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XXI SEMINARIO NACIONAL DE HIDRULICA E HIDROLOGA


VILLA DE LEYVA, BOYACA, 25 AL 27 DE SEPTIEMBRE, 2014

METODOLOGA PARA LA ESTIMACIN DEL COEFICIENTE DE


PARTICIN DE COLIFORMES TOTALES CASO DE ESTUDIO: RO
BOGOT

scar Roberto Daz, Luis Alejandro Camacho

RESUMEN: En la actualidad, la modelacin de la calidad del agua es un tema muy importante para
la sociedad. Un atributo importante, en cuanto a la calidad, son los colifomes totales. stos indican el
nivel de contaminacin y los niveles permisibles para el uso y consumo humano pues usualmente son
utilizados como organismo indicador. Al realizar modelos matemticos para coliformes, se requiere
de diferentes coeficientes que modifican su comportamiento en el tiempo. Este es el caso del
coeficiente de particin (Kd), el cual indica la tendencia que tienen los microorganismos a unirse a
los slidos suspendidos en el agua. ste ayuda a entender el proceso de autopurificacin de los
cuerpos de agua, y el decaimiento de la cantidad de microorganismos por causa de la sedimentacin.
Realizar una buena estimacin de este coeficiente, significa representar la cantidad de organismos
existentes en los ros, y su decaimiento, correctamente. Por lo anterior, es necesaria una metodologa
que permita la estimacin y cuantificacin experimental de Kd, y no deba continuar siendo un valor
a calibrar en los diferentes modelos de calidad del agua. En el presente trabajo, se propone una
metodologa que permite determinar el Kd en cuerpos de agua superficial. Fue desarrollada a partir
de la investigacin de la teora involucrada en los procesos de sedimentacin y adsorcin de
microorganismos. A travs de dos ensayos en el ro Bogot, el procedimiento fue puesto a prueba a
fin de comprobar su efectividad; se encontr que tuvo la capacidad de estimar el coeficiente de
particin de manera coherente con resultados favorables.

ABSTRACT: Nowadays, the water quality modeling is a very important issue for society. An
important attribute, regarding water quality, are total coliform. These, indicate the level of
contamination and the permissible levels for human use and consumption as they are usually used as
indicator organisms. When applying mathematical models for total coliforms, different coefficients
that modify their behavior in time, are required. This is the case of the partition coefficient (Kd),
which indicates the tendency of microorganisms to attach to the suspended solids in the water. It helps
to understand the process of self-purification in water bodies, and the decrease of microorganisms
caused by sedimentation. Making a good estimate of this coefficient means representing the amount
of organisms in the rivers, and its decay, correctly. Therefore, it is necessary an experimental
methodology for the estimation and quantification of Kd, contributing to mathematical models in that
this factor will not have to be a parameter to calibrate. The aim of this paper is to propose a
methodology to determine the Kd in surface waters. It was developed from the theory involved in the
processes of sedimentation and adsorption of microorganisms. From two tests in the Bogot River,
the procedure was proved in order to verify its effectiveness; it was found that it was capable of
estimating the Kd in a coherent way, obtaining favorable results.

PALABRAS CLAVES: Coeficiente de Particin (Kd), Coliformes Totales, Modelacin de Calidad


del Agua.
INTRODUCCIN

La limitacin de agua potable en el planeta es un problema ya reconocido mundialmente, tanto


desde una perspectiva actual como a futuro. Asimismo, es conocido que la poblacin mundial est en
ascenso y, por lo tanto, la demanda de agua requerida para satisfacer a la humanidad tambin lo est.
El problema yace en que el abastecimiento de agua es limitado y el requerimiento de la misma es
cada vez mayor. Gracias a este recurso es posible, tanto nuestra existencia como nuestra subsistencia
y, aunque dependemos de ella, continuamos contaminando sin medida sus cauces alrededor de todo
el planeta. Aun teniendo conocimiento de la escasez, no se han tomado las medidas regulatorias
necesarias para poder emplear este recurso de forma verdaderamente sostenible.
En la modelacin de la calidad del agua, a partir de mtodos numricos y del conocimiento de
la qumica y fsica del lquido desarrollado a travs de la historia, es posible realizar simulaciones que
logran representar las condiciones existentes en los cuerpos de agua. La comprensin de la calidad
del agua en cuerpos superficiales es una herramienta muy til, ya que permite, de cierta manera,
conocer con buena exactitud las caractersticas del fluido en cualquier segmento de su extensin. Al
modelar la calidad del agua de un cauce, se puede obtener un conocimiento de su estado actual, las
afectaciones por vertimientos y las acciones que deben ser tomadas con el fin de recuperar el recurso.
Todos los proyectos que requieran de la utilizacin del recurso hdrico natural, ya sea para extraer o
para verter, necesitan de una caracterizacin de los cuerpos de agua que se utilizarn y la medida en
que estos se vern modificados o afectados.
Con el fin de realizar simulaciones, se deben tener modelos hidrolgicos, hidrulicos y de
calidad del agua, que representen el comportamiento real de un cauce en una zona dada; se deben
tener en cuenta los cambios dinmicos de las diferentes variables y as establecer una aproximacin
a la forma de proceder del cauce. En estos modelos, es necesario determinar algunos parmetros que
permiten al modelador llevar a cabo los respectivos clculos. Los parmetros son principalmente
coeficientes que representan, cuantitativamente, un proceso fsico o qumico de algn atributo del
agua. Algunos de los coeficientes utilizados comnmente, simbolizan el decaimiento natural que
sufren determinantes a medida que el agua avanza, tanto en el espacio como en el tiempo. En la
medida en que mejor sean establecidos estos parmetros, mejor ser la estimacin realizada por la
simulacin.
Un determinante muy importante, con respecto a la calidad del agua, son los microorganismos
existentes en los cuerpos de agua. Usualmente los coliformes totales y fecales son utilizados como
organismos indicadores con el fin de determinar los niveles permisibles de contaminacin y su
cumplimiento. Estos microorganismos estn presentes en dos formas distintas en los cauces: en el
agua en s y en los slidos suspendidos en ella, es decir en los sedimentos. Los coliformes totales
coexisten en las dos maneras mencionadas y estn en constante intercambio. Adems, los cuerpos de
agua tienen la capacidad de autodepuracin. Esto indica que pueden mejorar la calidad del agua a
medida que el agua fluye, pues gracias a procesos naturales como la mortalidad, la radiacin solar y
la sedimentacin, los coliformes tienden a decrecer en su nmero a medida que aumenta el tiempo de
viaje.
Este trabajo centrar su atencin en el proceso asociado al decaimiento de microorganismos
en cuerpos de agua superficial a partir de la sedimentacin: a la adsorcin o capacidad que tienen los
slidos suspendidos de atrapar bacterias libres en el agua, realizando, de esta manera, una purificacin
natural del sistema. Este es uno de los parmetros que los modelos de calidad del agua requieren para
poder realizar estimaciones acerca del destino y transformacin de coliformes totales en los cauces.
El coeficiente de particin (Kd) representa aquella tendencia de los microorganismos a unirse a
partculas slidas; lo cual est asociado al decaimiento de los mismos en el agua y depende
nicamente de la relacin entre la cantidad de ellos que se encuentran impregnados en los sedimentos
con respecto a aquellos libres en el agua, y la respectiva concentracin de slidos suspendidos totales,
como est descrito en el libro Surface Water-Quality Modeling (Chapra , 1997).
El coeficiente de particin es un parmetro muy importante en un modelo de calidad del agua
porque influye en gran medida en el comportamiento que tienen los coliformes totales en el tiempo.
Al implementar una buena estimacin de este parmetro se hace posible representar la poblacin de
coliformes totales, y su decaimiento, de una manera adecuada. Por lo anterior, es necesaria una
metodologa que permita la estimacin experimental del Kd en aguas superficiales, en donde ser
posible realizar una cuantificacin del mismo, aprovechando que su evaluacin depende nicamente
de atributos que son medibles en el laboratorio. El propsito del presente trabajo es plantear una
metodologa que permita determinar el Kd en aguas superficiales. El procedimiento desarrollado se
obtuvo a partir del estudio de la teora de implicada en procesos como la adsorcin y sedmientacin
de microorganismos en diferentes cuerpos de agua. Se realizaron dos ensayos diferentes en el ro
Bogot intentando comprobar la efectividad de la metodologa propuesta, pues existe una gran
incertidumbre en las variables que se manejan.
Al indagar en la literatura, se encuentra que no existe, actualmente, un procedimiento que
permita la identificacin de este parmetro en aguas superficiales. Los estudios son insuficientes para
entender el efecto de la adsorcin de microorganismos a los sedimentos. En la literatura slo se puede
encontrar cmo se realizan pruebas en aguas subterrneas o en dispersin de contaminantes, que no
son directamente aplicables para coliformes totales (Environmental Protection Agency, 1999).
Adems, por falta de conocimiento del proceso de autopurificacin, es posible encontrar que, en el
pasado, en estudios de modelacin de agua, el Kd se mantiene como una variable a calibrar. Es decir
que no se ha profundizado en este tema, lo cual puede llegar a significar una falencia en la modelacin,
ya que al mantenerlo como un valor que se debe graduar dependiendo de mediciones de coliformes
totales en distintos puntos discretos, puede que no se establezca de manera correcta el decaimiento
de microorganismos y se llegue a resultados que se alejen de las condiciones reales existentes.
Obtener el coeficiente de particin, a partir de ensayos experimentales, permite un anlisis ms exacto
de los procesos que ocurren en la realidad y hace que se tenga un mejor entendimiento de las
interacciones que ocurren entre los microorganismos, el agua, los sedimentos y el ambiente que los
rodea (Gamboa Medina, 2008).
Al desarrollar una metodologa que estime el Kd en aguas superficiales, se contribuye a que
cada vez se emplee la modelacin computacional de mejor forma, pues las estimaciones se realizarn
no slo con mayor exactitud, sino que contarn tambin con una mayor base terica. Esta teora se
refiere a que la determinacin del fenmeno de decaimiento se lleva a cabo por medio de procesos
fsicos y qumicos. As, en estudios futuros, la evaluacin de la cantidad de coliformes totales podr
ser mejor representada, lo cual es un aporte significativo a la modelacin ambiental y a la salud
pblica en s, puesto que caracterizar acertadamente estos procesos ayuda a la sociedad a tomar
mejores medidas de utilizacin y potabilizacin del agua, que beneficien a la poblacin por medio de
la reduccin de la incertidumbre en los modelos.

REVISIN DEL ESTADO DEL ARTE

Durante las ltimas dcadas con el fin de poder realizar una cuantificacin del nivel de
contaminacin existente y permisible en cuerpos de agua, se han utilizado lo que se denomina
organismos indicadores. Estos organismos permiten evidenciar la presencia de patgenos en el agua,
ya que al determinar la cantidad de organismos indicadores, se infiere la presencia, en menor cantidad,
de microorganismos perjudcales para la salud humana. Los organismos indicadores deben cumplir
con ciertas caractersticas que aseguren la anterior condicin. Estas son principalmente: mayor
presencia que organismos patgenos, existencia elevada en residuos fecales, facilidad de deteccin
en mtodos de laboratorio, mayor supervivencia y resistencia que organismos patgenos, y renuencia
a la inhibicin del crecimiento por otras especies (Gamboa Medina, 2008).
Los principales organismos indicadores utilizados son los coliformes totales (CT) y los
coliformes fecales (CF). Los coliformes totales estn compuestos por aquellos que tienen un efecto
perjudicial en el ser humano (patgenas) y por aquellas que no representan un peligro para la salud;
inclusive en los coliformes fecales, existen bacterias que no tienen efectos nocivos. Por esto es posible
establecer que si la cantidad de CT que se encuentran en un cuerpo de agua se encuentra dentro de
los niveles permitidos por las agencias reguladoras, tambin lo har la cantidad de organismos
patgenos. Es importante mencionar que existen excepciones y hay una reducida probabilidad de que
la ausencia de CT represente la inexistencia total de microorganismos patgenos. En cuanto a los CF,
el indicador ms utilizado es la Escherichia coli (E. coli) ya que representa con gran certeza la
presencia de organismos provenientes de origen fecal.
El descenso de organismos coliformes en cuerpos de agua puede ser representada por una tasa
de decaimiento total (Kb) que est compuesta por tres elementos: el decrecimiento asociado a la
mortalidad natural y a la salinidad (Kb1), el decaimiento asociado al efecto de la luz y la radiacin
(Kbi) y la tasa asociada al detrimento de coliformes debidos a la sedimentacin (kbs). As la tasa total
de decaimiento se puede representar por medio de las siguientes frmulas (Thomann & Mueller,
1987) (Mancini, 1978) (Chapra , 1997):

= 1 + + [1]

1 = (0.8 + 0.02 ) 1.0720 [2]



= (1 ) [3]

En donde Ke representa el coeficiente de extincin de luz y puede ser encontrado de las


siguientes maneras (Di Toro, OConnor, Thomann, & St. John, 1981):

1.8
= [4] = 0.55 [5]

Antes de presentar la ecuacin que representa el decaimiento asociado a la sedimentacin
(Kbs), se realizar un anlisis ms detallado del mismo, pues este parmetro es el que se pretende
estimar a partir de este trabajo. Primero, se debe establecer que la cantidad de coliformes totales
presentes en el agua (N) se puede dividir en dos componentes: la cantidad total de microorganismos
libres en el agua (Nw) y la porcin de ellos unidos a las partculas slidas (Np). Tambin es preciso
identificar la fraccin de microorganismos que est adherida a las partculas slidas con respecto del
total (Fp). Por medio de un anlisis detallado de este tema, Steven Chapra da una definicin del Kd
en forma de ecuacin, la cual Mara Gamboa desarrolla en su proyecto de grado obteniendo una
frmula que ser la utilizada en el presente trabajo para estimar el coeficiente de particin a partir de
tres atributos que son cuantificables en el laboratorio a partir de procedimientos estandarizados: los
slidos suspendidos totales (m), Nw y Np (Chapra , 1997) (Gamboa Medina, 2008).

= + [6]


= [7]


= [8]

Anlogamente se presenta una ecuacin ms conceptual del coeficiente de particin, que


puede ser entendido como: la relacin existente entre la concentracin de bacterias coliformes
atrapadas en los sedimentos, y la concentracin de dichas bacterias que quedan libres en el agua,
en la siguiente expresin (Gamboa Medina, 2008).

( )
[ 100 ]

= [9]
( )
[ 100 ]

Por ltimo es importante mostrar que a partir del Kd, se puede establecer la fraccin de
coliformes unidos a los slidos suspendidos lo cual permitir establecer la tasa de decremento de
microorganismos asociada a la sedimentacin. Esto se demuestra en las siguientes ecuaciones
(Chapra , 1997):


= [10]
1+


= [11]

As, teniendo descrito cada uno de los componentes que estn asociados al decaimiento absoluto
de coliformes totales, se desarrolla con mayor profundidad la ecuacin 1 obteniendo la siguiente
ecuacin final (Chapra , 1997):


= (0.8 + 0.02 ) 1.0720 + (1 ) + [12]

Previamente fue enunciado que la tasa de decaimiento de bacterias depende nicamente de tres
factores: la mortalidad natural de las bacterias, la influencia de la luz solar por medio de la radiacin
y los efectos causados por la sedimentacin. Pero esto no representa en su totalidad la complejidad
que est asociada a este tema. Una gran cantidad de determinantes y reacciones tambin modificarn,
tanto la magnitud total de la cantidad de coliformes presentes en un cuerpo de agua como su
respectivo decremento o crecimiento. Estos factores se pueden clasificar en tres categoras distintas:
fsicos, fisicoqumicos y bioqumicos-biolgicos. En la categora de factores fsicos las caractersticas
que se asocian a la dinmica de los microorganismos presentes en cuerpos de agua natural son:
temperatura, adsorcin, sedimentacin, resuspensin, floculacin, coagulacin, y la foto-oxidacin.
En general para este proyecto, estos factores son los que tienen mayor importancia e influyen en
mayor medida en el comportamiento de los microorganismos en el tiempo y en el espacio. La segunda
categora es aquella con los factores fisicoqumicos. En esta se encuentran los determinantes: Ph,
efectos osmticos, toxicidad qumica, y potencial redox. En el presente trabajo se realiz la medicin
del Ph y se tendr en cuenta como un determinante que modifica la cantidad de organismos. Por
ltimo, en la tercera categora, se encuentran los agentes bioqumicos-biolgicos que son
trascendentes en la modelacin de los coliformes totales. Estos son: niveles de nutrientes y la
presencia de sustancias orgnicas, organismos predadores, bacterifagos, virus, algas y materia fecal.
Aunque en esta ltima categora haya determinantes importantes, su medicin es de elevada dificultad
y se sale del alcance de este proyecto. Al existir tres categoras diferentes, se incrementa la
incertidumbre asociada a esta temtica y los resultados que se obtengan representan solamente una
estimacin de la realidad y no lo que ocurre, exactamente, en ella (Bowie, 1985).
Es importante mencionar que ninguno de los determinantes del agua mencionados en las tres
categoras es independiente. Todos los factores que influencian la cantidad de organismos dependen
en cierta medida de los otros y se ven influenciados por su comportamiento. Esto implica dos cosas,
la primera es que la complejidad y variabilidad es muy alta, lo cual representa una incertidumbre
significativa cuando se trabaja con microorganismos, y la primera justifica la segunda, que realizar
una simplificacin de la modelacin del decaimiento es apropiada, a falta de un conocimiento ms
detallado de cada una de las variables que influyen en su cuantificacin.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL PROPUESTO PARA LA ESTIMACIN DEL
COEFICIENTE DE PARTICION (Kd)

La tcnica propuesta para la identificacin experimental del coeficiente de particin se basa


en los procesos de sedimentacin descritos por Steven Chapra en su libro Surface Water-Quality
Modeling. En este, se indica que la presencia total de microorganismos en un cuerpo de agua
superficial, se divide en dos componentes: aquellos unidos a los slidos suspendidos y aquellos que
flotan libres en el agua como se muestra en la ecuacin 6. Chapra menciona que la sedimentacin
depender principalmente en la proporcin en la que coexisten los microorganismos en los dos
elementos mencionados. De esta manera, el coeficiente de particin se presenta como la tendencia
que tienen las bacterias a estar atrapadas por las partculas slidas dependiendo de la relacin,
sedimento-agua, de la cantidad de coliformes totales. Sin embargo, esta probabilidad tambin se ve
influenciada por la cantidad de slidos suspendidos en el agua, ya que la concentracin de
microorganismos se da, en los sedimentos por unidad de masa y en el agua por unidad de volumen,
como se observa en la ecuacin 9. As, la magnitud total de slidos suspendidos afectar la relacin
de la cantidad de bacterias y la posibilidad de que las mismas estn adsorbidas en los sedimentos.
Teniendo en cuenta lo anterior, se desarroll una metodologa que permite a travs de la
cuantificacin de los tres atributos esenciales: la cantidad de microorganismos en los slidos
suspendidos, la cantidad de ellos libres en el agua y la concentracin total de slidos suspendidos,
estimar el coeficiente de particin a partir de la ecuacin 8. De esta manera, la metodologa propuesta
se basa principalmente en la capacidad de separar de manera adecuada los slidos del agua, y que al
mismo tiempo los microorganismos permanezcan en su contenedor original. Es decir que cuando se
realiza la disociacin, la relacin entre la cantidad de coliformes atrapadas a los sedimentos y la
cantidad de ellos libres en el agua, no se vea modificada con respecto a la relacin de los mismos en
el agua inicial, antes de la divisin.
A continuacin se presentar el procedimiento propuesto desde la toma de las muestras de
agua y la seleccin del sitio de medicin, hasta el desarrollo de procedimientos en el laboratorio y la
obtencin del coeficiente de particin para coliformes totales.
En cuanto a la toma de muestras, los sitios de medicin deben estar ubicados a lo largo del
recorrido del cauce y deben cumplir con algunos requerimientos. El ms importante es que en el punto
escogido para la medicin, se tenga la seguridad de la existencia de microorganismos en el agua, pues
si se escoge un lugar en donde el agua es potable, es posible que cuando se realicen las pruebas de
coliformes totales, no se puedan cuantificar, no slo por la baja presencia, sino porque en la medida
en que la calidad del agua sea mejor, mayor volumen de muestra es requerido. Comnmente, este
volumen de muestra es limitado por la dificultad que existe en el transporte de la misma y por la
capacidad de los recipientes normalmente utilizados. El hecho de recoger un volumen relativamente
alto representa complicaciones a la hora de realizar las campaas de toma de muestras y puede resultar
imprctico. Otro factor importante para la escogencia del lugar de medicin, es la facilidad con la que
se pueden realizar los muestreos. Lo ms indicado es que exista algn tipo de puente que cruce de un
lado a otro el cauce en donde se tomarn las muestras, pues siempre se debe evitar al mximo el
contacto directo con el agua, y lo anterior, en mayor medida, si se espera que haya coliformes
perjudiciales para la salud. Sin embargo, si la profundidad del cauce es baja, es factible la realizacin
de muestreos entrando al ro y tomando todas las precauciones de seguridad necesarias.
Figura 1.- Ejemplo Sitio de Medicin

En el presente trabajo y para la metodologa propuesta, se requiere que en los sitios de


medicin se tomen dos muestras distintas de agua, una para los slidos suspendidos y una para los
coliformes totales. Pero las muestras de agua deben ser representativas de toda la seccin transversal
del cauce. Para lograr esto, y siguiendo la figura 2, la muestra de slidos suspendidos totales se deber
recoger agua en tres verticales (A, B, C) encontradas a las longitudes mostradas, en donde L
representa el ancho total del cauce. En un mismo recipiente se debe combinar el agua obtenida, en
cuanto al volumen, de la siguiente manera: del volumen del agua se obtiene en la vertical A, en
la vertical B, y en la vertical C. De esta manera se asegura que la muestra obtenida representa en
buena medida la totalidad del agua que fluye por el cauce. A esta cantidad de agua (combinada) se le
debe hallar la temperatura, el Ph, y la conductividad, adems de recoger la muestra de agua para la
prueba de slidos suspendidos. La muestra de agua que se llevar al laboratorio para la prueba de
coliformes totales se obtiene a partir de la vertical B. Se realiza un muestreo a lo largo de toda la
vertical, no debe ser slo superficialmente ya que a mayor profundidad, mayor es la cantidad de
bacterias coliformes. Se debe recolectar al menos un litro de agua del cauce y trasvasarlo a un
recipiente esterilizado con la menor exposicin posible con el fin de evitar una contaminacin externa.
A esta muestra obtenida en la mitad de la seccin, se le debe caracterizar el oxgeno disuelto.

Figura 2.- Tcnica toma de muestras

Teniendo las muestras de agua en los recipientes esterilizados, se deben trasladar al laboratorio
en el menor tiempo posible. Las muestras deben ir refrigeradas por medio de neveras porttiles a las
que se les adiciona hielo con el fin de mantener al mximo las condiciones exactas en la toma de
muestra. Al mantener las muestras a bajas temperaturas, se detienen los procesos de decaimiento de
microorganismos y se mantienen caractersticas similares al cauce.
Al llegar al laboratorio, las muestras deben ser ubicadas inmediatamente en refrigeracin
estable, no se deben conservar demasiado tiempo en las neveras temporales. A partir del momento de
toma de muestra, la prueba de slidos suspendidos se puede realizar en un lmite de tiempo mximo
de 7 das, mientras que el ensayo de coliformes totales slo dentro de un periodo de 24 horas. Por lo
anterior, se recomienda que todos los implementos para realizar la ltima prueba mencionada estn
listos el mismo da de la toma de muestras. En cuanto a la prueba de slidos suspendidos, se debe
aplicar la metodologa estndar para su obtencin. Se realizar sobre la muestra de agua destinada
para ese fin.
Por el contrario, para la prueba de coliformes totales se debe realizar un procedimiento previo
antes de realizar las pruebas de filtracin por membrana. Primero, se debe traspasar una cantidad
significativa de agua a otro recipiente al de la toma de muestra, al menos 200 ml. El agua restante
debe ser transportada hacia una maquina centrifuga con una capacidad de volumen suficiente.
Normalmente, este tipo de mquinas tienen sus respectivos envases para realizar una centrifugacin,
es decir que el agua debe ser trasvasada a estos. Es importante mencionar que todos los recipientes
que se utilicen para contener las muestras de agua de coliformes totales deben estar esterilizados, en
la medida en que las muestras no sean contaminadas, mejores sern los resultados. La efectividad de
la metodologa propuesta reside esencialmente en el manejo de las muestras y de la no alteracin de
la cantidad de bacterias presentes en las mismas.
Se debe centrifugar como mnimo 100ml del agua de la muestra de coliformes. En la
centrifugacin se debe tener especial cuidado, pues en la misma, adems de separar los slidos del
lquido, se debe garantizar que no exista desprendimiento de bacterias. Esto se logra por medio de
una centrifugacin que tenga una magnitud suficiente de revoluciones por minuto para separar los
componentes, pero no demasiado elevada que cause que la proporcin, sedimento-agua, de cantidad
de microorganismos se vea modificada. Por medio del conocimiento de los trabajadores del
laboratorio de la Universidad de los Andes y su experiencia en la utilizacin de la mquina, se
estableci que la centrifugacin se realizara a 8000 RPM durante un periodo de tiempo de 10 minutos.
Con estas caractersticas, es posible disociar los sedimentos sin alterar las condiciones iniciales de los
microorganismos.
Luego de efectuar la centrifugacin, en las paredes de los recipientes utilizados, se puede
observar cmo los sedimentos fueron efectivamente apartados del agua. Luego cuidadosamente, sin
movimientos violentos, el agua libre de sedimentos se transfiere a otro recipiente (tambin estril).
Posteriormente en aquel recipiente que tiene los sedimentos, se agrega un volumen de una solucin
acuosa buffer igual al del agua extrada del recipiente utilizado, en este trabajo se utiliz peptona al
0.1% (Gamboa Medina, 2008). Luego se debe mezclar al menos 10 minutos con el fin de que los
slidos se diluyan en la solucin y los microorganismos presentes en los mismos se adhieran a ella.

En resumen, luego de realizar el procedimiento explicado previamente, se deben tener tres


recipientes con diferentes componentes. El primero contiene una muestra del agua original tomada
del cauce, el segundo agua centrifugada sin slidos suspendidos, y el tercero los sedimentos diluidos
en una solucin acuosa. En este momento se realizan las pruebas de coliformes totales. Se ejecutan
ensayos de cuantificacin de coliformes totales a los tres diferentes lquidos que se tienen. La
metodologa utilizada en este proyecto fue la de filtracin por membrana y se utiliz ColiBlue como
el medio de cultivo.
De esta manera a partir de las pruebas de coliformes totales realizadas, se obtienen resultados
de los microorganismos totales en el agua de la muestra (N), aquellos libres en el agua (Nw), y la
cantidad de coliformes atrapadas en los slidos (Np). Teniendo estas variables cuantificadas es
posible por medio de la ecuacin 6 corroborar que la disgregacin de los coliformes totales fue
realizada efectivamente, y por medio de la ecuacin 8, estimar el coeficiente de particin para
coliformes totales en cuerpos de agua superficial.

APLICACIN DE LA METODOLOGA AL RO BOGOT

A fin de comprobar la efectividad de la metodologa descrita previamnete, se realizaron dos


campaas al ro Bogot. En ambas se utilizaron dos sitios de medicin, los cuales cumplen con las
caractersticas necesarias para poder aplicar la metodologa. En ambos lugares existe una presencia
de coliformes elevada, y tienen un puente que permite fcilmente la obtencin de las muestras de
agua. Los dos lugares de medicin son Puente Vargas y el Puente del Comn, ambos ubicados en la
cuenca alta del ro Bogot. Entre ambos puntos hay una distancia aproximada de 13 km y no existe
ningn vertimiento directo de fuentes naturales, pero si pueden existir fuentes difusas. Ambos puntos
se localizan a las afueras del norte de Bogot.

Figura 4.- Tramo entre los sitios de medicin: Puente Vargas Puente del Comn (Cantor Monroy, 2010)

El sitio de medicin 1 es Puente Vargas, en este hay una estacin limnigrfica. Est ubicado
aproximadamente en el k113+223 desde el inicio del ro Bogot en su punto ms al norte de la cuenca
alta y tiene las coordenadas 1035984 norte y 1007790 este. Por otro lado el sitio 2 es el Puente del
Comn el cual est ubicado aproximadamente en el K126+298 desde el inicio del ro Bogot en su
punto de inicio de la cuenca alta y tiene las coordenadas 1029557 norte y 1005432 este (EAAB-
Universidad Nacional de Colombia, 2010).
Posteriormente se procedi a realizar las campaas de medicin. En ambas ocasiones se
realiz durante las horas de la maana, y haba tiempo despejado. Es pertinente mencionar que
conociendo la naturaleza y calidad del agua en ambos lugares de medicin, se tomaron todas las
medidas de seguridad necesarias. Se utiliz equipo de proteccin personal procurando evitar al
mximo el contacto directo con el agua de las muestras, pues como se demostrar posteriormente,
existe una gran cantidad de coliformes en este tramo del ro Bogot.
Los immplementos utilizados para la toma de las muestras fue el siguiente:

Phmetro Oakton modelo pH300


Conductmetro Orion-Thermo modelo Orion Star
Multiparametrico Hach modelo HQ40D
Sonda de oxgeno Hach modelo HQ40D
2 recipientes de 1L de vidrio esterilizados para bacterias coliformes
2 recipientes de 1L de plstico esterilizados para los slidos suspendidos totales
1 balde
2 muestreadores de acero galvanizado especializados
2 cuerdas de 12 metros de longitud
Flexmetro

Para llevar a cabo la toma de muestras se utilizaron unos muestreadores especializados de acero
galvanizado. Estos tienen la capacidad de alcanzar la totalidad de la profundidad del ro en ambos
sitios de medicin gracias a su elevado peso. Estn diseados para que no se llenen inmediatamente
en el instante en que entran en contacto con el agua, sino que a partir de un pequeo orificio en la
parte superior, el agua entre de manera paulatina y permita realizar un barrido de toda la vertical
llegando hasta el fondo del ro. Como se observa en las figura 5 y 6, el muestreador en su interior
tiene un tubo de PVC del cual se sacarn las muestras de agua, para evitar el contacto del agua
directamente con el metal, puesto que esto podra afectar la calidad del agua

Figura 5.- Procedimiento toma de muestra Figura 6.- Componentes del Muestreador

Inicialmente se midi el ancho del ri de forma aproximada desde la superficie del puente y
as establecer el lugar de cada una de las verticales a las distancias indicadas. Luego se realiz en
primera instancia la obtencin de la muestra de agua para los slidos suspendidos. sta se consigue
a partir de la combinacin de diferentes cantidades de agua en tres verticales distintas. Se utiliz el
muestreador previamente descrito para recolectar las muestras de agua y un balde para la mezcla. Al
agua combinada a partir de diferentes muestras de agua en las verticales se le midi la temperatura,
el Ph, la conductividad, y se extrajo la muestra para los slidos suspendidos totales, esto se observa
en la figura 5. Luego se prosigui a tomar la muestra de agua de colformes totales. En sta se tuvo
mayor precaucin evitando lo mejor posible que la muestra de agua entrara en contacto con cualquier
superficie y se vieran modificadas sus caractersticas iniciales. A partir del muestreo en una sola
vertical central, se obtuvo la cantidad de agua necesaria para llenar el recipiente para la prueba de
coliformes. Este recipiente fue expuesto al ambiente slo durante el llenado del mismo. Pero antes de
realizar el llenado, se hizo una medicin de oxgeno disuelto a la muestra cuando todava se
encontraba en el muestreador. El procedimiento anterior se repiti durante las dos campaas en los
dos sitios de medicin y, con las muestras tomadas, fue posible la estimacin del coeficiente de
particin.

Figura 7.- Toma de muestra de agua con muestreador


RESULTADOS

Inicialmente se muestran los resultados para las pruebas realizadas a los principales
indicadores del agua en ambos sitios de medicin:

Tabla 1.- Indicadores del Agua medidos en campo


Conductividad
Campaa Sitio Temperatura (C) Ph Oxgeno Disuelto (mg/L)
(S/cm)
1 18.9 6.98 364 1.98
1
2 17.7 6.96 311 2.48
1 17 7.14 314 2.16
2
2 15.4 7.11 289.9 2.39

En la anterior tabla se puede observar que, como se mencionaba previamente en el documento,


las condiciones en las que se hizo la medicin variaron de una campaa a otra. Realizando una
comparacin entre las dos campaas, en trminos generales la temperatura del agua fue menor en la
segunda campaa, el Ph mayor, la conductividad disminuy y el oxgeno disuelto tuvo un
comportamiento distinto entre los sitios de medicin, en el sitio 1 (Puente Vargas) se present un
incremento, mientras que en el sitio 2 (Puente del Comn) disminuy. Por otra parte, al comparar los
sitios de medicin, en la estacin de Puente Vargas se obtiene una mayor temperatura y conductividad
que en el Puente del Comn, y un menor Ph y oxgeno disuelto. Estos determinantes influenciarn en
gran medida las bacterias que fueron obtenidas.

A continuacin se mostrarn los resultados de las pruebas de coliformes totales que son las
ms pertinentes para el presente trabajo:

Figura 8.- Resultados pruebas colifromes totales Figura 9.- Ejemplo de Resultado de una muestra
Tabla 2.- Resultados de las pruebas de coliformes totales en la campaa 1

Campaa Sitio Prueba Dilucin UFC rojas UFC Azules Total UFC/100ml
- Blanco Agua estril - 0 0 0 0
- Blanco Agua Ionizada - 0 0 0 0
- Blanco Solucin Acuosa - 0 0 0 0
1/1000 incontable incontable >200 >200000
Agua Original
1/10000 54 7 61 610000
1/1000 86 13 99 99000
Agua Centrifugada
1/10000 11 2 13 130000
1
1/1000 83 10 93 93000
Replica Agua Centrifugada
1/10000 10 4 14 140000
1 1/1000 incontable incontable >200 >200000
Sedimento
1/10000 41 13 54 540000
1/1000 incontable incontable >200 >200000
Agua Original
1/10000 51 15 66 660000
1/1000 76 22 98 98000
Agua Centrifugada
1/10000 6 3 9 90000
2
1/1000 81 17 98 98000
Replica Agua Centrifugada
1/10000 6 5 11 110000
1/1000 incontable incontable >200 >200000
Sedimento
1/10000 38 7 45 450000

Tabla 3.- Resultados de las pruebas de coliformes totales en la campaa 2

Campaa Sitio Prueba Dilucin Colonias rojas Colonias Azules Total UFC/100ml
- Blanco Agua Ionizada - 0 0 0 0
- Blanco Solucin Acuosa - 0 0 0 0
1/1000 149 37 186 186000
1/5000 26 4 30 150000
Agua Original 1/10000 14 1 15 150000
1 1/1000 10 11 21 21000
Agua Centrifugada
1/10000 1 3 4 40000
1/5000 33 3 36 180000
2 Sedimento
1/10000 7 0 7 70000
1/1000 213 63 276 276000
1/5000 45 7 52 260000
Agua Original 1/10000 21 7 28 280000
2 1/1000 13 10 23 23000
Agua Centrifugada
1/10000 2 1 3 30000
1/5000 21 4 25 125000
Sedimento
1/10000 9 3 12 120000

En los resultados se puede observar que se realizaron diferentes diluciones para cada una de
las pruebas. Adems, se realizaron pruebas Blanco para garantizar que el agua utilizada en las
diluciones no influyera en los resultados. Adicionalmente se realizaron algunas replicas en la primera
campaa a fin de observar el comportamiento de la prueba de filtracin por membrana. Como se
observa en las tablas 2 y 3 los ensayos mencionados fueron satisfactorios. Como se realizaron pruebas
a partir de diferentes diluciones sobre la misma muestra de agua, se utiliz el promedio de los
resultados obtenidos en aquellas realizadas sobre el mismo componente para obtener un valor nico
de la siguiente manera:
Tabla 4.- Comparacin de los coliformes totales obtenidos directamente en el agua y a travs de la separacin de sus
componentes en la campaa 1
Promedio
Promedio Agua Promedio Agua Original
Campaa Sitio Sedimento Suma (UFC/100ml) % diferencia
Centrifugada (UFC/100ml) (UFC/100ml)
(UFC/100ml)
1 115500 540000 655500 610000 7.46%
1
2 99000 450000 549000 660000 16.82%

Tabla 5.- Comparacin de los coliformes totales obtenidos directamente en el agua y a travs de la separacin de sus
componentes en la campaa 2
Promedio
Promedio Agua Promedio Agua Original
Campaa Sitio Sedimento Suma (UFC/100ml) % diferencia
Centrifugada (UFC/100ml) (UFC/100ml)
(UFC/100ml)
1 30500 125000 155500 162000 4.01%
2
2 26500 122500 149000 272000 45.22%

Como se puede observar en las tablas 4 y 5, la separacin de las bacterias en el agua sin slidos
y en los sedimentos ocurri, en general, de manera adecuada. Se obtienen dos valores dentro del 10%
del total, una cerca del 15%, y una alejada del 45%. Es importante mencionar que estas pruebas tienen
una gran variabilidad, y los resultados obtenidos fueron muy acertados. La metodologa a travs de
la centrifuga con una velocidad baja de revoluciones por minuto, funcion de manera correcta. Slo
en una de las cuatro pruebas se encontr un resultado incoherente y se establece una efectividad del
75%.
En cuanto a la cantidad de bacterias encontradas se encuentra que en la campaa 1 se obtienen
valores aproximadamente en un rango de 550000-650000 UFC/100ml y en la campaa 2 un rango de
150000-250000 UFC/100ml. Esto pudo ser causado por diferentes factores, pero principalmente se
cree que las condiciones cambiantes del agua influyeron en gran magnitud. El hecho de que en ambos
sitios de medicin se dieran concentraciones de coliformes similares, es un buen indicio de la
medicin, pues como se mencion prevamente, en los 13 km de separacin entre estos puntos, no
existen vertimientos naturales ni antropognicos, slo aquellas fuentes difusas. Otro indicativo de que
se realiz una buena estimacin de los coliformes totales, es que al compararlo con los datos medidos
en el 2010 por el estudio realizado por la EAAB en conjunto con la Universidad Nacional en la
estacin Puente Vargas y en el Puente del Comn, se encuentra que los valores obtenidos se
encuentran dentro de los rangos establecidos (EAAB-Universidad Nacional de Colombia, 2010).
Por otro lado, en cuanto a la estimacin Kd, se obtuvieron los siguientes resultados a partir
de la divisin de los coliformes totales y su medicin independiente. El Kd se encontr a partir de la
ecuacin 8 y la Fp con la ecuacin 10.

Tabla 6.- Estimacin de Kd para la campaa 1


m
Campaa Sitio Nw (UFC/100ml) Np (UFC/100ml) Slidos suspendidos Kd (L/mg) Kd(m3/g) Fp
totales (mg/L)
1 115500 540000 29.5 0.158 0.158 0.824
1
2 99000 450000 25 0.182 0.182 0.820

Tabla7.- Estimacin de Kd para la campaa 2


m
Np
Campaa Sitio Nw (UFC/100ml) Slidos suspendidos Kd (L/mg) Kd(m3/g) Fp
(UFC/100ml)
totales (mg/L)
1 30500 125000 25.5 0.161 0.161 0.804
2
2 26500 122500 23.5 0.197 0.197 0.822

En las tablas 6 y 7 se puede evidenciar que aun cuando la suma de los microorganismos
atrapados en las partculas con aquellos libres en el agua discrepan de las contabilizadas en el agua
original, aparentemente la estimacin de Kd contina siendo realizado de manera correcta. Los
valores de Kd fueron muy similares en ambos sitios de medicin, durante ambas campaas.

Tabla 8.- Comparacin valores de Kd obtenidos en las diferentes campaas

Sitio Kd Campaa 1 (m3/g) Kd Campaa 2 (m3/g) % diferencia

1 0.158 0.161 1.41%


2 0.182 0.197 8.19%

Con ambos valores dentro de un 10%, se encuentra que la metodologa tuvo buena efectividad.
Incluso este parmetro no debera permanecer constante, pues est modificado por la cantidad de
slidos suspendidos. Al haber encontrado valores de SST menores durante la segunda campaa, hizo
que los coeficientes de particin se incrementaran. Por otro lado el valor de Fp que se mantuvo
constante en ambos sitios con cerca del 80%.
Cuando se realiza una comparacin con valores en la literatura, se encuentra que en el mismo
coeficiente de particin en sustancias como metales pesados (Cd, Cu, Pb, Zn), se tiene un rango de
valores entre 0.01-0.1 m3/g (Thomann & Mueller, 1987). Cuando se realiza una comparacin con
valores en la literatura, se encuentra que en el mismo coeficiente de particin en sustancias como
metales pesados (Cd, Cu, Pb, Zn), se tiene un rango de valores entre 0.01-0.1 m3/g (Thomann &
Mueller, 1987). Esto indica que, en cuanto al orden de magnitud se es acertado y muestra que las
coliformes totales tienen mayor tendencia a adherirse a los slidos que otros contaminantes.

CONCLUISIONES Y RECOMENDACIONES

El principal objetivo del presente trabajo era la formulacin de una metodologa que tuviera
la capacidad de estimar experimentalmente el coeficiente de particin de coliformes totales en
cuerpos de agua superficial. La efectividad del ensayo resida en que se pudieran separar los
sedimentos del agua sin desprendimiento de microorganismos y, al cuantificarlos, se obtuvieran
valores similares a la totalidad de ellos. La eficacia tambin dependa de qu tan acertado fuera el
valor de Kd, y qu tan cercano se encontraba de valores del mismo coeficiente en diferentes tipos de
qumicos. Ambas caractersticas fueron efectivamente corroboradas con los resultados obtenidos. La
metodologa tuvo un buen desempeo pues al realizar la divisin de las coliformes entre las partculas
slidas y el agua sin sedimentos, se comprob que efectivamente se separaban adecuadamente en sus
componentes. De las cuatro pruebas, dos tuvieron una diferencia menor al 10%, una menor al 20% y
slo una de las cuatro pruebas realizadas, represent un valor que se considera fuera del nivel de
tolerancia. Esto implica una efectividad del 75% para la metodologa propuesta.
De la misma forma, ya que la experimentacin fue adecuada, era de esperarse que los valores
obtenidos para el coeficiente de particin tambin lo fueran. Se encontraron valores en un rango de
0.15-0.2 m3/g. stos se encuentran dentro del orden de magnitud del coeficiente al compararlo con
contaminantes, lo cual es un indicio de que la estimacin fue correcta. Adems, los Kd obtenidos
fueron consistentes en las dos campaas realizadas en cada sitio de medicin. Por otro lado, al calcular
la fraccin adsorbida de bacterias en los sedimentos (Fp), se encontr que este atributo fue muy
constante. Aunque en las pruebas realizadas existieran condiciones variables, se encontraron valores
cercanos entre s en un rango de 0.8-0.83. Lo anterior demuestra que la metodologa propuesta y los
Kd obtenidos son coherentes y se tuvo una buena efectividad.
Es importante mencionar que las pruebas de coliformes presentan una gran variabilidad.
Existen una gran cantidad de factores que pueden afectar la medicin: la contaminacin externa de
las muestras, la incertidumbre en s asociada a la prueba de filtracin por membrana y a la
probabilidad que la porcin de agua utilizada para las pruebas, efectivamente sea una buena
representacin de su totalidad. Al realizar diluciones tambin es posible que se realicen errores.
Los resultados obtenidos muestran que la metodologa propuesta tiene la capacidad de medir
correctamente el coeficiente de particin. Esto se logr a partir del buen manejo y manipulacin de
las muestras, procediendo con gran cautela y precisin para evitar posibles fallas en la cuantificacin.
Es necesario que ni las muestras de agua ni sus contenedores, estn expuestos a la intemperie ms
que el tiempo obligatorio.
La eficacia del procedimiento propuesto reside en la capacidad de mantener las muestras en
condiciones, en la mayor medida posible, similares a las encontradas en el sitio de medicin. Esto se
alcanza por medio de la utilizacin de equipo y recipientes estriles en todo momento, la buena
aplicacin de la toma de muestras y su conservacin hasta el sitio de experimentacin con buena
refrigeracin. Tambin es importante llevar a cabo procedimientos de cuantificacin de SST y
Coliformes totales estandarizados. Si no se tiene el conocimiento suficiente para realizar este tipo de
metodologas de manera independiente, mandar a realizar las pruebas en laboratorios especializados
es lo ms conveniente, pues en estos los resultados que sean entregados estarn certificados.

REFERENCIAS

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de Colombia, Departamento de Ingeniera Civil y Agrcola, Bogot.
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Thomann, R. V., & Mueller, J. A. (1987). Principles of Surface Water Quality Modeling and
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