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Cortisol saliva

KAPDB290

Todos los reactivos del kit y las muestras deben estar a temperatura ambiente. 100. Estos se deben mezclar por completo y suavemente antes de su uso. lave con abundante agua. Para evitar la contaminación de los reactivos. REACTIVOS SUMINISTRADOS Pocillos separables . PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DE PROCEDIMIENTO 1. 8. RIESGOS QUÍMICOS Evite el contacto con reactivos que contengan TMB. 2. Pipetas de precisión para dispensar 50. PRETRATAMIENTO DE LA MUESTRA Los tubos de muestras se colocan en un congelador y se dejan congelar. La absorbancia se mide en un lector de microplacas. Se utiliza un conjunto de calibradores para trazar una curva de calibración de la cual se puede leer directamente la cantidad de cortisol en muestras de pacientes y controles. ejercicio físico y administración externa de ACTH. 3. Después del lavado. Cuando estén listos para su uso. no use pipetas en que los líquidos entren en contacto con las piezas metálicas. PRINCIPIO DE LA PRUEBA El principio de la siguiente prueba de inmunoensayo enzimático sigue el típico caso de enlace competitivo. las muestras deben ser descongeladas y centrifugadas. Todos los reactivos en el kit están calibrados para la determinación directa de cortisol en la saliva humana. Al leer la microplaca. Éste se aumenta en situaciones de estrés. Se debe establecer una curva de calibración para cada ejecución.0 o mayor * (véase procedimiento de ensayo paso 10).También participa en la absorción de calcio. De este modo. KAPDB290 DIAGNÓSTICO IN VITRO USO Determinación cuantitativa de cortisol mediante inmunoensayo enzimático en saliva humana. Contenido: Una microplaca recubierta con anticuerpo policlonal de 96 pocillos (12x8) en una bolsa resellable con desecante. 11. se añade el sustrato de la enzima. Conservación: Refrigerar a 2-8 ° C Estabilidad: 12 meses o según lo indicado en la etiqueta. Los usuarios deben tener un conocimiento profundo de este protocolo para el correcto uso de este kit. 5. así como en la secreción de ácido gástrico y pepsina. Simplemente enjuague la boca con agua antes de la recolección. Los sobrenadantes se recogen y se vierte en tubos recién etiquetados.La competencia se produce entre un antígeno no marcado (presente en los calibradores. 3. La intensidad del color formado es inversamente proporcional a la concentración de cortisol en la muestra. se puede utilizar como un indicador de la función adrenal y el diagnóstico diferencial de las enfermedades de Addison y Cushing. es aproximadamente 1 . El kit no se encuentra calibrado para la determinación de cortisol en suero. Únicamente para diagnóstico in vitro.Placas de micropocillos recubiertos de anticuerpos de conejo anti-cortisol . Agua destilada o desionizada 4. plasma u otras muestras de origen humano o animal. 2. RECOLECCIÓN Y ALMACENAMIENTO DE ESPECÍMENES Aproximadamente 1 ml de saliva es necesaria para la determinación por duplicado. Solo se logra un rendimiento fiable mediante el estricto y cuidadoso cumplimiento de las instrucciones proporcionadas. Al suministrar el sustrato y solución de parada. pipeteado impreciso. y se encontró negativo. Con el fin de reducir la exposición a sustancias potencialmente nocivas. la presencia de burbujas en los pocillos afecta la densidad óptica (OD). Los procedimientos de lavado y decantación eliminan los materiales no ligados. Evite el continuo congelado y descongelado de reactivos y muestras. considerado como la parte activa de la sangre.No utilice muestras contaminadas con sangre. calibrador y control. Centrífuga de mesa 6. Por ejemplo. Retire con cuidado las burbujas antes de continuar con la lectura. APLICACIONES CLÍNICAS El cortisol es el esteroide de circulación más abundante y la mayoría de los glucocorticoides principales secretadas por la corteza suprarrenal.Cortisol saliva Para la determinación cuantitativa de cortisol por inmunoensayo enzimático en saliva humana. muestra. lavado incompleto así como el inadecuado almacenamiento de reactivos pueden presentarse cuando los valores de ensayo para el control no reflejan los rangos establecidos. Cuando se especifica el uso de agua para la dilución o reconstitución. 13. Las técnicas inadecuadas de procedimiento. ningún método de prueba puede ofrecer la completa seguridad de la ausencia de VIH. No mezcle varios números de lote de componentes del kit dentro de una prueba y no utilice los componentes más allá de la fecha de vencimiento impresa en la etiqueta. REACTIVOS Y MATERIAL NECESARIO PERO NO PROPORCIONADO 1. Sin embargo. Todas las muestras o sueros que contienen azida de control o timerosal no son compatibles con este equipo. 14. peróxido de hidrógeno y ácido sulfúrico. Recoger 4-5 ml de saliva en un tubo de vidrio limpio (se puede utilizar Salivette por Sarstedt) sin necesidad de fuerza o inducción y antes de comer. muestras control y de paciente) y un antígeno marcado con enzima (conjugado) durante un número limitado de sitios de unión de anticuerpos en la placa de micropocillos. El cortisol libre. el diagnóstico clínico debe incluir todos los aspectos de fondo de un paciente. La mayoría de cortisol circulante se une a la globulina de cortisol o transcortina y albúmina. Considere todas las muestras humanas como posible material de riesgo biológico y tome las debidas precauciones al manipularlas.2%. en general. 150 y 300 µl µl 2. use una nueva punta desechable para dispensar cada reactivo. el cortisol en saliva se considera libre y presenta un ritmo diurno con niveles más altos en la mañana y niveles más bajos durante la noche. 7. Únicamente el calibrador 0 puede ser utilizado para diluir las muestras de altas de saliva. la aparición de anticuerpos heterófilos en pacientes expuestos regularmente a animales o productos de origen animal tiene el potencial de causar interferencias en las pruebas inmunológicas. El cortisol es fisiológicamente eficaz para el mantenimiento de la presión arterial y la actividad antiinflamatoria. PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DE SEGURIDAD MATERIAL BIOLÓGICO POTENCIALMENTE DAÑINO El suero humano que se puede utilizar en la preparación de los calibradores y control ha sido analizado y se comprobó que no es reactivo frente al antígeno de superficie de hepatitis B y también ha sido analizado para determinar la presencia de anticuerpos contra el VHC y el virus de inmunodeficiencia humana (VIH). TMB es un carcinógeno potencial. incluyendo la frecuencia de exposición a animales o productos si se sospecha de resultados falsos. 6. El uso de cualquier otro reactivo puede conducir a resultados erróneos. Almacene las muestras a 4°C durante un máximo de 24 horas o a -10 ° C o menos si el análisis se realiza en una fecha posterior. La medición de los niveles de cortisol. Los materiales de control deben incluirse en cada ejecución a un nivel alto y bajo con el fin de evaluar la fiabilidad de los resultados. utilice desionizada o agua destilada. Si entra en contacto con cualquiera de estos reactivos. Los reactivos deben ser considerados un peligro biológico potencial y manipularse con las mismas precauciones que se aplican a cualquier muestra de sangre. Los reactivos del kit deben considerarse como residuos peligrosos y deben ser eliminados de acuerdo a las normativas nacionales. Puntas desechables para pipetas 3. 4. . En ausencia de cantidades apreciables de proteínas de cortisol en saliva. VHC y virus de la hepatitis B o de cualquier agente infeccioso. Agitador de placas (200 rpm) 5.Listo para Usar. en cuyo caso no deben ser utilizados. se deben utilizar guantes durante el manejo del kit de reactivos y muestras humanas. La solución de sustrato (TMB) es sensible a la luz y debe permanecer incolora si se almacena correctamente. la gluconeogénesis. 12. Lector de microplacas con un grupo de filtros a 450 nm y un límite superior de OD de 3. 10.El control se debe incluir en cada ejecución y debe mantenerse dentro de los límites establecidos de confianza. así como la hiperplasia suprarrenal y carcinoma. La inestabilidad o la contaminación se pueden indicar mediante el desarrollo de un color azul. ya que pueden conducir a resultados erróneos. 9. 4.Los resultados obtenidos con este equipo nunca debe utilizarse como la única base para una diagnóstico clínico. La reacción enzimática se termina mediante la adición de la solución de parada. beber o lavarse los dientes. LIMITACIONES 1.

Evite múltiples ciclos de congelación y descongelación.6 ml 0. los calibradores deben utilizarse dentro de 14 días o de manera alícuota y almacenarlos congelados.757 1.285 Valor (ng / ml) 0 1 3 10 30 100 63 CURVA DE CALIBRACIÓN Únicamente ejemplo de curva.Listo para Usar. 9.221 0. 7. Calcule la media de densidad óptica para cada duplicado de calibrador. Preparado mediante la adición de tampón con una cantidad definida de cortisol.Listo para Usar. . El resultado obtenido debe ser multiplicado por el factor de dilución. Calibrador Calibrador 0 Calibrador 1 Calibrador 2 Calibrador 3 Calibrador 4 Calibrador 5 Concentración 0 ng / ml 1 ng / ml 3 ng / ml 10 ng / ml 30 ng / ml 100 ng / ml Volumen / Vial 2.133 1. Incube en un agitador de placas (aproximadamente a 200 rpm) durante 45 minutos a temperatura ambiente. 1. CHROM TMB Sustrato TMB . CONTROL PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO Pretratamiento de muestras: Congelación y centrifugación.X10 Contenido: Una botella de tampón con un detergente no iónico y un conservante sin mercurio.6 ml 0. 40 µl de PRH en 2 ml de búfer de ensayo). 3. control y muestra de espécimen en duplicados dentro del pocillo debidamente etiquetado. 2. 4. controles y muestras de especímenes deben ser analizados por duplicado. Retire el número necesario de tiras para microplacas.6 ml / vial Almacenamiento: Refrigerar a 2-8 ° C Estabilidad: 12 meses en envase cerrado o según se indique en la etiqueta. Preparación: Diluya 1:50 en tampón de ensayo antes de su uso (ej.Listo para Usar.Listo para Usar. Pipetee 50 µl de solución de parada en cada pocillo a los mismos intervalos cronometrados del paso 7. Calibrador DO 1 DO 2 0 1 2 3 4 5 Desconocido 2.540 0. 10. Contenido: Un frasco con cortisol en tampón con base proteínica con contenido de conservante sin mercurio. NO utilice para calcular los resultados.254 0. Una vez abierto.521 0. 6.914 1. Vuelva a sellar la bolsa y regrese las tiras no utilizadas al refrigerador. Contenido: Un vial que contiene un tampón con base en proteína con conservante sin mercurio. se deben cumplir todos los pasos sin interrupción. Los calibradores. WASH DATOS TABULADOS Control . Volumen: 16 ml / botella Conservación: Refrigerar a 2-8 ° C Estabilidad: 12 meses o según lo indicado en la etiqueta. Contenido: Un vial que contiene ácido sulfúrico a 1M. Se deben evitar los múltiples ciclos de congelación y descongelación. Prepare las soluciones de trabajo del conjugado HRP-cortisol y tampón de lavado.6 ml 0. Lea la placa con un lector de microplacas a 450 nm dentro de los 20 minutos después de adicionar la solución de parada.283 DO media 2. 4. Preparación: Diluya 1:10 en agua destilada o desionizada antes de su uso.222 0.0 ml 0. Volumen: 6 mL / vial Conservación: Refrigerar a 2-8 ° C Estabilidad: 12 meses o según lo indicado en la etiqueta. CAL N Calibradores cortisol saliva. Si la muestra presenta más de 100 ng/ml entonces dilúyala con calibrador 0 en un dilución de no más de 1:8. por favor. consulte las etiquetas de los viales para conocer las concentraciones exactas. 3.6 ml Conservación: Refrigerar a 2-8 ° C Estabilidad: 12 meses en frascos sin abrir o según lo indicado en la etiqueta. 5.Una vez que el procedimiento se ha iniciado. Deseche lo que quede.799 1. sin embargo.Listo para Usar. 5. * Si la densidad óptica excede el límite superior de detección o si no se dispone de un filtro de 450 nm.X50 Contenido: Conjugado de cortisol-HRP en un tampón con base en proteína con conservante sin mercurio Volumen: 300 µl / vlal Conservación: Refrigerar a 2-8 ° C Estabilidad: 12 meses o según lo indicado en la etiqueta.6 ml 0.940 1. Una vez abiertos. ASS BUF Tampón de ensayo . Volumen: 15 ml / vial Conservación: Refrigerar a 2-8 ° C Estabilidad: 12 meses o según lo indicado en la etiqueta. el control debe ser utilizado dentro de los 14 días o mantenido en alícuotas y almacenado de manera congelada. Consulte en la etiqueta del frasco el valor esperado y el rango aceptable. Si se está utilizando un programa de inmunoensayo. se recomienda una curva de 4 parámetros. Dibuje una curva de calibración en papel semi-logarítmico con las densidades óptica promedio en el eje Y y las concentraciones de calibración en el eje X.287 2. Lave los pocillos 3 veces con 300 µl de tampón de lavado diluido por pocillo y tape sacuda la placa firmemente contra papel absorbente para asegurarse de que esté seca (se recomienda el uso de un sistema de lavado). SOLN CONC Solución de lavado concentrada .219 0. N = 0 a 5 Contenido: Seis frascos que contienen cortisol en un búfer basado en una proteína con un conservante que no contenga mercurio.238 0.187 1. Pipetee 150 µl de substrato TMB en cada pocillo a intervalos cronometrados. Volumen: 50 ml / botella Almacenamiento: Refrigerar a 2-8°C Estabilidad: 12 meses o según lo indicado en la etiqueta. Contenido: Una botella que contiene tetrametilbenzidina y peróxido de hidrógeno en un tampón con contenido sin DMF o con DMSO. Lea los valores de las muestras desconocidas directamente de la curva de calibración. Si toda la placa se va a utilizar diluir 240 µl de HRP en 12 ml de búfer de ensayo.241 1. Calcule la media de densidad óptica de cada duplicado de muestra desconocida. Pipetee 50 µl de cada calibrador.:. Volumen: 0.216 0. Pipetee 100 µl de solución de conjugado en cada pocillo de trabajo (le recomendamos utilizando una pipeta multicanal). 2. Las densidades ópticas serán menor.965 1.502 0. Incube en un agitador de placas durante 15-20 minutos a temperatura ambiente (o hasta que el calibrador cero alcance un color azul oscuro para la densidad óptica deseada). CÁLCULOS 1. * A continuación se mencionan concentraciones aproximadas. esto no afectará los resultados de las muestras de control o pacientes. Si se va a utilizar toda la placa diluya 50 ml de concentrado tampón de lavado en 450 ml de agua. STOP SOLN Solución de parada .778 1. se puede sustituir con un filtro de 405 o 415 nm. Preparado mediante la adición de tampón con una cantidad definida de cortisol. 8.Ag HRP CONC Concentrado de conjugado peroxidasa (HRP) rábano de cortisol . Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente antes de su uso.

68 1.95 12. Los resultados (en ng / ml) se tabulan a continuación: Muestra 1 no cargada + 1.49 107.7 6. la sensibilidad del kit DIAsource Cortisol Saliva de ELISA es de 1.29 7.38 8.0 + 30 + 100 3 no cargada + 3.99 8.48 91.57 31.49 13.98 3.6 ng / ml PRECISIÓN INTRAENSAYO Se analizaron tres muestras diez veces cada una en la misma curva de calibración. Los resultados (en ng / ml) se tabulan a continuación: Ejemplo: 1 2 3 Media 6.4 109.6% con prednisolona.49 18.81 7.2 116.6 87.05 20.18 10.5 112.53 34. 6.14 53.85 8.7 51.0 ng / ml. Los resultados (en ng / ml) se tabulan a continuación: Ejemplo: 1 2 3 Media 6. 1 1:2 1:4 :8 Resultado Observado.9 80.64 8.32 5.03 13.5 96.27 113.20 Esteroides Cortisol Prednisolona Corticosterona Desoxicorticosterona Progesterona Cortisona Desoxicortisol Pednisone Dexametasona 2 1:2 1:4 1:8 3 1:2 1:4 1:8 % de reactividad cruzada 100 13.14 9.1 96.13 8.47 7. LINEALIDAD Se diluyeron tres muestras de saliva de paciente con calibrador 0.2 7.7 111.06 3.3 23.52 19.24 112.97 24. Tenga en cuenta que se observa una reactividad cruzada de 13.28 4.6 5.7 49.89 28. se debe tener precaución al analizar los niveles de cortisol de pacientes que están recibiendo terapia.6 No se detectó ninguna reacción cruzada con DHEAS y Tetrahydrocortisone.8 52.CARACTERÍSTICAS DE DESEMPEÑO SENSIBILIDAD El límite de detección se calcula a partir de la curva de calibración.8 103.37 CV% 9.09 2.64 52.02 % de recuperación 113.4 SD 0.09 4.6 7.6 1.0 + 10 + 100 2 no cargada + 3. Los resultados (en ng/ml) se tabulan a continuación: ESPECIFICIDAD (REACTIVIDAD CRUZADA) Los siguientes compuestos fueron probados frente a la reactividad cruzada con el kit Cortisol Saliva de ELISA con reacción cruzada de cortisol al 100%.00 Result Esperado 3.2 102.03 6. cada laboratorio debe recoger datos y establecer su propio rango de valores normales esperados. mediante la determinación de la concentración resultante de la DO media del calibrador 0 (basado en 10 análisis repetidos) menos SD 2.14 5.3 VALORES NORMALES ESPERADOS En cuanto a todos los ensayos clínicos.2 5.6 24.63 2.02 54.1 68.3 8.8 SD 0. 18.6 110.8 .98 5.5 PRECISIÓN INTER-ENSAYO Se analizaron tres muestras diez veces durante un período de cuatro semanas. Muestra Result Esperado % de recuperación 9.40 CV% 10.0 6.6 108.5 RECUPERACIÓN Se prepararon muestras sobrecargadas adicionando cantidades definidas de cortisol a tres muestras de saliva de paciente (1:1).55 2.8 8. Muestras al azar de hombres y mujeres fueron tomadas en la madrugada y presentaron un rango absoluto de: 5 .20 6.0 + 10 + 30 Resultado Observado. Ya que la prednisona se convierte en prednisolona in vivo.27 17.6 4.05 61.21.6 7.2 6.3 106. Por lo tanto.76 19.