Practica 10 Reacciones de carbohidratos* Introduccion Los carbohidratos 0 gliicidos son las biomoléculas mas abundantes en la naturaleza. Cada afio, el proceso de fotosintesis de plantas y algas, convierte mas de 100 000 millones de toneladas métricas de CO2 y H20 en celulosa y otros productos vegetales. Los glucidos pueden ser monosacaridos, oligosacdridos (disacari- dos, trisacaridos, etc.) y polisacaridos. Los monosacaridos estan for- mados por una unidad de polihidroxialdehido o polihidroxicetona, el més abundante es la D-glucosa que es un azuicar de seis carbonos. Los oligosacaridos constan de cadenas cortas de monosacaridos uni- das por enlaces glucosidicos. Los mas abundantes son los disacdridos (unién de dos monosacaridos), el mas conocido es la sacarosa o azu- car de caja, formado por los monosacaridos de seis carbonos D-glu- cosa y D-fructosa. Los polisacaridos son cadenas largas de centena- res o miles de unidades de monosacaridos. Algunos polisacaridos, como la celulosa, son cadenas lineales, mientras que otros, como el glucdgeno y el almidon, tienen cadenas ramificadas Todos los compuestos antes mencionados desarrollan miiltiples funciones en los organismos: son fuentes de energia, componentes de estructuras celulares y participan en la comunicacién celular, entre otras. Los disacaridos y los polisacaridos se pueden hidrolizar para pro- ducir monosacaridos que reaccionan de acuerdo con los grupos hidroxilo y carbonilo que poseen. Por ejemplo, tienen la capacidad de reducir algunos compuestos en medio alcalino, por lo que se han denominado azucares reductores, contienen un carbono anomérico libre, es decir, que no forma parte del enlace glucosidico, y dan resul- tados positivos con los reactivos de Benedict o Fehling * Tiempo aproximado de realizacién: 3 horas. Reaccones de carbohidrates:Manual de Bioguimca 1 Los carbohidratos no reductores son aquellos que no contienen un carbono anomérico libre y, por lo tanto, no dan pruebas positivas con dichos reactivos carbono anomérico H oH ‘Azticar reductor (glucosa) con el hidroxilo del carbon ‘anomérico libre Qiemianetal. Da prueba positiva con los reactivos de Fehling 0 Benedict CH20H ° 407 cHyoH Adticar no reductor (sacarosa) sin el hidroxilo del carbono anomérico libre (acetal) No da prueba positiva con los reactivos de Fehling 0 Benedict. La solucién de Benedict se utiliza en la determinacién cuantitati- va de glucosa en la sangre. Esta solucién, como la de Fehling, contie~ ne un ion de cobre que se reduce y produce prueba positiva con los azucares reductores. En la actualidad para determinar con mayor rapidez y exactitud los niveles cualitativos y cuantitativos de los diferentes azucares se utilizan técnicas analiticas como la cromatografla de liquidos de alta resolucién (HPLC) por sus siglas en inglés. También se utilizan anali- sis bioquimicos comerciales, ya que contienen enzimas que actuan sobre determinados azuicares mezclindose con ellos para generar reacciones coloridas que se pueden analizar en el espectrofotome- tro.Objetivo general > Realizar pruebas de dxido-reduccién para la determinacion de azticares reductores en algunos alimentos. Objetivo particular > Reconocer las diferencias entre azticares reductores y no reducto- res. > Determinar la presencia de azticares reductores en algunos ali- mentos mediante las pruebas de Benedict y Fehling. jpotesis Generada por el estudiante Material y equipo Material por equipo (que los alumnos deben propor- cionar} 1 Sobre de Canderel o de Nutrasweet 1 Lata de refresco de dieta sin colorante 1 Lata de refresco normal sin colorante 1 Lata de jugo de manzana Azucar de mesa Material por equipo de 7 personas 1 Espatula 1 Gradilla 1 Vaso de precipitado de 1000 ml 36 Tubos de ensayo 3 Vasos de precipitados de 250 ml 10 Pipetas Pasteur 4 Pipetas graduadas de 5 ml 1 Parrilla eléctrica 2 Ligas anchas Reactivos + Glucosa + Manosa + FructosaManual de Bioguinica 1 Sacarosa Tartrato de sodio y potasio Citrato de sodio Na,CO3 anhidro CuSO,.5H0 NaOH Soluciones por grupo Solucién de glucosa al 5 % (plv) (05 g en 10 ml de agua), Solucién de fructosa al 5 % (plv) (0.5 g en 10 ml de agua) Solucién de manosa al 5 % (piv) (0.5 gen 10 ml de agua). Solucién de sacarosa al 5 % (plv) (0.5 g en 10 ml de agua). Solucion de Canderel 0 Nutrasweet al 1 % (0.1 g en 10 ml de agua) Soluci6n de azticar de mesa al 5 % (0.5 g en 10 ml de agua). Reactivo de Fehling. Preparacion Solucién A (3.5 g de CuSO4 en agua y aforar a so mi) Solucién B (17.5 g de tartrato de sodio y potasio y 5 g de NaOH en agua y aforar a so ml) Reactivo de Benedict. Preparacion: En 60 ml de agua disolver 17.3 g de citrato de sodio y 10 g de Na2CO3 anhidro. Esta mezcla se afiade lentamente y agitando a una solucién previamente preparada de 1.73 g de CuSOg pen- tahidratado en 15 mi de agua. La solucién final se afora a 100 ml Procedimiento experimental A. Prueba de Fehling 1. 2. Numerar una serie de nueve tubos por duplicado Adicionar a cada tubo las cantidades de sustancias indicadas en la tabla 7.TABLA 7 PREPARACION DE LOS TUBOS PARA LA PRUEBA DE FEHLING Tubos rvi2}afalsfe}r7]{eals Solucén A (nl) ee Solucion 8 (m) SO ‘Gcosa (gotas) 3 Fructosa(gotas) 3 Manosa(gotas) 3 Sacarosa (gotas) z Jugo de manzana (gotas) 10 Fresco normal sn clorante (Go43) 1 Refresco de dita sin colorante (gotas) 10 Solucion de Candee o Nutasweet (Gots) 10 Solucibn de anicar de mesa (gotas) 10 3. Calentar los tubos en “baho Maria" a ebullicion durante cinco minutos, 4. La formacién de un precipitado rojo y la decoloracién de la solu- cién indica prueba positiva para aziicar reductor. CHOH a a H oH on OH H OH curt Cu,0 — Complejo cuproctrico rojo soluble CH OH H OH cal HO oO H OH glucosa Reaccién de la prueba de Fehling para glucosa. B. Prueba de Benedict 1. Como en la prueba anterior, preparar por duplicado una serie de nueve tubos numerados. ae See CH.OH H OH ea 00H of H H producto oxidadoManual de Biaqimica ft 2. Afjadir las soluciones como se indica en la tabla 8. ee TABLA 8 PREPARACION DE LOS TUBOS PARA LA PRUEBA DE BENEDICT Tubos rf2\3jatsle}r7isa}s Reactivo de Benedict (rn!) ttrdadatata fi tata Glucosa (gotas) 5 Fructosa (g0tas) 3 Manosa (gotas) 3 Sacarosa (gotas) 3 Jugo de manzana (gots) 70 Refresco normal sin colorante_(gotas) 7 Refresco de dieta sin colorante (gotas) 0 Soucion de Canderel 0 Nutrasweet(gotas) wo Solucion de azicar de mesa (gotas) 10 3. Calentar los tubos en “bafo Maria" a ebullicion durante cinco minutos y dejar enfriar a temperatura ambiente. 4. Lapresencia de un precipitado, cuya coloracion varia desde ama- rillo hasta rojo y con decoloracién de la solucién, indica prueba positiva CH,OH a H vn ‘OH OH OH H oH CH,OH Cutt H OH Cu,0 + ———, ‘OH OOH ‘Complejo cuprotartarico rojo of soluble H OH CHOH producto oxidado Hj OH Reaccién de glucosa con el reactivo de Benedict. Resultados 1. Anotar los resultados en el siguiente cuadro y describir lo que se observa en cada tubo, color, formacién de precipitado, etcétera,Muestra Reaccién de Fehling Reaccién de Benedict Glucosa Fructosa Manosa Sacarosa Jugo de manzana Refresco normal sin colorante Refresco de dieta sin colorante Canderel 0 Nutrasweet Aziicar de mesa 2. Comparar los resultados y decir ,qué tipo de azuicares son la glu- cosa, fructosa, manosa y sacarosa? 3. los alimentos probados contenian azucares reductores? Discutir la respuesta $ {Las determinaciones realizadas en esta practica son cuantitati- vas 0 cualitativas? ¢Por qué? Analisis de resultados 1. Mencione la similitud, en su composicién, que presentan el reac- tivo de Fehling y el reactivo de Benedict. 2. {Qué efecto puede tener en el organismo, la presencia de aziica- res reductores en los alimentos? Cuestionario previo 1. {Qué es un azticar reductor? 2, gn qué consisten las pruebas que nos permiten saber si un azui- car es reductor? 3. Describa la reaccién de cada una de las pruebas efectuadas en la practica 4. Estudie y dibuje las estructuras de los principales monosacari- dos. 5. Describa las reacciones de oxidacidn de los monosacaridos. 6. ué se entiende por epimero? a Por epi Bibliografia 1. Boyer, R. 2000. Conceptos de bioquimica. international Thomson Editores, México. ee a eeeManual de Bicquimica 1 2. Dominguez, X. A. 1973. Métodos en investigacién fitoquimica Limusa Noriega, México. 3. Hudlicky, M. 1985. Laboratory Experiments in Organic Chemistry. Avery Publishing Group Inc, E.U.A 4 Lehningher, A. L. 1993. Principios de Bioquimica, Omega Ediciones, Barcelona. 5. 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