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FOSFATASA ACIDA

TECNICA DE ORIENTACION
SEMEN
El primer antecedente que se tiene de la existencia de células espermáticas data
del siglo XVII, cuando Luis de Hamm, tuvo la idea de coloca al microscopio una
gota de semen en la que pudo observar a una multitud de espermatozoides.
Comunico su descubrimiento a su maestro Anton Van Leeuwenhok, quien se
encargaría de estudiarlos de una manera sistemática.
El francés Albert Florence descubrió una de las primeras técnicas para reconocer
las huellas de líquido seminal, a través de un tratamiento de este con una
concentración de yodo alcalino, produciéndose cristales rómbicos.
Al descubrir los rayos ultravioleta por Kirchhoff y Busen se observo que las
manchas de semen adquirían bajo esta radiación una fluorescencia azulada.
En 1953 Fishman y Lerner dan a conocer su método para estimar fosfatasa ácida
de origen prostático.
CARACTERÍSTICAS
El semen total es un líquido muy viscoso y opalescente, de color blanco grisáceo.
El volumen promedio normal por eyaculación es de 2.5 a 3.5 ml.
Contiene hormonas, fructosa, fosfatasa ácida y alcalina, espermita, colina,
ergotioneína, ácido cítrico, lípidos, proteínas, hilauronidasa, prostglandina, ribosa,
inositol, sorbitol, flavinas, aminas, albúmina, alfa, gamma y beta globulinas,
lecitina, ácidos grasos, fosforilcolina, zinc, calcio y antígeno soluble de grupo
sanguíneo.
La fosfatasa ácida esta presente tanto en vegetales como animales; comprende
un conjunto de enzimas ampliamente repartidas en el organismo: eritrocitos,
suero, plaquetas, leucocitos, bazo, hígado, osteoclastos y en epitelios glandulares
de próstata, mama, estómago y colon.
Se ha demostrado que en el semen la fosfatasa ácida se encuentra en
concentraciones de 20 a 400 veces mas que en otros fluidos.
Por lo anterior, es necesario ajustar los reactivos para que sólo detecten
concentraciones mayores a 20 unidades.
Su detección se basa en una reacción cromática de la multicitada enzima, la cual
reacciona con el reactivo 1-naftilfosfato de calcio y queda libre de alfa naftol; este
reacciona con sulfato de dianisiltetrazonio y forma un colorante azoico violeta
intenso.

• Inmediatamente. se agregan 10 gotas de reactivo a cada una de las muestras.8 g de alfa naftil fosfato de sodio + 10 ml de agua destilada. filtrar y envasar en frasco ámbar refrigerado a 4° C. • Se colocan sobre una lámina de vidrio en la que previamente se habrá rotulado.PREPARACION DEL REACTIVO Solución 1: 23 g de NaCl + 2 g de Acetato de Na H2O + 0. Refrigerar en frasco ámbar. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS . se ha sustituido por: Solución 1: 1 g de orto dianilsidina tetrazotizada + 20 g de acetato de sodio + 10 ml de ácido acético + 100 ml de agua destilada. esta solución se conserva durante un año. Mezclar 10 ml de solución 1. Solución 2: 0. con una pipeta. Mezclar ambas soluciones. (1:CONTROL. 89 ml de agua destilada y 1 ml de solución 2. 2:BLANCO). Solución 2: 50 g de 1-naftil fosfato de calcio + 30 g de sulfato de dianisil tetrasonio + 1 ml de solución acuosa al 10% de laurel sulfato de sodio. • Lo mismo se hace con material igual no manchado para prueba en blanco y con otro que esté maculado con semen. PROCEDIMIENTO  Se tiene la mancha problema o el hisopo con el cual se tomó la muestra se colocan entre dos hojas de papel filtro.5 ml de ácido acético glacial + 90 ml de agua destilada. Debido a que actualmente ya no se fabrica el sulfato Debido a que actualmente ya no se fabrica el sulfato de dianisiltetrazonio. como control.

Agregar tres gotas de la solución de naftil diazo azul B. Marcar el tubo con la letra ‘P’ para el problema. CON EL ÁCIDO TARTÁRICO. procedente de la fosfatasa ácida seminal. la muy probable presencia de semen.La aparición de un color violeta intenso en la muestra problema dentro de un tiempo no mayor a 5 minutos. 4. colocarlo en un tubo igual al de la muestra problema con 3. • Tubo ‘Ci’ (control inhibidor) con tres gotas de sustrato y tres gotas de inhibidor. • Tubo ‘C’ con tres gotas de sustrato. 6.3 ml (aproximadamente diez gotas) del tubo P a cada uno de los tubos P y Pi y mezclar. 3. colorarla en un tubo de ensaye con tapón de rosca. . y por lo tanto. Este procedimiento señala que tanto las fosfatasas seminales como las vaginales son inhibidoras por el ácido tartárico. “El alfa naftil se incuba con la muestra problema y con un testigo de semen. 7. tomando cuatro muestras de la siguiente manera: El procedimiento para esta técnica se aplica en seis pasos. La formación de un precipitado violeta intenso con tamaño de partícula grande. Cortar un trozo de 1x1 centímetros de un área que no presente manchas.”22 El procedimiento para esta técnica se aplica en seis pasos. Marcar el tubo con la letra ‘C’ para control. Cortar un trozo de 1x1 centímetros del material que contenga la mancha seminal sospechosa. El principio es similar al señalado en la técnica de orientación de la fosfatasa ácida. tomando cuatro muestras de la siguiente manera:23 1. Agitar cada tubo mezclando bien. En el control siempre aparecerá el color señalado.0 m de agua desionizada. a cada tubo de los cuatro. la enzima fosfatasa en caso de estar presente.3 ml del tubo C a los tubos marcados C y Ci y mezclar. es diferente al precipitado café rojizo con menor tamaño de partículas no prostático. rompe el radical fosfato liberando el grupo alfa naftol. TÉCNICA POR INHIBICIÓN DE LA FOSFATASA ÁCIDA SEMINAL Y VAGINAL. 5. 2. el cual reacciona con el azul diazo formando un complejo de color violeta. de 15 ml de capacidad y añadir 3. tonalidad que no debe aparecer en el blanco. Después de 15 minutos preparar cuatro tubos de siete mililitros como sigue: • Tubo ‘P’ con tres gotas de sustrato. indicará la presencia de fosfatasa ácida en cantidades mayores a 20.0 ml de agua. ambos a un pH de 4. Poner 0. Pasar 0.9. • Tubo ‘Pi’ (problema inhibidor) con tres gotas de sustrato y tres gotas de inhibidor.

si esto no sucede indicará que el reactivo se ha deteriorado. . Los tubos C y Ci deben también de permanecer de color amarillo claro. toma un color amarillo pálido el resultado es positivo. en el mismo tiempo.La interpretación del resultado es: si el tubo P cambia de color café marrón a violeta intenso en 30 segundos o menos. mientras que el Pi.