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Facultad de Industrias Alimentarias

Anlisis de Alimentos
I.

INTRODUCCIN

En el anlisis de alimentos existe un marcado inters por el control en la calidad de los

alimentos, es as que para una determinacin cuantitativa de los componentes en los
alimentos y sus aditivos se suele utilizar la aplicacin de la espectrofotometra, el cual
mantiene como objetivo determinar la concentracin del analito en una determinada
muestra; para lo cual, por lo general, se requiere de una transformacin qumica con
reactivos

necesarios

para

obtener

productos

coloreados

que

se

medirn

fotomtricamente en el intervalo de luz visible y existiendo casos tambin donde la

medicin es directa. (Nielsen 1998).
La evaluacin cuantitativa de la concentracin de determinados componentes en
disolucin se basa en la ley de LambertBeer (aplicable solo en disoluciones diluidas,
hasta aproximadamente 10 Mm, que de no ser as podra ser una de las causas de no
obtener una linealidad entre la absorbancia y la concentracin), en la cual las medidas
se llevan a cabo con la longitud de onda en la cual se llega a presentar un mximo de
absorcin, siendo adems generalmente primero la medicin de la extincin de las
disoluciones que contienen la sustancia a investigar en concentraciones exactas, las
cuales son llamadas como disoluciones patrn o estndar para con esta llegar a
construir la curva patrn, y as buscar la concentracin del compuesto buscado de
forma matemtica o grfica (realizndose las medidas frente a un blanco). Es as
como se llega a registrar el control de las concentraciones de los diversos
componentes en los productos alimenticios, resultando esta tcnica de mucha utilidad.
(Matissek et.al. 1998).
El objetivo fue conocer algunos mtodos de determinacin espectrofotomtrica para
alimentos lquidos y slidos, en el caso especfico para la determinacin del contenido
de azcares reductores por el mtodo del DNS.

~1~
Prctica N9: Espectrofotometra

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II.

REVISIN DE LITERATURA

El anlisis qumico puede definirse como el desarrollo de un anlisis de rutina a una

muestra conocida. La qumica analtica, sin embargo, es la aplicacin del conocimiento
qumico y se encarga del perfeccionamiento de los mtodos establecidos, de extender
la aplicacin de mtodos existentes a nuevos tipos de muestras, y del desarrollo de
nuevos mtodos para la medicin de los fenmenos qumicos. (Harvey, citado por
Flores 2011).
2.1.
Teora de la absorcin
La energa E de una radiacin es proporcional a la frecuencia de esta:
E = h.v
Donde el factor de proporcionalidad h es el cuanto de accin de PLANCK. La
frecuencia v, esto es, el nmero de oscilaciones por segundo, es inversamente
proporcional a la longitud de onda de la radiacin.

v=

Siendo c la velocidad de la luz. Sustituyendo esta frmula en la anterior:

E=h . v=

h.c

Como h y c son constantes, la energa de una radiacin es inversamente proporcional

a su longitud de onda; cuanto ms pequea sea esta, mas energtica es la radiacin,
y viceversa.
La regin ultravioleta del espectro se encuentra en el rango de 200 a 400 nm y la
regin visible de 400 a 800 nm. Las energas relacionadas a estas regiones son de
150 a 72 Kcal/mol y de 72 a 36 Kcal/mol respectivamente. Estas magnitudes
normalmente corresponden a la diferencia de energa existente entre dos estados
energticos moleculares. Las transiciones electrnicas en las molculas ocurren
cuando energa de esta magnitud es absorbida por la molcula. Asimismo, la longitud
de onda y la cantidad de energa que un compuesto absorbe depende de la estructura
molecular y de la concentracin del compuesto en mencin respectivamente.
(Settle, citado por Flores 2011).
Absorcin de luz significa captacin de energa por la materia, y puede tener lugar de
tres maneras:

~2~
Prctica N9: Espectrofotometra

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-

Las molculas entran en rotacin.

Partes de una molcula(es decir, tomos aislados o grupos atmicos) vibran unas

respecto de otras.
Un electrn de un tomo o molcula es promovido a un nivel de energa superior.
Expresado de una manera grfica, significa esto que si se imagina un tomo o
molcula a modo de un sistema planetario segn la teora de BOHR: un electrn
experimenta una transicin de una rbita electrnica ms alejada del ncleo y de
mayor energa. (Maier 1981).

2.2.

Espectrofotometra de absorcin

Se basa en medicin de transmitancia T o de la absorbancia A de soluciones que

estn en celdas transparentes que tienen una longitud de trayectoria de b cm.
Normalmente, la concentracin de un analito absorbente se relaciona en forma lineal
con la absorbancia segn la ley de Beer:

A=logT =log

P
=bc
P

Por lo regular, la transmitancia y la absorbancia, no pueden medirse en el laboratorio

porque la solucin del analito debe estar en un recipiente o cubeta transparente. Como
se muestra la figura 1, la reflexin se presenta en las dos interfases aire/pared del
recipiente y en las dos interfases pared/solucin. La atenuacin del haz puede ocurrir
como consecuencia de la dispersin del haz puede ocurrir como consecuencia de la
dispersin causada por molculas grandes y, a veces, porque lo absorben las paredes
del recipiente. Para compensar todos estos efectos, la potencia del haz transmitido por
la solucin del analito se compara con la potencia del haz transmitido por una celda
idntica que contiene solo solvente. Skoog et al. (2008)

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Prctica N9: Espectrofotometra

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Figura 1: Perdidas por reflexin y dispersin con una solucin que est en un
recipiente tpico de vidrio.
Fuente: Skoog et al. (2008)
Las prdidas por reflexin que representan en todos los lmites que separan los
diversos materiales. En este ejemplo, la luz atraviesa las superficies de contacto airevidrio, vidrio-solucin, solucin-vidrio y vidrio-aire.
Entonces la transmitancia y absorbancia experimentales que se aproximan de manera
notable a la transmitancia y absorbancia verdaderas se obtiene mediante las
siguientes ecuaciones

T=

P solucion P
P solvente
P

A=log
log
P solvente P
P solucion
P

2.2.1. Transmitancia Y Absorbancia

En la figura 2, se ilustra un haz de radiacin paralela antes y despus de que ha
pasado a travs de un medio que tiene un espesor de b cm y una concentracin c de
una especie absorbente. Como consecuencia de las interacciones entre fotones y los
tomos o las molculas absorbentes. , la potencia del rayo se atena desde P0 a P. Al
contrario que la transmitancia, la absorbancia de un medio aumenta cuando se
incrementa la atenuacin de un haz. Skoog et al. (2008)

Figura 2: Atenuacin de un haz de radiacin mediante una solucin absorbente.

Fuente: Skoog et al. (2008)

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Prctica N9: Espectrofotometra

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En el caso de la radiacin monocromtica, la absorbancia es directamente
proporcional a la longitud b de la trayectoria a travs de un medio y la concentracin c
de la especie absorbente. Esta relacin se representa con:

A=abc
Donde a es una constante de proporcionalidad que se llama absortividad. La magnitud
de a depende de las unidades de b y c. Para soluciones de una especie absorbente, b
esta con frecuencia en cm y c en gramos por litro. Entonces, las unidades de la
absortividad son L.g-1 .cm-1.
2.3.
Aparatos de medida
Los aparatos ms utilizados en la medida de absorcin de luz son colormetros
(medida de la concentracin de una sustancia coloreada por comparacin con otra,
generalmente por mtodo visual), fotometra (medida comparativa de intensidades
luminosas mediante atenuacin variable de uno de los rayos o por transformacin en
energa elctrica) y espectrometra (determinacin cualitativa o cuantitativa en funcin
de la longitud de onda). (Maier 1981).
Esencialmente, todos los instrumentos son de construccin parecida, representada en
la figura 3.

Figura 3: Componentes principales de instrumentos para medir absorcin del luz.

Fuente: Kirk et al. (1996)
2.3.1. Fuentes de radiacin
En colormetros y fotmetros que operan en la regin visible se utilizan como fuentes
luminosas la luz solar, lmparas incandescentes o lmparas espectrales. Estas ltimas
son tubos de descarga en gases conteniendo un determinado elemento en forma
gaseosa o de vapor (por ejemplo, Hg, Cd), que pueden exigir un calentamiento previo
por una corriente transitoria. Este calentamiento previo puede evitarse si la lmpara
contiene adems un gas noble. En cualquier caso, deben observarse estrictamente las
instrucciones de funcionamiento. Las fluctuaciones de tensin de la red pueden

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Prctica N9: Espectrofotometra

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ocasionar errores considerables en la medida (sobre todo con lmparas de
incandescencia), a consecuencia del cambio en la estabilidad de luz emitida. En
ocasiones, el estabilizador de tensin incorporado al instrumento debe precisar el
concurso de otro estabilizador magntico o, mejor, electrnico previamente conectado.
(Maier 1981).
2.3.2. Ajuste de intensidad
La intensidad de la radiacin que emite una fuente debe reducirse con arreglo a su
potencia en el dominio espectral deseado, a la absorcin en el portamuestras y a la
sensibilidad del detector. Adems, en los mtodos de sustitucin la absorcin
producida por la muestra en el rayo de medida es sustituida en el de comparacin
por un dispositivo de atenuacin ptica. (Maier 1981).
2.3.3. Seleccin de longitudes de onda
En general, las medidas de absorcin conviene efectuarlas, a ser posible, con luz
monocromtica, esto es, luz de una sola longitud de onda, Dicha radiacin puede
obtenerse aproximadamente mediante monocromadores (prismas o redes), que
separan la radiacin continua (por ejemplo, de una cmara de incandescencia) en las
longitudes de onda aisladas de una cuanta depende de su poder de resolucin
(Maier 1981).
2.3.4. Portamuestras
Como portamuestras se usan cubetas, y como la limpieza juega un papel esencial en
la correccin del anlisis, deben manejarse aquellas con mucho cuidado. En el visible
se emplean cubetas de vidrio (grabado: OS o nada), en el UV, cuarzo (grabado: QU).
Las cubetas sucias (incluso pelculas superficiales invisibles de grasa pueden absorber
fuertemente en el UV) se limpian con mezcla crmica (no con lcalis), se lavan
brevemente con agua amoniacal al 0.5% y se enjuagan repetidas veces con agua
destilada. En el llenado con la solucin problema debe asegurarse la ausencia de
burbujas de aire partculas de polvo. Las paredes exteriores de las ventanas se secan
con un pao de lino limpio, gamuza o papel de filtro, y con otra gamuza seca se frotan
hasta recuperar totalmente su brillo (el control se hace observando a travs de ellas
frente a un fondo oscuro). (Maier 1981).
2.3.5. Detectores
En los mtodos fotoelctricos, la medida de la radiacin se lleva a cabo con
fotoelementos (regin visibles), fotoclulas (para UV y visible),

fotomultiplicadores

(visibles y UV), fotorresistencias (en el visible de onda larga e infrarrojo de onda corta),
termoelementos, termopilas, bolmetros o clulas GOLAY (todo para IR). Adems,

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Prctica N9: Espectrofotometra

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pueden utilizarse placas fotogrficas (ventajas: accin acumulativa de la radiacin
durante un tiempo cualquiera; favorables en el caso de intensidades muy pequeas).
(Maier 1981).

2.3.6. Instrumento indicador

En los mtodos fotoelctricos se mide la fotocorriente (directamente o amplificada, con
un galvanmetro, por ejemplo, galvanmetro de torsin, galvanmetro de espejo) o la
cada de tensin a travs de una resistencia elevada (con un electrmetro). Incluso
con fotomultiplicadores suele aplicarse la corriente a fin de utilizar galvanmetros
sencillos (indicadores). Normalmente, se considera que la fotocorriente producida por
el detector (y, por tanto, la indicacin en el instrumento) es proporcional a la intensidad
de luz que incide sobre aqul. Esto no es estrictamente correcto, segn el tipo de
detector se cometen errores de 0.1-1.0%. A fin de excluir en lo posible tales errores,
as como las oscilaciones de intensidad de la fuente luminosa, que pueden originar
errores an mayores, se han desarrollado distintos mtodos de medida que ms
adelante sern brevemente considerados. Al mismo tiempo, se describirn, como
ilustracin, algunos aparatos y la forma de operar con ellos. (Maier 1981).
2.4.

Determinacin de azcares reductores totales por espectrofotometra

(Mtodo de cido dinitrosalicilico DNS)

Los azucares reductores poseen un grupo carbonilo libre formando un grupo
hemiacetal que le confiere la caracterstica de poder reaccionar con otros compuestos.
El mtodo de Miller o DNS (cido dinitrosalicilico) como reactivo tiene la capacidad de
oxidar los azucares reductores mostrando un comportamiento diferencial hacia mono y
disacridos, dando resultados colorimtricos que se puede medir con una longitud de
onda de 575 nm. (Cristancho y Monroy 2014).
Segn Southgate citado por Cristancho y Monroy (2014), en disolucin alcalina el
azcar se hidroliza produciendo un compuesto que se reduce a un grupo nitro del
DNS, para dar el producto monoamino correspondiente. Esta reaccin da un producto
colorido en solucin alcalina

~7~
Prctica N9: Espectrofotometra

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III.

MATERIALES Y MTODOLOGA

3.1. MATERIALES:
Muestras alimenticias:
1. Caramelos de limn.
2. Jugo de naranja.
3. Jugo de pia.

Figura 4:

Muestras

alimenticias
Materiales de laboratorio:
1. Embudo Buchner.
2. Papel filtro.
3. Erlenmeyer.
4. Fiola.

Figura 5:

5. Kitasato.
6. Tubos de prueba.
7. Bomba de vaco.
8. Espectrofotmetro

Materiales de
laboratorio

~8~
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3.2. REACTIVOS
-

SOLUCIN DE DNS: Disolver 11 g de hidrxido de sodio, 10 g de DNS, 2 g de

fenol y 0.5 g de bisulfito de sodio, llevar a un litro y conservar en refrigeracin

en botella oscura.
SAL DE ROCHELLE: Preparar una solucin al 40% de tartrato de sodio y

potasio y refrigerar.
SOLUCIN ESTNDAR DE GLUCOSA: Preparar 6 soluciones entre 1.5 a

7.5 x 104

g de glucosa anhidra / 0.5 mL de solucin.

3.3. PROCEDIMIENTO
3.3.1. Preparacin de la curva estndar.
1. Se pes aproximadamente 0.2 g de glucosa anhidra.
2. Se procedi a colocar dicha cantidad de glucosa anhidra en una fiola de
100ml, para posteriormente llegar a enrasar con agua destilada.
3. Luego, se procedi a tomar alcuotas de 7, 9, 11,14.5, 18 y 20 mL;
colocndolas en fiolas de 25 mL para llevarlas a enrasar con agua destilada.
4. Se coloc, en tubos de prueba, 0.5 mL de la solucin de glucosa obtenida en
la etapa anterior, para adicionar 3mL de DNS y luego se llev a calentar a
ebullicin por 5 minutos.
5. Posteriormente cumplido los 5 minutos del tiempo de ebullicin, se adicion 1
mL de sal de Rochelle seguido de 10 mL de agua destilada, y se agit la
disolucin obtenida (se mezcl).
6. Se esper a que enfre a temperatura ambiente para luego proceder a la
medicin de la absorbancia en el espectrofotmetro con una lectura de
longitud de onda de 550 nm.
7. Se realiz para realizar la curva estndar, tres repeticiones de cada solucin,
incluyndose adems la lectura de un blanco (agua destilada, el cual
present una lectura de 0.42-0.43), para la correccin respectiva en la
medicin del espectrofotmetro; y se someti la lectura de estos pun estos
puntos obtenidos a un anlisis de regresin lineal.
8. Se grafic la absorbancia, en el eje de las ordenadas versus la
concentracin, en el eje de las abscisas.

3.3.2. Anlisis de las muestras.

A. Caramelo de limn:

~9~
Prctica N9: Espectrofotometra

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1. Se trituraron 2 pastillas del caramelo de limn.
2. Se pes aproximadamente 0.5 g de la muestra triturada y se diluy en
una fiola con 50 mL de agua destilada.
3. Luego, se procedi a tomar una alcuota de 1 mL de la disolucin
obtenida y 49 mL de agua destilada en una fiola de 50 mL, y otra
alcuota de 1mL de la disolucin con 99 mL de agua destilada en una
fiola de 100 mL
4. Se coloc, en tubos de prueba 0.5 mL de la solucin de glucosa
obtenida en la etapa anterior, para adicionar 3mL de DNS y luego se
llev a calentar a ebullicin por 5 minutos.
5. Posteriormente cumplido los 5 minutos del tiempo de ebullicin, se
adicion 1 mL de sal de Rochelle seguido de 10 mL de agua destilada,
y se agit la disolucin obtenida (se mezcl).
6. Se realiz los mismos procedimientos que las soluciones para la curva
estndar
B. Jugo de naranja:
1. Se diluy 1 mL del jugo de naranja con 50 mL de agua destilada, dos
repeticiones.
2. Se coloc, en tubos de prueba 0.5 mL de la solucin de glucosa
obtenida en la etapa anterior, para adicionar 3mL de DNS y luego se
llev a calentar a ebullicin por 5 minutos.
3. Posteriormente cumplido los 5 minutos del tiempo de ebullicin, se
adicion 1 mL de sal de Rochelle seguido de 10 mL de agua destilada,
y se agit la disolucin obtenida (se mezcl).
4. Se realiz los mismos procedimientos que las soluciones para la curva
estndar.

C. Jugo de pia.
1. Se diluy 1 mL del jugo de naranja con 50 mL de agua destilada, dos
repeticiones.
2. Se coloc, en tubos de prueba 0.5 mL de la solucin de glucosa
obtenida en la etapa anterior, para adicionar 3mL de DNS y luego se
llev a calentar a ebullicin por 5 minutos.

~ 10 ~
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3. Posteriormente cumplido los 5 minutos del tiempo de ebullicin, se
adicion 1 mL de sal de Rochelle seguido de 10 mL de agua destilada,
y se agit la disolucin obtenida (se mezcl).
4. Se realiz los mismos procedimientos que las soluciones para la curva
estndar.
D. Jugo de caa de azcar.
1. Se diluy 1 mL del jugo de caa de azcar con 50 mL de agua
destilada, dos repeticiones.
2. Se coloc, en tubos de prueba 0.5 mL de la solucin de glucosa
obtenida en la etapa anterior, para adicionar 3mL de DNS y luego se
llev a calentar a ebullicin por 5 minutos.
3. Posteriormente cumplido los 5 minutos del tiempo de ebullicin, se
adicion 1 mL de sal de Rochelle seguido de 10 mL de agua destilada,
y se agit la disolucin obtenida (se mezcl).
4. Se realiz los mismos procedimientos que las soluciones para la curva
estndar.

IV.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

En el Cuadro 1 se presenta las distintas alcuotas tomadas de una disolucin de

0.20056 g de glucosa anhidra en 100 mL de agua destilada cada una con sus
respectivas concentraciones y absorbancias.

Cuadro 1: Concentraciones de glucosa y sus absorbancias (550 nm) usadas para

la curva de calibracin

~ 11 ~
Prctica N9: Espectrofotometra

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Alcuota

Concentracin

Absorbancia

(mL)

(g/mL)

R1

R2

R3

R4

0.000561568

0.169

0.164

0.174

0.000722016

0.392

0.389

0.375

0.382

11

0.000882464

0.482

0.476

0.452

0.486

14.5

0.001163248

0.644

0.466

0.582

0.645

18

0.001444032

0.868

0.927

0.819

0.819

20

0.00160448

0.647

0.637

0.672

En la Figura 1 se muestra la curva de calibracin de la glucosa que sirve de referencia

para la determinacin de glucosa en las muestras a una longitud de onda de 550nm.

~ 12 ~
Prctica N9: Espectrofotometra

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Figura 6: Curva de calibracin o estndar de la glucosa

En el Cuadro 2 se presenta las distintas absorbancias de las muestras que con ayuda
de la curva de calibracin se obtienen las concentraciones finales de glucosa en cada
una.

Cuadro 2: Absorbancias y concentraciones de las muestras

Muestras

Absorbancias

Concentracin
(g/mL)

Concentracin
(g/ 100 mL)

Jugo de caa de azcar

0.128

0.0002977

0.594

Jugo de pia

0.317

0.0006563

3.2815

Caramelo de limn

0.022

0.0000966

47.46

0.393

0.0008005

0.404

0.0008214

Jugo de naranja

4.1.

4.05475

Curva de Calibracin

Segn Vargas (2011) mediante un mtodo que obedezca la ley de BeerLambert

se puede realizar un anlisis cualitativo de cualquier especie en solucin,
conociendo por supuesto la longitud de onda de mxima absorbancia del
analito, esto por medio de la determinacin de la absorbancia en funcin
de soluciones de concentracin conocida a travs de la elaboracin de una
curva de calibracin que las relacione de manera proporcional y linealmente,
para lo que se requiere de un mtodo estadstico. El mtodo estadstico clsico y
que se adecua a las caractersticas para la realizacin de dicha actividad es el de
los Mnimos Cuadrados en los que se grafica la ordenada
independiente) con los datos de la respuesta del aparato y

(la

variable

la abscisa

(variable dependiente) en donde se coloca la concentracin o el tanto por

ciento del analito, lo ms habitual (y deseable) es que la grfica se aproxime a

~ 13 ~
Prctica N9: Espectrofotometra

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una lnea recta, sin embargo puede darse el caso de que los valores no
coincidan en una recta debido a errores aleatorios del proceso de medida, el
mtodo de los mnimos cuadrados nos sirve para intentar ajustar la mejor
lnea recta que conecte los puntos.
Skoog et al. (2001) menciona que la linealidad del mtodo se observa en la figura
2, la cual es la funcin de la concentracin con absorcin; calculada a partir de la
ecuacin de la regresin lineal determinada por el mtodo de los mnimos
cuadrados. El coeficiente de correlacin lineal es usado para indicar cunto puede
ser considerada adecuada la recta como modelo matemtico.

Figura 2: Absorbancia vs Concentracin

Fuente: Skoog et al. (2001)

Harris (2007) menciona que en un anlisis cuantitativo:

1. Las medidas ms fiables de absorbancia son entre 0.4 y 0.9. Si la
absorbancia es menor, la potencia radiante que atraviesa la muestra es
parecida a la que atraviesa a la referencia, y la incertidumbre relativa de
la diferencia entre estos dos nmeros sera grande. Si la absorbancia es
alta, llega poca luz al detector y disminuye la relacin seal a ruido.
2. Se debe medir la absorbancia en un pico o en un hombro donde
dA/d sea pequea.
3. La anchura de banda del monocromador debe ser tan grande
como sea posible, pero pequea comparada con la banda que se quiere
medir.

4.2.

Jugo de caa de azcar

~ 14 ~
Prctica N9: Espectrofotometra

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El porcentaje de glucosa experimental en el jugo de caa fue de 0.594 %, dicho
valor no coincide con lo expuesto por Aguirre y Poveda (2001), los cuales
mencionan que los azcares ms simples como la Glucosa y Fructosa existen
en el jugo de caa con un grado avanzado de madurez en una concentracin
entre 1% y 5%, adems la calidad del jugo depende en buena parte de la
proporcin de estos Azcares Reductores, los cuales cuando aumentan por
causa del deterioro o la inmadurez de la planta, pueden producir incrementos
en el color y variacin en el color. Dicho porcentaje, tambin coincide con
Larrahondo (1995), el cual menciona que la celulosa est formado por
azcares sencillos como la glucosa y que el contenido porcentual, se le
denomina comnmente como Brix, y que se encuentra en una concentracin
de 2% a 5 %.
Por otro lado, segn Bello et al. (2006), el mtodo del DNS no es recomendable
utilizarlo para la determinacin de azcares reductores en muestras
intensamente coloreadas, sin embargo en el jugo de caa si es posible,
adicionalmente dice que puede variar de 0.9 a 1.2, por lo que estos valores,
seran los ms prximos al resultado experimental y totalmente diferentes a lo
mencionado por los otros dos autores anteriores. Es posible que la cantidad de
glucosa terico de la caa de azcar no coincida con el experimental, debido a
que hubo errores del personal en el momento de realizar la prctica o tambin
mal manejo de los reactivos.

4.3.

Jugo de Pia

El valor de azcares reductores representados por el porcentaje de glucosa

obtenido fue de 3.2815 g por 100 mL de jugo de pia teniendo relacin con lo
mencionado por beda (2012) donde indica que el porcentaje de glucosa en el
jugo de pia es de 2.60 g/100 mL de jugo. Aunque el contenido de glucosa es
cercano tiene diferencias significativas esto puede ser debido a que la
absorbancia es pequea (0.317) y se encuentra en un intervalo de error del
espectrofotmetro. Segn Harris (2007) la mayora de los espectrofotmetros
presentan un mnimo de incertidumbre relativa a valores intermedios de
absorbancia (A= 0.4 - 0.9). Si pasa poca luz por la muestra (gran absorbancia),
es difcil medir la intensidad. Si pasa demasiada luz (baja absorbancia), es
difcil apreciar la diferencia entre la muestra y la referencia.

~ 15 ~
Prctica N9: Espectrofotometra

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4.4.

Caramelo de Limn

Segn Gil (2010) los caramelos son masa cristalinas obtenidas por
concentracin de glucosa o mezcla de azcar/jarabe de glucosa en un
porcentaje mnimo del 50%. En el caso del caramelo de limn el porcentaje
obtenido es prximo siendo 47,46% adems esta cantidad indica el porcentaje
de azcares reductores presentes en la muestra. El porcentaje determinado
tiene gran concordancia con lo sugerido por Malagn (2007) donde menciona
que la cantidad de azcares reductores en porcentaje de glucosa en un
caramelo es de 48% teniendo un resultado sin un error significativo aunque las
posibles diferencias obtenidas pueden haber sido provocadas por un mal
manejo del equipo o en la calibracin del blanco.

4.5.

Jugo de Naranja

En la prctica realizada se obtuvo que 100 ml de jugo de naranja contienen

4.05475 g de azcares reductores, esto se asemeja a lo investigado por Hours
et al. (2005) quienes encontraron que en el zumo de naranja el contenido de
azcares reductores es de 4.0 0.5 g en 100ml con el mtodo de la AOAC
31.034; esa cantidad, se encuentra en los lmites establecidos por el autor, por
lo que hubo influencia del grado de madurez.
As mismo para beda (2012) los resultados del contenido de azcares
reductores fueron de 5 g en 100ml de zumo de naranja con el mtodo de
cromatografa lquida de intercambio aninico con deteccin amperomtrica de
pulsos (HPAEC) con un cromatgrafo Metrohm, comprobando as que no se
cometi error en la prctica.

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Otra causa de la mnima diferencia de resultados respecto a beda (2012) se
puede atribuir a la calidad de la sal de Rochelle; ya que si esta se encuentra en
mal estado ya sea por vencimiento o algn fenmeno fisicoqumico que haya
experimentado no podr evitar la reaccin del DNS con el oxgeno disuelto
impidiendo la estabilidad del color y provocando interferencia en la lectura del
espectrofotmetro (Ratsimbal et al. 1999).

V.

CONCLUSIONES

Los valores obtenidos de las concentraciones de glucosa por el mtodo

DNS y espectrofotometra resultaron respectivamente de 0.594, 3.2815,
47.46 y 4.05475. Siendo la concentracin de la muestra de jugo de pia,
caramelo de limn y jugo de naranja como los valores que ms se
acercaron a los valores referenciales.
El caramelo de limn present una mayor concentracin de glucosa
(azcar reductor) en comparacin con las dems muestras.
La linealidad en una grfica absorbancia concentracin de la Ley de
Beer

es

efectiva

mayormente

en

disoluciones

diluidas

aproximadamente 10 mM.

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Prctica N9: Espectrofotometra

hasta

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Los reactivos que pasaron de la fecha de vencimiento afectan los datos
requeridos por calcular. (Por ejemplo una sal de Rochelle en mal
estado, llegara a impedir que se d la reaccin del DNS con el oxgeno,
lo cual a su vez generara distorsiones con el paso de la luz en la
disolucin efectuada).

VI.
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VII.

ANEXO

AOAC Mtodo Oficial 955.39

Color total en aditivos de color
Mtodo Espectrofotomtrico
Primera Accin 1934
Accin final 1960

A. Aparatos
(a). Espectrofotmetro.- Para la medicin precisa de la absorbancia en la regin
400 - 750 nm; preferiblemente con ancho de ranura efectiva de <10 nm.
(b) Dos o ms celdas de absorcin emparejadas
B. Reactivos
(a). Estndar del colorante a determinar.- Los estndares deben ser
cuidadosamente preparadas y de la mayor pureza alcanzable. El contenido de
colorante puro de los estndares debe ser conocido con precisin para obtener
resultados cuantitativos.
(b).

Solventes.- Libre de materia en suspensin.

C. Estandarizacin
Preparar una serie de soluciones de concentraciones conocidas de patrn y
determinar la A (absorbancia) de soluciones, corregir la A debida al disolvente ya la
clula, a la longitud de onda adecuada. (Longitud de onda en la que la A es mxima.)
Ajustar las concentraciones de las soluciones para obtener valores de A de 0,4 - 1,0
con el instrumento y las clulas utilizadas. Trazar o tabular los datos obtenidos.

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D. Determinacin
Preparar la solucin de ensayo en disolvente utilizado en la normalizacin. (La
solucin debe ser de tal concentracin que la A obtenida est dentro del rango cubierto
por las normas examinadas). Determinar la A de esta solucin de ensayo en las
mismas condiciones utilizadas en la estandarizacin.
Calcular el contenido total de color de la muestra de ensayo de la absorbancia de la
solucin de ensayo y la A de la solucin patrn:
Total color = (A/concentracin de la solucin de prueba)
(concentracin de la solucin estndar/A) x pureza del estndar
Si la lnea recta no resulta cuando se trazan los datos de absorbancia y concentracin
obtenidos del examen de la solucin estndar, es decir, si la ley de Beer no se cumple,
determine la concentracin de solucin "desconocida" en comparacin con los datos
obtenidos a partir de una solucin conocida de concentracin casi igual.
Fuente: AOAC (2005)

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