El Choque Oxidativo

Las células vegetales son capaces de producir cantidades significativas de
especies reactivas de oxígeno (ROS), principalmente H 2O2. Esta producción
se asocia con la matriz exocelular (o pared celular) y es regulada por factores
como las hormonas, luz, daño mecánico y diferentes estados de estrés. El
choque o descarga oxidativa se define como la rápida producción de altos
niveles de ROS en respuesta a un estímulo externo. El primer reporte de
rápida producción de ROS se refiere a la generación de •O-2 en discos de
tubérculos de papa en respuesta a la inoculación con una raza no compatible
de Phytophthora infestans o con fragmentos de la pared celular de hifas de
la misma raza. Actualmente el choque oxidativo se considera uno de los
primeros eventos que siguen a la inducción de una respuesta causada por
patógenos (hongos, bacterias o virus), preparaciones con fragmentos de las
paredes de los patógenos, fragmentos de pared celular de plantas
(oligogalacturónidos y oligosacarinas) o estrés mecánico. La ocurrencia del
incremento transitorio en la producción de ROS es generalmente muy rápida,
presentando variaciones de acuerdo al sistema y al inductor utilizado. Cuando
se utilizaron segmentos de plantas como modelo para el estudio del choque
oxidativo, esta respuesta fue observada de 8 a 12 horas después de la
inducción), acompañada en cambio de signos visibles de generación de ROS
de 2 a 4 horas después. En hipocotilos preacondicionados de pepino la
aplicación de un inductor fúngico dio lugar a un máximo en la producción de
H2O2 en 30 minutos, completando la respuesta en 90 minutos, Este efecto del
preacondicionamiento fue completamente inhibido por la adición de
cicloheximida o puromicina, sugiriendo un requerimiento de traducción y
síntesis de proteínas.
Otras observaciones sugieren asimismo la existencia de “factores para la
inducción de respuestas de defensa en la soya. Es probable, debido a la
constante estimulación mecánica por la agitación de los cultivos celulares,
que el efecto de pre acondicionamiento sea inherente en estos sistemas de
estudio. En los cultivos celulares el pre tratamiento con ácido salicílico no
cambia el curso temporal del choque oxidativo, pero si intensifica la
intensidad de generación de ROS.
En los cultivos celulares tratados con bacterias o inductores bacterianos, la
producción de ROS fue observada como un proceso bifásico. La Fase I es
muy similar en tiempo y forma a la reacción frente a los inductores fúngicos,
y se considera por lo tanto una respuesta no específica. La Fase I es
acompañada de la Fase II, una generación de relativa larga duración que
ocurre de 1.5 a 6 horas después de la inducción. La comparación de la
habilidad de diferentes inductores para evocar un choque oxidativo demuestra
diferencias significativas en el tiempo y la intensidad de producción de ROS. En
un cultivo celular de soya la aplicación de OGA de plantas causó un choque
oxidativo muy similar al causado por el tratamiento de células con un
inductor no purificado de Verticillium dahliae. Se encontró una situación
diferente en las células de tabaco cuando, al añadir un inductor no purificado

..8.) y planta preacondicionada frente a un inductor fúngico (. . . Se encontró sin embargo lo contrario al aplicar ambos inductores en segmentos de hipocotilo de pepino. . este fue inefectivo en inducir un choque oxidativo.de Phytophthora parasitica var. . nicotianae. En este último caso la respuesta más rápida (máximo en 4-6 horas después de la inducción) evocada por lo oligoglucanos alcanzó solo un 10-15% de la intensidad de la respuesta máxima (10-12 horas después de la inducción) generada por el inductor de OGA. . Figura 5... Los valores de 0 a 100 en el eje de las ordenadas representan % de producción de ROS. fragmentos oligogalacturónidos de plantas (.. (a) Respuesta a un inductor fúngico (____). Una representación esquemática de la cinética del choque oxidativo en cultivos celulares de plantas posterior a la adición de diversos inductores. mientras que la criptogeína fue un inductor efectivo de la generación de ROS.-)..-). (b) Reacción bifásica de las células vegetales por inducción con bacterias ( )y generación de ROS por plantas en respuesta al tratamiento con fragmentos oligogalacturónidos (.

5. dos enzimas que regulan el nivel de ROS en las células. Estos hallazgos corroboraron los efectos observados sobre la intensidad del choque oxidativo en tejidos pretratados con ácido salicílico o INA. los inductores originados de patógenos incompatibles (es decir. una enzima cuya expresión es estimulada por el déficit de O2.3.Respuestas Bioquímicas Asociadas al Choque Oxidativo. Es asimismo de particular interés la evidencia de que la manitol deshidrogenasa es una proteína inducida por la patogénesis. Asimismo. En las plantas el crecimiento y propagación de los patógenos se consigue por medio de una reacción hipersensible (HR). También se presentan modificaciones en el metabolismo secundario. cuatro horas después de la exposición al inductor no se observaron cambios en las células tratadas con inductores provenientes de patógenos compatibles. inhibieron la catalasa y la ascorbato peroxidasa. En ambos casos se tiene dependencia del aporte de equivalentes de reducción NADPH2 a un complejo enzimático llamado oxidasa de NADPH2 que produce •O-2 (superóxido) que posteriormente dismuta a H2O2. probablemente por efecto de los ROS producidos. Choque Oxidativo y Resistencia Sistémica. Al nivel bioquímico parecen existir ciertos puntos comunes entre los mecanismos de generación de ROS de plantas y mamíferos. Dado que se supone que el manitol funciona como antioxidante una disminución en la concentración del mismo afectaría la tasa interna de producción de ROS en respuesta a los patógenos. el INA. Se ha demostrado que el H2O2 es directamente tóxico para los microorganismos que induce la resistencia sistémica adquirida (SAR) además de reducir la sensibilidad de la pared celular a la degragación enzimática induciendo el entrelazamiento oxidativo de las glicoproteínas. La resistencia sistémica adquirida (RSA) es una de las consecuencias de las respuestas de defensa de las plantas. en el sentido de que ambos compuestos afectan el sistema de remoción de ROS y no precisamente la generación de ROS. Por otro lado. Se ha sugerido que existe conexión entre la generación de ROS y la inducción de producción de fitoalexinas y se utilizaron aplicaciones directas de H2O2 en plantas para verificar esta posibilidad. En experimentos de largo plazo en donde se determinó el consumo de O2 en células inducidas de tomate. dando lugar a síntomas de estrés oxidativo en las células. pero no inhiben las guayacol peroxidasas que participan en la síntesis de lignina. en la cual las células vegetales en el sitio de infección resultan muertas (respuesta de muerte celular hipersensible). El análisis adicional de los niveles de ATP y del cociente NADH/NAD+ indicó que el incremento en el consumo de O2 va dirigido casi totalmente a la producción de ROS.2. comenzando en 1 hora y alcanzando una tasa constante después de 3 horas. que inducen una HR) evocaron la disminución gradual en la tasa de consumo de oxígeno. Se observó una cinética similar en callos de clavel derivados de un cultivar resistente a Fusarium oxysporum tratados con un extracto no purificado del hongo. Se observó que el ácido salicílico y su análogo sintético. una de las consecuencia de la eventual . Esta conclusión es apoyada por la demostración de la inducción de la alcohol deshidrogenasa. como es el caso de la producción de fitoalexinas (compuestos de bajo peso molecular con actividad antimicrobiana.1.

NADH. En cuanto a ello diversos supuestos receptores se han identificado y al menos parcialmente caracterizado. ). aunque no relacionada con el choque oxidativo. En la elaboración de un modelo de la generación de ROS durante el choque oxidativo se han trazado analogías con el sistema NADPH oxidasa de las células de mamíferos. Se ha demostrado que el reductor está presente en alta concentración en los fluidos apoplásticos del frijol justo antes . canales iónicos especialmente de Ca2+. En el modelo alternativo de generación de H 2O2 por una peroxidasa cuya actividad depende del pH se enfatiza la trascendencia de los componentes preexistentes. es activada en respuesta a patógenos. pero los datos preliminares indican que no es NADPH. El control de la actividad de las peroxidasas de la pared celular por el pH ha sido demostrado tanto para la producción de H 2O2 como para la oxidación del alcohol coniferil. mientras que los inhibidores de las fosfatasas (ácido okadáico. De acuerdo a este modelo la molécula inductora es reconocida por un receptor apropiado localizado en la membrana plasmática. observándose mayor actividad en condición alcalina. cantaridina. glutatión o cisteína. Generación de H2O2 por la germin/oxalato oxidasa la cual. Generación de H2O2 por peroxidasas de la pared celular en una reacción dependiente del pH. fue inhibido por inhibidores de los canales iónicos e iniciado por compuestos que estimulan los flujos iónicos. sin excluir la importancia de los eventos de señalización. siendo que se ha postulado que dicho nivel actúa como segundo mensajero del ácido salicílico en la vía de transducción que lleva a la obtención de SAR así como a la activación de los genes que codifican las proteínas PR. Fuentes de Especies Reactivas de Oxígeno para el Choque Oxidativo. En el perejil el choque oxidativo fue estrictamente dependiente de la presencia de Ca2+ en el medio de cultivo. El mayor reto en los estudios acerca del choque oxidativo se refiere a la cuestión del origen de las ROS que determinan el fenómeno. K+. fosfolipasas A y C y posiblemente AMP cíclico. De acuerdo a los datos disponibles las interacciones posteriores que activan a la NADPH oxidasa involucran proteínas receptoras de GTP. ascorbato. que a su vez activa la peroxidasa asociada a dicha estructura generando •O-2 que dismuta en H2O2. Acción de un sistema lipoxigenasa. De acuerdo a este modelo. La fuente de poder reductor para la generación de ROS no ha sido identificada. caliculina A) actuaron como estimuladores del choque oxidativo en células de soya. El movimiento de iones (Ca2+.actividad inhibitoria del salicílico la catalasa en plantas pudiera ser la elevación de los niveles de H 2O2 en la vecindad inmediata de los sitios de infección. Se ha propuesto como una posible fuente de ROS aunque parece ser que la producción de ROS precede a la actividad de lipoxigenasa. Los inhibidores de las quinasas protéicas inhibieron la generación de ROS. H+ y Cl-) resulta en la alcalinización transitoria de la pared extracelular. Al respecto existen varias posibilidades:     Acción de un sistema NADPH oxidasa análogo al de los fagocitos de animales. cuando un inductor arriba a la superficie celular es reconocido por un receptor apropiado dando esto lugar a la activación de los canales iónicos.

su actividad se incrementa de forma dramática en respuesta a la inoculación con el patógeno Erysiphe graminis sp.del inicio del choque oxidativo. utilizando distintas especies de planta como modelo. varias observaciones indican que es activada en respuesta a la infección por un patógeno. que libera H 2O2 y CO2 a partir del ácido oxálico. Aunque diferentes experimentos. también se ha observado cierta heterogeneidad que no es posible explicar por la acción de un solo proceso. es conocida también como germin. si bien alguna evidencia preliminar parece sugerir que esta proteína está presente también en dicotiledóneas. con un tiempo de respuesta paralelo al de la quitinasa. La oxalato oxidasa. . Aunque el sistema oxalato oxidasa no se encuentra totalmente caracterizado. La acción del sistema germin/oxalato oxidasa parece estar limitada a las interacciones de cereales con patógenos. hordei. regulándose su expresión durante los eventos del desarrollo. Sin embargo. favorecen uno u otro modelo de la generación de ROS durante el choque oxidativo. la síntesis del mismo en la pared o su liberación de algún almacén ubicado en la misma estructura. sugiriendo que el estímulo del inductor causa o bien su secreción hacia la pared celular. Esto ha llevado a proponer la unificación de los dos modelos ya que parece ser que ambos procesos cooperan generando ROS durante el choque oxidativo. pero no en respuesta al daño mecánico. especialmente con respecto a la localización del sustrato y la proteína. En las plantas de cebada la oxalato oxidasa se expresa en bajo nivel de forma constitutiva.