You are on page 1of 9

PRACTICA 3.

PREPARACIN DE EXTENSIONES O FROTIS Y


TINCIN SIMPLE

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA APLICADA


17-I
MARTES, 31 DE ENERO DE 2017

CRUZ COLN MARA DEL ROCO

CRUZ LPEZ LUZ MARA


2142002660
DAZA PONCE YISEL
2133004049
GARCA DE LA CRUZ AGLAETTE
2143033123

EQUIPO 3
PRCTICA 3
PREPARACIN DE EXTENSIONES O FROTIS Y TINCIN SIMPLE

I. OBJETIVO
Conocer el procedimiento para preparar extensiones o frotis y los diferentes
mtodos de tincin, as como su utilidad en el estudio microscpico de los
microorganismos.

II. INTRODUCCIN
La mayora de las observaciones de los microorganismos se realizan con
preparados teidos. Los microorganismos se fijan y tien para poder apreciar sus
caractersticas morfolgicas y conservarlos para observarlos en otra ocasin.
El trmino tincin significa simplemente colorear los microorganismos con un
colorante que destaque ciertas estructuras. Sin embargo, antes de teir los
microorganismos se los debe fijar (adherir) al portaobjetos. El proceso de fijacin
produce la muerte simultnea de los microorganismos y su adherencia al
portaobjetos. Tambin preserva diversas partes de los microbios en su estado
natural con una distorsin mnima (Tortora et al., 2007).
Para fijar una muestra se extiende una pelcula delgada del medio que contiene
los microorganismos sobre la superficie del portaobjetos; pelcula denominada
extensin, que se deja secar al aire. Posteriormente se fijan las clulas al
portaobjetos, pasando el portaobjetos rpidamente por la flama de un mechero
Bunsen. Al finalizar el microorganismo est listo para ser observado en el
microscopio.
Los colorantes son sales compuestas por un in positivo y un in negativo, uno de
los cuales est coloreado y se conoce como cromforo. El color de los
denominados colorantes bsicos est en el in positivo; en los colorantes
cidos, est en el in negativo. En un pH de 7 las bacterias presentan una carga
levemente negativa. Por lo tanto, el in positivo coloreado en un colorante bsico
es atrado hacia la clula bacteriana con carga negativa. Los colorantes bsicos,
entre los que se encuentran el violeta de genciana, el azul de metileno, el verde de
malaquita y la safranina, se utilizan con ms frecuencia que los colorantes cidos.
Son ejemplos de colorantes cidos la eosina, la fucsina cida y la nigrosina
(Tortora et al., 2007).
Las extensiones bacterianas en donde los microorganismos estn coloreados
sobre un fondo claro se denominan tinciones positivas, cuando las extensiones
bacterianas son incoloras contra un fondo coloreado se denominan tinciones
negativas.
Los colorantes cidos o bsicos se pueden emplear en tres clases de tcnicas de
tincin: simple, diferencial y especial.
Una tincin simple es una solucin acuosa o alcohlica de un colorante bsico
nico. Aunque los diferentes colorantes se unen de forma especfica a las distintas
partes de las clulas, el propsito principal de una tincin simple es destacar el
microorganismo completo para que se vean las formas y las estructuras celulares
bsicas. El colorante se aplica al extendido fijado durante un tiempo determinado y
luego se lava; a continuacin, el portaobjetos se seca y se examina. Algunas de
las tinciones simples utilizadas con frecuencia en el laboratorio son el azul de
metileno, la carbolfucsina, el violeta de genciana (cristal violeta) y la safranina.
(Tortora et al., 2007).

III. RESULTADOS
Cruz Lpez Luz Mara
Como principal observacin se puede decir que para el cultivo en medio slido se
observan formas redondas coloreadas por lo que se definen como cocos. Se
pueden ver cocos en multitudes grandes y otros en forma de cadena, as como
otros tetrados. Imagen 1

imagen 1

En el cultivo en medio lquido se observ que la biomasa fue poca y no se pudo


definir un tipo de bacteria, general se determinan que son cocos. Aunque se
absorben colores diferentes pueden verse un poco su forma, pero no exacta.
Imagen 2
Daza Ponce Yisel
Garca de la Cruz Aglaette

IV. ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS


Cruz Lpez Luz Mara
De acuerdo a lo observado, se pudo determinar qu forma tena cada cultivo,
lquido y slido, en el microscopio. Se determinaron ser bacterias en forma de
cocos en el cultivo slido.
La accin de poner muy poca biomasa tuvo como consecuencia la no
determinacin de una familia de bacterias en el cultivo lquido.
El dejar un frotis o extensin con un colorante ms del tiempo determinado para tal
provoca exceso de colorante y no se observa mucho en el microscopio
Daza Ponce Yisel
Garca de la Cruz Aglaette

V. CONCLUSIONES
Cruz Lpez Luz Mara
Para la preparacin de un frotis o extensin se deben tener varios elementos en
cuenta. Por ello se concluye que: para la preparacin de una muestra liquida se
debe homogeneizar perfectamente en el tubo de ensayo.
Cuando se prepara una extensin se debe estar cerca de la zona estril, que es
aproximadamente 30cm de mechero.
Una tincin debe ser perfectamente medida ya que si se sobrepasa el tiempo de
espera se obtiene un exceso de colorante.
Finalmente se concluye que una tincin simple es muy til cuando se trata de un
elemento puro o bacteria pura, ya que si se quisiera diferencias en un elemento
mixto se necesitan de un mtodo de tincin diferente.

Daza Ponce Yisel


Garca de la Cruz Aglaette
VI. CUESTIONARIO

1. Consultar las estructuras qumicas de 2 colorantes cidos y 2 bsicos


Eosina CIDO

Rojo congo CIDO

Azul de metileno BASE

Cristal violeta BASE


2. Qu significa fijar la extensin y qu sucede durante este proceso?
Mencionar dos tipos de fijacin
La fijacin tiene como misin mantener en forma estable e inmovible componentes
celulares que se desean estudiar y mantener las propiedades fsicas, adems
protege tambin el corte o la pieza del ataque bacteriano.
La fijacin es el proceso por el cual se conservan y fijan en su posicin las
estructuras internas y externas de las clulas de los microorganismos. (Prescott
et al., 2003)
Tipos
El calor: Es el ms antiguo y ms utilizado de estos fijadores. Tanto en
microbiologa, como en el frotis de clulas animales, la fijacin se hace a la llama,
con lo que se obtiene una coagulacin rpida de las protenas y por tanto su
estabilizacin. Esta tcnica no es recomendable cuando se trata de tejidos
vegetales, puesto que produce alteraciones importantes y muy desiguales en las
paredes celulares.
La criodesecacin (liofilizacin): Se trata de congelar a una temperatura inferior
a -50C y eliminar el agua a una presin baja. este mtodo puede ser muy
efectivo, si despus la pieza se incluye en parafina o en plstico, pero es bastante
complejo y excesivamente caro; no produce deformaciones ni retracciones, ni
tampoco endurecimiento de las muestras. Su inconveniente es el precio y lo
engorroso que puede resultar el que, al manipular la muestra, no se rehidrate
posteriormente. (Prescott et al., 2003)

3. Qu caracterstica presenta el aceite de inmersin?


El aceite de inmersin tiene como caracterstica aumentar la resolucin de un
microscopio mediante la inmersin de la lente del objetivo y el espcimen en un
aceite transparente de alto ndice de refraccin.
El aceite de inmersin tiene el mismo ndice de refraccin que el vidrio, de modo
que el aceite se convierte en parte de la ptica del microscopio. A menos que se
utilice aceite de inmersin los rayos de luz se refractan cuando llegan desde la
muestra al aire y el objetivo deber tener mayor dimetro para capturar la mayora
de ellos. El aceite tiene el mismo efecto que un aumento del dimetro del objetivo;
por consiguiente, mejora el poder de resolucin de las lentes. Si no se utiliza
aceite de inmersin con un objetivo de inmersin la imagen se torna borrosa, con
mala resolucin. (Tortora et al., 2007).

4. Por qu es necesario teir las extensiones?


Porque con las tinciones se pretende observar la morfologa de los
microrganismos, as como diferenciar entre las distintas especies de los mismos,
es por eso que existen diferentes tipos de tinciones. No obstante, mejora el
contraste en la imagen vista al microscopio mediante distintos colores.

5. Consultar otras 2 tcnicas para la preparacin de extensiones

Gota pendiente

Este procedimiento es la forma ms sencilla de observacin de organismos vivos,


nos proporciona informacin sobre la morfologa, tamao, color y movilidad de las
bacterias. Sin embargo, debido a la falta de contraste con el entorno es una
prctica que se utiliza nicamente para la observacin del movimiento.

Tincin de Cpsula
La cpsula es una estructura que rodea externamente la pared de algunos
microorganismos y constituye una barrera fsica que protege a la clula del
ambiente externo, proporcionando numerosas ventajas a los microorganismos que
son capaces de sintetizarla, por ejemplo, en las bacterias patgenas la cpsula
permite la adhesin al hospedador o protege de la fagocitosis, en otros casos
incrementa las posibilidades de sobrevivir en condiciones de desecacin en
bacterias que colonizan ambientes naturales, o bien previenen el ataque de
algunos virus, en otras ocasiones son importantes factores de virulencia en
algunas especies clnicamente relevantes como es el caso de Streptococcus
pneumoniae y tambin proporcionan importantes ventajas al facilitar la adhesin a
superficies slidas. El procedimiento para la realizacin de la tincin de cpsulas
es el mismo que se ha explicado para la tincin negativa. Las cpsulas aparecen
rodeando a las clulas como estructuras sin teir sobre un fondo oscuro (Mettael
et al., 2006).

REFERENCIAS
Prescott, L.M., Harley, N.N. & Klein N.N.(2003). Microbiologa. Espaa: Mc Graw-
Hill Interamericana.

Tortora, G. J., Funke, B. R., & Case, C. L. (2007). Introduccin a la Microbiologa.


Buenos Aires: Mdica Panamericana.

http://www.euita.upv.es/varios/biologia/tecnicas_de_histologia_vegetal/Documento
s/Fijacion.htm

https://www.nikoninstruments.com/es_AMS/Productos/Accesorios/Aceite-de-
inmersion
http://revistareduca.es/index.php/biologia/article/view/819/834