Dr. Mg Q.

F Eduardo Flores Juárez
Cátedra de Análisis Clínicos
Departamento de Bioquímica

HELICOBACTER PYLORI IgM
Para uso diagnóstico in Vitro
RESUMEN DEL PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO:
Paso

(Temperatura ambiente 20-25 °C)

Volumen

Tiempo de
Incubación

1
2
3
4
5
6
7
8

Diluyente 1:40 = 5 μl / 200 μl
Muestras diluidas, controles y calibrador
Buffer de lavado (3 veces)
Enzima conjugada
Buffer de lavado (3 veces)
TMB Substrato cromogénico
Solucion de paro
Lectura a 450 nm

100 μl
350 μl
100 μl
350 μl
100 μl
100 μl

30 minutos
30 minutos
30 minutos

NOMBRE Y USO DESTINADO
El diagnostico de IgM Helicobacter pylori por el método de ELISA automatizado, está
destinado para utilizarse en la evaluación serológica del estado de infección por H.
pylori en pacientes con síntomas gastrointestinales.
RESUMEN Y EXPLICACION DE LA PRUEBA
Helicobacter pylori es una bacteria espiral que se cultivó desde la mucosa gástrica
humana por Marshall in 1982. Los estudios han indicado que la presencia de H pylori
está asociada con una variedad de enfermedades gastrointestinales incluyendo
gastritis, úlcera gástrica y duodenal, dispepsia no ulcérica, linfoma y adenocarcinoma
gástrico. El organismo está presente en el 95-98% de los pacientes con úlcera
duodenal y en el 60-90% de los pacientes con úlceras gástricas. Los estudios también
han demostrado que la remoción del organismo por medio de terapia antimicrobiana
i
está correlacionada con la resolución de los síntomas y cura de enfermedades.
Los pacientes que presentan síntomas clínicos relacionados con el tracto
gastrointestinal pueden ser diagnosticados para la infección H pylori por medio de dos
métodos
1) Las técnicas invasivas incluyen la biopsia seguida de un cultivo o examen
histológico de biopsia o detección directa de actividad ureasa.
2) Las técnicas no invasivas incluyen pruebas de aliento de urea y métodos
serológicos.
Todas las pruebas realizadas en muestras de biopsia están sujetas a errores
relacionados con el muestreo e interferencia de contaminación por bacterias.
H. Pylori IgM, el cual prueba la presencia del anticuerpo específico IgM de H. pylori es
la técnica de elección para las pruebas serológicas por su precisión y simplicidad.

PRINCIPIO DE LA PRUEBA

y el anticuerpo específico de H. pylori purificados (12 x 8) 2. F Eduardo Flores Juárez Cátedra de Análisis Clínicos Departamento de Bioquímica El antígeno H.” 1984. pylori M = 1. ya que no existe un método de prueba que pueda ofrecer un aseguramiento completo que el VIH. La intensidad del color generado es proporcional a la cantidad de anticuerpo específico de IgM en la muestra. Tapa Amarilla. ALMACENAJE Y ESTABILIDAD: 1. El exceso de conjugado de enzima es lavado para su retiro y el substrato y cromógeno es agregado. Recomendamos usar todos los micro pozos dentro de las siguientes 4 semanas después de abierto el empaque. No exponga los reactivos de prueba al calor. La reacción catalítica del conjugado de enzima es detenida a un tiempo específico. 2. Índice H. Materiales bio-peligrosos potenciales: El calibrador y los controles contienen componentes de fuente humana los cuales han sido probados con reactivos con licencia del FDA y no se han encontrado reactivos para el antígeno de superficie de la hepatitis B así como del anticuerpo VIH. ni beba en las áreas en las cuales los especímenes o los reactivos del equipo de prueba están manejándose. Control Negativo: (Rango indicado en etiqueta). Solución de Pare: 2N HCl. Tapa Color Rojo 1 vial (150 μl) 9. pylori IgM. estos reactivos deben ser manejados al Nivel de Bioseguridad 2. Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad del equipo de prueba 4. Todos los materiales no adheridos son lavados para su retiro. “Bioseguridad en Laboratorios Microbiológicos y Biomédicos. Solución de color rojo 1 frasco (12 ml) 6. El suero diluido del paciente es agregado a los pozos.0 1 vial (150 μl) 7. sol. Enzima conjugada. No utilice la pipeta oralmente. MATERIALES ABASTECIDOS: 1. Tiras con micropozos cubiertos de antígeno H.Dr. 1 frasco 12 ml. pylori purificado está cubierto sobre la superficie de los micro pozos. como se recomienda en los Centros para el Control de Enfermedades / Institutos Nacionales del manual de Salud. Los resultados son interpretados por un lector de micro pozos comparados de una manera paralela con un calibrador y controles. o luz fuerte durante el almacenaje o uso. coma. . Calibrador Cut-off (Rango indicado en etiqueta). ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES: 1. TMB Substrato Cromogénico: Botella Ámbar 1 frasco (15 ml) 5. Solución absorbente: Tapa Negra 1 frasco (22 ml) 3. Concentrado de Lavado 10x: Tapa Blanca 1 botella (100 ml) 4. Sin embargo. No fume. se adhiere al antígeno. 2. Mg Q. el virus de Hepatitis B u otros agentes infecciosos estén ausentes. si se encontrara presente. Almacene el equipo de prueba a 2°– 8° C. Después de agregar el conjugado de enzima. 3. Tapa Color Natural 1 vial (150 μl) 8. éste se adhiere al complejo del antígeno-anticuerpo. Mantenga siempre los micro pozos sellados en una bolsa seca con desecantes. Control Positivo: (Rango indicado en la etiqueta).

Vierta 100 μl de suero diluído. Este producto contiene compuestos conservados con ázida sódica.0 D. 0630 Xc=0. el control negativo y las muestras del paciente duplicados 3.O. 8. calibrador. Lea a 450 nm DO con un lector de micro pozos. PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO: 1. Mezcle bien. Recolecte la muestra y separe el suero. y controles en los pozos apropiados. Para desecharlo. pylori = 1. 2. Para el blanco de reactivo. Asegúrese que no existan burbujas de aire en cada depósito antes de la lectura. 7. Retire la enzima conjugada de todos los pozos. 2.220 .640 D. 4. 2. Control Negativo = 0.8° C por hasta 7 días o congelados por hasta seis meses.210. 4. Calcule la media del control positivo. 6. Incube por 30 minutos a temperatura ambiente. para detener la reacción. Los compuestos de lotes diferentes no deben ser mezclados. Los compuestos en este equipo de prueba están destinados para su uso como una unidad integral. 3. = 0.230 Xn=0. enjuague con un gran volumen de agua. Mg Q. Coloque el número deseado de tiras cubiertas en el soporte. Agregue 100 μl de HCl 2 N. PREPARACIÓN PARA EL ENSAYO: 1. F Eduardo Flores Juárez Cátedra de Análisis Clínicos Departamento de Bioquímica 3. Vierta 100 μl de enzima conjugada a cada depósito e incube por 30 minutos a temperatura ambiente. 5. Ejemplo De Resultados Típicos: Calibrador de Cut-Off Índice M H. control negativo. 9. Ponga todos los especímenes y reactivos del equipo de prueba a temperatura ambiente (20°-25°C) y mezcle suavemente. control positivo y calibrador a 200 μl del diluente de muestra. pylori M de cada determinación al dividir los valores de la media de cada muestra entre el valor xc de la media del calibrador. vierta 100 μl de diluente de muestra en la posición del pozo 1A. Calcule el índice de H. Repita el lavado tres veces con buffer de lavado. Evite el congelado y descongelado repetitivo de la muestra de suero.Dr. RECOLECCIÓN DEL ESPÉCIMEN Y MANEJO: 1.650. Prepare el buffer de lavado al agregar agua destilada o desionizada al concentrado de lavado 10x para obtener un volumen final de 1 litro. Las muestras pueden ser refrigerados a 2° . Prepare la dilución 1:40 al agregar 5 μl de la muestra. Calcule la media del valor Xc del calibrador duplicado. Prepare el buffer de lavado 1x. Retire el líquido de todos los pozos y repita el lavado tres veces con el buffer de lavado. Dele golpecitos al soporte para retirar burbujas de aire del líquido y mezcle bien. Calibrador Cut-Off. Vierta 100 μl de TMB Substrato a cada pozo e incube por 30 minutos a temperatura ambiente y en la obscuridad. La ázida sódica podría reaccionar con tuberías de plomo o cobre para formar ázida metálica explosiva. CÁLCULO DE RESULTADOS: 1. 2.O. .

Pylori. pylori M de 0.S.200 / 0.J.640 = 1. El valor D.J. Marshall. pylori M es de 1.220 / 0.I. Un resultado de prueba positivo indica una infección activa y colonizada de H.D. M.99 es erróneo. B. Unidentified curved bacilli in the stomach of patients with gastritis and Peptic ulceration. Seroprevalence of Helicobacter Pylori infection in couples.90 o menor es seronegativo para el anticuerpo IgM para el H. 1. Microbiol. Muestra del Paciente = 1.D. 1991.640 = 2.Warren. del Calibrador es menor de 0. Wilkin. G.501. Lancet 1:131-1314. S. Blaswer. 3. 2. pylori M de 0. Positivo: Índice H.50 Xp=1. Cure of duodenal ulcer associated with eradication of Helicobacter Pylori. del blanco de reactivo comparado con el del aire de un lector de micropozos debe ser menor de 0.J. 3.210 Índice M de H. 2. 1984. No necesariamente indica que una enfermedad gastrointestinal esté presente.340 D. and J.250.O. Ruawsa.640 = 0. 29:642-644. F Eduardo Flores Juárez Cátedra de Análisis Clínicos Departamento de Bioquímica Índice M de H.R. Control Positivo= 1.600 / 0. and G. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO: El ensayo debe ser solamente utilizado para evaluar a pacientes con señales clínicas que sugieren una enfermedad gastrointestinal.600 CONTROL DE CALIDAD: La corrida de la prueba podría ser considerada válida siempre y cuando los siguientes criterios sean cumplidos: 1. La muestra de suero pudo haber sido tomada muy prematuramente. Si el valor D. Pylori = 1.Dr.N.Perez-Perez.O.J.Clin.250. Lancet 335:1233-35. la prueba no es válida y debe ser repetida. . El Índice M de H.A.670 Índice H. Vuelva a probar de una manera paralela con una nueva muestra de suero tomada 3 semanas después.00 o mayor es seropositivo.105. INTERPRETACIÓN: Negativo: El índice H.91-0. pylori. 1.O. Erróneo: El índice H. Mg Q. 1990. Pylori = 0. pylori para el Control Positivo y Negativo debe encontrarse en el rango descrito en las etiquetas. J. Pylori m = 1. REFERENCIA: 1.200 Xs=1. E.80 O. Decker and M. Tyagat.

Eduardo Flores Juarez .i Dr. QF. Mg.