http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/18conjuga.

htm
https://books.google.com.mx/books?
id=WuXjJltGSdsC&pg=PA506&lpg=PA506&dq=genes+rec&source=bl&ots=KKB
1BCzbAg&sig=ShvHLVjGKnpKQLz8AvIA2yTCaU8&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjI
h4LpgcDOAhUCJCYKHaUZBfgQ6AEIJzAB#v=onepage&q=hfr&f=false
Romero Cabello
https://books.google.com.mx/books?
id=Wv026CUhR6YC&pg=PA659&lpg=PA659&dq=genes+rec&source=bl&ots=n
5uqkAzHJ8&sig=1N9A36EfZDP6uvDOMdfmYbnNn0&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwil5djKgsDOAhWHYiYKHXzLAUoQ6AE
IRTAF#v=onepage&q=genes%20rec&f=false

http://www.microcsalud.us.es/web/docencia/grado/biomedicina-basicaexp/virologia/practicas/gion-practica-virologia-ciclo-01.pdf

Glosario
http://www.biorom.uma.es/contenido/Glosario/D.html
Bacteriófago M13:
http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/DNA-recombinante/Tecnica%20DNA
%20recombinante.pdf

duplex
: bicatenario,
híbrido.
Adjetivo que se aplica a los ácidos nucleicos de dos cadenas o hebras. Según la clase de nucleótidos que componen
estas
cadenas
(ribonucleótidos,
desoxirribonucleótidos)
admite
distintas
traducciones:
a) duplex RNA-DNA (ADN-ARN híbrido, doble hélice híbrida) cuando el ácido nucleico está formado por una hebra
de
ADN
y
otra
de
ARN;
b) duplex DNA (ADN bicatenario) cuando el ácido nucleico está formado por dos hebras de ADN (véase doublestranded
DNA);
c) duplex RNA (ARN bicatenario) cuando el ácido nucleico está formado por dos hebras de ARN (véase doublestranded
RNA).
Observación: los libros de texto también recogen las variantes «doble» y «dúplex». No son incorrectas desde el
punto de vista semántico, pero sí mucho menos frecuentes que el adjetivo «bicatenario».

BACTERIÓFAGO M13

El bacteriofago M13 tiene una cápside de tipo filamentoso dentro de la
cual se encuentra una molécula circular de ADN de hélice sencilla de
6.400 nucleotidos. Al igual que ØX174, también pasa por una forma
replicativa dúplex.

Fago filamentoso M13

Esquema del bacteriofago M13

Fagos con de ADN monocatenario. El fago M13 como herramienta en
biología molecular.
El bacteriófago M13 destaca entre los fagos utilizados en biología molecular. Se
trata de un fago de cadena sencilla circular. A diferencia del fago , este fago
infectan cepas de E. coli a través del Pili, por ello la cepa E. coli Dh5 F´ resulta
un receptor idóneo. Dentro de los fagos con ssDNA nos encontramos 2 familias:
Inoviridae (fago filamentoso M13, que infecta Enterobacterias ) y Microviridae
(Enterofago X174). El fago M13 es un bacteriófago filamentoso de 900nm de
longitud y 6.5nm de ancho que contiene una molécula de ADN circular
monocatenario de sentido positivo encapsulado por ~2300 copias de la
proteína de la capside gp8 más cinco copias de 4 proteinas menores. El ADN se
extiende en el interior a lo largo del eje longitudinal de la partícula. Las
proteínas menores están implicadas en el inicio del ensamblaje y estabilidad de
la partícula. Las proteínas gp3 y gp6 participan en la unión a la célula huésped.

Cuando el fago M13 infecta a una célula bacteriana, la cadena sencilla (cadena
+) se replica y produce una molécula de doble cadena denominada forma
replicativa (RF). Las moléculas RF pueden considerarse similares a los
plásmidos, pudiéndose insertar DNA exógeno en sitios de restricción únicos
presentes en el DNA del fago. Cuando se reinsertan en células bacterianas, las
moléculas RF se replican y producen cadenas sencillas (+), en las que hay una
cadena del DNA insertado. La célula hace salir los clones de DNA de cadena
sencilla que produce M13, que pueden recuperarse y utilizarse directamente
para su secuenciación, o como molde para alteraciones mutacionales de la
secuencia clonada.

coli Dh5 F´)  Poseen DNA monocatenario circular (+). El DNA (-) producido puede utilizarse para sintetizar mRNA.  El ciclo replicativo es complejo: mecanismo de CIRCULO RODANTE.  En algunos casos puede integrarse en el genoma bacteriano.  Se forman ciertos loops por apareamientos de bases complementarias. (E.  Hay solapamiento de genes  Durante la replicación. se forman FORMAS REPLICATIVAS de dsDNA. Tiene 6 nm de diámetro y 860 nm de longitud.Características del Fago M13:  Simetría helicoidal.  Infectan a través del Pili. .

produciendo fagos continuamente. en las que hay una cadena del DNA insertado. así como en ensayos de clonación de fragmentos de gran tamaño. pudiéndose insertar DNA exógeno en sitios de restricción únicos presentes en el DNA del fago.  Este fago ha sido muy utilizado en BIOLOGIA MOLECULAR. Cuando M13 infecta a una célula bacteriana. entre los que destaca el fago de cadena sencilla M13. La célula hace salir los clones de DNA de cadena sencilla que produce M13. Cuando se reinsertan en células bacterianas. en ensayos de mutagénesis. . la cadena sencilla (cadena +) se replica y produce una molécula de doble cadena denominada forma replicativa (RF). que pueden recuperarse y utilizarse directamente para su secuenciación. Permite la secuenciación de genes por el método de Sanger. se puede utilizar como vector de expresión. También se utilizan otros bacteriófagos como vectores. Las moléculas RF pueden considerarse similares a los plásmidos. o como molde para alteraciones mutacionales de la secuencia clonada. Puede liberarse de la célula sin lisarla. las moléculas RF se replican y producen cadenas sencillas (+).

con un ADN en forma de anillo de una única . Los avances en las técnicas de síntesis de DNA han acelerado los progresos experimentados en el estudio de las funciones de las proteínas y de la expresión génica. puede introducirse el gen mutado en una bacteria huésped y clonarse. esto se realizaba mediante la modificación química de aminoácidos individuales o mediante inducción de mutaciones en el gen que codifica la proteína objeto de estudio. por otro lado. Sin embargo. hasta hace unos años no siempre era posible producir la mutación adecuada en la localización del gen que se deseaba. la modificación química de una proteína no siempre es especifica. con lo que la polimerasa extiende el olignucleótido y copia el resto del gen diana para producir una nueva copia del gen con la mutación deseada. Virus M13 El M13 es un fago filamentoso. posteriormente se amplifica el complejo mediante PCR. en ella se sintetiza un oligonucleótido de unas 20 bases que contiene el cambio de secuencia deseado. Posteriormente se permite que dicho oligonucleótido alterado con la mutación objeto de estudio hibride con una copia monocatenaria del gen salvaje original completo.Mutagénesis dirigida. Hasta hace unos años. Una de las formas más efectiva de estudiar la relación entre la estructura y la función proteicas consiste en alterar una porción determinada de la proteína y observar los cambios funcionales que se producen. Se trata de un virus en forma de hilo (900 nm de longitud. con lo que obtendremos grandes cantidades de una proteína mutante para el estudio de su función. Si unimos el gen a un fago de DNA monocatenario como es el caso del fago M13. Estas dificultades han sido superadas en los últimos años gracias a la técnica de la mutagénesis dirigida. con sólo 9 nm de diámetro). ya que pueden verse alterados varios aminoácidos y no sólo el que se desea alterar.

M13 es muy útil por la posibilidad de obtener ADN en forma de hebras simples. sin embargo. Por generación se originan aproximadamente mil nuevos fagos M13. se pueden cultivar y cosechar fácilmente en grandes cantidades. más lentamente que las células no infectadas. Las hebras simples de los genes clonados se necesitan especialmente para la secuenciación del ADN y la mutagenésis in vitro. La bacteria crece y se divide. .hebra (también denominada hebra +) y una cubierta proteica de 2710 subunidades proteicas idénticas. coli a través del pilus. Las células hijas liberan todavía fagos M13. El virus penetra E. Mapa genético del fago M13 El ADN de M13 no se integra (como en el fago lambda) en el genoma bacteriano. Puesto que el huésped no muere. No provoca tampoco la lisis de las células. que posibilita el intercambio de ADN entre bacterias.

.

.

.

La infección con bacteriófagos filamentosos no es letal para las bacterias. esta molécula se encuentra encapsulada en una cubierta proteica formada por aproximadamente 2700 copias de la proteína mayor de recubrimiento P8. La proteína de recubrimiento menor P3 permite que el fago se una a un receptor presente en la punta de los pilli del hospedador Escherichia coli. P6. Marrón: Proteína pVI. coli. sin embargo la infección causa placas turbias en los cultivos de E. Fucsia: Proteína pIX. Rojo: Proteína pVII. y encapuchada en los extremos por cinco copias de dos diferentes proteínas de recubrimiento menores (P9. si se ha observado una disminución en la velocidad de reproducción de las células infectadas. Aunque no se trata de un virus lítico. Verde: Proteína pVIII. P3). Clasificación de los virus Grupo: II (Virus ADN monocatenario) Familia: Inoviridae Género: Inovirus Especie: Fago M13 de Enterobacteria [editar datos en Wikidata] El fago M13 es un bacteriófago filamentoso compuesto por una única molécula de ADN monocatenario circular la cual tiene aproximadamente 6407 nucleótidos de longitud. Púrpura: ADN monocatenario. Los plásmidos M13 llamados fagémidos son utilizados .Fago M13 Fago M13 Azul: Proteína pIII.

Por ejemplo. entonces p7 y p9 forman el pomo que es posible ver en las microfotografías. típicamente. la cual se encuentra codificada por el gen VIII (o g8) en el genoma del fago. Existen también otras cuatro proteínas en la superficie del fago. coli.4 kb a 221 pb). Aparentemente existe una limitación en la capacidad del fago para contener material genético que está en torno al doble de su contenido normal de ADN. Estructura del fago[editar] La cubierta proteica del fago se encuentra formada primariamente por un ensamble de monómeros de una proteína formada por 50 aminoácidos llamada pVIII (o p8). y en estas condiciones es posible encontrar dentro de la célula hospedadora fagos con una longitud de entre 10 y 20 veces la longitud normal. dos de las cuales han sido extensamente estudiadas. tiene aproximadamente 900 nm de longitud. En uno de los extremos del filamento hay cinco copias de la proteína de superficie pIX (p9) y de su proteína acompañante pVII (p7) que se encuentra más profundamente enclavada en la cubierta proteica del fago. cuando el genoma del fago se muta para reducir el número de bases de ADN (de 6. Un fago M13 de tipo silvestre emplea aproximadamente unas 2700 copias de la proteína p8 para formar la cubierta que. Sin embargo. conteniendo 33 y 32 aminoácidos respectivamente. Sin embargo. sin embargo es posible añadir residuos a la porción terminal de cada una. la deleción del gen que codifica para la proteína p3 del fago previene que este pueda escapar de su hospedador E. provocando que la cubierta de p8 se ajuste para acomodar el genoma reducido. partículas víricas que poseen varias copas del genoma del fago. Si fuera posible comparar a la proteína p8 con el material del cual está formada el asta del bastón que es el fago. Estas proteínas son muy pequeñas. las dimensiones de la cubierta son flexibles y el número de monómeros de p8 utilizados para formarla se pueden ajustar para empacar correctamente el tamaño del genoma de cadena simple que lo forma.1 el número de copias de p8 utilizadas para empacarlo se reduce a menos de 100. y el virus ha sido estudiado por las posibles aplicaciones en nanoestructuras y nanotecnología de los principios que dominan su proceso de encapsulamiento. ya que esta porción se encuentra presente en la .en numerosos procesos de recombinación de ADN.

La ADN polimerasa de la célula hospedadora empieza a sintetizar la cadena complementaria que se denomina "hebra -". Replicación del genoma[editar] El ADN de fago que entra en la célula es de cadena sencilla y se lo suele llamar "hebra +". es además el último punto de contacto con el hospedador cuando la partícula viral abandona la superficie bacteriana. La proteína p3 del extremo del fago se ancla a la proteína To1A del pilus bacteriano permitiéndole al fago transferir su genoma hacia el citoplasma de la bacteria. coli en el momento de la infección. Finalmente la ligasa suelda los dos tramos de ADN recién sintetizados. no se puede producir la replicación del fago. La proteína p3. Apenas penetra en la célula. Sin la presencia de p2. Infección[editar] Los fagos filamentosos utilizan una estructura bacteriana conocida como pilus F para infectar a E. donde las enzimas de la maquinaria metabólica bacteriana convierten el genoma formado por una cadena simple de ADN (llamada cadena positiva o +). Las enzimas de la bacteria hospedadora van completando las cadenas + con su cadena . Esta forma replicativa sirve además de molde para la expresión de los genes virales. ensamble de nuevas partículas virales. Dos productos de los genes del virus cumplen un rol crítico en esta etapa del ciclo de vida del fago: Estos son la proteína pII (p2) que es una endonucleasa y provoca una "muesca" en el genoma viral cuando se encuentra en su forma de doble cadena. En el otro extremo del fago hay cinco copias de la proteína pIII (p3) expuestas en la superficie y de la proteína accesoria pVI (p6) la cual se encuentra un poco menos expuesta. coli. Estas forman el extremo redondeado del fago y son las primeras proteínas en interaccionar con el hospedador E. en la forma replicativa (FR) de ADN doble cadena. Cuando la Pol III encuentra el cebador se disocia del ADN. para posibilitar la iniciación en la replicación de la cadena + y permanece unida al fosfato en el extremo 5' dejando el extremo 3' libre. Ciclo vital del fago[editar] Las etapas generales del ciclo de vida viral son: infección. la ARN polimerasa de la célula hospedadora sintetiza un cebador en el origen de replicación.parte exterior de la cubierta. La síntesis de la cadena .da lugar a un ADN de doble cadena llamado "forma replicativa". y liberación de la progenie de partículas del microorganismo hospedador. replicación del genoma viral. Luego la ADN Pol I con actividad exonucleasa 5'elimina el cebador y llena la brecha.

Ensamble de las partículas virales[editar] La maduración del fago requiere de las proteínas pIV (p4). Estas proteínas en conjunto. p1. Existe además una proteína adicional codificada por el genoma del fago. La proteína Rep del huésped es una helicasa que ayuda a desenredar el ADN en el punto donde se encuentra la muesca. Sin la proteína p10 no se acumulan cadenas +. y de la proteína pXI (p11). ya que el gen que codifica para p10 se encuentra de hecho dentro del gen p2 y la proteína surge de una iniciación diferencial de la transcripción dentro del gen de p2. Esto hace que la manipulación de p10 se encuentre inextricablemente unida a la manipulación de p2 (un verdadero dolor de cabeza desde el punto de vista de la ingeniería) pero esto logra una estructura genética sumamente compacta y eficiente en la naturaleza. p11. pI (p1) codificadas también en el genoma viral. En forma similar un puñado de p1 y p11 (5 o 6 copias de cada una) se ensamblan en la membrana interna de la bacteria. mientras que la vieja se quita. La ADN Pol III del anfitrión utiliza extremo 3' libre como un cebador para la síntesis de una nueva hebra +. que es importante para regular el número de genomas de doble cadena en el hospedador bacteriano. sobre esta última actúa la proteína p2 soldando el extremo 5 'y 3' por medio de una reacción de transesterificación recreando de esta forma una hebra +. Esta proteína se une al ADN de cadena sencilla + y evita que se siga replicando. Esta última es una proteína codificada por el mismo gen pI. p4.complementaria formando de esta manera múltiples copias del ADN viral en su forma de doble cadena. y la evidencia genética sugiere que las porciones C terminales de p1 y p11 interaccionan con la porción N terminal de p4 en el periplasma. La proteína pV (p5) compite con la formación de ADN de doble cadena secuestrando copias sencillas de la cadena + formando un complejo nucleoproteico que servirá de núcleo para la formación de nuevas partículas virales. Lo que resulta particularmente interesante con respecto a esta proteína es que es idéntica a la porción carboxilo terminal de p2. Excresión[editar] . Este proceso continúa hasta que se empieza a acumular p5. En la membrana externa de la bacteria se ensamblan múltiples copias (generalmente entre 12 y 14) de p4 para formar una estructura estable con forma de barril. Una vez completada la replicación se obtienen dos moléculas de ADN: una circular de doble cadena y una de cadena sencilla. y es producto de un punto de iniciación de transcripción diferencial. la pX (p10). forman un complejo en forma de canal a través del cual el fago maduro es secretado de su hospedador bacteriano.

Entonces las proteínas p5 que recubren la hebra de ADN monocatenario son reemplazadas por las proteínas p8 que se encuentran empotradas en la membrana celular de la bacteria y el fago en crecimiento es "hilado" al atravesar el canal formado por p1. p11 y p4. Este proceso de reemplazo de p5 por p8 explica la evidencia de microfagos presentada anteriormente indicando como es que el tamaño de la partícula viral se encuentra determinado por el número de bases empacadas dentro del fago.  La síntesis de ADN RF continúa hasta que pV alcanza una concentración crítica .  La cadena de ADN viral (+) entra al citoplasma. pII.  El producto final es la forma replicativa (RF) parental de ADN. una topoisomerasa tipo II. Una vez que el ADN viral se encuentra completamente recubierto con p8.  La cadena (-) de la RF funciona como molde para la transcripción.Para iniciar la secreción del fago.  Una proteína del fago.  La pII forma cadenas circulares a partir de la cadena (+) viral.  El extremo 3'-hidroxilo actúa como cebador en la creación de una nueva cadena viral. actúa sobre el ADN de doble cadena y cataliza la formación de superenrrollamientos de ADN doble cadena. dos de las proteínas menores de la envoltura: p9 y p7. y previenen la conversiónn de estas a ADN RF.  Se produce un reservorio de moléculas RF de doble cadena como progenie.  La ADN girasa. coli Debajo se listan los pasos involucrados en la replicación del fago M13 en el anfitrión E. Replicación en E.  Los dímeros pV unen a las cadenas simples de ADN recién sintetizadas.  Los ARNm son traducidos a proteínas del fago. interactúan con el complejo formado por ADN monocatenario y p5 a la altura de la región del ADN llamada secuencia de empaque (también conocida como secuencia PS). se finaliza la secresión añadiendo los capuchones p3/p6 y el fago se desprende de la superficie bacteriana. hace una muesca en la cadena RF (+).  Las enzimas bacterianas sintetizan la cadena complementaria (-). coli.

es una herramienta popular para la construcción e investigación de nanoestructuras.3 o para empacar nanotubos en forma de manojos orientados para su utilización en celdas fotovoltaicas. es incapaz de generar las proteínas estructurales necesarias para el ensamblaje del fago y para el empaquetamiento del ADN dentro de él. Por esta razón. La longitud de su genoma no es fijo y por lo tanto es capaz de aceptar ADN extraño sin comprometer la viabilidad del fago. cuya proteína pIII resulta accesible desde el exterior. Cuando las células que contienen el fagémido se superinfectan con M13K07. Este fago contiene un origen de replicación y de codificación para todas las proteínas estructurales necesarias para el montaje de la forma infectiva del fago. Se puede modificar al M13 para obtener diferentes sitios de inserción accesibles. el fago puede ser genéticamente modificado para expresar proteínas diferentes en sus extremos y en su segmento medio. M13 como vector de clonación[editar] Dado que el ADN de M13 es monocatenario. mostró que los fragmentos producidos por la endonucleasa EcoRI pueden ser soldados en un sitio Bam único de los fagos filamentosos f1. la Gp2 producida por los genes del M13K07 reconoce como secuencia de origen de fago a la que se encuentra presente en el fagémido por lo que en consecuencia es capaz de replicarse y de empaquetarse junto con las proteínas estructurales codificadas por el fago auxiliar. Otras investigaciones George Smith. Debido a que el sistema de expresión M13 permite una gran flexibilidad en la localzación y número de proteínas recombinantes que pueden obtenerse del fago. Un vector de clonación particular que explota el ciclo de vida del fago M13 se llama "fagémido". 2 por ejemplo. El fagémido es una molécula circular de ADN de doble cadena de plásmido que contiene un origen de replicación (ori V) y el origen de replicación de M13 pero que no contiene los genes que codifican para las proteínas estructurales del fago.4 .  Los complejos pV-ADN sirven como sustrato para la reacción de ensamble del fago. se utiliza el fago auxiliar M13K07. Debido a que el fagémido contiene solo el origen de replicación de fago. En un fagémido se puede clonar una secuencia de ADN de interés que se desea que se exprese en una población de células mediante la explotación de la infección por fagos.  Se forman estructuras de pV-ADN de aproximadamente 800 nm de longitud y 8 nm de diámetro. y por lo tanto resultar expresados en el gen III. Esto puede ser utilizado para ensamblar estructuras tales como nanocables de oro u óxido de cobalto para la fabricación de baterías. Éste no es el único sitio Bam existente en el gen III de M13. entre otros. haciéndolo útil en su flexibilidad para el manejo de insertos de diferente tamaño. La replicación del ADN cambia hacia la síntesis de ADN viral (+) de simple cadena. este bacteriófago es un vector conveniente para la clonación de ADN.

MUTANTE SUPRESO RA .

Mutante condicional Mutante que expresa el fenotipo normal bajo determinadas condiciones (permisivas) y el fenotipo mutante bajo otras condiciones (restrictivas). .

«UGA». y «UAA». el primero descubierto.3 4 . como «codón ocre». «UAG».Existen tres codones de terminación. como «codón ópalo». que reciben distintos nombres. se conoce como «codón ámbar».

Este proceso no es completamente efectivo. Este nuevo tARN mutado puede incorporar un aa en lugar de un codón de parada al leer la secuencia de ARN.com/genetica/efectos-de-las-mutacionesgeneticas#ixzz4HvMz3fRt . ya que parte se sintetizará como proteína truncada y parte como normal (en este caso participará el tRNA mutado). Esto es debido a una mutación en la región del ARN que codifica para el anticodón en el tRNA. Relacionados Lee todo en: Efectos de las mutaciones genéticas | La guía de Biología http://biologia.laguia2000.-Por tRNA supresores: esto ocurre cuando la mutación afecta a un tARN. Las cepas en las que existe este doble mutante tienen un crecimiento lento debido a la falta de proteína correcta en cantidad suficiente.

.

.

.

.

mx/books?id=ALR9bgLtFhYC&pg=PA476&lpg=PA476&dq=mutaci %C3%B3n+supresora&source=bl&ots=droS_hopsy&sig=vgjGqbg4_ILF4cpvZuVck7e7ADQ&hl=es&sa=X&sqi=2&ved=0ahUKEwipypuBp9HOAhWJbSYKHQ nODrkQ6AEIPjAF#v=onepage&q=mutaci%C3%B3n%20supresora&f=false .https://books.com.google.

.

.

.

.

.

google.com.https://books.mx/books? id=NVVtJcqvVxgC&pg=PA150&lpg=PA150&dq=mutante +condicional+AMBAR&source=bl&ots=OIDUFB3PP&sig=GuzBDOc94fymkrmfAgQc1F2H2cI&hl=es &sa=X&ved=0ahUKEwjH45jEk8rOAhUJdyYKHYryCTAQ6 AEIIDAB#v=onepage&q=mutante%20condicional %20AMBAR&f=false .

fquim.pdf .unam.mx/amyd/archivero/Clase09_23 097.http://depa.

Resultados Tabla 1. · En los años de 1950 Joshua Lederberg y William Hayes. En ambos citoplasmas se van sintetizando las cadenas complementarias de forma que al final del proceso ambas bacterias poseen un plásmido F completo. y una de sus cadenas pasa a través del puente citoplásmico creado por el pili. La conjugación entre bacterias Gram negativas suele ocurrir a través de Pili sexuales codificados por el plásmido conjugativo. realizaron a partir de 1956 una importantísima serie de experiencias. Cepa Dilución No de Colonias Título . Transformación y Transducción Cuando la transferencia genética se produce entre miembros de la misma especie se le llama transferencia vertical de genes. y puede ocurrir entre bacterias de la misma o de diferentes especies relacionadas. Estos plásmidos conjugativos serán los siguientes: · F⁺: plásmido autónomo. hasta el citoplasma de la célula receptora. que trabajaban en el Instituto Pasteur de París. aislaron un nuevo tipo de cepas fértiles a partir de las cepas F+ originales. que demostraron que la transferencia conjugativa tiene una polaridad (un sentido determinado): la transferencia de ADN por cada cepa Hfr es unidireccional y linear. Dicha recombinación puede presentarse de tres maneras distintas: Conjugación. Entonces el plásmido F se rompe por un lugar fijo (el origen de transferencia). Título de las células donadoras y receptoras para la cruza CSH62 X RC712 (Hfr y Rec+). Las bacterias que lo poseen (F+) sintetizan 2 o 3 pili con los que contactan con bacterias receptoras y se acercan a ellas. cada uno por separado. · Joshua Lederberg y Edward Tatum (1946) mezclaron dos cepas doblemente auxotrofas. libre en el citoplasma · Hfr :plásmido integrado en el cromosoma celular · F′: plásmido autónomo modificado por marcadores cromosómicos Entre éstos el mejor estudiado es el plásmido F de Escherichia coli. cuyas propiedades distintivas respecto de las cepas F+ · Alan Cambell propuso en 1962 un modelo hipotético que posteriormente se vio confirmado por otros experimentos. dotadas de distintos marcadores genéticos. cuando esta ocurre entre miembros de especies distintas se usa el término transferencia horizontal. Para que se dé el proceso de conjugación deben de existir contacto físico entre la bacteria donadora de ADN y la receptora. y que daba cuenta del comportamiento de las cepas F+ de Lederberg y de las Hfr de Lederberg y Hayes. o sea. Mientras tanto la otra gira en el citoplasma de la donadora (mecanismo del círculo rodante). · Estos autores. lo que acelera el proceso de extensión del plásmido. los genes del donador van entrando al receptor en un orden determinado. factor de fertilidad o plásmido sexual.Introducción Antes de mencionar la conjugación tenemos que hacer mención de la recombinación genética la cual hace referencia a la sustitución de uno o más genes presentes en el cromosoma de una célula por los del cromosoma de otra célula genéticamente distinta. Por tanto la conjugación convierte a la bacteria receptora (F-) a su vez en donadora (F+). La capacidad de donar la proporciona el poseer un plásmido al cual se le denomina conjugativo.

1 Título de transconjugantes resultantes de la cruza JC4046 x KL323 y la cruza CSH62 X KL323 Cruza Medio No de colonias Dilución Titulo JC4046 X KL323 G8 513 G9 Sin crecimiento .(Hfr y Rec+). y para esto. el G9 contenía histidina y prolina con el cual se pudo indentificar a las Trp+ Y EL G10 que contenía Histidina y triptofano se lorgró identificar a los Pro+. G9 y G10. En el medio G8 se encontraron menos transconjugantes con respecto a los otros medios. esto ultimo nos indica que tiene un sistema para recombinación con lo cual se esperaba que la cruza se llevara acabo.CSH62 X KL323 G8 Sin crecimiento .G9 Sin crecimiento . Frecuencia de recombinación de la cruza CSH62 x RC712 Tabla 2. y al ser el plásmido lo primero en transferirse se encontró que el marcador para histidina fue el de mayor frecuencia por tal razón.. la cepa donadora al ser F’ significa que contiene en el plásmido un pedazo del DNA genómico y esté plásmido contiene el marcador de histidina. esto debido a que en el DNA de la bacteria Hfr. el marcador de la histidina se encuentra posterior a los de Prolina y Triptofano. ya que sabiendo la frecuencia de reversión se podría saber de manera adecuada la frecuencia de recombinación de las cruzas.. Medio Dilución No de Colonias Título G8 55/50 4/2 G9 93/91 5/8 G10 280/298 16/15 Frecuencia de reversión* *Las dos colonias fueron encontradas en los medios G8 y G10. restando el valor de la frecuencia de reversión a la frecuencia de recombinación.CSH62 (Donadora) 330/314 50/50 RC712 (Receptora) 224/200 35/37 Tabla 2. la cruza se sembró en los medios de selección G8. pero en este caso al ser la fecuencia de reversión muy pequeña se pudo despreciar ese valor..G10 Sin crecimiento . y por tal motivo en los demás medios se pudo observar como el marcador de Triptofano fue el segundo en tener un mayor número de trasnconjugantes y finalmente en el medio G10 para indentificar a las Pro+ hubo un mayor número de trasnconjugantes debido a lo mismo.y Rec+. En la cruza de JC4046 x RC712.Frecuencia de recombinación de las cepas JCC4046 X Kl323 Tabla 2. que contenían los aminoácidos ya mencionados anteriormente. esto se realizó para determinar la frecuencia de reversión. Por otro lado el de menor frecuencia fue el marcador de prolina y esto se debe a lo mismo ya que el marcador para éste. Título de las transconjugantes resultantes de la cruza de CSH62 y RC712. ya que este marcador en el genoma de bacteria es el que se encuentra mas cercano al origen de la replicación del DNA con lo cual hubo una mayor frecuencia de trasnferencia. no se . La cruza de CSH62 x RC712 al ser una Hfr y la otra F.. G9 y G10 los cuales contenían estreptomicina que es un contraselector y éste se utilizó para que las cepas donadoras no pudieran crecer además de contener lo anterior mencionado también contienen Prolina y triptofano el medio G8 con el cual se pudó identificar a las His+. razón por la cual tiene una frecuencia de trasnferencia menor con respecto a estos.2 Título de transconjugantes resultantes de la cruza JC4046 x RC712 Medio Dilución Colonias Título G8 Incontable Incontable 62/101 G9 2/2 1/1 G10 8/20 No hubo crecimiento No se encontraron revertantes Frecuencia de recombinación Discusión Para la cruza de las cepas (y de todas las que se realizaron) CSH62 x RC712 se sembraron cada cepa en los medios de selección que fueron G8. y que con esto se pudiese cuantificar de manera adecuada la trasferencia de material genético. por lo cual no se resto a la frecuencia de recombinación.G10 Sin crecimiento .

Para la experiencia que requería el fago.A.swf. sin embargo en la cruza de JC4046 x KL323 se encontró un marcador para la prolina. y que al utilzar este fago. se esperaba que con esto se pudiera indentificar a las sexductantes. esto se debió a que en la cepa donadora se pueden formar Hfr temporales para poder transferir el DNA y dependiendo del lugar donde se pegue el marcador en el DNA de la receptora. 3.Davis. Conclusiones · En la cruza CHS62 x RC712 el marcador transferido de mayor frecuencia es el de Prolina.que fueron la cruza JC4046 x KL323 y la cruza CSH62 X KL323. 1. éste será la frecuencia con la que se transfiere.es/CONJUGACION.ehu. http://cienciasnaturales. pero sin embargo se esperaba que con el fago M13 hubiera un pequeño halo de inhibición que realmente era un halo de crecimiento tenúe de las bacterias. ya que el fago al ser tener su sitio de fijación en la proteína pilina del extremo del pili.Dulbecco” Tratado de microbiología”. no se obtuvo resultado. España 1972 (204-214). las cepas receptoras al no tener un sistema recombinante.pdf . Para las cruzas que contenían cepas con Rec. S. Bibliografía. R.. Salvat editores. se esperaba que no se encontraran transconjugantes. o sea. que no puedan poder integrar un DNA ajeno al genómico. · En la cruza JC4046 x RC712 el marcador trasnferido de mayor frecuencia es el histidina. BD. se esperaba poder saber el tipo sexula de las trasnconjugantes obtenidas. 2. http://cvb. · No hay recombinación en la cruza de una Hfr y una Rec-.es/open_course_ware/castellano/salud/tecnicasmol/tema2pdf.encontraba cerca del origen como la histidina. y por ese motivo sólo en un medio se encontró que las transconjugantes resultantes tuvieran un marcador para la Prolina.

.

AGAR ES .

.

El ensayo de formación de colonias en agar blando desde entonces ha sido modificada. La limitación de esta técnica es que sólo se proporciona información con respecto a la formación de colonias. los investigadores desarrollaron el ensayo de formación de colonias en agar blando. En 1956 para evaluar la capacidad de las células para formar colonias 1. las células transformadas tienen la capacidad de crecer y dividirse sin unirse a un sustrato. para abordar specific necesidades. en años más recientes.Sin embargo. denominado anoikis 2. debido a un tipo particular de muerte apoptótica. las células se dispersaron en una placa de cultivo y se cultivaron en la presencia de células alimentadoras '' o medio acondicionado para proporcionar factores de crecimiento necesarios. Las células normales se impide el crecimiento independiente de anclaje. el ensayo clonogénico.El ensayo de formación de colonias en agar blando es una técnica ampliamente utilizada para evaluar la transformación celular in vitro. Para sacar provecho de este concepto. se utilizó otro ensayo. Una variación consiste en la incorporación de colorante . En esta técnica. descrito por Pucket al. Históricamente.

las células capaces de formar colonias de una manera independiente de anclaje fueron considered a transformar y cancerígeno. pero que contiene una mayor concentración de agar. Por el contrario. permite que las células transformadas para formar colonias visibles. El objetivo general de este método es medir esta capacidad en las células de una manera semi-cuantitativa y rigurosa. En el ensayo de formación de colonias en agar blando tradicional. las células se cultivan en una capa de agar blando mezclado con medio de cultivo celular que descansa sobre otra capa de agar blando. Otra variación implica el uso de solución especializada agar para permitir la recuperación de células viables después de la formación de colonias cuando se necesitan muestras de proteínas o de ADN. sin embargo.fluorométrico para permitir de alto rendimiento recuento de colonias. Por lo tanto. las células transformadas tienen la capacidad de crecer y dividirse independientemente de su entorno. Esto evita que las células se adhieran a la placa de cultivo. también mezclado con medio de cultivo celular. . El fundamento de esta técnica es que las células normales dependen de contacto célula a la matriz extracelular para ser capaz de crecer y dividirse.

ugr.htm .mx/books? id=TX4UDZaKIUsC&pg=PA555&lpg=PA555&dq=tipos+sexuales+de+escherichia+coli&source =bl&ots=NmOX2KrDSD&sig=suh605pHWpoB3GkwMbro2tG93_Q&hl=es&sa=X&ved=0ahUKE wiHoK6B39LOAhWCSCYKHWSbB3oQ6AEITTAK#v=onepage&q=tipos%20sexuales%20de %20escherichia%20coli&f=false http://www.https://books.google.com.es/~eianez/Microbiologia/18conjuga.