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NDICE

FACULDADE DE CINCIAS DA SADE


Pgina

UNIVERSIDADE FERNANDO PESSOA

Mestrado Integrado em CINCIAS FARMACUTICAS

Indicaes gerais

Cronograma das aulas prticas

Organizao das aulas prticas por grupos

Assiduidade mnima obrigatria

Sistema de avaliao da componente prtica

Consideraes sobre o funcionamento das aulas laboratoriais

Protocolos experimentais
T1 - Determinao de alguns parmetros caractersticos de um procedimento
analtico
T2 - Determinao espetrofotomtrica do teor de ferro em comprimidos

MTODOS INSTRUMENTAIS DE ANLISE


TRABALHOS PRTICOS protocolos experimentais
Ano letivo 2016/2017

7
12

T3 - Espetrofotometria de absoro atmica com atomizao em chama


estudo de parmetros instrumentais, interferncias e efeito de solventes
orgnicos
T4 - Determinao de clcio no soro humano

15

T5 - Determinao de sdio e potssio no leite por espetrofotometria de


emisso atmica
T6 - Determinao de paracetamol em comprimidos por cromatografia lquida
de alta resoluo
T7 - Estudo de um eltrodo seletivo ao io cloreto

22

T8 -Determinao potenciomtrica de fluoretos em pasta dentfrica

29

T9 - Determinao do teor de cafena em refrigerantes por cromatografia


lquida de alta resoluo

31

Anexo. Fichas para registo de resultados, observaes e clculos

19

24
26

INDICAES GERAIS

O trabalho laboratorial exige da parte do aluno uma atitude especial. Para que os objetivos do trabalho sejam
atingidos, e a segurana no laboratrio mantida, as instrues quanto execuo do protocolo experimental devem

Cronograma das aulas prticas - CFA


Aula n

Data

Sntese programtica

Apresentao do programa e dos objetivos da componente laboratorial da unidade


12/16 setembro curricular de MIA. Indicao das normas de avaliao componente laboratorial.
Organizao dos grupos de trabalho.

19/23 setembro

26/30 setembro Aula terico-prtica

ser previamente estudadas. S assim ser possvel compreender o procedimento, planear o trabalho, gerir
adequadamente o seu tempo de execuo e saber como atuar caso se seja confrontado com alguma contrariedade.
Deve-se trabalhar sem pressa, com mtodo e cuidado, evitando deste modo acidentes e eventuais danos no
material do laboratrio.

1 srie de trabalhos prticos


T1 - Determinao de alguns parmetros caractersticos de um procedimento analtico.

1 srie de trabalhos prticos (continuao)

3/7 outubro

T2 Determinao espetrofotomtrica do teor de ferro em comprimidos


T3 Espetrofotometria de absoro atmica com atomizao em chama estudo de
parmetros instrumentais, interferncias e efeito de solventes orgnicos.

10/14 outubro

17/21 outubro

24/28 outubro

T5 Determinao de sdio e potssio no leite por espetrofotometria de emisso


atmica

31 out / 4 nov

T6 Determinao de paracetamol em comprimidos por cromatografia lquida de alta


resoluo.

7/11 novembro

10

3 srie de trabalhos prticos


T7 Estudo de um eltrodo seletivo a io cloreto.
14/18 novembro T8 Determinao potenciomtrica de fluoretos em pasta dentfrica.
T9 Determinao do teor de cafena em refrigerantes por cromatografia lquida de
alta resoluo

adequados para cada situao e nunca verter na canalizao restos de solues sem previamente perguntar ao

11

21/25 novembro Teste de avaliao prtico

professor o destino a dar a uma soluo.

12

28 nov / 2 dez

13

5/9 dezembro

RESDUOS LABORATORIAIS:

A atividade laboratorial forosamente produtora de resduos lquidos e slidos sendo alguns deles de perigosidade
considervel. Como resduos definem-se quaisquer substncias ou objetos de que o detentor se desfaz ou tem
inteno ou obrigao de se desfazer, nomeadamente os previstos na Portaria n 818/97, de 5 de setembro, que
aprova a lista harmonizada, que abrange todos os resduos, designada por Catlogo Europeu de Resduos (CER). Esta
portaria adota a Deciso comunitria n 94/3/CE, de 20 de dezembro de 1993.
A primeira etapa no processo de tratamento dos resduos consiste na minimizao da sua produo. Num
laboratrio de Qumica a preveno de resduos urbanos conseguida atravs da preferncia por mtodos de
anlise geradores de menor quantidade de resduos ou que sejam mais fceis de tratar e ainda pela utilizao de
menor quantidade e volume de materiais e optando sempre por materiais menos poluentes e de mais fcil

2 srie de trabalhos prticos


T4 Determinao de clcio no soro humano

Aula terico-prtica

reciclagem. No final de cada trabalho laboratorial os alunos devem procurar os frascos coletores de resduos

3 srie de trabalhos prticos (continuao)


T7 Estudo de um eltrodo seletivo a io cloreto.
T8 Determinao potenciomtrica de fluoretos em pasta dentfrica.
T9 Determinao do teor de cafena em refrigerantes por cromatografia lquida de
alta resoluo

12/16 dezembro Aula terico-prtica

14

2/6 janeiro

15

Teste de avaliao prtico

Organizao das aulas prticas por grupos

Aula laboratorial n

Grupo

1 srie de trabalhos prticos

2 srie de trabalhos prticos

3 srie de trabalhos prticos

T1

T2

T3

T4

T5

T6

T7

T8

T9

T1

T2

T3

T4

T5

T6

T7

T8

T9

T1

T2

T3

T5

T6

T4

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T7

T1

T3

T2

T5

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T1

T3

T2

T6

T4

T5

T9

T7

T8

T1

T3

T2

T6

T4

T5

T9

T7

T8

Cronograma das aulas prticas - CFO


Aula n

Assiduidade mnima obrigatria

Data

Sntese programtica

15 setembro

Apresentao do programa e dos objetivos da componente laboratorial da unidade


curricular de MIA. Indicao das normas de avaliao componente laboratorial.
Organizao dos grupos de trabalho.

22 setembro

29 setembro

6 outubro

1 srie de trabalhos prticos

A assiduidade s aulas laboratoriais obrigatria para todos os alunos, incluindo os que esto ao abrigo de estatutos
especiais. Conforme consta do artigo 12 da normativa acadmica do funcionamento das licenciaturas e dos
mestrados integrados da Universidade Fernando Pessoa (NA-UFP) (Dirio da Repblica, 2. srie, N. 167 de 27 de
agosto de 2015), a percentagem mnima de frequncia das prticas para os cursos da rea da sade 80%. O aluno

T1 - Determinao de alguns parmetros caractersticos de um procedimento analtico.

que no complete a frequncia mnima obrigatria considerado reprovado componente prtica da unidade

Aula terico-prtica

curricular. A eventual justificao de faltas no dispensa o aluno do cumprimento efectivo da percentagem das
1 srie de trabalhos prticos (continuao)

aulas prtico-laboratoriais, das aulas clnicas, e estgios. (nmero 5 do artigo 12).

T2 Determinao espetrofotomtrica do teor de ferro em comprimidos


5

6
7

13 outubro

20 outubro
27 outubro

3 novembro

10 novembro

T3 Espetrofotometria de absoro atmica com atomizao em chama estudo de


parmetros instrumentais, interferncias e efeito de solventes orgnicos.

Justificao de faltas

2 srie de trabalhos prticos


De acordo com a NA-UFP, a justificao de faltas deve ser entregue na secretaria geral ou na secretaria virtual (at

T4 Determinao de clcio no soro humano


T5 Determinao de sdio e potssio no leite por espetrofotometria de emisso
atmica

cinco dias depois da data da ocorrncia ou cinco dias aps o fim do perodo de ausncia legalmente definido) sendo
aceite apenas se efetuda pelos meios e motivos legalmente previstos (nmero 5. do artigo 12).

Aula terico-prtica
Teste de avaliao prtico

Sistema de avaliao da componente prtica


3 srie de trabalhos prticos

10

11

17 novembro

24 novembro

T7 Estudo de um eltrodo seletivo a io cloreto.

A avaliao componente prtica laboratorial da unidade curricular de Mtodos Instrumentais de Anlise

T8 Determinao potenciomtrica de fluoretos em pasta dentfrica.

efetuada, de forma contnua, ao longo do semestre.

T9 Determinao do teor de cafena em refrigerantes por cromatografia lquida de


alta resoluo

12

1 dezembro

Feriado

13

8 dezembro

Feriado

O desempenho do aluno nas aulas prtico-laboratoriais avaliado, entre outros elementos, pela quantidade e pela
qualidade de execuo autnoma dos protocolos e trabalhos nelas desenvolvidos, com vista aquisio de
efectivas competncias na rea cientfica em questo (nmero 4 do artigo 13 da NA-UFP).

3 srie de trabalhos prticos (continuao)


14

15 dezembro

T8 Determinao potenciomtrica de fluoretos em pasta dentfrica.


T9 Determinao do teor de cafena em refrigerantes por cromatografia lquida de
alta resoluo

15

5 janeiro

Para aprovao componente laboratorial necessrio que a classificao prtica final seja igual ou superior a dez
(10) valores. A avaliao comprender dois parmetros distintos:

T7 Estudo de um eltrodo seletivo a io cloreto.

1) Desempenho em laboratrio e preenchimento de fichas de resultados experimentais e respetivos clculos


-

Teste de avaliao prtico

Execuo correta dos protocolos experimentais propostos, capacidade de trabalhar em grupo, postura,
interesse, participao em sala de aula e domnio dos fundamentos tericos inerentes adequada
compreenso do trabalho executado.

No final de cada aula obrigatrio a entrega de uma ficha de registo com os resultados experimentais
obtidos no trabalho executado (devidamente identificada e assinada por todos os elementos do grupo que
estiveram presentes na aula). Os alunos dispem ento de um prazo mximo de uma semana para a
entrega dos respetivos clculos (tratamento de dados experimentais). Findo o prazo para a entrega, as

fichas no sero corrigidas nem consideradas para avaliao, sendo por isso contabilizadas como
zero no clculo da nota laboratorial.
-

As fichas sero classificadas como positivas ou negativas sendo consideradas para avaliao as oito
melhores.
(ponderao de 50% na nota final da componente laboratorial)

2) Execuo de dois testes escritos

Em todos os trabalhos experimentais, os alunos devem no decorrer da aula complementar a ficha,


registando os valores experimentais obtidos, e entreg-la ao docente responsvel no final da aula.

Os testes sero constitudos por perguntas de ndole prtica (clculos e tratamento de dados, metodologia
experimental, princpios de funcionamento, etc.) dos trabalhos realizados nas aulas prticas. Caso seja necessrio
sero utilizados os dados adquiridos pelos alunos nos referidos trabalhos.

Dispem ento de um prazo mximo de 1 semana para a entrega dos respetivos clculos que finaliza a
ficha. Findo o prazo para a entrega, as fichas no sero corrigidas nem consideradas para avaliao,
sendo por isso contabilizadas como zero no clculo da nota laboratorial.

(ponderao de 50% na nota final da componente laboratorial - 1 teste (30%) e 2 teste (20%))

Quando uma unidade curricular for avaliada autonomamente na componente terica e na componente prtica, a
nota final dessa unidade curricular s ser atribuda, quando ambas as componentes estiverem aprovadas. (artigo
15 da NA-UFP).
Assim a classificao de aprovao apenas numa das componentes (prtica ou terica) s ser vlida nos trs anos
letivos subsequentes, durante os quais o aluno ter de aprovar a outra componente, sob pena de ver anulada a
componente j aprovada. A nota final da unidade curricular (80% nota da componente terica e 20% da
classificao prtica) s ser atribuda, quando ambas as componentes estiverem aprovadas (artigo 15 da NA-UFP).

Consideraes sobre o funcionamento das aulas laboratoriais

O uso de bata (modelo UFP), e, se for o caso, culos e outros elementos de proteo obrigatrio nas
aulas prtico-laboratoriais. (nmero 4 do artigo 13, NA-UFP). A sua falta impeditiva da participao
nas sesses de formao e conduz marcao de falta aula, falta essa que injustificvel e conta
para o clculo da assiduidade obrigatria (nmero 4 do artigo 13, NA-UFP).

Os protocolos experimentais dos trabalhos a executar constituem material indispensvel, sendo

Os trabalhos so executados em grupos (mximo de 3 alunos) (nmero 4 do artigo 13, NA-UFP).

Para cada aula prtica, ser necessrio a preparao prvia do trabalho a executar, o que poder

obrigatrios para as aulas prtico-laboratoriais.

implicar a execuo de clculos preliminares e/ou a pesquisa de informao nas fontes bibliogrficas.
-

As fichas para registo de resultados, observaes e clculos so fornecidas pelo docente, no sendo
aceites nem consideradas para avaliao outros formatos.

Nestas fichas necessria a identificao dos elementos do grupo que estiveram presentes na aula,
sendo suficiente a entrega de uma ficha por grupo. As fichas sero obrigatoriamente originais e todos os
elementos do grupo devem participar ativamente na sua elaborao.

As fichas sero classificadas como positivas ou negativas sendo consideradas para avaliao as oito
melhores.

Fichas contendo partes copiadas de outros colegas sero fortemente penalizados e as integralmente
copiadas no sero corrigidas nem considerados para avaliao.

estatstico dos parmetros da reta (y = a + bx) sendo frequentemente testada analisando o coeficiente de

Protocolos experimentais

correlao da reta (r ) que no dever ser significativamente diferente de um (1).


Trabalho n1 Determinao de alguns parmetros caractersticos de um procedimento analtico
Linearidade fotomtrica corresponde gama de concentraes para a qual a resposta do espetrofotmetro
(absorvncia) linear, ou seja, quando a relao entre a concentrao ([A]) e o sinal (SA) pode ser descrita por uma
1. Introduo

reta do tipo:
SinalAbs =m [A] + b (r 1)
2

Quando se pretende efetuar uma determinao quantitativa de uma determinada espcie qumica
(vulgarmente designada por analito) existem geralmente vrias metodologias analticas disponveis. A escolha de

Sempre que possvel uma medida analtica deve ser efetuada nesta gama de concentraes, que se pretende

uma metodologia, em detrimento das outras, baseia-se numa srie de critrios bem estabelecidos e que tm em

seja suficientemente extensa para evitar diluies das amostras. Ou seja, o mtodo escolhido para uma

conta parmetros analticos caractersticos.

determinada anlise deve ter um intervalo de trabalho (gama linear dinmica) o mais amplo possvel. O uso de

Neste trabalho prtico pretende-se estudar alguns dos parmetros analticos mais vulgarmente avaliados para

extrapolao (para alm dos extremos da reta de calibrao) no est recomendado, quer acima do padro de
concentrao mais elevado (limite de linearidade), quer abaixo do padro de concentrao mais baixa, ou seja,

depois ajuizar quanto qualidade (caractersticas de desempenho) de um dado mtodo experimental.


Utilizando como composto padro o permanganato de potssio (KMnO4) em soluo aquosa, vo ser

abaixo do limite de quantificao (LQ).

determinados:
-

A sensibilidade de um mtodo de anlise relaciona-se com a sua capacidade de distinguir duas concentraes

a linearidade fotomtrica,

de analito muito prximas estando por isso relacionada com o declive/inclinao da equao de regresso linear.

a sensibilidade do mtodo,

os limites de deteo e de determinao (ou quantificao) do procedimento,

a preciso fotomtrica ao longo do intervalo de linearidade.

Um mtodo ser considerado sensvel se pequenas variaes na concentrao (x) originarem grandes alteraes na
resposta medida (y), neste caso a absorvncia. Os fatores que limitam a sensibilidade de um mtodo so o

Em soluo aquosa, este sal apresenta um espetro de absoro na regio 400 a 700 nm, correspondente

coeficiente angular da reta de calibrao (declive) e a preciso fotomtrica. Para medidas efetuadas no mesmo
espetrofotmetro, com igual preciso fotomtrica, um maior declive da reta de calibrao corresponder ao

absoro do io permanganato.
De forma a determinar o melhor comprimento de onda () para efetuar determinaes quantitativas (isto ,
comprimento de onda a que corresponde o mximo de absorvncia da espcie) inicia-se o trabalho efetuando a
medio da absorvncia de uma soluo de permanganato de potssio a diversos comprimentos de onda de
radiao incidente (entre 400 e 700 nm). A esse comprimento de onda (mx) determina-se, depois, a preciso
fotomtrica, intervalo de trabalho, sensibilidade e os limites de deteo e determinao (ou quantificao da
metodologia.

mtodo de maior sensibilidade. Embora relacionados entre si, a sensibilidade no deve ser confundida com o limite
de deteo (LD), nem com o limite de quantificao (LQ), que esto relacionados com a capacidade do mtodo
detetar concentraes baixas.
Qualquer medio instrumental tem um erro aleatrio inerente pelo que h sempre um sinal/reposta (rudo de
fundo) do instrumento ao longo do tempo para uma soluo sem analito (branco). O sinal do branco tem de ser
avaliado de modo a ser depois possvel estimar qual o sinal instrumental mnimo que se consegue distinguir desse

A concentrao analtica de uma substncia pode ser correlacionada com as absorvncias medidas atravs da lei
de Lambert-Beer:

rudo de fundo.
O limite de deteo (LD) de um mtodo a menor quantidade (concentrao, massa,...) de analito numa

A=bc

amostra que se pode detetar com uma dada confiana estatstica (normalmente 95%). Uma das definies mais

em que A a absorvncia medida, c a concentrao analtica molar (mol dm ), a absortividade molar (M cm ) e


-3

-1

-1

comuns de LD, aceite internacionalmente, assume que o sinal correspondente ao LD o valor mais pequeno que
possvel distinguir do sinal do branco relacionando-se, por isso, com este e com o seu desvio-padro. Isto significa

b o percurso tico da clula de medida (cm).


Assim, em condies experimentais em que e b sejam mantidos constantes, h uma relao direta entre o

que, a menos que o sinal do analito seja 3 vezes superior s variaes aleatrias do sinal do branco (Sbranco), uma

valor de absorvncia registado e a concentrao do analito que se traduz matematicamente por uma regresso

deteo correta do sinal do analito no possvel. Assim, o sinal mnimo detetvel (SinalLD) pode ser calculado do

linear (equao de 1 grau ou equao de uma reta) desde que se verifiquem experimentalmente as condies de

seguinte modo:

validade da Lei de Beer.


SinalLD = Sinal mdiobranco + 3 ssinal do branco
A capacidade de obter resultados linearmente proporcionais concentrao de analito na amostra dentro de
um intervalo determinado, designa-se por linearidade. Em qualquer tcnica instrumental, a relao linear s
vlida para uma gama (intervalo ou amplitude) de concentraes. Este intervalo estabelecido quando se confirma

onde Sinal mdiobranco o sinal mdio do branco para um dado nmero de medidas (mnimo de 20 vezes), e ssinal do
branco

o desvio padro dessas medidas.

que o mtodo apresenta um grau aceitvel de linearidade, exatido e preciso para as concentraes
compreendidas entre os valores especificados. A linearidade do mtodo pode ser demonstrada atravs do estudo

A quantidade correspondente ao limite de deteo (LD), depois calculada recorrendo curva de analtica

2. Procedimento experimental

estipulada para a metodologia nas mesmas condies experimentais, que se assume constante para baixas
concentraes.

2.1. Material, reagentes e equipamento


-

O limite de quantificao (LQ) ou limite de determinao define-se como a quantidade mais baixa de analito
numa amostra que pode ser quantificada com preciso e exatido aceitveis. Pode ser obtido considerando que
este deve ser igual a 10 vezes o desvio padro da medida quando a concentrao zero (ou seja, para o branco).
Deste modo, para estimar o seu valor, procede-se como anteriormente descrito para o LD , mas considerando um
fator multiplicativo de 10 para calcular o seu valor:
SinalLQ = Sinal mdiobranco + 10 ssinal do branco

10 bales volumtricos de 50 ml
1 pipeta volumtrica de 25 ml
1 pipeta volumtrica de 20 ml
1 pipeta volumtrica de 10 ml
2 cuvetes plstico
1 gobel de 250 ml para desperdcio
espetrofotmetro
soluo padro aquosa de permanganato de potssio (KMnO4)

2.2. Execuo prtica

A concentrao mnima determinvel (limite de quantificao) depois calculada por interpolao na curva de
analtica que se assume constante para baixas concentraes. Uma vez estabelecido o LQ, este deve ser usado
como limite operacional, ou seja, valor a partir do qual possvel efetuar uma anlise quantitativa. Deste modo, na

Para bales de 50 ml prepare, por diluies sucessivas , 10 solues de


permanganato de potssio (KMnO4) com as concentraes indicadas na
tabela ao lado apresentada.

prtica deve usar-se o LQ como incio da zona em que se reportam valores numricos. A gama entre o LD e LQ deve
ser entendida como uma zona de deteo qualitativa, e no quantitativa, pelo que no se devem reportar valores
1

numricos nesta gama.


A preciso um dos principais parmetros a considerar na aceitao de um mtodo. Pode ser avaliada a vrios
nveis e define-se como sendo o grau de concordncia entre os valores obtidos numa srie repetida de ensaios
analticos. A preciso avaliada pelo desvio padro (s) e o desvio padro relativo (DPR), tambm conhecido como
coeficiente de variao, das respostas obtidas para uma mesma concentrao.

-2

Soluo padro n
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

[KMnO4] (M)
-2
1.00x10
-3
5.00x10
-3
1.00x10
-4
5.00x10
-4
2.00x10
-4
1.00x10
-5
5.00x10
-5
2.00x10
-5
1.00x10
-6
5.00x10

Diluies sucessivas significa que a primeira soluo a preparar (1.00x10


M) obtida por diluio da soluo me de KMnO4 (0.0500 M). A soluo
-3
seguinte (de concentrao 5.00x10 M) obtida por diluio rigorosa da
-2
soluo que acabou de preparar e cuja concentrao 1.00x10 M. A
-3
-3
terceira soluo (1.00x10 M) vai depois ser preparada por diluio rigorosa desta (5.00x10 M), e assim,
sucessivamente.

Na preparao destas solues deve ter em conta que as diluies tm de ser feitas de modo rigoroso (dever
utilizar as pipetas volumtricas disponveis na sua banca de trabalho) e que tem sempre de aferir
convenientemente os bales com gua desionizada antes de preparar a soluo seguinte.

A preciso fotomtrica relaciona-se diretamente com a estabilidade das medidas efetuadas num
espetrofotmetro . Est diretamente relacionada com o rudo de fundo, e depende da zona espetral (ou seja, do

Escolha do comprimento de onda para a anlise - traado do espetro

comprimento de onda) e da concentrao do analito. Numa situao ideal o espetrofotmetro no devia ter
variaes superiores a 1% para qualquer medida efetuada.

-4

Com a soluo de permanganato de concentrao 1.00x10 M que preparou (soluo padro n 6), efetue o

Um modo de estimar este parmetro ser atravs dos desvios padro das leituras efetuadas (sA) para uma
mesma concentrao, atravs da seguinte equao:

sA =

traado do espetro (entre 400 e 700 nm) seguindo as instrues fornecidas pelo docente a fim de escolher o
melhor comprimenbto de onda para a anlise.

(Sinal

Abs , i

Sinal Abs

Nota:

n 1

As clulas que vo ser utilizadas nas medies espetrofotometrias para este trabalho so de plstico, sendo
necessrios alguns cuidados especiais na sua utilizao:
- ao manusear a clula nunca deve colocar dedadas nas paredes transparentes da clula;

onde SinalAbs,i sinal do analito para as diferentes medidas e SinalAbs o seu valor mdio.

- a clula deve ser cheia at cerca de , depois de a lavar duas a trs vezes, com uma pequena quantidade de

soluo a analisar;
O desvio padro relativo (DPR) para cada conjunto de dados que se define como:

- antes das medies deve limpar as paredes com um papel macio para retirar soluo que esteja na zona

exterior da clula mas sem riscar a mesma;


S

DPR %

- a clula deve ser colocada dentro do espetrofotmetro de modo a que a radiao atravesse as paredes

100

Sinal Abs

transparentes; no caso do espetrofotmetro de feixe duplo deve ser colocada no respectivo porta-amostras
uma clula equivalente contendo apenas o branco, ou seja o solvente.

onde

a mdia aritmtica das respostas obtida.

Determinao das caractersticas de desempenho da metodologia analtica

Com as condies do espetrofotmetro

Trabalho n2 Determinao espetrofotomtrica do teor de ferro em comprimidos

otimizadas para o mximo de absorvncia da espcie a analisar

1. Introduo

(determinado anteriormente quando traou o espetro), ter agora que efetuar a leitura dos valores de
absorvncias das seguintes solues:

O ferro um elemento facilmente encontrado na superfcie da Terra, sendo essencial para o bom

vinte (20) leituras do sinal analtico obtido para o branco;

absorvncias das 10 solues padro que preparou; efetue as leituras da soluo mais diluda para a mais

funcionamento do nosso organismo. Existem muitas protenas que apresentam ferro na sua constituio, tais como

concentrada;
-

aparecimento de problemas de sade. Assim, a carncia de ferro no organismo humano traduz-se em anemia,

dez (10) leituras do sinal analtico das solues de permanganato com as seguintes concentraes:
-4

a hemoglobina e a mioglobina e os citocromos P450. Alteraes na homeostasia deste metal conduzem ao

-5

anorexia, distrbios digestivos, irritabilidade e problemas de crescimento. Quanto ao excesso de ferro

-6

5.00x10 M (soluo padro n 4), 5.00x10 M (soluo padro n 7) e 5.00x10 M (soluo padro n 10).

(hemocromatose) pode igualmente traduzir-se em anorexia, fadiga e dores de cabea.

A carncia de ferro bastante comum, afetando cerca de 500 milhes de pessoas em todo o mundo, e pode ser
explicada pelo facto do ser humano ter uma capacidade limitada de absoro deste metal. Por outro lado so vrios
os fatores que podem contribuir para a perda de ferro (lceras, diverticulite, neoplasias, fluxos menstruais
abundantes) ou para a existncia de necessidades acrescidas do mesmo (gravidez, crescimento). Os nveis de ferro
podem ser repostos, com relativa facilidade, recorrendo a suplementos.
2+

Neste procedimento, o ferro existente no comprimido dissolvido em cido, reduzido a Fe com hidroquinona,
e complexado com 1,10-fenantrolina para formar um complexo fortemente corado cuja absorvncia lida a 508
nm.

Hidroquinona

Quinona

Tris (1,10-fenantrolina) ferro (II)

A quantificao requer a preparao de um conjunto de solues padro de ferro, com concentraes includas
no intervalo de linearidade da metodologia, ou seja, na zona onde se verifica uma relao linear entre a
concentrao de ferro e o sinal analtico (absorvncia). Estabelece-se a melhor relao linear para os valores
experimentais encontrados com as solues padro (regresso linear ou mtodo dos mnimos quadrados), o que
pressupe determinar a equao da reta y = mx + b (em que a concentrao em ferro a varivel independente, x,
2

e o valor de absorvncia a varivel dependente, y) e o coeficiente de correlao (r ).


A concentrao em ferro na amostra depois calculada por interpolao do sinal medido para a amostra na
curva analtica estabelecida com as solues padro.
Este o mtodo de quantificao mais comum em anlise qumica e designa-se por mtodo da curva analtica
ou curva de calibrao.
10

11

c) Preparao da amostra para anlise

2. Procedimento experimental
2.1. Material, reagentes e equipamento
-

1 gobel de 100 ml e vidro de relgio a servir de tampa


1 proveta de 25 ml
14 bales volumtricos de 100 ml
1 pipeta volumtrica de 1 ml
1 pipeta volumtrica de 2 ml
1 pipeta volumtrica de 3 ml
1 pipeta volumtrica de 4 ml
1 pipeta volumtrica de 5 ml
1 pipeta volumtrica de 6 ml
1 pipeta volumtrica de 8 ml
1 pipeta volumtrica de 10 ml
1 pipeta graduada de 2 ml
1 pipeta graduada de 5 ml
1 gobel de 25 ml
funil e papel de filtro
placa de aquecimento
soluo aquosa hidroquinona
soluo aquosa de citrato de trisdio
soluo de 1,10-fenantrolina
comprimidos com ferro
soluo padro de ferro
soluo de HCl 6 M

Transfira 5.00 ml da soluo de suplemento vitamnico para trs bales volumtricos de 100 ml e adicione a
cada um deles 3 ml de soluo de citrato. Junte 2 ml de soluo de hidroquinona, 3 ml de soluo de 1,10
fenantrolina, dilua at marca e agite convenientemente.

Aps a preparao da ltima soluo, espere pelo menos 15 minutos e depois mea absorvncia de todas as
solues (padro e replicas da amostra) a 508 nm na mesma altura.

Nota: Depois de formado, o complexo Tris (1,10-fenantrolina) ferro (II) formado estvel por um alargado perodo
de tempo. Assim, dever preparar todas as solues - quer de padres quer da amostra e, em seguida,
aguardar pelo menos os 15 minutos (tempo necessrio para que a reao se d, lendo no final as
absorvncias de cada uma das solues na mesma altura.

2.2. Execuo prtica


a) Tratamento inicial da amostra
-

Coloque 1 comprimido ou suspenso do material a analisar num gobel de 100 ml.

Adicione 25 ml de HCl 6 M, tape com um vidro de relgio, e aquea quase ebulio, sem deixar ferver (na
hotte), durante 15 min.

Filtre, diretamente para um balo volumtrico de 100 ml, transferindo quantitativamente o contedo do
gobel para o balo por lavagem sucessivas com pequenas pores de gua.

Deixe a soluo arrefecer, complete o balo at marca e agite a soluo.

Dilua 5.00 ml desta soluo num balo volumtrico de 100 ml.

b) Preparao das solues padro


Em bales de 100 ml, prepare um conjunto de solues padro de ferro de acordo com as indicaes da tabela
a seguir apresentada.
Soluo n
1
2
3
4
5
6
7
8
9

Volume sol. padro de ferro (ml)


1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
6.00
8.00
10.00

Volume sol. citrato (ml)


3
3
3
3
3
3
3
3
3

Volume sol. hidroquinona (ml)


2
2
2
2
2
2
2
2
2

Volume sol. 1,10fenantrolina (ml)


3
3
3
3
3
3
3
3
3

No final perfaa o volume com gua desionizada e homogeneize o contedo do balo.

12

13

Trabalho n3 Espetrofotometria de absoro atmica com atomizao em chama estudo de parmetros

comuns so os metais alcalinos (K, Na, Rb e Cs) que se ionizam facilmente criando uma atmosfera redutora que
desfavorece a formao de ies de outros caties.

instrumentais, interferncias e efeito de solventes orgnicos

A eficincia do nebulizador condicionada por vrios fatores designadamente: o tamanho e geometria do


1.

nebulizador, o caudal de aspirao e propriedades do prprio solvente. De facto as caractersticas fsico-qumicas da

Introduo

solvente (viscosidade, velocidade de queima, tenso superficial) podem afetar consideravelmente o sinal analtico
O objetivo deste trabalho o estudo do modo de funcionamento da tcnica de espetrofotometria de absoro
atmica (EAA) com atomizao em chama. uma tcnica analtica bem sucedida e estabelecida e largamente
utilizada nos laboratrios de pesquisa, aplicaes e controle de qualidade para a determinao de elementos em
baixas concentraes, presentes em diversos tipos de amostras, sejam estas lquidas, slidas, em suspenso, e at
mesmo gasosas. O princpio bsico que tomos livres no estado gasoso (vapor atmico) gerados num atomizador
so capazes de absorver radiao de frequncia especfica (comprimento de onda caracterstico), emitida por uma

por alterarem os processos de aspirao, nebulizao, desolvatao e a volatilizao, influenciando a quantidade de


amostra que atinge a chama. De um modo geral, quanto menor for a tenso superficial, mais fcil ser formar
gotculas a partir do lquido. Assim, se o solvente for orgnico, vai formar-se um aerossol mais fino do que se for
aquoso (j que a tenso superficial da gua superior) sendo, por isso, a nebulizao mais eficiente.
Adicionalmente, a presena de um solvente orgnico, origina alteraes importantes nas caractersticas da chama,
pelo que poder ser um artifcio valioso quando se pretende aumentar a sensibilidade das determinaes.

fonte apropriada, atenuando a intensidade desse feixe de luz. A quantidade de radiao absorvida usada para

2.

determinar a concentrao do elemento na amostra em estudo.

Procedimento experimental

No caso da atomizao em chama, a produo de tomos consequncia da ao conjunta do sistema


nebulizador-queimador. O processo impe que a amostra seja introduzida na forma lquida, dividida em pequenas

2.1.

Material e reagentes

gotculas (nebulizao) de modo a assegurar o seu rpido aquecimento para que o processo de formao de tomos

- 1 balo volumtrico de 250 ml

seja rpido e eficiente. Neste processo apenas as gotculas menores so encaminhadas para a chama (cerca de 95%

- 20 bales volumtricos de 50 ml
- 1 pipeta volumtrica de 25 ml

da amostra inicial desprezada atravs do dreno). O aerossol, constitudo por pequenas gotculas, chega depois ao

- 1 pipeta volumtrica de 5 ml

queimador arrastado pelos gases combustvel e oxidante, onde ocorrem uma srie de eventos fsico-qumicos, que

- 1 pipeta graduada de 1 ml

implicam a mudana de estado fsico, at que finalmente so produzidos tomos livres na chama. Nesta fase, o

- 1 pipeta graduada de 2 ml

elemento no estado fundamental est apto a absorver radiao de determinado comprimento de onda

- 1 pipeta graduada de 5 ml

correspondente a um nvel de ressonncia.

- 1 pipeta graduada de 10 ml
- 1 pipeta graduada de 20 ml

Neste trabalho prtico, aps a escolha da chama (neste caso ar-acetileno, que permite atingir uma temperatura

- 1 pipeta graduada de 50 ml

de ~2100-2400 c), alguns parmetros tm de ser otimizados de modo a estabelecer as melhores condies para as

- soluo padro de clcio (Ca) 500 ppm

medies analticas. Neste trabalho procede-se, otimizao de razo/proporo entre o combustvel e o oxidante

- soluo de estrncio (SrCl2) 5% (m/v)

(estequiometria da chama), altura tima e alinhamento do queimador para a anlise de clcio por EAA com

- soluo de sdio 500 ppm

atomizao em chama. Em seguida estudam-se alguns dos interferentes mais importantes nesta determinao e

- soluo de fosfato 50 ppm

tambm o modo de os minimizar.

- etanol absoluto

A qualidade dos resultados condicionada pela composio qumica das amostras dado que a existncia de
interferentes qumicos na matriz pode afetar o sinal analtico. Na chama, a formao de compostos refratrios do

2.2.

Execuo prtica

analito (ou seja, formao de sais pouco volteis) com outros componentes existentes na amostra dificulta a
atomizao do metal, o que diminui a sensibilidade da anlise. Assim, a presena de fosfato ou sulfato na amostra
afeta a determinao de clcio (Ca) por levar formao de sais pouco volteis. Uma soluo possvel para
minimizar o problema a adio de um agente libertador - catio que reage seletivamente com os anies
2+

3+

interferentes formando compostos estveis. Assim, a adio de estrncio (Sr ) ou lantnio (La ) na anlise de Ca

2+

Soluo padro intermediria 50.0 ppm


A partir da soluo padro de clcio (Ca) 500 ppm, prepare 250 ml de uma soluo padro intermediria de clcio
com uma concentrao de 50.0 ppm. Esta soluo de clcio (isto , com uma concentrao de 50.0 ppm) ir ser
utilizada na preparao de todas as outras solues que contenham clcio.

em amostras que contm fosfato, liberta o clcio para o estado atmico e permite que ele seja detetado com boa
sensibilidade.
Outro problema na EAA em chama a possvel ionizao do analito, levando a uma reduo da populao de
tomos neutros que podem absorver radiao, resultando numa diminuio acentuada dos valores de absorvncia.
Geralmente a soluo para esta limitao passa por adicionar amostra um supressor de ionizao. Os mais

14

15

2) Efeito do fosfato e do estrncio

Soluo de referncia de clcio 5.00 ppm


Prepare 50.00 ml de uma soluo de clcio 5.00 ppm (soluo de referncia/comparao) a partir da soluo
padro de 50.0 ppm. Esta soluo s ir ser utilizada no estudo e otimizao dos parmetros instrumentais e no

Prepare 2 solues (tambm em bales de 50 ml) com a seguinte composio:


-

estudo de interferentes e solventes orgnicos.

5.00 ppm de Ca, 10 ppm de fosfato e 1% de cloreto de estrncio (a soluo me de cloreto de estrncio
tem uma concentrao de 5%)

5.00 ppm de Ca e 1% de cloreto de estrncio

3) Efeito do sdio
Prepare 5 solues (bales volumtricos de 50 ml) contendo todas elas 5.00 ppm de Ca e diferentes

2.2.1. Estudo e otimizao de parmetros instrumentais


Consulte o manual de operao do espetrofotmetro e selecione as condies experimentais para o mximo de

concentraes em sdio: 20, 50, 100, 200 e 400 ppm de Na (a partir de uma soluo padro de sdio 500 ppm).
4) Efeito do etanol

sensibilidade do clcio.
Ligue o espetrofotmetro seguindo as instrues de funcionamento do aparelho. Utilize uma chama ar/acetileno, a
intensidade de corrente recomendada pelo fabricante para a lmpada de ctodo co de clcio e como

Prepare 6 solues (bales volumtricos de 50 ml) contendo todas elas 5.00 ppm de Ca e diferentes
percentagem em etanol: 1, 2, 5, 10, 25 e 50% em etanol.
Prepare tambm um branco para cada uma destas solues, isto , para 6 bales volumtricos de 100 ml,

comprimento de onda 422.7 nm ( 0.7 nm).


Ligue a chama. Use gua desionizada para ajustar o zero de absorvncia. Aspire a soluo de clcio 5.00 ppm e

adicione apenas os volumes de etanol que utilizou na preparao das solues anteriores.

anote o valor de absorvncia.


Em seguida, ir efetuar uma srie de ajustamentos de condies operacionais de modo a maximizar o sinal analtico

Registe a absorvncia de todas as solues preparadas usando as condies operacionais otimizadas que
estabeleceu aquando do estudo e otimizao de parmetros instrumentais. No caso das solues contendo 5.00

obtido. Estes ajustes vo recair sobre os seguintes parmetros instrumentais:

ppm de Ca e etanol dever efetuar previamente o ajuste do branco (com a soluo com a mesma % em etanol).
1) Altura do queimador
Rodando o boto regulador da altura do queimador, suba-o de modo a que o feixe de luz passe junto base da
chama e depois mea novamente a absorvncia da soluo de clcio 5.00 ppm. Baixe, sucessivamente, o
queimador (em pelo menos 6 a 8 passos) e registe a absorvncia a cada altura. Para cada posio no se
esquea de fazer previamente o zero com a soluo do branco.
No final, volte a rodar o boto regulador de altura do queimador de modo a colocar o queimador na posio de
onde registou a mxima absorvncia.
2) Posio do queimador
Com a altura do queimador ajustada (alnea anterior), aspire a soluo de clcio 5.00 ppm e rode o boto de
comando da rotao do queimador selecionando o seu ngulo timo (correspondente mxima absorvncia
registada).
3) Razo combustvel/ar
Mantenha a presso do ar constante e ajuste a presso do combustvel em incrementos, desde uma chama rica
em combustvel at uma chama pobre. Anote a absorvncia de uma soluo 5.00 ppm em cada incremento.
Selecione a presso de combustvel tima e varie a presso do ar de modo semelhante.

2.2.2. Estudo de interferentes e solventes orgnicos


1) Efeito do fosfato
Em bales volumtricos de 50 ml, prepare 6 solues todas com uma concentrao de 5.00 ppm de Ca (use a
soluo padro de clcio 50.0 ppm) e diferentes concentraes em fosfato: 1, 2, 4, 6, 8 e 10 ppm de fosfato (a
partir de uma soluo padro de fosfato 50 ppm).

16

17

Trabalho n4 - Determinao de clcio no soro humano

2.

1.

2.1. Material e reagentes

Introduo

Procedimento experimental

- 1 balo volumtrico de 100 ml

Neste trabalho pretende-se dosear o teor em clcio numa amostra de sangue humano. A dosagem de clcio no

- 20 bales volumtricos de 50 ml

soro empregue para avaliar a funo da paratireoide e o metabolismo do clcio, uma vez que o clcio srico

- 1 pipeta volumtrica de 10 ml

mantido dentro dos limites fisiolgicos pela ao combinada do paratormona (PTH) e vitamina D atravs de seus

- 1 micropipeta de 1000 l

efeitos sobre os ossos, intestinos e rins. Cerca de metade do clcio total encontra-se no sangue em sua forma livre

- 1 bureta de 25 ml

(ionizado) e a outra metade combinada com protenas, principalmente com a albumina.

- 1 pipeta graduada de 10 ml

A hipercalcemia (> 10.5 mg/dL de sangue) pode ser causada pelo aumento da absoro gastrointestinal ou por

- 2 pipetas graduadas de 5 ml

um aumento da ingesto de clcio. As pessoas que ingerem grandes quantidades de clcio, como por vezes

- soluo padro de clcio (Ca) 500 ppm

acontece no caso daquelas que tm lceras ppticas e que tomam leite e anticidos que contm clcio, podem

- soluo de cloreto de estrncio (SrCl2) 5% (m/v)

desenvolver uma hipercalcemia. Uma sobredose de vitamina D tambm pode afetar a concentrao de clcio no

- soluo de sdio (Na) 3.2 g l

sangue ao aumentar de forma exagerada a absoro de clcio procedente do trato gastrointestinal. Contudo a

-1

- soluo de potssio (K) 110 mg l

causa mais frequente da hipercalcemia o hiperparatireoidismo. Alguns casos de cancro de pulmo, ovrios, rins e

-1

- amostra de plasma ou soro

bexiga sem envolvimento sseo levam tambm a esta condio.


No caso da hipocalcemia (<8.8 mg/dL de sangue) as causas mais comuns so: hipoparatireoidismo idioptico ou

Execuo prtica

2.2.

cirrgico; pseudo hipoparatireoidismo; insuficincia renal; deficincia de vitamina D; doena gastro-intestinal que
interfere com a absoro de vitamina D ou clcio; nefrose ou outras condies com baixos nveis de protenas
sricas; pancreatite aguda; deficincia de magnsio

2.2.1.

Dilua a soluo padro de clcio 500 ppm, num balo volumtrico de 100 ml, de modo a obter uma

A partir da soluo padro de 50.0 ppm (usando a bureta que tem disponvel na sua banca de trabalho),

soluo padro intermdia de 50.0 ppm.

Neste trabalho prtico efetua-se a determinao de clcio numa amostra de soro por espetrofotometria de
absoro atmica (EAA) com atomizao em chama recorrendo, para isso, a dois mtodos de quantificao

Mtodo da curva de analtica

prepare (para bales de 50 ml) uma srie de solues padro de clcio 0, 1.00, 2.00, 3.00, 4.00, 5.00,

distintos: mtodo da curva de analtica (tambm designado por curva de calibrao) e mtodo das adies de

-1

-1

6.00, 8.00 e 10.0 ppm. Cada padro dever conter tambm 1% de SrCl2, 0.16 g l Na e 5.5 mg l K.

padro.
A curva analtica o mtodo mais comum em anlise qumica quantitativa. Consiste em medir o sinal de um

quantidade conveniente de soluo de cloreto de estrncio (SrCl2) de modo a obter a mesma

conjunto de solues padres de analito (neste caso, clcio) na regio de concentraes de interesse. Estabelece-se

concentrao em SrCl2 que colocou nos padres. Prepare a amostra em triplicado.

a relao linear entre concentrao do analito e sinal de resposta do equipamento e aps leitura do sinal da
-

amostra, determina-se por interpolao grfica nesta zona linear, a concentrao de clcio na amostra.

padro leva a resultados errados. Nestas situaes, pode usar-se o mtodo das adies de padro. O procedimento
mais comum colocar iguais volumes da amostra desconhecida/complexa em vrios bales volumtricos e

2.2.2.

Transfira 1.00 ml (use a micropipeta) de amostra de soro para 7 bales volumtricos de 50 ml.

Usando a bureta mea, para 6 desses bales, volumes de 0.50, 1.00, 1.50, 2.00, 2.50 e 3.00 ml,
respetivamente, de uma soluo padro 50.0 ppm em Ca.

Adicione a todos os bales o volume necessrio da soluo de estrncio de modo a obter uma

Prepare, ainda, a soluo branco (uma soluo com concentrao de 1% de cloreto de estrncio).

Ajuste o zero do aparelho com a soluo anterior (i.e. 1% de cloreto de estrncio) e em seguida mea a

concentrao final de 1% de SrCl2. Perfaa o volume com gua desionizada.

volume) de espcie adicionada a cada balo. Este mtodo requer maior quantidade da amostra e, normalmente,
maior tempo de execuo. Por outro lado, todas as amostras preparadas esto submetidas s mesmas condies de
matriz, minimizando ao mximo interferncias na anlise desta natureza.

Mtodo das adies de padro

adicionar volumes crescentes de uma soluo padro de analito a cada balo. O valor da concentrao do analito na
amostra pode ser determinado graficamente registando o valor do sinal das vrias em funo da concentrao (ou

Registe a absorvncia destas solues (a leitura dos padres deve ser feita por ordem crescente de
concentraes).

Entretanto, quando se trabalha com matrizes desconhecidas ou complexas frequentemente ocorre o chamado
efeito de matriz, ou seja, a determinao da concentrao por interpolao do sinal da amostra lida na curva

Para a preparao da amostra, efetue uma diluio de 1:25 (num balo volumtrico de 50 ml) e adicione a

absorvncia das solues que preparou.

18

19

3.

Trabalho n5 - Determinao de sdio e potssio no leite por espectrofotometria de emisso atmica

Apresentao dos resultados


3.1. Mtodo da curva de analtica
Determine a equao resultante do ajuste dos pontos experimentais do grfico sinal obtido (absorvncia)

1.

Introduo

em funo da concentrao em clcio (ppm).


O sdio e potssio existem no leite na forma de cloretos, em concentraes da ordem dos 500 ppm em sdio e

Determine por interpolao grfica na equao de ajuste (para os 3 ensaios) a concentrao em clcio
presente na amostra analisada. Com os valores de concentrao obtidos calcule a mdia (x), desvio

1500 ppm em potssio, no entanto, quando os animais esto doentes o teor em sdio do leite aumenta, podendo ir
at concentraes de 900 ppm.

padro (s) e desvio padro relativo (DPR).

Neste trabalho experimental efetua-se a determinao destes 2 elementos soro do leite por espetroscopia de
emisso atmica (EEA) em chama. As tcnicas de emisso, em chama e em plasma, so hoje em dia prticas comuns

3.2. Mtodo das adies de padro


Efetue o grfico de absorvncia versus concentrao adicionada de clcio, determine a concentrao de

em laboratrios de anlise. O elemento a medir introduzido na chama na forma de aerossol onde, devido
energia trmica, passa a um estado excitado e emite energia radiante ao retornar a estados energticos menores.

clcio na amostra diluda e calcule a concentrao na amostra original.

As radiaes emitidas, aps conveniente separao de comprimentos de onda por sistemas ticos, so
correlacionadas s concentraes correspondentes em analito atravs de curvas analticas (curvas de calibrao). A
Compare os resultados obtidos. Saliente as diferenas e eventuais vantagens/desvantagens de cada

amostra pr-tratada com cido tricloroactico (TCA) para coagulao das protenas e gorduras e, em seguida,

metodologia.

doseia-se o sdio (Na) e potssio (K), no soro obtido.

2.

Procedimento experimental

2.1. Material e reagentes


-

centrfuga e tubos de centrifugao

1 bureta de 25 ml

1 pipeta volumtrica de 20 ml

1 pipeta volumtrica de 10 ml

1 pipeta volumtrica de 5 ml

1 pipeta volumtrica de 2 ml

3 bales volumtricos de 250 ml

16 bales volumtricos de 100 ml

1 pipeta graduada de 25 ml

1 pipeta graduada de 10 ml

1 pipeta graduada de 2 ml

leite

soluo padro de Na 100 ppm

soluo padro de K 100 ppm

cido tricloroactico (CCl3COOH) a 20% (m/v)

cido tricloroactico (CCl3COOH) a 5% (m/v)

2.2. Execuo prtica


Preparao da amostra
Para um tubo de centrfuga adicione 10.00 ml de leite e 20.00 ml de cido tricloroactico a 20%. Centrifugue at
clarificao da soluo.
Nota: Se no conseguir obter uma soluo lmpida por centrifugao, filtre por papel de filtro seco de porosidade
mdia.

20

21

Trabalho n6 Determinao de paracetamol em comprimidos por cromatografia lquida de alta resoluo

Solues de calibrao e anlise de sdio


-

Retire 5.00 ml do soro do leite (lquido aquoso sobrenadante resultante da centrifugao) para um balo de
volumtrico de 100 ml e perfaa o volume com gua desionizada. Prepare a amostra em triplicado.

1.

Introduo

Prepare um branco e padres de sdio do seguinte modo: para 6 bales de 100 ml adicione,
O paracetamol (acetaminofeno; C8H9NO2; MM 151.16 g/mol) um dos analgsicos e

respetivamente, 0, 2.00, 4.00, 6.00, 8.00 e 10.00 ml da soluo 100 ppm em sdio (use a bureta) e 10 ml de

antipirticos mais utilizados na teraputica. Este trabalho descreve as condies para separar e

cido tricloroactico a 5% em cada balo. Acerte os bales at ao trao com gua desionizada.

quantificar o paracetamol em comprimidos por cromatografia lquida de elevada eficincia


(HPLC), baseando-se na monografia da Farmacopeia Americana (U.S. Pharmacopeia 30-NF 25).
Solues de calibrao e anlise de potssio
-

A cromatografia hoje considerada uma poderosa ferramenta, essencial em qualquer

Retire 2.00 ml do soro do leite para um balo de volumtrico de 250 ml e complete a capacidade com gua
desionizada; prepare a amostra em triplicado.

rea de trabalho laboratorial onde a determinao qualitativa dos componentes de uma amostra ou a
determinao da sua composio quantitativa sejam indispensveis. uma tcnica em que os componentes de uma

Prepare padres e um branco de potssio do seguinte modo: para 6 bales de 100 ml adicione,

mistura se separam de acordo com as velocidades s quais so transportados por uma fase mvel atravs de uma

respetivamente, 0, 1.00, 2.00, 4.00, 6.00 e 8.00 da soluo 100 ppm em potssio e 2 ml de cido

fase estacionria, permitindo assim separar, isolar e identificar os componentes da mistura. No caso da

tricloroactico a 5% em cada balo. Acerte os bales at ao trao com gua desionizada.

cromatografia lquida de elevada eficincia a fase mvel um lquido e a fase estacionria (contida numa pequena
coluna empacotada) vulgarmente um lquido viscoso. Atualmente, possvel o estudo de misturas muito difceis
de separar por outras tcnicas, especialmente misturas de biomolculas, por HPLC sendo, sem dvida alguma

Ligue e ajuste o espetrofotmetro de absoro atmica em modo de emisso de acordo com as instrues de

empregue num grandes nmero de procedimentos analticos.

funcionamento do aparelho. Selecione o comprimento de onda adequado a cada doseamento (potssio 766.5

Na figura encontra-se a representao esquemtica de

0.2 nm; sdio 589.0 0.2 nm). Mea as intensidades de emisso para os padres e amostras de soro de sdio ou

um equipamento para cromatografia lquida de alta

potssio, respetivamente, comeando pela mais diluda e registe os valores obtidos.

eficincia - cromatgrafo para HPLC. Neste instrumento, a


amostra colocada na vlvula de injeo sendo

3.

Apresentao dos resultados

posteriormente intercalada no sistema HPLC por rotao

3.1.Trace as curvas de calibrao.

da vlvula. O eluente, que continuamente bombeado

3.2.A partir dos valores obtidos para a amostra (3 ensaios) e do volume de leite inicial, determine o teor em

para a coluna, vai arrastar os componentes da amostra


que vo sendo separados diferencialmente uns dos outros

sdio e potssio no leite em anlise.


3.3.Com os valores de concentrao obtidos calcule a mdia, o desvio padro e o desvio padro relativo.

devido aos diferentes equilbrios de distribuio a que esto submetidos entre a fase mvel (eluente) e a fase

3.4.Compare com os dados do rtulo

estacionria (leito da coluna). Em seguida os componentes da amostra so detetados, sendo o tempo de chegada
ao detetor (tempo de reteno) dependente da forma como cada componente interatua com a fase estacionria da
coluna. Um registador, que est ligado ao detetor, permite obter automaticamente o sinal enviado por este, o qual,
em primeira aproximao, proporcional ao componente em soluo que passa nesse instante atravs da clula do
detetor. A representao grfica do sinal enviado pelo detetor em funo do tempo constitui o cromatograma da
mistura.
De acordo com a referida monografia os comprimidos de paracetamol no devem conter menos de 90% e nem
mais de 110% do valor indicado na embalagem.

2.

Procedimento experimental

2.1. Material e reagentes


- banho de ultrassons
- filtros e seringas para HPLC
- pipetas de Pasteur
- vidro de relgio

22

23

- esptula

Trabalho n7 Estudo de um eltrodo seletivo ao io cloreto

- almofariz e pilo
- 2 bales volumtricos 100 ml

1.

Introduo

- 1 balo volumtrico 25 ml
- 1 balo volumtrico de 50 ml

Os mtodos potenciomtricos baseiam-se na medio da diferena de potencial entre dois eltrodos um

- 1 pipeta volumtrica de 5 ml

eltrodo de referncia e um eltrodo indicador (seletivo) - mergulhados numa amostra para fornecer informao

- 1 micropipeta de 1000 l

analtica.

- fase mvel para HPLC: Mistura de gua e de metanol (3:1); esta soluo filtrada sob vcuo por uma
membrana de nylon 0.45 m, e desgaseificada.

Estes mtodos envolvem a utilizao de equipamento simples e pouco dispendioso (alm dos dois eltrodos
apenas necessrio um potencimetro) e apresentam algumas vantagens gerais sobre outros procedimentos como

- paracetamol (reagente slido para HPLC)

por exemplo, serem capazes de fornecer limites de deteo excepcionalmente baixos, possuirem intervalos de

- comprimidos contendo paracetamol

trabalho alargados e no serem afetados pela cor ou turvao das amostras.


O eltrodo de referncia apresenta um valor de potencial constante ao longo do tempo (isto , independente

2.2. Execuo prtica

da composio da composio da soluo de analito) pelo que as variaes dos valores de diferena de potencial
Sistema cromatogrfico:

registados so devidos s alteraes sentidas pelo eltrodo seletivo (ESI). Este equipamento tem a capacidade de

Ajuste o cromatgrafo para as seguintes condies de operao:

desenvolver um potencial eltrico proporcional ao logaritmo da concentrao de uma espcie inica, mesmo na

- coluna
- fluxo

coluna de slica (C18) com dimenses 3.9 mm x 30 cm e com partculas de 5 m

- quantidade injectada (volume de padro/amostra)


- detetor

presena de outros ies. Possuem uma membrana seletiva ao io que se quer medir e idealmente tm a capacidade

-1

1.5 ml min

de ter uma interao fsico-qumica com a espcie inica de interesse e com nenhuma outra. Assim, O ESI sente
20 l

preferencialmente a presena de um determinado io, tornando possvel a obteno da concentrao desse io

UV 243 nm

atravs do valor de potencial medido.

Preparao da soluo padro: Prepare 100 ml de uma soluo padro de paracetamol 0.1 mg por ml, em
fase mvel. Dilua a soluo preparada anteriormente de forma a obter uma soluo padro de paracetamol
0.01 mg por ml (use o balo volumtrico de 50 ml). Filtre cerca 3 ml desta soluo diluda por um filtro de
0.22 m para um frasco.

Nos ltimos anos a potenciometria viu o seu campo de aplicao imensamente alargado com o aparecimento
de uma vasta gama de ESI que so utilizados rotineiramente em laboratrios para aplicaes clnicas e ambientais.
Um dos ESI mais comuns o eltrodo de membrana cristalina sensvel ao anio cloreto. Tal como acontece com
todos os instrumentos analticos, a anlise potenciomtrica quantitativa s possvel num determinado intervalo
de concentraes onde h uma relao linear entre o valor de diferena de potencial medido (E) e o logaritmo da

Preparao da amostra: Num almofariz triture os comprimidos analgsicos at obter um p fino. Pese o
equivalente a 50 mg de paracetamol e coloque num balo volumtrico de 100 ml. Adicione cerca de 50 ml
de fase mvel e coloque no ultrassons por 15 min. Complete o volume com fase mvel at aos 100 ml.
Transfira 500 l desta soluo para um balo de 25 ml e dilua com fase mvel. Filtre cerca 3 ml desta
soluo diluda por um filtro de 0.22 m para um frasco.

concentrao do io cloreto:
E = const + S log [Cl-]

(forma simplificada da equao de Nernst modificada)

Deste modo, este trabalho prtico envolve a preparao de um srie de solues padro de cloreto numa regio
alargada de concentraes para encontrar essa zona linear (zona nernstiana) e determinar o limite prtico ou
inferior de deteo (LPD ou LID) e o limite inferior de resposta linear (LIRL) deste eltrodo de condutor cristalino.

Procedimento:

O grfico dos valores E do sistema em funo do logaritmo da concentrao (curva analtica) dever conter 3

- Injete separadamente 20 l da soluo de comprimidos analgsicos (amostra) e da soluo padro de


paracetamol mais diluda (i.. 0.01 mg por ml).

zona de uso para todos os fins prticos.

- Registe os cromatogramas, mencionando os tempos de reteno associados ao paracetamol e as


respetivas respostas no detetor.

De acordo com a Unio Internacional de Qumica Pura e Aplicada (IUPAC) o LPD o valor de concentrao do
io na qual a poro horizontal extrapolada do grfico intercepta a poro nernstiana do grfico e corresponde ao

- Calcule a quantidade de paracetamol, em mg, nos comprimidos analisados.

valor de concentrao a partir do qual o eltrodo sensvel ao io em questo. O LIRL o valor de concentrao a

- Repita o procedimento mais duas vezes.

3.

regies: uma poro inicial horizontal, uma poro curva e por fim uma regio reta. Esta ltima regio , ento, a

partir do qual a variao de potencial do eltrodo em funo do logaritmo da concentrao segue a equao de
Nernst modificada sendo por isso o limite mnimo para anlise quantitativa.

Apresentao dos resultados

O conhecimento do valor declive do eltrodo na regio nernstiana permite ainda tirar concluses quanto ao

3.1 Determine o teor de paracetamol nos comprimidos analisados.


3.2 Verifique se cumprem os requisitos impostos pela Farmacopeia.

estado de funcionamento da unidade. O declive teoricamente esperado

24

.
! "!

$ %"&!

mV/dcada de

25

concentrao. Um valor prximo do esperado (neste caso 59.16 mV/dcada) indica um bom estado de

Tabela 1. Preparao das solues de padro de anio cloreto

funcionamento da unidade.
Concentrao e volume de soluo padro de cloreto a adicionar

Solues de Cloreto
(em bales de 100 ml)
2.

Procedimento experimental
-2

padro 1 - 5x10 M
-2
padro 2 - 1x10 M
-3
padro 3 - 5x10 M
-3
padro 4 - 1x10 M
-4
padro 5 - 5x10 M
-4
padro 6 - 1x10 M
-5
padro 7 - 5x10 M
-5
padro 8 - 1x10 M
-6
padro 9 - 1x10 M
-7
padro 10 - 1x10 M

2.1. Material e reagentes


-

decimilivoltmetro

eltrodo de referncia de dupla juno e eltrodo seletivo ao anio cloreto

agitador e barra magntica

1 pipeta volumtrica de 50 ml

4 pipetas volumtricas de 10 ml

3 pipetas volumtricas de 5 ml

2 pipetas volumtricas de 1 ml

1 gobel de 100 ml

10 bales volumtricos de 100 ml

9 bales volumtricos de 50 ml

soluo de sulfato de sdio (Na2SO4) 0.033 M

soluo padro de cloreto de sdio (NaCl) 0.100 M

-1

[Cl ]sol me = 10 M
50.00 ml
10.00 ml
5.00 ml

-2

[Cl ]padro 2 = 10 M

-3

[Cl ]padro 4 = 10 M

-5

[Cl ]padro 8 = 10 M

10.00 ml
5.00 ml
10.00 ml
5.00 ml
1.00 ml
10.00 ml
1.00 ml

No final, perfaa do volume de cada balo com soluo Na2SO4 0.033 M e agite, convenientemente, o seu
contedo.

2.2.2. Para um gobel previamente passado por gua desionizada, introduza cerca de 25 ml da soluo de
-7

padro de cloretos menos concentrada (i.e. 1x10 M). Insira, cuidadosamente os eltrodos e mea a
diferena de potencial entre o eltrodo indicador e o de referncia de acordo com as instrues do
decimilivoltmetro. Repita o procedimento para as outras solues padro (no se esquea que a leitura

2.2. Curva de analtica

dos padres deve ser feita por ordem crescente de concentraes).

2.2.1. Para bales volumtricos de 100 ml, prepare uma srie de solues padro de cloreto, de acordo com

2.2.3. Aps ter terminado estas operaes coloque os eltrodos numa soluo de NaCl 0.1 M.

o indicado na Tabela 1. De modo a ajustar a fora inica ajustada todas as solues devem ser preparadas
em Na2SO4 0.033 M.
3.

Apresentao do resultado
3.1. Trace o grfico E = f (log [Cl ]) e estime os valores dos limite prtico de deteco (LPD) e do limite
-

inferior de resposta linear (LIRL).


3.2. Comente quanto s condies de operacionalidade do eltrodo.

26

27

Tabela 2. Preparao das solues de calibrao

Trabalho n8 - Determinao potenciomtrica de fluoretos em pasta dentfrica

Volume de soluo (ml)


Balo n

1. Introduo

KNO3 0.4 M

O flor reconhecido como principal agente de preveno da crie dental pois proporciona o fortalecimento do
esmalte dos dentes. O flor interfere com os microrganismos produtores da crie e altera os cristais do esmalte

Citrato de sdio 0.8 M

Soluo padro de fluoreto 50 ppm

2.00

3.00

4.00

tornando-os mais resistentes.


4

Neste contexto, surge a adio de flor em todos os cremes dentais de uso geral que esto no mercado. Apesar
de ser benfico, deve ser ingerido na dosagem correta, para que a preveno no resulte em efeitos nocivos
sade j que a ingesto excessiva de flor (acima de 0.07 mg/kg de peso da pessoa, diariamente) pode ocasionar a
fluorose dental. Da, a necessidade de se estabelecer limites, mximo e mnimo, para a concentrao de flor nas
pastas dentais.
Neste trabalho pretende-se determinar o teor de fluoretos numa pasta dentfrica por potenciometria direta

5.00
10.0

5.0

6.00

8.00

10.00

20.00

No final, perfaa do volume de cada balo com gua desionizada e agite, convenientemente, o seu contedo.

(curva analtica). Para isso, recorre-se ao uso de um eltrodo seletivo ao anio fluoreto e de um eltrodo de
2.2.3.

referncia de prata-cloreto de prata de dupla juno. As no conformidades neste ensaio indicam que a pasta

Prepare a amostra em triplicado. Pese rigorosamente para dentro de um matrs de 250 ml, cerca de
250 mg da pasta a analisar (Nota: aconselha-se a que sejam utilizados pedaos de pasta de diferentes

poder trazer riscos para a sade do consumidor, no tendo a eficincia esperada.

zonas da bisnaga, de modo a que o valor de fluoreto determinado seja representativo). Adicione 10.0
2. Procedimento experimental

ml de KNO3 0.4 M, 5.0 ml de citrato de sdio 0.8 M, 40 ml de gua desionizada e ferva durante pelo

2.1.Material e reagentes

menos 2 minutos utilizando, para isso, uma placa eltrica de aquecimento com agitao magntica. A
soluo final pode apresentar-se turva, devido ao excipiente da pasta dentfrica. Aps arrefecimento,

- milivoltmetro

transfira quantitativamente a soluo para um balo volumtrico de 100 ml e dilua at ao trao com

- eltrodo de referncia de dupla juno de AgCl/Ag

gua (soluo-amostra). Mea os valores de potencial dos padres e da amostra, utilizando um

- ESI sensvel a fluoreto

potencimetro equipado com um eltrodo de fluoreto e um eltrodo de referncia.

- agitador magntico e barra magntica

2.2.4.

- 12 bales volumtricos de 100 ml

Para um gobel previamente passado por gua desionizada e seco em papel absorvente, introduza

- 11 gobels de 50 ml

cerca de 25 ml da soluo de calibrao de fluoreto menos concentrada. Insira, cuidadosamente os

- 3 matrazes de 250 ml

eltrodos e mea a diferena de potencial entre o eltrodo indicador e o de referncia de acordo

- 1 pipeta automtica de 1000 l

com as instrues do decimilivoltmetro.

- 1 pipeta graduada de 10 ml

2.2.5.

- 1 pipeta graduada de 5 ml

Efetue esta operao para todos os padres de fluoreto e no final para as 3 solues-amostra.

- 1 pipeta volumtrica de: 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 20, 25 e 50 ml


- soluo de nitrato de potssio 0,4 M

3.

- soluo de citrato de sdio 0,8 M com pH ajustado a 5,5

Apresentao do resultado
3.1. Trace a curva de calibrao E (mV) em funo do log [F ].
-

- soluo padro de fluoreto de sdio 100 ppm

3.2. Com os resultados obtidos, calcule (para a trs preparaes de amostra) a concentrao em fluoreto

- pasta dentfrica

existente na soluo-amostra e finalmente na pasta dentfrica. Com os valores de concentrao obtidos


2.2. Execuo prtica
2.2.1.

2.2.2.

calcule a mdia, desvio padro (s) e desvio padro relativo (RSD).

Para um balo volumtrico de 100 ml, dilua a soluo padro de fluoreto, de modo a obter uma

3.3. Compare o resultado obtido com as indicaes do laboratrio fabricante.

concentrao de 50 ppm em fluoreto.

3.4. Efetue um breve comentrio quanto exatido e preciso da anlise .

Com esta soluo intermdia prepare padres para bales volumtricos de 100 ml de acordo com o
indicado na Tabela a seguir apresentada.

28

29

- 1 pipeta volumtrica de 8 ml

Trabalho n9 - Determinao do teor de cafena em refrigerantes por cromatografia


rafia lquida de alta resoluo

- 3 pipetas volumtricas de 10 ml
1. Introduo

- 1 pipeta volumtrica de 15 ml
- banho de ultrassons

A cafena (C8H10N4O2 MM = 194.19 g/mol) um alcaloide que apresenta propriedades


bsicas. Pertence a uma classe de compostos de ocorrncia natural chamada xantina.

- equipamento para filtrao a vcuo

Possivelmente, as xantinas so os estimulantes mais antigos conhecidos sendo que, neste

- seringas e filtros para HPLC

contexto, a cafena um dos mais potentes.

- soluo padro de cafena 500 mg l

-1

Os principais efeitos fisiolgicos da atuao


tuao da cafena no organismo humano so o efeito estimulante, o efeito
diurtico e a dependncia qumica. Entre
Entre outros efeitos, causa o aumento da taxa metablica, o relaxamento da
musculatura
tura lisa dos brnquios, do trato
trato biliar, do trato gastrintestinal e de partes do sistema vascular. Aps cinco
minutos do consumo,
onsumo, a cafena pode ser detetada
dete
em todo o corpo humano,
mano, atingindo o seu mximo depois de 2020

- soluo padro de cido benzico 500 mg l

- fase mvel: soluo tampo de fosfatos de trietilamina (1% vol.) e acetonitrilo (15% vol.) pH 4.3
2.2.Execuo prtica
Ajuste o cromatgrafo para as seguintes condies de operao:

30 min. metabolizada no fgado e tem uma meia vida de cerca de 3-6


3 6 h, no acumulando no corpo. A ingesto de

- coluna

cafena em excesso pode causar vrios sintomas desagradveis incluindo a irritabilidade, dores de cabea,
cabe insnia,

- fluxo

diarreia, palpitaes cardacas.

- quantidade injectada

O teor em cafena em refrigerantes pode ser avaliado por cromatografia lquida de alta resoluo (HPLC),

- detetor
-

usando o mtodo da curva analtica com recurso a um padro interno.


O sinal analtico pode ser afetado por vrios fatores que influenciam a sensibilidade e a resposta
respos do detetor;
alguns desses fatores
tores so devidos a efeito de matriz outros podero ser ocasionados por outras condies

-1

coluna de slica (C18)


-1

1.0 ml min

20 l

UV 214 nm

fase mvel

tampo de fosfatos de trietilamina (1% vol.) e acetonitrilo (15% vol.) a pH 4.3

Preparao de solues padro de cafena


-1

A partir da soluo padro de cafena (0.500 g l ) prepare rigorosamente, para bales volumtricos de 25 ml, uma

experimentais designadamente falta de reprodutibilidade no volume de amostra introduzido


ntroduzido no instrumento,

-1

srie de solues com as seguintes concentraes em cafena: 20.0, 40.0, 100, 160 e 200 mg l . Todos estes padres
flutuaes nas condies experimentais, etc. O efeito destas variaes pode ser minimizado pelo uso de um padro

-1

devero tambm conter uma concentrao de 100 mg l em cido benzico.


interno, composto de referncia adicionado em quantidade conhecida a todas as solues usadas para a anlise.
Como o PI est junto com o analito em todas as solues analisadas, as oscilaes experimentais afetam, na

Preparao da amostra

mesma proporo, os sinais de ambos; assim, quando se calcula a razo entre os sinais, o efeito da variao

Para bales volumtricos de 25 ml, efetue a diluio rigorosa de 15.00 ml das amostras de refrigerantes e adicione

atenuado.

um volume de cido benzoico de modo a que a concentrao final desta substncia na soluo seja idntica dos
-1

se cido benzico
benzico como padro interno. O composto obedece s condies necessrias para
Neste trabalho usa-se

padres (i.e. 100 mg l ). Filtre e desgaseifique as amostras.

que uma substncia possa ser usada com esta finalidade numa anlise cromatogrfica: solvel na amostra, no
est presente na amostra original, tem um tempo de reteno prximo do tempo de reteno do analito, ocasiona

- Injete sucessivamente os padres, do menos para o mais concentrado, aps filtrao e desgaseificao.

um sinal com dimenso semelhante ao correspondente ao analito e no reage quimicamente com os componentes

- Em seguida, registe o cromatograma da soluo de amostra.

da amostra.

- Repita esta anlise pelo menos mais duas vezes de modo a obter pelo menos trs cromatogramas da
amostra.

As amostras de vrios refrigerantes so analisadas numa coluna de fase reversa, usando um detetor de UV/Vis a
214 nm aps adio de uma pequena quantidade de cido benzico rigorosamente conhecida.
conhecida Por comparao dos
tempos de reteno e reas obtidas com uma srie de solues padro de cafena contendo
endo cido benzico,
benzico

3. Apresentao do resultado

3.1. Trace os grficos que lhe permitem determinar a concentrao de cafena nas amostras:

determina-se, por interpolao grfica, o teor em cafena das amostras de refrigerantes.

'"$ % ( )*$

2. Procedimento experimental

'"$ % " ! -*$." !

=f(

0( )*$ 1
0 .-*$." !1

2.1. Material e reagentes


'"$ % ( )*$

- 8 bales volumtricos de 25 ml

'"$ % " ! -*$." !

= f (02

34

1)

- 1 pipeta volumtrica de 1 ml

3.2. Determine a concentrao em cafena na amostra e associe-lhe os parmetros estatsticos que lhe

- 1 pipeta volumtrica de 2 ml

permitem comentar quanto preciso da anlise.

- 2 pipetas volumtricas de 5 ml

30

31

32

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