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INSTITUTO TECNOLGICO DE

ACAPULCO
INGENIERA QUMICA Y BIOQUMICA

DISEO EXPERIMENTAL:
BACTERIOFAGOS
MICROBIOLOGA GENERAL GPO. A

PROFESOR: DIAZ ALDAY MIGUEL ANGEL

ALUMNA: SANTANA JUAREZ LORENA MONSERRAT

NO.CONTROL: 13320318

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ndice

Objetivos 3

Introduccin. 4

Metodologa. 5

Conclusin y bibliografa... 8

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Objetivos

Establecer una tcnica para la identificacin de E. Coli


Visualizar la presencia de bacterifagos a travs de las consecuencias de
su ciclo infeccioso.

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Introduccin

Los bacterifagos son virus que fueron descubiertos de forma independiente por
los microbilogos Frederick W. Tworten 1915 y Flix d'Hrelle en 1917.Siendo
esta la ltima clase principal de virus en ser descubierta este tipo de virus constituye un sistema
simple y de gran abundancia en la naturaleza. En esencia, los bacterifagos se encuentran
de manera ubicua en el ambiente y en el lugar en que se encuentre su clula husped.

Un fago es ante todo un parsito bacteriano que puede persistir por s mismo pero es incapaz
de desarrollarse y reproducirse fuera de una bacteria. Los genes presentes en los fagos
codifican para una diversidad de protenas, sin embargo todos ellos necesitan de la maquinaria
de su clula husped como ribosomas, factores para sntesis de protenas y sistemas de
produccin de energa para poder replicarse. En otras palabras, un fago crecer en una
bacteria metablicamente activa. Dentro de slo puede este grupo se encuentran los
colifagos que utilizan E. coli y otras especies emparentadas como hospedadores. Estos
colfagos se encuentran presentes en cantidades bajasen las heces humanas y en animales
homeotrmicos, pero estn en nmero elevado en aguas residuales por lo que su
presencia se asocia con contaminacin fecal.

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(Representacin de un bacterifago)

Metodologa

Materiales y procedimiento
Pipeta graduada

Matraz

Placas Petri

Mechero

Tubos de ensayo 13x100

Agua de drenaje

Aza bacteriolgica

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Alcohol yodado

Bomba de presin positiva

Cultivo joven de E. Coli

Caldo comn doble concentracin:

Peptona. 2 g

Cloruro de sodio. 1 g

Extracto de carne... 0.6 g

Agua destilada...100 ml

Procedimiento

1. Filtramos en la Bomba de presin positiva el agua de albaal (fase de pre-


enriquecimiento).

2. En un matraz colocamos 20 ml del filtrado ms 25 ml de caldo doble concentrado y 5


ml de cultivo joven de E. coli, mezclamos con movimientos circulares, rotulamos la muestra
y llevamos a la estufa a 37 C por 48 horas.

3. Pasado las 48 horas nuevamente filtramos la suspensin en la Bomba de presin


positiva, el filtrado queda en un matraz kitasato.

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4. Luego en una placa Petri con agar hacemos una siembra por superficie
del cultivo joven de E. coli
(4-6 horas), Sacamos el exceso de la siembra con una pipeta
y llevamos a la estufa por 10 min.

5. Despus de los 10 min, retiramos la placa de la estufa y colocamos


unas gotitas del filtrado sobre la superficie. Llevamos a la estufa incubar
24 hrs.
6. Observar placas

Para la titulacin:

1. Preparar diluciones decimales seriadas desde 10 -1 hasta 10-8 de la


suspensin de fagos en caldo nutritivo.

2. Preparamos tubos con agar blando a los que aadimos 0,1 mL de la


bacteria (cultivo joven de E. coli).

3. Se aaden 0.1 ml de las disoluciones 10-7 y 10-8 de fagos a los tubos de


manera que tendremos un tubo con cada una de las disoluciones vricas.

4. Despus aadiremos cada tubo a una palca con agar nutritivo y dejaremos
solidificar, para poner luego a incubar (37C/24 h).

5. Hacer recuento de placas lticas (20-200) y calcular el nmero de partculas


virales/ml.

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Conclusin
Mediante estas tcnicas podremos identificar los virus que contiene nuestra cepa
E. Coli asi como de que manera afecta a los seres humanos al consumir algn tipo
de alimento infectado con este bacterifago.

Bibliografia
Gaviria A G, Gonzlez de S M, Castao O J. Tcnica para aislamiento
debacterifagos especficos para E.coli DH5a a partir de aguas residuales.Revista
MVZ Crdoba 2012172852-2860.