LOS MEDIOS DE CULTIVO

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos
es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en
el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.
Un medio de cultivo consta de un gel o una solución que cuenta con los
nutrientes
necesarios
para
permitir,
en
condiciones
favorables
de pH y temperatura, el crecimiento de virus, microorganismos, células, tejidos
vegetales o incluso pequeñas plantas. Según lo que se quiera hacer crecer, el
medio requerirá unas u otras condiciones. Generalmente se presentan
desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya
preparados pueden encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido. El
objetivo último del cultivo es variado: antibiograma, identificación,
multiplicación. Uno de los sistemas más importantes para la identificación de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias
artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen
los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de
cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de
humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de
acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
Los virus, por ejemplo, son obligados parásitos intracelulares, por lo que
necesitan un medio que contenga células vivas.

1. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo pueden clasificarse según diferentes criterios, pero
los más importantes son aquellos que se basan en:
a) Su consistencia
b) Su utilización
c) Su composición
d) Su origen

SEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA).
1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado,
denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es

utilizada para electroforesis en gel. 3) Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos. Se trata de una molécula insoluble enagua pero soluble en agua caliente. aunque los más importantes son: agar comercial para la industria alimenticia. Agar-agar:Es un polímero de azúcares obtenido de algas marinas. El medio más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar común. el agar Columbia. compuesto principalmente de extracto de carne. por lo que es importante la ausencia de metales tóxicos.el llamado caldo nutritivo. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido alrededor de los 45ºC. peptona y agua. Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias SEGÚN SU UTILIZACIÓN. El agar puede utilizarse para diferentes fines. se utiliza en trabajo microbiológico.5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39ºC y nose funde por debajo de 85ºC. y además su uso está muy limitado porque su punto de fusión es bajo (licúa a temperatura ambiente) razón por la que no puede utilizarse para cultivos a 37ºC. 2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos. Los más utilizados son la gelatina y el agar. incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. libre de ácido pirúvico. agregándoles un agente gelificante. que es la tempera óptima de crecimiento para muchos microorganismos. los dividió en dos grupos:agarosa. que resulta de la adición de agar al caldo nutritivo. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración. en 1937. con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. una solución al 1.agaropectina. Araki. Gelatina: Es una proteína animal obtenida de los huesos. agar bacteriológico. 2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que. La proporción de agarosa a agaropectina en el agar varía según el alga de origen. además de las sustancias nutritivas normales. agregando a éstos un agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Este . agares purificados y agarosa. etc. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias. Aunque el agar es una mezcla de polisacáridos. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce. 1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgánicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un microorganismo. y. con poco sulfato. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja.

bilis. que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.E. También lo son el C. necesita cistina y cisteína para su crecimiento. ej. el medio de Simmons y en general. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adición de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de una población determinada.enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos (sangre. Actualmente están apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios específicos de identificación para ciertos microorganismos. etc. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. 4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana. 5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies.) que aportan dichos factores. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. se denomina inhibidor. son medios utilizados en identificación. Isovitalex. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito. etc.L. El gonococo. 3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. el SS (que es doblemente diferencial). etc). Los medios inhibidores podrían considerarse como una variante más restrictiva de los medios selectivos. utilizados para identificar los gérmenes urinarios más . Polivitex. con lo cual se consigue simultáneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificación. huevo. el agar sangre (tipo de hemólisis). La adición de un azúcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. 6) Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. El agar Kligler. cualquier medio al que se le haya añadido un elemento diferencial de un microorganismo. (lactosa +/lactosa -). Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de los microorganismos. por ejemplo. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). el sustrato específico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. Son ejemplos de esto último los medios CPS ID3 o Uriline ID(Biomerieux). leche.D. suero.

etc. y más raramente de vegetales.Ciertos gérmenes no crecen en ningún medio por muy enriquecido que esté éste. donde la reproductibilidad no podrá ser exacta.). El caldoinfusión cerebro-corazón (BHI). resultando un medio de composición perfectamente definida. Los medios más adecuados para la multiplicación suelen ser líquidos. por diversas razones nos interese mantener.1%. En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgánico complejo (extracto de levadura. haciéndolo exclusivamente en células vivas con unas características . 2) Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas. Según las sustancias que entren a formar parte en su composición. en la investigación y en la industria. Su composición no es exactamente definida. b) mediante liofilización de una suspensión bacteriana. es un ejemplo típico de estos medios. y los más empleados se preparan a partir de tejidos animales. Son ejemplos típicos de este grupo los medios de Stuart-Amies. En la práctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los más empleados. 7) Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado. Se emplean en la obtención de vacunas. ATENDIENDO A SU COMPOSICIÓN. y por consiguiente no es rigurosamente constante. extracto de tejidos. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el Laboratorio de Microbiología. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas: a) haciendo pases periódicos de placa a placa. los medios de cultivo pueden ser clasificados en: 1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados. Su utilización debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo).importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilización de sustratos cromogénicos específicos. y c) congelando las cepas en leche descremada estéril al 0. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales.Cary-Blair. etc. 9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden sembrarse inmediatamente. 3) Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento exigidos para ciertos gérmenes hace que la fabricación de un medio sintético para estos gérmenes sea imposible o demasiado cara. 8) Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que.

Rickettsias. las Chlamydias.La sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%. que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies (caballo. etc. MEDIOS DE CULTIVO COMUNES. conejo. pero sí puede añadir factores inhibidores del crecimiento bacteriano presentes en el suero. Agar sangre: Se utiliza para el crecimiento de estreptococos. sí son los más conocidos en un laboratorio de Microbiología. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de gérmenes que no presentan exigencias particulares. La adición de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que están en el interior de los hematíes. aparte de los virus. y aunque no vamos a enumerarlos todos. Para la preparación del agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. b. pues facilitan las reacciones hemolíticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados gérmenes. b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cuali y cuantitativamente. humana). a. Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base.determinadas. No es diferencial. que son termolábiles. El agar . 2. Ejemplos de este tipo son. Son los más corrientemente utilizados. como por ejemplo extracto de levadura. Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras. Por esta razón el agar chocolate contiene hemoglobina. SEGÚN SU ORIGEN: a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente. c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo.

En su composición lleva un azúcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferencial. apareciendo del mismo color que el medio subyacente (naranja). denominadas de forma diferente según las casas comerciales (Polivitex. Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el aislamiento e identificación de enterobacterias. La presencia de lactosa en su composición le confiere el carácter de medio diferencial. Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. El agar SS es doblemente diferencial. Los gérmenes que fermenten la lactosa producen una acidificación del medio que hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes. nos muestra los gérmenes que son capaces de producir ácido sulfhídrico.L. Isovitalex. Las colonias lactosa positivas aparecerán de color amarillo y las lactosa negativas lo harán con un color verdoso.D. aunque la interpretación sea diferente al anterior medio por la incorporación de otro indicador: el azul de bromotimol. que se manifiesta como un . pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. c. Agar S.Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la lactosa por lo que este medio es excelente para descartar todas las colonias que no cumplan este requisito. (Cistina Lactosa Electrólito Deficiente) está recomendado para el recuento e identificación presuntiva de los microorganismos de las vías urinarias. etc. utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocolate enriquecido al cual se ha añadido unamezcla de tres antibióticos específicos que impedirán el crecimiento del resto de la flora acompañante.:El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir de muestras fecales.: El medio C.) contienen más de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. Estas mezclas.D. porque además de indicarnos el comportamiento de los gérmenes con relación a la lactosa. d. blanco o azulado. La presencia de lactosa y rojo de metilo nos permiten diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no lo hacen (incoloras). El medio contiene sales biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y gérmenes Gram positivos. Su bajo contenido en electrolitos evita la invasión de los cultivos por Proteus.E.L. Las colonias lactosa negativas serán incoloras. El agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios más enriquecidos si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. Es un medio inhibidor de los gérmenes Gram positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias por su contenido en sales biliares.S. Un ejemplo clásico es el Thayer-Martin.E. Agar C.chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos ymeningococos) y Haemophilus.

anaerobiosy microaerófilos. al aumentar. que neutralizan el efecto inhibidor de las sales biliares respecto a ciertos gérmenes de cultivo delicado (Shigella en particular). obteniéndose colonias más numerosas y voluminosas que en los medios selectivos usuales. Así. La presencia de tres azúcares (lactosa. sacarosa y salicilina) permiten ampliar el poder diferencial de este medio. h. . Agar Hektoen : Es un medio más diferencial y menos selectivo que el agar SS. sobre E. A él nos referiremos más ampliamente en el capítulo correspondiente. f. coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter. p. esencialmente. Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de gérmenes exigentes. ej) Granada. igual que el de Shigella. Neisseria o Streptococcus. y será exclusivamente a estas colonias a quienes se hagan las pruebas bioquímicas confirmatorias de esta especie. azulo marrón). g. mediante la utilización de un sustrato cromogénico específico de este microorganismo. Otros microorganismos diferentes requieren los sistemas de identificación habituales (API. que permite la identificación de E. con la simple visualización del cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos. Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. una colonia incolora y con un punto negro central es sospechosa de Salmonella. C. se manifiesta por un color rosa del medio.precipitado de color negro en el centro de la colonia. Islam o New GBS: Medios utilizados para detección de Streptococcus agalactiae. e. Hay que señalar que el vibrión colérico crece bien en este medio. Por esta razón debe utilizarse siempre junto con otro medio menos inhibidor como el Hektoen. mirabilisy E.El crecimiento de Salmonella es excelente. Es un medio muy enriquecido. El agar SS es un medio muy inhibidor que a veces impide incluso el crecimiento de ciertas especies de Salmonella y sobre todo de Shigella.P. como Brucella. P. coli. La inhibición tiene lugar. Tiene un bajo potencial redox que. Las cualidades del agar Hektoen se deben a su riqueza en peptonas y azúcares. La identificación solo requiere la adición de un reactivo para confirmar o descartar la especie sospechada. igual que el SS. pero no es diferencial. Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la realización de los antibiogramas o pruebas de sensibilidada los antimicrobianos. Este medio es capaz de detectar los gérmenes formadores de SH2.S. Permite el cultivo de aerobios. faecalis. ID3. : Medio cromogénico desarrollado por Biomerieux. Caldo tioglicolato con resazurina: Es un medio recomendado para controles de esterilidad.

investigar la formación de gas y comprobar si el microorganismo puede producir sulfatoferroso a partir del tiosulfato sódico. n. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en diferencial: así se puede identificar presuntivamente el Staphylococcus aureus. Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el cultivo de anaerobios. Agar Levine ó EMB (Eosina azul de metileno): Se utiliza para aislamiento de enterobacterias. . Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos. pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia muy bien a E. k. podemos ir adelantando que se tratade un medio diferencial que permite conocer el comportamiento del microorganismo ante dos azúcares (glucosa y lactosa). coli. Medio de Loeffler: Es un medio específico para el cultivo de Corynebacterium difteriae. inhibiendo Gram positivos y la mayoría de enterobacterias. p. Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS):Similar al agar SS. m. j. q. Agar Gardnerella:Agar con sangre humana más una mezcla de antibióticos que permiten la observación de colonias betahemolíticas características de Gardnerella vaginalis r. o.i. Agar Cetrimida. Agar Kligler: Medio específico para pruebas de identificación de enterobacterias. l. Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales creciendo a 42º C en microaerofilia. Aunque de él hablaremos conmás detenimiento en el capítulo de pruebas de identificación bacteriana. ya que estegérmen crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias amarillas).El segundo pone además de manifiesto la pigmentación fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV. Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa positivos. a la vez que los diferencia del resto. Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas. cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo metálico característico. Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para enriquecimiento de Salmonellas. Es un medio diferencial e inhibidor a la vez. Su elevado contenido en cloruro sódico permite la inhibición de la mayoría de los otros gérmenes.

esto es debido a que el Ca puede ligar varios grupos de cadenas peptídicas haciéndolas más resistentes a la desnaturalización. Se dividen en métodos a) Físicos b) Químicos. Löwenstein-Jensen:Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis. botulinum. hay ruptura de esta en las uniones disulfuro formando cadenas peptídicas móviles o activas que se reactivan formando nuevas proteínas (desnaturalización) cuando menos agua tenga la proteína.coli se deseca y es más resistente al calor. algunos agentes químicos (muy pocos) y ciertos filtros y radiaciones U. Para medios de cultivo se usan altas temperaturas. t. Cl. Se necesita más temperatura en calor seco que con calor húmedo. En un medio de cultivo simple influye el contenido proteico.) que pueden revestir a las bacterias. 3. Las condiciones y mecanismos por las que actuaban no eran las mismas. . Se hablaba de un mecanismo de oxidación por calor seco además de efectos tóxicos por elevada concentración de electrolitos y mecanismos de coagulación y desnaturalización de proteínas y alteración funcional de la membrana celular por calor húmedo. el Mg. Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract): Se utiliza para el aislamiento de bacterias del género Legionella. Contiene verde malaquita parainhibir parcialmente el crecimiento de otras bacterias. grasas. La presencia de sales aumenta la resistencia al calor.V. hace falta más energía para romper la molécula. Fe y Ca aumenta la resistencia de las esporas en algunas bacterias como por ej. El huevo se utiliza como sustancia de enriquecimiento. e impedir la llegada del calor a ellas. E. En 1881 se hablaba de la diferencia que había en el uso de calor seco y húmedo como mecanismo de destrucción de microorganismos.s. hígado. vapor saturado a presión. etc. ESTERILIZACIÓN DEL MEDIO Es un procedimiento que engloba un término absoluto que significa la total destrucción o remoción de toda forma de vida. sales y componentes más groseros (como carne. En calor seco hay más alta estabilidad proteica que con calor húmedo por ej. Pretch y Hansen demostraron que cuando se calienta una proteína con agua. Calor y filtros esterilizantes (Medios de Cultivo) Calor: La muerte térmica de un microorganismo es el resultado de la inactivación de proteínas celulares esenciales o enzimas y hay alta correlación entre altas temperaturas y la inactivación celular o proteica.

el vapor se sobrecalienta. a 80ºC 5 a 10 minutos se destruyen las formas vegetativas de bacterias y hongos.botulinium 121ºC 4 minutos. aceites.Incineración (residuos) . El vapor . es seco y actúa como calor (de esterilización) a seco.Llama directa (mechero) . sumando 106 a la presión en libras. polvos que son impermeables al vapor. Calor seco: . Si el vapor sobrecalentado no encuentra ningún objeto frío. (agua y vapor) Hay tanta agua que pasa a vapor. En forma práctica se puede calcular la temperatura en relación con la presión en libras. es menor que el latente liberado por la condensación del vapor saturado. se usa para material de vidrio. Bacilus estearothermophilus 121ºC 12 minutos. Por ejemplo: 106+15= 121ºC. Calor Húmedo: . 2. Calor latente: para llevar un Lt. Para esporas de Cl. como vapor que vuelve a agua. un suave sobre calentamiento no necesariamente entrañaría una mala esterilización pero es claramente una desventaja. .1.Vapor fluente – Tyndalización 80-100ºC 3 días. Calor sensible: cantidad de calor necesario para llevar 1 Lt. Calor tiempos mínimos de esterilización El calor húmedo es el preferido porque su acción letal es más rápida por ej. gelatinas.Vapor a presión – autoclave (la totalidad del material a esterilizar debe estar en contacto con el vapor). Cuando el vapor condensa cede 540 calorías La línea indica el equilibrio de las dos fases.Ebullición. Ahora bien. Se utiliza para medios de cultivo en producción de vacunas. de agua a ebullición (80 calorías). El vapor esta sobresaturado de agua. de agua hirviendo a vapor necesitamos 540 calorías (casi 7 veces más).Aire caliente (hornos) Con calor seco se requieren temperaturas más altas y mayor tiempo. la esterilización no se realiza porque la cantidad de calor liberado por este. . Si le saco agua del sistema y aumento la temperatura.

. lo que modificará la temperatura del sistema ya que 7.Tiempo de calentamiento (en autoclave) de aproximadamente 20’ desde 20ºC (temperatura ambiente) a 121ºC. y el manómetro nos indica 15 libras de presión correspondieran a 7. 2. El diagrama de fases indica que hay vapor saturado a 121ºC de temperatura y a 15 lb.. ESTERILIZACIÓN POR AUTOCLAVE CICLO DE ESTERILIZACIÓN 1. Las autoclaves grandes tienen un sistema de bombas de vacío para desalojar rápidamente todo el aire.5ºC y no 121ºC que debieran existir con 15 libras de vapor saturado solamente.Tiempo de alojamiento: es el tiempo en que va a estar el objeto a esa temperatura 121ºC ..5 libras de aire.sobrecalentado es menor en efectividad frente a las esporas pero más efectivo que el calor seco. Esta temperatura es solamente para presión de vapor puro y no para vapor mezclado con aire. en la cámara interna en autoclave. Si existe una mezcla de vapor y aire en partes iguales. de presión sobre la presión atmosférica.5 libras de vapor corresponden a 113.5 libras de vapor y 7. por ejemplo.Tiempo de penetración: tiempo que tarda el calor en llegar a todo el objeto (121ºC) 3.

CULTIVO EN PLACA: Si las bacterias se pueden separar por dilución y después se ponen en un medio sólido para que den lugar a colonias. Las placas estriadas se usan fundamentalmente para aislar cultivos puros en muestras que contienen flora mixta. De acuerdo al procedimiento de inoculación puede emplearse el asa o la aguja para inoculación. tubos inclinados y por picadura serán demostrados antes de que se lleven a cabo. dependiendo de la bacteria que se desee crecer. Inoculación. Existen muchas fórmulas de caldos. CULTIVO EN TUBO: CALDOS Y SÓLIDOS Los medios en tubo pueden presentarse sólidos en forma inclinada. Generalmente se emplea el asa para inocular especímenes en placa y la aguja de inoculación para la transferencia de cultivos puros de placas a tubos con medio sólido. estas tendrán una medida. caldo o bien como medios semisólidos. el tubo se pone a enfriar en posición inclinada.4. forma.. Los procedimientos para inocular caldos. . de manera que al solidificar queda la superficie inclinada. Los tubos inclinados son útiles para el cultivo de aerobios y anaerobios facultativos. PRODUCCIÓN DE CULTIVO INOCULO. En los tubos con medio sólido. El método de estría cruzada consiste en la dilución de un cultivo mediante el estriado en la superficie de un medio sólido. color y textura dependiendo de cada microorganismo lo cual proporcionará una valiosa ayuda en su identificación. Los microorganismos se van quedando al hacer las estrías en diferentes partes de la superficie del medio de tal forma que en un momento dado quedarán células individuales o bien unidades formadoras de colonias. en una caja Petri. que al multiplicarse darán lugar a una colonia. también es útil para el estudio de la morfología colonial y propiedades hemolíticas de las bacterias. Las características del cultivo tales como pigmento son fáciles de observar en este tipo de cultivo.Tiempo de enfriamiento: de 121ºC a 60ºC 4.

estimasterol y ergosterol mediante la adición de 3. Además. i. extracción. El solvente más empleado en este tipo de procesos es el dióxido de carbono supercrítico. Estas dos etapas no son mutuamente excluyentes y los límites entre las mismas están definidos de manera arbitraria y no muy precisa. extracción. el uso de pequeñas cantidades de un solvente puede mejorar considerablemente la solubilidad de las biomoléculas y por ejemplo se ha obtenido una mejora de varias veces en la solubilización de colesterol. tratamiento iónico. EXTRACCIÓN DEL PRODUCTO Y SU PURIFICACIÓN. ultrafiltración. las tasas de flujo por unidad de área tienden a ser bajas debido a que el transporte a través de la membrana es forzado por una diferencia de concentración. los métodos primarios tienen diversos grados de aplicación en las industrias de bioprocesamiento.5. Las etapas de aislamiento final. electrodiálisis. el cual permite la necesaria limpieza y con el cual se logra incrementar las tasas de extracción normales. Purificación de los productos Las etapas de purificación finales de los procesos de bioseparación conllevan la separación de las micromoléculas de las macromoléculas. un proceso que ha recibido mucha atención es la extracción de biomoléculas utilizando dos fases acuosas . cromatografía de intercambio iónico y cromatografía de afinidad. En el caso de la electrodiálisis se utiliza un campo eléctrico para mejorar el movimiento de los iones a través de una serie de membranas. cromatrografía de permeación por gel y cromatografía de alto rendimiento. La extracción con fluidos supercríticos es un método de separación que promete mucho en los bioprocesos. En los últimos años. al solvente dióxido de carbono (Wong y Johnston. Estas etapas pueden clasificarse como una etapa de purificación primaria. En las etapas primarias de purificación se incluyen el uso de diálisis. seguida de una etapa final de aislamiento. Por ejemplo. incluyen la precipitación. seguidas de la separación entre las macromoléculas.5 % molar de etanol o metanol. la diálisis y la electrodiálisis se han usadas durante muchos años en las aplicaciones bioquímicas y biomédicas y en las mismas. 1986).

por ejemplo. con lo cual pueden surgir dos fases inmiscibles en determinadas condiciones.inmiscibles. las que se obtienen. añadiendo al agua materiales como dextrana y polietileno. .