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REACTIVIDAD INMUNOQUÍMICA DE SUEROS ANTI- CAIMAN


YACARE Y CAIMAN LATIROSTRIS FRENTE A SUEROS DE
DIFERENTES ESPECIES

A D O L F O R A F A E L DE R O O D T
Área Investigación y Desarrollo / Serpentario, Instituto Nacional de Producción de Biológicos A.N.L.I.S.
“Dr. Carlos G. Malbrán”, Ministerio de Salud, Av. Vélez Sarsfield 563 (1281), Buenos Aires.
aderoodt@gmail.com

R E S U M E N. — Se estudió la reactividad inmunoquímica entre los sueros de distintas especies


de reptiles frente a sueros hiperinmunes experimentales anti-suero de Caiman yacare y anti-suero
de Caiman latirostris. Los sueros que se probaron fueron los homólogos de Caiman yacare, Cai-
man latirostris y los heterólogos de Alligator missisipiensis, Tupinambis merinae, Tupinambis
rufescens, Chelonoidis chilensis, Clelia rustica, Waglerophis merremii, Lystrophys dorbignyi,
Phyton molurus, Boa constrictor occidentalis, Eunectes notaeus, Crotalus durissus terrificus,
Bothrops alternatus, Bothrops diporus, Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu, Bothrops moojeni,
Pitangus sulphuratus y Gallus gallus. La reactividad inmunoquímica se determinó mediante las
técnicas de doble inmunodifusión y ELISA, mostrándose importante entre los sueros de los croco-
drílidos y baja entre estos y los de las otras especies de reptiles estudiadas. Se observó mayor
reactividad entre los antisueros anti-Caiman respecto a los sueros de Caiman latirostris y Caiman
yacare que frente al suero de Alligator missisipiensis. Además, se encontró una fuerte reactivi-
dad entre ambos sueros anti-Caiman y el de Gallus gallus poniendo en evidencia la fuerte reac-
tividad entre los sueros de arcosaurios.
PALABRAS CLAVE: Cocodrilos, antisueros, inmunología, ELISA, reptiles, suero.

A B S T R A C T. — In order to study the immunochemical reactivity among sera from


different species of reptiles regarding sera from Caiman, the immunoreactivity of sera from
reptiles against antisera to Caiman yacare or anti-Caiman latirostris sera was studied. These
hiperimmune sera were tested against sera from Alligator missisipiensis, Tupinambis merinae,
Tupinambis rufescens, Chelonoidis chilensis, Clelia rustica, Waglerophis merremii, Lystrophys
dorbignyi, Phyton molurus, Boa constrictor occidentalis, Eunectes notaeus, Crotalus durissus
terrificus, Bothrops alternatus, Bothrops neuwiedii, Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu,
Bothrops moojeni, Pitangus sulphuratus and Gallus gallus. The immunochemical reactivity was
tested by double immunodiffusion and ELISA. The results showed high reactivity among the
sera from crocodiles while the reactivity against sera from the other species of reptiles studied
was lower. The reactivity among sera of both species of Caiman was higher with the anti-
Caiman latirostris and anti-Caiman yacare sera when compared with the reactivity against
serum of Alligator missisipiensis. In addition, a strong reactivity of both anti Caiman sera on
serum from Gallus gallus was observed, indicating a high reactivity between achosauria sera.
KEYWORDS: Crocodile, antisera, immunology, ELISA, reptiles, serum.

INTRODUCCION desde principios del siglo XX (Haas et


al., 1992). El grado de reactividad inmu-
Las técnicas inmunológicas han sido noquímica cruzada usualmente refleja la
utilizadas para proveer información so- relación filogenética entre especies y la
bre al filogenia entre organismos vivos homología estructural entre los antíge-

R e c i b i d o : 0 5 / 0 4 / 1 0 — A c e p t a d o : 2 4 / 0 6 / 1 0
E d . a s o c . : R . M o n t e r o
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nos individuales, pudiendo así brindar et al., 1961; Cohen, 1971; De Smet
información sobre la evolución de las 1978) y la relación entre las proteínas
proteínas y la relación entre ellas (Jeffe- séricas de algunas especies de reptiles
ris et al., 1982; Mizejewski, 1995). Si como en Lacertilia (Blanc, 1978) e Igua-
bien los estudios sobre el ADN brindan nidos (Higgins & Rand, 1975), enre
una enorme utilidad para los estudios otros, se ha estudiado por técnicas in-
filogenéticos entre las diferentes espe- munológicas.
cies (Deessauer et al., 2002; Murphy et La amplia experiencia entre la reac-
al., 2004; Shedlock et al., 2007), los da- tividad de anticuerpos de animales de
tos sobre las características de las pro- laboratorio o de granja frente a los sue-
teínas de los seres vivos también brin- ros homólogos o los heterólogos (Esteves
dan informaciones provechosas en este & Binaghi, 1972), es aprovechada para
sentido estudios inmunoquímicos cuando no se
Por este motivo, los estudios siste- dispone de reactivos no homólogos. Esta
máticos de reactividad cruzada entre relación entre los componentes séricos
proteínas plasmáticas brindaron elemen- de diferentes especies puede ser utiliza-
tos útiles para asignar grupos evolucio- da en la práctica. En este aspecto, con-
narios (Bauer 1974; Jefferis et al., 1982). siderando como un ejemplo a las in-
Entre las proteínas consideradas a estos munoglobulinas, proteínas que constitu-
efectos pueden mencionarse a las albú- yen uno de los componentes mayorita-
minas, las transaminasas, la transferri- rios de los sueros, ante la ausencia de
na, hemoglobina, haptoglobina y las in- reactivos específicos para una especie,
munoglobulinas entre otras (Córdoba, como en el caso de los anti anticuerpos
1965; Javid & Fuhrman, 1971; Esteves utilizados para estudios inmunológicos,
& Binaghi 1972; Raymond & Fletcher, pueden utilizarse anticuerpos heterólo-
1983; Montgelard et al., 1990; Haas et gos afines. Un ejemplo de esto lo cons-
al., 1992; Jefferis et al., 1982; Grouban tituye la detección de anticuerpos deter-
Botros et al., 1996; Omatsu et al., minados por otros no específicos (hete-
1992). rólogos), como el uso de anticuerpos
A causa de lo mencionado, las técni- anti IgG de perro (Canis familiaris) para
cas inmunoquímicas pueden ser utiliza- determinar los de especies de Géneros
das para estudios zoológicos entre espe- emparentados Urocyon o Crisocyon u
cies animales emparentadas (Charnyi, otros de esa Familia (Silva et al., 2005),
1969; Bernard et al., 1982). Además, las lo mismo en el caso del uso de anti IgG
características inmunoquímicas de las de gato (Felis catus) para detectar anti-
proteínas de origen animal se pueden cuerpos de otros félidos (Kania et al.,
utilizar para el diagnóstico de enferme- 1997), el uso de anti IgG de oveja para
dades y aún para la identificación de estas determinaciones en otras especies
las diferentes proteínas animales en ali- de Ovis o del género Hircus (Esteves &
mentos mediante la aplicación de técni- Binaghi, 1972), o el uso de la reactivi-
cas inmunológicas (Bequer Lombar et dad entre proteínas del plasma humano
al., 1999; Ofori & Hsie 2007; Hsie et y de primates (Bauer, 1974), entre otros
al., 2009). muchos otros ejemplos de la práctica
Las características bioquímicas e in- cotidiana (Esteves & Binaghi, 1972).
munológicas de las proteínas séricas de Esta reactividad facilita los estudios en
los reptiles, también han sido y son he- numerosas especies animales ya que
rramientas útiles para los tipos de es- anticuerpos comerciales, estandarizados
tudios mencionados. Se han observado y evaluados pueden ser adquiridos para
diferencias bioquímicas importantes en- la realización de estudios inmuonológi-
tre las características séricas de algunas cos para una gran cantidad de mamífe-
especies de reptiles (Zweig, 1957; Baril ros y aves. Sin embargo, en lo referen-
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te a reptiles no existe tanta disponibili- eligió utilizar el suero de estas especies


dad de reactivos y la mayoría de los de reptiles debido las diferentes vías
necesarios son producidos artesanalmen- evolutivas de los mismos: Arcosaurios,
te por los investigadores (Jacobson & Lepidosaurios y Testudines (Cohen,
Origgi, 2002). 1971; Hickman et al., 1992; Montero &
Respecto a los Crocodrílidos de la Autino, 2009). De esta forma, el grado
Argentina, se han comunicado diferen- de reactividad entre estos antisueros y
cias bioquímicas entre los sueros de los diferentes sueros de reptiles y de
Caiman, que pueden apreciarse fácil- aves probados podría indicar el grado de
mente en estudios electroforéticos (Fi- similitud entre estos y por lo tanto la
gura 1) o cromatográficos (de Roodt et viabilidad de utilización de estos sueros
al., 1994; 1997b). También se comunicó como heterólogos para estudios inmuno-
que existe reactividad inmunoquímica lógicos.
importante entre estos y el suero de
Alligator missisipiensis y reactividad
menor frente a sueros de otros reptiles MATERIALES Y METODOLOGIA
(de Roodt et al., 1997a).
En base a lo antes mencionado y a Sueros de reptiles.— Se trabajó con sue-
fin de observar la similitud entre sueros ros de Caiman yacare (Cy), Caiman lati-
de diferentes especies de reptiles, en rostris chacoensis (Cl), Alligator mississi-
este trabajo se analizó la reactividad ppiensis (Am), Tupinambis meriane (Tm),
inmunoquímica de sueros de booideos, Tupinambis rufescens (Tr), Chelonoidis
colúbridos, crotalíneos, saurios, crocodrí- chilensis (Chch), Clelia rustica (Cr),
lidos, quelonios y aves frente a sueros Iguana iguana (Ii), Waglerophis merremii
hiperinmunes contra los sueros de Cai- (Wm), Lystrophys dorbignyi (Ld’O),
man latirostris y de Caiman yacare. Se Phyton molurus (Pm), Boa constrictor

Figura 1. Electroforesis del plasma de Caiman yacare y de Caiman latirostris. Electroforesis


en acetato de celulosa (CellogelNR) de 5 mg de plasma de Caiman yacare (a) y de Caiman la-
tirostris (b). Los plasmas se disolvieron en buffer barbital pH 8.0 y se corrieron a una potencia
de 200 mV durante 60 miutos. Fueron teñidos con Negro amido. El signo + indica el ánodo.
Las flechas indican el punto de siembra. Obsérvese la mayor migración anódica del plasma de
Caiman latirostris.
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occidentalis (Bco), Eunectes notaeus ajustada a una cantidad de 5 mg de pro-


(En), Hydrodynastes gigas (Hg), Crotalus teína, con adyuvante de Freund comple-
durissus terrificus (Cdt), Bothrops alter- to. La segunda inmunización se realizó
natus (Ba), Bothrops diporus (Bd), Bo- de la misma manera pero utilizando
throps jararaca (Bjca), Bothrops jarara- adyuvante de Freund incompleto, a los
cussu (Bjcu) y Bothrops moojeni (Bm), 15 días. La tercera se realizó de la mis-
Gallus gallus (Gg) y Pitangus sulphura- ma manera utilizando como adyuvante
tus (Ps). Los sueros de los crotalidos, gel de hidróxido de aluminio al 10% en
colúbridos y de En provinieron de espe- el día 45. La última inoculación se rea-
cies en cautividad alojadas en el serpen- lizó de la misma manera el día 60 con
tario del Instituto Nacional de Produc- el suero diluido en NaCl 0,15M.
ción de Biológicos – A.N.L.I.S. “Dr. Car- Una vez detectada la presencia de
los G. Malbrán”, Buenos Aires. La san- anticuerpos específicos en el suero por
gre de Tm, Tr, Bco, Pm y de Am provi- doble difusión (Harlow & Lane, 1989),
no de especímenes del Zoológico de la fracción de gammaglobulinas fue se-
Buenos Aires S.A., Buenos Aires, Ar- parada por precipitación salina con una
gentina. La sangre de las especies de solución sobresaturada de sulfato de
Caiman provino del criadero “Yacaré amonio al 33%, tras lo cual fue desali-
Ranch”, Corrientes, Argentina. Los sue- nizada en una columna cromatográfica
ros de Gg, de Chch y Ps fueron dona- de Sephadex G-25 Superfine (Sigma),
ciones de colecciones privadas. El suero concentrada con polietilenglicol 20.000 y
de las diferentes especies se obtuvo a dializada frente a 0,15 M NaCl hasta
partir de sangre venosa total extraída una concentración proteica de 6,0 g/dl.
por las venas de la cola. La extracción Los anti sueros anti-Cl (A-Cl) y anti-Cy
se realizó sin anticoagulante y en condi- (A-Cy) procesados fueron acondicionados,
ciones estériles. Tras la formación del separados en alícuotas y conservados a
coágulo a 37ºC las muestras fueron cen- -20ºC hasta su utilización.
trifugadas y el suero se separó, tras lo
cual se tomaron alícuotas que se con- Determinación de proteínas totales.—
servaron a -20ºC hasta su utilización. Para todos los sueros de reptiles así
como la de los sueros hiperinmunes de
Elaboración de los sueros hiperinmu- conejos preparados para esta experien-
nes.— Se obtuvieron inmunizando cone- cia, la concentración proteica se deter-
jos neocelandeses adultos (2,5 kg) con minó utilizando un equipo comercial de
suero total de Cy o de Cl. Los animales medición de proteínas (Bio-Merieux, Pa-
fueron alojados en cajas metálicas ade- ris, Francia).
cuadas para animales adultos y se man-
tuvieron en un ambiente con tempera- Doble inmunoprecipitación (Técnica de
tura controlada, con ciclos de luz – obs- Ouchterlony).— Se realizó con todos los
curidad de 12 horas y agua y alimenta- sueros de todos los ofidios, Tupinambis,
ción ad libitum. Para todas las manio- crocodrílidos, aves y Chch. Se realizó
bras efectuadas sobre, estos se siguie- en agarosa (Sigma, Ultrapure) al 1,0%
ron los lineamientos éticos sugeridos en NaCl 0,15 M según técnicas conven-
por la Guía para el Cuidado y Uso de cionales (Harlow & Lane, 1989) enfren-
Animales de Laboratorio (National Re- tando el suero de los reptiles frente a
search Council, 2002). los antisueros obtenidos.
En la primera inmunización se inyec-
taron por la vía subcutánea en varios Enzima Inmuno Ensayo (ELISA).— Se
puntos en la parrilla costal, con una realizó en policubetas de poliestireno de
solución de suero de Cy o Cl en un vo- 96 pocillos (Corning) que fueron sensibi-
lumen final de 1 ml con NaCl 0,15 M, lizadas con sueros de Cl, Cy, Am, Tt,
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Tr, Ba, Bd, Bja, Bju, Bm, Cdt, ajusta- La reactividad se determinó como la
dos a una concentración de proteínas de Concentración Efectiva Media (EC50) que
1 µg/ml en solución tampón barbital só- indica la dilución del antiveneno que da
dico pH 8,8 durante 12 horas a 4ºC. el 50% de la lectura de máxima Absor-
Las placas se incubaron durante 30 mi- bancia a A490nm para el suero y anti-
nutos a 37ºC con los antisueros anti-cro- suero estudiados. La EC50 se determinó
codrílidos como anticuerpo primario. graficando la dilución de los antisueros
Como control negativo se usó suero versus la lectura de la A 490nm y se
normal de equino para detectar uniones analizó por regresión no lineal utilizan-
inespecíficas. Tras la incubación las pla- do el software Prism 4.0 (Graph Pad,
cas fueron lavadas y se incubaron con CA). Con fines comparativos también se
anticuerpo secundario, una anti-IgG de consideró la máxima lectura de la
conejo conjugada a peroxidasa (Sigma). A490nm en coicidencia con la mínima
La reacción se reveló con Ortoparafeni- dilución de los antisueros.
lendiamina (OPD) (Sigma) y peróxido de
hidrógeno y la reacción se detuvo con
H2SO4 3M. La lectura se realizó en un RESULTADOS
lector automático (BioRad) a una Absor-
bancia (A) de 490 nm de longitud de Mediante la técnica de doble inmuno-
onda. precipitación solamente se pudieron ob-

Figura 2. Pruebas de doble inmunodifusión. a) Doble difusión de sueros de diferentes especies


frente al sueros anti Caimam latirostris (A-Cl) y anti Caiman yacare (A-Cy). Se ejemplifican
las pruebas realizadas con los diferentes sueros probados. Los antisueros (15 µl) se sembraron
en pocillos que se enfrentaron a un volumen similar del suero de las diferentes especies estu-
diadas. 1- Gallus gallus; 2- Chelonoidis chilensis; 3- Iguana iguana; 4- Caiman latirostris; 5-
Eunectes notaeous; 6- Hydrodynastes gygas. b) Idem, 1- Gallus gallus; 2- Caiman latirostris; 3-
Oryctolagus cuniculi(control negativo); 4- Tupinambis merinae; 5- Eunectes notaeous, 6- Chelo-
noidis chilensis.
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servar bandas de precipitación entre los reactividad importante entre los sueros
sueros de Cl, Cy, Am y Gg. frente a los de los tres Alligatorinae estudiados,
dos antisueros estudiados. Por medio de siendo también esta mas fuerte entre Cl
esta técnica y en las condiciones del es- y Cy que con Am con ambos antisueros
tudio, no se observaron bandas de preci- (p < 0,05). En el resto de los casos los
pitación entre los antisueros con ninguna valores de las lecturas fueron mucho
de las otras especies estudiadas. menores pero claramente se observó
El reconocimiento fue mucho mayor reactividad entre los diferentes sueros
entre los sueros Caiman que entre es- con los antisueros anti Caiman. Figuras
tos y el suero de Alligator (bandas débil- 3 y 4, Tablas 1 y 2.
mente teñidas). Fue muy iportante el
reconocimiento de ambos anti Caimán
frente al suero de Gg. La reactividad DISCUSIÓN
observada se ejemplifica en la Figura 2.
Por esta técnica, de baja sensibilidad, Se observó una reactividad importan-
no pudo observarse reactividad frente a te entre los sueros de los tres Alligato-
los sueros de las diferentes especies de ridae, siendo más fuerte entre Cl y Cy
reptiles estudiados. Esto muestra una que entre estos y Am. La reactividad
alta reactividad entre los sueros de Alli- frente al suero de Gg fue muy impor-
gatorinae y Gallus que respecto al de tante ante ambos anti Caimán utilizados
las otras especies estudiadas, lo que in- mediante la técnica de doble inmunodi-
dica mayor similitud de las proteínas fusión (Figura 2). No se observaron ban-
séricas de estos grupos. Las bandas de das de precipitación frente a los otros
ambos anti Caiman frente a los sueros sueros mediante esta técnica, lo que
de Cl y Cy fueron más fuertes que indica una reactividad inmunoquímica
frente a Am y Gg. mucho menor o ausente. Por otro lado,
En el ensayo de ELISA la lectura la presencia de bandas de precipitación
del control negativo fue inferior en to- indica un fuerte reconocimiento entre
dos los casos a los sueros de reptiles los Crocodrílidos y Gg, dado que esta
estudiados (p < 0,05). Reafirmando y técnica permite detectar complejos antí-
cuantificando los resultados anteriores, geno-anticuerpo en el orden de los mi-
la técnica de ELISA mostró inmuno- crogramos (<1 mg/100 ml), mientras que

Figura 3. Reactividad inmunoquímica determinada por ELISA de los sueros anti Caimán con
los sueros de otras especies de reptiles. a) Reactividad frente al A-Cy. Figura b) Reactividad
frente al A-Cl. (■) C. yacare; (▲) C. latirostris; (▼) A. mississippiensis; (◆) T. merinae; (●)
T. rufescens; (❍) B. jararacussu; (❏) B. jararaca; ( ) B. alternatus; (❏) B. diporus (✕ ) B.
mojeni; (❏) C. d. terrificus.
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la técnica de ELISA puede detectar en cas individuales de la respuesta inmune


el orden de los nanogramos (<1 µg/100 de los conejo utilizados, también podrían
ml) (Stites & Channing Rodgers, 1993). indicar una diferencia mayor entre los
Los ensayos de ELISA también mos- componentes séricos de Cy y las otras
traron mayor reactividad entre los dos especies estudiadas respecto a Cl. Estas
anti Caiman frente los Alligatorinae res- diferencias se pueden observar bien al
pecto a otros reptiles, y una mayor comparar las EC 50 (Figura 4.a y 4.b).
reactividad entre ambas especies de Cai- Estudios adicionales podrían aclarar este
man respecto a la observada con Am. punto.
Considerando la menor dilución utili- En trabajos realizados con antisueros
zada en el ensayo de ELISA (1 x 10 2) anti IgG de Am se observó una mayor
los antisueros mostraron una gran reac- reactividad sobre el suero homólogo que
tividad (Figura 3) frente a todos los sue- frente a los sueros de Cl y Crocodylus
ros estudiados por esta técnica, siendo niloticus (Brown et al., 2001). En este
esta diferente en los distintos grupos estudio, también observamos mayor
(Figuras 4.a y 4.b). El A-Cl mostró una reactividad frente a los sueros homólo-
lectura mayor frente a los sueros de gos, del mismo grado frente a los sue-
saurios que el A-Cy. Si bien estas dife- ros de Caiman y, algo menor frente a
rencias solo podrían ser debidas a limi- suero de Am, que teniendo en cuenta
taciones de la técnica, o a característi- las EC50 reaccionó 52,9% frente al A-Cl

Porcentaje de reactividad respecto a los otros sueros de reptiles a la dilución 1 x 102

Sueros Cy Cl Am Tm Tr Cdt Ba Bn Bja Bju Bm

Anti-Cl 98,2 100 96,4 96,2 98,1 81,9 91,4 88,6 86,4 89,1 92,7

Anti–Cy 100 100 100 68,7 74,6 79,7 66,1 56,7 59,7 64,2 58,3

Tabla 1. Porcentaje de reactividad de los antisueros a su reactividad a la dilución 1x10-2 de los


antisueros anti-Caiman. Reactividad porcentual medida por el método de ELISA de los sueros de
las diferentes especies ante los antisueros de Cl y Cy. Los valores son el porcentaje de lectura
a 490 nm respecto al suero específico (considerado como el 100%) de cada uno de los sueros es-
tudiados. Se tomó como valor comparativo la lectura a una Absorbancia de 490 nm de la reac-
tividad de los antisueros de Caiman, a la dilución 1/100 frente a los sueros de los diferentes
reptiles.

Porcentaje de reactividad de los antisueros respecto a su EC50

Sueros Cy Cl Am Tm Tr Cdt Ba Bn Bja Bju Bm

Anti-Cl 112 100 52,9 46,1 49,3 26,2 29,1 29,6 31,9 31,3 38,7

Anti–Cy 100 64,7 39,2 13,6 10,4 6,8 7,2 9,6 8,7 6,7 9,0

Tabla 2. Porcentaje de reactividad de los antisueros anti-Caiman respecto a los otros sueros de
reptiles. Reactividad porcentual medida por el método de ELISA de los sueros de las diferentes
especies ante los antisueros de Cl y Cy. Los valores son el porcentaje de lectura a 490 nm
respecto al suero específico (considerado como el 100 %) de cada uno de los sueros estudiados.
Se tomó como valor comparativo la EC50, que significa la dilución del antisuero con la que se
obtiene una lectura a una Absorbancia de 490 nm del 50% respecto a la mayor obtenida con el
suero homólogo.
32 A. R. DE R OODT : Reactividad de sueros anti- Caiman yacare y C. latirostris

y 32,9% frente al A-Cy (Figura 4.b y res encontraron diferencias evolutivas


Tabla 2). Considerando la dilución me- entre Cl y Cy y entre estos y Am. Es-
nor de los antisueros reaccionó 96,4% tos datos son congruentes con la reacti-
frente al A-Cl y 100% frente al A-Cy vidad de los anti suero total de Caiman
(Figura 4.a y Tabla 1). (este trabajo) y de anti Igs de Alligator
El reconocimiento fue menor frente mississippiensis (Brown et al., 2001).
a los sueros de Tupinambis y menor Si bien es conocida la relación filoge-
aún frente a los sueros de las Crotali- nética entre las aves y los crododrílidos
nae. Estos resultados, si bien podrían (Montero & Autino, 2009), fue sorpren-
esperarse, hasta la fecha no se habían dente la reactividad cruzada entre ambos
descripto. sueros anti Caiman y el suero de Gg,
Estudios inmunoquímicos con compo- dado que esta reactividad se observó por
nentes séricos aislados como inmunoglo- la técnica menos sensible, lo que indica
bulinas, albúminas u otros podrían brin- una reactividad muy grande entre los
dar más información básica de este tipo. antisueros y ese suero (Stites & Chan-
De hecho se ha observado que mediante nig Rodgers, 1993). El estudio de la reac-
las características inmunoquímicas de tividad inmunoquímica entre los sueros
las albúminas pueden obtenerse datos o componentes séricos de los diferentes
evolutivos respecto a los Crocodrílidos grupos de aves y los crocodrílidos podría
(Hass et al., 1992). Estos mismos auto- brindar información importante sobre la
relación de estos arcosaurios.
Independientemente de la informa-
ción de importancia zoológica sobre las
similitudes entre los componentes séri-
cos de las diferentes especies, estos re-
sultados tienen utilidad en el campo del
diagnóstico. La necesidad de contar con
anticuerpos anti especie o anti-Igs de
reptiles proviene tanto del campo de las
ciencias básicas como de los de la salud
animal y humana. Independientemente
de aquellas investigaciones que pudie-
sen requerir este tipo de reactivos, en
la práctica médico veterinaria o en los
estudios de epidemiología de campo, el
conocimiento del grado de relación in-
munoquímica entre las proteínas séricas
puede ser de suma utilidad. Como un
ejemplo del primer caso, puede mencio-
narse la implementación de métodos de
diagnóstico inmunológico para las pobla-
ciones de las diferentes especies de rep-
tiles en zoológicos o criaderos frente a
enfermedades infecciosas (Jacobson &
Origgi, 2003).
Figura 4. Reactividad de los sueros anti Cai-
man latirostris y anti Caiman yacare frente a En este caso particular, se observa
sueros de diferentes especies de reptiles. Las que tanto el A-Cl como el A-Cy pueden
barras indican dilución a la que se observa la ser utilizados para el diagnóstico seroló-
absorbancia media (EC50) de las curvas de lec- gico de cualquiera de ambas especies.
tura de los ensayos con sueros anti – Caiman También cualquiera de esos antisueros,
latirostris (a) y Caiman yacare (b) frente a
los otros sueros de reptiles. podrían servir para la detección de sue-
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ro de Alligator mississippiensis, en coin- grupos para los que se ha demostrado


cidencia con lo observado respecto al buen nivel de reactividad cruzada, como
suero anti IgG(Y) de Alligator mississip- Tupinambis, aún cuando se requerirían
piensis que reconoce, aunque con menos menores diluciones de los antisueros
reactividad, a los sueros de Caiman lati- Ante la ausencia de reactivos especí-
rostris y de Crocodylus niloticus (Brown ficos, lo que ocurre en el caso de los
et al., 2001). reptiles (Jacobson & Origgi, 2003) esta
La reactividad heteróloga observada reactividad cruzada podría ser utilizada
frente al suero de Gg podría indicar la en el diagnóstico, de la misma manera
utilidad de los sueros anti-Caiman para que la reactividad heteróloga entre pro-
detectar suero de algunas especies de teínas séricas se aprovecha para el
aves. Pero esta utilidad es secundaria, diagnóstico serológico en diferentes gru-
dado que los anti sueros de ave son fá- pos de mamíferos como rumiantes (Es-
ciles de obtener comercialmente. Estos teves & Binaghi 1972), cánidos (Silva et
resultados indican entonces que es im- al., 2005) o félidos (Kania et al., 1997).
portante considerar la alta reactividad Si bien se debe a alentar al uso de an-
heteróloga entre estos sueros al mo- tisueros específicos, ante la ausencia de
mento de realizar pruebas inmunoquí- estos reactivos, la reactividad cruzada
micas con los mismos, a fin de evitar podría en determinados casos ser una
resultados erróneos. Esto es especial- herramienta útil para algunos tipos de
mente importante en el caso de los es- estudios inmunológicos.
tudios forenses o sobre alimentos, ya No se debe entender que el diag-
que la reactividad puede ocultar adulte- nóstico serológico en los reptiles se li-
raciones de productos que contengan mite solamente al manejo sanitario.
sueros de estas especies. Para descartar Las técnicas inmunológicas en estas es-
esa posibilidad, las mismas deberían pecies poseen una importancia epidemio-
realizarse con anticuerpos elaborados lógica muy importante en el campo de
contra antígenos específicos o con sue- la salud pública. Los reptiles son reser-
ros absorbidos para evitar inespeceficida- vorios de diversos microorganismos zoo-
des entre sueros de Gallus y Caiman. nóticos. Entre éstos, respecto a las bac-
También, se detectó una reactividad terias se pueden mencionar a Leptospi-
menor de ambos antisueros frente a los ra spp. (Stanchi et al., 1986; Rosetti et
sueros de Tupinambis y menor aún fren- al., 2003), Salmonella spp. (Passman et
te a los sueros de Bothrops y Crotalus. al., 2002), Mycobacterium spp. y Chla-
Esta reactividad, si bien baja, utilizando mydia spp, (Soldati et al., 2004) entre
los antisueros con diluciones bajas (por muchas otras. También pueden ser re-
ejemplo 1x102) permitirían mediante la servorios de virus, manteniendo la acti-
técnica de ELISA detectar la presencia vidad viral en la naturaleza. En este
de proteínas de estas especies. caso se destacan, entre muchos otros,
La reactividad frente a Tupinambis los arbovirus causantes de encefalomie-
por ELISA fue mayor que la observada litis en el humano como los de la Ence-
frente los sueros de serpientes, lo que falitis Equina del Oeste (Spalatin et al.,
indicaría una mayor alejamiento de es- 1964; Thomas et al,. 1980; Hidalgo Mar-
tas especies respecto a los crocodrílidos. tínez et al., 2008), la Encefalitis del
La reactividad cruzada podría ser de Nilo (Miller et al., 2003; Jacobson et
utilidad para el caso de los crocodrílidos, al., 2005) o la Encefalitis Japonesa
no solo para el diagnóstico de enferme- (Shortridge et al., 1974). El monitoreo
dades en la naturaleza sino en zoologi- de los niveles de anticuerpos en espe-
cos o en los diferentes sistemas de cria cies silvestres es una herramienta fun-
(Brown et al., 2001), incluso podrían damental para conocer la dinámica de
utilizarse para el diagnóstico de otros muchos agentes infecciosos en la natu-
34 A. R. DE R OODT : Reactividad de sueros anti- Caiman yacare y C. latirostris

raleza que tienen a sus reservorios y Gabriel Aguado del Zoológico de Buenos
fuentes de infección en animales salva- Aires S.A., por permitir la extracción de
jes (Acha & Szyfres, 1986). De esta for- sangre a ejemplares de Tm, Tr, Bco,
ma, conociendo la reactividad cruzada Pm y de Am. Se agradece al Sr. Daniel
entre diferentes especies, se facilitarían I.J. Herman por la donación de suero
las labores de vigilancia epidemiológica de Gg y a los Med. Vet. Vanessa Olivei-
en estos casos. ra y Pablo Regner por la donación de
En estudios preliminares observamos suero de ChCh y Ps. El autor agradece
que antisueros anti suero total de Bo- la asistencia técnica de los Sres. Her-
throps alternatus y anti fracción gam- nán Dinápoli, Pedro P. Galarce y la de
maglobulínica de esta especie, cruzan los Lic. Silvana Litwin, José Ch. Dok-
inmunoquímicamente bien con sueros metjian, Laura C. Lanari y Laura Sáez.
de Bothrops jararacussu, Bothrops dipo-
rus y Crotalus durissus terrificus. Esos
mismos antisueros, cruzan aunque con LITERATURA CITADA
menor reactividad con los sueros de
Tm, En, Hg y tiene menor reactividad ACHA, P. N. & B. SZYFRES. 1986. Zoo-
frente a los sueros de Ii y de Chch (de nosis y enfermedades transmisi-
Roodt et al., 2008). Esto junto a los re- bles comunes al hombre y a los
sultados hallados con los sueros anti animales. Organización Panameri-
Caiman, indican una reactividad mayor cana de la Salud, Pub. Científica
entre los sueros de especies pertene- 503. Organización Mundial de la
cientes a una misma familia, si bien la Salud, Washington DC. 989 pp.
reactividad cruzada se observa en todos BARIL , E. F.; PALMER, J. L. & A. H.
los casos. BARTEL . 1961. Electrophoretic
La importancia de los estudios sero- analysis of young alligator serum.
lógicos en la medicina de reptiles así Science 173: 278-279.
como la necesidad de contar con reacti- BAUER, K. 1974. Cross-Reactions bet-
vos para estudios epidemiológicos de ween Human and Animal Plasma
enfermedades infecciosas en que los Proteins. VI. An Assay Method for
reptiles actúan como reservorios, son Ape and Monkey Plasma Proteins
motivos importantes para que se reali- Using Antihuman Antisera. Hu-
cen estudios inmunológicos con los dife- mangenetik 21, 273-278.
rentes componentes de los sueros de BECQUER LOMBARD, A.; GARCÍA GÓ-
estas especies. Esto redundará en ma- MEZ , M.; V ALLADARES, C.; R ÍOS
yor conocimiento entre las relaciones DE S ALGRAT , M. & G. B ELTRÁN
de las especies y en brindar herramien- LLERANDI. 1999. Identificación se-
tas útiles en el campo de la medicina rológica de especies animales usa-
humana y veterinaria. das como ingredientes de produc-
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AGRADECIMIENTOS BERNARD , P.; B OUCHERART, M. & R.
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El autor agradece al Med. Vet. munochemical study of serum and
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