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Trabajo cientfico

Recogida de muestras para el


laboratorio Qu, cmo, cul,
cunto?
Paloma Chaves Sanz

Directora tcnica del laboratorio APG


Rodriguez San Pedro 10
28015 Madrid

Obtencin
La primera pregunta que nos planteamos cuando tenemos que hacer un anlisis de sangre es qu tipo de
aguja debo emplear, en que tipo de tubo tengo que recogerlo, qu cantidad de sangre se necesitar?
El uso de palomillas o agujas y el distinto calibre de las
mismas, lo mismo que el volumen de las jeringuillas y la
eleccin de la vena depender en ocasiones del tamao
del animal al que vamos a extraer la sangre.

Figura 2 Qu tubo elijo?

La cantidad de sangre extrada depender tambin de


las pruebas que solicitemos al laboratorio.
-BBHVKBSPTBFTEF( MBNTHSVFTB
MBBNBSJMMBEF
( MBWFSEFEF( MBB[VMEF(ZMBOBSBOKBEF(
de insulina (la ms fina). (Fig. 1)

Figura 3 Cdigo
Internacional de
colores para recogida
de tubos
(Norma ISO 6740)

Figura 1Qu calibre de aguja, que jeringuilla, qu cantidad?


Depender del tipo de animal.

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Recogida de muestras para el laboratorio Qu, cmo, cul, cunto? - Chaves P.

Anticoagulante

Modo de
accin

Cantidad/ ml
sangre

EDTA Na o K
Quelante
Calcio

1-2 mg/ml

Inhibe paso
protrombinatrombina

20 U/ml

Citrato sdico

Quelante
calcio

Sol. 3,8%:
1vol.citrato/ 9
vol. sangre

Fluoruro
Sdico

Inhibe
gluclisis

Heparina Na,K,
Li, Li,NH4

2-4mg/ml

Color
tapn

Ventajas

Inconvenientes

Utilizacin

Conserva
morfologa
clulas
sanguneas

Interfiere
determinaciones
bioqumicas

Hemograma
Parsitos
hemticos

LILA

Desaconsejable
hematologa

Perfiles
bioqumicos

VERDE

Hemostasia

Conserva
factores
lbiles
coagulacin
algunas horas

Coagulacin

AZUL

Conservador
de la
glucosa

Desaconsejable
en otras
determinaciones
bioqumicas

Deter. de la
glucosa

GRIS

Bioqumica
Inmunologa

ROJO

Conserva
pH sanguneo

Sin
anticoagulante

Hemograma

En cuanto a los tubos, existe un Cdigo internacional


EF DPMPSFT QBSB SFDPHJEB EF UVCPT OPSNB *40 

'JHVSB


&MUBQOMJMBDPSSFTQPOEFBMBOUJDPBHVMBOUF&%5" FUJMFOEJBminotetra-actico) en forma de sales de sodio o potasio (Fig.4).

Dependiendo del color del tapn el anticoagulante ser


diferente y se utilizar para distintos fines.

&M&%5"FTFMBOUJDPBHVMBOUFRVFNFKPSDPOTFSWBMBTDlulas sanguneas.

5VCPEFUBQOMJMBMMFWB&%5"TEJDPPQPUTJDPTFVTB
para la realizacin de hemogramas y estudio de clulas
y parsitos hemticos.

Acta como anticoagulante por ser quelante del calcio


de la muestra.

5VCPEFUBQOWFSEFMMFWBIFQBSJOBTPEJP QPUBTJP MJUJP


y amonio se utiliza para perfiles bioqumicos.

La concentracin de la muestra debe ser de 1-2 mgr/ml


de sangre. Esto lo conseguimos aadiendo la cantidad
de sangre que nos indica el tubo.

5VCPEFUBQOB[VMMMFWBDJUSBUPTEJDPZTFVUJMJ[BQBSB
pruebas de coagulacin.
El tubo de tapn gris lleva fluoruro sdico y se utiliza
para determinacin de glucosa.
5VCP EF UBQO SPKP OP MMFWB OJOHO UJQP EF BOUJcoagulante. Con l obtenemos suero para pruebas de
bioqumica, hormonas e inmunologa.

Fig.4
Tubos de
EDTA
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Trabajo cientfico

Excepcionalmente podemos hacer un hemograma en tubos


con otro tipo de anticoagulante como por ejemplo Heparina
litio pero conserva peor la morfologa celular y se producen
con ms frecuencia todava agregados plaquetarios.

Se puede hacer un hemograma con 0,5 a 1 ml de sangre.

Mtodos

&O DBTP EF VTBS UVCPT 5BQWBM QPEFNPT RVJUBS MB BHVKB F
JOUSPEVDJSFONCPMPQPSFMPSJGJDJPTVQFSJPS 'JH
FTNVZDmodo pero si lo vamos a remitir al laboratorio, la sangre puede
salirse y no os podis imaginar lo que cunde una gota de sangre
'JH
FOVOTPCSFZOPQPEJTJNBHJOBSPTDPNPMMFHBFMUVCP
o tubos que le acompaan al laboratorio pues sigue goteando.

.JSBEFOFMUVCPTJFNQSFMBTFBMIBTUBEPOEFIBZRVF
llenarlo de sangre.

Una vez obtenida la muestra de sangre quitamos la aguja


de la jeringuilla y solo con esta introducimos la sangre en
FMUVCPDPSSFTQPOEJFOUF 'JHVSBTZ
5BQBNPTDPOFM
tapn e invertimos suavemente varias veces (cinco o seis)
para que la sangre se mezcle bien con el anticoagulante.
/VODBCSVTDBNFOUFDPNPTJGVFSBVOBDPDUFMFSB

Figura 9

Figura 5

SI

Figura 6

Figura 8
NO

Si aadimos un volumen distinto de sangre al indicado


en el tubo tendremos problemas.
Si el volumen de sangre es mayor al del tubo se nos coagular la sangre.

Figura 10
Por favor quitad el tapn, os llevar unos segundos ms y
hacedlo como si fuera un tubo de tapn hermtico (Fig.10).

4J FM WPMVNFO EF TBOHSF FT NFOPS TF OPT QSPEVDJSO
Hemlisis, crenacin de los hemates, falsas disminucioOFTEFMIFNBUPDSJUP 7$.ZGBMTPTBVNFOUPTEF$$.)

Identificacin

Figura 7 El
tubo de la
izquierda
tiene poco
volumen de
sangre y el
de la derecha
demasiada por
lo que se ha
formado un
cogulo.

Es importantsimo identificar los tubos con los datos del animal al que realizaremos el anlisis antes incluso de depositar
la sangre en l. Evitaremos as un posible error preanaltico
que puede complicarse en el laboratorio. (Figura 11)
Si adems acompaamos a las muestras identificadas de
un protocolo facilitaremos mucho el trabajo al laboratoSJP JOEJDBOEP
t
t
t
t
t
t

NO

16

-PTEBUPTEFMBOJNBM/PNCSF SB[B TFYP FEBE


%BUPTEFMBDMOJDBPWFUFSJOBSJPRVFMBSFNJUF
5JQPEFNVFTUSB
#SFWFIJTUPSJBDMOJDB
5SBUBNJFOUPTFNQMFBEPT
%FUFSNJOBDJORVFTFTPMJDJUB

Trabajo cientfico

La contaminacin con un exceso de antisptico puede


producir hemlisis debido al alcohol.
La extraccin de sangre extravasada puede producir heNMJTJTZBHSFHBDJOQMBRVFUBSJB 'JHZ

Figura 10

Fig.13. Agregados plaquetarios. Fig. 14. Hemlisis


SI

NO
La contaminacin con el
lquido de fluidoterapia
producir una dilucin de
la muestra e incluso contaminacin de la misma
si el fluido lleva potasio
produciendo hiperkalemia
(Fig. 16).

Conservacin:
Lo ideal son dos horas desde la obtencin de la muestra
a temperatura ambiente o 24 horas en nevera a 4 C para no alterar los valores del hemograma.
+".4JOUSPEVDJSFOFMDPOHFMBEPS

Fig. 15. Crenacin de hemates

Figura 16

Las plaquetas deben determinarse lo antes posible para


evitar agregados.
Los frotis sanguneos deben realizarse como mximo
dos horas despus de haber obtenido la muestra y fijarlos en metanol durante dos minutos una vez secos.

NO

Hay una serie de factores a considerar


Un animal estresado puede presentar Hperglucemia,
neutrofilia madura y/o linfocitosis.
Si el volumen de sangre es mayor al del tubo se nos coagular la sangre.

Produciremos hemlisis si usamos agujas de bajo calibre


y jeringas de alto volumen (Figura 12).

4J FM WPMVNFO EF TBOHSF FT NFOPS TF OPT QSPEVDJSO
Hemlisis, creacin de los hemates (Fig. 15), falsas disNJOVDJPOFT EFM IFNBUPDSJUP  7$. Z GBMTPT BVNFOUPT
EF$$.)

Figura 12

NO

Pruebas de bioqumica
Las podemos hacer prcticamente todas en suero, en
plasma tambin siempre que el anticoagulante no interfiera en la prueba.

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Recogida de muestras para el laboratorio Qu, cmo, cul, cunto? - Chaves P.

Los tubos de suero no llevan ningn tipo de anticoagulante y el tapn es de color rojo, segn las norma ISO
 'JH
 &O FM NFSDBEP IBZ UVCPT TJO BOUJDPBHVlante que no siguen esta norma y hay tapones de todos
MPT DPMPSFT 5FOFNPT RVF BTFHVSBSOPT RVF FM UVCP FMFgido para suero no lleve anticoagulante de ningn tipo.
Para inmunologa el tubo de eleccin es el de suero lo
mismo que para la determinacin de hormonas.

Lo ideal es separarlos antes de las dos horas de recogida


de la sangre.

Las pruebas de bioqumica tambin pueden


hacerse en plasma recogido en un tubo con
heparina litio, tubos
con tapn verde (Fig.

 QVFT OP JOUFSGJFren los resultados sin
FNCSBHP FO &%5" JOterfieren las pruebas
enzimticas (fosfatasa
alcalina) y los iones Ca
Z,

Suero
t 3JFTHPEFIFNMJTJTNBZPSRVFFOTVFSP
t $FOUSJGVHBDJOUSBTDPBHVMBDJO
t .VFTUSBJEOFBQBSBMBNBZPSBEFQSVFCBTCJPRVmicas e inmunolgicas
t /PDPOUJFOFGJCSJOHFOP

Fig. 17. Tubos de Heparina Li


y sin nada

Si la sangre la recogemos en tubo de heparina litio podemos centrifugarla inmediatamente despus para la
obtencin del plasma.

Diferencias entre el suero y el plasma

Plasma
t 3JFTHPEFIFNMJTJTNFOPSRVFFOTVFSP
t $FOUSJGVHBDJOJONFEJBUB
t &OQSVFCBTCJPRVNJDBTQPTJCMFJOUFSGFSFODJBDPOBOticoagulante (mnimas con heparina Litio)
t $POUJFOFGJCSJOHFOP

Manejo de las muestras

Conservacin de suero o plasma

Si recogemos la sangre en tubo de suero, tenemos que


dejarlo en posicin vertical y a temperatura ambiente
'JH Z
/PEFCFNPTSFGSJHFSBSMPBOUFTEFTVDPBgulacin y retraccin del coagulo (de treinta minutos a
una hora despus de la recogida) pues produciramos
hemlisis.

4FDPOTFSWBEBTB$ZDPOHFMBEPBo$EVSBOUF
mucho tiempo

Conservacin de las muestras


Compuesto
Albmina
ALT (GPT)
AST (GOT)
Bilirrubina
total
Calcio
Colesterol
Creatinina
Fosfatasa
alcalina
Fsforo
inorgnico
GGT
Glucosa
(en FlNa)
Potasio
Protenas
totales
Urea

Fig. 18
Fig.19
El microtubo de la Fig. 18 se dej en posicin horizontal el de
la Fig. 19 en posicin vertical, en los dos se ve el coagulo y su
retraccin.
Si la sangre no desuera bien, esto suele ser lo habitual,
DFOUSJGVHBSFNPT B  SQN EVSBOUF  NJnutos.

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20 25 C
6 das
1 da
3 das
Solo muestra
reciente
10 das
6 das
1 da

4 C
6 das
7 das
7 das

-20 C
Varios meses
1 mes
1 mes

10 das
6 das
1 da

8 meses
4 meses
Varios meses

10%actividad
7 das
en 7 d.

1 mes

2 das

7 das

Varios meses

5 das

10 das

1 mes

1 da

2 das

2 semanas 2 semanas Varios meses


7 das

1 mes

Varios meses

1 da

3 das

6 meses

Trabajo cientfico

Determinacin de glucosa

miccin espontnea, sonda o cistocentesis y especialmente cuando se trate de urocultivos, en cuyo caso el
frasco o tubo deber ser estril.

La sangre la podemos recoger en un tubo de suero, en


cuyo caso la deberemos centrifugar en el momento que
se haya coagulado o en un tubo con Heparina Litio en
cuyo caso deberemos centrifugar inmediatamente o en
un tubo de Fluoruro sdico, tubo de tapn gris (Fig. 20),
que inhibir las enzimas de la gluclisis y conserva el valor de glucosa durante 24 horas a temperatura ambiente
PIPSBTB$

Se conservan perfectamente de 12 a 24 horas a 4 C.

Anlisis de heces
-PJEFBMTPOMPTBOMJTJTTFSJBEPTEFBEBTFODBTPEF
diagnstico de giardias por ejemplo.

Si no lo hacemos siguiendo
este protocolo no podremos valorar la glucosa pues
se produce un consumo de
esta por parte de los hemates.

Se conservaran a 4C excepto la ltima muestra que se


enviar a temperatura ambiente y lo ms fresca posible.
6TBS SFDJQJFOUFT BEFDVBEPT /0 64"3 #0-4"4 %&
1-"45*$0 P 1"1&- %& "-6.*/*0 QBSB SFNJUJS MBT
muestras.
Para coprocultivos los frascos debern ser estriles.

Coagulacin
Fig. 20 Tubos de fluoruro
Na

Lquidos orgnicos

La sangre se recoger en un
tubo de citrato sdico, tubo
de tapn azul (Fig. 21).

4FSFNJUJSOFOEPTUVCPT VOPDPO&%5"QBSBFMSFDVFOto de clulas y la citologa y otro de suero para pruebas


bioqumicas en caso de que se soliciten.

Las cantidades de sangre sern las correspondientes al


volumen de anticoagulante, Para el cultivo bacteriolgico se emplear un tubo estril
QBSUFTEFTBOHSFQPSEF o la propia jeringuilla de extraccin.
anticoagulante).
Los portas con las extensiones para las citologas deben
$FOUSJGVHBS BOUFT EF MPT  ir fijadas en metanol.
minutos de extraccin de la
TBOHSFBSQNEVSBOUF
15 minutos.
Citologas y biopsias
Fig. 21 Tubos de Citrato
sdico

Citologas

Refrigerar un mximo de 2
horas o congelar a -20 C.

Materiales: Agujas, jeringuillas y portas.

Urianlisis

Mtodos: Podemos
realizarla de dos for3FDPNFOEBNPT/064"3GSBTDPTEFPSJOBQBSBSFNJUJS NBT 1VODJO DPO
la muestra al laboratorio, a no ser que sean hermticos aguja fina o punes preferible remitirla en tubos. Durante el transporte DJOoBTQJSBDJO DPO
suelen ser frecuentes los accidentes.
aguja fina.
Para el urianlisis solo son necesarios 5 10 ml de orina.
$POWJFOF JOEJDBS MB GPSNB EF SFDPHJEB EF MB NVFTUSB

Fig. 22

22

Recogida de muestras para el laboratorio Qu, cmo, cul, cunto? - Chaves P.

Fig. 22

Las dos tcnicas son


muy similares. La primera es ideal para
ganglios pues al ser
estos muy frgiles asegura la integridad de
las clulas y en tejidos
muy vascularizados
para minimizar la contaminacin sangunea.

Fig. 24

Fig. 25

/P UPNBSFNPT NVFTUSBT EF [POBT VMDFSBEBT QVFT TPMP Mtodos:


reflejara el proceso inflamatorio.

Tamao

En lesiones de gran tamao la zona central suele estar


necrosada/inflamada por tanto debemos ir a los bordes.

El tamao ideal
de la muestra seria de 1cm x 1cm aproximadamente. En caso de muestras de
mayor tamao deberemos hacer cortes cada 1,5 cms perpendiculares al eje mayor o tomar varias muestras incluyendo los
mrgenes de extirpacin (Fig. 25).

Introducimos la aguja y aspiramos con una jeringuilla


de 10 ml.
Sacamos la aguja y la volvemos a introducir en otra direccin y aspiramos de nuevo.

Fijacin

Una vez realizada la aspiracin, separamos la aguja y llenamos la jeringuilla de aire.

La fijacin de las muestras para oncologa se hace por mtoEPTRVNJDPT GJKBEPSFT


&MNTDPNOFTFMGPSNPMBM

Ponemos la aguja de nuevo y vaciamos la jeringa en un


porta (Fig. 22).

'PSNPMBM4FQSFQBSBDPOQBSUFEFGPSNBMEFIEP
BM QBSUFTEFBHVB UBNCJOQVFEFTVCTUJUVJSTFFM
Hacemos la extensin inmediatamente por el procedi- BHVBQPSTPMVDJOTBMJOBGJTJPMHJDBBM
)BZPUSBTGSNJFOUP EF TRVBTI P BQMBTUBNJFOUP 'JH 
 &T EFDJS  mulas pero esta es la ms comn.
ponemos sobre el porta que contiene la gota otro porta
formando una cruz con el anterior y lo deslizamos sua- Recipientes
ve y rpidamente.
Existen distintos tipos de recipientes, la nica condicin es
Dejamos secar y fijamos con metanol.
RVFTFBIFSNUJDPZBEFDVBEPQBSBMBNVFTUSB 'JHZ

Lo remitimos al laboratorio sin teir. Se enviarn en
porta- preparaciones de plstico o envueltas en papel absorbente para acolcharlas.

Deber ir perfectamente identificado.

Si lo visualizamos nosotros se teir con tcnicas


3PNBOPXTLZ

Biopsias
Materiales: Bistur, tijeras, pinzas, punch, frascos hermticos, fijador (Fig.24).
Fig. 26

23

Trabajo cientfico

Fig. 27

Volumen de fijador
Deber superar el volumen de la muestra en una proporDJOP
Figura 28

Se debe sumergir el material en el fijador y no a la inversa para evitar el contacto de esta con las paredes y el
fondo del recipiente, evitando que se adhiera.
Si la muestra flotara (pulmn) la sumergiremos totalmente en el fijador.

NO

Figura 29
NO

t &MWPMVNFOEFMGJKBEPSOPFTFMBEFDVBEP
t -BNVFTUSBOPFTUGJMFUFBEBFOQPSDJPOFTEF DNT 
est entera.
t /PFTUFUJRVFUBEPPJEFOUJGJDBEPFMGSBTDP

Duracin de la fijacin
(FOFSBMNFOUFMBTNVFTUSBTFTUOGJKBEBTBMBTIPras de haberlas introducido en el fijador.

Figura 29
t &MGSBTDPFTEFQMTUJDPZIFSNUJDPQFSPEFNBTJBEP
pequeo para la muestra.
t -BNVFTUSBOPFTUGJMFUFBEBFOQPSDJPOFTEF DN
t /PIBZGJKBEPSFOFMGSBTDP FTUWBDP

En formol las muestras no se alteran en semanas o meses.

Protocolo
Las muestras debern ir acompaadas de un protocoMPDPO
t
t
t
t
t
t

Bibliografa

-PTEBUPTEFMBOJNBMOPNCSF SB[B TFYP FEBE


%BUPTEFMBDMOJDBPWFUFSJOBSJPRVFMBSFNJUF
)JTUPSJBDMOJDB
-PDBMJ[BDJO%BZIPSBEFMBFYUSBDDJOZGJKBDJO
5SBUBNJFOUPTFNQMFBEPTZSFTQVFTUBTBFTUPT
"OBMUJDBTTJMBTIVCJFSB

1.

#VTI#..BOVBMEFM-BCPSBUPSJP7FUFSJOBSJPEF"OMJTJT$MOJDPT
Ed. Acribia

2.

#& 1PXFST i5IF 1BUIPMPHZ PG /FPQMBTJBw 4NBMM "OJNBM $MJOJDBM


0ODPMPHZ8%4BVOEFST$P



$PXFMM 3- 5BZMFS  3% %JBHOPTUJD $ZUPMPHZ PG EPH BOE DBU &E
"NFSJDBO7FUFSJOBSZQVCMJDBUJPOT *OD

Por favor recordad que enviis la muestra a un citlogo o


a un patlogo no a un adivino.

4.

$PXFMM3- 5BZMFS3% .FJOLPUI+)%JBHOPTUJDDZUPMPHZBOEIFNBUPMPHZPGUIFEPHBOEDBU&E.PTCZ

5.

Errores

%BWJETPIO*)FOSZ+#%JBHOTUJDPDMOJDPQPSFMMBCPSBUPSJP&E
4BMWBUFEJDJO

6.

Figura 28
t /PFTBDPOTFKBCMFFMVTPEFGSBTDPTEFDSJTUBMQVFTEVrante el transporte pueden ocurrir accidentes.

.BSUOF[EF.FSMP &"UMBTEFDJUPMPHBDMOJDBEFMQFSSPZFMHBUP
&E4FSWFU



4UFWFO&8FJTCSPEFi5IF)JTUPQBUIPMPHZMBCPSBUPSZJO%JBHOPTJT
PG/FPQMBTJBw

24