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DETERMINACION Y PRESENCIA DE MICROORGANISMOS FECALES

(COLIFORMES Y ENTEROCOCOS) EN AGUAS DE RIEGO AGRICOLA
DEL DISTRITO DE SANTA MARIA.

El distrito santa María perteneciente a provincia de Huaura, región Lima. Es uno de los distritos
que utiliza el agua de río para realizar el riego agrícola, basándonos en investigaciones
anteriores en las cuales se determinaron que las aguas de río empleadas para el riego agrícola
presentaban presencia de microorganismos fecales y parásitos. Nuestra investigación se basa
en la determinación de microrganismos fecales en aguas de riego agrícola (vegetales de tallo
corto), ya que estos cultivos están destinados al consumo de los pobladores del distrito de Santa
María.

MATERIALES Y MÉTODOS

LUGAR DE ESTUDIO:

El presente estudio se realizara en un periodo que abarcara desde mayo del 2016 a julio del
2016. Se investigarán 10 tipos de muestras de aguas de riego agrícola. Los muestreos se
llevaron a cabo en el distrito de Santa María.

El estudio bacteriológico se realizara en el Laboratorio de Microbiología de los
alimentos de la Facultad de Bromatología y Nutrición de La Universidad
Nacional
José Faustino Sánchez Carrión, Huacho, región Lima.

ENSAYOS MICROBIOLÓGICOS

En el presente estudio se llevarán a cabo las siguientes determinaciones
Microbiológicas.

 Cuantificación de coliformes fecales.

 Detección y recuento de microorganismos fecales.

 Aislamiento e identificación de coliformes y enterococos.

MUESTREO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS

El muestreo se realizara en horas de la mañana, por ser la hora en que se
realiza el regado con aguas de regadíos. La unidad de muestra será las aguas
de regadíos, tomándose en cada punto (tres muestras), una muestra de cada
regadío de distintos lugares de en estudio.
Las muestras serán colocadas en frascos esterilizados de primer uso, tal como
son se recolecta y transportadas en un culer al Laboratorio de Microbiología
de los alimentos de la Facultad de Bromatología y Nutrición de La Universidad
Nacional José Faustino Sánchez Carrión, Huacho, región Lima.

ENSAYOS MICROBIOLÓGICOS

1º C. 0. . y se les incubó a 35 – 37º C. obteniéndose la dilución 10-2. obteniéndose la dilución 10-1 De ésta. utilizándose 3 tubos por cada dilución. III) DETERMINACIÓN DE COLIFORMES FECALES Se inoculó un asa de cada tubo CLVBB seleccionado. se realizó la prueba del indol en el agua de peptona y se observó si los tubos de CLVBB presentaron gas. ICSMF. Después de 24 horas.En el presente estudio se llevaran a cabo las siguientes determinaciones microbiológicas: • Cuantificación de coliformes fecales. se anotaron los tubos que mostraron producción de gas y quedaron seleccionados para la determinación de coliformes fecales (CF). repitiéndose esta observación a las 48 horas de incubación. P.1% (A. • Detección y recuento de coliforme: Técnica del Número Más Probable (NMP). se extrajo 1 ml y se transfirió a un tubo que contenía 9 ml de A. 1999) I) PREPARACIÓN DE DILUCIONES Se pesaran 10 g representativos de la muestra de vegetal y se homogenizara con 90 ml de agua peptonada al 0. Pasadas 24 horas. -3 II) RECUENTO DE COLIFORMES Se inoculó 1 ml de cada dilución en tubos de caldo lactosa bilis (2%) verde brillante (CLVBB). De la misma manera. incubado a 35 – 37º C durante 24 horas.1%). Aquellos tubos gas positivo luego de 48 horas de incubación también fueron considerados. La presencia de coliformes se manifestó por colonias de color rojo oscuro y con diámetro mayor a 5 mm. Se calculó el NMP con el número de tubos positivos por dilución y la tabla respectiva (Apéndice 3). 0. TÉCNICA DEL NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP) PARA RECUENTO DE COLIFORMES PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE COLIFORMES (MÉTODO 3. P. Se anotó el número de tubos confirmados en cada dilución como positivos de coliformes y se calculó el NMP de coliformes (Apéndice 3). en un tubo de CLVBB y en otro de agua de peptona y se les incubó a 44 ± 0.1%. se obtuvo la dilución 10 . Los tubos CLVBB seleccionados fueron confirmados mediante la siembra en agar bilis lactosa rojo neutro cristal violeta (VRBA).

6 ml de la solución de naftol y 0. se tiñó una extensión por el método de Gram para confirmar la presencia de bacilos Gram negativos no esporulados. para ser incubados a 35 – 37º C durante 24 horas. por picadura en la columna de agar y por estría en la superficie inclinada. Luego de 48 horas de incubación. D) Prueba de Voges-Proskauer Se inocularon tubos de caldo glucosa tamponado y se incubaron a 35 –37º C. gas e indol positivos. la aparición de un color rojo oscuro en la superficie de la capa de alcohol amílico indicó un resultado positivo. IV) PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN DE COLIFORMES (IMVIC) A) Técnica para el aislamiento y purificación de cultivos Se sembró un asa de cada tubo de CLVBB gas positivo a coliformes fecales en placas de agar eosina azul de metileno. Luego de 24 horas de incubación. se añadió a cada tubo 0. y partir de cultivos de 24 horas en agar nutritivo inclinado se inocularon los medios IMViC. se seleccionaron colonias individuales y se sembraron cada una en agar nutritivo inclinado y en caldo lactosado. Al cabo de 10 minutos. Se agitaron los tubos y se dejaron en reposo durante 2 a 4 horas.2 – 0. E) Prueba del Citrato Sódico Se sembraron tubos de agar citrato de Simmons. Pasadas las 24 horas. con o sin brillo metálico) de cada placa y se resembró en una placa de agar nutritivo. Pasadas las 24 horas. _ B) Prueba del Indol Se inocularon tubos de caldo triptona o de agua de peptona y se incubaron a 35 – 37º C. C) Prueba del Rojo de Metilo Se inocularon tubos de caldo glucosa tamponado y se incubaron a 35 – 37º C durante 5 días. se añadió a cada tubo 5 gotas de la solución de rojo de metilo y se agitó.3 ml del reactivo de Kovacs y se agitó. Pasado ese tiempo. Luego de ser incubados a 35 – 37º .Los cultivos que resultaron simultáneamente. La aparición de un color rosa a carmesí se anotó como prueba positiva. se añadió a cada tubo 0.2 ml de la solución de hidróxido potásico. se tomó una colonia representativa (nucleada. A partir de los cultivos gas positivos en caldo lactosado. Se anotaron los tubos positivos por dilución y se determinó el NMP de coliformes fecales (Apéndice 3). se consideraron como coliformes fecales. para ser incubada a 35 – 37º C. Se anotó como positivo cuando apareció un color rojo bien definido y como negativo si el color fue amarillo. para ser incubadas a 35 – 37º C.

neumáticos. el cual fue visible por el cambio del color verde claro del medio al azul. El material sólido decantado y flotante se descompone anaeróbicamente por varios meses hasta que se llene para luego ser removidos mecánicamente por camiones municipales o manualmente con baldes. así como para las personas que entran en contacto con el agua del río. los que permiten inferir la presencia de patógenos intestinales. presentes en alimentos que han tenido contacto con aguas contaminadas son: Escherichia coli. Con base en que estos indicadores deben ser cero en el agua para beber y utilizando referencias para cuerpos de agua. La contaminación microbiológica del agua de riego es una de las principales causas que restringen la comercialización de productos cosechados. animales muertos. no siendo segura en el 100% de las muestras ni para actividades recreativas ni aptas para riego agrícola. Enrique Salazar-Sosa3 y Manuel Fortis-Hernández3 (año 2011) en el estudio de indicadores fecales y patogenos en agua descargada al Rio Bravo. bloques o ladrillos. identificaron la calidad microbiológica del agua del Río Bravo. se anotó como reacción positiva si hubo crecimiento. 2003). Es común que letrinas en zonas rurales tengan sistemas de alcantarillado que evacuen las aguas negras en canales de regadío por ser una alternativa fácil y rápida. principalmente para los agricultores que la manejan y en el riego por la contaminación de los productos agrícolas de consumo humano. proveniente de drenes y canales que desembocan en ambos lados de la frontera Juárez. en ambas fronteras se encontró un número mayor del parásito Giardia que de Cryptosporidium. Mónica Serrano- Alamillo1. tarros de pintura. bolsas plásticas. etc. Dentro de los microrganismos más perjudiciales en cuanto a la salud de las personas. con los cuales se creen cámaras donde sedimente los sólidos y ascienda el material flotante. residuos vegetales. Vibrión cholerae. El líquido aclarado fluye por una salida hasta zanjas subterráneas llenas de material poroso en donde se infiltra el líquido y se oxida aeróbicamente.El Paso (región denominada Paso del Norte) mediante la detección de organismos indicadores de contaminación fecal. se pudo deducir la calidad microbiológica. envases de artículos de consumo diario. otros indicadores fueron las bacterias coliformes totales y Escherichia coli. Juan Pedro Flores-Margez1‡. Tipos de contaminación Contaminación por organismos patógenos: La contaminación microbiológica del agua se debe en gran medida a inadecuados sistemas de alcantarillado de zonas rurales y urbanas. construidos fundamentalmente de cemento. La mejor alternativa para evitar esta práctica es la implementación de pozos sépticos.) en canales de regadío arrojados por . asimismo. Jaime Iglesias-Olivas2. y como negativo cuando no lo fue.) e inorgánicos (escombros. Salmonella typhi y Shigella. etc. Eréndira Soto-Mejía1.C durante 48 horas. fundamentalmente hortalizas que crecen a ras de suelo (Martínez L. Actualmente la presencia indiscutible de enteropatógenos en el agua del Río Bravo constituye un riesgo para la salud pública. pañales desechables. Se identificaron y cuantificaron los indicadores fecales Cryptosporidium y Giardia por técnicas de separación inmunomagnética e inmunofluorescencia. Contaminación por basuras Es la presencia de residuos orgánicos (restos de comida. Se observó un número mayor de parásitos y bacterias en las muestras del lado mexicano. el arrojo de animales muertos a cauces y deyecciones animales liberadas a cursos de agua. ANTECEDENTES Según Evangelina Olivas-Enrique .

La contaminación por aceites y grasas para la agricultura genera obstrucción de los filtros de malla o grava en sistemas de riego por goteo. Contaminación por residuos líquidos domiciliarios La liberación difusa y frecuente de aguas grises o servidas (aguas para uso en aseo personal. Algunos desechos liberan compuestos tóxicos. estos residuos no se eliminan durante el retrolavado de los filtros. Una de las soluciones más practicadas para abatir este problema consiste en limpiar los cauces y remover las plantas acuáticas. como las baterías de auto. La contaminación por fosfatos provenientes fundamentalmente de los detergentes provoca un notable aumento del crecimiento y desarrollo de plantas acuáticas dentro de los cauces de aguas lo cual genera un aumento de la altura de agua en los canales. se debe hacer un esfuerzo por fomentar prácticas como el compostaje para el reciclaje orgánico y los residuos inorgánicos depositarlos en basureros municipales. es común que. enterrarlos bajo tierra lejos de los domicilios (Martínez L. deteriorando la imagen de la agricultura local. residuos de comida) genera contaminación del agua por su contenido de aceites y grasas y fosfatos contenidos principalmente en los detergentes. 2003) . caseríos o pueblos por donde circula los canales. Servicios de recolección de basuras en lugares de muy baja densidad poblacional o a grandes distancias de centros poblacionales es prácticamente nula. debido a esta razón. obliga a hacer limpiezas con detergentes y escobillas en los filtros y su frecuencia dependerá del grado de contaminación del agua por estos compuestos. perjudicando cultivos o caminos vecinales. en épocas críticas. lavado de ropa. Aumenta el costo del agua ya que obliga a hacer limpiezas intensas y más frecuentes de los canales. pilas o tarros de pintura. pueden generar estrés hídrico moderado a severo dependiendo del número de días. es instalar un desgrasador a la salida del lavaplatos y limpiarlo cuando este se llene. por lo tanto. 2003). por lo tanto. (Martínez L. La sola presencia de uno de estos compuestos puede dificultar la comercialización de hortalizas producidas en el lugar.habitantes de villorrios. si no existen. lo cual genera un costo adicional por mano de obra además de interrumpirse el suministro de aguas hacia los predios vecinos durante las faenas de limpieza lo cual. La solución a nivel de hogares para disminuir el contenido de grasas en el agua. se produzcan desbordes de agua deteriorando los canales.