Laboratorio de Inmunologa General

Semestre 2016-1
EJERCICIO EXPERIMENTAL 6
Determinacin de grupos sanguneos
OBJETIVO
Determinar los grupo sanguneo del sistema ABO y Rh (D) en eritrocitos de sangre
de voluntarios sanos
CMO?
A travs de las reacciones de aglutinacin directa e indirecta.
INTRODUCCIN
La determinacin del grupo sanguneo es una prctica habitual e imprescindible para
la transfusin de componente hemticos. La razn est en que el sistema inmune
de algunos individuos rechaza los hemates de otros. Esta reaccin inmunolgica
est mediada por anticuerpos y es fcilmente visualizable in vitro mediante
reacciones de aglutinacin.
Se conocen ms de 24 grupos de antgenos
eritrocitarios codificados en otros tantos loci gnicos, para los cuales existen
mltiples variantes allicas. El resultado son ms de 200 antgenos eritrocitarios
identificables. Estos antgenos varan en su inmunogenicidad. Los ms importantes
a efectos transfusionales son los antgenos del sistema AB0 y los del sistema
Rhesus (Rh).
Sistemas ABO
Los eptopos responsables son carbohidratos que aparecen en glicoesfingolpidos
de membrana y tambin en glucoprotenas. El gen H codifica la enzima fucosil
transferasa, que adiciona L-fucosa a una cadena oligosacardica precursora. Los
tres ltimos azcares de la cadena se denominan antgeno H (Figura 1). En un locus
aparte est el sistema ABO, con tres alelos. El alelo A codifica una transferasa que
une N-acetil galactosamina a la cadena H, mientras que el alelo B codifica una
transferasa que une una D-galactosa. El alelo O no produce transferasas y por tanto
no modifica la sustancia H. El azcar unido al carbono 3 de la galactosa determina la
actividad antignica. La galactosa no acepta azcar en el carbono 3 a no ser que
haya L-fucosa unida al carbono 2.

Figura 1.
Es importante destacar que estos genes son codominantes. Los individuos que
expresan los alelos A y B tendrn oligosacridos con los dos tipos de
modificaciones. As, se distinguen 4 grupos: A, B, AB y O. La importancia
transfusional de estos antgenos radica en que los individuos de un grupo sintetizan
CLM
MAM

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anticuerpos frente a los oligosacridos que no estn en sus hemates (Tabla 1).
Estos anticuerpos, que se denominan isoaglutininas y que suelen ser IgM, aparecen
en grandes cantidades en circulacin sin necesidad de exposicin previa a sangre
de otros grupos. La razn parece estar en la reactividad cruzada de sustancias
presentes en bacterias de la flora intestinal.
Grupo
sanguneo

Tabla 1
Genotipo
Antgenos
Anticuerpos
eritrocitarios sricos

AA, AO

Anti-B

BB, BO

Anti-A

AB

AB

AyB

OO

Anti-A, Anti-B

Sistema Rhesus (Rh)

Se han identificado ms de 40 antgenos del sistema Rh aunque no se sabe cuantos
genes son responsables de este sistema. Son protenas integrales de membrana
con un contenido lipdico alto. D es el antgeno Rh ms inmunognico y por tanto el
ms importante a efectos transfusionales. La presencia de D da lugar al Rh+,
mientras que la ausencia (d) da lugar al Rh-. Los anticuerpos anti D, que son IgG,
aparecen en la circulacin de los individuos Rh- slo tras una exposicin previa a
sangre D, por ejemplo por una transfusin de hemates o tras la gestacin de un feto
D.
Material:
- Centrfuga con rotor para tubos de 12x75.
- Placa de vidrio
- Aplicadores
- Tubos de 10x70 mm
- Pipetas Pasteur.
- Antisueros anti-A, anti-AB, anti-B y anti-D.
- Glbulos rojos tipificados (A, B, AB y O)
- PBS.
Metodologa:
A)

CLM
MAM

Centrifugar la muestra sangunea 5 min a 2000 rpm y separar el paquete

celular del suero en tubos diferentes, previamente marcados.
Preparar una suspensin al 5% del paquete celular de la muestra
adicionando a un tubo una gota de pipeta Pasteur del paquete celular y
adicionando 19 gotas de PBS.
Rotular cuatro tubos con A, B, AB y D respectivamente, a los cuales se les
agrega una gota de suspensin al 5% del paquete celular de cada tubo.

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Adicionar al tubo A dos gotas de suero anti-A, al tubo B dos gotas de suero
anti-B al tubo AB dos gotas de suero anti-AB y por ltimo al tubo rotulado D
agregar dos gotas de suero anti-D.
Mezclar el contenido de los tubos y centrifugar 30 seg a 2000 rpm.
Realizar la lectura agitando suavemente el tubo para resuspender el botn
formado. La presencia de cmulos celulares indica la presencia del antgeno
en la superficie del eritrocito.

B)

En el caso del suero agregar 4 gotas de este en la placa de vidrio y

agregar una gota de cada una de las suspensiones de glbulos rojos
tipificados, mezclar con un agitador de madera.
Esperar entre 2 y 5 minutos para observar la aglutinacin en la placa.

C)

Colocar 4 gotas por separado en la placa de vidrio de la muestra problema

asignada, a cada gota colocar uno de los antisuero (anti- A, anti- B, Anti-AB o
Anti-D).
Mezclar cada una de las pruebas con un agitador de madera y esperar de
2 a 5 minutos para observar aglutinacin en placa.

Resultados.
Con las observaciones realizadas complete el siguiente cuadro y determine el grupo
sanguneo de la muestra problema.
TIPIFICACIN DIRECTA
A

AB

TIPIFICACIN INDIRECTA
A

CLM
MAM

AB

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