Produccion en Laboratorio de Microorganismos Efectivos de Montana MM para Su Uso en La Degradacion Acelerada de Residuos Organicos de Cosecha en F

Produccin en laboratorio de microorganismos efectivos de montaa (MM), para su
uso en la degradacin acelerada de residuos orgnicos de cosecha en finca
Marco A. Crdoba1; Oscar Quirs2; Harold Vquez3

Palabras clave: microorganismos efectivos, microorganismos de montaa, materia
orgnica, Lactobacillus sp., descomposicin, hongos, bacterias cido-lcticas
Key words: effective microorganisms, mountain microorganisms, organic matter,
Lactobacillus sp. Decomposition, fungus, acid-lactic bacteria.
Abreviaciones: microorganismos efectivos (EM), microorganismos de montaa (MM), Instituto
Tecnolgico de Costa Rica (ITCR)
RESUMEN
Se realiz un aislamiento de microorganismos a
partir de residuos de hojarasca de montaa, con
material vegetal colectado en sotobosque en la
finca de Flores y Follajes del Caribe S.A, en el
cantn de Gucimo, provincia de Limn, Costa
Rica. Los microorganismos de montaa (MM),
fueron capturados a partir de un sustrato
compuesto por melaza, agua destilada, semolina
de arroz. En este medio se coloc unos 100
gramos de hojarasca, la cual fue macerada y
mezclada en forma homognea. Al cabo de una
semana, se observ la proliferacin de micelio de
hongos y se procedi a tomar un gramo de
sustrato slido, l cual se suspendi en agua
estril para luego por medio de dilucin seriada
realizar un cultivo. De igual forma se obtuv a
partir de suero lcteo, cultivos de Lactobacillus
sp., del cul se tom un volumen de: 200 cc. para
adicionar al sustrato con 1500 gramos de semolina
de arroz, 200 cc de melaza y 1000 gramos de
arroz cocinado, adems de 1 litro de agua
destilada; todo se mezcl y se coloc dentro de
un recipiente cerrado tipo bioreactor casero, en el
cual se dej para que se produjera la fermentacin
slida durante un perodo de 3 semanas.
Mediante cultivos selectivos, se comprob la
presencia de hongos, levaduras y bacterias cidolcticas. Se concluye la necesidad de continuar la
investigacin en lo referente a formulacin de un
sustrato o vehculo mediante el cual los
microorganismos se puedan utilizar e incorporar
al suelo para su uso en el manejo de desechos
orgnicos vegetales, o en desechos de estircol en
produccin pecuaria, incrementando la tasa de
descomposicin y mineralizacin de la materia
orgnica y su incorporacin al suelo.
Se considera imprescindible la identificacin y

caracterizacin de los microorganismos aislados,
con el propsito de poder escalar la produccin y
desarrollar productos biotecnolgicos de inters
comercial.
ABSTRACT
An isolation of microorganisms was done
from mountain trash leaves collected in the
understory from Flores y Follajes del Caribe S.A.,
located in Gucimo, Limn province, Costa Rica.
The mountain microorganisms (MM), were
captured in organic substrate composed by
molasses (sugar syrup), distilled water, and rice
bran. In this substrate, 100 g. of macerated litter
was placed which was mixed homogenously. A
week later, the mycelia of fungus was observed,
and 1 gram of substrate was taken and mixed in
sterile distilled water, the microbiological method
of serial dilution was applied to isolate the
microorganisms. Lactobacillus sp. was isolated
from whey; 200cc of whey were mixed together
with 200 cc. molasses, 1000 g. of cooked rice,
and 1 liter of distilled water.
All these
ingredients were mixed and placed in a plastic
tank used as a homemade bioreactor. In this
bioreactor, there was solid fermentation produced
during 3 weeks. Using selective culture media, the
presence of fungus, acid-lactic bacteria and yeasts
was shown. It is concluded the importance to do
more research in aspects related to formulation,
appropriate substrate and vehicle to apply the
MM for the management of organic waste from
vegetables or from cattle manure to the increase
rate of decomposition and mineralization to
incorporate it to the soils.
Produccin en laboratorio de microorganismos efectivos de montaa (MM), para su uso en la degradacin acelerada de residuos orgnicos de
cosecha en finca
INTRODUCCION
El empleo y la aplicacin de compostaje
orgnico y fertilizantes biolgicos en la
agricultura es una de las alternativas de mayor
seguridad para obtener rendimientos con bajo uso
de agroqumicos ( Reganold and Parr y Litterick,
1999 citados por: (Ryang et al. 2003).
El significado de EM corresponde a una
abreviacin del trmino: Microorganismos
Eficaces o Microorganismos Eficientes, los cuales
no son ms que un cultivo mixto de
microorganismos habitantes del suelo rico en
materia orgnica encontrados en forma natural y
sin manipulacin gentica en ecosistemas
naturales. Son productos de la naturaleza capaces
de degradar malos olores causados por hongos y
bacterias, controlar agentes patgenos y focos de
enfermedades como las moscas y en general paa
mantener ambientes regulados y sanos
(Ecotecnologa, 2012). Tienen la facultad de
regenerar el equilibrio microbiano del suelo,
mejora
sus
condiciones
fsico-qumicas,
incrementa la produccin de cultivos y su
proteccin pues consume exudados de races,
hojas, flores y frutos que favorece a los patgenos
en el desarrollo de enfermedades, incrementa la
posibilidad de supervivencia de plntulas, tiene
accin en la actividad meristemtica de las plantas
(Aprolab 2007).
La tecnologa del EM, fue desarrollada por

el Dr. Teruo Higa, de la Universidad de Ryukyus
en Okinawa, Japn en la dcada de los aos
1 Autor para correspondencia. Universidad Estatal a
Distancia (UNED) Correo electrnico:
macordoba@uned.ac.cr
2COOPELESCA R.L. Ciudad Quesada, San Carlos, Alajuela,
Costa Rica, Correo electronic: email:
oquiros@coopelesca.co.cr
FUNDECOR . Sarapiqu, Heredia. Costa Rica. Correo
Electrnico: email: hviquez@fundecor.org
ochentas, como una opcin viable y sostenible

para la produccin agrcola y animal dentro de los
parmetros orgnicos y biolgicos, para no afectar
el medio ambiente, as como para lograr productos
de alta calidad con bajo costo.
Su composicin a base de bacterias cido
lcticas, levaduras y la combinacin de estos
ayudan a restaurar el equilibrio natural en los
agro-ecosistemas y adems actan como
complemento biolgico (Emprotec 2012). Los
EM, constituyen a una mezcla de tres grupos
bsicos los cuales son:
A. Bacterias fototrpicas (Rhodopseudomonas
spp.), son auttrofos y metabolizan materia
orgnica.
.
B. Bacterias acido lcticas (Lactobacillus spp.).
Suprime microrganismos dainos y ayuda a la
descomposicin de materiales como la lignina
y la celulosa fermentndolos; adems reducen
las poblaciones de nemtodos y controla la
propagacin y dispersin de Fusarium y
gracias a ello induce un mejor ambiente para el
crecimiento de los cultivos.
C. Levaduras (Saccharomycetes spp.)
Sintetizan sustancias antimicrobiales
Al aumentar los niveles en el suelo de
Microorganismos Eficientes (EM), se estimula
que la microflora del suelo se incremente su
actividad metablica y poblacional y por ello el
suelo desarrolle un sistema microbial bien
balanceado. En este proceso los microorganismos
cosecha en finca
3
especficos (especialmente los causantes de
enfermedades en cultivos como: Fusarium sp. y
Phytium sp. son suprimidos, a su vez reduciendo
especies microbiales del suelo que causan
enfermedades (Aprolab 2007).
Los EM son ampliamente utilizados a nivel
industrial y a nivel domstico; su aplicacin es
variada desde la agricultura hasta el uso
domstico en el manejo de desechos orgnicos e
incluso en sanitizacin de tanques spticos.
El empleo de melaza es til para el crecimiento de
microorganismos, segn Ariza y Gonzlez (1997)
citadas por Fajardo y Sarmiento ( 2007); el
empleo de la melaza permiti el crecimiento de
levaduras, hongos y bacterias y result til para

microorganismos mesfilos.
La funcin de la semolina de arroz es para servir
como fuente proveedora de caloras disponibles
para los microorganismos y aporta P, K, Ca y Mg;
la semolina favorece la fermentacin y puede ser
reemplazada por afrecho o harinas ( CNAOH, sf).
Segn la literatura, el Lactobacillus sp. acelera la
descomposicin de la materia orgnica pues
degrada la celulosa y la lignina, adems de que
confiere una accin supresora en hongos
fitopatgenos como: Fusarium sp. (PyMERURAL
et. al. 2011).
MATERIALES Y MTODOS
Se recolect hojarasca de residuos de

bosque secundario y terciario en reas en las
cules no se ha practicado ningn tipo de
actividad agrcola en la finca de la empresa Flores
y Follajes del Caribe S.A. , ubicada en La Perla
de Gucimo de Limn, aproximadamente a 110
msnm, en la zona de vida BMhT. La hojarasca
se mantuvo durante 4 das en una bolsa de
plstico con alta humedad.
Fig. 1 Hojarasca colectada del mantillo ubicado en el sotobosque,

de la finca de Flores y Follajes del Caribe S.A., Gucimo,
Limn, Costa Rica.
Posteriormente en laboratorio se pes 1500

gramos de semolina de arroz, la cual se utiliz
como sustrato y se mezcl partcula que contena
el inculo de hongos y bacterias colectadas en la
hojarasca (figura 1), dicha hojarasca fue
macerada con el objetivo de reducir su tamao,
aumentando as el rea superficial de la partcula
inoculada con hongos y bacterias.
Se adicion: 174 ml. de melaza y 1655 ml.
de agua destilada; todo se mezcl en conjunto
para promover el crecimiento bacteriano y
fngico colectado en la muestra de campo. La

cosecha en finca
4
recipiente de plstico con su respectiva tapa para
mantener separado la mezcla del ambiente
externo. (Figura 3).
Fig. 3. Trampa de semolina empleada en la captura de MM.

Cuadro 1
Componentes utilizados para la captura de

microorganismos
descomponedores
de
materia orgnica, mezclados en 100 g. de
hojarasca.
Componente
Fig.2.Materiales
usados para el crecimiento de
microorganismos
(Semolina de arroz, Melaza y agua
destilada.
Se emple como base la metodologa descrita

por: PymeRURAL y PRONAGRO (2011).
Dicha metodologa se desarroll para la captura
de microorganismos de montaa (MM), para la
produccin de un quintal de sustrato. Los
componentes empleados como fuentes de
carbono, nitrgeno, fsforo y agua, se ilustran en
la figura 2. En el cuadro 1 se detalla la
composicin de las fuentes empleadas en esta
etapa del experimento.

Cantidad por
Composicin
100g. de
qumica
hojarasca
Semolina de arroz
1500 g.
ND
Melaza
174 ml
Sacarosa 60 %
63% p/p
Azcares
reductores 3-5
%p/p
Otros azcares (48 %p/p) *
Agua destilada
1655 ml
H2O
(*) Fajardo C.,E.;Sarmiento F.,S. 2007.
El material al cabo de 8 das fue removido de

la bandeja plstica y se le adicion un kilo de
arroz humedecido, se adicionaron 200 cc de
melaza al que se le adicion 200 cc de suero de
leche conteniendo Lactobacillus sp., adems se
adicion 1 litro de agua destilada . Para la
obtencin de Lactobacillus sp. se utiliz suero de
leche de vaca cruda (sin pasterurizacin) y
tambin se mezclo con un extracto de agua de
arroz, obtenida a partir del remojamiento de
granos de arroz durante 8 horas y luego de
permanecer en reposo durante 24 horas.
Siguiendo la metodologa descrita por:
PymeRural y Pronagro (2011).
Todo este
material fue homogenizado en forma manual y
colocado en un recipiente plstico para promover
la fermentacin del conjunto de levaduras,
Lactobacillus y hongos. La fermentacin slida
se realizo en un recipiente plstico o tanque de
fermentacin fue conectado mediante una tubera
plstica de 3/8 de pulgada, a un envase plstico
cosecha en finca
5
de 1 galn de capacidad, el cual contena agua y
que sirve como trampa para capturar el CO2
(figura 4), que se produce por accin metablica
de los microorganismos efectivos, se ilustra en la
figura 3, el sistema descrito.
Fig. 3 Biorreactor artesanal usado en las pruebas
Este sistema o bioreactor artesanal

permaneci a la sombra durante 3 semanas para
que se de un crecimiento de los microorganismos
efectivos se reproduzcan.
Se realiz un aislamiento o cultivo en
placa a partir de una suspensin de semolina de
arroz conteniendo microorganismos capturados
a partir de las hojas maceradas y colectadas de
campo. Mediante la tcnica de dilucin seriada,
se procedi a inocular en el medio de cultivo 0,1
ml de la suspensin acuosa de microorganismos
capturados en semolina de arroz, las

concentraciones utilizadas fueron de: 1 x 10 -4 y
1 x 10-5 UFC/ml., ambas alcuotas se colocaron
en el medio de PDA (Difco) y pH de 5,5. en
este medio se adicion un mililitro de solucin de
la suspensin que contena microorganismos,
obtenidos a partir de la trampa de arroz (figura 3),
luego de 2 semanas de estar en reposo y una vez
que se evidenci la formacin de colonias de
hongos en la superficie de la trampa.
Al cabo de 3 das de mantener las placas
Petri en condiciones de temperatura ambiente se
formaron colonias de hongos y bacterias. Con
base en estas colonias se procedi a hacer un
cultivo puro de cada una, para lo cual se prepar
dos medios uno un PDA acidificado con pH 4,5,
se emple para acidificar cido ctrico y ascrbico
obtenidos a partir de jugo de limn ( Citrus sp.).
En este medio se colocaron secciones de hifas de
las colonias de hongos que se identificaron
creciendo en el aislamiento. En el caso de las
bacterias fueron aisladas en un medio: PDA +
peptona 8 g/l y el pH se ajust a 8,5 con el
objetivo de realizar cultivos puros. Las placas
fueron mantenidas a temperatura ambiente y con
humedad relativa fluctuante pues se careca de
una incubadora microbiolgica.
El objetivo de ste aislamiento fue
obtener las cepas de los microorganismos para
realizar los cultivos puros, caracterizarlos y
proceder a su identificacin en laboratorio.
RESULTADOS Y DISCUSION

cosecha en finca
6
Se logr aislar microorganismos de montaa, y
a partir de stos se logr producir un sustrato
enriquecido con cepas de microorganismos
conformados por: bacterias cido lcticas,
levaduras y otros hongos filamentosos. Se estima
que la produccin de microorganismos eficaces
como lo indica la literatura es una fuente
apropiada de materia orgnica para los sistemas
agrcolas y dar a estos un aprovechamiento de los
recursos propios de la finca.
Se evidencia que la fuente bsica para la
obtencin de microorganismos efectivos es el uso
de materia vegetal en proceso de descomposicin
o
residuos
de
arbustos
parcialmente
descompuestos que presentaban evidencia de
micelios de color blanco. El cultivo o captura de
los microorganismos mediante la trampa de
semolina de arroz enriquecida con melaza,
permiti que los hongos presentes en la hojarasca
recolectada colonizara el sustrato, el cual era rico
en carbohidratos (semolina y melaza de caa de
azcar). La identificacin y aislamiento de los
hongos capturados permite generar alternativas
para poder desarrollar otras formulaciones ms
especficas para lograr la hidrlisis de la celulosa
y la lignina, con el objetivo de poder incorporar
ms rpidamente la materia orgnica al sistema.
Para efectos de esta investigacin los factores
como: infraestructura y conocimiento de los
agentes descomponedores especficos fueron
aspectos limitantes para poder tener claridad en
los organismos aislados.
Sin embargo, si se logr el objetivo de
produccin de EM a nivel artesanal, escalando la
produccin de la captura en un bioreactor sencillo
tanque de fermentacin (ver figura 3), en el cual
se enriqueci, con arroz cocinado, agua destilada,
melaza y la adicin de bacterias cido lcticas

obtenidas a partir del suero obtenido a partir de
leche cruda y que se mantuvo en un sistema
anaerbico durante 3 semanas.
Se comprob la presencia de Lactobacillus
sp., mediante un cultivo selectivo de PDA
(Difco) enriquecido con Peptona hidrolizada
(Meron) y ajustando el pH a 8,0. La figura 4,
ilustra el crecimiento de estos microorganismos en
el medio utilizado.
Fig. 4 Cultivo de Lactobacillus sp., aislado a partir de suero de

leche de vaca cruda sin pasteurizar.
Fig. 5 Cepas de hongos creciendo en un medio PDA concentracin

de alcuota 1 x 10-5 .
cosecha en finca
7
La Figura 5, ilustra la captura de hongos que se
obtuvo a partir de la trampa de captura de MM, en
una concentracin de 1 x 10-5 UFC/ml, el cual
fue cultivado en un medio general, papa-dextrosaagar, (PDA) (Difco)
Fig. 8 Cepas de hongos creciendo en un medio PDA acidificado

obtenido a partir de las colonias de la figura 1.
Fig. 6 Cepas de hongos creciendo en un medio PDA acidificado

obtenido a partir de las colonias de la figura 1.
En los medios selectivos como PDA

acidificado, se cultivaron hongos para su
aislamiento como los ilustrados en las figuras:
5,6,7 y 8.
El caso de la nica bacteria identificada fue

aislada en un medio de agar enriquecido con
peptona, con la cual se produjeron rayados de
placa como la ilustrada en la figura 9-a y 9-b. A la
fecha de esta publicacin los aislamientos fueron
enviados
al
Centro
de
Investigaciones
Agronmicas de la Universidad de Costa Rica
para su cultivo, aislamiento e identificacin.
Fig 9-.a Medio de PDA con crecimiento de bacteria

Fig. 7 Cepas de hongos creciendo en un medio PDAacidificado
aislados a partir de las colonias del aislamiento logrado
en la dilucin serial 1 x 10-5.
cosecha en finca
8
Fig. 9-b Medio de PDA con crecimiento de bacteria aislada en
cultivo puro a partir del crecimiento observado en la placa de la
figura 5
Con ste producto obtenido a partir de la

fermentacin slida (FFS), se pretende hacer
suspensiones en agua y poder atomizar stas a la
materia orgnica producida como residuos de
cosecha. Dado que se evidenci la presencia de
hongos descomponedores de celulosa capturados
a partir de la hojarasca y posteriormente aislados
en la trampa enriquecida con semolina y melaza.
Adems, de que esta mezcla fue enriquecida con
la adicin de bacilos de bacterias cido-lcticas
(Lactobacillus sp. ), obtenidas a partir del suero de
leche de vaca sin pasteurizar. Y cuya presencia fue
demostrada en el cultivo selectivo empleado para
el crecimiento de stas. Se requieren al menos 3
semanas segn la literatura consultad para la
produccin de EM, para lograr que el sustrato se
fermente en su totalidad y se pueda hacer uso del

mismo en aplicaciones en fincas. Cmo el
objetivo de esta investigacin era validar la
presencia de MM, en los sustratos empleados y
replicar el procedimiento de produccin artesanal
a un nivel piloto, se puede considerar que la
eficacia del proceso depender en gran medida de
las condiciones que se le den a los
microorganismos para que puedan colonizar el
sustrato, de all la importancia de un adecuado
cultivo de cepas para asegurar que la produccin
de microorganismos es la requerida o deseada y
no la produccin de microorganismos oportunistas
que no tendran importancia en el proceso de
descomposicin de materia orgnica.
CONCLUSIONES
El uso de microorganismos efectivos de
montaa y su posterior aislamiento para la
implementacin de una tecnologa de manejo de
desechos slidos en un sistema de produccin
agrcola, resulta ser una buena estrategia de
aprovechamiento de los recursos de la misma
finca. Mediante el uso de procedimientos
microbiolgicos
se
logr
capturar
los
microorganismos que participan en los procesos
de descomposicin de materia orgnica vegetal.
El empleo de esta tecnologa permite mitigar
el impacto que causan en los agroecosistemas el
uso continuo de fertilizantes qumicos, los cuales
se sabe que en la medida que aumenta su
cosecha en finca
9
concentracin en el suelo disminuye la actividad
microbiana, con la consecuente prdida de
fertilidad debido a la ausencia de procesos de
mineralizacin de la fraccin orgnica del suelo.
Esto tambin incide en la relacin de hospedante
patgenos, pues se sabe que los microorganismos
compiten en espacio y actan como antagonistas
de algunas
enfermedades de plantas causadas por hongos del
suelo como Fusarium oxysporum.
Se requiere continuar una lnea de
investigacin en el uso de microorganismo
efectivos, su caracterizacin y aislamiento en
laboratorio. De igual forma se requiere trabajar en

formulacin de un sustrato o vehculo mediante el

cual los microorganismos se puedan utilizar e
incorporar al suelo mediante diversas formas de
aplicacin para su uso en el manejo de desechos
orgnicos vegetales, o en otras actividades cmo
el manejo de desechos de estircol en produccin
pecuaria.
La identificacin y caracterizacin de los
microorganismos aislados, es imprescindible para
poder desarrollar los medios de cultivo ms
apropiados para el aislamiento, multiplicacin y
escalamiento
en
la
produccin
de
microorganismos efectivos, para su uso en las
fincas.
cosecha en finca
10
LITERATURA CITADA
APROLAB. 2007. Manual para la

Produccin de Compost con
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Produccion en Laboratorio de Microorganismos Efectivos de Montana MM para Su Uso en La Degradacion Acelerada de Residuos Organicos de Cosecha en F

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uso en la degradacin acelerada de residuos orgnicos de cosecha en finca

Marco A. Crdoba1; Oscar Quirs2; Harold Vquez3

Se considera imprescindible la identificacin y

La tecnologa del EM, fue desarrollada por

ochentas, como una opcin viable y sostenible

levaduras, hongos y bacterias y result til para

Se recolect hojarasca de residuos de

Fig. 1 Hojarasca colectada del mantillo ubicado en el sotobosque,

Posteriormente en laboratorio se pes 1500

1 Autor para correspondencia. Universidad Estatal a

Fig. 3. Trampa de semolina empleada en la captura de MM.

Componentes utilizados para la captura de

Se emple como base la metodologa descrita

1 Autor para correspondencia. Universidad Estatal a

El material al cabo de 8 das fue removido de

Fig. 3 Biorreactor artesanal usado en las pruebas

Este sistema o bioreactor artesanal

capturados en semolina de arroz, las

1 Autor para correspondencia. Universidad Estatal a

melaza y la adicin de bacterias cido lcticas

Fig. 4 Cultivo de Lactobacillus sp., aislado a partir de suero de

Fig. 5 Cepas de hongos creciendo en un medio PDA concentracin

Fig. 8 Cepas de hongos creciendo en un medio PDA acidificado

Fig. 6 Cepas de hongos creciendo en un medio PDA acidificado

En los medios selectivos como PDA

El caso de la nica bacteria identificada fue

Fig 9-.a Medio de PDA con crecimiento de bacteria

Con ste producto obtenido a partir de la

fermente en su totalidad y se pueda hacer uso del

1 Autor para correspondencia. Universidad Estatal a

formulacin de un sustrato o vehculo mediante el

APROLAB. 2007. Manual para la

EMPROTEC S.A. 2012. EM

Microorganismos Eficaces. (en

PYME RURAL y PRONAGRO. 2011.

FAJARDO C., E.; SARMIENTO F., S.

1 Autor para correspondencia. Universidad Estatal a

Ryang, H.G.; Rim, MS;Rim, YH;

Manufacturing methods of multiingredient compost with EM. (en

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