streptadivina que recubre el pozo y el anticuerpo anti-AFP monoclonal Nota 1: No utilizar los reactivos después de la fecha de vencimiento

Nota 1: no use el sustrato de trabajo si se ve azul.
marcado con biotina agregado en forma exogéna. del Kit. Nota 2: no use reactivos que estén contaminadas o que tengan
Nota 2: Los reactivos abiertos son estables durante sesenta (60) días crecimiento bacteriano.
Al mezclar el anticuerpo marcado con biotina monoclonal, el si se almacenan a una temperatura de 2-8º C. Los reactivos
anticuerpo marcado con enzima y el suero que contiene el antígeno abiertos son estables por 60 días cuando son 9.0 PROCEDIMIENTO DE PRUEBA
nativo, da lugar a una reacción entre el antígeno nativo y los almacenados de 2-8ºC. La estabilidad del kit y los Antes de proceder con el ensayo, permita que todos los
anticuerpos, sin competencia u impedimentos estéricos, para formar componentes son identificados en la etiqueta. reactivos, los sueros de referencia y los controles se encuentren
un complejo soluble tipo sándwich. La interacción se ilustra mediante Nota 3: Los reactivos son para cada uno de los 96 pozos de la a temperatura ambiente (20-27ºC).
la siguiente ecuación: microplaca. **La prueba puede ser procesada por personal experto o por un
Ka profesional entrenado**
Enz
Ac + Ag AFP+ Btn Ac (m) Enz
Ac-Ag. AFP - BtnAc(m) 4.1 Elementos requeridos que no se suministran:
K-a 1. Pipeta (s) útil para dispensar volumenes de 25µl, 50µl, con una 1. Marcar los pozos de microplacas para cada calibrador, control y
precisión superior a 1.5%. muestra de paciente para ser procesados por duplicado.
2. Dispensador(es) para las distribuciones repetidas de 0.100 ml y Colocar las tiras no utilizadas nuevamente en la bolsa de
Btn
Ac (m)=Anticuerpo monoclonal marcado con biotina (cantidad en 0.350ml con una precisión superior al 1.5%. aluminio, sellar y almacenarlo de 2-8ºC.
exceso) 3. Lavador de microplacas o frasco lavador (opcional). 2. Pipetear 0.025 ml (25μl) del suero de referencia apropiado,
4. Lector de microplaca con capacidad de absorbancia de 450nm a control o muestra dentro del pozo asignado.
Ag AFP =Antígeno nativo (cantidad variable) 620nm. 3. Adicionar 0.100ml (100µl) de solución de reactivo anti-AFP
5. Papel absorbente para borrar los pozos de la microplaca. enzima a todos los pozos.
Enz
Ac= Anticuerpo marcado de enzima (cantidad en exceso) 6. Envoltura plástica o cubiertas de microplacas para los procesos 4. Agite suavemente la microplaca ligeramente por 20-30 segundos
de incubación para mezclar y cúbrala.
Enz
Ac–AgCEA- BtnAc (m)=Complejo en sándwich antígeno-anticuerpos 7. Aspirador al vacío o vacuo (opcional) para los pasos del lavado. 5. Incube 60 minutos a temperatura ambiente.
8. Cronómetro 6. Descarte los contenidos de la microplaca por decantación o
Sistema de Prueba Alfa- Fetoproteína Ka = Tasa Constante de Asociación 9. Materiales de control de calidad. aspiración. Si decanta, seque la placa con papel absorbente.
7. Adicione 350μl de buffer de lavado (ver Sección Preparación de
(AFP) K-a = Tasa Constante de Disociación Reactivos), decante (golpee y seque) o aspire. Repita 2 veces
Código del producto: 1925-300 5.0 PRECAUCIONES
Para uso Diagnóstico in Vitro
adicionales para un total de 3 lavados. Un lavador de placa
automático o manual puede ser usado. Siga las
Simultáneamente, el complejo es depositado en el pozo a través de la No para uso externo o interno en humanos o animales instrucciones del fabricante para el uso apropiado. Si se
1.0 INTRODUCCIÓN reacción de alta afinidad de la estreptavidina y el anticuerpo marcado Todos los productos que contienen suero humano han sido hallados emplea la botella de lavado, llene cada pozo presionándola
con biotina. Esta interacción se ilustra a continuación: no reactivos para antígeno de superficie de hepatitis B, VIH 1 y 2 y (evitar la formación de burbujas). Decante el lavado y repita
Uso: Determinación cuantitativa de la concentración de Alfa- anticuerpos HCV según pruebas exigidas por la FDA. Ninguna prueba 2 veces adicionales.
Enz
Fetoproteína (AFP) en suero humano mediante el inmunoensayo Ac-Ag AFP –BtnAc+ Estreptavidina (m) C.W . Complejo Inmovilizado puede asegurar completamente la ausencia de agentes infecciosos, 8. Adicione 0.100 ml (100μl) de solución sustrato de trabajo a cada
enzimométrico de microplacas. Todos los productos de suero humano deben manipularse como pozo (Consultar la sección sobre Preparación de Reactivo).
. Estreptavidina CW = estreptavidina inmovilizado en pozo potencialmente peligrosos y con capacidad de transmitir Adicionar los reactivos siempre en el mismo orden para
enfermedades. Las buenas practicas de laboratorio para el manejo de minimizar las diferencias en tiempos de reacción entre los
Complejo inmovilizado= complejo en sándwich enlazado al pozo. productos sanguíneos pueden ser encontrados en el Centro de pozos.
2.0 RESUMEN Y EXPLICACION DE LA PRUEBA Control de Enfermedades/ Instituto Nacional de Salud, “Bioseguridad
Después de lograr el equilibrio, la fracción anticuerpo unido se separa en Laboratorios Microbiológicos y Biomédicos”, 2da Edición, 1988, NO AGITAR LA MICROPLACA DESPUES DE ADICIONAR El
del antígeno no ligado mediante decantación o aspiración. La HHS Publicación Nº (CDC) 88-8395. SUBSTRAT0
La alfa-feto proteína (AFP) es una glico-proteína con peso molécular
actividad enzimática en la fracción de anticuerpo unido será 9. Incube a temperatura ambiente por 15 minutos.
de 70kDa. La AFP se produce normalmente durante el desarrollo fetal
por los hepatocitos, saco embrionario, y en menor grado por el tracto directamente proporcional a la concentración del antígeno nativo. Al La eliminación segura de los componentes del kit debe ser 10. Adicione 0.050 ml (50μl) de solución de parada para cada pozo
utilizar varias referencias de sueros de valores conocidos de acorde con los requerimientos estatutarios y de regulación. mezcle ligeramente por 15-20 segundos. Siempre adicione
gastrointestinal. Las concentraciones en suero alcanzan un nivel pico
antígenos, se genera una curva de dosis respuesta a partir de la cual reactivos en el mismo orden para minimizar las diferencias
hasta de 10mg/ml a las 12 semanas de gestación (1). Este nivel se
se evalúa la concentración de antígeno de una muestra desconocida. 6.0 RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS del tiempo de reacción entre los pozos.
disminuye gradualmente a menos de 25ng/ml después de un año del
parto. De allí en adelante, los niveles se reducen a menos de 10 Se deben emplear las precauciones en la recolección de muestras 11. Leer la absorbancia en cada pozo de cada pocillo a 450 nm
ng/ml. por punción venosa para las muestras de suero o sangre. La muestra (usando una longitud de referencia de 620-630 nm para
4.0 REACTIVOS de suero debe tomarse en la mañana para obtener unos resultados minimizar las imperfecciones del pocillo) en un lector de
exactos. La sangre se recolecta por punción venosa en un tubo tapa microplaca. Los resultados serán leídos dentro de los 30
Elevados niveles de FP se encuentran en pacientes con hepatoma
Materiales Proporcionados: roja sin aditivos o barrera de gel. Permitir que la sangre coagule. minutos de adicionar la solución de parada.
primario y tumores germinales derivados del embrionario. La AFP es
A. Alfafetoproteína (AFP) – 1ml/vial- Iconos A- F Centrifugue la muestra para separar el suero de las células.
el marcador mas útil para el diagnostico y manejo de carcinoma
Seis (6) viales de antígeno CEA de referencia en los niveles de 10. 0 CALCULO DE RESULTADOS
hepatocelular (2).
0 (A), 5 (B), 25 (C), 50 (D) 250 (E) y 500(F) ng/ml. Almacenar Las muestras pueden ser refrigeradas de 2-8ºC por un período
de 2-8ºC. Se agrega preservante máximo de 48 horas. Si la muestra no puede ser ensayada dentro de Una curva dosis respuesta es usada para hallar la concentración
La AFP se también eleva en mujeres embarazadas. La presencia de
concentraciones anormalmente altas de AFP en mujeres Nota: Los estándares, basados en suero humano, se calibraron este tiempo, la muestra puede ser almacenada a temperatura de AFP en muestras desconocidas.
embarazadas proporciona un marcador de riesgo para el síndrome de utilizando una preparación de referencia, la cual fue probada -20ºC por hasta 30 días. Evitar los ciclos de congelación y
Down (3). contra la primera preparación internacional de referencia WHO descongelación repetitivos. Cuando ensayamos en duplicado, se 1. Registrar la absorbancia obtenida del listado del lector de
1st IRP#72/225. requiere 0.100ml de la muestra. microplacas como se indica en el Ejemplo 1.
En este método el calibrador AFP, muestra del paciente o el control E 2. Graficar la absorbancia para cada calibrador en duplicado vs
B. Reactivo enzimático AFP- 13 ml/ vial – icono 7.0 CONTROL DE CALIDAD la concentración correspondiente AFP en ng/ml en papel lineal
son adicionadas en primer término a un pozo recubierto con
streptavidina. Los anticuerpos monoclonales marcado con biotina y Un (1) vial que contiene anticuerpo marcado con enzima, IgG de de gráficos (no promediar los duplicados de los calibradores
Cada laboratorio debe analizar controles externos a niveles en los
los marcados con enzimas (dirigidos contra epítopes claramente rata monoclonal y marcado con biotina, en buffer, colorante y antes de graficar).
rangos de hipotiroides, eutiroides e hipertiroide para monitorear el
diferenciados de AFP) son adicionados y los reactantes mezclados. preservantes. Almacenar de 2-8º C. 3. Sacar la mejor curva de ajustes a través de los puntos de la
desempeño de los ensayos. Estos controles deben ser tratados como
La reacción entre los diversos anticuerpos AFP y el AFP nativo grafica).
desconocidos y los valores determinados en cada procedimiento de
forman un complejo en sándwich que se une con el pozo recubierta C. Placa recubierta con estreptavidina – 96 pozos– Icono 4. Para determinar la concentración de AFP para una muestra
prueba realizada. Se mantendrán gráficos de control de calidad para
de streptavidina. Después de completar el periodo requerido de Un micro placa de 96 pozos recubiertos con estreptavidina y desconocida, localizar la absorbancia promedio de esta sobre
hacerle un seguimiento al desempeño de los reactivos suministrados.
empacada en bolsa de aluminio con agente desecante. eje vertical del grafico, encontrar el punto de intersección
incubación, el conjugado enlazado con el anticuerpo enzima- AFP se Se deberán utilizar métodos estadísticos pertinentes para evaluar las
separa del conjugado no enlazado enzima -AFP mediante aspiración Almacenar de 2-8º C. sobre la curva y leer la concentración (enng/ml) a partir del eje
tendencias. Los laboratorios en particular deberán establecer límites
horizontal del grafico (los duplicados de valores desconocidos
o decantación. La actividad de la enzima presente en la superficie del aceptables de desempeño de los ensayos. Adicionalmente, la
D. Concentrado de solución de lavado – 20 ml- Icono pueden ser promediados como está indicado). En el siguiente
pozo se cuantifica mediante reacción con un sustrato adecuado para intensidad máxima de luz deberá ser consistente con lo registrado
Un (1) vial que contiene un surfactante en solución salina ejemplo, la absorbancia promedio (0.420) intercepta con la
producir color. anteriormente. Una desviación significativa a partir de los datos
amortiguada. Un preservante fue adicionado. Almacenar de 2- curva estándar A (33.2 ng/ml) de concentración AFP (Ver
establecidos de desempeño puede indicar que hay cambios no
El empleo de varias referencias de suero de niveles conocidos de 8ºC. Figura 1).
perceptibles en condiciones experimentales o degradación de los
antígenos alfa- fetoproteínas (AFP) permite la construcción de una reactivos del kit. Los reactivos frescos serán usados para determinar
E. Sustrato A– 7 ml/vial- Icono SA
curva de dosis respuesta con respecto de su actividad y la razón para las variaciones. NOTA 1: el software reducción de datos de computadoras diseñadas
concentración. A partir de la comparación con la curva de dosis Una (1) botella que contiene tetrametil benzidina (TMB) en
. para (ELISA) también puede ser utilizados para la reducción de
respuesta, se puede correlacionar la actividad de una muestra solución amortiguadora. Almacenar de 2-8ºC.
datos. Si tal software es utilizado, la variación del software debe
desconocida con la concentración AFP. 8.0 PREPARACION DE LOS REACTIVOS ser comprobada
F. Sustrato B – 7 ml/vial- Icono SB
3.0 PRINCIPIO Una (1) botella que contiene Peroxido de Hidrógeno (H2O2) en
1. Tampón de Lavado
solución amortiguadora. Almacenar de 2-8ºC.
Diluir el contenido de concentrado de lavado en 1000 ml con
Inmunoensayo enzimométrico (TIPO 3) STOP agua destilada o desionizada en un recipiente adecuado de
G. Solución de parada – 8ml/vial – Icono
almacenamiento. Almacenar de 2-30ºC hasta por 60 días.
Los reactivos esenciales requeridos para un inmunoensayo Una (1) botella que contiene un ácido fuerte (1N HCL).
2. Solución de Substrato de Trabajo
Almacenar de 2-30ºC.
enzimométrico incluyen anticuerpos altamente afines y específicos Vierta el contenido del vial ámbar marcado como solución “A”
(enzima e inmovilizados), con reconocimiento de epítopes claramente dentro del vial claro marcado como solución “B”. Ubique la tapa
H. Instrucciones del Producto
diferenciados, en exceso, con antígenos nativos. De acuerdo con este amarilla al vial claro para fácil identificación. Mezcle e
procedimiento, la inmovilización tiene lugar durante el ensayo en la identifique según corresponda. Almacenar de 2-8º C.
superficie de los pocillos de la microplaca a través de la interacción de

la Tres preparaciones distintas de lotes de los reactivos AFP AccuBindTM cual es terminada mediante la adición de la solución de parada.427 El sistema de ensayo AFP AccuBindTM Microplaca se comparo con B) 1(13ml) 2 (13 ml) Paciente 0. Los niveles de AFP se encuentran elevados en ecuación de regresión de mínimos cuadrados y el coeficiente de una serie de enfermedades benignas y ciertas condiciones correlación indica que hay una excelente concordancia entre los incluyendo embarazo y enfermedades hepáticas no malignas métodos. Ácido ascórbico ND 100µg/ml Hombres y mujeres <8. precisión del método en las manos del analista.335 25 98/79/EC de la marca CE.7 226. Li D.420 33.5ng/ml (4). particularmente si los resultados biológicas provenientes de concentraciones normales y elevadas.100 * Medido en 30 experimentos en duplicado Cal B 0.24 4.V. Cualquier desviación 4. 14. los controles adecuados preparada con cada ensayo.1 Precisión 6.43 11. to isoforms. “AFP. Se Por lo tanto el sustrato y solución de parada deben ser 14. los valores AFP entre 100-350 ng/ml 3.0 ANALISIS DE RIESGOS TABLA 1 acetilsalicílico ND Valores Esperados para el Sistema de Prueba AFP AccuBind TM Ametopterina ND 100µg/ml El MSDS y Forma de Análisis de Riesgo para este producto está ELISA disponible en la solicitud de Monoblind Inc. AccubindTM ELISA se determinaron mediante análisis de tres niveles concentraciones hasta de 10.V. Los resultados de laboratorio por si solos son únicamente un F2 0. 45. El número total de estas muestras fue de 2. 14. 14. La adición de la solución sustrato inicia una reacción cinética.3 Exactitud: A) 1ml set 1ml set entrenados. 1755-61 (1980).2 2. Los lectores de placa realizan mediciones verticalmente.000 ng/ml ni dentro de un sistema de 7. Si los kits de prueba están alterados.3 carcinoma’. La sensibilidad fue hallada por la determinación de la variabilidad del suero calibrador “0 A2 2. Usar los componentes del mismo lote no mezclar los reactivo de 15.005 Cat #: 1925-300 Cal E 1. Muestras pacientes con concentraciones de AFP mayores a 500 Precisión Intra-Ensayo (Valores en ng/dl) 1. (2001). ya sea por mezcla de con el método de referencia. pueden ser solicitados vía Email: G1 0.5 6. El AFP posee una baja sensibilidad y especificidad clínicas (Y) 6. Se . es necesario que los valores de predicción para los calibradores se Este 6. C2 2. epitopes and conformational variants’ Exp Biol Med. La ecuación de E) 1 (7ml) 2 (7ml) 3.4 Especificidad Con el fin de validar los resultados del análisis se deben seguir 13.011 0 12. regulaciones y leyes de MUESTRA N X σ C. Clin Chem Acta.2 Interpretación ng/ml” usando 2σ estadísticas (95% de certeza) para calcular la B2 1.336 14.0 µg/ml reproducibles. de la región donde le laboratorio se encuentra localizado. de control se presentan en las Tablas 2 y 3. 445 ng/ml pueden ser diluidas (por ejemplo 1/10 o mayor) con MUESTRA N X σ C.011 lectores. suero normal de hombres (AFP <10 ng/ml) y analizadas Nivel 1 24 14. Stockton Press p400-02.333 El sistema de ensayo AFP AccuBindTM ELISA presenta una elaborados por Monobind.43 como marcador tumoral. TABLA 3 EJEMPLO 1 11.978 ubiquen dentro del 10% de las concentraciones asignadas. 11.0 REFERENCIAS diferentes lotes. Es importante que el tiempo de reacción en cada pozo se Es importante tener encuenta que el establecimiento de un rango de CEA ND 10µg/ml mantenido en forma constante para obtener resultados valores esperados.71 0. Williams R.000 ng/ml) para adicionados en la misma secuencia para eliminar cualquier diluciones lineales en sueros pool de pacientes humanos.0 hasta 109. Por estas razones hLH ND 10 IU/ml 3. El análisis de riesgo – como lo requiere la directiva IVD E1 0.41 8. ‘Alfa-fetoprotein structure and function.com Revisión: 3 Fecha: 060712 DCO: 0639 H1 0.C como la hepatitis y la cirrosis. Multiplicar el valor obtenido por el factor de Nivel 2 24 71. B1 0.4% o decantación puede resultar en replicación baja y resultados estándar y el coeficiente de variación para cada uno de estos sueros incorrectos. ELISA se utilizaron para evaluar la linearidad y el efecto Gancho.05 altas condiciones de riesgo.D. Javadpour N.89 2.097 13. La falla al remover solución adherida en los pazos de aspiración distintos de sueros de control.9 3. 313. calcularon para el método AFP AccuBindTM ELISA en comparación G) 1 (8ml) 2(8ml) 4. Clínicamente un elevado valor de Referencia AFP por si solo no constituye valor diagnostico para cáncer (X) y por lo tanto debe utilizarse en conjunto con otras manifestaciones clínicas o parámetros de diagnostico. establecidos por el fabricante. desviación recuperación de dosis de 97.000 U/ml 2. La Valores AFP en ng/ml enfermedad. the Immunoassay Handbook.62 7. 337-408 (2001).5 Linealidad y efecto Gancho 5. se ha definido por un método dado. a new generation of tumor de las instrucciones de uso Monobind´s IFU puede arrojar marker for hepatocellulor carcinoma”. 4. la población probada y la hCG ND 1000 IU/ml para evitar derivar el análisis.612 sensibilidad de 0. I. Nivel 3 30 188.67 4.1 Desempeño del análisis Cafeína ND 100µg/ml 1. El úmero total de muestras fue de 301. lo cual puede producir resultados de . solamente y no debe ser usado en lugar de la curva estándar analizadas.2 Sensibilidad Cal C 0. Este valor es equivalente a una muestra que Cal D 0. 140-147 (1987). población de personas “normales” y dependiendo de multiplicidad de CA-125 ND 10. Satomura S. El número.680 14. 4 de 6 grupos de control de calidad deben estar dentro de los sugieren un carcinoma hepatocelular.098 5 reactivo y realizar un mantenimiento preventivo rutinario cancer’. 1. E2 0. valor medio. 5-9 .664 1. ng/ml por lo general son un indicativo de la enfermedad cruzada Ácido ND 100µg/ml 12.60 y = 0. 8.47 8. por ejemplo: pipetas.594 50 Monobind@monobind. No se deben emplear muestras altamente lipémicas.6 2. tiempo exacto y la temperatura requerida. La absorbancia (OD) del calibrador F deberá ser ≥ a 1. TABLA 2 9. Wild D.7 Methods”. cada laboratorio dependerá del rango de valores esperados hTSH ND 100m IU/ml Hemolizadas o contaminadas.20 1. Los datos obtenidos se pueden observar Figura 1 en la tabla 4 partes de diferente kits. hasta que se determine un rango local hPRL ND 100µg/ml 4.012 del dispositivo Nivel 2 30 88. Monobind no tendrá responsabilidad. D1 0. Para el caso de pacientes en . resultados inexactos. ‘Cirrhosis and etiology of hepatocellular Cal A 0. Las concentraciones sobre 350 Sustancia Reactividaad Concentración rangos establecidos. derivación de tiempo durante la reacción.0 RANGOS DE VALORES ESPERADOS No se detectaron interferencias con respecto del desempeño de AFP los siguientes criterios: AccuBindTM ELISA cuando se hizo adición de cantidades masivas de Aproximadamente el 97-98% de la población normal sana presenta las siguientes sustancias a un pool de suero humano. regresión de mínimos cuadrados y el coeficiente de correlación se F) 1 (7ml) 2 (7ml) y otros parámetros deben estar dentro de los rangos listados y requerimientos del ensayo.9639 (X) 0.577 contenga una concentración de 1ng/ml AFP. La absorbancia (OD) del calibrador A deberá ser ≤ a 0. relevant Muestra Fuente Media Media Valor* estándares nacionales aplicables. ‘The role of biologic tumor markers in testicular C1 0. The Immunoassay Handbook.0 PARAMETROS DE Q.672 500 procesadas por personal capacitado o profesionales D2 2. Mallory T. dilución para obtener el valor correcto (x10). Nivel 3 24 148.990 250 12. J Hepatology. Henry JB. Se deben seguir las buenas prácticas de laboratorio todos los Precisión Inter-Ensayo (Valores en ng/ml) 5. para una PSA ND 1.025 ng. Medidas e interpretación de resultados deben ser Tamaño 96 (A) 192(B) Cal F 2. 5. Para resultados de pruebas válidas. se recomienda repetir la curva de determinado por el analista usando el método con muestras propias respuesta a la dosis.7514 + 0. A1 0.975 dosis mínima.para estos y otros dispositivos F1 0. como tampoco estos valores elevados ELISA de micro placas Monobind a AFP AccuBind y el método de AFP no siempre cambian con el avance o regresión de la referencia se indican por la cercanía de los valores medios. El pipeteo de las muestras no se extenderá más de 10 minutos factores: la especificidad del método.68 3. Wild D.26 7. “Clinical Diagnosis and Management by Laboratory nuevamente. Johnson OJ. Es esencial un pipeteo preciso y exacto así como seguir el (1994). lavadores y/o instrumentos automatizados con este 7. 2. 10. (1994). Si más de 1 placa es usada. observan pacientes con cáncer colorectal que no muestran Solo unas mínimas cantidades de sesgo entre el procedimiento de valores elevados AFP.0 CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO utilizaron concentraciones masivas se AFP (>100. Cancer. prueba falsos o si los resultados son interpretados TABLA 4 incorrectamente.5 ng/ml (97-98%) Atropina ND 100µg/ml 12. Método 6.3 niveles AFP inferiores a 8.413 un método de referencia ELISA. Nombre Abs (A) Abs (B) (ng/dl) manera estricta para asegurar el cumplimiento y uso adecuado Nivel 1 30 16. Si se utiliza el sistema de reducción de datos controlados por Método Media Análisis de regresión de Coeficiente (x) mínimos cuadros Correlación Absorbancia (s) Computador para interpretar los resultados del ensayo. No La precisión intra e interensayo del sistema de prueba AFP El ensayo demostró que no había ningún efecto de Gancho en tocar el fondo de los pozos. Es importante calibrar todos los equipos. Mizejewski GJ. Stockton Press. 1075 (1996).92 6. Se estudiaron igualmente muestras Reactivo aspecto para determinar el cuidado del paciente y no deben ser C) 1 placa 2 placas la única base para una terapia. WB Saunders Company.5 hasta 601 ng/ml fueron D) 1(20ml) 1 (20ml) *Los datos presentados en el ejemplo 1 y figura 1 es para ilustrar están en conflicto con otros determinantes.