaris lumbricoides. y las hembras adultas de 25 a 35 cm. La ascariosis es la infección humana provocada por lombrices más frecuente en el mundo. incluido el hombre. Es parásito de los canales biliares y la vesícula biliar de herbívoros y omnívoros. como oxiuriasis. un molusco gasterópodo anfibio y un mamífero. Las lombrices macho adultas miden de 15 a 25 cm de longitud. Página 71 . Enterobiasis La enterobiasis es una infección por el verme Enterobius vermicularis. en referencia a la familia Oxyurudae a la que pertenece el género Enterobius. Fasciolasis Fasciola estodos o duela del hígado es una especie de platelminto trematodo (duela) de la subclase Digenea. la fasciolasis (o fasciolosis). Se trata de un nematodo parásito del orden Rhabditida. con dos ventosas. que es considerada como una de las enfermedades parasitarias más importantes del mundo de los rumiantes domésticos. y un ciclo biológico con dos generaciones (digeneo) en dos hospedadores. es el agente causal de una de las parasitosis más difundidas del ganado. La enfermedad suele referirse.

es decir la forma larvaria o intermedia de la T. El ser humano puede ser también hospedero accidental del metacestodo. porque. Página 72 . en cuyo caso se desarrolla la enfermedad conocida como cistecercosis. requieren de un huésped intermediario para cumplir su ciclo biológico: el cerdo y el jabalí. comúnmente conocidas como “lombrices solitarias”. dado su gran tamaño. En el ser humano la teniasis es producida por Taenia solium o Taenia saginata. en el caso de la Taenia solium. suele encontrarse un único individuo parásito en el intestino de las personas infestadas. Las tenias. y el ganado vacuno para la Taenia saginata.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Fasciola hepática Teniasis La teniasis es una enfermedad parasitaria intestinal causada por las formas adultas de estodos del género Taenia. cuyos adultos son hermafroditas. solium.

la enfermedad se presenta en todo el mundo.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Himenolepiasis Himenolepiasis. Los huevos de estos gusanos son consumidos por insectos. infección por la tenia enana. de manera que la infección puede persistir durante años. En una persona infectada. Los humanos y otros animales resultan infectados cuando voluntaria o involuntariamente consumen material contaminado por insectos. el gusano puede completar su ciclo total de vida en el intestino. Hymenolepis nana Hymenolepis diminuta Página 73 . estas infecciones eran comunes en el sudeste de los Estados Unidos y han sido descritas en ambientes de hacinamiento y en personas recluidas en instituciones. La hymenolepis habita en los climas cálidos y es común en el sur de los Estados Unidos. Anteriormente. hymenolepis nana. las infecciones con Hymenolepis nana son mucho más comunes que las infecciones con Hymenolepis diminuta. En los humanos. tenia de la rata o infección por tenia es la infestación por una de las dos especies de tenia: Hymenolepis nana o Hymenolepis diminuta. Sin embargo.

que consisten en la eliminación de la cutícula. los que presentan una organización corporal muy particular en que es difícil diferenciar las regiones. Var.ventral cuatro pares de patas. revestimiento externo del ectoesqueleto que no tiene elasticidad. presentan un cuerpo globoso en que se pueden distinguir. el que comprende los quelíceros trisegmentados conformando pinzas y lateralmente a estos están lo pedipalpos. Puede Página 74 . causa la sarna humana. estructuras que otorgan el nombre al Phylum.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Artrópodos Los artrópodos son animales invertebrados con patas articuladas. Los quelíceros de las especies de ácaros predatores sirven para triturar. una porción anterior pequeña denominado gnathosoma o capítulo. La parte posterior denominada idiosoma. pero en especies parásitas están modificados para picar. Hominis. El desarrollo de los artrópodos desde huevos a adultos. Esta última cuando reposa se halla en la vestimenta. pero otras especies de ácaros también pueden acarosis. el que se presenta en dos variedades. El cuerpo está dividido en tres regiones que pueden estar diferenciados o no. Capitis y Pediculus humanus var. Cada una de estas variedades se localiza en la cabeza y en el cuerpo. Cuando están claramente diferenciadas las regiones. En el primer caso tenemos como ejemplo a los insectos y el segundo caso se hallan por ejemplo las arañas. Pediculosis Comprende al piojo del hombre Pediculus humanus. Escabiosis La especie Sarcoptes scabiei. Corporis (conocido por algunos autores como vestimenta) y que trasmite en nuestro país a Rickettsia prowasecki bacteria que ocasiona el tifo epidémico. las dos primeras regiones pueden estar fusionadas constituyendo el cefalotórax y abdomen. Un caso aparte lo constituyen los ácaros y las garrapatas. Algunos grupos presentan variación en el aspecto externo durante su desarrollo Ácaros Los ácaros que son de tamaño diminuto y algunos microscópicos. sin embargo. respectivamente. al igual que las garrapatas que son relativamente grandes. Pediculus humanus var. tiene en la parte antero. se efectúa a través de las mudas. ellas son cabeza. tórax y abdomen.

sin embargo. su infestación es tratada por algunos autores como Ptiriasis.MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA comprenderse dentro de la pediculosis al piojo de la zona pública o ladilla Phthirus pubis. ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ _____________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ _____________________________________ Página 75 .

MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ _____________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ _____________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ _____________________________________ Página 76 .

MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Cuestionario: ¿Qué tipo de protozoarios están asociados a diarreas? ¿Qué tipo de histoparásitos se conocen en la actualidad? ¿Qué especies de Plasmodium son causantes de malaria en el Perú? ¿A qué se debe la cistecercosis? ¿A qué se debe la babesiosis? Página 77 .

MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Ed. 16a edición. Moreno S. Microbiología médica. Allen S. Klein DA. 2003. 2007 10. Ingrahan J. 408p. Brock Biología de los Microorganismos. Ingrahan C. 6ª edición. Editorial Reverte 1999. Parker J. 2008 7. Parasitología médica. Basualdo JA. Arenas R. México. Stephen M.R. Ed. Koneman EW. 2006. 2005. Case CL. 9. 417 p. 1628 p. Médica Panamericana. Página 78 . ISBN: 9788479039219 3. 383 p. Tortora GJ. 790 p. 1015 p. Funke BR. Madrid. Editorial McGraw-Hill Interamericana. Martinco J. Editorial McGraw Hill Mexico. 6. Rodríguez EG. Melnick y Adelberg. 2003.L España 2006. Tratado SEIMC Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica 2ª Edición. De Torres RA. Ausina V. Madigan M. 4. Rosenthal KS. Batel J. Editorial Panamericana. 10ª Edición. 5. Pfaller MA. Microbiología Médica de Jawetz. Buenos aires. 2009. 8. 2. Editorial Pearson. Coto CE. Harley JP. Madrid. 2013. Introducción a la Microbiología 1ª Edición Barcelona. Elsevier España. 11. Murray PR. Editorial El Manual Moderno. Micología médica ilustrada 4ª edición. 9na edición. 1537 p. Microbiología. Editorial Manual Moderno. 1ª edición. 2013. Prescott LM. Médica Panamericana. 5ª edición. Koneman Diasgnóstico microbiológico. Brooks G. Introducción a la Microbiología. Microbiología Biomédica 2a edición Editorial Atlante S.

MANUAL DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA ANEXOS Imágenes de referencia Micología Alternaria Cladophialophora Cunninghamella Aspergillus niger Aspergillus Cunninghamella Página 79 .

MANUAL DE PRÁCTICAS Curvularia Lichtheimia Microsporum canis MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Exserohilum Histoplasma capsulatum Mucor Página 80 .

MANUAL DE PRÁCTICAS Nigrospora Sporothrix Epidermophyton floccosum MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Scopulariopsis Syncephalastrum Trichoderma Página 81 .

MANUAL DE PRÁCTICAS Trichophyton mentagrophytes Candida albicans MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Trichophyton tonsurans Rhizopus Página 82 .