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SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE

CENTRO NACIONAL DE HOTELERIA, TURISMO Y ALIMENTOS


LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
RECUENTRO DE COLIFORMES TOTALES Y E.COLI
JUAN GUILLERMO CUBILLOS HINOJOSA
Microbilogo Agroindustrial (c) MSc.

1. INTRODUCCION
Coliformes: Grupo de bacterias que presentan ciertas caractersticas bioqumicas en comn
e importancia relevante como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos. Se
encuentran comnmente en las plantas, el suelo y los animales, incluyendo a los humanos.
El grupo coliforme est conformado por los siguientes gneros tales como Escherichia,
Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter.
Escherichia coli: Bacilo corto gram negativo que forma parte de la flora normal del
intestino de animales de sangre caliente. Es aerobio facultativo, de metabolismo
fermentativo, O-Nitrofenli--D- galactopiransido positivo y su crecimiento ptimo es a 37
C. Algunas cepas pueden producir entero toxinas y tiene otros factores de virulencia de
colonizacin e invasin por lo cual pueden causar enfermedades diarreicas, as como
infecciones urinarias y nosocomiales.
Bacterias Coliformes frente a un medio Cromognico: Cuando se utiliza la tcnica
enzimtica, el grupo coliforme se define como toda bacteria que posea la enzima -D
galactosidasa; la cual tiene la propiedad de actuar sobre el substrato cromognico, formado
en la liberacin del cromgeno.
2. OBJETIVOS

Adquirir destreza en la determinacin de de Coliformes totales y E. Coli


Realizar informe de los resultados obtenidos por la muestra analizada

3. MATERIALES
Eosina Azul de Metileno (EMB)
Cajas petri
Erlenmeyer
Tubos de ensayo
Morteros
Agua peptonada
Puntas estriles
Micropipetas

4. METODOLOGIA
1. Tomar 10g de muestra y macerarla. En caso que la muestra sea liquida tome 10mL
en una probeta estril.
2. Agregar la muestra al Erlenmeyer que contiene 90mL de agua peptonada.
3. Realice diluciones seriadas hasta 10-3.
4. Siembre por duplicado todas las diluciones.
5. Incubar a 35C +/- 1 durante 24 horas.

Muestra
de 10g
90mL
H2O
Peptonada
9mL
H2O
Peptonada

Sembrar en
profundidad

Agar EMB

10-1

10-2

10-3

Figura 1. Esquema del procedimiento de recuento de coliformes totales E.coli en


alimentos

5. LECTURA DE RESULTADOS
a) Despus del perodo especificado de incubacin, se cuentan las colonias coliformes
caractersticas en cada caja que contenga no ms de 150 colonias, ya sean
caractersticas o no, usando el equipo para el recuento de colonias.
b) Se recomienda examinar con atencin los elementos dudosos, empleando una lupa
cuando sea necesario, con el objeto de diferenciar las colonias de partculas
extraas.
c) Las colonias invasoras deben ser consideradas como una sola colonia. Si menos de
un cuarto de la placa est invadida por dichas colonias, se cuentan las colonias de la
parte no afectada de la placa y se calcula el nmero correspondiente a la placa
entera. Si est invadido ms de un cuarto de la placa, se desecha el recuento.
6. EXPRESION DE RESULTADOS

E. coli es fcilmente distinguible por el color azul-verdoso color de las colonias de color
azul. El crecimiento de la voluntad de Enterobacterias como colonias Magentas.(Color
morado o Violeta.)
Para coliformes totales fcilmente se distingue por el color purpura y rosados. El recuento
de coliformes totales y E.coli se deben expresar por separado.
Se calcula el nmero de N de colonias por mililitro o por gramo de producto, dependiendo
del caso, usando la siguiente ecuacin:

Ejemplo:
Un recuento de coliformes totales dio el siguiente resultado (se incubaron dos cajas de
Petri por dilucin):
Dilucin 10-2: 83 y 97 colonias
Dilucin 10-3: 13 y 8 colonias

El nmero estimado de coliformes totales es por lo tanto: 1,1 x 104 expresados /g o /ml.
7. BIBILOGRAFIA

ICONTEC. 1997. Norma Tcnica Colombiana NTC 4458 Microbiologa. Gua


general para el recuento de E. Coli. Tcnica de recuento de colonias a 35 C.
ICONTEC. 2009Norma Tcnica Colombiana NTC 4092. Microbiologa de alimentos y
productos para alimentacin animal. Requisitos generales y directrices para anlisis
microbiolgicos.
INVIMA. 1998. Manual de tcnicas de anlisis para control de calidad
microbiolgico de alimentos para consumo humano.