Biochimie Curs 9

Gluconeogeneza
Acest proces reprezint calea metabolic principal de biosintez a
monozaharidelor i polizaharidelor att n plante ct i n animale. Formarea hidrailor
de carbon din aminoacizi, acid lactic etc. se numete gluconeogenez i este o reacie
este endergonic. Un exemplu n acest sens l constituie sinteza glucozei n ficat din
acidul lactic adus de ctre snge, n faza de repaos, dup o activitate muscular intens
care conduce la acumularea acidului lactic format din glucoz.
Glicogen
UDP-glucoza
G1P

UTP

G1P = Glucozo-1-fosfat
G6P = Glucozo-6-fosfat
F6P = Fructozo-6-fosfat

ATP
Glucoza

G6P
Pa
ATP

FDP = Fructozo-difosfatul
G3P = Glicerinaldehid-3-fosfat

Pa

F6P

DHAP = Dihidroxiaceton-fosfat
3PG = Acid 3-fosfo-gliceric
2PG = Acid 2-fosfo-gliceric
Pa = fosfat anorganic = H3PO4
UTP = Acid uridin 5'-trifosforic
ATP = Acid adenozin 5'-trifosforic
GTP = Acid guanozin-5'-trifosforic
NAD+ = Nicotinamidadenindinu-

FDP
G3P (DHAP)
3PG
2PG

cleotid fosfat oxidat

Fosfoenolpiruvat

GTP
Oxaloacetat

CO2

NAD+

Malat
Malat

ADP

Piruvat

NADH
ATP Oxaloacetat
+ CO2

Mitocondria
Piruvat
Reactia ocolitoare in sinteza glucozei si glicogenului din piruvat
1

1. Prima limitare se ntlnete la transformarea piruvatului n fosfoenolpiruvat,

unde G > 0, aadar urmtoarea reacie nu este posibil:

Piruvat + ATP

Fosfoenolpiruvat + ADP; Go = + 31,4 kJ

n locul acestei reacii, are loc o alt reacie catalizat de piruvat carboxilaz la
nivelul mitocondriilor:

Piruvat + CO2 + ATP

AcetilCoA

Oxalacetat + ADP + Pa

Piruvat-carboxilaza este o enzim alosteric care devine complet inactiv n

absena activatorului su, acetil CoA.
Aceasta transform piruvatul n oxalacetat n mitocondrie care este redus printro reacie dependent de NADH, la malat:

NADH + H+ + Oxalacetat

NAD+ + Malat

Numai malatul poate difuza n citoplasm. Aici, n prezena formei

citoplasmatice a malat-dehidrogenazei dependente de NAD +, malatul este reoxidat la
oxaloacetat extramitocondrial:

Malat + NAD+

Oxaloacetat + NADH + H+

n continuare, oxaloacetatul sau acidul oxalilacetic, sub aciunea fosfoenolpiruvat-carboxikinazei, este transformat n fosfoenolpiruvat. Reacia utilizeaz
guanozin-trifosfatul (GTP) ca surs de fosfat:

Oxaloacetat + GTP Mg2+ Fosfoenolpiruvat + CO 2 + GDP

n acest caz se poate rescrie transformarea piruvatului n fosfoenolpiruvat:

Piruvat + ATP + GTP

Fosfoenolpiruvat + ADP + GDP + Pa

Se consum astfel, n reacia global, dou molecule bogate n energie, una de

ATP i alta de GTP, care nsumeaz 30,5 kJ, energie suficient transformrii
piruvatului n fosfoenolpiruvat.
2.Cea de-a doua reacie din secvena glicolitic, n direcia gluconeogenezei ce
trebuie ocolit este fosforilarea fructozo-6-fosfatului sub aciunea fosfofructokinazei.
La sinteza glucozei, aceast reacie ireversibil este nlocuit cu difosfofructozofosfataza, cunoscut i ca fructozo-bifosfataz. Ea catalizeaz hidroliza complet a
grupei 1-fosfat cu formarea de fructozo-6-fosfatului:

Fructozo-1,6-difosfat + H2O

Fructozo-6-fosfat + Pa Go = -16,3 kJ

Urmeaz o reacie reversibil catalizat de fosfohexoizomeraz:

Fructozo-6-fosfat

Glucozo-6-fosfat

Glucozo-6-fosfatul poate lua parte la numeroase reacii n organism. n ficat se

transform n glucoz liber care ajunge n snge. Nu particip ns o hexokinaz, ci
glucozo-6-fosfataza, care catalizeaz urmtoarea reacie hidrolitic ireversibil:

Glucozo-6-fosfat + H2O

Glucoza + Pa

Go = -13,8 kJ

Aceste enzime se afl n reticulul endoplasmatic din celulele ficatului

vertebratelor i servesc n biochimie drept enzime conductoare pentru astfel de
structuri. Glucozo-6-fosfataza nu se gsete n muchi i creier, de aceea aceste
organe nu pot elibera n snge glucoz liber.
Reacia global de formare a glucozei din piruvat este urmtoarea:
2CH3COCOOH + 4ATP + 2GTP + 2NADH + 2H+ + 6H2O

Glucoza + 2NAD+ + 4ADP + 2GDP + 6Pa

Pentru fiecare molecul de glucoz se utilizeaz 6 legturi fosfat bogate n

energie i 2 molecule de NADH ca reductori. Este limpede c aceast serie de reacii
nu reprezint pur i simplu opusul reaciei de formare a piruvatului din glucoz:

Glucoza + 2ADP + 2Pa + 2NAD+

2CH3COCOOH + 2ATP + 2NADH + 2H+ + 2H2O

Reglarea formrii din piruvat a glucozo-6-fosfatului

Prima treapt este catalizat de piruvat-carboxilaz, o enzim alosteric, ce este
catalizat de acetil CoA. Reacia va fi deci favorizat de un exces mitocondrial de
acetil CoA.
Al doilea punct de control al acestei ci metabolice l constituie reacia
catalizat de difosfofructozo-fosfataz, ce este mpiedicat de AMP i stimulat de
ATP. Se face deci un control prin combustibilul acetil CoA i de asemenea prin ATP.
Sinteza glicogenului i a amidonului
Glucozo-6-fosfatul este utilizat att la obinerea glucozei libere din snge ct i
la sinteza glicogenului i a amidonului. Sub influena fosfoglucomutazei, acest
compus se transform n glucozo-1-fosfat:

Glucozo-6-fosfat

Glucozo-1-fosfat

G o = +7,27 kJ

Dei glicogenfosforilaza in vitro transform glucozo-1-fosfatul n glicogen, n

celul, aceasta catalizeaz numai scindarea glicogenului la glucozo-1-fosfat.
Aceasta servete ca purttor de molecule de zaharid. La sinteza glicogenului n
organismul animal, glucozo-1-fosfatul reacioneaz cu uridintrifosfatul (UTP) cu
formarea uridin-difosfat-glucozei (UDP-glucoz):
3

-D-Glucozo-1-fosfat + UTP

UDP-Glucoza + PP a

sub influena enzimei UDP-glucozo-pirofosforilazei

CH2 OH
O

OH

HN

OH
H

OH
O
HO

O
O

OH

CH2
O
H
H
OH

Uridin-difosfatglucoza

H
H
OH

n a doua etap, UDP-glucoza este transportat la captul reductor al unui rest

de glucoz din lanul amilazei.
Se formeaz astfel o legtur (14) glicozidic ntre atomul C1 al restului
glicozil transportat i grupa hidroxil din poziia 4 a restului terminal al lanului
amilazic. Reacia este catalizat de glicogensintetaz:

UDP-glucoza + (Glucoza)n

UDP + (Glucoza)n+1

Echilibrul acestor ultime trei reacii este puternic favorizat n direcia sintezei
glicogenului. Sinteza glicogenului necesit ns ca starter un lan de cel puin 4
resturi de glucoz. Enzima devine mai activ atunci cnd lanul de plecare este mai
lung. Formarea i descompunerea glicogenului este reglat i coordonat hormonal.
Glicogen-sintetaza nu poate realiza legturi (16) n punctele nodale ale
glicogenului. n celulele animalelor se afl enzima amilo(1,41,6)transglicolaza
(glycogen-branching enzyme) capabil s catalizeze transferul unui fragment
terminal de oligozaharid cu 6-7 resturi de glucoz de la un capt al lanului principal la
grupa 6-hidroxil al altui rest de glucoz al aceluiai lan de glicogen sau al altuia.
n plante, sub aciunea amilaz-sintetazei are loc sinteza amidonului printr-un
proces metabolic similar. Totui, n cele mai multe plante, donorul de glucoz este
ADP-glucoza (ADPG) n locul UDP-glucozei (UDPG).
Glicogenoliza
Ruperea moleculelor de glicogen (glicogenoliza) necesit trei enzime :
4

1. Glicogen fosforilaza catalizeaz fosforoliza conducnd la 1-fosfo-glucoza (G1P).

Aceast enzim are drept cofactor piridoxal-5-fosfat care este covalent legat prin
intermediul unei legturi iminice (baz Schiff) de un rest de lizin.

Enzima elibereaz o unitate de glucoz dac aceasta se afl la cel puin 5 uniti
distan de punctul n care exist bifurcaia catenei.
2. Enzima care ndeprteaz catena lateral faciliteaz accesul primei enzime la
glicogen. Aceast enzim transfer un rest de trizaharid de pe partea ramificat a
catenei pe captul nereductor al celuilalt lan. Degradarea glicogenului se bazeaz pe
aceast etap i din acest motiv procesul global este mai lent.
3. Fosfoglucomutaza convertete 1-fosfo-glucoza n 6-fosfo-glucoza. Gruparea
fosforil este transferat de pe fosfoenzim (de pe un rest de serin) pe G1P formnd
1,6-difosfat-glucoza (G1,6P), compus care refosforilez enzima rezultnd G6P.

In catabolismul polizaharurilor intervin i amilazele (asupra amidonului i

glicogenului) sau celulazelor (substratul este celuloza).
-Amilaza (diastaza, glicogenaza) sau -1,4-D-glucan-glucanohidrolaza
catalizeaz scindarea hidrolitic a legturilor -1,4-glicozidice din amidon/glicogen cu
formarea unor fragmente mai mici (dextrine). Enzima acioneaz asupra polimerilor
liniari la nivelul legturilor glicozidice interne. Enzima se gsete n toate organismele

vii, dar proprietile variaz de la o specie la alta sau de la un esut la altul (n cadrul
aceleeai specii). Enzima din pancreasul de porc are o mas molecular de
5

aproximativ 50 KDa, este o glicoprotein si are 2 grupri SH si 4 puni disulfurice i

un ion de calciu legat strns.

-Amilaza sau -1,4-D-glucan-maltohidrolaza cliveaza legaturile -1,4-glicozidice

(indepartand resturile de maltoza de la capete) de la capetele nereducatoare ale
substratului polizaharidic. Dat fiind faptul c nu cliveaz legturile -1,6-glicozidice
(din glicogen sau amilopectin) hidroliza este incomplet rezultnd deasemenea
dextrine.
-Amilaza se gseste n special n seminele plantelor i n cartofii dulci.
Legturile -1,6-glicozidice sunt scindate de izoamilaza (glicogen-6-glucanglucohidrolaza).

-Amilaza (glucoamilaza sau -1,4-D-glucan-glucohidrolaza), o exoamilaz

utilizat n industrie, catalizeaz hidroliza legturilor -1,4-glicozidice din
amidon/glicogen (de la captul neredus al polizaharului) cu formarea de glucoz.
Comparativ cu celelalte amilaze ( sau ) -amilaza este mai activ n mediu acid
(pHul optim este de 3). Majoritatea glucoamilazelor pot scinda i legatura -1,6glicozidic, dar cu o rat mai mic comparativ cu legtura -1,4. O singur specie de
fungi, Aspergillus oryzae este utilizat pentru prepararea la scara industrial a amilazei i glucoamilazei. Glucoamidaza din A. Niger conine 3 regiuni: (i) regiunea
care conine domeniul catalitic (aminoacizii 1-470) care are o regiune glicozilat n
poriunea 441-470, (ii) o regiune liant (aminoacizii 471-508) n care resturile de serin
sau treonin sunt O-manozilate i o regiune (iii) la care se ataeaz lanul de amidon
insolubil (aminoacizii 509-616).