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Universidad Andrs Bello

Facultad de Medicina
Departamento de Ciencias Biolgicas
Laboratorio de Biologa Celular BIO 131

TRABAJO PRCTICO N3:


COMPONENTES QUMICOS DE LA
CLULA

Alumnos:
-Francisco Echeverra M.
-Jean Llanillos
-Megan Neumann
Seccin: 1
Profesores:
-Mara Jos Daz Latas
-Constanza Riquelme Escudero
Fecha de entrega: 27/07/2016

-2016INTRODUCCIN

Si bien se sabe que las clulas son estructuras increblemente pequeas, estas
constituyen la unidad bsica de la vida; su organizacin y tamao son crticos para el
mantenimiento de la homeostasis y su forma permite que se adapten para cumplir esta
funcin 1. Estas funciones se llevan a cabo gracias a diferentes componentes qumicos
ubicados y distribuidos de diferente manera segn el tipo celular. Esta variedad se debe a la
alta especificidad de cada una de ellas. Hidratos de carbono, protenas, sales minerales,
entre otros, son algunas de las diversas molculas que encontramos dentro de estas
fascinantes estructuras.
Muchas de estas molculas interaccionan entre ellas. Este es el caso del ADN, quien posee
una estrecha relacin con protenas llamadas histonas, las cuales, gracias a las cargas
positivas de sus grupos aminos, interaccionan con los grupos fosfatos de estos cidos
nucleicos, generando una estructura altamente estable conocida como cromatina 2.
Durante el desarrollo del presente prctico, se explicarn los procedimientos llevados a
cabo para identificar la presencia de estas molculas en diferentes tipos de muestras.
Gracias a los diversos tipos de reactivos empleados, podremos identificar una variedad de
biomolculas. Por ejemplo, se reconocern monosacridos por medio del reactivo de
Somogyi, el cual reaccionar gracias a la capacidad de estas molculas de reducir
hidrxidos metlicos 3.
Es as como tambin se corroborar que el reactivo de Somogyi se encuentra capacitado
para realizar la identificacin no solo de monosacridos, sino que tambin ser capaz de
reaccionar al entrar en contacto con disacridos, pues estos ltimos se encuentran
constituidos por monosacridos gracias a una sntesis por deshidratacin.
OBJETIVOS
1. Comprobar la presencia de monosacridos y polisacridos en las muestras, segn el
reactivo de Somogyi y Lugol respectivamente.
2. Reconocer, de forma cualitativa, la presencia de protenas en las muestras, a travs
del reactivo Biuret y la intensidad de la reaccin.
3. Corroborar la solubilidad e insolubilidad de lpidos en solventes orgnicos e
inorgnicos respectivamente.
4. Identificar la existencia de distintas sales minerales en la misma solucin, a travs
de la agregacin de distintas sustancias.
5. Determinar la incidencia del factor T en la actividad enzimtica.

MATERIALES Y MTODOS
2

Para la actividad N1 A se rotularon 5 tubos de ensayo del 1 al 5. A cada uno se le


aadi 1 ml del reactivo de Somogyi junto con 1 ml de una de las muestra, que eran: agua
destilada, solucin de glucosa al 1%, solucin de almidn al 1%, leche y solucin NaCl al
1%. Estas se aadieron a los tubos 1, 2, 3, 4, 5 respectivamente. Luego se agit cada tubo,
se colocaron en una gradilla y se llevaron al bao termoregulado, a 90C por 3 minutos.
Transcurrido el tiempo, fueron extrados, dejados enfriar y se procedi a observar la
reaccin de cada uno. El objetivo de esta actividad, fue identificar la presencia de
monosacridos y algunos disacridos mediante la reaccin de Somogyi.
Para la actividad N1 B se repiti la preparacin en 5 tubos de ensayos nuevos, pero esta
vez se aadi 1 gota de Lugol como reactivo. Posteriormente se agit cada tubo de ensayo
y se procedi directamente a observar la reaccin. El objetivo fue reconocer la presencia de
polisacridos en las muestras antes sealadas al reaccionar con Lugol.
Para la actividad N2 se dispusieron 5 tubos de ensayo. Se agreg a cada uno 1 ml de una
de las siguientes muestras en los tubos rotulados del 1 al 5 en el siguiente orden: agua
destilada, solucin de glicina 1%, clara de huevo, leche y solucin de NaCl al 1%. Luego,
se agreg 1 ml del reactivo de Biuret a cada muestra. Posteriormente, se agit cada tubo de
ensayo, y se observ la reaccin. El objetivo fue reconocer la presencia de protenas en las
muestras, utilizando el reactivo de Biuret.
En la actividad N3 se ocuparon 2 tubos de ensayo, rotulados como 1 y 2. Al N1 se le
aadi 1 ml de agua, mientras que al N2 se le agreg 1 ml de ter. Acto seguido, se aadi
1ml de aceite a cada uno. Posteriormente se agit con fuerza cada tubo y se dej reposar,
para finalmente proceder a observar la reaccin. El objetivo fue reconocer la presencia de
lpidos a travs de la tcnica de solubilidad.
En la actividad N4 se tomaron 2 tubos de ensayo, rotulados como 1 y 2 y se aadi 1 ml
de solucin de Nitrato de Plata 1% al tubo N1 y 1ml de solucin de Oxalato de Amonio al
N2. A cada uno se le agreg 1 ml de Cloruro de Calcio. El objetivo fue reconocer la
presencia de sales minerales, especficamente Cloruros en el tubo N1 y Calcio en el N2.
Finalmente en la actividad N5 se utilizaron dos tubos de ensayos, rotulados con los N 1 y
2. En el tubo N1 se coloc un trozo de hgado de Gallus gallus domesticus y se aadi 1
ml de agua oxigenada. En el tubo N2 se agreg otro trozo de hgado de Gallus gallus
domesticus, junto con 1 ml de agua destilada. Posteriormente, este tubo de ensayo fue
llevado al bao termoregulado a 90C, durante 30 minutos. Al extraer el tubo N2, se
procedi a retirar el exceso de agua y se agreg 1 ml de agua oxigenada. El objetivo era
determinar la presencia de Catalasa activa e inactiva, mediante la reaccin con perxido de
hidrgeno, ms conocido como agua oxigenada.

RESULTADOS
3

ACTIVIDAD N1: Reconocimiento de Hidratos de Carbono.


A) Identificacin de monosacridos mediante la reaccin de Somogyi.
Tabla I: Reaccin de las muestras con reactivo Somogyi.
N
Reactivo
tubo de
de
Muestra
Reaccin
ensayo Somogyi
1

1 mL

Agua destilada. 1 mL

(-)

(+)(+)(+)

1 mL

Solucin de glucosa 1%. 1


mL

1 mL

Solucin de almidn 1%. 1


mL

(-)

1 mL

Leche. 1 mL

(+)(+)

1 mL

Solucin de NaCl 1%. 1 mL

(-)

Simbologa:

Observacin
No ocurren cambios en el color de la
muestra (permanece como azul claro,
que es el color del reactivo).
Se observa un cambio de coloracin
de la muestra, pasando desde un azul
claro a un rojo ladrillo. Adems, en la
parte inferior del tubo de ensayo, se
visualiza un precipitado del mismo
color.
No ocurren cambios en el color de la
muestra (permanece como azul claro,
que es el color del reactivo).
Se observa un cambio de coloracin
en la muestra, de un azul claro a un
naranja de tonalidades pastel y
lechoso. En la parte inferior se
visualiza un precipitado del mismo
color.
No ocurren cambios en el color de la
muestra (permanece como azul claro,
que es el color del reactivo).

(-): Reaccin negativa


(+):Reaccin positiva leve
(+)(+):Reaccin positiva
intermedia
(+)(+)(+):Reaccin positiva

Cul es el color y la cantidad relativa del precipitado en cada uno de los tubos?
4

En los tubos de ensayo nmero 1 (agua destilada) , nmero 3 (solucin de almidn


1%) y nmero 5 (solucin de NaCl 1%) no se observ ningn cambio (vase Tabla I),
permaneciendo el tono azul claro otrogado por el reactivo de Somogyi. Tampoco se
observ la formacin de algun tipo de precipitado. Por otro lado, los tubos de ensayo
nmero 2 (solucin de glucosa 1%) y nmero 4 (leche) presentaron un cambio en su
coloracin.
El tubo que contiene la solucin de glucosa reaccion con el reactivo de Somogyi,
cambiando drsticamente su coloracin, pasando de un azul claro a un rojo ladrillo intenso.
Ademas se observ la formacin de un precipitado de partculas del mismo color en la parte
inferior del tubo de ensayo.
En el tubo nmero 4, que contena leche, tambin se pudo observar un cambio en su
coloracin, pasando de un azul blanquecino a un naranjo en tonalidades pastel, de aspecto
lechoso (debido al tipo de muestra). Por ltimo la formacin de precipitado en este tubo de
ensayo fue minscula en comparacin a la formada en el tubo nmero 2 que contena
glucosa (vase Tabla I).
Revise la estructura qumica de los monosacridos. A qu caracterstica se debe su
capacidad reductora?
La capacidad reductora de los monosacridos, en medios alcalinos y calientes, se
debe a que poseen grupos aldhedos o cetos (grupos carbonilos) 2, los cuales pueden
oxidarse dando paso a un cido 4. Por ende, estos monosacridos reaccionan con el reactivo
de Somogyi, actuando como un agente reductor, formando as xido cuproso (Cu 2O). Este
xido cuproso es el responsable del color rojo ladrillo caracterstico de la reaccin 2.

B) Identificacin de polisacridos mediante la prueba de Lugol.


5

N tubo
de
ensayo

Reactivo Lugol

Muestra

Reaccin

1 mL

Agua destilada, 1 mL

(-)

1 mL

Solucin glucosa
1%, 1 mL

(-)

1 mL

Solucin almidn
1%, 1 mL

(+)(+)(+)

1 mL

Leche, 1 mL

(-)

1 mL

Solucin de NaCl
1%, 1 mL

(-)

5
Tabla II: Reaccin de las muestras con reactivo Lugol.

Simbologa:

(-): Reaccin negativa


(+):Reaccin positiva leve
(+)(+):Reaccin positiva
intermedia
(+)(+)(+):Reaccin positiva

ACTIVIDAD N2: Reconocimiento de Protenas.


6

Observacin
La muestra adopta
una
coloracin
amarillo mostaza,
debido al color del
reactivo.
La muestra adopta
una
coloracin
amarillo mostaza,
debido al color del
reactivo.
La
muestra
presenta
un
cambio radical de
coloracin,
tornndose a un
azul-violeta
negruzo
muy
intenso.
La muestra adopta
un color amarillo
lechoso, debido a
las caractersticas
de la muestra y el
color propio del
reactivo.
La muestra adopta
una
coloracin
amarillo mostaza,
denido al color del
reactivo.

Tabla III: Reaccin de las muestras con reactivo de Biuret.


N tubo
Reactivo de
de ensayo
Biuret
Muestra
Reaccin
1

1 mL

Agua destilada. 1 mL

(-)

1 mL

Solucin de Glicina
1%. 1 mL

(+)(+)

1 mL

Clara de huevo 1 mL

(+)(+)(+)

1 mL

Leche. 1 mL

(+)

1 mL

Solucin de NaCl 1%.


1 mL

(-)

Observacin
No ocurren cambios en el color de la
muestra
(permanece
celeste
transparente, que es el color del
reactivo).
Se observa un cambio de coloracin
de la muestra, quedando color azul
transparente homogneo suave.
Se observa un cambio de coloracin
en la muestra, tornndose azul
intensa, homognea algo turbia.
Se observa un cambio de coloracin
en la muestra, tornndose celeste
opaca homognea.
No ocurren cambios en el color de la
muestra (permanece celeste claro,
que es el color del reactivo).

(-): Reaccin negativa


Simbologa: (+):Reaccin positiva leve
(+)(+):Reaccin positiva
intermedia
(+)(+)(+):Reaccin positiva

Cmo se explica la diferencia de intensidades en los tubos que presentaron una


reaccin positiva?
7

El reactivo de Biuret contiene Sulfato de Cobre (CuSO 4) que en solucin acuosa


alcalina (de NaOH o KOH) reacciona
generando un compuesto de color violeta
intenso, ya que se forma un complejo de
coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares
de electrones no compartidos del nitrgeno
que forma parte de los enlaces peptdicos de
las protenas 5.
Es importante destacar, que esta reaccin la
producen los pptidos y las protenas, pero no
as los aminocidos, ya requiere la presencia
de enlace peptdico (- CO- NH -) que se
destruye al liberarse los aminocidos. Por Imagen N1: Enlace coordinado
ende, la reaccin ser positiva en compuestos entre Cobre y tomos de Nitrgeno.
que contengan dos o ms enlaces peptdicos
consecutivos en sus molculas. Por otro lado,
la intensidad de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas (enlaces
peptdicos) 6. Por ello, la muestra que contena clara de huevo, que contiene protenas como
la ovoalbmina (54%), ovomucina (11%) y lisozima (3,4%) 7, fue la que form la reaccin
ms positiva, mientras que las muestra con leche, que contiene mezclas de otros
componentes qumicos como lactosa, metioninas, cidos grasos de cadena corta, entre otros
8
, form reacciones menos intensas, al tener menor proporcin de protenas. Por ltimo, la
solucin con el aminocido Glicina al 1%, reaccion pobremente, ya que para que el
reactivo reaccione, requiere la presencia de al menos dos o ms enlaces peptdicos
consecutivos en sus molculas (- CO- NH -), como ocurre en pptidos y protenas.

ACTIVIDAD N3: Reconocimiento de Lpidos.


Tabla IV: Reaccin de aceite con ter y agua destilada.
8

N
tubo de
ensayo

Aceite

Reactivo

Solubilida
d

1 mL

Agua destilada. 1 mL

(-)

1 mL

ter. 1 mL

(+)

Simbologa:

Observacin
Al agitar se forman micelas (gotitas),
y al dejar en reposo se observa la
divisin del aceite y el agua en fases,
quedando el aceite sobre el nivel del
agua.
Se observa la formacin de una
solucin homognea y transparente.
Se forma una emulsin, con gotitas en
la paredes.

(-): Reaccin negativa


(+):Reaccin positiva leve
(+)(+):Reaccin positiva
intermedia
(+)(+)(+):Reaccin positiva
intensa

ACTIVIDAD N4: Reconocimiento de Sales Minerales.


Tabla V: Reaccin de Cloruro de Calcio con Nitrato de Plata y Oxalato de Amonio.
N
9

tubo de
ensayo

Cloruro
de
Calcio

Reactivo

Observacin

1 mL

Nitrato de Plata. 1 ml

Oxalato de Amonio. 1 ml
2

Simbologa:

1 mL

Se forma una solucin blanca fina,


homognea, opaca, de aspecto
lechoso, con un precipitado que
decanta al fondo del tubo. Al agitar se
mantiene el precipitado y no se vuelve
homogneo.
Se observa la formacin de una
solucin blanca cristalina, que en
reposo se separa en fases blancas,
siendo ms opaca la del fondo como
precipitado. Al agitar se vuelve
homognea la muestra.

(-): Reaccin negativa


(+):Reaccin positiva leve
(+)(+):Reaccin positiva
intermedia
(+)(+)(+):Reaccin positiva

ACTIVIDAD N5: Reconocimientos de enzimas.


Tabla VI: Reaccin de hgado de Gallus gallus domesticus con perxido de hidrgeno
(H2O2).
10

N tubo de ensayo

Muestra

Hgado de Gallus
gallus domesticus

Simbologa:

Tratamiento

Hgado de Gallus
gallus domesticus

Sin tratamiento

Sometido a bao
termoregulado a
90C por 30
minutos

Observaciones
Al entrar en contacto
con el perxido de
hidrgeno se genera un
fuerte
burbujeo,
notando una pequea
liberacin de calor
durante este proceso,
acompaado
de
espuma
de
color
blanco.
Al entrar en contacto
con el perxido de
hidrgeno,
no
se
visualiza ningn tipo
de reaccin.

(-): Reaccin negativa


(+):Reaccin positiva leve
(+)(+):Reaccin positiva
intermedia
(+)(+)(+):Reaccin positiva

DISCUSION
ACTIVIDAD N1: Reconocimiento de Hidratos de Carbono.
A) Identificacin de monosacridos mediante la reaccin de Somogyi.
11

Al someter las muestras a un reconocimiento de hidratos de carbono, con reactivo de


Somogyi, los tubos de ensayo nmero 1 (agua destilada), 3 (solucin de almidn 1%) y 5
(solucin de NaCl 1%), no presentaron cambios en su coloracin. Esta reaccin negativa se
debe a la ausencia de monosacridos que acten como agentes reductores, por lo cual el
hidrxido de cobre (Cu(OH2)) no es reducido a xido cuproso (Cu2O) 2.
Por el contrario, los tubos de ensayo nmero 2 (solucin de glucosa 1%) y 4 (leche), si
presentaron cambios en su coloracin (vase Tabla I).
La reaccin positiva e intensa, en el caso de la glucosa, ocurre debido a que esta es un
monosacrido de tipo hexosa 9, que presenta un grupo aldehdo o ceto que acta como
agente reductor, reduciendo el hidrxido de cobre (Cu(OH2)) a xido cuproso (Cu2O) 2.
En el caso de la leche se obtuvo una reaccin de mediana intensidad. El resultado se
comprende debido a la composicin de la leche. En esta, podemos encontrar presencia de
lactosa, un disacrido formado por glucosa (monosacrido) + galactosa (monosacrido) 9.
B) Identificacin de polisacridos mediante la prueba de Lugol.
Al someter las muestras mencionadas a un reconocimiento de hidratos de carbono, en base
a Lugol, los tubos de ensayo nmero 1 (agua destilada) , 2 (glucosa), 4 (leche) y 5 (solucin
de NaCl 1%), no presentaron reaccin, manteniendo la coloracin marrn rojiza del
reactivo, debido a que no contienen polisacridos que capturen el yodo dentro de sus
estructuras qumicas 2 . Por el contrario, la solucin de almidn (tubo nmero 3) se torn a
un color azul-violeta negruzco; esto debido a que el almidn es un polisacrido de
glucosas9. El I2 contenido en el Lugol queda atrapado en las cadenas qumicas del almidn,
las cadenas de amilosa y amilopectina, produciendo la coloracin azul-violeta observada 2.
ACTIVIDAD N2: Reconocimiento de Protenas.
Al someter muestras de agua destilada, solucin de glicina 1%, clara de huevo, leche, y
solucin de NaCl 1%, a un reconocimiento de protenas con reactivo Biuret, se observ que
el agua destilada y la solucin de NaCl 1% no reaccionaron, permaneciendo del color del
reactivo (celeste), puesto que no existen enlaces de carcter peptdico en su composicin.
En cambio la muestra con clara de huevo y reactivo de Biuret, reaccion intensamente,
formando una solucin de color azul fuerte, ya que el huevo est conformado por variadas
protenas, como la ovoalbmina, ovomucina y lisozima 7. La coloracin azul intensa, se
debe a que el reactivo de Biuret, formado por sulfato de Cobre (CuSO4) y tartrato doble de
sodio y potasio (C4H4KNaO6* 4H2O), en un medio de carcter alcalino y en presencia de
enlaces peptdicos, genera un enlace coordinado entre el Cobre del reactivo y los 4 tomos
de Nitrgeno de cada grupo amino, generando la coloracin azul-violeta de la mezcla 2.
Por otro lado, en la muestra que contena leche, la reaccin fue menos intensa, ya que esta
es proporcional a la cantidad de enlaces peptdicos que posee la muestra 8.
Por ltimo, la solucin con Glicina al 1%, que es un aminocido, reaccion dbilmente,
puesto que para la correcta reaccin del reactivo se requiere la presencia de al menos dos
enlaces peptdicos consecutivos en sus molculas, como ocurre en pptidos y protenas.
12

ACTIVIDAD N3: Reconocimiento de Lpidos.


Al someter dos muestras de aceite, una con agua destilada (tubo n1) y otra con ter (tubo
n2), para el posterior reconocimiento de lpidos, se observ que al agitar el tubo n1 se
formaban micelas (gotitas) en la muestra y al reposar la solucin, se generaba la separacin
en dos fases, quedando el aceite en la parte superior debido a su menor densidad 10.
En el tubo n2, se pudo apreciar la formacin de una mezcla homognea al agitar, debido a
que las sustancias son solubles en medios de polaridad semejante 11 . En este caso, el aceite
y el ter poseen polaridades semejantes, por lo que este es capaz de disolver la muestra.
ACTIVIDAD N4: Reconocimiento de Sales Minerales.
Al someter muestras de cloruro de calcio en dos tubos de ensayos distintos, se observ que
en el tubo 1, al agregar 1 ml de una solucin de nitrato de plata 1%, se form un precipitado
de color blanco lechoso, debido a una reaccin de doble reemplazo para la formacin de
nitrato de sodio y cloruro de plata, tras la disociacin de iones 12. Considerando que el
cloruro de plata no es soluble en agua, ste se precipita formando el color blanco. El
nitrato de sodio, que es soluble en agua, permanece en la parte baja del tubo de ensayo.
Precipitacin de Calcio con Nitrato de Plata: CaCl2+2AgNO3 (aq) 2AgCl (s)+Ca(NO3)2 (aq)
Al tubo 2 se le agreg oxalato de amonio al 1%, donde se pudo apreciar claramente un
precipitado blanco, debido a la misma reaccin de doble reemplazo ya mencionada, con la
diferencia que se forma oxalato de calcio que es insoluble en agua, por lo que se precipita,
y cloruro de amonio que es soluble en agua, formando un color gris claro en la muestra 13.
Precipitacin del Calcio con Oxalato de Amonio: CaCl2 + (NH4)2C2O4 2NH4Cl + CaC2O4
ACTIVIDAD N5: Reconocimiento de enzimas.
Como se puede apreciar en la Tabla VI, existan dos tubos de ensayo, con nmeros 1 y 2.
El tubo n1 contena hgado crudo de Gallus gallus domesticus, mientras que el n2
contena hgado cocido de Gallus gallus domesticus, pues haba sido sometido al bao
termoregulado a 90C por 30 minutos.
Al realizar un contraste comparativo, se desprende que la Catalasa, encargada de la
descomposicin del perxido de hidrogeno (H2O2) en agua (H2O) y oxgeno (O2) 2, se
encontraba presente y funcional en el hgado crudo ubicado en el tubo n 1, pues esta no
haba sido sometida a condiciones anmalas que afectaran su estructura, permitiendo la
correcta unin del sustrato (H20) al sitio activo de la Catalasa y su posterior degradacin a
sustancias mas inocuas para la clula.
Por el contrario, la Catalasa presente en el hgado del tubo n 2, perdi su funcin
biolgica. Esta perdida se debi a la temperatura a la cual fue expuesta (90C por 30
minutos), la cual no es la acostumbrada, generando la perdida de la estructura terciaria
junto a su sitio activo, conllevando a la desnaturalizacin enzimtica 14.
CONCLUSIN
Al finalizar el presente prctico se logr cumplir con xito todos los objetivos
planteados al inicio de este informe:
13

1. Se comprob la presencia de monosacridos y polisacridos en las diferentes


muestras, segn el reactivo de Somogyi y Lugol respectivamente.
Cabe destacar en este punto que se corrobor la capacidad del reactivo de Somogyi
para detectar no solo monosacridos, sino tambin disacridos.
2. Se determin, de forma cualitativa, la presencia de protenas en las muestras, a
travs del reactivo Biuret y la intensidad de su reaccin.
3. Se ratific la solubilidad de los lpidos en solventes orgnicos y la insolubilidad de
los mismos en solventes inorgnicos. De este modo se establece que lo semejante
disuelve a lo semejante.
4. Se identific la existencia de distintas sales minerales en la misma solucin,
Cloruros y Calcio, a travs de la agregacin de distintas sustancias.
5. Se determin la incidencia del factor T en la actividad enzimtica, demostrando
que la exposicin de una enzima a altas temperaturas desencadena su posterior
desnaturalizacin , siempre y cuando estas no sean las condiciones normales a la
que se encuentra expuesta dicha enzima.
De esta manera, a travs de diversos mtodos qumicos, se logr realizar la identificacin
de las principales biomolculas, hidratos de carbono, protenas, lpidos y sales minerales,
los cuales constituyeron el objeto de estudio del presente prctico.

BIBLIOGRAFA
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