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Alvaro Hernández Hernández TABLA DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS MICROBIOLOGÍA INGENIERÍA

EN BIOTECNOLOGÍA UPQROO
Prueba Medio Fundamento Consisten Inocul Condicion Resultados Observaciones
Bioquímica de cia del ación es de
cultivo medio Incubació
n
Fermentación Caldo Utiliza un indicador de ph Líquido Por Tiempo: Positivo: Amarillo *por lo regular las bacterias que
de glúcidos básico con determinado glúcido difusió 24-48 (ácido) fermentan un glúcido son
rojo de que determina si una n, horas Negativo: Rosa-Rojizo anaerobios facultativos.
fenol bacteria ha degradado el inóculo Temperatu (alcalino) *hay ocasiones en el que algunas
mismo en varios denso ra: 35-37 Naranja bacterias necesitan prolongar la
productos terminales. °C incubación 24 horas más (cuando
hay color naranja)
Prueba de Citrato Determina si un mo Sólido Estría Tiempo: Positivo: Crecimiento y *El inóculo debe ser liviano, si es
citrato de puede utilizar citrato inclinado única 24-48 no cambia de color o grande, compuestos orgánicos de
Simmon como única fuente de (pico de en horas azul intenso en pico de la pared celular de bacterias en
s carbono para flauta) superf Temperatu flauta. descomposición pueden liberar
metabolismo y cie del ra: 35-37 Negativo: Sin carbono y nitrógeno como para
crecimiento, provoca pico de °C crecimiento color verde dar falso-positivo.
alcalinidad. flauta
Licuefacción Gelatina Determina la capacidad Semisólido Picadur Tiempo: Positivo: Medio licuado *al término de la incubación el
de gelatina nutritiva de un mo para producir a 18-24 (líquido) tubo debe ser enfriado durante
enzimas proteolíticas vertical horas Negativo: Medio sólido dos horas para determinar
(gelatinasas) (2cm) Temperatu licuefacción
ra: 35-37
°C
Prueba de Leche El tornasol incorporado a Líquido Difusió Tiempo: Rojo rosado: ácido *Formación de coágulo:
leche con tornasol la leche es un indicador n 18-48 (fermentación de Coagulación de la proteína de la
tornasol ada de ph y de óxido horas lactosa) leche
reducción indicando Temperatu Azul purpúreo: sin *Gas, Producción de burbujas en
diversas funciones ra: 35-37 cambio la campana de Durham
metabólicas: °C Azul: Alcalino; no *Ayuda a la diferenciación del
Fermentación de lactosa fermentación, género Clostridium
Reducción del tornasol organismo ataca sust.
Formación de coágulo Nitrogenadas.
Peptonización (digestión) Blanco: Reducción
Formación de gas tornasol
Aclaración de medio:
Digestión
Reducción de Leche El azul metileno: los Líquido Difusió Tiempo: Positivo: Incoloro; *Se utiliza para diferenciar
leche con azul con azul electrones producidos por n, 18-24 reducción enterococos (especies de
de metileno de un sustrato oxidable son inóculo horas Negativo: Azul; no hay Streptococcus del grupo D)
metileno desplazados de su ciclo denso Temperatu reducción.
normal, si hay reductasa, ra: 35-37 °
y reduce el colorante.
Prueba de Básico Determina el Semisólido Picadur Tiempo: 18 Amarillo: ácido * Los bacilos no fermentadores de
fermentación Hugh metabolismo oxidativo o (permite a, - 24 horas Burbujas: Gas crecimiento lento pueden no
y oxidación Leifson, fermentativo de un observació inóculo Temperatu Verde: alcalino producir cambios de color durante
(O/F) O/F glúcido. La diferencia n de poco ra: 35-37° varios días, y especies que son
depende de movilidad) denso. C Oxidativo no particularmente activas sobre
requerimientos de Picar fermentador aminoácidos pueden hacer que

de amoniaco por la pescado) (no Temperatu el cual. que permanece Pseudomonas aeruginosa con un pH alcalino No sacarolítico: Especies de después de la incubación. líquida estériles.6ml de alfa naftol 2) 0. C cobrizo pero aun así la dejar reposar de 10 a 15 minutos Las bacterias que utilizan reacción es negativa. no diferenciar géneros intestinales no el otro se cubre con hasta fermentador entéricos. Moraxella Prueba de Agar Determina la capacidad Sólido en Estría Tiempo: Positivo: Rojo rosado *En muchas especies. . Gram negativos de la aceite mineral o parafna 0. Prueba de Medio Determina la capacidad Líquido Difusió Tiempo: 24 Positivo: Rojo rosado en *Agregar directamente los Voges. otros formadas a partir de la géneros son positivos descarboxilación oxidativa de los retardados aminoácidos en la parte del medio expuesta al aire.6 mm Familia Enterobacteriaceae. ya que la ácidos mixtos que son positivos inversión de incorporación dará insufcientes para Klebsiella pneunoniae. como resultado un débil positivo o disminuir el pH del medio Yersinia enterocolitica falso negativo. 1) 0. es medio otros miembros de las aumentada por las aminas enterobacterias. ente No oxidativo. esta vía producen solo *El orden de adición de los pequeñas cantidades de *Microorganismos reactivos es importante. la acetoína a Temperatu Negativo: Amarillo. los géneros de Familia producen ácidos solo en Micrococcaceae.48 horas la superfcie del medio reactivos al tubo después de la Proskauer y Lubs de producir un producto (presencia de acetoína). Las de * Ayuda a la diferenciación entre bacterias oxidativas fondo. de glucosa. Alvaro Hernández Hernández TABLA DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS MICROBIOLOGÍA INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA UPQROO oxígeno atmosférico y de ambos reacciones ácidas débiles la fosforilación inicial. de Clark de algunos organismos n . necesarios dos tubos de aproxi confundiendo la interpretación . antes de la interpretación. K. No debe de rojo de metilo.2ml de RM/VP) partir de la fermentación ra: 35-37° Puede formarse un color KOH 3) Agitar el tubo suavemente. • Staphylococcus fermentan los mo fermentadores glucosa producen ácidos en * Ayuda a la identifcación de ambos tubos. El medio en madam * Fundamentalmente para un tubo se expone al aire. la reacción Ureasa urea de de un organismo de pico de en pico 18-24 intenso en el pico de positiva de ureasa se detecta Christen desdoblar la urea flauta (cola de horas flauta primero por un cambio de color sen formando dos moléculas de flauta Negativo: Amarillo rojo en la parte de pico de flauta. lo *"Microorganismos excederse un volumen exacto de bastante como para negativos KOH ya que el exceso puede producir un cambio de Escherichia coli ocultar una reacción VP color. Son tubos Fermentador reviertan con el tiempo. ureasa positivos de pequeñas cantidades de urea. cada medio. ureasa produciendo un punció C los organismos Proteus resultado de la degradación de cambio de color rojo en el n). ozaenae débilmente positiva. incubación en el siguiente orden: (caldo fnal neutro. el tubo abierto expuesto • Micrococcus oxida glucosa al oxígeno atmosférico. al principio se vuelve rojo acción de la enzima hacer ra: 35-37° *Se usa para diferenciar porque la acción alcalina. y las Enterobacterias Fermentadoras de bacterias no sacarolíticas glucosa: Escherichia coli son inertes en este Oxidativas de glucosa: medio.

reacciona con los dos. Todas las Enterobacterias. concentración de iones Negativo: Amarillo (pH * Microorganismos positivos hidrógeno hasta alcanzar = 6) ó naranja Escherichia coli cierta concentración y Especies de Yersinia entonces cesa toda *Microorganismos negativos actividad. Adicionar 5 gotas de metilo de Clark metilo se basa en el n 48 horas superfcie del medio (pH al tubo previamente incubado. pero tienen una menor concentración de iones hidrógeno porque hay una reversión hacia la neutralidad debida a la nueva degradación de los ácidos orgánicos en carbonatos. este último proceso llevaría a una lectura falsa – negativa. óxido nítrico u óxido nitroso e hidroxilamina. incubado evitar la descomposición. no han sido reducidos o que han sido reducidos a otros productos. Esto indica una después de menos de 48 horas de manteniendo una alta prueba positiva. Alvaro Hernández Hernández TABLA DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS MICROBIOLOGÍA INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA UPQROO Prueba de rojo Medio La prueba de rojo de Líquido Difusió Tiempo: Positiva: Rojo en la *Rojo de metilo.37 ° Positivo: rosa a rojo nitrato. como amoniaco. La mayoría de los nitritos. Está indicada por denso Temperatu sulfanilico 1 ml. RM/VP) concentración de iones C producir menores *Conservación: Guardar el hidrógeno presentes cantidades de ácido a reactivo en refrigeración (4° C) cuando un organismo partir del sustrato por mientras no se usa. su actividad enzimática. reducen nitratos a nitritos. * Ayuda a la identifcación de Enterobacterias que por lo general son positivas. inóculo Temperatu Hacer rotar * Esta actividad enzimática es con la consiguiente denso. Prueba de Agar Determina la capacidad Sólido en Estría Tiempo: Adicionar Cloruro férrico *Conservación: Guardar los Fenilalanina fenilalan de un organismo de pico de en pico 18-24 10% reactivos en refrigeración y ina desaminar la fenilalanina flauta de horas de 4-5 gotas a un tubo colocarlos en frascos oscuros para en ácido fenilpirúvico por flauta. lo hacen dentro de las 24 cuando el nitrito C intenso Negativo: horas. Por ende. incubación prolongada de hasta 5 nitrato reducir el nitrato en inóculo horas naftilamina 1 ml y Ácido días. Amarillo * Se interpretan los resultados un minuto después de adicionar los reactivos *Una prueba negativa indica que los nitratos. Dado que los reactivos de prueba detectan solo nitritos. organismos capaces de reducir el la aparición de color ra 35 . nitrógeno molecular. 18-24 al tubo: Alfa . es necesario agregar una pequeña cantidad de polvo de zinc a todas las reacciones negativas.4) Algunas Interpretar el resultado del color (caldo de pH para determinar la ra: 35-37° bacterias pueden inmediatamente. Reducción de Caldo Determinar la capacidad Líquido Difusió Tiempo: Adicionar directamente * Raramente es necesaria una nitratos con de un organismo de n. con excepción de ciertos tipos de Enterobacter agglomerans y especies de Erwinia. Enterobacter aerogenes Los organismos RM Enterobacter cloacae negativo también Klebsiella producen ácidos. suavemente el tubo característica de todas las . fermenta glucosa. Las ello es posible que * No debe intentarse interpretar bacterias RM positivas aparezca un color un resultado con el rojo de metilo producen ácidos estables naranja. *Los iones zinc reducen nitratos a nitritos y la aparición de color rojo después del agregado de zinc indica una reacción positiva. incubación. y Lubs empleo de un indicador Temperatu = 4.

capa profunda: ácido y debe ser registrada como tal. Amarillo en pico: capa profunda una condición determinación de posible ácido Amarillo en ácida. degradación puede dar tal cantidad de TSI triple atacar un hidrato de flauta estría aeróbica de precipitado negro de sulfuro azúcar carbono específco en pico Temperatu glucosa. un compuesto metilado produciendo una reacción que van a Positivo: Anillo rojo en la que puede ser el precursor de la visible de color negro y someterse superfcie del medio. junto con la 2. Providencia .24 horas alcalino. la molécula triptófano. Alvaro Hernández Hernández TABLA DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS MICROBIOLOGÍA INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA UPQROO acidez resultante. Producción de gases: llevarán a errores en el . Indica desarrollo de contienen azufre cultivos *Indol escatol. forma H2S es que existe en la AHK) gases.37° para que el crecimiento especies de Proteus y del grupo El aminoácido aromático C se separe. línea de siembra y se 1. Negativo: Amarillo Sulfuro. ya que profunda: alcalina. si es capaz de vertical forma Temperatu Ennegrecimiento del suavemente el tubo Interpretar liberar ácido sulfhídrico vertical ra 35 . Movilidad bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra Agar hierro Agar Determina la capacidad Sólido en Picadur Tiempo: 18 Rojo en pico de flauta: *Una bacteria productora de H2S triple azúcar: hierro de un organismo de pico de a y . Crecimiento 3. Amarillo en ferroso que oculte completamente (agar incorporado en un medio de ra: 35 . flauta °C degradación anaeróbica profunda. deberán Color naranja en la Si el cultivo de 24 horas es además que la ser superfcie del medio. la acidez producida en la capa hierro de de crecimiento básico. con producción o no de de la glucosa. una interpretación prematura o 4. Los organismos la movilidad de algunas ente móviles migran de la bacterias. Sin embargo. Rojo en pico de *Es esencial que se interprete la flauta: alcalino Sin fermentación al término de 18 – cambio de color en capa 24 horas de incubación. aun cuando no se observe.37° medio inmediatamente. por acción enzimática de C Negativo:Sin * Color naranja en la superfcie del los aminoácidos que Los ennegrecimiento medio.37 capa profunda: ácido. 3. 2. ra 35 . La reacción por último la capacidad a pruebas Negativa: No se positiva después de 24 horas de desdoblar el indol de indol produce color Negativa: indica una prueba completa. formación de indol.48 horas Positivo: Kovacs Adicionar 5 gotas y agitar SIM inmóvil. negativo deberá incubarse otras consistencia del medio incubados *Movilidad 24 horas y repetirse la prueba. si se Kligler. ácido sulfhídrico. Producción de H2S: demorada dará formas de precipitado negro fermentación no válidas que 5. indol Medio Determinar si un Semisólido Picadur Tiempo: 24 * Ácido sulfhídrico * Prueba de indol :Reactivo de y movilidad: SIM organismo es móvil o en forma a en .Producción de ácido difunden en el medio sulfhídrico provocando turbiedad. Enterobacterias. Producción de indol Negativa. permite la observación de aeróbicam Positiva. y se usa para fenilalanina sufre una Esperar de 1 a 5 separar estos dos géneros de desaminación oxidativa minutos para leer la otros miembros de las catalizada por un reacción. aminoácido oxidasa para Positiva: Rojo claro a producir el ácido cetónico intenso en el pico de flauta.

K / A (Fermentación de *Pico de flauta alcalino / profundidad alcalina (K/K). para la identifcación primaria de *Pico de flauta ácido / profundidad ácida (A/A). compuesto metilado que puede Microorganismos ornitina positivos Indol ser el precursor de la formación • Especies de Enterobacter Positivo: Anillo rojo en de indol. No fermentación de hidratos de del medio sobre el glucosa solamente) carbono. Alvaro Hernández Hernández TABLA DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS MICROBIOLOGÍA INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA UPQROO Producción de burbujas. K/A= azul de prusia / lila amina. Reacciones de TSI medio. con la No desaminación consiguiente alcalinidad. lactosa no costado del tubo o 2. 3. agrupamiento del género o descomposición del especie. Arizona. Característico de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas aeruginosa. en del medio Adicionar 5 gotas y agitar base de movilidad. Glucosa fermentada. paredes del tubo Movilidad. la forma Temperatu Negativo: Color amarillo suavemente el tubo Interpretar producción de ornitina vertical ra: 35 –37° en el fondo del tubo que inmediatamente. un fnal. Glucosa y lactosa fermentadas. negativo deberá incubarse otras • Enterobacter aglomerans *Movilidad 24 horas y repetirse la prueba. Producción de H2S = El aminoácido L-lisina Ennegrecimiento del sufre la descarboxilación medio Producción de para dar cadaverina y gas = Burbujas o CO2 por acción de la levantamiento del enzima específca medio de cultivo de las lisinadescarboxilasa. coli y grupo Enterobacterias Agar lisina. los miembros de las Característico de coliformes que fermentan lactosa como: E. no fermentada. de descarboxilar un estría. *La reacción positiva después de • Proteus morganii Negativa: No se 24 horas indica una prueba • Yersinia enterocolitica produce color Negativa: completa. Los organismos *Se leen las reacciones de • Proteus rettgeri móviles migran de la movilidad y de ornitina • Yersinia pestis línea de siembra y se descarboxilasa antes de agregar • Yersinia pseudotuberculosis difunden en el medio el reactivo de Kovacs para la provocando turbiedad. *Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (K/A). ligera muesca 1. lactosa dejando un espacio glucosa y lactosa). Citrobacter y algunas especies de Proteus. • Proteus vulgaris Positiva. Característico de bacterias no fermentadoras de lactosa como especies de desplazamiento del glucosa y lactosa) Shigella. medio del fondo. producción de H2S. *Este tipo de pruebas se utilizan y productoras de H2S como: Salmonella. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de .Base de Mide la capacidad Sólido en Por Temperatu K/K = azul de Prusia * La descomposición de los hierro: LIA descarb enzimática de un pico de picadur ra: 35 –37° /azul de Prusia aminoácidos se produce oxilasa organismo para flauta a y C Desaminación anaeróbicamente. A / A (Fermentación de fermentada. • Proteus mirabilis la superfcie del medio. prueba de indol. C puede ser púrpura al *Indica desarrollo de escatol. Microorganismos ornitina negativos Color naranja en la *Si el cultivo de 24 horas es • Especies de Klebsiella superfcie del medio. Característico de bacterias no fermentadoras de lactosa libre. Glucosa fermentada. MIO El medio MIO se utiliza Semisólido Por Tiempo: 24 Ornitina descarboxilasa * Prueba de indol :Reactivo de indol y para la identifcación de en forma picadur – 48 horas Positivo: color púrpura Kovacs ornitina: MIO Enterobacterias sobre la vertical a. Tiempo: 18 oxidativa / Moller aminoácido (lisina y inóculo – 24 horas descarboxilación arginina) para formar una liviano. descarboxilasa y de indol. K / K (No fermentación de *Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (negra) (K/A/H2S). Negativa.

Alvaro Hernández Hernández TABLA DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS MICROBIOLOGÍA INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA UPQROO siembra Oxidasa Los discos contienen oxalato de . • Yersinia pseudotuberculosis . Si se permite que se microorganismo a efervescen acumule resulta letal para la célula probar cia bacteriana. • Klebsiella • Fermentadores de sacarosa: Yersinia enterocolitica. de carbono.En tubo: a partir de Generalmente dentro Positivo: *La prueba debe realizarse dimetil-para-fenilendiamina. • Shigella • No fermentadores de inositol: Proteus morganii. sostenida colonias de agar sangre como uno de los productos fnales del *Cultivo de 18-24 de para evitar falsos metabolismo aerobio de los hidratos horas del burbujas o positivos. * Se recomienda utilizar una y citocromo c. • Yersinia enterocolítica • No fermentadores de salicina: Especies de Corynebacterium. Enterobacteriaceae. una suspensión temperatura ambiente color rojo. (18-24 horas). Klebsiella y grupos Enterobacter. • Edwarsiella • No fermentadores de manitol: Staphylococcus epidermidis. Catalasa *La catalasa es una enzima que *Peroxido de La *Los eritrocitos poseen descompone el peroxido de Hidrogeno al 3% producción cátalasa. en presencia de oxígeno atmosférico estéril. • Escherichia coli • No fermentadores de rafnosa: Otras especies de Aeromonas. se oxida el sustrato disco de OX. "Microorganismos positivos citrato • Fermentadores de manitol: Staphylococcus aureus Especies de: • Fermentadores de inositol: Proteus rettgeri • Salmonella • Fermentadores de lactosa: Neisseria lactamica • Arizona • Fermentadores de adonitol: Providencia alcaligenes. y a observación de utilizando cultivos frescos es el sustrato de la enzima oxidasa. almacenado en rápida y debe evitar tomar El peroxido de Hidrogeno se forma frasco ámbar en frío. • No fermentadores de sacarosa: Otras especies de Yersinia • Fermentadores de glucosa y lactosa: Escherichia coli. pasado los 2 minutos. hacer del minuto. • Pseudomonas cepacia Microorganismos no fermentadores de Carbohidratos: • No fermentadores de lactosa: Enterobacterias patógenas como "Microorganismos negativos citrato Salmonella y Shigella. compuesto de color rojo-fucsia. el cual un cultivo puro. por lo cual se Hidrogeno (H2O2) en agua y oxigeno. constituye *La prueba de la catalasa se usa con una mucha frecuencia para diferenciar reacción miembros de la familia positiva Micrococaceae de miembros de la familia Streptococcaceae.2 ml de se detectan los fucsia en el provengan de medios con enzima oxidasa se evidencian porque agua destilada resultados positivos. plástico o presente en los discos a un debe considerarse disco madera. y que no Los microorganismos que producen la densa en 0. • Serratia licuefaciens • Fermentadores de salicina: Listeria monocytogenes. • Fermentadores de glucosa: Todos los miembros de las • No fermentadores de inulina: Streptococcus del grupo D. solución. Microorganismos fermentadores de carbohidratos: • No fermentadores de adonitol: Providencia stuartii. y agregar un Una reacción lenta. Negativo: el varilla de vidrio. disco y/o azúcares con pH ácido. • Citrobacter • Fermentadores de inulina: Streptococcus salivarius y Streptococcus • Enterobacter sanguis. negativa permanece sin cambio de color.

Alvaro Hernández Hernández TABLA DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS MICROBIOLOGÍA INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA UPQROO • Otras especies de Moraxella • Serratia marcescens • Proteus morganii • Pseudomonas aeruginosa • Especies de Flavobacteriumm "Microorganismos positivos en licuefacción de gelatina "Microorganismos negativos en licuefacción de gelatina • Staphylococcus aureus • Listeria monocytogenes • Staphylococcus epidermidis (lenta) • Serratia liquefaciens .