MICROBIOLOGIA - Bacteriologia, Medios de cultivo

y pruebas bioquimicas
Tema 1 - Microbiologia Clínica
(evolución histórica, conceptos
generales, organización de laboratorio)
Microbiología - la ciencia que estudia los seres vivos no visibles al ojo
desnudo(microorganismos; aunque se incluyen
metazoos parásitos no microscópicos), queatribuyen el origen de la vida sobre la
tierra y el mantenimiento del equilibrio en la biosfera (en vida libre como saprofitos
o depredadores con distinto grado de simbiosis =>comensalismo, mutualismo o
parasitismo), aunque también tienen efectos negativos comoproducir
enfermedades; Los virus y viroides => parásitos endo-celulares obligados (no
se replica en vida libre); Microbiología medica => estudia a los
microorganismos que afectan al hombre (reino procariota/ bacterias, los eucariotas
del reino Fungí, los virus y viroides); Parasitología => estudia
los eucariotas microscópicas (protozoos) ymacroscópicas (metazoos) de endo o
ectoparásito(los artrópodos estudiados también como vectores y reservorios de
enfermedades transmisibles);

Microbiología medica:
- Microbiología general => se estudia conocimientos históricos, clasificación,
estructura y fisiología de los microorganismos.
- Microbiología especial => se estudia 4 grupos de agentes
infecciosos(bacteriología, virología, micología y parasitología) + recientemente los
viroides(moleculas circulares de ARN de bajo peso molecular que carecen de
cubierta proteica) ylos priones (proteínas codificadas por genes celulares
y actúan como señales reguladoras, responsables de algunas
enfermedades neurológicas graves - Creutzfeldt-Jacob y el Kuru)

Evolución histórica de la microbiología - como ciencia especializada no
aparece hasta finales del siglo XIX; cuatro periodos:
-1º => periodo especulativo (desde la antigüedad hasta los primeros
microscopistas)
-2º => desde 1675 hasta la mitad del siglo XIX (descubrimiento de los
microorganismospor Leeuwenhoek en 1675 - constructor de lentes holandes que
inventó el microscópio simple)
-3º => periodo de cultivo de microorganismos hasta finales de siglo XIX (Pasteur y
Kochlogro cristalizar a la Microbiología como ciencia experimental bien asentada.
-4º => desde principios del siglo XX hasta ahora (se
estudian fisiológica, bioquímica, genética, ecológica y surgimiento
de virología, inmunológia.
- Redi, Spallanzani y otros fisicos del siglo XVII demostraron que el
microorganismo no se genera espontaneamente (de novo), postularon la teoría de
la biogénesis (ser vivo nace de otro ser vivo).
- Pasteur (1822-1895) demostró que la fermentación era producida por
microorganismos en crecimiento.
- Se dobló el interes de muchos naturalistas tras la publicación de los libros de
Darwin.
- Davaine (1863-1868) encontró grandes cantidades de m.o. en la sangre de las
vacas(bacteridios) y Robert Koch (1843-1910) en 1876 aisló con sus técnicas de
cultivo puro el bacilo de antrax (Bacillus anthracis); mas tarde Koch y su colegas
confirmaron que las esporas son formas diferenciadas y resistentes de bacilos y
demostraron que la enfermedad podía transmitir sucesivamente a ratones
sanos inoculándose bacilos obtenidos de cultivo puro; basados en los postulados su
maestro Henle, Koch postuló siguentes criterios:
- el microorganismo debe estar presente en todos los individuos enfermos
- el m.o. debe poder aislarse del hospedador y ser crecido en cultivo puro
- la inoculación del m.o crecido en cultivo puro a animales sanos debe provocar
la aparición de sintomas específicos de la enfermedad en cuestión (cada
enfermedad infecciosa esta causada por un tipo de bacteria diferente)
- el m.o. debe poder ser re-aislado del hospedador infectado de forma experimental.
Las 2 décadas siguientes, se aislaron una gran variedad de bacterias patógenas; en
Francia el Instituto Pasteur se concentro sobre los procesos infectivos, la
inmunidad del hospedador y la obtención de vacunas (vacuna antirrábica ensayada
por Pasteur en 1885, contribuye al nacimiento de la inmunológia).

Conceptos generales y clasificación - al finales del siglo XIX los
microorganismos se agrupan en un nuevo reino fuera de la teoría de Darwin
=> Protistas para los protozoos, las algas microscópicas, los
hongos microscópicos y las bacterias como seres microscópicos; Chatton en
1932 clasifica a los seres vivos en 4 reinos => animalia, plantae, protistas inferiores
o procariotas (bacterias) y protistas superiores o eucariotas (algas, hongos y
protozoos); Whittaker en 1969 agrupa en 5 reinos => animalia, plantae, fungi,
procariotas y protista; Magulis en 1992 los agrupa definitivamente por ahora en 2
superreinos /dominios, 5 reinos y 2 subreinos =>
- Dominio: procaryotae, 1 reino: monera, subreino: archeobacteria y eubacteria
(incluyendo todas las bacterias divididas en grupos)
- Dominio: eucaryotae, con 4 reinos: protista, fungí, animalia y plantae (incluyendo
protozoos, hongos, algas, animales y vegetales); protista => son unicelulares
eucariontes pero que no cumplen con las características para estar en algún otro reino
organismos de este tipo (p.ej. protozoos)

Diferencias básicas entre los procariotas y los eucariotas:
- célula eucariótica => presenta un núcleo verdadero rodeado por una
membrana nuclear con determinado numero
de cromosomas que están constituidos por ADN e hitonas (proteínas del núcleo);
el citoplasma contiene mitocondrias, cloroplastos, ribosomas y
otros orgánulos celulares y todo ello se recubre por una membrana que se prolonga
hacia el interior, organizando unos canales en el que forma el retículo endo-
plasmático (donde se encuentran los ribosomas - responsables de
la síntesis de proteínas); la membrana celular puede o no recubrirse de pared
celular (carece de peptidoglicano) para protección o dar la consistencia a la célula;
posee celulosa o quitina.

tampoco hay cloroplastos. . constituidos por 1 cadena de ARN cíclica corta que no codifica proteínas. aunque arqueo-bacterias y micoplasmas no lo poseen). los viroides (30 especies) => agentes infecciosos (de menor complejidad genética y estructural conocida) que solo afectan a plantas superiores. es incapaces de reproducirse por si mismos.las arqueo-bacterias.los virus => un grupo aparte que no se ha integrado en ningún reino y se discute si son o no seres vivos. sino cromatóforos(contienen clorofilas). otros a vegetales y otros a bacterias. no esta organizada y no posee verdadero núcleo (ADN no esta rodeado de una membrana . salen de la célula infectada produciendo su muerte. sino mesosomas (repliegues de la membrana celular donde se hallan lasenzimas responsables de la respiración). no posee mitocondrias.célula procariótica => mas primitiva. los ribosomas se encuentran pegados a la membrana citoplasmática que están protegidas por una pared celular (peptidoglicano -exclusivo de procariotas. identificados en 1982. las eubacterias y los eucariotas se difieren en => la estructura de RNA polimerasa y en la composicion de los lípidos de su membrana. aunque desde el siglo XVIII se sospechaba de su existencia. tamaño 10 veces menor que los virus (parecen ser una etapa primitiva de los virus). un virus se define como=> un bloque de material genético rodeado por una cubierta proteica que le sirve como vehículo de transmisión. las enfermedades "prion" en el hombre (encefalopatías espongiformes transmisibles) afectan al sistema nervioso y se cree que también a los musculos.se encuentra libre). hay virus que infectan a celulas animales. los priones (proteinceous infectious particle)=> partículas patógenas de naturaleza proteica sin acido nucleico. una vez que han conseguido esto. .. algunos pueden llevar una envoltura circundante compuesta de lípidos y carbohidratos. dependen de un huésped que les proporcione el mecanismo de la replicación y síntesis de macromoléculas).

Sección de antibióticos .Sección de micobacterias . evitando la producción de aerosoles.Sección de bacteriología (se divide en áreas => urocultivos. . Áreas/ secciones especializadas: . Áreas/ secciones básicas: .Sección de siembra de muestras .no pipetear aspirando con la boca . aplicarse cosméticos.Sección de recepción y registro de muestras .Otras secciones (virología o biología molecular) Normas de seguridad e higiene en el trabajo .llevar bata durante el trabajo que se quitara al salir del laboratorio. Niveles de seguridad biología: Nivel 1 => valido para laboratorios de enseñanza que trabajan con microorganismo no patógenos bien conocidos y patógenos oportunistas: .realizar las técnicas correctamente. bolígrafos o tener alimentos en el laboratorio.las puertas permanecen cerradas mientras se trabaja .Sección de toma de muestras . exudados y anaerobios. .no comer.las mesas de trabajo se desinfectan al terminar el trabajo y cuando es necesario (derrame/contaminación) .Área de almacén 2.tratan de evitar el riesgo de infección al personal que trabaja en el laboratorio así como su extensión a la comunidad(establecidas por el CDC/ centro de control de la enfermedad) americano y del instituto nacional de salud de ese país. debe existir autoclave para descontaminar en el mismo edificio.los materiales que no pueden ser esterilizados en el propio laboratorio.Organización de un laboratorio de microbiologia clínica Estructura (depende del tamaño y características. se transportaran en contenedores cerrados para el traslado hasta su descontaminación. hemocultivos) . fumar. coprocultivos y parásitos. espacio que dispone y numero de personal): 1.todo material contaminado debe ser esterilizado antes de desecharlo .Sección de medios de cultivo .Sección de serología o inmuno-microbiología . .Sección de micología .lavarse las manos después de trabajar con microorganismos y al terminar la jornada (uso de guantes). . . morder los lapices.

existirá un manual de normas de seguridad en el laboratorio que todo el mundo debe conocer y donde se exponga lo que debe hacerse ante un accidente.el laboratorio debe estar aislado de la circulación general.se utilizaran batas abiertas por la espalda. .. comprende las siguientes: .se deben utilizar guantes en todas las técnicas con productos potencialmente peligrosos o animales. resistentes a los ácidos.el diseño del laboratorio debe permitir una fácil limpieza incluso entre los muebles que deben ser impermeable. el de las cabinas tipo I y II se elimina directamente al exterior o al sistema general del edificio pasando previamente por filtros de alta eficacia (HEPA).todas las actividades con microorganismo o productos potencialmente patógenos se realizaran en cabinas de seguridad. regulación de la entrada y salida del aire acondicionado.cada laboratorio debe tener un lavabo. .existirá un autoclave para descontaminar en el propio laboratorio . que no deben llevarse fuera del laboratorio. .en un accidente de exposición a productos contaminados (derrame.cerca de las puerta de salida existirán lavabos que pueden accionar con el pie. el aire de salida de las cabinas de seguridad tipo III saldrá directamente al exterior. . ademas de las normas del nivel 1. . utilizar guantes cuando se trabaja con material contaminado o animales que se desinfectaran antes de desecharlos. Nivel 4 => este nivel solo se establece en laboratorios de experimentación y no en laboratorios de microbiologia clínica.en el laboratorio no debe haber plantas o animales que no se utilicen en el trabajo.existirá un sistema de extracción de aire con circulación del mismo de la puerta de entrada hacia el interior del laboratorio.el acceso al laboratorio debe estar limitado.se toma una muestra de suero del personal cuando comienza a trabajar. homogenización de muestras. siembra o procesamiento de muestras en general. las ventanas deben cerrar hermeticamente. . deben estar protegidas con mosquiteros Nivel 2 => permite el trabajo con microorganismo de peligrosidad potencial moderada (hospitales o centros de salud a nivel primario). II o III cuando se realicen técnicas que suponen producción de aerosoles como centrifugación. . se archivara como suero base. . pinchazos). comunicar inmediatamente al responsable del laboratorio.deben existir programas de desinfección y desratización .las técnicas serologícas con Ags sin capacidad infectante pueden realizarse en las mesas de trabajo .se trabajara con cabinas de seguridad de nivel I. . se necesita este nivel cuando se .las superficies y los muebles deben ser de fácil limpieza. . .es obligatorio el uso de bata o pijamas que no deben usarse fuera del laboratorio. . codo o rodilla. álcalis y al fuego. Nivel 3 => es adecuado para trabajar con microorganismos de alto riesgo y comprende las normas de los niveles 1 y 2 y ademas: . en las habitaciones donde se tienen los animales se utilizaran mascarillas rígidas. existiendo una doble puerta de entrada con una habitación para cambiarse de ropa y con ducha. .si las ventanas se pueden abrir. ningún trabajo se realizara en las mesas de trabajo. las puertas se cerraran automáticamente. . especialmente en el comedor o cafetería o salidas fuera del edificio.

especialmente virus. Metodos y áreas de control de calidad 1.Asegurar resultados rápidos y útiles .No deben utilizarse reactivos caducados o cuyo aspecto no sea el adecuado y debe asegurarse su almacenamiento correcto . almacenados correctamente y etiquetados con la fecha de caducidad(a 4ºC dura 8-10 semanas. sin empaquetar a 4ºC dura 2 semanas. .Control de esterilidad => comprobar con 1 unidad de cada lote (<100) o 3 unidad si es un gran lote mediante incubación a 37ºC durante 24 horas. Tema 2 .Estandarizar las técnicas e interpretar correctamente los resultados . Control de aparatos => se debe mantener una temperatura ambiente en el laboratorio entre 23-29ºC y la humedad entre 30-50 %. si se contaminan. Cepas control => una colección de cepas de ATCC dispone de prácticamente todos los microorganismo que se utilizan en controles de calidad. Mantenimiento de las cepas control => se mantiene de manera que no pierdan sus características típicas. Control de calidad de las muestras => se debe controlar desde su obtención. al final de jornada se limpian los superficies con un antiséptico (fenol 5% o glutaraldehido) . 3.manejanmicroorganismos de altísimo riesgo o que son exóticos en ese país.Limpieza => las neveras y congeladores se limpian y se descongelan periódicamente (mínimo 1 vez al año). debe rechazarse.Los reactivos de identificación se deben utilizar siempre con un control positivo y negativo. . los caldos y agar en tubo con tapón a 4ºC . .El Control de calidad de un laboratorio microbiologia clínica El control de calidad sirve para: . .6 meses). siguen un control siguiente: .Aumentar la profesionalidad del personal del laboratorio y la confianza de los clínicos en los resultados que reciben.Control de medios con características selectivas => se inocula con el germen que no debe crecer en ello.Control de crecimiento => se inocula un medio de cada lote con un inoculo reducido microorganismo control (cepas de colección) que asegure el crecimiento o con un inoculo estándar.Garantizar la fiabilidad de las técnicas que se realizan en el laboratorio .Control de las características bioquímicas => se utiliza un control positivo que produce la reacción bioquímica esperada. 2. estableciendo una buena comunicación con los clínicos y el personal encargados de obtener muestras . 5. los que están preparados en el laboratorio.Hay que utilizar siempre el lote o el vial cuya caducidad este mas próxima 4. . las cabinas de seguridad. transporte y procesamiento hasta la emisión de los resultados siguiendo normas elaboradas con criterios claros de rechazo y establecer horarios fijos de recepción de muestras. Reactivos de identificación => se deben marcar con la fecha del primer uso y la caducidad.Controlar la calidad de las muestras. . 6. Medios de cultivo => deben ser empaquetados correctamente en bolsas cerradas para evitar la desecación.

químico . se limpian cada semana los objetivos con alcohol-eter 50%.centrifugas. se usa un termómetro para cada aparato colocado en el interior del mismo .Material reutilizable (de vidrio. . .Microscopios => se limpian con suavidad al terminar la jornada. Tema 3 . se controla la atmósfera anaerobia mediante catalizadores e indicadores de azul de metileno. .Todo instrumento se limpia inmediatamente después de utilizar (según el protocolo de cada caso). se auto-clavar y se tirar en contenedores especiales. las estufas y baños se limpian cada 6 meses.conviene utilizar material desechable . se realiza periódicamente un ajuste de condensadores y objetivos.destreza y formación por parte del personal sanitario de laboratorio (deben trabajar en condiciones de total asepsia) . . el material debe estar limpio y/o desinfectado .Atmósfera de incubación => se controla la cantidad de CO2 de las estufas con un indicador que suele estar acoplado con sistema de alarma.antes de cualquier esterilización. de metal. baños. guantes. desinfección y esterilizaci ón En todo laboratorio de microbiologia se debe tener en cuenta: .todo material para la recogida de muestra debe estar esterilizado . se desinfecta o se esteriliza (según los casos) .Cabinas de flujo laminar => un cambio periódico de los filtros y un control de laslamparas ultravioleta.esporas) . concepto de limpieza. desinfección y esterilización .todo material para la realización de las pruebas debe estar estéril . . frasco de colorantes.Material desechable (jeringas. etc. batas. agitadores de tubos se limpian todos los días al acabar el trabajo con antiséptico fenol 5%. material punzante o cortante se desecha en recipientes resistentes a la punción.la limpieza de residuos en el suelo. neveras y congeladores antes de empezar el trabajo. después se desinfecta o se esteriliza directamente para destruir cualquier forma de vida incluidas formas de resistencia o esporas. lancetas) => se utiliza una sola vez y se desecha o se destruye.tiras y biológico . gorro de tela) después de su utilización se limpia. Fases de la manipulación del material del laboratorio .el material de uso aséptico debe guardarse separadamente del uso séptico .Autoclaves => control de esterilizacion (físico del aparato. mesas de trabajo y cualquier superficie se realiza mediante desinfección periódica .Técnicas de descontaminación. Principios básicos de descontaminación . si no es punzante. taparlos con su funda. frascos lavadores con agua destilada.Temperatura => un control diario de las estufas.Materiales no esterilizados (pero si se desinfecta .la manipulación de todo material debe seguir el protocolo de trabajo con medidas cautelares para la prevención de accidentes laborales.destruir toda forma de vida patógena) que se pueden utilizar => portaobjetos para la tinción.

es muy utilizado y se conseguirá esterilización si sometemos el autoclave a 1 atmósfera durante 20 minutos (120ºC). se limpia. no es un método de esterilización (no destruyen esporas) . se seca y se comprueba su estado. Descontaminación por calor seco (depende de la temperatura. se abrirá la llave de purga para que permita la salida de vapor y se ajustara la presión deseada para la esterilización y el tiempo (1 atmósfera . se protege si es necesario.Autoclave => un recipiente cilíndrico que se cierra herméticamente. 2. piel y mucosas corresponde a técnicas de antisepsia (se aplica tópicamente antisépticos). hipocloritos. externamente lleva un manómetro que registra la presión en el interior cuando esta en marcha. paños.Ebullición => se utiliza poco porque no es fiable.. Descontaminación por calor húmedo . . catéteres) . presenta una válvula de seguridad que se abrirá espontáneamente cuando la presión interna supere la elegida o resulte peligrosa.Incineración => se usa un horno crematorio para destruir material desechables(jeringas.consisten en la esterilización o desinfección de los gérmenes por aplicación de calor seco o húmedo.20 minutos). los instrumentos se limpian primero con agua fría (la sangre se adhieren con calor).Limpieza => se separa el material entre los de uso aséptico y séptico. se cerrara la llave de purga y la presión comenzara a subir hasta llegar al nivel programado. 1. mesa).Horno seco => estufas de Pasteur o Poupinel (hornos metálicos de doble pared y bandejas ajustables) mediante resistencias eléctricas. abriremos la llave de purga para que salga gran parte del vapor que todavía se encuentra contenido. Técnicas de descontaminación física A. cuando la presión este a 0. Tratamientos térmicos por calor seco y húmedo .). esterilizan durante 2 horas a 180º o 3horas y media a 160ºC. Técnica => con autoclave apagado y abierto. etc. se enjuaga y se volverá a aclarar con agua destilada. desinfección de manos. batas. se cierra la tapa y se ajusta a presión. una vez realizada la esterilización se apagara el interruptor del autoclave y se esperara a que el manómetro baje a 0. torundas. cristal.Flameado => exponer un objeto a la llama de un mechero durante un tiempo según el material de que se trate (p. interiormente hay una rejilla que se coloca por encima de una resistencia eléctrica cubierta por agua destilada. se utilizan metodos químicos (detergentes. esto se realizara con cuidado para evitar descompresiones bruscas que podrían originar la apertura de aquellos recipientes tapados . plásticos y gomas reutilizables. el inconveniente => con el tiempo los objetos metálicos se oxidan. después con agua caliente y jabón frotando en los ángulos. tienen termómetro externo que mide la temperatura en el interior y un selector de temperatura y un reloj.ej. se consigue o no la esterilización) .Desinfección => materiales o superficies inertes (suelo. en el se puede esterilizar => material metálico. compresas. . la asa de siembra) . se pondrá en marcha el aparato y se espera hasta que salga vapor por la llave de purga.Esterilización => se usa para la reutilización de cualquier material. introducir el material en agua hirviendo (100ºC) durante 10 minutos como mínimo. una llave de purga que permite la salida de vapor y un reloj que selecciona el tiempo deseado con alarma que indica el final del proceso. añadimos agua destilada hasta la rejilla. sin cubrirla (para que el material que deseamos esterilizar no contacte directamente con el agua). las piezas pequeñas se colocan en cestas/ cajas. a partir de aquí comenzara a contar el tiempo de esterilización.

no destruye las formas de resistencia. según el tipo de filtro. . las bacterias en medios neutros son (-). pero la llave de purga abierta. presentan un poder de penetración muy alto. medios muy azucarados. jeringas.Vapor fluente => utilizar el autoclave siguiendo la técnica habitual.Uperización => método muy utilizado en la industria alimentaria (tratar el medio a una temperatura de 149-150ºC durante unos instantes (1-5 segundos).Pasteurización => no es un método de esterilización y es utilizado en la industria alimentaria (calentar el medio a temperaturas entre 62ºC (15 minutos) y 72ºC (30 minutos). Sistemas de filtración (filtrar a las estructuras que sobrepasen un determinado tamaño. se abre la tapa del autoclave y se extrae el material.Tyndalización => método de esterilizaciones consecutivas (repetidas en 3- 4 días hasta que se elimine el germen contaminante). válvulas y que pudiera alterarse por calor) 2. Tratamientos a temperatura ambiente 1. teóricamente no se deben alcanzar temperatura >100ºC y no se debe abrir el aparato o recipiente que se somete a tyndalización. . actúa impidiendo y alterando la duplicación del ADN celular. catéteres. es utilizado para materiales o medios que no deban soportar temperaturas >100ºC(p.ej. . objetivo => destruir las esporas cuando germinan y evitar contaminaciones por microorganismos resistentes.Rayos gamma => para conseguir esterilización en frió. es poco usado en microbiologia. guantes. Radiaciones ionizantes . se debe evitar su presencia en la piel.Rayos ultravioletas => para mantener la esterilidad de superficies y recintos.las utilizadas en microbiologia son: . una ves comprobado la salida de vapor. tienenpoca penetracion. . . la efectividad del filtro es proporcional al tamaño del poro.Filtros de membrana => filtros de celulosa muy purificada y con un tamaño de poro fino o muy fino. vació y la carga del filtro (+). lo que impedirá que se produzca presión y la temperatura nunca sea > 100ºC. para evitar su caramelización). . pudiendo conseguirse esterilización). producidos por isotopos radiactivos. presencia de presión. No se alteran las propiedades del medio y produce esterilización. se utiliza cuando existe una contaminación de algún material o en el propio autoclave. constituyendo el método de esterilización mas utilizado a nivel industrial (materiales de uso único o desechable p.con algodón graso. prótesis. . existe desde sistemas sencillos hasta sistemas de piezas desmontables que llevan acoplada una bomba de vació para ejercer succión sobre el medio a filtrar.ej.

flujo => vertical u horizontal..Filtros de vidrio poroso o de fibra de vidrio => se utilizan en casos específicos y tienen mas resistencia que los anteriores. comienza a vibrar a gran velocidad originando pequeñísimas burbujas que entran en todos los recodos . en quirófanos y recinto que pretende crear o mantener un ambiente estéril.Filtros de Chamberland => son de porcelana porosa. mas caros que los anteriores y menos utilizados. utilizados como mecanismo de esterilización en campanas de flujo laminar. .Ultrasonidos => introducir el material en tanques de distintos tamaños con liquido desinfectante. . una vez puesto en marcha el dispositivo.Filtros de flujo laminar => dispositivos de filtrado donde entra aire contaminado y sale estéril. .

. .Clorofenoles => muy eficaces y se asocian con los detergentes catiónicos para mejorar el grado de desinfección.ser económico . Técnicas de descontaminación química 1. toxico ni irritante para los tejidos . antes de punción para hemo- cultivo. las manos (etanol). mas frecuente para limpieza y desinfección de paredes.Alcoholes => limpiar y desinfectar la piel. ya que puro es muy oxidante y podría explosionar al mezclarse con O2. presenta un gran poder de penetración y es muy efectivo y duradero. Metodos químicos de desinfección (desinfectantes que se aplica sobre objetos y superficies y antisépticos que se aplica sobre la piel y mucosas). urinarios.Detergentes catiónicos => diluidos al 1% para desinfección de manos. son efectivos y ejercen su acción por oxidación (p. .del material consiguiendo eliminar los microorganismos.no ser corrosivo.matar el mayor numero de gérmenes o al menos todos los patógenos . etc. cauchos. caro y poco practico. son muy caras. deberá conservarse estéril en el interior de una bolsa de plástico cerrada por procedimientos termoeléctricos y dura 6 meses. el oxido de etileno se aplica a cualquier material sensible al calor y que no pueda esterilizarse por otros metodos (p. se suelen usar diluidos en agua (lejias /hipocloritos) . betadine.se deberá diluir al menos en agua .tener un olor agradable Los mas utilizados: . el material esta listo para ser utilizado a las 48 horas después de la esterilización. la esterilización se produce a => temperaturas bajas (40ºC) con humedad relativa alta (40-60%) durante un tiempo de 3-8 horas (media de 5).Acido fenico => diluido al 5% para la limpiar objetos y superficies.ej.los mas empleados son "Oxido de etileno"=> en forma de gas (10ºC) mezclado con CO2. alcohol isopropilico70%) . -Amoniaco Los antisépticos mas utilizados: .ej. condiciones que cumplir en un buen método de desinfección: . el filo de instrumental y superficies pequeñas (metanol) que no tiene contacto con la piel (p.Compuestos clorados => para desinfección de superficies.Mercurio-cromo => contiene mercurio y un buen desinfectante para heridas superficiales (las mantiene secas y protegidas) . ropas. material eléctrico). suelos. se requiere cámaras o instalaciones especificas para ello. plásticos termo-lábiles.Derivados yodados => para preparar la piel antes de una intervención quirúrgica.ej. en la punción lumbar. ibetane) Metodos químicos de esterilización . ropa y objetos (sin diluir) . endoscopia. es poco utilizado.

comercializados en forma de cinta adhesiva.Es muy importante seguir las normas necesarias para evitar la contaminación externa de las muestras (descontaminar la piel. evitar áreas con flora normal. yodo-povidona 2% desde el centro hacia afuera en el circulo.comercializados en forma de capsulas cerradas en cuyo interior hay esporas de resistencia a la esterilizacion conocida. como indicadores del proceso de esterilizacion (por encima de la temperatura determinada cambian de color). en niños es suficiente extraer 1-5 ml máximo cada extracción. termómetros. los frascos se marcan con etiqueta del paciente. desinfectar otra vez la piel con alcohol (sensibilidad al yodo). remitir las botellas de hemocultivos inoculadas inmediatamente. sistemas de tipo biológico . Procedimiento para la toma de muestras: . se toma en la vía mas abajo. tiempo etc.La cantidad recogida debe ser suficiente y es fundamental que se utilice unrecipiente estéril y que se envié a laboratorio lo mas pronto posible. dejar secar 1 minuto. Tema 4 . cambiar la aguja antes de inyectar la sangre en las botellas de cultivo. 3. tras haber sido sometidas a condiciones de esterilizacion.5ºC /antes de la toma de la siguiente dosis de ATB) => smarch en el antebrazo. controles de tipo químico . manejo y tratamiento) Selección de la muestra para tener significación diagnostica - representativa del proceso patológico y cantidad suficiente (p. ponerse guantes estériles. se extrae lo mas limpio posible para no incluir bacterias saprofitas de la piel. estériles). recipiente estéril adecuado (para un pus de un absceso => anaerobio. controles de esterilizacion de tipo físico => incluidos en el aparato de esterilizacion (manómetros . dichas ampollas. realiza la extracción . se incuban a 56ºC (Bacillus strearat-haemophilus) o a 40ºC (Bacillus subtilis). a cabo de 24-48 horas.Control de esterilización . se procede a su lectura donde la germinación y cambio de color indicara si se han producido condiciones de esterilizacion. numero de cama y hora de extracción. humedad. pacientes con tubuladora intravenosa/ catéter. Extracción de sangre para hemocultivos (septicemia) La técnica de extracción (se hace en un pico febril > 38.La toma de muestras debe realizarse antes de iniciar el tratamiento ATB (al menos informar al laboratorio de ATB que esta recibiendo) . . vació.) 2. gráficos que registran los valores parámetros mas significativos del proceso: temperatura.Toma de muestras (recogida. vacuo-metros . no es relevante un esputo poco purulento y contaminado por saliva).frotando rigurosamente).La extracción o recogida de las muestras se debe realizarse en el estado adecuado de la enfermedad (durante la fase aguda o diarreica) . presión. medio de cultivo específicos para el patógeno sospechoso) .ej.miden presión.permiten comprobar la eficacia del proceso de esterilización 1. fundamentalmente para el control térmico. escoger la vena antes de la desinfección (alcohol 70º o clorhexidina alcohólica un área de 5cm . se recomienda 3 muestras de 10 ml (cada extracción para 2 botellas (aerobios y anaerobios) en 24 horas con intervalo de >1 hora (al menos 2-3 extracciones separadas 30 minutes en 24 horas) en sitios diferentes para dilucidar un posible contaminante de la piel.miden el vació en el interior.

las larvas y los quistes de protozoos permanecen viables varios días. moco o pus. la muestra bacteriana => turbio (meningococo dentro de leucocitos). biopsia transbronquial y pulmonar abierta. se recoge durante 3 días consecutivos.Exudado nasal => se realiza introduciendo un hisopo profundamente en cada fosa nasal y rotando suavemente. aunque es mas relevante que esputo). se recoge en 3-4 tubos estériles con tapa de rosca (tubo 3º o 4º => recuento celular. cepillado bronquial es una técnica mas agresiva en caso de neumonías por aspiración. 1º y 2º =>microbiológicos y bioquímicos. hidratación o nebulización). medio Cary y Blalir mantiene la viabilidad de los patógenos intestinales). el volumen de muestra es importante (10 ml) para la detección (p. también se puede utilizar frasco de orina estéril. Tractor respiratorio inferior . Recogida de heces (se procesa lo antes posible): .ej. se proporcionan al .Toma de muestras para coprocultivo . . exudación o formación de capsulas. la lengua se oprime con un depresor para reducir al mínimo la contaminación del hisopo con secreciones bucales.Exudado faríngeo => se realiza mediante una torunda de algodón. Recogida de otros líquidos estériles . se guardan en la nevera en un recipientes cerrados para evitar la desecación (temperatura 3-5ºC). instilando una pequeña cantidad de SF estéril en el árbol bronquial (también puede estar contaminado por flora del tracto superior. una buena muestra => instruir debidamente al paciente para lograr una expectoración profunda (ayudarle con fisioterapia respiratoria/ clapping. el resto => citológicos y bioquímicos.la aspiración percutánea de liquido sinovial. no se deben refrigerar (temperatura ambiente o estufa a 37º) excepto para estudios virales se pueden refrigerarse hasta 24 horas o congelarse a -70ºC si hay una mayor demora. antes. . pericárdico y peritoneal se hace de forma aséptica y se inyecta inmediatamente en un frasco o tubo esterilizadas (transporte anaerobio).Recogida de LCR (el procesamiento inmediato/ urgente) => se recoge insertando un agua. muestras de bacteriasanaerobias se recoge por una punción transtorácica. pacientes con traquestomías => se recoge aspirando (en un frasco de Lukens). virales => transparente.se recoge con un escobillón que se introduce en un tubo estéril preparado con un medio de transporte adecuado (Cary y Blair) (tubo con una cuchara y liquido rojo/transparente. ulceración. la cantidad de muestra es pequeña (1 cucharilla de café en un frasco con alcohol polivinilico /PVA 1:3). para investigar oxiuros (parásitos) se utiliza preparación con cita de celofán. dacrón o alginato de calcio frotando vigorosamente ambas áreas amigdalinas. se expulsar las burbujas de aire de la jeringa. si solo se llena 1 tubo => microbiologia retirara de forma aséptica la cantidad necesaria. se puede añadir una pequeña cantidad de heparina para evitar la coagulacion. en el espacio sub-aracnoideo a nivel lumbar.M. de forma aséptica.Muestras para estudio parasitológico . las secreciones bronquiales se recoge mediantebroncoscopio. Recogida de muestras del tracto respiratorio superior: .el esputo es una muestra menos relevante por la posibilidad de la contaminación por saliva. una muestra mas profunda se recoge mediante broncoscopio con lavado bronco-alveolar (BAL) para buscar Pneumocistis carinii y hongos. los huevos. pleural. basta con impregnar la torunda en las heces en la parte donde se observa sangre.neoformans).tuberculosis y C. la faringe posterior y las zonas de inflamación.

se toma la muestra a primera hora de la mañana antes de lavarse. conjuntivales. de forma aséptica. hasta su inoculación. se echa el primer chorro. la muestra liquido se inyecta a traves del tapón de goma después de expulsar el aire de la jeringa y aguja. 1º para estudio de gonococos 2º para clamidias o ureaplasmas). exudado vaginal => el hisopo se sumerge en el fornix posterior de la vagina.se obtiene mejor con una jeringa y aguja.se realiza por el personal de enfermeria Recogida de muestra de tracto genital . existe también un hisopo en un tubo anaerobiosis Envió de muestras (las medidas especiales para un envió por correo a un laboratorio de referencia): . Recogida de orina . a los que debe expulsarse todo el aire. Transporte de muestras: . las partes genitales se lava solo con agua. pero contiene tioglicolato de sodio como reductor.se utiliza un tubo con escobillón de algodón como medio de transporte. Sondaje vesical (puncion de sonda) y puncion suprapubica . pH regulado. Procedimiento para muestras en anaerobiosis .Metodos convencionales => el mas utilizado es hisopos en tubos de plástico que llevan incorporados diversos medios de transporte que consiste en un agar semi-solido. para aislamiento declamidias y micoplasmas.el frasco estéril no debe abrirse antes de la recogida. carece de nutrientes. exudado cervical => se inserta un hisopo especial (como uretral) en el canal cervical y rotando-lo y moviendo-lo durante 30" antes de retirar. para aislamiento de gonococos pueden sertransportados en el medio de Stuart modificado o en el medio de Amies con carbón en temperatura ambiente. se recoge la segunda mitad unos 20-30 ml.paciente 6 portaobjetos (se toma durante 6 días consecutivos) con cinta adhesiva transparente. el medio es tampon con sacarosa y ATB. se aplica la cinta sobre los margenes del ano con una suave presión. se recoge a primera hora de mañana para estudio microbiológico.Transporte de muestras para estudio en anaerobiosis => cuando la muestra se va a procesar dentro de 30 minutos. si la demora va a ser mayor. los mas utilizados => (1) Medio de Stuart (los exudados faríngeos. se retira y se coloca de en el porta. nasales y heridas) que mantiene un pH favorable e impide la deshidratación de las secreciones durante el transporte y la oxidación y autodestrucción enzimática de los patógenos presentes (2) Medio de Cary y Blair (muestras fecales) donde las salmonellas y las shigelas pueden recuperarse hasta 49 días después de la toma de muestras y Vibrio cholerae hasta 22 días después. para prolongar la viabilidad de los microorganismos cuando exista demora entre la recogida y su cultivo. se usa un tubo /frasco ampolla lleno de CO2 y libre de O2 con N2/ H2 con indicador en agar o caldo. se puede refrigerar si hay demora en el proceso. puede servir como transporte una jeringa con una aguja insertada en un tapón de goma. . exudado uretral => el hisopo se introduce 2 cm dentro de la uretra y se rota suavemente antes de retirarlo (muestras separadas para el cultivo de gonococos y clamidias o ureaplasmas => se utiliza 2 escobillones.

determinación solicitada) 2. datos de la muestra. La muestra <de 50 ml debe ser envasado en un recipiente hermético irrompible con espacio suficiente entre ambos para retener en caso de rotura. Stafilococcus aureus (B hemolítico) y en Cled.Procesamiento de las muestras en microbiologia clínica (protocolos de siembra) Normas básicas generales (antes de proceder al procesamiento de la muestra): 1.coli (sensible a colistina . datos clínicos. Tener constancia de que la obtención de la muestra ha sido realizada correctamente. => Enterobacterias y también Pseudomonas. bien en placa.j. Chlamydia). [b] Agar Mac Conkey (selectivo para bacilos Gram-) => se siembra por agotamiento en cuadrantes (puede ponerse un disco de Colistina en el inoculo para ayudar a la identificación de E. en Cled/AS no crecen cocos Gram- (Neisseria. el envase externo se identifica con un rotulo rojo y blanco para Agentes biológicos /Material bio-medico. se separa el suero y se envía en un tubo estéril . Procesamiento de las muestras 1. La siembra de dicha muestra se hará en los medios idóneos para cada caso. los fragmentos de pelos o raspados de piel y uñas para el aislamiento de hongos pueden ser mantenidos a temperatura ambiente durante varios días antes de ser inoculados (protegidos del polvo). el envase se coloca dentro de otro envase para el envió. terapéutica seguida. siguiendo las normas y criterios establecidos por el laboratorio. las característica lactosa (+) => amarillas o lactosa (-) sin cambio de color => azul verdosas. Orinas (debe llegar al laboratorio en contenedor estéril y ha de conservarse a 4ºC en menos de 24 horas) [a] Agar sangre.común en orinas)..La sangre no se envía entera. o bien en tubo. Tema 5 .para contar colonias. Volante de petición debe estar bien cumplimentada (filiación y datos administrativos del paciente. Manejo inicial de las muestras en el laboratorio . observaremos las características de lactosa (+) => colonias rojas y lactosa (-) sin cambio de color => rosa. crecenbacilos Gram. crecerán todo tipo de germenes: cocos Gram+.la mayor parte de las muestras para estudio bacteriológico que vayan a demorarse en su procesamiento deben mantenerse en la nevera a excepción de LCR. realizar antibiograma). en AS se comprueba las características hemolíticas o no de las bacterias e. por agotamiento y/o método cuantitativo. chocolate o Cled/Cystine-Lactose-Electrolyte- Deficient (medios general y especifico para orinas) => se siembra en 3 direcciones/ cubrir totalmente la superficie (cuantitativa en Cled o AS .Muestras que contengan virus deben ser refrigeradas inmediatamente y enviarse en una caja con unidades comerciales refrigerantes . así como su recogida. 3. bacilos Gram-. transporte y conservación. . Moraxella. levaduras.

ureasa (+) tardío. las colonias lactosas+ no son patógenas (coliformes fecales) y no se investigan. lactosa (-). colonias mucosas. ureasa (+). en SS las Salmonellas y Shigella serán el del medio (caramelo) y también con el fondo negro (Salmonellas SH+ y lactosa. sonbacilos móviles. Coprocultivos (contenedor especifico para coprocultivo "Cary y Blair" / bote de orina. sensible a Colistina. móvil. B hemolítico. se siembra enla lengüeta del tubo preparado en pico de flauta. coagulasa (+).E. . .). sensible a Colistina. . se siembran por agotamiento en cuadrantes). sensible a Colistina. sensible a Colistina y bacilos Gram. La inhibición selectiva de organismos gram negativos y gram positivos se obtiene mediante cristal violeta (inhibidor de Gram+).Stafilococcus aureus => coco Gram+. permanece verde. oxidasa (-).Streptococcus faecalis => coco Gram+.conservada a 4ºC.bacilos inmóviles en fresco y sensibles a Colistina. en Hecktoen las Salmonellas spp => colonias lactosas (-). fermentador de manitol.Klebsiella spp => bacilo Gram-. sensible a Colistina.epidermidis). .Candidas spp (todas) => morfología de levaduras (parece como hematíes) . Irgasan (Triclosan) y novobiocina (inhibidor de S.Proteus spp (todas) => bacilo móvil Gram-. lactosa (- ). SH2 (-). las colonias consumidoras decitrato (+) => vira a azul y las que no.Yersinia pestis. Triptófano Desaminasa/TDA (+). Los coliformes fecales no fueron capaces de utilizar el citrato como fuente de carbono ni a las sales de amonio como fuente de nitrógeno. oxidasa (+) 2. Yersinia enterocolitica y Yersinia pseudotuberculosis. . las Shigellas spp => lactosas (-) . catalasa (-). colonias lactosa (+) => rojizas. [b] Agar Yersinia CIN => para buscar colonias de Yersinia spp (rosa clarito. indol (+) . procurar procesarla en <24H. inmóvil. oxidasa (-). catalasa (+). Los coliformes no fecales como Enterobacter aerogenes o Salmonella enteritidis podían utilizar el citrato en este medio dando una reacción alcalina) en base a su capacidad de utilizar el citrato (mediante citrato permeasa) Los gérmenes mas frecuentes que podemos encontrar (en orina se identifican especies): .[c] Agar Citrato de Simmons (solo en algunos protocolos). desoxicolato sódico (inhibidor de Gam+) y los agentes antimicrobianos: cefsulodina. verdosas y pueden ser SH2/sulfihidrogeno/ acido sulfidrico (+) con fondo negro. [a] Hecktoen o SS => medios selectivos y diferenciales donde crecerán el generoSalmonella y Shigella.Pseudomonas spp => bacilo Gram-.) que aparece como lactosa (+). lactosa (+). e móviles. coli (el mas frecuente) => bacilo Gram-. resistente a Colistina. lactosa (+). las colonias lactosas (+) en este medio serán amarillas. móvil. oxidasa(-). tardío. se usa para la diferenciación deEnterobacterias (para diferenciar entre coliformes y coliformesfecales.

coli y C.pleomórficos. el extracto de levadura y la peptona proporcionan el nitrógeno y las vitaminas. sensibles a Nalidixico (especies C. El citrato sódico. la bilis de buey y un pH alcalino fuerte inhiben los organismos Gram+ y suprimir los coliformes (inhibidor para la mayoría de las entero-bacterias). al hacer la prueba del hipurato C.jejuni seran (+) y C. en fresco aparecen en coma/en S. el tiosulfato sódico. [e] Agar McConkey (solo en algunos protocolos) => los coliformes aparecerán como colonias rojas por ser lactosas (+). favoreciendo el crecimiento de Vibrio . el selenito de sodio inhibe la flora Gram+ y la mayoría de la flora entérica excepto Salmonella spp. hipurato=> un procedimiento cualitativo para determinar la capacidad de las bacterias de hidrolizar enzimáticamente (hipuricasa) el hipurato sódico que da lugar a acido benzoico y glicina un compuesto de color morado.jejuni)resistente a Nalidixico el C.coli (-).[c] Agar Campylosel => crecerá Campylobacter spp (bacilos Gram. fetus.con flagelos) como colonias pequeñas translucidas. P. [d] Caldo Selenito => caldo enriquecido para los géneros Salmonella y Shigella. no es necesario??? [f] Agar TCBS /tiosulfato citrato bilis sacarosa (detectar Vibrio cholerae) => aparecen colonias de color amarillo sacarosa (+). oxidasa (+) y son bacilos Gram. ureasa (+) oxidasa (+)catalasa (+).

oxidasa (-) y catalasa (-). anaerobio facultativo. 3. El azul de bromotimol y el azul de timol son indicadores de pH. y el cloruro sódico estimula el crecimiento. catalasa (+). [c] Agar Thayer Martin o New York => buscamos N. se siembra por agotamiento en cuadrantes). son diplococos Gram-. El tiosulfato sódico es una fuente de azufre y actúa con el citrato férrico como indicador para detectar la producción de ácido sulfhídrico/SH2. al fresco como coco-bacilos inmóviles. prueba de látex (+). Vibrio Cholerae es lactosa (-). catalasa y oxidasa (-). [b] Agar chocolate => buscamos Haemophilus spp como colonias muy pequeñas grisáceas que crecen bien por ser gérmenes exigentes en su crecimiento que requieren factor X y/o V (proceden de la degradación de la Hb). oxidasa (+) que fermentan la glucosa pero no el resto de los azucares. cuya mayoría es halofílica. En Mc.gonorrhoeae o N. La presencia de sangre humana favorece el crecimiento de las especies estudiadas. ya que producen ß-hemólisis alrededor de las colonias. oxidasa y catalasa variable.meningitisque aparecerán como colonias de color gris. La sacarosa (+) es un carbohidrato fermentable.y de las levaduras. anaerobio facultativo. son cocos Gram+. Gram-. [a] Agar Sangre (medio general) => buscamos Streptococcus B hemoliticos del grupo B (S. .agalactiae). La ß-hemólisis en agar con sangre humana es altamente indicativa de presencia de G.vaginalis. La alta concentración de sodio favorece el crecimiento de Vibrio cholerae que es halotolerante (tolera el medio salado) y de otras especies de Vibrio. Gram variable. que aparecerán como colonias pequeñas translucidas con un halo de B hemólisis alrededor de la colonia. [d] Agar Gardnerella => buscamos Gardnerella vaginalis. como colonias B- hemolíticas y al fresco como bacilo pequeño. Exudados vaginal y uretral (la muestra llegara en uno o varios escobillones. Los antibióticos incluidos en el medio inhiben la mayoría de los contaminantes Gram.cholerae porque este organismo essensible a los entornos ácidos. también podemos colocar discos de factor X y/o V y mirar el satelitismo.

Cuando sean muestras de UCI o provenientes de neumonías se siembran siempre. solo se siembra cuando en el Gram. 5.la muestra llegara en contenedor estéril/ bote de orina. Semen . buscando en cada caso los mismos gérmenes que en el caso del exudado vaginal. Agar chocolate. [a] Agar Sangre => buscamos colonias de Streptococcus . Agar Sangre.5 (recuento en fresco/al microscopio).la muestra ha de llegar en contenedor esteril y conservarse menos de 24H a 4ºC. se siembra por agotamiento en cuadrantes. Roiron. Thayer Martin o New York. Esputo . McConkey .[e] Vagicult o Roiron (medio liquido) => crecen levaduras (Candidas spp) yTrichomonas (protozoo unicelular flagelado). el cociente leucocitos/ celulas epiteliales sea > 2. [f] Agar Sabouraud (se puede incluir para detectar Candidas spp) [g] Medio de detección de Micoplasmas y Chlamydias 4. y cultivo de Clamydias. si es < a 1.5 es dudoso. antes de sembrar se observa por el microscopio si la muestra es valida/ no esta contaminada por saliva. se siembra por agotamiento en cuadrante en medios: Cled.

pneumoniae oBranhamella catharralis. se tiñe muy mal. no fermenta ni oxida los azucares. en general. que al fresco como coco-bacilos. La inhibición del crecimiento de las bacterias Gram+.anaerobios y Bacteroides (bacilo Gram-. selectivo para bacilos Gram. [d] Medio de Lowestein-Jensen (o Coletsos) => para rescatar Mycobacterium tuberculosis.pneumoniae >> colonias verdosas (alfa hemólisis) y al fresco como coco Gram+. [e] Medio Legionella => muestras de UCI. 7. catalasa (-). levaduras y mohos. catalasa (+) que no utiliza ningún azucar (no es fermentadora). Cepillado bronquial (la muestra vendrá en el cepillo y se conservara a 4ºC < de 24H). [b] Agar chocolate => buscamos Haemophilus spp como colonias puntiformes translucidas. sensible a la Optoquina. es hipurato+ => un procedimiento cualitativo para determinar la capacidad de las bacterias de hidrolizar enzimáticamente (hipuricasa) el hipurato sódico. el Glicerol mejora el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis. Exudado faringeo y oral (la muestra viene en torunda. Presencia de verde malaquita en el medio inhibe las floras mayoría acompañante. colonias de Legionella. anaerobio estricto). Branhamella catarralis >> colonias blanco-grisáceas y al fresco como cocos Gram-. oxidasa (+). bacilos acido alcohol resistente (Zhiel Neelsen+) de crecimiento muy lento. se siembra en los mismos medios que en el caso anterior (esputo) añadiendo ademas: agar sangre anaerobios (ASA) o medio AKV (agar sangre kanamicina-vancomicina). la Legionella pneumophila es bacilo Gram. se sembrara por agotamiento en cuadrante). agar chocolate polyvitex (contiene factor V/ NAD y factor X /hemina procedente de ladegradación de Hb) [c] Agar McConkey => donde creceran Enterobacterias y otros bacilos Gram-. sino que utiliza los aminoacidos. la mayoría de las bacterias Gram-. 6. los niveles bajos de la penicilina y el ácido nalidíxico también están presentes en el medio de LJ para inhibir el crecimiento de lo Gram+ y Gram-.(en realidad. S. [a] Agar sangre => crecera todo tipo de gérmenes (medio general enriquecido) . necesita L-cisteina para crecer y también iones férricos Fe. movil. Gram-. a través de una combinación optimizada de 3 antibióticos. con el fin de limitar el crecimiento de especies de micobacterias solamente. catalasa y oxidasa variable. pero reduce los nitratos a nitritos/ nitratasa+(lo que le diferencia del genero Neisseria que ademas es fermentadora de glucosa y maltosa). Las colonias que crecen en medio Agar Legionella y no crecen en medio AS deben considerarse. con alta probabilidad. aerobio exigente. que se desinfecta y se solidifica mediante un proceso de espesamiento.

mientras que las anaerobias facultativas o anaerobias estrictas crecen en las profundidades del medio. y tiene un tipo terminantemente respiratorio de metabolismo (Mycobacterium tuberculosis. Exudados varios . medio selectivo para Gram+/ inhibe los Gram. medio selectivo para Gram+/ inhibidor Gram. pero no puede crecer en la presencia de un nivel del oxígeno equivalente a una atmósfera de aire (oxígeno de <21%) => Campylobacter fetus. crecen en la parte superior. Bacillus). Anaerobio estricto: Un organismo que es incapaz de crecimiento oxígeno- dependiente y no puede crecer en la presencia de una concentración de oxígeno equivalente a una atmósfera de aire (oxígeno de 21% . estas se pueden clasificar en :  1. permite el desarrollo de una amplia variedad de microorganismos. agar sangre kanamicina y vancomicina) => medios selectivos para bacilos Gram. [f] Caldo Tioglicolato => crecen bien todo tipo de bacterias aerobias o anaerobias. anaerobios (estrictos) y Bacteroides. puede tolerar un nivel del oxígeno equivalente o mayor de una atmósfera de aire (oxígeno del 21%).  3. (Clostridium botulinum).  4. . Pseudomonas y Neisseria. Microaerofílico (anaerobio aerotolerante): Un organismo que es capaz de un crecimiento oxígeno-dependiente. Anaerobio o Aerobio facultativo: Un organismo que puede crecer bien en ausencia del oxígeno y en la presencia de un nivel de oxígeno equivalente a una atmósfera del aire (oxígeno de 21%) => Enterobacterias.=> para deteccion de Streptococcus B-hemoliticos. [e] Agar ANA (agar sangre anaerobios/ASA. Además. se observa que las bacterias estrictamente aerobias. La muestra ha de llegar en tubo estéril y se conservara a 4ºC menos de 24H... 8.=> crecerán bien los Steptococcus B-hemolíticos.abscesos heridas . Haemophilus spp. Vibrio spp. incluidos los nutricional-mente exigentes. [a] Agar sangre => crecerá todo tipo de gérmenes [b] Agar chocolate => idem [c] Agar Mac Conkey => crecerán las Entero-bacterias y otros bacilos Gram (-) poco exigentes.  2.. [d] Agar CNA /agar sangre (de cordero) colistina nalidixico.poco exigentes.[b] Agar chocolate => crecera todo tipo de gérmenes [c] Agar Mac Conkey => creceran las Enterobacterias y otros bacilos Gram. (se sembrara por agotamiento en cuadrantes. Aerobio estricto: Un organismo el cual requiere utilizar el oxígeno como aceptador terminal de electrones . Enterococcus y Staphylococcus?? [e] Agar Sabouraud (solo en orales) => deteccion de Candidas spp. aunque también puede utilizarse agarAKV.nada de O2). RELACION DE LAS BACTERIAS CON EL OXIGENO EN TIOGLICOLATO En base a la relación de las bacterias con el oxígeno. [d] Agar CNA /agar sangre (de cordero) colistina nalidixico.

anaerobios yBacteroides. Gram-. conservando a 37ºC en el Bactec (detecta CO2) hasta su identificación. como pequeñas colonias no hemolíticas y al fresco se ve como diplococos. pericardio.se siembra mediante la técnica de Maki (rodamiento del cateter) [a] Agar chocolate => crecerán casi todo tipo de gérmenes. [d] Medio tioglicolato (caldo) => medios para anaerobios y aerobios. (f) Ademas se hará una extensión para Gram. Hemocultivos . Sino. [b] Agar sangre => crecerán bien casi todo tipo de gérmenes y podrá verse sus características hemolíticas si las tuvieran. como coco-bacilos. catalasa (-). [d] También puede ponerse en una placa de agar MacConkey. la muestra ha de llegar en tubo estéril y su conservación no se ha de demorar mas de 24H a 4ºC.se siembra por agotamiento en cuadrante del sedimento del tubo centrifugado a 1500 rpm a 3000 rpm durante 20 minutos. [d] Agar CNA => agar columbia colistina nalidixico (sangre de cordero). si en el tubo hay mas de 1 ml de muestra. Cateteres y sondas . 12. conservarse a 37ºC. Anaerobios aero-tolerantes: Pueden crecer con o sin oxígeno pero su metabolismo es siempre fermentativo (Lactobacillus) 9. 10. [c] Caldo tioglicolato => si se observa crecimiento se hará un pase por Agar chocolate. también puede crecer Streptococcus pneumoniae (neumococo) que aparecen como colonias verdosas (Alfa hemolisis) y al fresco como cocos Gram+. fermentador de glucosa y maltosa (la fermentación de este azucar le diferencia del gonococo. selectivo para Gram (+) [e] Agar ASA => agar sangre anaerobios selectivo para bacilos Gram.) . Gram-. Otros líquidos estériles (sinovial. [a] Agar sangre => buscamos Neisseria meningitidis.meningitidis. catalasa (+).. sobre todo exigentes. 11. Liquido cefalorraquídeo . La muestra se ha de procesar de inmediato y si no es posible. oxidasa (+). que al fresco aparecerá. [b] Agar chocolate => crecerán casi todo tipo de gérmenes.se siembran por agotamiento.. [c] Agar Thayer-Martin => medio selectivo para Neisserias. pleural. catalasa y oxidasa variable. vortear el tubo. 5. . crecerán bien los meningococos /N. [c] Agar McConkey => crecerán Enterobacterias y otros bacilos Gram. sensible a la optoquina. y podrán crecer bien algunos exigentes como el Haemophillus. la muestra se introduce en el vial de hemocultivos. con características hemolíticas de algunos de ellos. [b] Agar chocolate => ídem y ademas pueden crecer Haemophilus spp como colonias puntiformes translucidas.poco exigentes. [a] Agar sangre => crecerán casi todo tipo de microorganismos.

nitrogeno organico.paso previo para el estudio de identificación de un microorganismo problema. fuente de nitrógeno (menos energética) => proteínas completas (gelatina . pruebas de CMI (concentración minima inhibitoria) . extractos de carne y sales de amonio). Otros requerimientos no energéticos: Factores de crecimiento => componentes que muchas bacterias no son capaces de fabricar por si solas para su crecimiento (aminoácidos => cisteina. magnesio y en concentraciones mas bajas => cinc. amoniaco. citrato sódico. iones metálicos.conocer el metabolismo en función del nutriente o sustrato que utiliza (lactosa) o metabolito que produce (indol). aminoacidos. sodio. cobalto. CO2 (bacterias fotosintetizantes y quimiolitotrofas). conocer el tipo de azucar utilizado => útil para su identificación bioquímica y clasificación taxonómica.separar y aislar distintas especies microbiales presentes en una muestra. existen grandes diferencias entre los medios de cultivo que nos sirven para diferenciar cada tipo de microorganismo que podrá crecer en unos medios de cultivo y no en otros. antibióticos => inhibidores y destructores. azucares (mono o disacáridos incluso almidón => glucosa. . cisteina. lactosa. Requerimientos energéticos y no energéticos de los medios de cultivo - fuente de energia (fuente de carbono y de nitrogeno) y fuente no energética (azufre. . . de arranque y inhibidores) necesarios para el desarrollo (crecimiento) de cultivos microbiales. maltosa). . tiamina). vitaminas.Medios de Cultivo en bacteriología clínica (Clasificación y Preparación) Medios de cultivo . . caseína . conservar las especies microbiales o muestras. cristal violeta en medio Mac-Conkey => impide Gram+). iones metálicos que estimula el crecimiento).estudios macroscópicos => visualizar las características de las colonias en medios sólidos.determinar actividad proteolítica/gelatinasa. fuente de carbono => acido acetico. conocer la fuente nitrogenada => util para clasificación taxonómica. factor X y factor V procedente de la degradación Hb. manganeso. iones metalico => hierro. . tiosulfatos. fósforo.Tema 6 . colorantes laeosina azul de metileno utilizado por medio Levine. en función de sus requerimientos. hongos y parásitos según sus necesidades nutricionales de cada uno. muy útiles para la identificación y tipificación bioquímica de las bacterias (azida sodica => impide Gram-. etc. cobre. fuente de azufre => sulfatos. bases puricas y pirimidicas). sales de amonio. factores de arranque => sustancias que permite a la bacteria salir de su fase de latencia y comenzar su fase de crecimiento exponencial (fuentes de energía => glucosa. factores de crecimiento. aminoacidos (metionina. péptidos/polipeptidos (peptonas .realizar antibiogramas determinando la sensibilidad (mayor/menor) de la bacteria problema a distintos antibióticos. f. potasio.extractos de levadura. alcohol. factores inhibidores => componentes que bloquar el proceso metabólicos de algun microbio.trípsica de caseína/triptófano => formación de indol) o aminoácidos y otros => nitratos. Función de medios cultivo: . fuente de fosforo => fosfatos.compuesto por distintos nutrientes requeridos para cultivar gérmenes como las bacterias.

Condiciones que ha de cumplir un medio de cultivo:
1. Una composición de nutrientes adecuada (requerimientos energéticos y no
energéticos)
2. Condiciones físico-químicas apropiadas:
- Temperatura optima/ideal (según la especie microbiana
=> psicrófilas <20ºC;mesófilas 18-45ºC; termófilas > 45ºC; las
bacterias patógenas del hombre 35-37ºC; fuera de estas no crecen o crecen mucho
mas despacio;) e.j.: Yersinia 22ºC, Campylobacter45ºC (los dos son
gastrointestinales)
- Grado de humedad (cantidad de agua que necesita para crecer)
- pH adecuado es en general cercano a la neutralidad +/- 7(estabilizante de pH
=> buffers o tampones que facilitan el crecimiento); pH acido => Tiobacilos (cerca
a 0); pH alcalino => bacilos ureasa positivo/ Proteus (en torno a 8) y Vibrio
cholerae (pH 9)
- Presión osmótica en general isotónia (300 miliosmoles)
- Presencia o ausencia de oxigeno; la mayoría de las bacterias aerobias y
anaerobias son facultativos que se desarollan bien con y sin O2; existen pocos
anaerobios estrictos; bacterias microaerofílica => produce mas CO2.

Principales tipos de medios de cultivo
- según su proporción de agua / su consistencia (sólidos, líquidos, caldo)
- según su uso / su utilización (para aislamiento, crecimiento en general /recuento,
identificacion, mantenimiento de cepas, para antibiogramas)
- según su origen del que proceden (naturales, sintéticos y semi-sintéticos,
complejos)
- según su presentación (deshidratados o liofilizados, sólidos en placa
petri, sólidos en tubo, líquidos en tubo, semi-sólidos en tubo, doble fase en frasco o
tubo).

Medios de cultivo según su proporción en agua:
- Medios sólidos > 15% de agar; para aislamiento, identificación, elaboración de
antibiogramas) =>1881 Koch utiliza la gelatina (inconveniente => se funde a 24oC y
existen bacterias gelatinasa positiva que destruiran tal medio);
posteriormente Hesse su alumno usa el agar (medio inerte).
- Medios líquidos/caldos => contiene agua, fuente de carbono, sales minerales
y algunos lleva factores de crecimiento, vitaminas, peptonas y aminoácidos.
- Medios semisolidos => agar semi-sólidos (<5% de agar)

Medios de cultivo según su uso o utilización:
- Medios para aislamiento => {a} medios enriquecidos (componentes basicos
+ caseina soja, triptofano para microorganismo exigente; e.j. agar sangre/chocolate
{b}medios selectivos (componentes basicos + componentes que impiden el
crecimiento de algún tipo bacteriano para seleccionar) e.j. medio Rothe (para
aislar Streptococcus faecalis/Gram+) contiene azida sódica que impide Gram-; la
mayoria de medios selectivos son también medios diferenciales {c} medios
diferenciales (= medios selectivos + sustancias resalta las caracteristicas
microbiales de algunas; e.j. medio Levine (contiene eosina y azul de metileno que
inhibe Gram+ y algunas Gram-, facilita a las enterobacterias y lactosa(para las
fermentadoras)
- Medios para crecimiento en general => liquida o solida sirve para el
crecimiento de la mayor parte de las bacterias (componentes basicos + sales y agua)
; e.j. el caldo comun (contiene extracto de carne, peptona, glucosa, cloruro sodico y
agua); el caldo Tioglicolato.

- Medios de identificación (= medios diferenciales) => sirve para
clasificar taxonómica-mente el microoganismo; e.j. agua peptonada = indol
positivo; caldo Stuart urea-indol = ureasa; glucosa = fermentación de glucosa
(sacarolitico = sacarosa positivo).
- Medios de mantenimiento de cepas => mantener las cepas vivas durante
periodos de tiempo relativamente largos a temperaturas bajas para impedir su
crecimiento; e.j.leche descremada congelada
- Medios para antibiogramas; e.j. Proctor (antibiogramas fungicas), Mueller
Hinton(a.b.bacterianas), Wilkins-Chapman (a.b. bacteriana anaerobicas).

Medios de cultivo según su origen
- Medios naturales => poco utilizados, se preparan artesanalmente, constituidos
por ciertos tejidos, liquidos organicos (leche, huevo, patata, suero sanguineo)
- Medios semi-sintéticos => parte de su composicion son extractos
naturales(levadura, malta, patata, sagre, leche) + constituyentes sintéticos
- Medios sintéticos => estructuras sintéticas mas o menos puras y químicamente
definidas disueltas en agua destilada (los mas utilizados en bacteriologia y en
general); contiene: fuente de carbono o azucar, fuente de nitrógeno inorgánica
como iones NO-3, NH+4 o orgánica como peptona, aminoácidos, aminas, etc.,
compuestos minerales como oligoelementos, factores de crecimiento (vitaminas,
aminoacidos, bases puricas o pirimidínicas).
- Medios complejos => son los primeros que se utilizaron en bacteriología; en
actualidad se uss mas en parasitología y virología; se preparan de forma compleja
(tejidos animales/carne de musculo, higado, corazon, yema de huevo, azucares,
pepetonas, vegetales, etc.

Medios de cultivo segun su presentacion
- Medios deshidratados o liofilizados
- Medios ya preparados
- Medios solidos en placa Petri
- Medios solidos en tubo
- Medios liquidos en tubo
- Medios semisolidos en tubo
- Medios de doble fase en frasco

Principales medios utilizados en microbiología
1. Agua peptonada (peptona en medio acuoso con pH 7 a 37ºC 24-48 horas) =>
determinación de la producción de indol debido a su alto contenido en triptófano;
tras laadición de 5/6 gotas de reactivo Kovacs en hidróxido potásico (KOH 40%) =>
anillo rojo en la superficie indicara indol positivo.

2. Medio Chapman (selectivo y diferencial) => aislamiento
de Staphylococcus (halófilos)S.aureus (coagulasa+); Comp: alto contenido de
cloruro sódico 75 gr (agar manitol salado); 15 gr de D-manitol (diferencial =>
azucar utilizado por algunos estafilococos), 25 gr de rojo fenol (indicador positivo
de pH a 37ºC 24-48 horas => amarillo dorado); es orientativa, se debe completar la
prueba con pruebas bioquímicas (coagulasa/latex); S.epidermidis no fermentan el
manitol, por tanto el color sigue rojizo o purpureo.

3. Agar de Thayer y Martin (Agar New York City) => no permite el crecimiento
de muchos microorganismos, pero si permite aislar gonococos y meningococos
(Neisseria); Comp: agar chocolate/ sangre calentado + formula polyvitex
(vitaminas y aminoácidos) + VCAT (vancomicina => inhibe los Gram+, colistina =>
inhibe los coliformes /Gram-,anfotericina =>
antifúngico, trimetropinsulfametroxazol => antibiótico de amplio espectro).

4. Agar chocolate Polyvitex => medio general enriquecidos donde crecen la
mayoría de bacteria y Haemophyllus); Comp: agar chocolate + formula polyvitex
(vitaminas y aminoácidos) incluyendo factores X (hemina) y V (NAD/ nicotinamida
adenina dinucleótido) proporcionados por la hemoglobina y PolyViteX.

5. Medio base Christensen (líquidos y sólidos) => para la prueba de la ureasa;
ureasa+ de rojo => rosa; gérmenes con ureasa+ => Proteus y Helicobacter pilory

. Medio Cled/Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient (solido) => recuento e identificación de gérmenes en las vías urinarias. Medio citrato de Simmons (agar solido) => prueba de citrato (como fuente de energía) para la investigación de bacilos Gram. azul de bromotimol (indicador del consume lactosa verde => amarillo).(la diferenciación entre coliformes y coliformes fecales. y prueba de Rojo de Metilo(acidificación del medio con pH <4. Enterobacter aerogenes.6. azul de bromotimol(indicador pH.coli (amarilla L+). las colonias mas frecuente => E.3 butanodiol o por oxidación a diacetilo). gérmenes con citrato permeasa => Klebsiella pneumoniae. Comp: citrato sódico. E. de que el citrato esta consumido /se alcalina. verde => azul). Los coliformes fecales (E.5 y cambio de color a rojo). Streptococcus faecalis (amarilla L+). Pseudomonas aeruginosa (verde L- ). Klebsiella (amarilla azulada y muy mucosa (L+). Comp: lactosa en alta cantidad.Staphylococcus aereus (amarilla L+). Proteus (azul L-). gérmenes con VP+ =>Klebsiella pneumoniae y Enterobacter aerogenes. 7.coli y Salmonella. Los coliformes no fecales como Enterobacter aerogenes o Salmonella enteritidis podían utilizar el citrato en este medio dando una reacción alcalina). Salmonella. gérmenes con RM+ => Proteus.coli) no fueron capaces de utilizar el citrato como fuente de carbono ni a las sales de amonio como fuente de nitrógeno. Medio Clark y Lubs (caldo/ liquido) => para diferenciar entero-bacterias medianteprueba de Voges-Proskauer (producción de acetoína/ acetil metil carbinol => por reducción a 2. 8.

es un medio general enriquecida. para aislamiento de entero-bacterias Gram. soja. gamma hemólisis/ Pseudomona causa gastro intestinales (no hemolizar) => sin halo. 10. Klebsiella) Comp: alto contenido de lactosa (indicador fermentadora). alfa hemólisis/ neumococo (parcial) => halo verdoso/difuso alrededor de la colonia. Enterobacter. Shigella.9. Agar sangre (se comercializa con nombre TSA => tripticasa.coli. agar) =>investigación de microorganismos hemolíticos (consume hematíes). Comp: sangre de cordero (agar columbia) o caballo o ternero => estériles y desfibrinadas. beta hemólisis/ Streptococcus B- hemolítico y Staphylococcus aureus que causan anginas (total) => halo transparente.fastidiosas).(E. 11. Medio eosina azul de metileno /EMB (Medio Levine) => selectivo y diferencial. Salmonella. Proteus. eosina azul de metileno (indicador de pH y inhibidor los Gram+ y las floras de Gram. Medio de agar Hektoen (diferencial y selectivo) => aislamiento de entero- .

Medio MacConckey (color rosa) => aislamiento e identificación de entero- bacterias Gram-/ poco exigentes. muy utilizado para la identificación de entero-bacterias. los gérmenes productor de SH2+ => Proteus. Salmonella y Citrobacter. . Klebsiella. peptona. lactosa (indicador de L+ => amarillo/naranja) sacarosa.coli y Enterobacter aerogenes). glucosa. L+ (consumidor de lactosa) => rojo (E. cloruro sodico. glucosa.coli. Citrobacter. lactosa (indicador L+). fuschsina ácida (indicadores de pH). peptonas.exigentes => Neisseria. citrato férrico amoniacal y tiosulfato sódico (componentes para producir SH2). rojo fenol (indicador de pH). gas y SH2. iron) + 10 gr de sacarosa.bacterias patógenas Gram-. rojo neutro. L. Gram. azul de bromotimol. cuando se consume azufre/ disulfurasas+ => precipita el hierro y la colonia se vuelve negro (característica de Salmonella y Proteus vulgaris). cristal violeta (inhibidor los cocos de Gram+). Serratia. y después se basifican) => verde. pruebas de la lactosa. Comp: sales biliares (inhibe Gram+). 12. tiosulfato sódico y citrato férrico amoniacal(indicador de la producción SH2/H2S => puntos negro).(no fermentador)=> Salmonella. Enterobacter y Vibrio cholerae). 13. en condición normal es verde => fermentacion de lactosa/acidificación => vira a amarillo/naranja (características de fermentadora L+Escherichia. muy semejante y mas utilizado es TSI (triple sugar. Haemophyllus. los productores del gas CO2+ => Salmonella y Citrobacter y E. Comp: sales biliares (inhibidor Gram+). Shigella y Pseudomonas. Comp: lactosa (indicador de L+). Medio Kliger o KIA (Kliger Iron Agar) => medio solido en tubo (color caramelo). cuando se consume lactosa + peptona (se acidifican primero.

La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas allá de la línea de inoculación.14. Comp: selenito sódico (inhibidor de flora Gram+ y Gram. 16.excepto Salmonella). Medio Ornitina Movilidad/ MIO (preparado en tubo/ semisolido) => identificación de la movilidad bacteriana (entero-bacterias). Medio caldo F-Selenito (selectivo) => medio enriquecido con fosfato para el aislamiento de Salmonella. el germen que da resultado positivo de los 3 pruebas => E. . después también se hace cultivo con agar SS. Medio Mueller Hinton (general) => para la realizacion de antibiograma por el método de Bauer-Kirby 15.coli. capacidad para descarboxilar la ornitina(orinitina descarboxilasa /está dada por un color púrpura/ alcalinidad del medio y laproducción de indol (al añadir reactivo de Kovacs).

Vibrios y Pasteurella en sangre (hemocultivos). lisina descarboxilasa+ =>Salmonella que alcaliniza el medio y SH2+ (tiosulfato sódico + citrato de hierro amoniacal). sales biliares y verde brillante(inhibidor bacillos Gram+). especialmente del género Salmonella y especialmente Shigella (entero-bacterias patógenas). L. se puede utilizar para la identificación de lactasa+. desoxicolato de sodico (inhibe Gram+).Coli y Klebsiella) => rojas o rosadas. Medio Castañeda (caldo y solido) => búsqueda de gérmenes Brucella. verde malaquita => inhibidor de la mayoría de gérmenes. la prueba se confirma con tinción de acido alcohol resistencia(Con la tinción de Ziehl-Neelsen las micobacterias se observan . Comp. sacarosa y lactosa. 18. Comp: fécula de patata.17.: xilosa (la fermentan los entéricos menos Shigella). L.=> incoloras (típico de Shigella). 19. Medio agar S-S (color caramelo) => aislamiento de las bacterias patógenas importantes Salmonella y Shigella.E.y SH2. Comp: lactosa (indicador fermentadora de L). 21.y SH2+con la precipitación de hierro => negro (típico de Salmonella). Medio caldo Columbia => caldos para hemocultivos. Medio Agar XLD (agar xilosa-lisina-desoxicolato) => se utiliza para el aislamiento y diferenciación de bacilos entéricos Gram-.tiosulfato sódico y citrato de hierro (indicador de SH2). Medio de Lowenstein-Jensen (selectivo) => cultivo de Mycobacterium tuberculosis y otras micobacterias. rojo neutro (indicador de pH). L+ (coliformes . 20.

El agente reductor (L-cistina) y la elevada concentración de dextrosa en el medio favorecen el crecimiento de especies anaerobias p. Lactobacillus. Clostridios y Bacteroides. Medio Schaedler con vitamina K3 (caldo o agar solido) => para cultivo deanaerobios (estrictos y facultativos). permite la identificacion directa de: . 25. Enterococcus del grupo D. KES (Klebsiella. La presencia de factores de crecimiento como el extracto de levadura. Medio Sabouraud => para el aislamiento e identificación de hongos micelares y levaduriformes. con el fin de limitar el crecimiento => único de micobacterias. 24. Enterobacter. los niveles bajos de la penicilina y el ácido nalidíxico también están presentes en el medio de LJ para inhibir el crecimiento de Gram+ y Gram-. 22.y Gram+. Morganella). Providencia. Streptococcus. La gentamicina inhibe el crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram.micobacterias patógenas crecen muy lenta (+ 7 días). 23. respetando técnicas adecuadas de toma de muestras y su transporte. Medio CPS cromogénico (agar/ solido) => es un medio de aislamiento y de identificación destinado a las muestras urinarias. Medio Sabouraud gentamicina tetrazolium => para el aislamiento eidentificación de Candida (levaduriformes).como bacilos de color rojo). permite realizar (1) el recuento microbiano (método de inoculación estandarizado). (2) identificación de: Esch erichia coli. la hemina y la vitamina K3 y la adición de sangre de cordero permite el crecimiento incluso de las especies más exigentes. la concentración elevada de agar evita el crecimiento invasivo de Proteus. Serratia). Proteeae (Proteus. el medio se inocua directamente a partir de la orina.ej.

si no cumple esta condición.000 (dudoso).coli => coloración espontanea (rosa a burdeos) de las colonias productores de B-glucuronidasa (B-GUR) y coloración azul revelada por el reactivo indol cuando la cepa genera triptofanasa. la ausencia de color azul (indol-) se debe proceder a la pruebas de API. (3) Colonias de color azul-verdoso y observación de bacilos Gram. la identificación se debe proseguir mediante pruebas bioquímicas (ureasa+ => Klebsiella. observar la coloración después de unos 30 segundos => TDA+ da una coloración marrón +/. E. c. ornitina descarboxilasa+ => Enterobacter. incubar en la estufa con la tapa hacia abajo a 37ºC en aerobiosis. confirmar mediante una detección de indol (depositar una colonia sobre un disco de papel previamente embebido de una gota de reactivo R1 del envase ID Indol TDA) => indol+ da una coloración azul (E. Modo operativo . una gota de reactivo R2 del envase ID Indol TDA). (2) Colonias de color azul-verdoso y observación de cocos Gram+ mediante examen directo => Enterococcus.dejar atemperar las placas a temperatura ambiente. inocular la muestra con el asa calibrada de 10ul => sumergir el asa en la orina. TDA. efectuar indol => indol+ da color azul (Proteus.oscuro. ausencia de coloración azul es indol. Providencia o Morganella).estimar la concentración bacteriana comparando la densidad de las colonias presentes sobre la mitad superior de la placa con la del esquema. realizar estrías perpendiculares muy apretadas sobre toda la superficie de la placa.a. se examinan los cultivos después de 24 horas de incubación.000 (positivo) Identificación . Enterococcus y KES => coloración espontanea azul-verde de las cepas queproducen B-glucosidasa (B-GLU). mas de 100.(Proteus mirabilis).coli).100. b. Lectura e interpretación: Recuento .coli. se debe proceder a las pruebas de API. entre 1000 . da una coloración amarilla y la identificación se debe proceder a las pruebas de API.mediante examen directo => grupo KES. observar las colonias (1) Colonias de color rosa a burdeos o translucidas con centro rosa a burdeos=> presunción de E. <1000 (negativo). (4) Colonias incoloras a marrón-anaranjado => efectuar TDA (depositar sobre algunas colonias idénticas. descargar el asa al realizar una estría sobre un radio de la placa. Tema 7 . mantenerlo verticalmente.Metodos de Siembra (cultivo de las . Proteeae => coloración marrón revelada por el reactivo TDA cuando la cepa genera triptófano desaminasa (sin reactivo es incoloro). gelatinasa+ => Serratia).

escala 2 = 6 x10. escala 1 = 3 x 10. inoculación: {a} En medio liquido. Metodos de siembra .Inoculación sobre la superficie del medio solidificado (técnica de Kirby-Bauer) => se prepara el inoculo en un tubo estéril. se deja secar la placa 4-5 minutos en posicion semiabierta e invertida. con asa => se sumerge el asa cargada en el medio y se agita. se introduce en el tubo que contiene el medio. agar semi-solido => puede usar el asa en lugar de la aguja.cepas) Sembrar . se elimina el exceso presionando el escobillón con movimiento de rotación contra las paredes del tubo.Muestras viscosas o concentradas (análisis cuantitativo) => suspender un cultivo joven y puro o un producto patológico (muestra biológica) en 5 ml de solución diluyente (caldo de cultivo. . medio solido inclinado => puede realizarse tambien una siembra en estría por la superficie del medio con la misma aguja.Siembra en picadura (para ver la movilidad de los gérmenes en la zona de punción + pruebas bioquímicas) => se toma la muestra con la aguja o hilo. Preparación de inóculos (pequeña parte de muestra) . escala de Mcfarland => una serie de tubos con precipitación blanco de sulfato de bario por reacción de acido sulfúrico + cloruro de bario (escala 0. {b} En medio solido (en placa): .Ajustar con la escala con un gradiente de turbidez (tecnica de Kirby-Bauer) => tubos numerados como patrón de referencia según la concentración de microorganismos./ml. {c} En medio solido (en tubo): . se siembra la placa emplenando la técnica de los tres giros distribuyendo uniformemente el inoculo.Inoculación previa al vertido en placa (técnica de Barry .Siembra por estria en superficie inclinada => se toma la muestra con el asa /hisopo. suero fisiológico estéril o agua destilada estéril.6 /ml.no se utiliza mucho) => 0.5 x 10. desde el fondo y en progresión ascendente se desliza el asa en movimiento de zig-zag (se utiliza para pruebas bioquímicas y renovar cepas). . Metodos de inoculación y aislamiento de microorganismos 1. se extrae la aguja por la misma linea que se introdujo. se introduce un escobillón estéril impregnando.cultivar la muestra utilizando técnica y medios adecuados para conseguir el objetivo (identificar el microorganismo). quedando lista para ser utilizada (en los antibiogramas). con escobillón = con asa.1 ml de inoculo + 25 ml de medio cultivo => fundido/ atemperado a 45-55ºC para no esterilizar => homogeneizar => verter en la placa de Petri. se punciona en el centro del medio introduciendo la punta de la aguja hasta 2-3 mm del fondo del tubo. .5 = 1. con pipeta => se vierte el contenido de la pipeta sobre el medio de cultivo y se homogeneiza. .6. se ajusta mediante comparación visual aproximada o mediante la absorbancia de espectrofotometría.6/ml de microorganismos en el inoculo.

{f} Técnica de los tres giros => se siembra en estría la mitad de la placa. entre cada tramo se ha de flamear o cambiar el asa. se realiza la misma operacion sucesivamente en los otros 3 cuadrantes. {d} Técnica por agotamiento en cuadrantes (lo que usamos) => es muy similar a la anterior pero sin flamear el asa y estriando mas los cuadrantes. dejando las estrias muy juntas. siguiendo el borde de la placa. al final nos queda una placa muy bien tapizada. volvemos a girar la placa haciendo lo mismo. sin flamear el asa. mediante asa o escobillón. se deposita el inoculo en el extremo superior de uno de los cuadrantes y se siembra en estría. sin flamear o cambiar de asa. es decir se ha de flamear el asa. sembrando en estría la mitad superior de la misma. se siembra con el asa o con hisopo. las colonias mas aisladas las obtendremos en la zona mas distal del inoculo. con el asa se reparte en varios tramos. giramos la placa 90º y realizamos la misma operación. flamear el asa. se encuentran las colonias aisladas. a partir del inoculo. {e} Técnica de los 4 cuadrantes => se divide la placa en 4 cuadrantes (pueden rotularse por la parte posterior). Se realiza en urinocultivos para el contaje de las colonias. se gira la placa 90º. {c} Siembra en estría multiple => se deposita el inoculo en un extremo de la placa.2. en el ultimo de los cuadrantes sembrado. sin levantar el asa y sin flamearla. la colonia aisladas aparecerá en la zona sembrada en ultimo lugar.aislamiento (para obtener cepas puras/ bien aisladas) : {a} Siembra en estria o zig-zag => se deposita el inoculo en el extremo superior de la placa. tras la siembra del anterior. suavemente. se gira la placa y se estría. . {b} Siembra en tres direcciones => se deposita el inoculo en el extremo superior de la placa dejando deslizar hacia el centro para ello inclinaremos la placa (también se puede arrastras con el asa). haremos movmientos laterales de un lado a otro de la placa. los segmentos seguidos describen un poliedro regular y el ultimo tramo se efectua hacia el interior en el que se obtendran colonias aisladas. se repite la operación. es decir al acabar la siembra. Metodos de siembra . aprovechando mas la placa. el estriado ha de hacerse sin presionar el medio. en cada uno de ellos se sembrara el inoculo que queda adherido al asa. con un movimiento en zig-zag cada vez mas amplio de lado a lado de la placa.

la que tienen (formas S). compuesta por mureina (peptidoglicano . flagelos. las bacterias que no son sensibles a la tinción de Gram => BAAR/ acido alcohol resistentes (micobacterias). dar unpaso selectivo de algunas sustancias. cuyamaterial genético no esta rodeado por una membrana nuclear especial (procariotas). elementos facultativos (son elementos de supervivencia y virulencia que pueden estar o no presentes en la bacteria => capsula. pero la pierden (formas L). funciones => protegerse de cambios externos adversos. proteínas y ácidos teicoicos. 50% peso seco/mucha cantidad). Gram- => biestratificada y fina (1ª capa es mureina en poca cantidad y 2ª capa formada por polisacáridos proteínas.constituidos por elementos obligados (presentes en todas las bacterias eindispensables para su vida => pared celular.es el limite externo de la célula con estructura rígida. no tiene ácidos teicoicos). pelos/pilis. proporciona la especificidad de grupo y de tipo (clasificación).Gram+ => mono- estratificada y gruesa. relativamente sencillos. parecida a la pared celular de las células vegetales. . citoplasma.organismos unicelulares de tamaño 0. proporciona la resistencia a los antibióticos. implicada en la patogenicidad. violeta oscuro => Gram+ y color rosa => Gram-. Estructura .mantener la morfología de la célula. dar el color en la tinción de Gram. membrana plasmática.Tema 8 .2-2 um. ribosomas y la región nuclear). Estructura y composicion de la pared celular . fosfolipidos y lípidos. las que sin pared celular => los de genero mycoplasma/ patógenas.Características biológicas de la bacteria (Morfología) Bacterias .mono-capa. endosporas e inclusiones citoplásmicas) Pared celular . polisacáridos.

Flagelos . corpúsculos metacromáticos (fosfato inorgánico). enzimas. formando N cromosomas (enroscada en forma de anillo). Región nuclear . estructura y composición => fosfolípidos.Membrana plasmática . vacuolas).una zona en el interior del citoplasma donde se acumula el acido nucleico.largos apéndices filamentosos frecuentes solo en los bacilos (su presencia es rara). comp: 60%ARNr y 40% proteínas. ni retículo endotelial plasmática. estructura y composicion => es un núcleo difuso que contiene 1 molécula ADN bicatenario. Citoplasma .aparecen en el citoplasma y no tienen una estructura uniforme. funciones => actúa como barrera selectiva. funciones => depósitos de reserva e intervienen en funciones de regulación. plásmidos => estructuras que pueden existir ademas de ADN cromosómico (formadas por moleculares de ADN extra- cromosómico bicatenario.estructura delgada que se extiende por dentro de la pared celular. ribosomas. función => engloba los orgánulos celulares (región nuclear. (2) Vacuolas => acúmulos de gases o líquidos rodeados de membrana (donde se fija CO2). interviene en la degradación de nutrientes y producción de energía. polisacáridos (glucógeno y almidón). funciones => responsable de la movilidad (elementos patogénico: facilitar la difusión de las bacterias a traves de las . encerrando al citoplasma.70S y eucariotas - 80S. funciones => el acido nucleico transmite la información genética de la célula sobre estructuras y funciones celulares.son elementos de supervivencia y virulencia Inclusiones citoplásmicas . mesosomas => plegamientos hacia dentro de la membrana plasmática. Elementos facultativos (algunos no tienen . se encargan de dirigir la duplicación del ADN bacteriano y realizar la respiración. no tienen ni aparato golgi. se replican independientemente. tolerancia a metales tóxicos y síntesis de enzima.son orgánulos celulares muy abundantes (presentes en eucariotas y procariotas) dan aspecto granuloso a su citoplasma. iones y principios inmediatos. Tipos: (1) Gránulos de reserva => lipídicos. cada ribosoma tiene 2 subunidades de 30 y 50 Svedberg (velocidad relativa de sedimentación). procariotas . se transmite por conjugación. funciones = > síntesis de proteínas.estructura y composicion => en grupos de 3 o 4 unidos por un filamento de ARN mensaje (polirribosomas). proteínas y glicolípidos.es todo lo que hay en el interior de la membrana plasmática. en algunas se encuentran pigmentos y enzimas para la fotosíntesis. composicion => 80% de agua. inclusiones/depósitos de reserva. Ribosomas . ni mitocondria.variables) . pueden estar libres o unidos al ADN cromosómico /episomas). portan genes muy importantes que determinan la resistencia a antibióticos. gránulos de azufre. irregulares (no existen en las celulas eucarióticas).

funciones => capacidad de fijación a superficies (pelos comunes).0. estructura => tres partes (filamento.típico de neisserias/meningitis). perítricos (flagelos distribuidos en toda la superficie de la bacteria). pueden o no deformar el bacilo).tolerancia al medio ácida/ . Endosporas .2 um. agentes químicos). ATF y inmunosupresores). es preciso utilizar el microscopio óptico. los elementos esenciales para la vida quedan protegidos en esa nueva estructura (endosporas). sirve comoalmacén externo de nutrientes. Morfológicamente comienza con el aislamiento del núcleo y elementos energéticos mediante el crecimiento en vaginante de la membrana. en cadenas/estreptococos. en formas cubicas de 8 elementos/sarcinas (sarcinas ventriculi . mas frecuentes en Gram. se forman por un proceso de esporulación /esporogénesis. calor y agentes químicos. bastoncillo/cilíndrica/bacilo. muy numerosos. frio. Capsula . la bacteria queda en estado latente esperando una condición externas favorables para resurgir. desecación. esporulación => la producción de estructuras. cortos. estrella y cuadrangular /forma de hifas de hongos (actinomyces/ streptomyces . se visualiza con tinción negativa (tinta china). en parejas/diplococos (granos de cafe . defensa frente a Acs.que en Gram+. tipos =>monótricas (1 solo flagelo en un extremo). la espora => célula en reposo con capacidad de resistencia a la desecación. temperaturas elevadas. enzimas y metabolitos nuevos y la desaparición de muchos componentes celulares. tetradas o tretacocos (4 celulas => micrococcus/micrococacceae). Pelos /pilis o fimbrias .localización => zona central. formas => esférica/coco. proporcionan pelos comunes y sexuales (son morfológicamente iguales). anfítricos(un grupo de flagelos en un extremo y otro grupo en el otro extremo).solo en bacilos (Bacillus aerobio estricto y Clostridium anaerobio estricto). helicoidal/espirilo.elementos rígidos constituidos por una proteína (pilina). protege de la desecación (contiene agua). codo y corpúsculo basal). una forma de resistencia que adoptan algunas bacterias ante situaciones adversas (deficiencia nutricional. iones y nutrientes. pero no de forma concluyente (viene dada por la rigidez de la pared.membranas). en coma/vibrio. sistema de intercambio de información genética por conjugación (pelos sexuales).estructura que rodea la pared bacteriana. la morfología => información primaria sobre el tipo de bacteria. espiral/espiroqueta. estructura y composición => polisacáridos y proteínas. funciones => regula el intercambio de agua. coco-bacilo.productor de muchos ATB. distribuidos sobre la superficie. formación de colonias(habitualmente engloba mas de una bacteria). lofótricas (2 o mas en un extremo). pueden permanecer latentes durante cientos de años y volver a una forma vegetativa por un proceso germinación. Tamaño y Morfología de las Bacterias . fagos y celulas fagocíticas (elemento virulencia). subterminal o terminal (depende de su tamaño. agrupación de los cocos => aislados. en racimos/estafilococos.2 .

estomago);agrupación de los bacilos => aislados, en parejas/diplobacilos, en
cadena/estreptobacilos, algunos se parecen a cocos/cocobacilos (E.coli), en
formaempalizada/letra china (corynebacterium - algunos son saprofitos de la piel y
también causante de difteria).

Aroma típicos => Pseudomonas aureginosa (olor a jabón); Haemophyllus (olor
asemen/yeso); Citrobacter (olor a fétido); Proteus (olor a amoniacal); Klebsiella y
E. coli(olor a levadura de pan).

Tema 10 - Fisiología de las bacterias
Morfología macroscópica - estudio de la forma y estructura de las colonias
(masas constituidas por muchos millones de bacterias, se aprecian a simple vista y
originadas a partir de una bacteria en el medio solido); reconocible en función de
=> 1. características o tipo de medio de cultivo solido donde se ha desarrollado (un
microorganismo puede dar lugar a distintos tipos de colonias) 2. tipo de
microorganismo (mayor movilidad => colonias extendidas y planas); la verificación
de las colonias (siempre en medios sólidos sembrándolo por estría) => en placa y
en tubo con agar inclinado.

Las colonias en placa - sembrándolo por estría
El tamaño y el aspecto de cada colonia son bastante constante para cada genero y
especies, hecho que se puede utilizar como característica diferencial; tamaño =>
1-2 mm (E.coli); 4-6mm (stafilococcus en agar sangre); extendidas en forma de velo
invadiendo toda la superficie del medio (Proteus en AS); puntiformes +/- 0,5 mm o
inferiores (stafilococos en AS); forma => según el espesor (planas, elevadas,
semiconvexas, cóncavas semicóncavas, semiesféricas, en meseta); según los bordes
(lobuladas, onduladas, rizoides, redondeadas, filamentosas,
especuladas); superficie de la colonia/ elevación/ aspecto => lisa, rugosa
(con capsulas), plana, acuminada, umbilicada, mucosa, seca; consistencia de la
colonia => duras, viscosas, mucosas, secas, muy secas,
cremosas; transparencia y coloración => debido a la elaboración de algún tipo
de pigmento, formación de alguna sustancia por parte de la bacteria o la utilización
de algún sustrato del medio que se acidifique o basifique; la presencia o no de
halos de transparencia => generado por la prueba de la gelatinasa (+) en placa
y también por la actividad hemolítica de ciertas bacterias con hemolisinas
(estreptococos hemolíticos tipo alfa, beta y gamma).

Las colonias en tubo, con agar inclinado - sembrándolo por estría
Las colonias presentan las mismas características que en placa, pero su
visualización es mucho peor (menor superficie); aspecto => filiforme, rizoide,
arborescente, filamentoso, difuso, perlado, equinulada, arrosariada.

Morfología microscópica - estudio de la estructura fina de las bacterias
1. Estudio de su forma como célula procariota individual:
oval/esférica => coco/cocoidea; cilíndrica/bastón => bacilo; espiral/helicoidal =>
espirilo/sacacorchos /espiroquetas; filamentosa/forma de hifas de hongos =>
filamentosas (actinomyces/ streptomyces), formas intermedias => vibrio, coco-
bacilos; bacterias helicoidales => Borrelia (poca espiras y amplitud), Treponema
(tiene mas espiras) y Leptospira (muy apretadas y enroladas).
2. Estudio de su agrupación bacteriana (no todas las formas bacterianas se
agrupan, p.ej. los espirilos y los actinomicetos) => los mas frecuentes son las
formas cocoideas y las bacilares son menos frecuentes; las cocoideas => diplococos
(parejas /granos de café => neisserias y neumococos); estreptococos
(paralelos/cadenas => streptococcus); tetradas o tretacocos (4 celulas =>
micrococcus/micrococacceae); estafilococos (racimos => staphylococcus/
micrococcus); sarcinas (cuboidales de 8 celulas o mas; sarcina ventriculi y también
stafilococcus); las bacilares => diplobacilos/parejas, estreptobacilos/ cadenas y
formas irregulares/en empalizada/letra china (corinebacterium).

TAXONOMÍA - CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS
La clasificación definitiva de las bacterias esta aun por establecer; los que se utilizan
actualmente deben considerarse como provisionales o transitiva; la mas utilizada
suelen ser recogidas de las manuales BERGEY'S en la 9ª edición de Bergey's
Manual of Determinative Bacteriology de 1994, se agrupan a las bacterias en 35
grupos, situados en 4 categorías mayores:

1. Eubacterias Gram- (bacterias verdaderas) con 16 grupos; en esta
categoría se incluyen a la mayor parte de las bacterias que provocan a la patología

humana.
Espiroquetas:
- Familia Leptospiraceae (genero - Leptospira)
- Familia Spirochaetaceae (genero - Borrelia, Treponema)
Helicoidales /vibrioides aerobias - microaerófilas móviles (crecen mejor a
bajas presiones de oxígeno):
- Familia Campylobacteriaceae (genero - Campylobacter, Helicobacter)
Bacilos y cocos aerobios - microaerófilos (crecen mejor a bajas presiones de
oxígeno):
- Familia Pseudomonadaceae (genero - Pseudomonas, Stenotrophomonas)
- Familia Alcaligenaceae (genero - Bordetella) => bacilos y coco-bacilos
- Familia Legionellaceae (genero - Legionella)
- Familia Neisseriaceae (genero - Neisseria) => diplococos
- Familia Moraxellaceae / Familia Branhamaceae (genero - Moraxella,
Branhamella) => diplococos
- Otros generos => Brucella (cocobacilos)
Bacilos anaerobios y facultativos:
- Familia Enterobacteriaceae (genero - Citrobacter, Enterobacter, Escherichia,
Klebsiella, Serratia, Hafnia [coliformes] Morganella, Proteus, Providencia,
Salmonella, Shigella, Yersinia/peste)
- Familia Vibrionaceae (genero - Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas)
- Familia Pasteurellaceae (genero - Haemophilus)
- Otros generos => Gardnerella
Cocos Gram- anaerobios => genero - Veillonella
- Familia Rickettsiaceae (genero Coxiella, Ehrlichia, Rickettsia) - son parásitos
intercelulares obligados, altamente pleomórficas cocos/bacilos/hilos
- Familia Chlamydiaceae (genero Chlamydia) - son parásitos intercelulares
obligados de forma esférica.

2. Eubacterias Gram+ con 13 grupos (17-29); en este grupo hay los que
provocan patologia humana (la mayoria).
Cocos => genero - Staphylococcus y Streptococcus
Bacilos esporulados => genero - Bacillus (aerobio) y Clostridium (anaerobio)
Bacilos regulares no esporulados => genero - Lactobacillus y Listeria
Bacilos irregulares no esporulados:
- Familia Corynebacteriaceae (genero - Corynebacterium)
Micobacterias:
- Familia Mycobacteriaceae (genero - Mycobacterium)

3. Micoplasmas (Mollicutes / bacterias sin pared) de 1 solo grupo (30);
dentro de este grupo, los que provocan patología humana =>
genero Mycoplasma/Mycoplasma pneumoniae y Ureaplasma.

4. Arqueobacterias con 5 grupos (31-35); todas las bacterias de este grupo no
provocan patologia humanas (viven en las situaciones extremas => termofilas/
termogenas)

Taxonomía => la ciencia de la clasificación que agrupa y separa los organismos de
acuerdo con su características fenotípicas, estructurales o genéticas para facilitar su
estudio; la misión => construir un esquema racional, para clasificar y nombrar los
organismos; el sistema jerárquico de la taxonomía se ha formado gradualmente a
partir del sistema binomial / binominal / binaria de nomenclatura genero y
especie establecida por Linneo en 1758 (un botánico); la taxonomía no es una

pero si la flora residente se altera. goza de gran dinamismo y esta en la relacion con los avances de los procedimientos empleada para su estudio. 2 poblaciones: 1. p. viene definida por un nombre genérico de un nombre especifico latinizado o helenizado y concuerdan gramaticalmente. SIDA) . Bacilo de Koch. tiene poca importancia.dorados).E.Streptococcus viridans son comensales del tracto respiratorio superior y de la boca. la palabra que define genero puede ser abreviada a su inicial seguida de un punto (p. sino que pueden ser descriptivos. bien en un articulo o bien dentro de los sistemas en las listas de las bacterias aprobadas que incluyen sus números.ciencia estático. la flora transitoria puede multiplicarse y producir infecciones. Pasteurella. para el orden => ales (sufijo) p.división . tanto el nombre de genero o especie se escriben con letra cursiva/ italica o en su defecto.genero y especie. o pueden dar homenaje a un autor p. todas las categorías taxonomía se expresa en cursiva o itálica.ej. permanecen intactas. suelen ser temporales). La flora transitoria (FT) => microorganismos no patógenos o potencialmente patógenos. .ej. FLORAS BACTERIANAS Flora Normal de la especie humana => la población de microorganismos comensales que normalmente coloniza la piel y las membranas mucosas de las personas adultas sanas. 2. los grupos de taxonomía van de dominio .reino - tribu . linfomas. La flora residente (FR) => un numero relativamente fijo de especies de microorganismos (comensales y oportunistas) en una zona definida (si se producen alteraciones. una especie bacteriana.ej. no es esencial para la vida. los nombres de las bacterias no se eligen de manera arbitraria. el termino de sistemática se utiliza como sinónimo de taxonomía. leucemias. . Para la asignación de una bacteria.Infecciones de pacientes inmunodeprimidos por causas diversas (cáncer. Staphilococcus aureus (cocos en forma de racimos . si alcanza el torrente sanguíneo => si válvula cardíaca dañada => posible endocarditis. FR oportunistas => los que tienen acceso a lugares estériles. algunas de las categorías taxonomia superiores.ej.familia .Bacteroides son comensales del intestino grueso => si apendicitis perforada => posible peritonitis o bacteriémia. E. encuentran condiciones fisiológicas y nutritivas adecuadas. que colonizan la piel o las mucosas en periodo corto de tiempo. La supresión de FR => vació ecológico => ocupación de microorganismos ambientales o de otras zonas de cuerpo => infecciones.coli).coli es comensal del colon => lugar estéril (o no habitual) a traves de uretra => infección urinaria . subrayado. se siguen las normas recogidas por el código internacional de nomenclatura bacteriana y adquieren validez cuando ha sido publicado por el Int´l Journal of Systematic Bacteriology.coli o E. para referirse a un especie o varios especies no determinadas su genero => E. se forman añadiendo las palabras que las asignan distintas terminaciones. Mycoplasmatales. el nombre generico es único.ej. también puede dar referencia a un acontecimiento p. algunos ejemplos: . en la denominación de un especie. pero es normalmente beneficiosa (produce vitamina K en el intestino y ayudan en la absorción de nutrientes y impide la colonización de microorganismos potencialmente patógenos. p.imperio .orden .ej. Legionella.clase . la inicial de genero va con letra mayúsculas y el de especie con minúsculas. aceae. la piel y las mucosas colonizadas por microorganismos dinámicos => cambios cualitativos y cuantitativos constantemente.spp/ sp.

. Flora normal del tracto intestinal . Neisserias no patógenas. la omisión o inclusión de una especie en una de las categorías no implica que no pueda ser aislada en otra zona del cuerpo o que en condiciones especiales. difteroides (Corynebacterium). la leche materna => Estreptococos y Lactobacilosy el biberón => flora mixta con menos Lactobacilos) . en el estomago hay poco (pH acido protegen la cólera y salmonelosis - excepto Helicobacter pilori que puede causar ulcera péptida. Flora normal de la piel. enterococos. Clostridium spp. los ácidos grasos de las secreciones sebáceas.La utilidad/beneficio => sintetiza la vitamina K.Los mas frecuentes son estafilococos. salida de dientes => espiroquetas de Bacteroides. . diplococos Gram-. . enterobacterias (la mayoría son pobladores de la piel que recubre esta zona). las anaerobias facultativas. intestino delgado inferior (íleon y ciego) contiene la flora fecal. Micrococcus spp. . vibrios anaerobios.ej. el intestino delgado superior contiene Lactobacilos y enterococos. Candidas.Staphylococcus aureus (coagulasa+) en pequeñas cantidades. el sudor y el lavado diario con jabones desinfectantes. se disminuye de forma temporal => la repoblación es muy rápida. posteriormente => colonizado por microorganismos de los alimentos dependiendo de la dieta (p.FT/no residente se elimina o se disminuye => pH acido. Adulto normal => las principales (mira arriba!!) .Al nacer => estéril. Fusobacterium spp. se deben limpiar con cuidado la zona perineal antes de tomar una muestra. el coloncontiene >100 especies 96-99% anaerobios facultativo y estricto => Bacteroides spp. boca y vías respiratorias superiores .epidermiditis).En los cultivos de orina. Fusobacterium e Actynomicetes. bronquiolos y alvéolos suelen ser estériles.Al nacer. transformación de los pigmentos biliares en ácidos biliares. Los bronquios.Las principales (en faringe y traquea) => Staphylococcus epidermiditis (coagulasa-). Flora normal de la uretra . Lactobacilos/ Bifidobacterium spp. tiene ureasa que alcalina/neutralizar el acidez: degradar la urea => amoniaco). Neisseriade especies no patógenas. evitar trauma en el acto quirúrgico y infección peritoneal e diseminada. absorción y metabolismo primario de nutrientes. esta colonizada por Lactobacilos aerobios (produce pH acido). . posteriormente => estafilococos (S. lisozima.Las causas de las interpretaciones erróneas => no se toma en cuenta al microorganismo como patógeno o se le descarta (como mero contaminante). Corynebacterias. Estreptococos A- hemolíticos y no hemolíticos.La administración de ATB por vía parenteral en una cirugía intestinal => necesario para reducir al mínimo posible el numero de microorganismo. . Flora normal de la vagina . tras 12 horas => Streptococcus viridas (las mas abundantes en la boca).Adulto normal => el esófago contiene lo que previenen de la saliva y comida. pueda producir enfermedad.La administración de anti-microbianos orales => la posible proliferación de cepas resistentes al anti-microbiano administrado y pueden ser diseminada. cocos Gram+ anaerobios (Peptostreptococcus spp). Lactobacilos y levaduras. .Al nacer => la boca y faringe son estériles. .

hasta la pubertad.aumentando la imagen aérea. El ocular (lupa) . x40. se calcula multiplicando el aumento individual del objetivo por el aumento individual del ocular. produciéndose una multiplicación excesiva en la vagina de levaduras (candidas) u otras causantes de vaginitis. el primer científico italiano observando el exterior de una abeja o Jansen. Staphylococcus epidermidis y estreptococos no hemolíticos. aparece de nuevo una flora mixta de cocos y bacilos.posteriormente el pH acido se convierte en neutro y aparece flora mixta de cocos y bacilos. x100. Flora normal de la conjuntiva del ojo Predomina los difteroides (Corynebacterium xerosis). Disminuir la distancia resoluble = aumentar el poder de resolución = aumentar la apertura numérica (AN) = disminuir la longitud de onda de la luz empleada = aumentar el ángulo alpha en el espacio objeto = aumentar el índice de refracción (IR) en el espacio objeto (rellenar el espacio existente entre la muestra y el objetivo con una sustancia de mayor índice de refracción. El objetivo . el control de la flora lo ejercen las lagrimas. Tema 11 . . x10 Resolución – la capacidad del microscopio para mostrar los detalles más finos de un objeto. por su contenido en lisozima.aerobios y anaerobios). La imagen virtual (el ojo percibe la imagen final en el plano virtual). el moco cervical contiene lisozima con actividad bactericida.produce una imagen aumentada de una muestra diminuta. Aumento óptico ocular . el holandés. se podrá ver el objeto con mayor amplitud y claridad.En la menopausia la flora vaginal cambia. El sistema de lentes . . Numero de campo – diámetro de la imagen observada a través del ocular (en mm).x4. inventado 1610 por Galileo. . Aumento – es el numero de veces que se ve el tamaño de un objeto por encima de su valor real. pueden estar presentes otras especies. x5.Examen Microscópico (observación de microorganismos vivos) Nociones de microscopia (repasar apuntes de 1º curso) Microscopio – instrumento que permite amplificar la imagen de un objeto o de un ser pequeño (micros: pequeño y scopein: ver). x10.En la pubertad esta colonizada por Lactobacilos aerobios y anaerobios que produce ácidos por su metabolismo de hidratos de carbono => cambio a pH acido (protección a los otros microorganismos potencialmente patógenos. Poder de resolución (limite de resolución o distancia resoluble) – la distancia minima entre dos puntos que permite distinguirlos como tales (la capacidad de microscopio para distinguir 2 puntos separados aunque están muy próximos entre si). estreptococos anaerobios (hemoliticos o no hemoliticos) y otros.La administración de antibióticos de amplio espectro. puede eliminar las especies protectoras.se forma en la retina del ojo.En la mujer adulta esta colonizada ademas de los anteriores (Lactobacillus acidophillus . como aceite). Objetivo . En el microscopio óptico compuesto. Fundamento – Si se sitúa entre el ojo y el objeto un sistema óptico capaz de aumentar el angulo visual. . La imagen final .pequeña lente de proyección que aumenta y proyecta la imagen primaria del objeto hacia el extremo superior del tubo del microscopio (imagen aérea). .

anillos de enfoque macro-métrico y micrométrico. actualmente aceites sintético) Tipos de microscopios: Microscopio de campo oscuro – si dentro de la muestra hay elementos transparentes. lentes (objetivos . tornillo de elevación del condensador.lampara halogena de intensidad graduable. sistema de ajuste (anillo de ajuste de las dioptrías.Profundidad de foco – el espesor de la muestra que es posible tener enfocado por completo >< aumento y AN (apertura numérica) de la lente. la luz es difractada e incide sobre el objetivo y pueden ser visualizados. tornillos de centrado del condensador. control del diafragma de apertura del condensador.el control adecuado del cono de iluminación que atraviesa la muestra y entra en el objetivo = se ajusta AN). naranja de acridina (detectar Gardnerella vaginalis en los . líquido de inmersión (se usa sin cubreobjetos) es imprescindible cuando se observa muestra desecada con objetivo de 100x (tradicionalmente aceite de madera de cedro. oculares . condensador .generan imagen real.vitamina A-tiamina. diafragma de apertura . El contraste – para mejorarlo. disminuye el cono de iluminación (se controla mediante el diafragma de apertura) procedente del condensador. Parte óptica – sistema de iluminación (fuente de luz . hacia la preparación. Fluorescencia secundaria .captan la imagen formada por el objetivo y la amplian) Material necesario para la visualización microscópica – portaobjetos esmerilado y biselado. Partes de un microscopio óptico compuesto: Parte mecánica – sistema de soporte o estático (pie. invertida y aumentada del objeto. con un indice de refracción diferente al del medio que los circunda.colorantes fluorescentes: auramina (demostrar la presencia del bacilo de Koch en esputos). emite una radiación que puede incidir en la muestra desde abajo. control de ajuste de la claridad/ la luz). cabezal). tras atravesar un condensador de campo oscuro (iluminación transmitida).dispositivo que contiene una lente que concentra la luz. permite la observación de seres microscópicos transparentes y no teñidos (Treponema pallidum – preparación en fresco). fluorescencia natural (auto fluorescencia) . Microscopio de fluorescencia – consta de una fuente de luz muy intensa (lámpara de Hg a alta presión). vitamina B-riboflavina. brazo. Tipos de fluorescencia: Fluorescencia primaria . tornillo de seguridad del condensador. se emplea un tipo especial de liquido de inmersión (glicerina). generada en la lampara. tornillos reguladores de la platina. cubreobjetos 22x22. tornillo de fijación del cabezal.

proporciona una enorme profundidad de campo y genera unas imágenes que producen una gran sensación de tri dimensionalidad.con el asa de siembra esterilizada por flameado. pero sin embargo.seguir el método o técnica adecuada. Fuente de luz => Filtro primario => Muestra Fluorescente => Filtro secundario => Luz fluorescente de exitacion (UV) Observador Microscopios electrónicos de transmisión (TEM) – una gran amplificación y permite la observación de elementos que son demasiado pequeños como para ser vistos en un microscopio óptico.700 nm longitud de onda. emplean electrones en lugar de unas fotones. muestra de microorganismo problema. colocar con cuidado sobre la suspensión un .fijación del fluorocromo (colorante) como rodamina y ficoeritrina al elemento investigado (a traves de Ac marcado). vaselina (opcional). cantidad de agua o colorante adecuada . cantidad de muestra adecuada (ni mucho ni poco) . Material => portaobjetos. tomar un poco de muestra del microorganismo y suspenderla en la gota. El poder de resolucion en microscopio electronico es x1000 > que microscopio óptico.exudados vaginales.para conocer la movilidad y la disposición bacteriana en una muestra se debe observar los gérmenes vivos a partir de cultivos jovenes (lleva pocas horas). asa de siembra. Fluorescencia terciaria inmunofluorescencia . preparar portaobjetos y cubreobjetos limpios y desengrasados .suspender el microorganismo en agua destilada o SSF colocandolo en un portaobjetos y posteriormente visualizarlo por microscopio su morfología (cocos o bacilos). 1973 se comercializo el 3º modelo que une las caracteristicas de los 2 anteriores (la gran resolucion de los TEM y la gran definicion y contraste de los MEB. cubreobjetos. Técnica . microscopio.adecuadamente distribuida en el portaobjetos (amplia y homogénea) . . Microscopio electrónico de barrido (MEB) – no tiene tanto poder de resolución como el de transmisión.examen en fresco.homogeneizar la muestra. la muestra recogida en condiciones de esterilidad . Examen en fresco . a causa del vacío que ha de establecerse dentro del tubo y es muy costoso (solo se usa en lab de investigación). Técnicas para observar los microorganismos vivos . sobre gota pendiente en porta excavado (no lo hacemos) y con tinción vital. evitando cualquier contaminación.Método de examen en fresco entre portaobjetos y cubreobjetos: .para la fijación por calor => no debe calentarse demasiado (no quemar el dorso de la mano y la gota +/-consumida) => para hacer tincion . agua destilada estéril. microscopio óptico < 200 nm . pero no sirve para observar elementos vivos. se trabaja con limpieza y orden. entre portaobjetos y cubreobjetos.depositar una gota de agua estéril en el portaobjetos (50ul/lambdas) . que permiten visualizar mejor su movilidad y su preparación en fresco. disposición/agrupación y motilidad.fotones: 400 . mechero Bunsen o de alcohol (para flamear el asa de siembra). Condiciones que debe cumplir para este fin: . portaobjetos excavado. Examen en fresco de bacterias vivas (Gota pendiente) .

material => microscopio. cubreobjetos. asa de siembra estéril.es importante no confundirlos con los movimientos brownianos que se producen cuando se desplaza el medio liquido y hace que todos las bacterias siga dicha corriente en dicha dirección. observar al microscopio con objetivo de 40 aumentos. .colocar vaselina en los bordes del pocillo del porta excavado .000 o 10 lambas : 10 ml y azul de metileno en solución acuosa al 1:1. pero mejora notablemente la visualización de su morfología y estructuras. . mezclar bien ambas gotas con el asa de siembra y colocar el cubre objetos con cuidado para evitar que se formen burbujas de aire.la vaselina adherirá el cubre al porta formando una cámara evitando su evaporación y corrientes de aire.Las tinciones en bacteriología La morfología bacteriana (es incolora) puede ser estudiada por visualización de los microorganismos => vivos sin teñir (observar su posible movilidad) y teñidos mediante colorantes con una concentración que matan la bacteria y no permiten observar su movilidad. se invertirá la preparación . portaobjetos. observar al microscopio con objetivo de inmersión. en el caso de haber utilizado como colorante el rojo neutro o de color azul si se utiliza el azul de metileno. . Coloración vital . evitando que se formen burbujas de aire al caer el cubre sobre la suspensión. nos orienta hacia un grupo u otro en la . papel de filtro. Resultados . permite al microorganismo acumular parcialmente dichos colorantes. aceite de inmersión. resultados => los microorganismos se visualizaran vivos y ligeramente coloreados de rojo. altas diluciones de colorantes para disminuir su toxicidad (rojo neutro en solución acuosa al 1:1. observar al microscopio con objetivo de 40 aumentos.cubreobjetos.dar información complementaria de sus estructuras internas y/o externas que no se observa en fresco.invertir el cubre sobre el porta excavado.al conocer sus características tintoriales.colocar en el centro de un cubreobjetos una gota de la suspensión microbiana con una asa de siembra estéril. una suspensión de muestra problema.es una técnica intermedia entre los exámenes en fresco y las técnicas de tinción después de fijación previa???. mechero. . evitando la muerte de tales gérmenes. Método de examen en fresco sobre gota pendiente en porta excavado: . . Técnica (se puede hacer igual como en fresco) . la dilución debe ser muy altas para que no resulten toxicas para las bacterias.colocar sobre el portaobjetos limpio y desengrasado una gota de suspensión muestra junto con otra gota del colorante diluido utilizado. colocandolo encima del área cóncava del portaobjetos. consiste en teñir las muestras bacterianas con colorantes muy diluidos.observar mas adecuadamente su morfología y permite diferenciar entre los distintos tipos .000 o 1:500). el sellado con vaselina evita este problema. Ventajas de las técnicas de tinción: . Tema 12 .

básicos y neutros). en general por calor => coagula las proteinas bacterianas. Colorantes naturales . las auraminas. tiempos de tinción (según el colorante que usemos) Principales técnicas de coloración . violeta de genciana.ej. Factores que afectan a toda técnica de tinción: . azul de toloudina. básicos y neutros en forma de sales) p. es hidro-solubles (posee las propiedades de colorantes ácidos y básicos). p.preparados artificiales y obtenidos de alquitrán de hulla(colorantes anilina ácidos.técnica empleada (material limpios y seguir los pasos de la técnica) . para que no se arrastre con el colorante mordientes y decolorantes) . etc. [3] colorantes neutros: es una sal compuesta de un colorante acido y un colorante básico => el eosina azul de metileno. .8-7. azul de metileno.concentración del colorante (valores ideales oscilan entre 0.calidad en la tinción). [1] colorantes ácidos o aniónicos: la carga del radical colorante es (-) => colorantes citoplasmáticos que son básicos (los componentes citoplasmáticos captan muy bien los colorantes ácidos) => las eosinas. Colorantes según su comportamiento químico . azul de metileno (son colorantes básicos) y de añadir un mordiente que ayude a fijar dicho colorante.4) .se unirá de forma mas estable a la estructura que tiñe. [4] colorantes indiferentes: insolubles en agua y solubles en alcohol. lugol en la Gram) . el azul de índigo (de una leguminosa). conservación del colorante . los colorantes ácidos se utiliza como un contraste y los colorante neutros e indiferente como coloraciones particulares. cristal violeta o violeta de genciana. cantidad de muestra (representativa y homogénea) .extraído de animales como el carmin (de una cochinilla) Colorantes artificiales .pH del colorante (en general son neutro +/.clasificación bacteriana. [2] colorantes básicos o catiónicos: la carga del ion cromóforo es (+) => colorantes de la zona nuclear que son ácidas o ligeramente ácidas => fucsina básica.pureza del colorante (a + impurezas => + error y .2 y 2%) . elaboración (no lo hacemos /vienen preparadas) . etc. temperatura (en general la ambiental) .ej. En bacteriología es frecuente la utilización de => fucsina fenicada. cristal violeta. . acido pícrico. azul de metileno o las tioninas. dependiendo de su estructura físico-química.7 o entre 6.clasificación de colorantes => [1] según su origen (naturales y artificiales) [2] según su comportamiento químico (ácidos.soluciones mordientes (ayudar a fijar el colorante a las estructuras microbianas.extraído de plantas como la hematoxilina (del tronco de una planta que por oxidación produce hemateína.realizar correctamente el frotis (fijarlo bien. fucsina básica. constituido por un anillo bencénico que unen distintos radicales => radical cromóforo. el proceso de tinción => reacción de intercambio de iones entre colorante y sitios activos de la superficie o del interior de la célula (los iones teñidos/colorantes reemplazan iones de los componentes celulares) y esto permite contrastar mucho mas el germen con respecto al medio que le rodea. pero tampoco es de carácter neutro => colorantes de los lípidos comoSudan III. no predomina ni la carga+ ni (-). a+ numero de radicales => +poder colorante de la solución. Negro Sudan. violeta de genciana.

ej. muestra problema. se fija mediante el flameado (en algunos casos se podrá hacer con alcohol) para coagular las proteínas y los gérmenes quedan adheridos al portaobjetos. -coloración segun el tipo de tincion (generalmente con colorantes basicos que tiñen estructura acida) -decoloración que permite diferenciar distintos grupos bacterianos (genero Micobacterium son resistentes a la decoloracion ácida/BAAR). alcohol acido. -observación al microscopio Tipos de tinciones bacterianas: (1) Tinción simple => fijación previa. los neumococos.realizar una extensión y fijar la muestra problema para posterior coloración y visualización al microscopio. resultado => se observan las capsulas (si las tienen) en forma de un halo mas claro que rodea el cuerpo de la bacteria. se basa en => la afinidad de los colorantes que suelen ser de tipo básico (azul de metileno. se utiliza 1 solo colorante. permite observar características estructurales de la bacteria ademas de su morfología sobre un fondo oscuro. a traves de un asa de siembra una cantidad de microorganismo problema suspendido en medio liquido estéril. se extiende homogéneamente. p. (2) Tinción negativa => es un tinción simple (1 solo colorante => tinta china o solución acuosa de nigrosina al 1%) con diferencias que no necesita fijación previa (no mata las bacterias).se basa en => colorante acido cargado negativamente. Gram. Técnica de tinción . extendiéndolo adecuadamente hasta formar una fina película homogénea que posteriormente se fijara generalmente con calor cuando sea requerido. material => portaobjetos. ácidos y neutros. dejar secar al aire. agua estéril. clasificación => tinciones simples con colorantes básicos. poner en un portaobjetos. safranina. se aplican al final para las estructuras decoloradas con el decolorante.ej. técnica => pequeña cantidad de la muestra liquida se deposita y se extiende homogéneamente en el centro del portaobjetos con el asa de siembra para tener una capa fina (según la viscosidad. se deposita primero una gota de agua estéril y se añade con el asa de siembra una pequeña cantidad de la colonia. con la intensidad de calor adecuada que soporte el dorso de la mano. los pasos: -realizar un frotis y fijación por calor (generalmente). según el método de tinción que se utilizara posteriormente. . violeta de genciana. permite la visualización de la morfología y la agrupación bacteriana.Preparación de un frotis . como es la presencia de capsulas p. acidoclorhidrico => micobacterias -lavado siempre entre paso y paso con agua destilada para evitar interferencias entre un producto y otro. dan color azul a las celulas o fucsina fenicada diluida => da color rojo a los componentes celulares. asa de siembra o platino. si la muestra es solida (una colonia). los microorganismos no se tiñen (se quedan claros y brillantes sobre un fondo teñido oscuro). -coloración de contraste (generalmente ácido). azul de toloudina => 1-2 minutos.decoloradas con el alcohol 96º/alcohol acetonas. se puede diluir con unas gotas de agua estéril). para obtener una capa fina (para dejar pasar el paso de luz del microscopio y evitar a formarse grietas al secarse el colorante) se puede hacer una extensión con el borde de otro portaobjetos.

Tinción diferenciales de Gram => descubierto en 1883 por Cristian Gram. colorantes para la tinción de Gram. frasco lavador.5 minuto o violeta de genciana durante 2 minutos . asa de tinción (punte). cilios. pinzas de madera. nos permite observar su morfología y características estructurales como esporas. se utiliza 2 colorantes (el ultimo es de contraste). pero no quemar las bacterias . flagelos.lavar abundantemente con agua para eliminar el exceso de colorante .Gram y t. (4) Tinciones estructurales => fijación previa (en general por calor).realizar la preparación de frotis => extender 1 gota de agua destilada estéril + una colonia de la bacteria problema por la superficie de la portaobjeto . si se quedan con el color azul violeta serán Gram+. asa de siembra. finalmente unagente decolorante que decolora solamente un tipo de bacterias (Gram-) que serán teñidas con el colorante de contraste o segundo colorante (la safranina) de color rosa-rojo. distinto comportamiento debido a la distinta composicion de la pared de las celulas bacterianas. se utiliza al menos 2 colorantes. es mas empleado en bacteriología.ZhielNeelsen). cuando trabajaba con material de biopsias y utilizada a partir de 1886 como tinción diferencial. mechero de Bunsen. muestra problema. pipeta Pasteur. corpúsculos metacromáticos (utiliza 1 solo colorante???).aplicar el colorante cristal violeta durante 1. permite visualizar su morfología y características estructurales (composicion de la pared bacteriana.(3) Tinciones diferenciales => fijación previa (en general por calor). se emplea como el primer colorante básico (cristal violeta o violeta de genciana) que teñirá de color azul violeta todas las bacterias. aceite de inmersión. capsulas. para clasificar 2 grandes grupos (Gram+ y Gram-). Técnica: . Material de la tinción Gram => portaobjetos. posteriormente un mordiente el lugol que aumenta la afinidad del primer colorante a las celulas (lo fijara). fijación por el calor. su resistencia a la decoloración ácida (t.

de corpúsculos metacromáticos y de capsulas. dicha tinción se emplea principalmente para el diagnostico y estudio de enfermedades como tuberculosis y la lepra. de flagelos. BAAR. lavar abundantemente con agua destilada.ej. alcohol acido al 3% (97% alcohol). lavar. observar con objetivo de inmersión (100x). su decoloración posterior no es posible (resiste incluso a decoloraciones ácidas). Técnica => preparación de frotis y fijación calor. de cilios (similar a flagelos. con el decolorante. Material => es el mismo que esta descrito en la tinción simple. pero en cuanto los reactivos: 1º colorante . técnica => idéntica. Resultados => con el 1º colorante. BAAR. secar. vuelve a lavar con agua el exceso . p.y BAAR+ (ambas) se tiñen de rojo. pero corto y se extiende por todo el cuerpo. decolorar con alcohol acido para arrastrar restos del colorante (10-30 segundos). 3º decolorante . . decoloración a 3%. 2º colorante: azul de metileno fenicado (con fenol). objetivo => diferenciar del resto. lavar abundantemente con agua . Método de Kin Youw modificado (coloración en frió) Reactivos => 1º colorante: fucsina fenicada (con fenol) de KinYouw. dejamos actuar 5 minutos sin calentamiento. cubrir el frotis con fucsina fenicada básica 5 minutos aplicando en este tiempo calor. como pilis). una vez teñidas. evitando que se caliente demasiado o que se seque el colorante. rotular y observar con objetivo de inmersión. debido a su gran cantidad de componentes micólicos (lipoideos y cereos/cera) que forman parte de la pared de este tipo de bacteria (los colorantes convencionales no penetran en el interior de estas bacterias).se decoloran y BAAR+ no se decoloran. Mycobacterium). Tinción especiales => tinción de auramina y de naranjo de acridina. Tinción de Ziehl-Neelsen Este método fue desarrollado por Ehrlich en 1882 trabajando con bacilo de Koch y mejorado posteriormente por Ziehl-Neelsen. salvo para la fucsina de KY.. el lugol durante 1 minuto (solución iodoiodura de potasio con OH de 96º o con acetona a 5/1 o con OH 50%) . De ahí se necesitan colorantes altamente concentrados y la presencia de calor que facilite su penetración al interior de dichas bacterias.solución fenicada de fucsina básica (carbo fucsina). decolorar con solución decolorante (alcohol 90º) . Tinción de espiroquetas (para las espiroquetas) Tinción estructurales => tinción de esporas. hasta la emisión de vapores. para teñir aquellas bacterias que no son resistentes a la decoloración (se han decolorado) y resaltar el color rojo de los BAAR+.setiñen de azul y BAAR+ permanecen de color rojo/ acido alcohol resistencia+ (bacilos Mycobacterium y algunos Nocardia) B. 2º colorante de contraste . las bacterias tipos BAAR (bacterias acido alcohol resistentes.añadir un mordiente. BAAR. Tinción de gérmenes del acido alcohol resistentes (BAAR + criptococo) A. lavar abundantemente con agua destilada hasta arrastrar el colorante.lavar con agua para arrastrar los restos de colorantes y dejar secar al aire . cubrir el portaobjetos con la safranina durante 1 minuto . con el 2º colorante (de contraste). existen otras técnicas de tinción de los BAAR => tinción de auramina o de rodamina que usan microscopio de fluorescencia.solución hidro-alcohólica de azul de metileno fenicado. cubrir el frotis concolorante de contraste /azul de metileno fenicado 30 segundos sin necesidad de calentar.

Tema 13 - Pruebas bioquímicas para la
detección del metabolismo hidrocarbonado
de las bacterias.
Metabolismo - conjunto de reacciones químicas que tiene lugar en las celulas
vivas; necesitan energía que se obtiene por oxidación (perdida de electrones) de
sustancias introducidas en forma de alimentos; la gran mayoría de las bacterias
(heterótrofas) se nutren de sustancias orgánicas que proceden de otros seres vivos y
otras (autótrofas - cianobacterias) se nutren de sustancias orgánicas que sintetizan
ellas mismas a partir de sustancias inorgánicas; 3 etapas en metabolismo =>
1ª-catabolismo/hidrólisis/degradación de sustancias nutritivas => compuestos mas
sencillos + energía en forma de ATP (adenosin trifosfato)
2ª-anfibolismo/metabolismo intermedio del producto del catabolismo =>
compuestos de bajo peso molecular
3ª-anabolismo/metabolismo biosintético de sustancias simples => biosíntesis de
macromoléculas /moleculas complejas + gasto de energía.

Enzima - catalizadores biológicos (proteínas); cada enzima afecta solo a un
sustrato especifico.
Reducción => captan electro nes.

Catabolismo de hidratos de carbono - oxidación de azucares para obtener la
energía es muy importante, aunque también se catabolizan lípidos y proteínas; la 1ª
etapa de la degradación de la glucosa => oxidación de esta para formar acido
pirúvico (glucólisis); 2 procesos => la respiración (necesita O2) o la fermentación
(no necesita O2); la glucólisis (no precisa O2) se produce en 3 vías, en función de la
dotación enzimática.

1º vía glucolítico/ ruta de Embden-Meyerhof Parna (EMP) fue descubierto
porPasteur => se obtiene 2 moleculas de ATP mediante fosforilación por cada
molécula de glucosa que se oxida; este proceso se puede realizar en presencia o no
de O2; a partir de la formación de acido pirúvico, las bacterias que usan esta vía,
normalmente utilizan la vía fermentativa para acabar transformando este acido
pirúvico en ácidos mixtos;degradación/ hidrólisis de glucosa (6C) => acido pirúvico
+ 2 ATP (fosforilación) => ácidos mixtos (fermentacion); son 9-10 reacciones
químicas con un enzima diferente en cada una; utilizados por las bacterias
fermentadoras que poseen deshidrogenasas(Clostridium, Enterobacter,
Salmonella)

2º vía de las pentosas fosfato /vía fosfoglucónica (vía HMP) - es una ruta
mixta y vía alternativa; este ciclo rompe los azucares de 5 carbonos /pentosas
y también glucosa,mediante sucesivas reacciones y produce => pentosas
intermedias (precursores de síntesis de ácidos nucleicos y ciertos aminoácidos) de
gran utilidad para las celulas; ademas de la glucólisis via EMP, muchas bacterias
utilizan HMP como una vía alternativa para la oxidación de la glucosa => produce
acido láctico o acido mixto + 1ATP (p.ej.Enterobacterias/ E.coli); esta vía es un
híbrido de la vía ED y la EMP, ya que en las primeras etapas, la oxidación de la
glucosa es similar a la via ED y en las etapas posteriores es similar a la vía EMP, es
decir: proporcionan a las bacterias no oxidativas un medio de oxidar la glucosa a
acido pirúvico puro, porque no tienen las enzimas necesarios para comenzar la vía
EMP, apareciendo en los sistemas analíticos como fermentadoras.

3º vía de Entner-Doudoroff (vía ED/ vía aerobia => requiere O2) - es otra
vía por la cual la glucosa se oxida a acido pirúvico; por cada molécula de glucosa se
producen 1 molécula de ATP para ser utilizada por la célula en reacciones bio-
sintéticas; esta víarequiere enzimas específicos y solo los microorganismos que las
poseen pueden utilizarla sin seguir la vía de las pentosas fosfato ni la glucólisis; los
microorganismos que la utilizan son Pseudomonas y Neisseria (aerobio estricto),
por carecer de las deshidrogenasas necesarias para oxidar el acido pirúvico al acido
láctico u otros ácidos; los hidrogeniones se transfieren al ciclo de Krebs y se
acabaran obteniendo agua; oxidación de glucosa => acido pirúvico + 1ATP (no
producen acido láctico ni acido mixto)

Respiración - es un proceso fosforilación oxidativa de generación de ATP y se
caracteriza por el aceptor final de electrones generalmente es una molécula
inorgánica (O2); la glucosa se degrada => acido pirúvico se sigue oxidando por la
vía de la respiración o la fermentación (en función del sistema enzimático que
tienen) => ATP + CO2 + H2O; durante la respiración, cualquier molécula orgánica
puede ser degradada /oxidada con un mayor rendimiento que en la fermentación.

Respiración aeróbica - cuando el aceptor final de Hidrógenos (electrones) es el
O2; en la respiración, el acido pirúvico producido por la glucólisis se escinde en 2
partes: una parte se unen con CoA => forman acetil CoA que entra en el ciclo de
Krebs donde se liberan electrones y protones (H+); la otra parte para biosíntesis???
Cadena de transporte de electrones (se encuentra en la membrana citoplasmática
de las celulas procarióticas y en las membranas internas de las mitocondrias en las
celulas eucarióticas) - los electrones se mueven desde los coenzimas reducidos
hasta una molécula inorgánica como O2 en la respiración aeróbica o hasta una
molécula inorgánica diferente del oxigeno NO3- ion nitrato, SO2-4 ion sulfato,
etc.; las moleculas transportadoras de electrones son 3 tipos =>
[1] flavoproteínas - realizan reacciones de oxidación reducción, [2] citocromos -
proteínas con un grupo prostéticos (Fe) en forma oxidada, [3]ubiquinonas o
coenzima Q - transportadores no proteicos de bajo peso molecular.

Respiración anaeróbica - cuando el aceptor final de electrones (H-) es una
sustancia inorgánica distinta del O2, tal como iones nitratos NO-3, sulfatos SO2-4,
carbonatos CO2-3. (Pseudomonas y Bacillus)
Fermentación - proceso que se inicia a partir de acido pirúvico formado en la
glucólisis de EMP /HMP, en cual el aceptor final de los electrones es un compuesto
orgánico y no requiere O2; características principales => (1) no precisa O2,
pero se puede ocurrir en su presencia, (2) no necesita el ciclo de Krebs ni cadena
transportadora de electrones,(3) utiliza 1 molécula orgánica como aceptor final de
electrones, (4) libera energía a partir de azucares y otras moleculas orgánicas
(aminoácidos, ácidos orgánicos, purinas, pirimidinas), (5) libera solamente 2
moleculas de ATP por cada molécula del sustrato inicial, (6) los productos finales
pueden ser acido láctico, etanol y CO2, acido propiónico, acido acético, CO2 y agua,
acido butírico, etc. (compuesto orgánico); cuando el aceptor final de electrones es el
lactato, se producirá acido láctico y en general cuando el aceptor final sean otras
sales orgánicas, se formaran ácidos mixtos p.ej. acido succínico, que son
responsables de la caída de pH en las pruebas empleadas, para la identificación
bacteriana; ademas, las bacterias que tienen la dotación enzimática apropiada,
pueden seguir degradando estos ácidos mixtos hasta CO2 y otros compuestos
orgánicos; es útil el análisis de los productos finales para identificar así los
microorganismos; la mayor parte de la energía producida en la fermentación queda

almacenada en los productos finales; las fermentadoras => Streptococcus,
Lactobacillus, Clostridium, Escherichia, Salmonella, Enterobacter.

Prueba de la B-D Galactosidasa (ONPG) - se basa en la capacidad que tienen
los microorganismos de fermentar lactosa, mediante 2 enzimas => Lactosa
Permeasa (esta en la membrana celular y es capaz de transportar la lactosa a traves
de ella) y B-D-Galactosidasa (esta en el interior de la célula y es capaz de desdobla
la lactosa en glucosa y galactosa).

Clasificación de los microorganismos segun su capacidad de fermentar
o no la lactosa:
- fermentadores activos de lactosa en 24 horas (poseen ambos enzimas)
- no fermentadores de lactosa (carecen de ambos enzimas, no degradan la lactosa,
no penetra en la célula)
- fermentadores tardíos de lactosa (poseen el enzima B-D-Galactosidasa,
permeabilizar la lactosa ligeramente cuando la concentración es alta en 2-15 días).

La aplicación fundamental es la diferenciación de
Enterobacteriaceae =>Escherichia (+) es fermentadora activo, Proteus (-) es no
fermentadora y Klebsiella (+) es una fermentadora tardía de lactosa, es decir
lactosa (-) y ONPG (+); para detectar la enzima B-D-Galactosidasa => se utiliza un
compuesto similar a la lactosa (orto-nitrofenol): al liberarse al medio alcalino por la
acción de BDG produce un color amarillo.
Material => 1 tubo de ensayos estériles, baño maría o estufa a 37ºC, asa de
siembra, solución fisiológica esteril, discos de ONPG, microorganismo problema
Técnica => una suspensión densa (con muchas colonias) de un cultivo puro en 0,5
ml de suero fisiologico estéril se añade un disco de ONPG y mezclar durante unos
segundos, incubar a 37ºC durante 30-60 minutos (en general se vira antes de 30
minutos)
Resultados => en ONPG+ se produce una coloración amarillo y en ONPG- no se
produce color (incoloro).

Tema 14 - Pruebas bioquímicas para la
detección del metabolismo proteico de las
bacterias
Principal productor de energía => catabolismo de la glucosa y las oxidaciones
de proteinas y lípidos (estan relacionados entre si); la hidrólisis de proteínas/
proteína+agua (mediante enzimas proteolíticos extracelulares, secretadas por
ciertas bacterias que sirve para su tipificación/tipación) => polipéptidos y
aminoácidos; las pruebas bioquímicas investigan fundamentalmente la capacidad
de un microorganismo de producir la hidrólisis de la gelatina; catabolismo de

se observara el viraje del color del indicador del pH. Resultados => SH2 positivo (Salmonela y Proteus) se observa a lo largo de la linea de inoculación ennegrecimiento del medio. agujas y asas de siembra. Producción de acido sulfhídrico . sembrar en picadura (tubo de KIA o TSI) o con agotamiento en cuadrante (Hektoen o SS).enzimas que actúan sobre el grupo carbóxilo de los aminoácidos Lisina. muestras de problema. Arginina para formar => aminas (alcalinas) y se desprende CO2 (el proceso se realiza en anaerobiosis) => se realiza mediante el sistema multiprueba (API .buscar el código en el libro). cisteina) y un indicador de pH (sales de hierro /citrato férrico amoniacal) => un precipitado negro).L-ornitina + ODC/ornitina descarboxilasa => Putrescina + CO2 . se observara la liberación del gas SH2 por algunos microorganismo que poseen enzimas desulfurasas (activada por la fermentación de la glucosa => acidifica/produce ácidos/baja el pH) que actúan sobre los aminoácidos azufrados. SH2 negativo (Brucella y Shigella) no se ennegrece el medio. el gas es detectado a traves del medio que contiene fuente de hidrógeno (azucar) fuente de azufre(tiosulfato sodio. la presencia del enzima investigado supondrá la alcalinización del medio (sigue el mismo color como el inicio). Ornitina. si la técnica se realiza conBrucella (microaerofila). si se realiza en placa de cultivo (Hektoen y SS).técnica con indicador incorporado al tubo/a la placa => algunos microorganismos actúan metabolizando proteínas con aminoácidos azufrados (cistina. estufa de cultivo. en cada reacción se desprende CO2 y se alcaliniza el medio: . Bacteria con enzimas desulfurasas (activada por la fermentación de azucar) + indicador de pH/sales de Fe + fuente de S + (H+) => H2S gas + indicador pH => precipitado negro insoluble/ puntos negros (FeS) Prueba de las descarboxilasas . se debe incubar con una atmósfera de CO2. Material => tubo de cultivo (KIA/kliger iron agar y TSI/triple sugar iron). acido orgánico entrar al ciclo de Krebs y ion amonio NH4+ es secretado de la célula. incubar durante 18-24 horas. Técnica => a partir de un cultivo puro y reciente de microorganismo problema se tomara una muestra con una aguja. cada pocillo contiene indicador de pH y amino acido correspondiente al enzima a investigar.proteínas/ proteólisis se realiza mediante proteinasas/proteasas y peptidasas (desaminación) para obtener => ion amonio NH4+ (+) acido orgánico. cisteina) y liberan azufre en forma de gas acido sulfhídrico SH2. se investiga la alcalinización del medio inicialmente de color purpura. la temperatura de incubación (estufa) tiene que oscilar entre 35-36ºC (superior a 37º se inhibiría la producción de SH2). L-lisina + LDC/lisina descarboxilasa => Cadaverina + CO2 . cada descarboxilasa actúa sobre un aminoácido especifico. cistina. estas pruebas se aplican para la identificación de Enterobacteriaceas.

Arginina y Ornitina): .L-arginina + ADH/arginina deshidrolasa => L-citrulina + NH3 (descarboxilación) => Putrescina +CO2 Material => pruebas de API. el oxigeno es reducido a partir de un sustrato orgánico que procede de la nutrición con la intervención de un sistema de transporte de electrones denominado cadena respiratoria. se incuba a 35ºC durante 18-24 horas. peptonas y los indicadores rojo cresol y purpura de bromo cresol. Aplicación => detectar en el microorganismo estudiado el enzima citocromo . se observara el cambio de color de un indicador de pH incoloro cuando esta reducido (p-fenilendiamina=> formar indofenol de color violeta oscuro) y coloreado cuando se oxida.Lisina => Klebsiella. el pH vuelve a subir. Pseudomonas Tema 15 . carenciandolo de ello los anaerobios estrictos.Arginina => Salmonella. el caldo vira a amarillo.. Salmonella . por la fermentación de glucosa que lleva el medio. Proteus. los aerobios o anaerobios facultativos obtienen su energía por la respiración y la almacenan en forma de ATP.esta denominación se le da de forma genérica al enzima citocromo oxidasa que participa en la transferencia de electrones en la cadena respiratoria hacia el oxigeno. gérmenes con descarboxilasa+ (Escherichia no es 100% descarboxilasa+ de Lisina. Resultados => durante las primeras horas de incubación. oxidasa => enzima que cataliza la transferencia de electrones del sustrato al oxigeno. este sistemase encuentra en los organismos aerobios y anaerobios facultativos. Salmonella . Técnica => se añade una gota del inoculo (suspensión microbiana) en cada pocillo de la prueba de API. pipeta Pasteur. produciéndose agua o peróxido de hidrógeno según la especie microbiana. transferiéndo H+ al O2 con formación de H2O. muestra de problema y papel parafina. ya que se forma aminas alcalinas que es de color purpura (descarboxilasa+). Serratia. si se queda amarillo sera descarboxilasa-.Ornitina => Serratia. aminoácidos ensayados en forma L.Pruebas bioquímicas para la detección de la actividad enzimática de las bacterias Pruebas oxidasa . pH6). Reactivos => caldo de Moller para descarboxilasas (lleva pequeña cantidad en su composicion una pequeña cantidad de glucosa. pero si el aminoácido es descarboxilado. los citocromos son hemo-proteínas que contiene Fe y actúan como ultimo eslabón de la cadena respiratoria aerobio.

diferencia entre géneros Moraxella (oxi+). con una asa se añade una colonia del cultivo del microorganismo de 12-24 horas. Material => portaobjeto. oxidasa-no se produce color. es un enzima fundamental que actúa sobre el peróxido de hidrógeno /H2O2 (es un producto final de la degradación aerobica oxidativa de los hidratos de carbono). microorganismo de problema Técnica => se coloca una gota de H2O2 (agua oxigenada) en un porta objeto. Resultados => catalasa+ forma burbujas de O2 inmediatamente. aplicación => diferenciación deStreptococcus (-) de Staphylococcus (+) y Micrococcus (+). asas de siembra de plástico (las de platino catalizará la reacción) Reactivo => H2O2/ agua oxigenada. si se acumula H2O2. Resultados => oxidasa+ aparece un color purpureo en el papel. si son oxidasa positivo toman un color marrón y en seguida pasan a negro parduzco. Material => placa sembrada con microorganismo problema. simultáneamente.oxidasa. asa de plástico. diferenciar entre Enterobacteriaceas (oxi-) de Pseudomonadacea (oxid+). papel de filtro. Pruebas de catalasa La catalasa es una enzima que se encuentra en la mayoría de los microorganismos aerobios y anaerobios facultativos que contienen citocromo. se podrán observar falsos positivos si se utilizaran medios de cultivo agar sangreo otros que lleven hematíes (los hematíes contiene catalasa). otra manera: se añade directamente el reactivo oxidasa de Kovacs sobre las colonias de la placa Petri con agar sangre y también en otro medio. pipeta Pasteur. catalasa. Neisseria (oxi+) de Acinetobacter (oxi-). . homogeneizar y observar. reactivo oxidasa de Kovacs. fundamento: si el microorganismo tiene el enzima catalasa y se pone en contacto con H2O2 => se descompone en H2O + O2. porta. Técnica => mezclar una pequeña muestra pura con el reactivo en el papel de filtro que se sitúa por encima de una porta. si se desarrolla el color a los 10-60" se considera oxidasa retardado positivo. después de 60" es negativo.no aparecen burbujas. esperar 30-60 segundos y se observar el posible cambio de color. estos gérmenes morirían.

inoculamos el medio. puede significar => [1] no se ha reducido el nitrato. con lo que el medio se alcaliniza. ya que el color puede desaparecer).=> cuando se forma color rojo o rosado al añadir polvo de zinc en menos de 30 segundos. es nitratasa (-) y si no hay cambio de color. aplicación => diferenciación de especies deHaemophilus y Neisserias.). . [2] al añadir polvo de zink no se desarrolla color indica formación de otros productos nitrogenados. microorganismo. técnica => hacemos un inoculo a partir de un cultivo puro reciente de 12-24 horas. si no se forma color.resultados => hay 2 posibilidades de que sean Nitratasa+ (Haemophilus y Branhamella Catarallis): [1] cuando aparece color rojo o rosado fuerte al añadir el reactivo A y B que indica la reducción de nitratos a nitritos. Nitratasa. etc. depende de la especie bacteriana se trate. hidroxil-amina.detecta la presencia de la ureasa en los microorganismos cuando se observa la alcalinización de un medio liquido. Material => multiprueba de API. [2] la reducción de nitratos ha sido llevada hasta la formación de N2. [3] la reducción de nitratos ha formado otros productos nitrogenados (oxido nítrico. agregar 1 gota de Nit A y 1 gota de Nit B.Pruebas de Nitrato reductasa o Nitratasa (se realiza con multiprueba de API) La nitratasa (nitrato reductasa) es el enzima que cataliza el proceso en cual el nitratos son reducidos a nitritos (presentes en algunos microorganismos anaerobios o anaerobios facultativos que utilizan nitrógeno como ultimo aceptor de electrones en el proceso metabólico/ respiración anaeróbica). Zinc en polvo. que sube el pH.coli (-) o positivo retardado (+) como Klebsiella. la prueba detecta los productos finales liberados al medio mediante un reactivo colorimétrico API. se comprueba añadiendo polvo de zinc que actúa como reductor y si hay un cambio al rojo. el medio no debe contener azufre ya que si el microorganismo es productor de H2S (acido sulfhídrico) este impide la formación de color. se observa con la aparición de grietas o burbujas. la ureasa cataliza la hidrólisis de la urea => carbonato amónico. se pueden producir diversos productos finales. aplicación => diferenciar Proteus (+) de otras Enterobacteriaceas / E. reactivo => Nit A y Nit B. sera nitratasa (+). amoniaco. reacción: nitrato/NO-3 + nitratasa => nitrito/NO-2=> N2 (nitrógeno molecular/ gas nitrógeno) o otros => amoniaco / oxido nítrico / oxido nitroso / hidroxil amina. observar si hay un cambio o no antes de 30 segundos (se interpreta rápido. incubar a 37ºC durante 12-24 horas. Prueba de Ureasa (se hace en manual y con el sistema API) . cuando no se forma color (rojo) al añadir los reactivos. se añade al tubo un poco de polvo de Zinc.

catalasa+.aplicación => diferenciar Staphylococcus aureus (coco Gram+. inoculamos el microorganismo en un tubo con caldo urea de Stuart. Enterobacter. Prueba de Coagulasa (se hace con el kit comercial que contiene Acs anti coagulasa) . . beta hemolítico +. Reactivo => caldo urea de Stuart/ urea-indol (de color ámbar) y microorganismo de problema Técnica => con el asa estéril se toma una muestra de cultivo puro reciente 18-24 horas.Material => tubos de cultivo. esta prueba solo se hace si el germen es coco Gram+. catalasa+. se puede utilizar el reactivo urea-indol. Prueba de Triptófano Desaminasa (TDA) . Brucella. Providencia y Morganella. resultados =>coagulasa+ se observa en forma de grumos (si se utiliza un plasma como reactivo => se observara la formación de un hilo de fibrina en la reacción) y en coagulasa. incubar 37ºC. incubar a 37ºC entre 18-24 horas.observar la coagulacion del plasma en forma de grumos o precipitación al ponerse en contacto el microorganismo con el reactivo (si se utiliza el plasma en la prueba). técnica => (usando el kit comercial /prueba de látex) seguir la instrucción de la casa comercial que hacen el reactivo.técnica => en un medio liquido de TDA (color ámbar). requieren 6 días de incubación. y leer. la reacción se produce entre 1-4 horas Resultados => en ureasa (+) el caldo de color ámbar vira a rosa fuerte durante el tiempo de reacción (1-4 horas). en ureasa (-) no vira el indicador.se basa en la capacidad que tienen algunas bacterias de desaminar el triptófano por la acción de TDA. algunas cepas de Klebsiella. añadimos 1 sola colonia de un cultivo puro y 1 gota de reactivo TDA del API. asas. produciendo => acido indol pirúvico que reacciona con citrato férrico amoniacal y el cloruro férrico que lleva el medio produciendo un color marrón (determina la presencia de la enzima TDA). los géneros que tienen TDA+ => Proteus.no se forma grumos. pipeta Pasteur. estufa de cultivo o baño maría. la coagulasa es un enzima producido por microorganismos capaz de coagular en plasma. resultado => el color marrón/café indica la presencia deTDA+ y sera negativo si no hay cambio de color. beta hemolítico + y coagulasa+) de otro Staphylococcus.

el cual vira al color amarillo en medio ácido. Lisina Iron Agar (LIA) . el microorganismo debe tener B-D galactosidasa y lactosa permeasa.4 (neutro) e indicador rojo fenol a 6.sistemas multiprueba que permiten realizar varias pruebas bioquimicas simultáneamente. otros métodos) Macrotécnicas . que se detectan por medio del indicador rojo de fenol. inocular por picadura y estría un tubo de cultivo con medio KIA en pico de flauta.utilización de azucares (fermentacion glucosa 0. la glucosa se metaboliza mejor que lactosa (la molécula es mas pequeña/sencilla). Fundamento => cuando el microorganismo fermenta los azucares. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. Resultados => se observaran los 3 parámetros: cambios de pH/color.8 (cualquier cambio de pH va a virar el medio). se recoge una colonia puro y joven con un aguja. estufa de cultivo Reactivo => tubo con agar KIA en pico de flauta (color rojo anaranjado). si el medio no tienen azucares como fuente de hidratos de carbono. producción de acido sulfhídrico (SH2) Por fermentación de azúcares. producción de gas CO2 (grietas en el medio/ se desplaza) y producción de acido sulfhídrico SH2 (precipitado negro).Tema 16 . la reacción se ha de observar justo después de terminar el periodo de incubación (suficiente tiempo para la fermentación del azucar). el pH esta ajustado a 7. asa y aguja de siembra.1% y lactosa 1%) . incubar 18-24 horas a 37ºC. para metabolizar la lactosa. utilizara proteínas que alcalinizan el medio por la formación de aminas.se pueden realizar 3 pruebas a la vez: . si se lee después de 24 horas. porque el germen habría utilizado la peptona y el medio se alcaliniza. se producen ácidos. IMVIC . . siempre se compara con un tubo de control no inoculado. Kliger Iron Agar (KIA) . sistemas rápidos. facilitando notablemente la identificación del microorganismos: .Pruebas bioquímicas simultaneas (macro-técnicas. micro-técnicas. se acidifica el medio porque se forman ácidos orgánicos.Agar Sulfuro Indol Motilidad (ASIM) Motility Indol Agar (MIA) . microorganismo Técnica => es importante tener un tubo de control. Triple Sugar Iron (TSI) . Material => tubos de cultivo. Motilidad Indol Ornitina (MIO) KIA (Kligler Iron Agar) . se puede dar un falso alcalino. producción de gas (CO2) . las proteínas en condiciones de aerobiosis (en el pico) se metabolizan mejor por la vía de descarboxilación oxidativa de los aminoácidos que en anaerobiosis (en el fondo).

los fundamentos y la interpretación de los resultados son los mismos que en el método anterior. [b] en la fermentación de glucosa y lactosa => A/A zona superficial y profunda son amarillas (características de E. ya que el medio lleva el 3er hidrato de carbono (sacarosa al 1%). que a su vez el acido pirúvico es degradado mediante el ciclo de Krebs por los aerobiosis o anaerobiosis facultativos dando CO2 + H2O y ATP. la forma de realizarla es . [c] no metabolizan ni lactosa ni glucosa (pero si la peptona) => K/K todo el tubo es de color rojo (si se trata de anaerobiosis) o si se trata de aerobiosis. S.typhimurium. la produccion de indol y la formacion de acido sulfhidrico.aparecen burbujas. el medio de cultivo inicialmente es amarillo entero. TSI (Triple Sugar Iron) .[a] resultado final de la fermentación solo de la glucosa => K/A zona superficial roja (reacción alcalina de las aminas) y zona profunda amarillo (reaccion ácida).identificación de Yersinia enterocolitica como sacarolítica (también Proteus. pero es imposible saber si el azucar utilizado es uno u otro o ambos. Lactobacillus y Clostridium). el acido pirúvico es degradado hacia acido láctico y acido mixtos que mantiene el pH acido de manera estable.enteritidis. también P. en cambio.aeruginosa) [d] si no se consume ni glucosa. ni lactosa ni peptona => no hay cambio de color en el tubo (gérmenes inertes). Producción de gas CO2 .flexneri. en el fondo.coli y K. S. agrietamiento o desplazamiento del medio del fondo del tubo.Cambios de pH . después de la fermentación de la glucosa.mirabilis. debido a la formación de hidrógeno y de anhídrido carbónico (CO2) Producción de acido sulfhídrico SH2 . Providencia y Shigella. pero posteriormente la parte del pico se alcalina/rojo (había poca cantidad de glucosa) por la descarboxilación oxidativa de los aminoácidos (que forman la peptona) que se produce mejor en aerobiosis. utiliza tanto para los aerobiosis y anaerobiosis.. Agar sulfuro-indol-motilidad/ ASIM o motility-indol-agar (MIA) .pneumoniae). dando un intermedio clave (acido pirúvico). SH2+ => Proteus y Salmonella.se manifiesta por el color negro de la capa profunda o un anillo negro cerca de la parte superior de la capa profunda o un precipitado negro en la capa profunda (que puede enmascarar la acidificación del medio => fermentación de la glucosa activa la desulfurasas).tal como indica su nombre. P. la fermentación de glucosa en el pico es inicialmente mediante la vía EMP. S. la zona profunda es de color naranja (se alcalina mas la zona con mas O2 => Pseudomonas. son características de Morganella. sirve para determinar la motilidad de los microorganismos.

acido indol-acético). mediante triptofanasa (enzima intracelular). acido acético. Resultado => en indol+. Sighella. aparecen un color rojo fuerte en la superficie y en RM negativo. aparece un anillo rojo en la superficie del medio (E. Yersinia. no hay cambio en la superficie del medio. añadir al cultivo 2 gotas de reactivo indol de Kovacs (debe ser siempre fresco). mechero.la siguiente => se siembra en picadura y se incuba a 37ºC durante 18-24 horas.coli. enindol-. reactivo indol de Kovacs. microorganismo. no hay cambio de color (Klebsiella pneumoniae) Prueba de rojo de Metilo => muchas enterobacteriaceas con importancia clínica (E. agitar suavemente el tubo y dejar unos segundos en reposo. estufa de cultivo. se hacen de una en una y conjuntamente. alcohol etílico (ácidos mixtos). pipeta Pasteur. utilizan la fermentación acido-mixta de los hidratos de carbono produciéndose => acido succínico. que para tener energía para sus reacciones metabólicas. la motilidad se vera por la zona del inoculo con un zig-zag (en la picadura). la produccion de indol se vera con un cambio de color a violeta purpura (el medio es de color violeta clarito). incubar a 37ºC durante 4 horas. IMVIC (Indol .Citrato) - se emplean en la identificación de la familia enterobacteriaceas. asa de siembra. se siembra el microorganismo problema.Motilidad .coli). Técnica => Método de Kovacs: en el tubo con 500 lambdas de reactivo urea-indol. Salmonella typhimurium.rojo de Metilo . . Proteus mirabilis.Voges-Proskauer . en RM positivo. Prueba de indol => estudia el metabolismo proteico/ la capacidad de degradar el triptófano (aminoácido) y de formar según la bacteria: indol y productos indólicos (escatol. Citrobacter freundii. Reactivo => caldo urea-indol de la casa Biomerieux. Vibrio) son anaerobios facultativos. la produccion de SH2 se vera por un cambio a negro. Material => tubos de ensayo.

por ello. Material => multiprueba API y resto igual Reactivo => Medio de Clark y Lubs (liquido amarillo). Resultados => RM+ superficie del medio rojo fuerte y RM. luego 0.=> color amarillo en la superficie del medio Prueba de Voges Proskauer (2 microbiólogos) . antes de 1 hora aparece coloración rojo rosada en la superficie del medio. la mayoría de enterobacteriaceas en VP dan reacciones opuestas a la reacción de RM (VP+ => RM. reposar el tubo 10 minutos e interpretar los resultados.2 ml (200 lambdas) solución KOH 40%.=> RM+). se incuba 24 horas a 37ºC. se produce => un metabolito neutro (producto intermediario).lo podemos hacer en el API => la fermentación butanodiólica/ butilenglicólica/ acetoínica (acetil metil carbinol) que es una vía alternativa de metabolismo de acido pirúvico. en presencia de aire y hidróxido potásico 40%/KOH (por oxidación) se forma => diacetilo y añadiendo alfa naftol.=> VP+.solución de hidróxido potásico al 40% o hidroxilo sódico al 40% (KOH). las bacterias VP+ producen menor cantidad de ácidos mixtos que serán insuficientes para bajar pH del medio con rojo metilo. E. se añade 0. agitar e inclinar casi horizontalmente el tubo para que se favorezca la oxidación de la acetoína.6 ml de la solución alfa naftol.5 ml de reactivo de Clark y Lubs y dejar incubar entre 18-24 horas (c) a este cultivo se le añaden unas 5 gotas de indicador rojo de metilo que es rojo a pH 4. el medio cambiara de color cuando el pH sea inferior a 4.ej. solución de alfa naftol (VP2). cuando una bacteria es RM.ej. Klebsiella pneumoniae y Enterobacter aerogenes. la acetoína forma => 2. la superficie del medio queda de color amarillento o cobrizo (la reacción de los reactivos al mezclarse). Resultados => en VP positiva (+). solución de rojo de metilo y microorganismo Técnica => (a) en el tubo del medio Clark y Lubs se siembra el microorganismo problema (b) actualmente se utiliza la modificación de Barry que es poner un inoculo abundante en 0.coli y Proteus. p. .5 y amarillo a pH 6.5.3 butanodiol. microorganismo problema. VP negativa (-)p.Material => igual que anterior Reactivo => Medio de Clark y Lubs en tubo (liquido amarillo). se forma un complejo rojo.o VP. Técnica => en un tubo de ensayo que contenga un medio de Clark y Lubs se siembra el microorganismo problema.3. por reducción.

también utilizan las sales de amonio. E. aparece color azul intenso en la superficie del medio y crecimiento de colonias en la lengüeta. la alcalinización del medio es producido por la formación de amoniaco a partir de las sales de amonio que había y la formación de carbonatos y bicarbonatos se debe a la degradación del citrato. solo la lengüeta y guardar otro tubo que sirve de control negativo. leer los resultados a las 18-24 horas de incubación.ej. Enterobacter aerogenes. en Citrato (-)p. incubar 24-48 horas a 37ºC dejando los tubos destapados para que se desprenda el CO2.ej.Prueba del Citrato => se investiga la capacidad del microorganismo de utilizar el citrato como única fuente de carbono y sales de amonio inorgánicas como fuente de nitrógeno. citrato sódico es una sal de acido cítrico que es uno de los metabolitos del ciclo de Krebs y algunas bacterias pueden obtener energía por una vía diferente a la de la fermentacion de los hidratos de carbono.coli. utilizando al citrato como única fuente de carbono. Material => igual que anterior Reactivos => medio solido de Citrato de Simmons en tubo con azul de bromotimol (agar inclinado) y microorganismo de problema Técnica => inocular un tubo de Citrato de Simmons con microorganismo mediante escobillón. por el crecimiento de colonias y el viraje de color del indicador incorporado en el medio causado por la alcalinización. los microorganismos que utilizan el citrato. Resultados => en Citrato (+) p. no aparece cambio de color (verde) ni crecimiento. .

Biomerieux) El material y reactivos necesarios para la realización de estas pruebas se encuentran comercializados en kits. después de utilizar todo debe ser incinerado o descontaminado en autoclave o sumergido en un germicida. mediante un código numérico o colorimétrico. anaerobios. donde pueden leer hasta 11 características). estafilococos.Micro-técnicas 1. principalmente se utiliza para la detección de Enterobacteriaceas. fundamento => los medios deshidratados en micro- tubos se re-hidratan mediante una suspensión de 5 ml de agua estéril con 1 colonia bacteriana y se incuban. fundamento => un tubo en forma de lápiz con numerosos compartimentos (normalmente son 8 con diferentes medios. levaduras. este tubo se inocula (con 1 colonia del medio y alambre de la inoculación atraviesa todas las cámaras) y se incuba. Sistemas en Tubos (entero-Tube BBL) Se utiliza para identificación de Enterobacteriaceas y otras aplicaciones. bacterias aerobios no-fermentativas. se puede identificar al microorganismo. 2. Sistema en Tiras (API . genera cambios del color en el medio de cultivo o al añadir reactivos y esos cambios se interpretan mediante tablas de lectura o ordenadores (se deben seguir rigurosamente las instrucciones del fabricante). produce cambios de color en cada compartimento. . el proceso metabolismo del microorganismo.

3.Para detección primaria del crecimiento (espectrofotometría infrarroja) => detecta los niveles de anhídrido carbónico (CO2). identificación y antibiograma) . . metodos automatizados Cuando las muestras son procesadas a traves de metodos automatizados se logran excelentes resultados en tiempo muy cortos (se deben seguir las normas dadas por los fabricantes). Sistema rápidos .ej. p.Para identificación (fotometría) => VITECK (crecimiento. BACTEC .

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detección debetalactamasa. diferentes metodos de antibiograma => (1) por difusión que daran resultados cualitativos de resistencia.Tema 17 .ej. etc. sensibilidad o intermedios a los diferentes ATB (2) por dilución nos dará resultados cuantitativos en base a 2 conceptos (CMI/ Concentración Mínima Inhibitoria y CMB/ CM Bactericida) (3) por detección enzimática. CMB => la mínima cantidad de ATB que mataría al germen. acetilasa. siendo por tanto la CMI es el termino mas utilizado. normalmente CMI es suficiente para combatir una infección y los mecanismos inmunitarios se encargan de eliminar el microorganismo. Clasificación de las sustancias anti-microbianas: (a) un microorganismo es sensible => cuando ATB alcanza niveles plasmáticos => a CMI en el lugar de la infección. se debe hacer antes de establecer el tto de una infección microbiana.estudio de la sensibilidad del microorganismo patológico a los antimicrobianos.Pruebas de sensibilidad a los anti- microbianos Antibiograma . (b) un microorganismo es resistente => cuando la concentración máxima de ATB que se puede localizar en el lugar de la infección no es suficiente para eliminar el . CMI => la mínima cantidad de ATB capaz de inhibir el crecimiento de un germen. consiste en detectar la enzima del germen que confiere resistencia a los ATB p. adenilasa.

ni tampoco utilizar mezclas de gérmenes (se debe realizar un aislamiento por agotamiento en placa). La selección de ATB representativo de cada grupo para realizar las pruebas de sensibilidad Normalmente se selecciona un ATB representativo de cada grupo para realizar las pruebas de sensibilidad.ej. Normas básicas => no efectuar un antibiograma directamente del producto patológico. pero con una dosis alta en el lugar de la infección sin llegar a dosis que produzcan efectos tóxicos. Factores a tener en cuenta => (1) características tintoriales del germen (Gram+o-) (2)lugar de la infección (especialmente las vías urinarias y meningitis). se dará una dosis toxico o una combinación de ATB por vía endovenosa. es decir. habitualmente se acepta que no es necesario hacer pruebas de sensibilidad para un ATB cuando no se han descrito resistencias en esas especies.germen. para elegir un ATB se deberá ensayar aquellos que son útiles clínicamente y se encuentran disponibles en el mercado farmacéutico. (c) microorganismo de sensibilidad intermedia => no esta afectado por dosis normales de ATB dadas a intervalos normales.la concentración de ATB necesario para destruir el germen no se puede elevar mas por efectos tóxicos secundarios. excepto para muestras de orina ambulatoria (normalmente es una infección mono-microbiana). . es importante porque es necesario que la CMI sea alcanzable en los líquidos corporales para que sea efectivo (3)bacteria investigada. puede eliminar el germen. Casos clínicos => Pseudomonas que da problemas respiratoria/ urinaria y es resistente a casi todos los ATB. p.Streptococcus pyogenes.

Penicilinas . coli. aborto séptico.ej. bacteriuria. sepsis puerperal. 3. profilaxis quirúrgica. Cefalosporinas .influenzae. pielonefritis. Aminoglicosidos => en general su mecanismo de acción es la inhibición de la síntesis de proteína en diferentes fases según el ATB. Staphylococcus epidermidis y estreptococo beta-hemolítico. son susceptibles Escherichia coli. * Penicilina G sodica . como p.tiene espectro desigual => aveces es mas efectivo a uno pero no a otro. en general derivan de los hongos y son potentes bactericidas.se utiliza comúnmente frente a las infecciones causadas por Pseudomonas aeruginosa. son de amplio espectro y provocan toxicidad renal y audio vestíbular en alta dosis o a las personas susceptible. la forma oral es P V * Amoxicilina . neumonías bacterianas y bronconeumonía. como:Mycobacterium tuberculosis. De piel y tejido blando (incluida infección de herida quirúrgica).infección del tracto respiratorio inferior: bronquitis aguda y crónica. Klebsiella pneumoniae. porestreptococo.Genitourinaria: cistitis.actualmente se ha desarrollado la 4ª generación (semi- sintéticos. . a. neumococo y H. Gastrointestinal: fiebre tifoidea o paratifoidea. bacteriostáticas frente a cocos Gram+ y bacilos Gram-) * Cefotaxima (indicado para gonorrea. Klebsiella. son bactericidas. estreptococos. enterococos. Derivados de betalactámicos: * Aztreonam . Sta- phylococcus aureus. Citrobacter y Proteus. Proteus mirabilis) 2. Salmonellas. Betalactámicos => todo el grupo tiene en común que presenta un anilla betalactámicoy el mecanismo de acción consiste en inhibir la formación de peptidoglicano de la pared celular. estafilococosensible. epiglotitis y meningitis porHaemophilus) * Cefuroxima (efectividad contra Neisseria gonorrheae y otras bacterias productoras de penicilinasa. pero su espectro abarca a las enterobacterias (incluida Escherichia coli). * Amoxicilina + acido clavulanico (es un inhibidor de las betalactámasas producida por algunas bacterias) b. Haemophilus. * Estreptomicina (tratamiento de infecciones causadas por gérmenes sensibles. estafilococo sensible y E. es activa contra Streptococcus pneumoniae. uretritis. gonorrea. producidas por estreptococo.1.

son fármacos de elección en brucelosis.=> ambas (polimixinas) se usan tópicamente sobre Gram-.aureus y S. se reservan para infecciones de Gram+ resistentes.coli y S. Vibrio. son ATB de segunda elección (para bacilos Gram. Enterobacter sp. Lincosamidas => inhibe la síntesis proteica * Clindamicina (es un buen ATB frente anaerobios) . incluyendo enterobac- teriáceas. ATB polipeptídicos y glucopeptídicos => su mecanismo de acción es inhibir la formación de peptido glicano de la pared celular (bactericidas) a.aerobias.aureus) * Neomicina (es activo in vitro contra Escherichia coli. son de amplio espectro.son bacteriostáticas y su mecanismo de acción es inhibir la síntesis de las proteínas. Haemophillus y Bordetella. E. en especial Bacteroides fragilis.como Haemophilus influenzae. granuloma inguinal (ETS). Klebsiella y contra flora anaeróbica intestinal) 4. es bactericida... Providencia y Serratia). es eficaz en infecciones del tracto respiratorio) * Gentamicina (Actúa sobre bacterias Gram.Pseudomonas y Haemophilus. también se usa como ATB de identificación. 7.aeruginosa.neumococos y algunos Gram. tiene acción ante cocos Gram+ y bacilos Gram+ b. bronconeumonía y bronquitis aguda causadas por P. tienen acción ante entero- bacterias (excepto Proteus. Tetraciclinas . Activos frente a Gram+ * Bacitracina .actúa sobre la síntesis proteica y destaca su acción sobreStaphylococcus aureus. origen biológico o semi-sintético..aerobios. no se deben administrar a menores de 8 años por tener efecto secundarios sobre la dentición y los huesos. cólera. Klebsiella sp.activas frente a cocos y bacilos Gram+ y Gram. se utiliza tópicamente para infecciones cutáneas (por su efecto de nefrotoxicidad) actúa sobre cocos y bacilos Gram+ (Neisseria y Treponema pallidum) * Vancomicina . además es efectiva en contra de anaerobios.Su actividad antibacteriana essimilar a la de eritromicina (macrolidos) en contra de estafilococos y estreptococos.por su alta toxicidad renal y óptica. 5. Serratia sp. Activos frente a Gram. también pueden producir toxicidad sobre el tracto gastrointestinal y el higado. Pasteurella.es un ATB de origen español de un amplio espectro que actúa sobre la pared celular (se usa en infección urinaria) * Acido fucsidico . * Tetraciclina * Doxiciclina . Activos frente a Mycobacterium tuberculosis 6. fiebre Q.es el tratamiento de fiebre tifus.epidermidis) * Tobramicina (Infecciones del tracto respiratorio inferior como neumonía. resistentes a otros ATB) * Polimixina B * Polimixina E (Colistina) c. Pseudomonas aeruginosa. erupciones . Actúa también sobre estafiloco- cos (S. Otros * Fosfomicina .es utilizado para la identificación del estreptococo del grupo A a cual es sensible. es bactericida.

actualmente se emplea: . inhibe la síntesis de acido fólico.intracellulare.para tratar ciertas infecciones causadas por las bacterias. enfermedades de transmisión sexual (ETS). 11. reagudización de bronquitis crónica. amplio espectro.inhibe la síntesis de acido fólico. brucelosis causada por especies de Brucella (junto con estreptomicina). oídos e intestinos c.inhiben la replicacioón del ADN bacteriano son buenos ATB de amplio espectro. cólera causada por Vibrio chole- rae (anteriormente Vibrio comma). 8. neumonía bacteriana (adquirida en la comunidad). inhibe la replicación del ADN bacteriano. faringitis. tos ferina) b. infección localizada o diseminada porMycobacterium avium o M. el tratamiento de infecciones causadas por Gram- : chancroide causado por Haemophilus ducreyi. inhibe la síntesis proteica y es toxica a nivel medular. amigdalitis. pulmones. foliculitis. M. de origen sintetico. plaga debida a Yersinia pestis (anteriormente Pasteurella pestis). bartonelosis causada por Bartonella bacilliformis.inhiben la síntesis proteica.chelonae. pero se ha abusado mucho. también se usa para tratar o prevenir el ántrax (una infección grave que se puede propagar en forma intencional como parte de un ataque bioterrorista) en quienes han estado expuestos a los gérmenes del ántrax suspendidos en el aire. celulitis.interfiere la síntesis de proteínas en las bacterias sensibles. c. tomar ciprofloxacina aumenta el riesgo de que desarrolle tendinitis. tularemia debida a Francisella tularensis (anteriormente Pasteurella tularensis). y las infecciones en los oídos. Norfloxacina . Nocardia) b. Quinolonas (6) . legionelosis. infecciones del tracto respiratorio causadas por Mycoplasma pneumoniae. los pulmones (neumonía). a. e. la gripe y otras infecciones virales. Trimetropin+sulfametoxazol (cotrimoxazol) . erisipela. Quimioterapia antituberculosa . se dan cuando es alérgica a penicilina. incluyendo las infecciones que afectan las vías urinarias.es de amplio espectro. Eritromicina (un buen ATB frente neumónia atípica. para tratar o prevenir determinadas infecciones bacterianas. como la bronquitis. Claritomicina . d. Azitromicina . granuloma inguinal causado por Calymmatobacterium granulomatis. Clamidias. bacteriostático. Quimioterápicos de síntesis a. activo frente Gram+ y -. Macrolidos y similares . elimina las bacterias que provocan infecciones. sinusitis. piel y garganta.kansaii. La norfloxacina pertenece a una clase de antibióticos llamadosfluoroquinolonas.avium complex en pacientes con VIH de alto riesgo 10. bronquitis aguda. infecciones por Campylobacter en fetos causadas por Campylobacter fetus (anteriormente Vibrio fetus). infección localizada por M. tomar norfloxacina aumenta el riesgo de que desarrolle tendinitis. no tienen ningún efecto sobre los resfriados. Sulfamidas (es bacteriostático.infecciones de las vías urinarias y la próstata. infección de piel y tejidos blandos leve-moderada.inhibe la replicación del ADN bacteriano. Cloranfenicol . neumonía. Ciprofloxacina .pustulosas porRicketsias y fiebre de las montañas rocosas por Ricketsias. Prevención de infección diseminada por M. difteria. son bacteriostáticos y bactericidas en alta dosis. actúa frente a Gram+ y - (especialmenteHaemophilus influenzae y Salmonella) 9. fortuitum y M. es de origen sintético.

epidermidis.* Rifampicina . Quimioterapia antimicótica: * Nistatina * Miconazol * Amfotericina B. * Ribavirina . 12. * Isoniacida .) Antibióticos . sensibilidad del neumococo/S. Esta actúa impidiendo que el virus que provoca la hepatitis C se propague dentro del cuerpo.para tratar la tuberculosis.ATB sistémico.el tratamiento de tuberculosis pulmonar.La ribavirina se utiliza con un medicamento interferón. S. Erradicación de meningococos en portadores asintomáticos.faecium). Quimioterapia anti-viral * Aciclovir . del S.técnicas que investigan la actividad anti-microbiana de distintos quimioterápicos frente al microorganismo estudiado. La ribavirina pertenece a una clase de medicamentos antivirales llamados análogos de nucleósidos. Son técnicas estandarizadas y se ha demostrado que existe un paralelismo entre los resultados de sensibilidad obtenidos in vitro con los efectos terapéuticos in vivo.. la terapia con isoniazida (y otros medicamentos para evitar la tuberculosis) debe hacerse durante mucho tiempo (por lo general entre 6 y 12 meses). Debido a que las bacterias pueden estar en un período de incubación (sin crecimiento) durante largos períodos. Alérgicos o con contraindicaciones a otros antibióticos o quimioterápicos.faecalis. Pasco. Pruebas de sensibilidad anti-microbiana .. debe ser usado en conjunción con otros fármacos antituberculosos. Tuberculosis en todas sus formas (asociado a otros tuberculostáticos).un grupo de compuestos químicos terapéuticamente muy útiles y queantaño se caracterizaban por ser subproductos metabólicos de un . cepas polirresistentes) y porenterococos (S.aureus. inhibe la replicación de ADN viral. la prueba mas utilizada es la difusión en medio solido a excepción de los grandes laboratorios que utilizan sistemas multiprueba o métodos automatizados (Vitec. * Etambutol .constituye una base fundamental para la instauración de una terapia adecuada.Brucelosis.ej.pneumonia a la optiquina.pyogenes a la Bacitracina) . bactericida. S. Elimina sólo las bacterias activas (en crecimiento). antituberculoso.antiviral activo frente al virus herpes humano. Inhibe la síntesis de ARN bacteriano. no enfermos. y para prevenirla en personas que han tenido contacto con las bacterias de la tuberculosis. interfiriendo con el ADN polimerasa viral. Infecciones causadas por estafilococos (S.contribuir a la identificación de los microorganismos (p. sus principales aplicaciones: . * Fluconazol 13. para tratar la hepatitis C en personas que no han sido tratadas con interferón antes.

Pruebas enzimáticas de detección => fundamentalmente se detectan las beta-lactamasas. cuandoAlexander Flemming descubrió la penicilina extrayendo-lo de un hongo (Penicillium notatum) siendo en 1929 cuando efectuó los primero ensayos de sensibilidad anti-microbiana (se contaminaron las placas sin querer por un hongo). Kirby-Bauer y Anderson estandarizaron la técnica que se utiliza actualmente por difusión en medio solido o en placa. en el tubo donde no hay turbidez se ha inhibido el crecimiento de los gérmenes.ej. Los principales pruebas para hacer un antibiograma: a. uno de los primeros es descubierto en 1927. un reducido numero de bacterias son resistentes a las penicilinas y . 2 tipos => en medio liquido y solido.Microorganismo resistente o resistencia => no es sensible al ATB a dosis habituales y es necesario administrar dosis toxicas . sensibilidad intermedia o resistencia (no se utilizan habitualmente). c.con estos datos estudiamos la CMI y la CMB de los antibióticos. Pruebas de elución en disco (disolver) => se realiza introduciendo discos de un ATB en tubos con caldo nutritivo.CMI (cantidad mínima inhibitoria) => es la menor concentración de un ATB capaz de inhibir el crecimiento bacteriano de una cepa dada . Prueba de difusión en medio solido (de Kirby-Bauer) b. Prueba de elución en disco 3. Pruebas de dilución (es una técnica de centros de investigación /lenta /engorrosas)=> se basan en el estudio al unisono de diferentes concentraciones de ATB. Automatizadas Términos utilizados en las pruebas anti-microbianas: .CMB (cantidad mínima bactericida) => es la menor concentración de un ATB con la que no quedan bacterias vivas de una cepa dada Técnicas manuales de realización de las pruebas de sensibilidad anti- microbiana a.microorganismo siendo casi siempre letal para otros gérmenes (p. se utilizan 10 tubos con gérmenes en caldo nutritivo o agar y a cada tubo se le añade una cantidad prefijada de ATB diluido seriadamente. posteriormente se inocula un volumen de una suspensión microbiana y se sigue la misma metodología descrita antes obteniéndose resultados cuantitativos o cualitativos en base a sensibilidad. b. a los hongos). actualmente la mayoría son sintetizados en el laboratorio. lo que les da un carácter cuantitativo en base a los conceptos CMB y CMI. excepto en el tubo de control. Manuales 1. el ATB se disuelve en el caldo alcanzando una concentración final conocida.Microorganismo de sensibilidad intermedia => el germen "in vitro" no es claramente sensible al ATB. se incuban 18-24 horas a 37ºC y se examina la turbidez que indica crecimiento de gérmenes. en 1939 Rose y Miller intentaron estandarizar las múltiples variantes de los análisis de sensibilidad microbiana por difusión en placa y posteriormente en los años 50. pero si lo seria "in vivo" incrementando la dosis habitual sin llegar a dosis toxicas . Prueba de dilución en medio solido y liquido 2.Microorganismo sensible o sensibilidad => es inhibido por un ATB a dosis habituales . Prueba de detección enzimática 4.

5 se prepara añadiendo 0. suspensión microbiana al 0. Manual => se saca el disco de ATB con unas pinzas estériles y se deposita en la placa. pinzas metálicas estériles o dispensador automático. Técnica => el medio Mueller-Hinton se vierte en placas con un espesor de 4 mm.(b) la de Barry: se hace una inoculación previa al vertido de las placas. se añaden 0. material => placas de Petri (9cm). los gonococos.5 ml de Cl2Ba 0.cefalosporinas (ATB B-lactámicos) debido a que producen un enzima (b-lactamasa) capaz de inactivar estos ATB. se escogen discos con una concentración que producen un halo de inhibición entre 20 y 30 mm para organismos tipificados como sensibles y de menos de 10 mm para los resistentes. discos de ATB.36M). pneumococo y algunos estreptococos. el lugar de la infección (orina./ml. la difusión del ATB a traves del medio produce un halo de inhibición del crecimiento cuyo diámetro sera proporcional a la potencia del ATB dando resultados cualitativos de resistencia. en general.ej.5 ml de acido sulfúrico 0.5 escala Mc Farland (10 elevado 8 u. escala Mc Farland => el 0. los aspectos importantes que prevalecen a la hora de seleccionar un ATB => las características tintoriales del germen (Gram+o-). p. fundamento => depositar discos impregnados de ATB sobre cultivos de microorganismos en placa. Implantación de los discos (papel de filtro grueso de un diámetro 6mm que van impregnados con una concentración determinada de ATB).c. la siembra utilizada preferentemente (a) la de Kirby-Bauer: se introduce un escobillón en el inoculo preparado al 0.1 ml del inoculo a 25 ml del medio Mueller- Hinton fundido y se vierte en placa (no se usa mas) Elección de ATB => se debe seleccionar un ATB representativo de cada grupo excepto en los casos donde existan diferencias significativas en los espectros de actividad o resistencia. sensibilidad o sensibilidad intermedia a los ATB. Concentración de los discos => tiene que estar perfectamente estandarizada siguéndose las normas de la Federación de Drogas y Alimentos/ FDA => la actividad del disco debe estar entre 65% y 150% y de la OMS => entre 75% y 135%. medio Mueller-Hinton. consiste en observar el crecimiento de los gérmenes en presencia de dichos ATB. pie de rey o regla milimetrada. se denomina Prueba de NITROCEFIN. siempre se debe utilizar un control para controlar la actividad de los discos. se toma la colonia sospechosa y mezclar-la con un sustrato que si cambia de color nos indica que la colonia es B-lactamasa (+).5 Mc Farland (no tenemos) y se siembra en 3 direcciones y se deja aproximadamente 4 minutos la placa semi-abierta e invertida antes de colocar los discos. la distancia mínima . por lo tanto es resistente a los ATB B-lactamico. Prueba de difusión en medio solido (antibiograma clásico) => estandarizadodesde los años 50 (se hace igual en todo el mundo) por Kirby-Bauer y Anderson en todos sus pasos y es mas utilizado actualmente en forma manual. meningitis) y la bacteria investigada.f.04 M a 99. d. una placa llena => mas de 10 elevado 6.

y según cual sea clasificaremos al germen como sensible (la dosis habituales es eficaz). la CIM o una sensibilidad cualitativa (sensible.entre los discos es de 24 mm para evitar la superposición de los halos. y con una pinza se presionan ligeramente los discos para que al girar o invertir la placa no se caigan los discos. el ordenador puede dar resultados a las 4 horas (lo normal entre 4 -13 horas) El sistema Microscan utiliza un sistema semejante al de dilución en caldo pero en miniatura utilizando paneles con caldo de Mueller-Hinton deshidratado (como API). intermedio (se deben incrementar las dosis habituales sin llegar a dosis toxicas) o resistente (ATB es totalmente ineficaz). preservar la estandarización en todos sus pasos 2. tras la inoculación y re-hidratación con una suspensión estandarizada del microorganismo y su incubación a 35ºC por un mínimo de 16 horas. Aunque el medio elegido es el Mueller-Hinton.actualmente existen diferentes metodos automatizados para realizar el antibiograma. Observación al método: 1. el halo se mide con una regla calibrada o pie de rey midiendo los diámetros. leyéndose de manera automática los resultados cada hora. otros metodos se basan en técnicas de impedancia eléctrica microcalorimetría bioluminiscencia. puesto que la difusión del ATB es casi instantánea no debe moverse ningún disco una vez que se ha puesto en contacto con la superficie del agar 3. agar chocolate (Haemophylus) para gérmenes exigentes 6. se resume: . la tarjeta presenta unas perforaciones donde lleva incorporadas diferentes medios selectivos liofilizados.ej. los discos se tienen que conservar en la nevera 4.la tarjeta se sella y se coloca en un modulo incubador y de lectura.. . los mas utilizados se basan fundamentalmente en la medida bien fotométrica o bien turbidimétrica del efecto de un ATB sobre el crecimiento de una bacteria en medio liquido comparándolo con el de la misma bacteria en un medio sin ATB. procurar que la lectura se haga a las 18-24 horas. cuando el germen sea anaerobio el método es diferente Método automatizados de identificación y susceptibilidad . radiometría . intermedio o resistente) para el organismo en prueba se determina observando la menor concentración ATB.. Incubación => 18-24 horas a 35-37ºC (máximo 48 horas) Lectura e interpretación del antibiograma => los resultados se expresan según el halo de inhibición que aparece alrededor de cada disco. Los metodos fotométrico y turbidimétrico p.se utilizan unas tarjetas desechables del tamaño de un naipe donde se inyecta la muestra ya diluida mediante un modulo inyector. Automática => se utilizan dispensadores automáticos que son unos dispositivos de plástico del tamaño de una placa de Petri con unos orificios guía que permiten la colocación simultanea de todos los discos en el lugar adecuado. sistema Vitec. evitándose el exceso de incubación 5. esta detección puede hacerse manualmente mediante un . se pueden emplear medios enriquecidos como AS (estreptococo). de vez en cuando hay que colocar controles de calidad 7. los datos los almacena un ordenador que los compara con valores umbrales ya almacenados. deben estar situados a 15 mm del borde como mínimo (se colocan 8 discos) una vez depositado el disco se presiona ligeramente con la punta de pinzas. que muestre inhibición de crecimiento.

Clasificación de los antibióticos según su efecto bacteriano Bactericidas => Penicilinas. Vancomicina. Doxicilina. Aminoglucósidos. Clor anfenicol Clasificación de los antibióticos según su mecanismo de acción sobre la estructura bacteriana I. viene en tripletes de un ATB con diferentes concentraciones. Rifampicina. Qui nolonas. Agentes antimicrobianos (ATB) activos frente a Gram. Tobramicina. frente a ambos Gram+ y . . Amoxicilina+acido clavulonico. Cotrimoxazol. Novobiocina. Eritromicina. Tetraciclina. Imipenem. Meticilina. Inhibición de la síntesis de la pared celular Penicilinas Cefalosporinas Vancomicina Fosfomicina Tercoplanina Bacitracina II. frente a Gram+ => Eritromicina.=> Cefuroxima. Cloranfenicol. Cefalosporinas. Cefotaxima.visualizador de micro-dilución o mediante un lector conectado a un ordenador. Gentamicina. Sulfonamida. Colistina. Cefalotina. Polimixinas. Monobactámicos. Bacteriostáticos=> Tetraciclinas. Lesión en la permeabilidad de la membrana celular Poliomixinas Colistinas Nistatina Anfotericín B .=> Ampicilina. Clindamicina.

y de otros que incluso pueden comportarse como tóxicos.La eliminación de nuestro organismo de una importante cantidad deresiduos metabólicos. tanto la supervivencia de las células como el optimo desarrollo de todos los procesos metabólicos.La regulación de la composición de los fluidos de nuestro organismo facilitando así. Inhibición de la síntesis de ácidos nucleicos Quinolonas Sulfonamidas Rifampicina Trimetropín Nota: (*) Penicilina semisintética resistente penicilinasa Estudio de la orina Función del riñón: . muchos de ellos inútiles. Inhibición de la síntesis proteica Cloranfenicol Tetraciclina Aminoglucósidos Lincomicinas Eritromicina IV.III. . .

aminoácidos. El glomerulo . ácido úrico. filtrar/ depurar el plasma 25 ml de sangre por minuto (150 litros de plasma/ dia). se filtra agua.rodeado de una cavidad (capsula de Bowman) y dispone de una extensa red vascular. proteina) y permite la secreción de otras que. proteínas de bajo pm.el filtrado por el glomerulo es recogido en la capsula de Bowman y se dirige hacia la red tubular donde se lleva a cabo un proceso de reabsorción selectiva => reabsorber agua. por su toxicidad.Cateterismo vesical/ sondaje (realizada por personal enfermería) => pacientes que presentan dificultades de la micción. desde la red capilar hacia los túbulos renales.Reabsorción tubular => el producto de la filtración glomerular se modifica su composicion al atravesar la red tubular. prevención: eliminar la primera porción de la micción y asegurar el lavado minucioso previo de los genitales. . potasio.Filtración glomerular => filtra el plasma desde los capilares que lo envuelven hasta la capsula de Bowman. que permite la regulación del equilibrio acido-base en el organismo.El control de la eritropoyesis (eritropoyetina) Nefronas . ciertos elementos útiles para el organismo y que deben ser recuperadas (glucosa. La red tubular . 1. la red tubular esta formada por => túbulo contorneado proximal. Mecanismo de la función renal: . deben ser posteriormente eliminadas mediante la micción (amonio.25 dihidroxicolecalciferol) .Secreción tubular => transporte de sustancias. cloruro. creatinina. se elimina 1 ml de orina por minuto (1500 ml diarios).son unidades funcionales básicas consiste de 2 partes => el glomerulo (dentro de la cavidad "capsula de Bowman") y la red tubular. indicar las pautas de almacenaje y transporteadecuado (si se toma fuera del laboratorio). urea. noradrenalina) . Recogida de muestras de orina . destaca la secreción activa de iones H+. indicaciones: análisis fisico- químico. concentración de creatina y microbiologia (en ocasiones). insistir en la importancia de la limpieza en general y de la higiene antes de la recogida (evitar la contaminación involuntaria).El control de los niveles orgánicos del calcio (mineral corticoides aldosterona. tener en cuenta la capacidad del paciente para evacuar la vejiga de forma voluntaria y la necesidad de utilizar técnicas invasivas para obtener la orina en condiciones adecuadas. urea. agua. .. estudio del sedimento. sodio. Procedimiento de la recogida de muestra (el personal facultativo determina el tipo de muestra necesaria para el análisis) => informar a la persona del objeto del análisis. mujeres para evitar la contaminación vaginal. túbulo contorneado distal y túbulo colector.El control hormonal de la presión arterial (adrenalina.Micción espontanea => paciente responsable de la misma para obtener muestra sin contaminación. orientar acerca dela técnica de obtención de la misma. aminoácidos. asa de Henle. . urea. . indicar el tipo de muestra deseada. describir el tipo y características mas adecuadas del recipiente a utilizar. hidrogeniones/H+). glucosa. bicarbonato.

sangre/hemoglobina.Microscópico => estudio de estructuras cristalinas/cristales y de formas amorfas en suspensión.detectar la existencia de una alteración a nivel de las vías urinarias . Objetivos: .detectar alguna alteración en la concentración (por defecto o por exceso) de componentes que habitualmente se encuentran en la orina Tipos de análisis de orina => análisis elemental. formas de resistencia (quistes). Parámetro bioquímico => Densidad . .. densidad. rutinario. color.sedimentación (a 1500 rpm durante 10-15 minutos) .Glucosa . estudio citológico.Orina minutada (fraccionada.Parasitológico => técnicas especificas de visualización macroscópica de parásitos. de 2 horas. glucosa. . bilirrubina/ pigmentos biliares.Físico/macroscópico => cantidad.pH . ATB (antibiograma). estados fisiológicos particulares no patológicos (embarazo) y un buen funcionamiento renal. detectar alteraciones funcionales de otros órganos . procesos metabólicos) => permite detectar alteraciones patológicas. Análisis general de una muestra de orina: . nitritos . completo. aspecto/turbidez. la . .Hemoglobina . identificación del germen (pruebas bioquímicas). urobilinógeno/ urobilina.teniendo en cuenta aquellos productos que se eliminan vía urinaria.se intenta encontrar sustancias o componentes que normalmente no se encuentran en la orina . huevos. pH . Tipos de muestras para un análisis de orina (sin supervisión - micción espontanea): . estudio microscópico de parásitos en la muestra de orina: parásitos enteros o parte de ellos.Cuerpos cetónicos - Proteínas .Orina tomada al azar => muestra valida para cultivos microbiologicos .Químico/anormales => proteínas. olor. obtener información del estado general del riñon y las lesiones que pudieran afectarlo . su cantidad y la proporción en que se encuentran. El orden cronológico de un análisis general=> características físicas macroscópica .Nitritos . estudio bacteriológico.Punción supra-púbica (realizada por personal facultativo) => diagnostico de infección por microorganismos extraños en niños.Microbiológico => urinocultivo.pruebas bioquímicas (tiras reactivas). procedimiento técnico encaminado a examinar los componentes que la integran.Urobilinogeno . su estudio proporciona gran información acerca de múltiples alteraciones orgánicas y de muy diversa etiología (riñon.Hematíes - Leucocitos (actualmente se utiliza determinación por química seca / tiras reactivas). cuerpos cetónicos. anormales y sedimento.Primera orina de la mañana => se recomienda porque la concentración de solutos es variable a lo largo del día y esta en relación con la ingesta de liquidos.detectar las alteraciones metabólicas de diversa etiologia . de 24 horas) => gran utilidad para el paciente diabeticos Análisis de orina .Bilirrubina .

Proteinuria => eliminación de proteina en orina superando los VN .Cantidad / diuresis normal 1200-2000 ml/24H.de patrón glomerular => pierde su selectividad en la filtración. (e) IgA. . almacenada: sedimento blanco/fosfatos y carbonatos. Examen físico .macroscópico Es orientativo => para diagnosticar una patología.moderada (de 0.de forma persistente => suele cursar con hematuria y su pronostico es peor.030 (se determina mediante tiras reactivas). normoglucemia => 6-120 mg/dl.010-1.intensa (>4 g/día) indica un daño renal grave. poliuria/superior. (b) globulinas.la orina normal carece casi por completo de glucosa (filtrado y absorbido). cetonuria => aparición de cuerpos cetónicos detectables en orina. Pruebas bioquímicas cuantitativas Proteínas .en condiciones normales las proteínas se encuentran 130-150 mg/día en función del volumen de orina eliminado.) que pueden alterar las características de la muestra. mieloma multiple.5 . (d) transferrina. la presencia de cetonuria y el aumento de cetonemia implica que no se realiza correctamente el catabolismo oxidativo de los ácidos grasos.leve (<0. de forma que en la orina aparecen en concentraciones mínimas (indetectables). en recién nacidos 2-8 mg/100 ml.se forma en el tubulo contorneado distal. nefropatía diabética. acido beta- hidroxibutirico. glomerulonefritis (aguda y crónica). 6).en personas sanas. causada por (1) aumento de la glucemia por encima de umbral renal (2) alteración renal (tubulopatía) Cuerpos cetónicos (compuesto por acido acetilacetico/diacetico.Aspecto / turbidez. hay que tener en cuenta situaciones fisiológicas (menstruación. los CC se sintetizan en el hígado y se metabolizan por completo.5-6 (ligeramente ácida). de patrón tubular => cuando hay lesión tubular . (c) proteína de Tamm-Horsfall (T-H) es muco- proteína viscosa que no se encuentra en el plasma . acetona) . constituye la matriz de los cilindros. 1).de forma intermitente o transitoria => puede ser fisiológica (hay que comprobarlo) . .Color amarillo / ámbar (en función de la concentración) 4). pH alcalino => posible contenido de gérmenes con ureasa.cantidad de proteína (con peso molecular menor)=> (a) albumina 1/3 del total (fisiológica). recién emitida: clara y transparente. umbral renal 160 mg/dl. lesiones renales incipientes. se dan en pielonefritis con hipertensión. alteración => oliguria/inferior. anuria/falta de eliminación (<300 ml/24H) 2). grado de hidratación. etc. ligeramente amoniacal 5). Glucosa . hay que confirmar con otros análisis complementarios. hay que revisar los resultados del sedimento concuerdan con las pruebas químicas y comprobar las anomalías detectadas han sido confirmadas.muestra sobrante se debe guardar hasta que la analítica haya concluido.pH normal 5. .Densidad 1. 3).Olor aromático. glucosuria => aumento de la concentración de glucosa en orina por encima de los VN. las causas de cetonuria: . se dan en síndrome nefrótico. sedimento rojizo (uratos desaparecer al calentar la orina a 60ºC).5 g/día) se dan en riñones poliquísticos. . congestión venosa renal.4g/día) indica un daño renal menos graves.

- sobrecarga de lipidos en la dieta
- diabetes mellitus (coma diabetico)
- vómitos (en niños y embarazadas)
- bajo consumo de hidratos de carbono o alteración en su metabolismo
- ayuno prolongado

Hemoglobina - no aparece en orinas normales; hemoglobinuria => presencia
de Hb en orina (si la cantidad es alta, se puede ver a simple vista); causas
=> enfermedad renal de vías altas, anemias hemolíticas, reacciones transfusionales,
infecciones (malaria, paludismo)

Pigmentos biliares (bilirrubina y biliverdina) - se forman en bazo, higado y
MO por degradación fisiológica de Hb; 2 tipos => BB-Albumina / indirecta y BB-
Glucurónico /directa; aparece BB en orina, siempre que aumente la BB directa en
sangre por causas => enfermedad obstructiva (ictericia
obstructiva/ acumulación en sangre), lesiones hepáticas(hepatitis, hepato-
toxicidad).

Urobilinógeno - BB directa con la bilis, pasa al intestino delgado donde
por acción de la flora bacteriana se transforma en urobilinógeno o
estercobilinógeno (se elimina en mayoría con las heces y la orina en
menor concentración); la cantidad de urobilinógeno aumenta en la orina en las
hepatitis y las anemias hemolíticas; la determinación de urobilinógeno debe
realizarse rápidamente en orina, ya que se transforma en urobilina + O2 (falso
negativo).

Nitritos - su aparición en la orina indica crecimiento bacteriano (bacteriuria), de
germenes capaces de reducir los nitratos ingeridos con la dieta, hasta nitritos
(entero-bacterias); un resultado negativo de la prueba de los nitritos, no indica
ausencia de microorganismos, ya que puede haber bacterias que no son
productores de nitritos o ausencia de nitratos ingeridos en la dieta.

Examen microscópico de orina - sedimento urinario - estudio de elementos
o estructuras de origen y composicion variados que aparecen suspendidos en la
orina que proporciona ayuda para el diagnostico y evolución de las enfermedades
renales; la muestra debe examinarse antes de transcurridas 3-4 horas desde su
recogida (algunas estructuras como celulas y cilindros se
lisan fácilmente; obtención del sedimento: homogeneizar bien la muestra,
verter 10 ml en un tubo de centrifuga (fondo cónico), centrifugar a 1500 rpm
durante 10 minutos; decantar el sobrenadante (quedando solo 1 ml), re-
suspender el sedimento residual, montar un fresco (una gota entre porta y
cubreobjetos, evitando la formación de burbujas), observar al microscopio a 40x,
intensidad lumínica media y condensador a media altura; también se
puede observar a 10x en el perímetro de cubre si hay los cilindros hialinos.

Estructuras organizadas
- Hematíes: pueden proceder de cualquier parte del sistema renal; en gran
numeroindica infección, traumatismos, neoplasias y litiasis renal; presencia normal
de 1-2/campo o como una contaminación menstrual; pueden confundirse con
levaduras y cristal de oxalato cálcico monohidratado; con tinción Gram se
diferenciar => los hematíes son teñidos de rojo, levaduras de violeta y cristales
incoloros; es importante distinguir entre macro-hematuria (se ve en el sedimento
de color rojizo) y micro-hematuria (únicamente se detecta al

microscopio), también si el color rojo observado macroscópicamente procede
de hematíes o Hb (al centrifugar el sedimento, el color rojizo de Hb permanece).

- Leucocitos (neutrófilos): pueden proceder de cualquier parte del sistema
renal; >50% de ellos se lisan al permanecer mas de 2-3 horas a temperatura
ambiente; presencianormal de 1-2/campo (varón) y 1-3/campo (mujer); cifra
superior de normal en el sedimento => piuria (>5 leucocitos/campo indica
=> infección renal en cualquier nivel);

- Espermatozoides: formados por 2 partes cabeza y cola; frecuente en un
sedimento del varón (eyaculaciones recientes, poluciones nocturnas, etc.), y en
mujer después de haber mantenido relaciones sexuales.

- Bacterias: la composicion de orina es un excelente medio de cultivo para los
microorganismos; la mayoría de ocasiones son fruto de una contaminación de la
flora saprofita alojada en zonas próximas al meato urinario => anal, perineal,
vaginal (sobre todo en mujeres); su presencia en el sedimento, no debe ser tenida
en cuenta salvo que vaya acompañada de piuria (aumento de leucocitos).

- Levaduras: su presencia en la gran mayoría debido por una contaminación,
salvo acompañada de una piuria; en personas diabéticas, debido a la glucosuria,
parecen facilitar el crecimiento micótico; su identificación es sencilla, por su forma
ovoidea, frecuentemente con presencia de celulas en gemación; su tamaño es
ligeramente mayor que los hematíes (pueden confundirse); su aumento en la orina
se trata de vaginitis causada por Candida albicans.

- Parásitos: (1) Protozoos: normalmente se trata de Trichomonas
vaginalis (frecuente en sedimentos de mujeres con vaginitis que puede
ser asintomático y mas raro en los de hombres); aspecto piriforme de mayor
tamaño que los leucocitos y una gran motilidad (por sus flagelos);
su identificación es mas complicada cuando la motilidad esta mermada (al ser de
un tamaño semejante al de los leucocitos); la piuria que le acompaña puede hacer
pensar (erróneamente) en una infección bacteriana y se descarta esta posibilidad al
obtener urocultivos negativos;

(2) otros parásitos: su aparición es siempre el resultado de una contaminación de la
muestra de orina con materia fecal;

Celulas epiteliales: el árbol urinario esta revestido por 3 tipos de
epitelio => (1)columnar /tubular /renales /cuboideo (capsula de
Bowman, túbulos distal, proximal y colector) (2) transicional o urotelio (pelvis
renal, uréteres, vejiga y uretra) y (3) escamoso (uretra y vejiga); una
escasa descamación es normal, pero se puede aumentar por causas=>
microorganismos, productos químicos, cuerpos extraños, procesos degenerativos,
procesos invasivos-destructivos.

- Celulas tubulares /renales /cuboideas: son de tamaño 1/3 mayores que los
leucocitos; su forma normal es redonda con núcleo grande y céntrico; un
sedimento normal 0-1/campo; aumentado en pielonefritis y glomerulonefritis.

- Celulas de transición (segunda capa de vejiga): el epitelio transicional
espluriestratificado (3 capas => basal, intermedia y superficial); las celulas son de
tamaño2-4 veces mayor que leucocitos; su forma es redondeada, piriforme o
raqueta con un núcleo pequeño; un sedimento normal 0-2/campo; su aumento
exige un estudio citológico mas completo (p.ej. tinción de Papanicolau), por
posibilidad de un carcinoma en cualquier punto entre la pelvis renal y la vejiga.

el lugar de la nefrona en que se forman. el aumento de su presencia indica una nefropatía. replegados. sus borden son contrastados y angulados. hay que evitar un exceso de iluminación. causantes de su formación => (1) disminución del pH de la orina. se desintegra en la orina a pH alcalino y en presencia debacterias (con ureasa).. aspecto rígido y mayor refringencia. a veces sus bordes aparecen doblados. .Cilindros hialinos: se pueden encontrar en grandes cantidades en orinas normales (deshidratación y estrés físico) y también en nefropatías. son de mayor tamaño. 2 tipos => cilindros granulosos finos (semejante a los hialinos en tamaño y forma. un sedimentonormal 0-1/campo. Cilindros: se forma en túbulos colectores y distales. la matriz de todos ellos es una muco-proteína (Tamm-Horsfall)segregada en la orina. es un resultado de la consolidación de las proteínas en los túbulos de las nefronas.Celulas del epitelio escamoso: son planas y tienen abundante citoplasma con nucleo centrico y pequeño. su aparición en el sedimento no tiene significación clínica (1-2/campo). normalmente sus contornos se aprecian con suficiente nitidez y uno de sus extremos es romo (un dedo de guante). tienen mayor refringencia debido a la masiva pequeños gránulos de inclusión) y cilindros granulosos gruesos (estructura totalmente diferente a los hialinos. muy semejante a los hialinos. es normal encontrarse algunos (sobre todo hialinos) en el sedimento. . existe también cilindros granulo-hialinos. (2) aumento de la densidad o concentración de solutos. determina su tamaño y forma => cilindros estrechos (contorneados) proceden de los túbulos distales y cilindros anchos se originan en los túbulos colectores. . para visualizar su escasa refringencia. pero con algunas incrustaciones en su estructura (sin significación clínica).Cilindros granulosos: predomina la estructura granular y desaparece el aspecto hialino. en orina normal 0- 1/campo. (3) un grado de estancamiento de la orina (disminución del filtrado glomerular).

(2) Hemáticos (eritrocitarios) .fácil de reconocer porque los leucocitos presentes en su matriz se conservan estables durante el trayecto por los túbulos. indica una nefropatía todavía no manifestada. es un signo de lesión a nivel del parénquima renal (vasculares o pielonefritis).. su presencia normalmente acompañada por piuria intensa e indica infección localizada en el parénquima renal(pielonefritis) o lesiones de tipo inflamatorio (glomerulonefritis aguda).se parecen a los granulosos toscos. medicamentos y virus) puede causar la formación de este cilindros.aparecen en sedimentos con hematuria. la cantidad de estos cilindros suele ser escasa y dificulta su localización. .Cilindros celulares: la presencia de ellos en la orina nunca es normal.Cilindros grasos: cilindros granulosos o celulares con pequeñas inclusiones lipídico (gotitas de grasa). . tipos: (1) Epiteliales . (3) Leucocitarios . gran variedad de nefropatías. lesiones del epitelio tubular (debidas adiversos tóxicos industriales. muy refringentes y tonalidad amarillenta donde se localizan dichas inclusiones.la matriz del cilindro engloba celulas epiteliales que se han desprendido de la luz tubular. (4) Bacterianos . generalmente unidos a piuria y muy probablemente se trate de una pielonefritis.

muy frecuente en el sedimento y pueden aparecer en orinas recién emitidas.aparecen en la orina tras la introducción en el organismo(vía enteral o parenteral) diversas sustancias (contrastes radiológicos/ contraste radiopaco vía endovenosa y medicamentos p. reflejan trastornos metabólicos o afectación grave de algún órgano o sistema y muy raras veces aparecen en orina. suelen estar inmersos en una cilindruria (presencia de la mayoría de los diversos tipos de cilindros). su presencia es un síntoma claro de una alteración renal importante. etc. densidad. (3) Cristales exógenos .) . los extremos angulados y generalmente de gran tamaño.) y se excretan a nivel urinario. sulfonamidas. rígidos.no corresponden a alteraciones metabólicas ni funcionales.. Estructuras no organizadas Cristales: en general son productos finales del metabolismo que adoptan formas cristalinas según la condiciones físico-químicas de la orina (la pH sobretodo. etc. temperatura.Cilindros céreos: son muy refringentes. se diferencian en 3 grupos: (1) Cristales endogénos normales . de apariencia dura. (2) Cristales endogénos patológicos .ej. superficie rugosa y brillante (como la cera de las velas).

Cristales de oxalato cálcico mono-hidrato y di hidratado: en orinas ácidas y ligeramente neutras. un sedimento normal 0-2/campo.ej. de forma prismas incoloros -casi nunca aislados-unidos por un punto intermedio (pesas de gimnasia).Cristales de acido úrico: en orinas ácidas. menos frecuente. indica una situación patológica o concentraciones elevadas de acido úrico. son birrefringentes. finamente estriados. agujas).Uratos amorfos: en orinas ácidas. un sedimento normal 0-2/campo. incoloros y con una depresión central (radios de bicicleta). .. . de formas variadas(p. color entre marrón rojizo. se presentan como un precipitado amorfo. también los hay de forma redondeados. el amarillo e incluso incoloros. . la mas frecuente es de forma sobre.

es imprescindible una vez observados en el sedimento. . . ambas son de color amarillo o marrón. confirmar la concentración de cistina en la orina. no tiene mucha importancia clínica.Leucina y tirosina: en orinas ácidas. cirrosis. son productos finales del metabolismo proteico y suelen aparecer juntos en situaciones clínicas graves=> destrucción o necrosis tisular importante.Cristales de bilirrubina: en orinas ácidas. de pacientes con bilirrubinemia(bilirrubina alta en sangre).Cistina: en orinas ácidas. etc. fundamentalmente de tejido hepático (hepatitis.). tiene significación clínica por si solos => aparecen comoconsecuencia de cistinuria. regulares finas y transparentes.coloreado debido a la presencia de pigmentos urinarios de color amarillo-naranja (color ladrillo). . de forma agujas con color marrón- rojizo (flecha verde). raramente se observan. aspecto incoloro con forma de placas hexagonales. de aspecto oleoso o graso y muy refringentes. . los cristales de tirosina forman manojos de agujas finas y los de leucina son como gránulos esféricos de estrías radiales y concéntricas.

Uratos amoniacos: en orinas muy alcalinas.Fosfato cálcico (hipurato cálcico): en orina alcalina o neutra. pero puede ser ligada a hipertrofia de próstata o algunas infecciones urinarias crónicas.Carbonato cálcico: en orinas alcalinas o neutras.. . no es frecuente. pero pueden estar asociados a infecciones del tracto urinario. no es frecuente y no tiene mucha importancia clínica (procedencia de ingesta vegetales). de color amarillo/marrón muy intensa. de forma amorfo o granular. . cálculos urinarios contienen fosfato cálcico. por bacterias con ureasa+. . predomina la forma esférica de distinto tamaño. en ocasiones se agrupan formando rosetas o estrellas. amorfas e incoloras (similares a acido úrico). también como placas granulares. no tienen mucha importancia clínica.no tiene mucha importancia clínica. en ocasiones como pequeños lazos y raramente como pequeñas esferas incoloras. de forma prismas largos y afilados (agujas).

de semejante forma a uratos amorfos. de forma pseudo-hexagonal característica.Cristales de creatina: raramente encontrados en orinas de adultas. pero es frecuente en orinas de niños y niñas antes de la pubertad. etc. poliomielitis. es un metabolito de la degradación endógena del tejido muscular (su aumento => distrofias musculares. de forma tapa de ataúd. . pero decolor blanquecino.Fosfato amorfo: en orinas alcalinas. . no tiene mucha importancia clínica.Fosfato triple (amónico-magnesico-cálcico): frecuente en orinas alcalinas o neutras. aunque también puede verse como octaedros (muy variable).).. .

. la infección del tracto urinario es frecuente y la mayoría de m. patógenos proceden de la flora intestina => Bacilos Gram- .celulas epiteliales => se redactan con adjetivos: escasas (algunas 1-3) - moderada (3-4) -abundante (6-8) .celulas hematológicas => se redactan con números y abreviaturas (p. deben observarse al microscopio optico (40x) al menos 10 campos.compuestos amorfos => se redactan con adjetivos Examen microbiológico: . es importante identificarlos e indicar en el informe el tipo de cilindro. debe proporcionar una visión del valor medio de cada elemento o estructura. obtenido en todos los campos observados.cilindros: se redactan al igual que las celulas. 4. .ej. .leucocitos por campo). y su movilidad .intensa (muy abundante 10-12).o. debe preceder por el estudio de "anormales" en orina (tiras reactivas => pH. Examen citológico: . es frecuente no incluirlos en el informe): . Examen químico (en un sedimento de orina normales.o. 6-8 L/C = no. debe seguirse un orden => hay que informar primero el examen realizado de citológico. densidad y características patológicas) 2. se informa si existe piuria y hematuria y si se forma acúmulos.bacterias => se redactan con adjetivos.levaduras => se informa con adjetivos.cristales => se redactan con adjetivos. cuando son muy abundante. se habla de "diatesis". es necesario especificar el tipo de m.en condiciones normales carecen totalmente de flora bacteriana. se informan cuando son abundantes. 3.Informe del sedimento urinario 1. debe ser "escueto" y "conciso" (solo hay que poner lo verdaderamente importante) 5. Examen microbiológico de una muestra de orina . las celulas escamosas (de las vías bajas). segundo el de químico y por ultimo el de microbiológico. las importantes son las renales y las de transición.

para proceder la identificación (tipación) del germen causal de la misma. agar Cetrimide (eficaz para la búsqueda de pseudomonas) 3. donde esta la infección). Una vez determinada la infección.McConkey (un medio selectivo y diferencia para m.000 y 100. .). entre 10. hay que resembrar en medios selectivos. el paciente debe ser instruido de la forma mas adecuada. Preparación de un "inoculo" 2. impide la invasión por proteus).000 mo/ml el diagnostico es incierto. evitando en todo momento la contaminación. Klebsiella pneumoniae). Realizar el recuento tras la incubación (presumible-mente han crecido los causantes de la infección) => menos de 10. Gram-). Proteus spp. Análisis de microbiológico (urinocultivo) 1. buscados (generalmente a 37ºC) 4.000 mo/ml hay infección urinaria.o.000 mo/ml de orina es negativo. puede haberse infección no detectada por causas => un tratamiento ATB instaurado.coli. mas de 100. 5. Sembrar en medio Cled (la ausencia de electrolitos. Pseudomonas aeruginosa. Levaduras (Candida spp.o. Incubar a la temperatura optima de crecimiento de los m. Cocos Gram+(Streptococcus grupo D y Staphylococcus). la toma de muestra debe ser obtenida en condiciones asépticas en un recipiente estéril. una obstrucción a nivel de las vías renales o la muestra recogida por una punción supra-púbica (sin pasar por la uretra. (E.

.

.

=> Neisseriaceae (Neisseria . fermenta el manitol. fermentadores de muchas azucares (via EMP). flora normal de las mucosas y la piel. crecen en medios generales y medios con alto contenido de NaCl (halófilo).Tema 18 .Cocos aerobios y anaerobios facultativos (patología e identificación) Gram+ => Micrococaceae (Staphylococcus .Peptococaceae Gram. distribuidas ampliamente en la naturaleza.Gemella - Aerococcus).Micrococcus . aerobios y anaerobios facultativos. etc. Streptocococeae (Streptococcus .Pediococcus . causante de la intoxicaciones alimentarias. Especies importantes (existe >25 especies y varios sub-especies/ cepas) (1) S. aureus (saprofito de >40% de fosas nasales y 10% de vaginas) => estafilococo dorado (pigmento amarillo). nitratasa+. heridas.30 Ags (propiedades antifagocitarias y producen estructuras . sensible a la novobiacina. no capsulados y resiste al calor. Branhamella . coagulasa+. .1 um. catalasa+. gelatinasa+. tamaño +/.Stomatococcus - Planococus). resistentes a agentes externos. en forma de racimos. Moraxella) Staphylococcus => cocos Gram+ inmóviles.

). ricos en NaCl(carácter halófilo). fructosa. Otros tipos de muestras => medio AS (observar características de las colonias .causa eritemas en la piel. S.exfoliativa/ exotoxina . aureus del resto de Staphylococcus). por eso no se encuentra en las heces.Hemolisinas alfa . nitratasa+. son patógenas en debilidad. hemólisis. etc).Muestra procede de las heces => medios selectivos Chapman.lisan eritrocitos y leucocitos. . la piel y mucosas. distribuidas en el medio ambiente.romper el anillo b-lactamico de las penicilinas creando resistencia). leucopidinas . provoca hemólisis beta en AS.Enterotoxinas tipo A. La acción patogena directa => procesos inflamatorios. Aislamiento de los estafilococos: .un potente agente antigénico) => se subdividen en tipos según sus caracteres antigénicos. . osteomielitis o meningitis en los debilitados (periodo de incubación 1- 6 horas). supurativos y de necrosación (en heridas y quemaduras). duración 1- 2 días. etc. crece muy bien con la temperatura veraniega y en las cremas.Los estafilococos degradan muchas azucares (glucosa. se trata con sueros orales o anti-diarreicos). hemolisina beta - provoca hemólisis alfa en AS.saprophyticus). enterotoxina . indirecta => afecta al tubo digestivo por la entero-toxina (gastroenteritis con nauseas. B (causan intoxicaciones alimentaria) y D causa enterocolitis.saprophyticuspuede tener pigmento dorado y puede fermentar Manitol.anula la acción del jugo gástrico y actúa en el centro del vomito. crecen muy bien a . pleuritis. sacarosa.saprophyticus son estafilococos oportunistas.destruyen pmn y macrófagos. nauseas y diarreas).Produce toxinas (hemolisinas .piógenas/ características en las lesiones: polisacárido A es el mas importantes - inducen la formacion de Acs. infección generalizada (septicemia) => formación de coágulos o trombos intravenosos.epidermidis y (3) S. catalasa+. la bacteria no llega al intestino (solo su toxina). . activa la protrombina. endocarditis. penicilinasas o beta-lactamasa .epidermidis sensible a la novobiocina (lo que le diferencia a S. t. (2) S. contiene manitol (diferencia S. S. fibrinolisinas oestafiloquinasas . forunculos. vómitos y diarreas. .Fermentos/enzimas (coagulasas . proteína A . Pruebas bioquímicas: . color. artritis. produce gelatinasa+. activador del plasminógeno. manosa.

S. se clasifican en grupos A-V de Lancefield. según sus caracteres bioquímicos (sensibilidad a bacitracina. anaerobios facultativos.aureus (lo produce grupo B) . tinción Gram.aureus). Diagnóstico bacteriológico: . oportunistas y algunos patógenos.saprophyticus) . proteína M antifagocitarias.aureus).coagulasa (S. D (enterococo) G y F. gelatinasa. pueden producir infecciones urinarias.Estafilococos coagulasa. poseen Ags (polisacárido C - según sus características. estudio de la sensibilidad a lanovobiocina (diferenciar S. catalasa.viridans y S. .v.) y endocarditis. Crecimiento en NaCl 6. se agrupan en cadenas.epidermidis de S.5% (grupo D enterococos) .grupo D.Pruebas de bilis esculina . hemolisina alfa y beta. pruebas bioquímicas .Hidrólisis de hipurato sódico (grupo B) . Sensible a optoquina (S.epidermidis yS. la posee el grupo A) Clasificacion A. ademas muestra resistencia a varios ATB alternativa de penicilina (meticilina y cloxacilina).Factor CAMP => potenciar la acción hemolítica de S.Diferenciacion del genero Staphylococcus y Micrococcus (en principio no es patogeno) => Staphylococcus sensible a bacitracina y eritromicina. coagulasa+ (S. tras la incubación observar las colonias. degradación de bilis esculina y factor CAMP): . fibrinolisinas.pneumoniae (alfa y gamma) B.Toma muestra con torunda estéril o por punción según los casos en total asepsia.es un grupo heterogéneo (+ importante son S.viridans). C.hidrolisan este compuesto (grupo D enterococos) . tolerancia a NaCl. Sensible a bacitracina (grupo A) . bacteriemias (por la implantación de cateteres i.beta hemolíticos/ hemólisis total (halos de transparencia grandes entorno a su colonia) -grupos A. aislamiento en medio Chapman/manitol salado y AS. tamaño pequeño. fermentador de glucosa. B. pero cada vez esta tomando mas importancia.pneumoniae /neumococo) .aureus). fermentación de glucosa. alfa hemolíticos/ hemólisis parcial (decoloración parda verdosa - S. son saprofitos. hemolisinas alfa y beta (cepas patógenas).saprophyticus) 80% en el pasado no causan infecciones importantes. según el tipo de hemolisis (capacidad de romper hematíes - produce hemólisis alrededor de sus colonias en AS) => gamma hemolítico. capsulados. estreptococo NO Beta- hemolíticos . Micrococcus a veces pueden dar oxidasa+. fermentación del manitol (S. Streptococcus => cocos Gram+.37ºC. optoquina.

distintas características que confiere la agrupación de los estreptococos (grupos de Lancefield). precipitación. inmunofluorescencia. .Produce toxina eritrogénica responsable del exantema de la fiebre escarlatina. etc.agalactiae) => saprofito del hombre .anginas/faringitis sobre todo a niños/contacto directo. En las capsulas del grupos A y C se encuentra enzima hialuronidasa(características anti-fagocitarías) Acción patógena e Interés clínico: (1) Streptococcus del grupo A (S. facilita su invasión. sensibles a la bacitracina y variable a optoquina . muy sensibles a los agentes externos. estreptolisina S(poco antigénico) => holoproteína toxica responsable de hemólisis en medio AS.toxica y facilita la unión de ellos a las células epiteliales invadidas. .Grupo A (la + importantes) => la mayoría son Beta-hemolíticos y patogenos al hombre. poseen polisacárido C (proporciona la especificidad de grupo) y proteína M(facilita la adherencia a las células invadidas y protección a la fagocitosis). según los caracteres antigénicos (a traves de reacciones serologícas especificas => aglutinación. (2) Streptococcus del grupo B (S. sepsis. induce a la formación de Acs ASLO.) => los Ags en la pared celular (péptido glicano . meningitis. . Poseen hemolisinas estreptocócicas/ estreptolisinas (O y S). polisacárido C . otitis y sinusitis) 95% de infecciones naso-faringeas son producidas por estreptococos del grupo A. proteína M se presenta como pelos en el perímetro de la pared celular (anti-fagocitarías). endocarditis.pyogenes (grupo A) => Infecciones en la piel o mucosas (+frecuentes . .pyogenes) => causan 90% de las infecciones estreptocócicas. glomerulonefritis. son floras de la mucosa nasal y faríngea.C.Proteinasa estreptocócica (origina procesos inflamatorios y necrosación) Patogenicidad de S. son Beta-hemolíticas. se utiliza en el hospital en procesos trombo- génicos. son antigénicas y se distingue en 4 grupos (A-B-C-D).estreptolisina O (muy antigénico) => hetero- proteína exotóxica muy activa de efecto hemolítico frente a glóbulos rojos y leucocitos (pmn y macrófagos => alterando la estructura celular). infecciones NO supuradas/ inmunológica => fiebres reumáticas (complicaciones de tto no adecuados). Enzima desoxirribonucleasa estreptocócica (despolimeriza ADN).Enzimas estreptoquinasas (activador de plasminógeno => plasmina en fibrinolisis). induce a la formación Acs. .Enzima Hialuronidasa (hidroliza el acido hialurónico del tejido conjuntivo). . .

en rino-faringe.equinus y S.bovis. son alfa-beta-gamma hemolíticos. son saprofitos del intestino del hombre. vaginal e intestinal. hipurato+(degrada el hipurato sódico) es lo que le diferencia del grupo A.anginosos (afecta vacas y caballos). inflamaciones sinusitis.5%) (6) Streptococcus Alfa hemoliticos (S.faecalis y S.los enterococos => S.sensibles a optoquina.5%).los No enterococos => S. son alfa y gamma hemolíticos. resistente a la bacitracina.faecium. puede producir mastitis en vacas.aureus). otitis y meningitis (mas frecuente en adultos). piel. pueden producir infecciones en vias urinarias. posee factor CAMP(potenciar la acción hemolítica de S. crecen en medios salinos (NaCl 6. resistentes a agentes externos y ATB. etc.5% (a diferencia de los NO enterococos). placa dental (caries). (4) Streptococcus del grupo D => son alfa.viridans) => no son capsulados.crecen bien en NaCl 6. sonBeta hemolíticos (también alfa y gamma) y muy sensible a los agentes externos. Gram+ y son capsulados. puede origina meningitis e infecciones pulmonares en el neonato. diplococos. resistente a la bacitracina. F y E => saprofitos de la rinofaringe. puede producir neumonias. resistente a la bacitracina. vias genitales e intestino en el hombre. posee enzima hialuronidasa. S. resistente a la optoquina.5%). crecen variable en medios salinos (NaCl 6. son alfa y beta-hemolíticos. heridas. mucosa bucal. saprofitos de la orofaringe. . . . beta y gamma hemolíticos. produce infecciones oportunistas. son Beta-hemoliticos. mucosas. crecen variable en medios salinos (NaCl 6. (5) Streptococcus del grupo G. muermo en caballos y sepsis ??? en el hombre. hidrolizan la bilis esculina. (3) Streptococcus del grupo C => es el mas proximo al grupo A. puede producir infección urinaria e herida. saprofito del hombre en la rinofaringe. resistente a la bacitracina. infecciones del tracto respiratorio. resistente a la bacitracina. producen alfa y gamma hemolisis. muy sensibles a medios externos.hidrolizan la bilis esculina. (7) Streptococcus pneumoniae (neumococo) => es un grupo a parte. uro-genital. saprofito en aparato respiratorio.

aerobios.estreptococos son resistentes a nalidixicoque inhibe el crecimiento de otros gérmenes). . en forma de diplococos (granos de café). . faringe. se analiza de inmediato (estreptococos son sensibles a medios externos). si hay aglutinación es signo de que esta estreptococo. se produce una reacción de Quellung cuando un Acs tipo específico se une al polisacárido capsular del neumococo y causa un cambio en el índice refractivo de la cápsula haciéndola aparecer “hinchada” y más visible. hemolisis en AS.toma de muestra con total asepsia de la rino-faringe con hisopo estéril. redondos de bordes lisos y pequeños. hidrolisis de hipurato (positivo en el grupo B). sonsaprofitos de mucosas (genitales.Aislamiento: . catalasa. utilización de bilis esculina. . identificar los grupos antigénicos según el tipo de sustancia polisacárido C(clasificación de Lancefield) por metodo serológicos => prueba de látex (romper la capsula para sacar la sustancia.un frotis para la tinción de Gram.antihialuronidasas (ASH). nutricional- mente exigentes. utilizan azucares con metabolismo oxidativa y fermentativa.pneumonia => se añaden Acs contra Ags capsulados.la búsqueda en el suero (dilución seriadas) del paciente de Acs frente a toxinas y enzimas de estreptococos (sobre todo grupo A) => títulos de Acs antiestreptolisinas O (ASLO). una muestra del pus (si hubiera). se determinan los títulos de Acs antiestreptoquinasas (ASK). Pruebas bioquímicas: .pruebas de catalasa-.que no son estreptococos (Pediococcus es resistente a la vancomicina). citocromo-oxidasa y catalasa+. Neisseria => cocos Gram-. fosas nasales) y cavidades del hombre y los animales. pruebas de hinchamiento capsular con suero antineumococico polivalente (prueba de Quellung) muy utilizado para determinar S. . sensibilidad o no de optoquina y bacitracina. Pruebas serologícas / inmunologicas: .pneumoniae se realiza una tinción negativa con tinta china y prueba de "Quellung" (determinar Ags de la capsula). para saber si la infección es aguda o creciendo. si se sospecha S.5% => permite el crecimiento de enterococos del grupo D. producen pigmentos carotenoides.medios selectivo y diferencial con NaCl 6. sensibles a medios externos.los Gram+ en general son sensibles a la vancomicina excepto algunos cocos Gram+.la siembra en AS-CNA (posibles hemólisis . realizar hemocultivos si se sospecha endocarditis o sepsis. reacción inmuno-complejo Ag-Ac). las colonias son grisaceos. en caso de fiebres reumáticas con títulos de ASLO negativos. .

se complica con bronquitis. artralgias.4 géneros => Neisseria.C. Pseudomona aeroginosa. cefaleas. Branhamella (B.). si el meningococo pasa a la sangre. crecen a 35-37ºC. son poco exigentes y crecen a 22-35ºC en medios generales. rigidez de nuca. originara micro-focos en la piel con erupciones petequiales (1-2mm) en el tronco e extremidades inferiores.en adultos se forman Acs anti meningococo) evoluciona a forma severa. el examen LCR es turbio. 5-30% son portadores sanos en rino-faríngeo. se agravan hasta la muerte sin tto efectivo y rápido. Acinetobacter y Moraxella. resistentes a medios externos y no son patógenos para el hombre.. son muy sensibles a medios externos. diarreas. son muy sensibles a medios externos y son parásitos estrictos del hombre y produce gonorrea (no se encuentra libre en la naturaleza). utiliza glucosa y maltosa. coloniza las mucosas y vías respiratorias (sobre todo superiores). también afectan niños mayores y adultos jóvenes de 6 hasta 25 años. (1) Neisseria meningitidis (meningococo) => es una especie patógena para el hombre.estructura antigénica => componentes de su capsula (polisacárido). requieren medios enriquecidos con CO2 5-10% para potenciar su crecimiento a 35-37ºC. Streptococcus agalactiae. (2) Neisseria gonorrhoeae (gonococo) => idénticas características que meningococo. son parásitos obligados del hombre (no se encuentran libre en la naturaleza). es difícil de cultivar si hay competición (acompañadas por otros gérmenes). cefaleas fuertes. Neisseria meningitidis. vómitos. Cryptococcus neoformans y otros. puede pasar a LCR con fiebres muy altas.Especies mas importantes .catharralis). posee fimbrias (facilita su adherencia) y capsulas (contiene polisacáridos con comportamientos serológicos diferentes A. las fimbrias(facilitar la adherencia y la invasión) y proteínas de la membrana (toxica sobre las celulas invadidas). Micobacteria. utiliza glucosa como fuente de carbono. Escherichia coli. afectan a niños de 6 meses hasta 5 años (causas mas importantes de mortalidad infantil). purulento con abundantes meningococos (debido a acumulación de pmn con meningococo dentro (celulas CLUE). etc. otros causantes de meningitis => Haemophyllus influenzae. Neisseria gonorrhoea (gonococo) => idénticas características que el .comienza con una rino-faringitis de sintomatología leve (sobre todo en niños . Cuadro clínico .el tto del portador es rifampicina. producen meningitis epidémico (contagio por gotas de flugge en contacto íntimos).B. fiebres altas. tto con penicilina (G) . (3) Neisseria saprofitas => saprofitos de la rino-faringe y genitales. etc. Acción patógena e interés clínico Neisseria meningitidis (meningococo) => diplococos /granos de café. soncapsulados.

su afinidad particular es sobre las mucosas uro-genitales. .se previene instilando gotas de nitrato de plata . tto => penicilina o sus derivados. 2nd tubo se utiliza para la siembra en AS. colistina y trimetropin que inhibe el crecimiento de otros gérmenes).Estudios serológicos => inmunofluorescencia directa del LCR o el suero. posteriormente se penetran a tejidos sub-epiteliales y empiezan a multiplicarse. . ano (donde colonicen). lactosa-. 3er tubo se realiza un hemocultivo y recuentocelular. Thayer- Martin (con factores de crecimiento y ATB vancomicina. contrainmuno-electroforesis y técnica ELISA.meningococo. caracteres bioquímicos . en neonatos provoca gonococia ocular que conduce a la ceguera .método de "Crede" y (contra Chlamydia es mas efectivo) eritromicina??? Aislamiento . nitratasa-.tras un contacto sexual. oxidasa+. en el frotis se ven los pmn con diplococos dentro.en forma de granos de café). diagnostico N. las placas se incuban a 37ºC en ambiente de CO2 5-10%. . agar chocolate. N.meningitidis . produce la destrucción de celulas del epitelio y supuración (secreción purulenta) y dolor a la micción. se realizan en el laboratorio (sensibilidad a medio externo). se procede de inmediato al estudio directo y la siembra en medios específicos o se transporta en medio TM modificado. meningococo crecen dando colonias transparentes diminutas y no hemolíticas. los gonococos se adhieren a la superficie de la mucosa gracias a las fimbrias y proteínas de la membrana. 1er tubo se centrifuga y sobre elsedimento se realizan frotis Gram. agar chocolate.gonorrhoeae . produce gonorrea en hombres y mujeres (ETS). . 50% de los casos son asintomáticos con lo que la ausencia de tratamiento conduce a la cronificación. maltosa+ para meningococo. cuello del útero. Cuadro clínico . recto en homosexuales y uretra. y sacarosa). prueba de la utilización de glucosa y maltosa por oxidación (aerobio). si la muestra de LCR es turbio o purulento. la siembra se hará en AS. liberando endo- toxina con efecto toxicoa la uretra. oxidasa y catalasa son positivos. Mueller Hinton y Thayer-Martin. se transporta en un medio de Thayer-Martin modificado a 37ºC (en caliente). anfotericina. . en las mujeres puede ir acompañada por uretritis. posee endo-toxina que inactiva Acs próximos. cuello de útero y recto (mujer). . en TM los gonococo son colonias pequeñas de color gris ylos meningococo son blanquecinas se incuba a 35- 37ºC y atmósfera enriquecida de CO2 5-10%.Existe sistema de multi-prueba para Neisseria y Haemophylus. se deben examinar de lo antes posible (sensibilidad al medio externo). se divide en 2-3 tubos.se realiza la tinción (Gram.Pruebas bioquímicas => utilización de azucares por vía oxidación (glucosa+. por la mañana antes de la primera micción (al ser posible). puede provocar bacteriémia dando artritis supurativos. lactosa. vaginitis y 20% salpingitis de las trompas (produce esterilidad en mujeres).toma de muestra a partir de la uretra (hombre).toma de muestra de LCR (punción lumbar). con fimbrias (adherencia a las celulas epiteliales dificultando la fagocitosis). sangre y/o exudado faringeo.Pruebas bioquímicas => catalasa+.

. pero a veces se aísla como agente causal en septicemias e infecciones otorrinolaringológicas (sinusitis. ELISA (mas utilizadas) . catalasa+.dentro de la familia moraxellacea).Acinetobacter => anteriormente clasificada dentro de la familia Gram.coli). aerobios y anaerobios facultativos. oxidasa-. oxidasa+. Neisseria saprofitos (Neisseriaceas) . no fermentador. son saprofitas/ flora del tracto gastrointestinal del hombre y de los animales.bacilos o coco-bacilos Gram-. fermentadoras de glucosa (con o sin producción de CO2). en general los no fermentadores son muy difíciles de distinguir y requiere numerosas pruebas bioquímicas para etiquetarlos. Tema 19 . son aerobias o 5% de CO2. flora normal de naso-faringe.Pruebas serologícas => hemo-aglutinación. crecen bien en medios generales (AS. actualmente esta incluido dentro de la familia Moraxellaceae. es Gram-. inmóvil. son especies de bajo patogenicidad. Gram-. la mayoría son nitratasa+.(se pueden confundir con Neisserias por su tamaño). oxidasa-. catalasa+. . inmunofluorescencia indirecta. . en AS producen colonias grises con halos de hemólisis. catalasa+.Entero-bacterias y vibrios (patología e identificación) Entero-bacterias . también se encuentra . no fermentan azucares. la especie mas importante => A. son cocobacilos Gram.normalmente son flora de oro-faringe/ naso-faringe. algunos usan metabolismo fermentativo y otros usan metabolismo oxidativo. son microorganismos que pueblan fundamentalmente suelos y aguas y presentes en medios hospitalarios (infección nosocomial).calcoaceticus(causan neumonías. catalasa+. no requieren medios especiales para su crecimiento. otros autores tienden a diferenciarla y la clasifican como familia Branhamellaceae. crecen en Mac.Sistema de identificación multiprueba para Neisseria y Haemophylus.nitratasa-. indol+ (E. aunque a veces implicadas en meningitis y otros. .=> bacteria inerte) junto con Pseudomonas.no fermentadoras (pero oxidasa. difícil de distinguir con Neisseria. otitis). AS y otros. algunos son sulfuhidratasa+ (Proteus y Salmonella). infecciones urinarias y sepsis).Branhamella catharralis / Moraxella catharralis => hoy en día la clasificación es confusa (la tendencia .Moraxella => coco-bacilo. nitratasa+ (reducen nitratos a nitritos). móviles (flagelación perítrica) o inmóviles. oxidasa+. agar chocolate y Thayer Martin).

en el agua y en el suelo.cuadros clínicos => dolores de cabeza. una vez dentro las salmonellas son fagocitadaspor macrófagos y transportadas por diferentes vías y provoca bacteriémia => todo sucedeen el periodo de incubación (8-15 días).paratyphi A.Ag somático / Ag O => es lipo-polisacárido. termo-estables. llega al estomago. S. astenia/ cansancio.B o C - para-tifoideas).typhi . se encuentra en la pared bacteriana.entero-bacterias no coliformes. . móviles con flagelación perítrica. Ag flagelar H y Ag capsular VI (en S. Morganella.arizonae.typhi . entero-colitis o fiebres tifoideas o para-tifoideas). S. necrosación de placas de Peyer y en casos mas graves originar perforación y hemorragias. bacilos Gram-.coli K- 1 y Salmonella thyphi).choleraesuis. Hafnia.endo-toxina y enterotoxina (efecto irritante y citotóxico sobre el tracto intestinal) Cuadros clínicos 1.Ag capsular / Ag K => se encuentra en la capsula bacteriana. S. S. comienzo brusco de signos y sintomas =>los macrófagos les transportan hacia el bazo.S. produciendo multiplicación de nuevas salmonellas. son potencialmente patógenos en individuos debilitados y produce infecciones oportunistas. anorexia.enteritidis. Clasificación según su capacidad para fermentar la lactosa: .paratyphi A. otras depende de la muestra donde se aísla y el resto se cuestiona su papel. volver al intestino generando placas ulceradas. Las fiebres tifoideas son transmitidas al hombre vía oral (alimentos crudos.typhi. Las fiebres para-tifoideas son mucho mas leve con un periodo de incubación de entre 7-10 dias con bacteriémia y estado febril que dura varias semanas. Shigella. . resistentes a medios externos. Salmonella .Ag flagelar /Ag H => es característico de las cepas móviles. Enterobacter y Klebsiella(tardía a veces) . Infecciones entéricas (S. Proteus.Fermentadoras rápidas de lactosa (coliformes) => Escherichia. mal conservados y aguas contaminadas). fiebres altas.fiebres tifoideas o S. resiste la acidez gástrica.B y C. Serratia.NO fermentadoras de lactosa (no coliformes) => Salmonella. pasa al intestino delgado (íleon).Fermentadoras lentas de lactosa / ONPG+ (coliformes) => Citrobacter.Ag termolábil con poderprotector frente a los ácidos /ácida gástrica. Providencia y Edwardsiella. penetra por endocitosis destruyendo parte de las celulas de la mucosa intestinal. no hay perforación intestinal ni hemorragias ni invasión de salmonellas a otros órganos. es proteico y responsable de la acción patógena de la bacteria. resistencia y anti-fagocitarías) . es anti-fagocitarías (relacionado con la virulencia de ciertas especies como E. higado y MO.Ag somático O. . preciso un tratamiento que dura 9-10 días. es una endo-toxina (la parte polisacárido es muy antigénico y la parte lipídica es inactiva bioquímica-mente). . Características antigénicas: . en general provocan infecciones entérico febriles (gastroenteritis. poco hechos. es polisacárido. Acción patógena e interés clínico . Especies importantes . algunos son patógenos siempre donde sea se encuentra. Yersinia (patógeno) y Shigella sonnei.

depende de tipo de la cepa. periodo de incubación 12- 36 horas. se realiza hemocultivo. re quiere un tratamiento de re-hidratación que dura 6 días . Aislamiento . SH2+. Infecciones gastrointestinales y enterocolitis (S.pruebas bioquímicas . pruebas bioquímicas: ONPG-. Fiebres tifoideas y para-tifoideas => toma muestra de diferentes localización según la fase de enfermedad. análisis del alimento sospechoso. reacciones de aglutinación cuantitativa (títulos) de Ags O. tambien son CO2+ y Ornitina descarboxilasa+). un resultado positivo dara unas colonias fluorescentes (posible Salmonella).cholera-suis y S.enteritidis . medios adecuados. especialmente para Ag VI (pruebas inmunológicas).enteritidis). en la fase inicial de la enfermedad / periodo febril. nauseas. el alimento les facilita su llegada a pasar el estomago y llegar al intestino delgado colonizando el íleon y el ciego. Mucaptest => prueba inmunológica utilizando suero polivalente (Acs anti O y anti H). se realiza las pruebas bioquímicas.typhimurium y otras).2. caldo selenito. .S.typhi yS. medios de cultivo SS. Trehalosa+ (S. se penetran por fagocitosis al epitelio y se multiplican originando una inflamación que genera cuadros diarreicos con dolor abdominal (perdidas de electrolitos y agua). H y VI a traves de sueros específicos monovalentes y polivalentes.las floras se encargan de eliminarlas. fermentacion de azucares: Glucosa+. Citrato+ (S. fiebres altas. en el periodo posteriores o finales se busca en heces (coprocultivo). se transmite por alimentos contaminados con una concentración de salmonellas de 10 millones a mil millones/ml.diagnostico de Salmonella Salmonelosis => toma muestra de las heces (coprocultivo). sangre (hemocultivo). en orina(urocultivo). en la fase de incubación se busca en heces (coprocultivos). TDA-. vómitos.enteritidis.choleraesuis. etc.la mas frecuente. McConkey. S.

sonnei) . pruebas de aglutinación cuantitativa (titulo) para demostrar Acs en el suero del paciente a traves de sueros específicos mono y polivalentes. nausea. KIA (K/A para Shigella y A/A para S. malestar general y fiebres muy altas con deposiciones sanguinolentas con moco y pus.pruebas bioquímicas TDA. al llegar al intestino del hombre vía oral (puede resistir el acido gástrico. adhesinas (adherencia a las celulas que invaden). nitratasa+. son patógenas para el hombre. no fermentador de lactosa (excepto S. pruebas bioquímicas. TCBS.origina necrosis celular. eligiendo restos de moco y sangre si los hubiera. provoca afecciones graves y contagiosas sobre el tracto gastrointestinal (disentería bacilar) especialmente en ambientes de salubridad baja. pasar al colon originando necrosis con signos y sintomas características (las toxinas de S.adherencia a las celulas del epitelio gastrointestinal).Shigella . Hektoen. ONPG (positivo para S. VP- .exotoxina con propiedades cito-toxicas (tipo A .disenteriae). Acción patógena e interés clínico . Yersinia CIN. McConkey. diagnostico de Shigella Toma muestras de heces recién emitidas en los primeros días de la enfermedad (hay mayor numero de shigellas). vómitos. plásmidos (facilita la invasión).sonnei). fresco. . por la alta cantidad ingerido y también protegido por los alimentos). ejerce su acción toxica. ureasa-.disenteriae no suelen pasar a la sangre). Campylosel.se debe a la producción de sustancias toxicas. medios de cultivos SS.cuadros diarreicos van acompañados de dolor cólico. manitol (positivo para Shigella y negativopara S.bacilo Gram. el estudio riguroso (teniendo en cuenta que Shigella se destruye en medios ácidos y a temperaturas <4ºC.inmóvil. Aislamiento . hemorragias y perforación). Ags O y K. neuro-toxicas y entero- invasivas (tipo B .sonnei). ulceras.

pielonefritis.si la cepa de E. originándose esporádica-mente brotes epidémicos (diarrea del viajero . heridas. hemorragico esporádicamente en brotes (E.coli se distingue con sueros antigénicos. E.colientero-toxígena) . puede provocar trastornos gastrointestinales de diarrea.E.los cuadros clínicos son variables según el tipo de toxina que originen. . fácil de encontrar en el agua. algunas cepas de E.si forma una entero-toxina semejante a Vibrio cholerae => procesos diarreicos en niños. meninges (meningitis en neonatos).si forma una entero-toxina citotóxica similar a S.coli entero- hemorragica) .coli también puede provocar infecciones urinarias (cistitis.coli forma una entero-toxina citotóxica parecida a Shigella => cuadros diarreicos en brotes epidémicos que afectan a niños y lactantes (E.coli forman Ag O y K anti- fagocitarías yresistencia a bactericidas y ATB (alto poder invasivo). infecciones biliares. fermentadoras de glucosa y lactosa. Acción patógena e interés clínico . meningitis en neonatos y excepcionalmente bacteriémia. adultos con brotes epidémicos en casos aislados (E. adultos. capsular K y flagelar H. aguantan temperaturas altas (la diferencia de otros coliformes). produce CO2. otras cepas forman endo-toxinas. alimentos(indicativo de contaminación fecal reciente). otras cepas tienen un mecanismo de acción análogo al de Shigella con menor gravedad.entero-bacterias bacilar o coco-bacilar Gram- móviles. fermentos y endo-toxinas).coli entero-invasiva) Las cepas de E.Escherichia . etc). la especie mas importante para el hombre es E. causante de cuadros febriles y diarreicos.coli (según la cepa puede tener Ag somático O. resistente a medios externos. infecciones urinarias.si presenta ciertos plásmidos que incrementan su capacidad de invasión => cuadros diarreicos graves que afectan a niños. a veces la entero-toxina que producen es parecida a la de Vibrio cholerae que causa perdida masiva de agua y electrolitos. .coli entero-patógena) . saprofito de flora aerobia y anaerobia facultativa del tubo digestivo.disenteriae => procesos diarreicos graves.

La toxina murina (liberada al medio cuando muera la bacteria) => proteína que bloquea la utilización de O2 por parte de las celulas.pestis) y oxidasa-.causante la peste bubónica). . Peste bubónica (la mas frecuente). en ocasiones septicemia y neumónia. originando enfermedad grave febril. sin tratamiento se agrava hasta la muerte.Aislamiento. hemorrágicas.Ag V con propiedades anti-fagocitarías . factores de virulencia: .atraviesa los vasos linfáticos.capsuladas (Y. los 2 últimos afectan mas a animales que al hombre (niños) => originando estados febriles y diarreicos. higado.pestis (agente etiológico de la peste bubónica en el hombre) trasmitida a traves de ratas y pulgas. pulmones. tras el periodo de incubación de 3- 7 días después de la picadura. agua. Acción patógena e interés clínico de Y.Coagulasas y fibrinolisinas Y.pestis => cuadros agudos y febriles con alta inflamación de los ganglios linfáticos. mucosas. pruebas bioquímicas . pruebas bioquímicas => lactosa+. es muy contagiosa. indol+.pestis llega al hombre a traves de la picadura de pulga (infectada por ratas con peste). móviles a 25ºCcon flagelación perítrica e inmóviles a 37ºC. diagnostico Toma de muestra representativa de alimento. piel. necrótica y edematosa. son coco-bacilos Gram-. epidémico de alta mortalidad. Especies mas importantes . aparecen signos y sintomas con escalofríos. citrato- . colapso circulatorio. Y. se multiplica provocando lesiones piógenas (toxina murina).enterocolitica (sacarosa+ en medio TSI). vómitos. fermentadores de glucosa (ONPG variable). exudado. la muerte se produce por shock séptico (fracaso multi sistémico) o por neumónia. hemorragias internas. . heces. Y.Y.pestis . Levine. se origina en lugares de salubridad baja. Yersinia . petequias difusas en la piel.pasa a la sangre y se disemina por el bazo. formación de bubones en las ingles axilas y/o zonas submaxilares (los tejidos circundantes aparecen inflamados). frotis de Gram. pasa a los ganglios donde se multiplica originando bubones. toxemía generalizada y muerte. formas clínicas: 1.Endo-toxinas (liberadas en el transcurso de la enfermedad) => origina el proceso febril .entero-bacterias muy patógenas para el hombre (Y.pseudotuberculosis afecta animales y excepcionalmente al hombre. medios de cultivo Mc. sensible a la Colistina. en casos graves aparece coagulacion intravascular diseminada (CID) (por la acción de lascoagulasas) o diátesis hemorragica (por la acción de las fibrinolisinas).

puede provocar a individuos debilitados diarreas. Peste septicémica es estadios últimos de la peste en cual quiera de sus formas y es generalmente mortal. LCR. resistentes a ATB y desinfectantes. móvil. Peste pulmonar (es la complicación de peste bubónica). Citrobacter. Lactosa-. móviles. Escherichia => Gram. . indol+. se produce afección pulmonar grave con insuficiencia respiratoria. 1. de sangre. Morganella y Providencia). citrato-. nitratasa+.cloacae. sensible a Colistina.produce acetoína (VP+). pueden provocar infecciones hospitalario. Aislamiento . nigrosina (visualización de capsulas). infecciones del tracto respiratorio.ONPG+. Yersinia CIN (colonias muy pequeñas).enterocolitica es sacarosa+.aerobios y anaerobios facultativos. produce CO2. ampliamente distribuidos en el medio ambiente.bacilos Gram. oxidasa- . etc. saprofitas del hombre y también en el medio ambiente (agua y otros líquidos). 3. tejido pulmonar. fermentadoras rápidas de lactosa y glucosa.pestis yY. heridas.aerogenes y E. pruebas bioquímicas . produce acetoína de la glucosa (VP+). Serratia => fermentadora lenta de lactosa (ONPG+) y la glucosa. la tinción Gram-. ornitina- descarboxilasa+. cianosis. Entero-bacterias oportunistas . según los casos. ureasa+. medios de cultivo => Mc. provoca infecciones urinarias y sepsis a personas debilitadas. diagnostico Toma de muestra de exudados purulentos del bubón (por aspiración). Enterobacter. Y. resistente a medios externos y ATB. especies importantes: E. pruebas bioquímicas => móvil a 22ºC y inmóvil a 37ºC. citrato+. Serratia. móviles. es altamente mortal. Enterobacter => fermentadora rápida de lactosa. Klebsiella y Hafnia) y no coliformes /lactosa.pseudotuberculosis son ONPG variable. 2. nódulos linfáticos o esputo. heces. 3. citrato+.(Proteus. aerobias y anaerobias facultativas. produce CO2. ADNasa+. en la mayoría son lactosa+. son comensales de flora intestinal. Principales especies de coliformes/ lactosa+ (Escherichia. a veces Y.2. indol y TDA-. poco exigentes nutricional-mente. ornitina- descarboxilasa+. sonsaprofitos de la flora gastrointestinal. no son patógenos al no ser si el huésped es debilitados. bacilos Gram- coliformes.

bacteriémias. ureasa+.Providencia rettgeri (ureasa-. heridas. fermenta la glucosa y VP. materia orgánica y son comensales en la flora intestinal del hombre. infecciones urinarias. SH2+).pneumoniae (sub especies VP+ y VP-) y K. especies importante => C. especies importante => K. TDA+) .citrato+.oxytoca(indol+). pueden provocar infecciones hospitalarias. citrato+. TDA+. móvil. Proteus. ureasa+. descompone la urea de la orina quegenera precipitación de sales cálcicas => formación de cálculos renales. 6.freundii. ureasa+. el suelo.M. indol+. respiratoria. Morganella y Providencia => NO fermentan la lactosa. indol+. citrato+. RM+.RM+.mirabilis puede provocar infección urinaria. si el huésped se encuentra debilitado (postoperatorio. puede provocar neumonías. meningitis a los individuos debilitados. pero si glucosa y produce CO2. P. 5. utiliza glucosa y produce acetoína (VP+). móviles. son comensales del tubo digestivo del hombre y puede provocar infecciones urinaria. toxinfecciones alimentarias.Proteus mirabilis (indol-. TDA+) P. son comensales del tracto gastrointestinal y vías respiratorias superiores. Acción patógena e interés clínico . provoca infecciones hospitalarias. utiliza glucosa yproduce acetoína (VP+). TDA+ (diferenciar del resto entero- bacterias). etc. 7. Hafnia => móviles a 22ºC y inmóviles a 37ºC. Klebsiella => inmóviles. pueblan aguas residuales. fermentadoras tardía de lactosa. rinitis. Citrobacter (huelen a peste) => fermentadora lenta de lactosa (ONPG+). sepsis. tratamiento inmunosupresores) los . también puede provocar infecciones gastrointestinales.morganii (ureasa+.vulgaris (indol+. especies importantes: . fermentadora lenta de lactosa (ONPG+). TDA+) .4.

neumonías y bronco-neumonías (pacientes con afecciones crónicas) Aislamiento . .tipo abdominal son poco frecuente => abscesos y peritonitis debido a perforación intestinal. provocando cistitis (de las vías bajas) y pielonefritis (de las vías altas). .Genero Vibrio.tipo respiratorio (20% de las infecciones hospitalarias) afectando vías respiratorias altas.mirabilis.Pruebas bioquímicas e inmunológicas Familia Vibrionaceae . oxidasa+ (la diferencia de la . polaquiuria o anuria y disuria. pruebas bioquímicas .coli. las infecciones mas frecuentes => . diagnostico .Toma de muestra según las afecciones o procesos patológicos en condiciones de total asepsia . bacteriuria y proteinuria. son infecciones agudas con fiebre. móviles (flagelación lofótrica). encamados.saprofitos podrían ser patógenos. intervencionados quirúrgica-mente) provocado por E.Aislamiento en medios específicos/ selectivos (Hektoen.V. es frecuente en los análisis de orina piuria.tipo urinario (40% de las infecciones hospitalarias .pacientes sondados. crecen bien en medios generales y pH alcalino (sensibles al medios ácidos). Examen directo (fresco y tinción Gram) . Aeromonas y Pleisomonas (los patogenos) Especie mas importante y patógeno del genero Vibrio . anaerobios facultativos de morfología curva (pleomórficos).vulgaris. Mac) que inhiben los Gram+ . P. Klebsiella y Enterobacter. P. dolor lumbar.cholerae => bacilos Gram.

eludir el medio acido del estomago (sucede cuando se ingieren >100 millones de gérmenes - en el caso de epidemias donde se encuentra 1 millón/ ml de agua). Pruebas serologícas para determinar el titulo de Acs. se diferencia dePseudomonas por la diferencia en el patrón de fermentacion de azucares.Ag flagelar H (no tiene valor para su tipación . Plesiomonas . . el especie mas importante Aeromonas hydrophila. caracteres bioquímicos .Ag somático O (polisacáridos) se utiliza para su tipación . el especie mas importante Plesiomonas shigelloides (se propone a incluirla a la familia enterobacterias). móviles.Adhesina (proteína que tiene afinidad por los azucares) que permite adherirse a la pared intestinal Para formar cuadros graves es necesario su penetración por vía oral (agua o alimentos contaminados con el bacilo. VP+. coma y muertepor deshidratación (puede perder hasta 10-15 lt/día de agua y electrolitos). ureasa- . afectan al tracto gastrointestinal del hombre.ej.enterobacteriaceae). indol+. no son halófilo (a diferencia de Vibrio) implicadas en procesos diarreicos. catalasa+. .común a todas las cepas) .Exotoxina / entero-toxina proteica (el principal efecto patógeno del cólera - provoca diarrea masiva) . catalasa+. hay que hacer API para distinguirla de Aeromonas (Plesiomonas . halófilo. diagnostico . medio de transporte Cary-Blair.Toma de muestra a partir de las heces diarreicas. Aeromonas .Aislamiento en medios de cultivo específicos TCBS que impide el crecimiento de gran parte de microorganismos => produce colonias amarillas por la fermentacion de la sacarosa sobre el medio verde y también se siembre en el Mc. p. shock hipovolémico. sacarosa+ (produce un tipo de acido débiles que no bajara mucho el pH) . es el agente causal del cólera => provoca diarreas graves hasta llegar a la deshidratación (diarreas masivas).Pruebas bioquímicas => oxidasa+. Acción patógena e interés clínico: . SH2-. lactosa-. Aislamiento .bacilo Gram.no fermentadoras de la misma familia. catalasa+ y oxidasa+. vómitos. tiene las mismas características bioquímicas que Aeromonas (excepto en pruebas de VP y ornitina descarboxilasa). procediéndose de inmediato a su identificación (sensible a medios externos). ornitina descarboxilasa+) . productos marinos crudos).

Pseudomonas aeroginosa . en ocasiones resultan muy graves (resistente a muchos ATB . . . faringitis. Acción patógena e interés clínico . enterocolitis. lapiocianina es un pigmento responsable de la coloración azul verdosa que puede adquirir el medio y el olor a jabón de las colonias son las características de P. catalasa y citocromo oxidasa positivos. porqueoxida maltosa (no oxida la glucosa). . maltophilia (ahora se llama Stenotrophomonas maltophilia) se llama así. en generalaerobios estrictos. móviles (flagelación).aeroginosa. Ag flagelar H (proteico). pasando de aquí a los animales y al hombre. Aislamiento . .P.Pruebas serologícas para buscar Acs anti Pseudomonas. . tubo digestivo??.Bacilos y cocobacilos aerobios y anaerobios facultativos (patología e identificación) Pseudomonas . catalasa+. es importante estudiar la presencia de pigmentos que se difunden en el medio.Ag somático O (polisacáridos). .P. en grandes quemaduras. utilización de la glucosa vía oxidativa (aerobio). - Sustancia => (1) piocina (pigmento azulado de acción bactericida). agravando la lesión o provoca infección de heridas quirúrgicas. . puede producirendocarditis en drogadictos y paciente con SIDA. Ag mucoide M (produce exotoxinas => enterotoxina responsables de cuadros diarreicos y toxina eritrodérmica). puede provocar cuadros graves en individuos debilitados y es mortal si se produjese septicemia. en generalmetabolismo glucídico oxidativo. si el pus es azulado se sospechara de P. infecciones del aparato respiratorio (neumonías. especialmente de carácter purulento en total asepsia. hay que combinar varios). cogen cada vez mas importancia. saprofita en la piel.caracteres bioquímicos . aeroginosa => presenta pigmentos fluorescentes.Pruebas bioquímicas de citocromo oxidasa+. gelatinasa+. bronco-neumonías).bacilos pequeño (coco-bacilo) Gram-.Aislamiento en medios generales (el bacilo piociánico es fácil de cultivar) a temperatura 37ºC.Toma de muestra de cualquier producto patológico.Cuadros graves o muy graves (de carácter oportunista) => sinusitis crónicas.Tema 20 . en casos mas graves puede originar bacteriémia (quemaduras graves).diagnóstico bacteriológico . ampliamente distribuidos en el agua y suelo. Los especies mas importantes: . pielonefritis y meningitis en neonatos.aeroginosa. (2) fluorescein a(pigmento verde amarillo) y (3) pigmento melánico (tiñe de color marrón los cultivos). oxidasa variable. Examen directo (tinción Gram). son oportunistas en el ambiente hospitalario (pacientes inmunodeprimidos).

Brucella . nitratasa+. posteriormente.Brucella abortus afecta a bóvidos (la mayoría de los casos de brucelosis en España . catalasa+. empezar a multiplicarse con la consiguiente producción de endo-toxina. se caracteriza por artralgias difusas (dolores de articulaciones). depende de su estructura antigénica. neumónia brucelar. carne cruda o poco hecha. quesos frescos. algunas crecen mejor en atmósferas ricas en CO2 (5-10%).penetran en el hombre a traves de heridas y vía digestiva (alimentos procedentes de animales infectados (leche no esterilizada. su crecimiento es lento. ureasa+. . quesos frescos. afecta al hombre a traves de sus leches no esterilizada. . en menor proporción B. donde serán fagocitadas por neutrófilos (en la sangre) y macrófagos (en los tejidos) y se distribuyen por todo el organismo.melitensis) Acción patógena e interés clínico . oxidasa+. sudoración abundante. pasaran a los ganglios linfáticos.bacilos pequeños (coco-bacilos) Gram. las fiebres son ondulantes con tendencia a las recidivas (frecuente entre los 3 y 6 meses subsiguientes a la infección por Brucella). etc).Brucella melitensis afecta a cabras y ovejas. Especies mas importantes (en función del huésped en el que anidan): . esplenomegalia y otras distintas formas clínicas dependientes de la localización de Brucella (orquitis.inmóviles. carne cruda o poco hecha). volver a pasar al torrente circulatorio originando bacteriémia (brucelosis agudao fiebres de Malta). aerobios estrictos. Brucella es capaz de mantenerse latente en el interior de la celulas que la han fagocitado y posteriormente. sensibles a medios ácidos y se destruyen fácilmente a temperatura de pasteurización.

se infectan a traves de gotitas (flugge) que se producen al hablar. originando inflamación en estas zonas. aislada en el hombre excepcionalmente en casos benignos de tosferina.Bordetella pertussis (bacilo Bordet y Gengou) => la mas patógena y es elagente etiológico de la tosferina . son parásitos estrictos (no se encuentran libres en la naturaleza).bacilos muy pequeños Gram. paralización de sus ciliosy consiguiente necrosación.parapertussis => aislada en casos benignos de tosferina y no es estrictamente patógena . el calor y muchos antisépticos. inmóviles y patógenos para el hombre y muchos animales. inmóviles (algunas son móviles).B.aerobios y anaerobios facultativos.bacilos o coco-bacilos Gram. Acción patógena e interés clínico (Bordetella pertussis) . puede originar cianosis. presenta una fuerte acción tusígena (tos seca) que puede llegar a agotar debido a la acción de la toxina proteica y incremento de las mucosidades queobstruyen los bronquios (bronco-constricción) lo que facilita un déficit en la ventilación pulmonar.aerobios estrictos. bronquios y bronquiolos.Bordetella . sensibles a medios externos. es altamente contagiosa. taquicardia y vómitos alimenticios. Especies mas importantes: . se transmite por las gotitas de flugge o contacto directo. pero ya existe vacunas de la tosferina. Haemophilus . empiezan a multiplicarse en la superficie de las celulas epiteliales ciliadas de la traquea.B. desecación. capsulados. necesita medio de cultivo especifico con sangre como AS o agar chocolate (contiene factores X/hemina o ferroprotoporfirina yfactor V/NAD o nicotinamida-adenina- . tras periodo de incubación de 1-2 semanas.bronchiseptica => afecta mas a animales que al hombre.

.Toma de muestra a partir del exudado faríngeo. incubar en la atmósfera rica en CO2. .Existe vacuna para H. requiere solo factor X.Puede producir meningitis en niños de corta edad. afecciones respiratorias y septicemias. ONPG-.parainfluenzae es agente causales en ciertas meningitis. ATB como la bacitracina que inhibe a otros gérmenes. oxidasa variable (según la cepa).diagnostico de Haemophilus: . esputo o líquidos purulentos (en caso de infección de vías respiratorias).Pruebas bioquímicas => indol+. también son saprofitos en fosas nasales y boca. bronquitis aguda en ancianos y adultos debilitados. nitratasa+. Acción patógena e interés clínico (Haemophilus influenzae): .Suelen afectar a las vías respiratorias originando neumonías.influenzae tipo B.H. .Técnicas inmunológicas => determinar el Ags capsular (se realizan por la urgencia del diagnostico) . . tinción negativa) . requiere solo factor V. ureasa+. se añaden discos que contengan factores V y X. comienza como infección de las vías respiratorias altas y posteriormente se extiende via sangre hasta el sistema nervioso produciendo meningitis purulenta con mortalidad alta sin tratamiento a tiempo. Examen directo (tinción Gram.dinucleotido necesarios para el proceso de respiración).Se cultiva en agar chocolate o AS de conejo/caballo.caracteres bioquímicos . . . . .Es capsulada (su capsula esta formada por polisacáridos distintos de A-F) en España es mas frecuente la del tipo B.Posee endo-toxina que es responsable de lesiones en la traquea y bronquios en procesos neumónicos . requiere ambos factores V y X.Haemophilus influenzae (bacilo de Pfeiffer) es el agente etiológico de 10-15% de lasmeningitis en niños de corte edad en España y de neumonías en ancianos. Especies mas importantes (clasificadas en función de los factores que necesitan): .fermentacion de glucosa positiva.ducreyi es agente etiológico del chancro blando (enfermedad venérea /ETS). se transmite por vía aérea y mas frecuente en invierno y primavera.H. LCR por punción lumbar (en caso de sospecharmeningitis). Aislamiento . se formaran satelitismo según sus necesidades de los factores.

astenia. comienza con una pápula eritematosa que se complica a vesícula pruriginosa que se convierte en ulcera o escara. oxidasa+. aerobio estricto.En general. . se conoce como la enfermedad de los legionarios. anorexia. Acción patógena e interés clínico .otros bacilos son comensales para el hombre o saprofitos del suelo. Especies mas importantes de Bacillus: . dolor pleural agudo. agua. el pronostico sera mas severo en ancianos o adultos debilitados aunque con el tratamiento preciso suele remitir sin problema. Acción patógena e interés clínico de Bacillus anthracis: . tos. un coco-bacilo o bacilo Gram- . habitualmente se presenta en forma de cadenas cortas o en parejas. catalasa+.1 semana) se produce fiebres altas. malestar generalizado. tras el periodo de incubación (+/. en ocasiones puede presentarse de forma filamentosa. que sin tratamiento puede necrosarse y extenderse en superficie y profundidad. de la familia Bacillaceae. etc.se transmite vía aérea a partir de aerosoles procedentes de aguas contaminadas o sistemas de aire acondicionado o humidificadores contaminados con Legionella. puede producir diferentes cuadros clínicos (p. en general son móviles. los casos no tratados. y que depende del estado inmunitario. el cuadro clínico que produce es el carbunco animal o humano.Bacillus anthracis (agente etiológico del ántrax o carbunco) .. podrían ser graves. ya que existe el riesgo de . formando fácilmente esporas sobre todo en los cultivos viejos. disnea (un cuadro típico de una neumónia atípica). es inmóvil.la especie mas importante para el ser humano. otro genero de la misma familia es Clostridium son bacilos esporulados y anaerobios estrictos. presenta capsulas (los patógenos) y exotoxina proteica que proporcionan propiedades anti-fagocitarías.Es un bacilo grande.Legionella . es Legionella pneumophila (el agente etiológico de la legionelosis / neumónia atípica por Legionella). que origina en su mayoría potentes exotoxinas responsables de cuadros clínicos graves. pero algunas cepas son inmóviles. Bacillus subtillis).ej. el genero Bacillus son bacilos esporulados aerobios o anaerobios facultativos con tamaño entre 1-7 micras Gram+ y en su mayoría móviles. requiere medios muy específicos para crecer (agar legionella).Bacillus cereus (responsable en muchas ocasiones de trastornos gastrointestinales) . en el humano tiene lugar tras un primer contacto a partir de animales infectados que tras periodo de incubación de 2-3 días surge una pústula maligna (color negro en la mano) en el punto de contagio (las manos y cabeza). Bacillus .

En casos excepcionales pueden aparecer formas internas como el carbunco pulmonarante la inhalación de polvo contaminado con esporas de Bacillus anthracis que da lugar a neumonías graves. son fácilmente confundible con Neisserias porque es bacilo muy pequeño (coco-bacilo). al igual que Pseudomonas. fiebre. dolor tipo cólico. neumonías y sepsis. etc. .(también esta descrito en genero de Moraxella/ Neisseriaceas) este genero engloba especies que pueblan la flora de suelos y agua. la especie mas frecuente es Acinetobacter calcoaceticus que produce infección urinaria. capsuladas y presentes en ambiente hospitalarios donde afectan a pacientes inmunodeprimidos. también puede producirse carbunco intestinal por la ingestión de alimentos contaminados con las mismas esporas y originara diarreas. se diferencian de Pseudomonas en queAcinetobacter es oxidasa-.no fermentadoras. son bacilos Gram. . crecen bien en Mc y AS que da colonias grises y B-hemolíticas. lo mas habitual son las formas benignas que curan con facilitad tras un tratamiento. Acinetobacter . también es muy resistente a los ATB.septicemia intensa que en pocas horas podría originar la muerte. vómitos.

en casos excepcionales. se comportan como Gram+. Acción patógena e interés clínico de Corinebacterium diphteriae .el bacilo diftéricollega al hombre por vía respiratoria a traves de gotitas de saliva (pflugge) u objetos recientemente contaminados invadiendo la oro-faringe y las amígdalas. son muy distribuidos . presenta granulaciones metacromáticas.Mycobacterium y Nocardia (patología e identificación) La familia Mycobacteriaceae engloba un solo genero Mycobacterium.Corinebacterium (patología e identificación) Genero Corinebacterium . originando necrosis en las celulas epiteliales que invade. arabinosa y galactosa. son pequeños bacilos finos rectos y a veces incurvados. desde aquí se extiende. la especie mas importante esCorinebacterium diphteriae. presentan ciertos rasgos comunes con Mycobacterium en su pared bacteriana que es muy rica en ácidos micólicos. catalasa+. tal pseudomembrana se encuentra fuertemente adherida a las mucosas. por vía linfática podría pasar a la sangre difundiéndose al resto del organismo. suelen agruparse en formas geométricas parecidas a letras chinas o abecedario (empalizadas). este epitelio necrosado junto con leucocitos y fibrina formara una pseudomembrana que cubre las amígdalas.pequeños bacilos inmóviles a temperatura corporal. que puede llegar a provocar una obstrucción respiratoria si se extiende por la naso-faringe y laringe. anaerobios facultativos y pueden dar lugar a un velo superficial en medios líquidos. una vez teñidos son altamenteresistentes a la decoloración ácida (AAR+ o acido alcohol resistencia positivo) lo que les diferencia del resto de microorganismos. en general los signos y sintomas de la difteria suelen ser de tipo respiratorio.responde a Gram+). liberando toxinas y enzimas inhibiendo la síntesis proteica celular.Tema 21 . de forma que si se intenta arrancar. son inmóviles con una pared típica y característica no encontrada en ninguna otra familia excepto Nocardia (altamente enriquecida con ácidos micólicos y componentes céreos que se tiñe muy difícilmente . aunque la tinción de BAAR (Zhiel- Nielssen) para Corinebacterium resulta negativa. Tema 22 . se necesitan colorantes con alta capacidad tintorial para su penetración. excepcionalmente pueden encontrarse algo filamentosos. originaria al paciente una fuerte hemorragia.

en la naturaleza. sin tratamiento se va desarrollando evolucionando hacia una necrosis "caseosa" (parecida a queso de caverna). podrían presentar un poder patógeno para el hombre distinto al de la tuberculosis y la lepra (Mycobacterium avium y Mycobacterium marinum). en función de los cuadros clínicos se subdividen en 2 grupos: a. Acción patógena e interés clínico Mycobacterium tuberculosis . provocara fiebres mas o menos variables. de las morfologías de las colonias y de la velocidad del crecimiento. es capaz decrecer en el interior de las celulas que constituyen el sistema retículo endotelial. especies que producen tuberculosis al hombre y a los animales (Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium bovis). contiene proteínas que provocan la formacion de Acs (reacción de la tuberculina /test de Mantoux).responsables de tuberculosis en el hombre Muy rica en componentes lipídicos en su pared celular dotándole un carácter tintorial especifico AAR+ que servirá para su identificación y clasificación. no tiene interés clínico (no son patógenos) para el hombre. estos bacilos pueden llegar hasta los vasos linfáticos y de aquí a los ganglios. Llega al hombre por inhalación (excepcionalmente por ingestión de alimentos contaminados con Mycobacterium o a traves de las heridas de la piel). pueden ser saprofitos del agua y suelo y puede provocar infecciones graves al hombre y en ocasiones crónicas como la lepra. de crecimiento lento(>1semana hasta 3 semanas). provocando una intensa reacción inflamatoria que da lugar a exudación. tos débil o intensa (a . retornando a la circulación venosa y originando focos metástasis en distintos órganos. después de 6 semanas o mas va evolucionando hacia una destrucción y desintegración de las celulas pulmonares con la formación de una masa solida. adelgazamiento progresivo. (2) Micobacterias de crecimiento rápido (<1semana). sudoración por la tarde. (3) Bacilos de Mycobacterium no cultivables sobre medios artificiales y patógenos para el hombre (Mycobacterium leprae) y ciertos roedores (Mycobacterium lepraemurium) Los micobacterias también se pueden clasificar en función de la producción de pigmentos. parecida al queso (caverna tuberculosa). homogénea. necesita gran cantidad de oxigeno para sobrevivir (aerobias estrictas). b. Las especies mas importantes del genero Mycobacterium (3 importantes grupos): (1) Bacilos de Mycobacterium cultivables en medios artificiales. en el frotis de baciloscopia se puede observar forma cordones microscópicos. se multiplican dentro de ellas sin ser destruida. produce una lesión primaria en el pulmón y mas concretamente a nivel de los alvéolos pulmonares. especies de micobacterias atípicas de crecimiento lento.

sintomas raros y no asociables a lepra (picor. patógeno para el hombre. en general cualquier parte del organismo podría verse afectada a causa de diseminación (gastrointestinales.productoras de la lepra en el hombre Se multiplica con extraordinaria lentitud y su clínica es bastante insidiosa y no ha podido ser cultivado en ningún medio in vitro. extremidades) invadiendo los nervios mas superficiales. genito-urinarias. a veces confundido con Mycobacterium tuberculosis ya que la sintomatología es similar => tras una invasión. la gravedad de lesiones depende del estado inmunológico del paciente. en la dermis y en biopsias de lesiones en individuos con lepra. hormigueo y perdida de sensibilidad en las manos/pies. los gérmenes invadirá especialmente individuos inmunodeprimidos. su periodo de incubación es muy difícil de determinar.veces con esputos muco-purulentos) y en fases mas avanzada. el bacilo se multiplica en el interior de los macrófagos de la piel y las celulas de Schwam. producido por Mycobacterium avium y Mycobacterium marinum Las micobacterias atípicas son m. por lo que se conocen poco sus características microbiológicas.o. su periodo durara toda la vida y su evolución mas o menos grave dependerá del grado de inmunidad del huésped. se tiñe con Zhiel-Nielssen (AAR+). La vía de entrada es a traves de lesiones en la piel. concretamente a las celulas de Schwam. . de forma lenta y progresiva aparecen lesiones cutáneas (maculas prominentes en extremidades y cara). se propagan a los nervios superficiales próximos. en estado grave también aparece en órganos mas profundos y su pronostico es mas complicado. su único reservorio es el hombre con autentica predilección por las terminaciones nerviosas. a partir de aquí. su periodo de invasión es muy insidioso. Micobacterias atípicas . puede durar muchos años. diseminación y cuadros de fibrosis pulmonar con rara aparición de focos extra-pulmonares. rectilíneo. se producen formación de tubérculos y consiguiente necrosis caseosa con formación de cavernas. etc. se multiplica mejor en las partes mas frías del organismo (la cara. hemoptisis. tto => ATB sistemico. frecuentemente de carácter pulmonar. la vía de entrada es muy variable (respiratoria o mucosas). pericárdicas. originando inflamación y perdida de sensibilidad. suelen encontrarse en la mucosa nasal.) Mycobacterium leprae . de aquí propagarse via linfática al sistema venoso y disemina a otros órganos (lepra lepromatosa). es un bacilo inmóvil.

en general tienen catalasa termolábil (a temperatura alta no tienen catalasa). Micobacterias son muy exigentes en su crecimiento => incubar a 37ºC.Pruebas bioquímicas => la mas importante es la prueba de la niacina+ (todas las micobacterias producen ácido nicotínico durante su crecimiento. cuando se sospecha que hay pocos bacilos (todo se trabaja bajo la campana de flujo laminar). M. orina. LCR. LCR e orina. que contienen huevo. también se pueden utilizar tinciones fluorescentes (auramina. en el ambiente con CO2 de 5-10% (en 1ª semana) y en atmósfera normal a partir de la 2ª semana. tuberculina es un extracto proteico de bacilo tuberculoso.Se realizara un examen microscópico del frotis previa tinción de Zhiel-Nielssen (AAR). caracteres bioquímicos .tuberculosis no metabolizan el ácido nicotínico y por ello lo acumulan y es excretada al medio.Muestras a partir de heridas sospechosas en piel y otras localizaciones. los tubos desenroscados hasta que se evaporen el agua (sin secar el medio). homogenización y concentración (mediante centrifuga) previa al cultivo. este eritema endurado (pápula de >10mm es positivo) se debe leer hacia 48-72 horas (se mide la pápula no la zona roja). aminoácidos. en la oscuridad. es nitratasa+ y catalasa+ (solo algunas cepas de Mycobacterium tuberculosis no tienen la catalasa. la muestra de esputo han de someterse a una descontaminación.Pruebas de alergia /la prueba de la tuberculina (Mantoux). . sobre todo en medios con base de huevo. se hará la identificación de su morfología mediante tinción de Zhiel-Nielssen y pigmentos. aspirado bronquial. b). se puede sembrar directamente. . Aislamiento de Mycobacterium tuberculosis . aspirado gástrica. también existeagar Middlebrook que se suele emplear junto con el anterior para completar su identificación. la mayoría tardan entre 3-6 semanas en crecer (algunos aun mas). naranja de acridina). sales minerales y verde malaquita (inhibe los gérmenes contaminantes) cuyo crecimiento es lento (2-4 semanas).Para aislar el bacilo de Koch de muestras estériles (LCR. orina) se utilizaramedios líquidos como Proskauer-Beck. originando una reacción intradérmica en la cara anterior del brazo intensa. la prueba del Mantoux dará de por vida positiva. posteriormente se realiza la hibridación con las sondas genéticas (ADN) de M. Aislamiento de Mycobacterium leprae . pero lo mejor seria centrifugar-lo antes.tuberculosis marcadas. rojo de tiacina. actualmente la identificación se hace con el PCR. .Muestras puede proceder de esputo. diagnostico a). después de las 4-6 semanas posteriores al contacto. . . existe medios específicos como Lowenstein-Jensen o Coletsos. es solo toxico para individuos que han estado en contacto con dicho germen. si hay crecimiento.Aislamiento .Pruebas serologícas => la mas utilizada es la técnica ELISA. . si pretendemos hacerlos crecer en medios sólidos (esputo). etc. del cual puede ser extraída y detectada).

Tinción de Zhiel-Nielssen (positiva). se debe evitar el contacto físico entre las portas para evitar contaminación cruzada. test de pilocarpina => para buscar la ausencia de sudoración de la piel lesionada después de una inyección de clorhidrato de pilocarpina. catalasa+. una reacción positiva de la piel se puede observar en pacientes con lepra tuberculoide y lepra dimorfa tuberculoide.las extensiones para baciloscopias se deben hacer previamente a la descontaminación (CHNa 2-4%) de las muestras y homogenización (N-acetil cisteina) . Coletsos o caldo Middlebrook. se hace los 3 pruebas o solo algunos). mientras que en las lesiones lepromatosas esto no sucede debido a que los nervios periféricos están lesionados y no aparecerá ninguna reacción alérgica.(la diferencia de Mycobacterium tuberculosis). reacción de la lepromina => para conocer el tipo de lepra que posee ese individuo (prueba de intra-dermorreacción /Ag de bacterias inactivadas). Pruebas serologícas de ELISA Actualmente en grandes laboratorios. que deberá dar positiva . Baciloscopias . c). llamado lepra lepromatosa. no tendrán ninguna reacción de la piel al Ag. . se realiza la tinción de Ziehl-Neelsen para ver si lo que ha crecido son BAAR o no.Pruebas bioquímicos: niacina. nitratasa+. es importante . su velocidad de crecimiento y la presencia de pigmentos. tinción fluorescencia con auramina. las micobacterias al crecer metabolizan el sustrato y liberan gas CO2 marcadoradioactivamente que es detectada automáticamente por el Bactec y una vez que se ha detectado crecimiento en alguno de los medios.Recogida de muestra de los lugares sospechosos en total asepsia .Se realiza una tinción de Zhiel-Nielssen o AAR. donde se puede observar el aspecto de las colonias. 3. Las personas que no tienen lepra tendrán poca o ninguna reacción de la piel al Ag. rojo de tiacina. la preparación del frotis del esputo ha de hacerse seleccionando la parte mas purulenta que es donde hay mas micobacterias. se utilizan medios de cultivos radiométrico (Bactec TB) de deteccion mas rapida que contiene liquido de soporte (agar Middlebrook) con ATBpara inhibir los demas gérmenes y el sustrato marcado con un isótopo del carbono C14. cuando se lleva acabo la tinción de los frotis. test de la histamina => inyectar histamina de tal forma que en una piel sana aparecerá una reaccion alérgica característica.No podrá ser cultivada en medios de cultivo . Aislamiento de Micobacterias atípicas . . naranja de acridina.Pruebas cutáneas: (depende del resultado. 2.Se realizara un diagnostico serológico (un estudio de la inmunidad celular y humoral del individuo) .. 1.Cultivos en medios Lowenstein-Jensen. . Los pacientes con un tipo particular de lepra. posteriormente su concentración por centrifugación.

generalmente causados por Nocardia brasiliensis y es frecuente en las extremidades inferiores y superiores. Acción patógena e interés clínico Gran parte de nocardiosis son infecciones de carácter oportunista. Nocardiosis pulmonar .cuantificar el numero de bacilos encontrados ya que esta directamente relacionado con el grado de contagiosidad del paciente y con la gravedad de la infección. las manifestaciones clínicas mas frecuentes son: A. no produce toxinas. linfocitos. El genero Nocardia . algunas especies son patógenas para el hombre. etc.causada sobretodo por Nocardia asteroides que produce lesiones pulmonares con abscesos. .). inflamación diseminada semejante a la tuberculosis. poseen ademas glicolípidos y fosfolípidos que sirve para su identificacion y diferenciación. aerobios estrictos y AAR+ (tiene características análogas alMycobacterium) poseen gran cantidad de acidos micolicos de cadena larga en su pared bacteriana. pueden surgir áreas de necrosis y diseminarse por sangre a otros órganos provocando septicemia. presenta periodos de remisión y es característico de climas tropicales. tiene capacidad decrecer y multiplicarse en el interior de los tejidos (macrófagos) como parásito intracelular y solo crece cuando las defensas del individuo se encuentran bajas. pero contiene en su pared bacteriana alta proporción de lípidos que le confiere una resistencia a los sistemas de defensa (macrófagos. B.corresponde a actinomicetos aerobios que forman micelio vegetativo que tiende a fragmentarse originando estructuras bacilares o coco- bacilares. Gram+ inmovil. Micetomas (lesiones granulomatosas) de carácter crónico originadas en eltejido subcutáneo donde se producen tumefacción. abscesos y pústulas y/o nódulos que al abrirse presentan exudados sero-sanguinolentos.

presentan flagelación perítrica. el agente etiológico de tétanos y Clostridium botulinum . responsable de infecciones e intoxicaciones muy graves (tétanos.ej. dentro de los anaerobios se distingue => anaerobios estrictos y anaerobios aero- tolerantes /microaerofílicos (puede crecer a 2-8% de O2). las especies mas patógenos actúan mediante la formación de toxina con poder toxico sobre el huésped. anaerobios estrictos. etc. presentan un metabolismo anoxibiótico => incapaz de utilizar O2 de la atmósfera como aceptor final de electrones. y altamente resistente a medios externos. agente etiológico del botulismo.). boca o intestino están en proporción de 1000:1 con respecto a la flora aerobia. etc. la mayoría de la infección que provoca los anaerobios son endógenas. la presencia de O2 puede ser (1) bactericida /toxica /letal directa o bacteriostático (crecerán de nuevo cuando las condiciones son favorables).Bacterias anaerobias (patología e identificación) Anaerobias . Clostridium que originan toxinas cuyo mecanismo de acción es neuro- toxico =>Clostridium tetanii . no presentan capsulas excepto Clostridium perfringes. móviles. bacterias anaerobias esporuladas. ampliamente distribuidas en el suelo.todas aquellas bacterias incapaces de crecer y/o mantenerse en contacto con O2 a la presion atmosférica. Genero Clostridium . gangrena gaseosa. Las especies mas importantes A. (3) generan producto tóxicos al interaccionar sus componentes propios con O2. son bacilos Gram+. botulismo.Tema 23 . agua. forman esporas a nivel terminal o subterminal. en su lugar utilizan sustratos orgánicos como aceptores finales de electrones(respiración anaeróbica /fermentacion). (2) inhibir ciertos sistemas enzimáticos o la función reguladora primordial del metabolismo celular. algunos podrían formar parte de la flora normal del hombre y animales. los anaerobios son las bacterias predominantes en la flora normal humana y en algunas partes p. por tanto. .

D. grandes. Clostridium que originan toxinas que actúan sobre tejidos provocando histo- toxicidad=> Clostridium perfringes . habitan la tierra y el intestino del hombre y animales. punzante. se ve alterado el sistema muscular variando el ciclo de contracción-relajación de forma que este entra en fase de contracción y no se recupera(rigidez tetánica / epistótonos). C. las esporas de Clostridium tetanii en el ambiente pasan a la herida. es importante la detección precoz y medidas profilácticas (vacunación se renueva cada 10 años). si las condiciones en el ambiente son de anaerobiosis.botulinum) Clostridium tetanii . produce 3 toxinas responsables del cuadro típico del tétanos que son transportadas vía sanguínea o humoral hasta SNC bloqueando la liberación de neurotransmisores.es un bacilo Gram+ pequeño. Clostridium botulinum . Clostridium responsables de cuadros purulentos (clostridios piógenos) => Clostridium perfringes. partos. móviles por su flagelación y presentan esporas. ulceras por decubito) o herida superficiales (rozaduras) se pueden infectar y formar costra que facilita la infección anaerobia. Clostridium que originan toxinas que actúan sobre el tracto digestivo (clostridios entero-toxicos) => Clostridium difficile .B. originan hiperactividad de las neuronas motoras que da lugar a convulsiones y parálisis espástica o espasmo muscular a nivel periférico. germinaran. la forma generalizada es mas habitual y mas grave. en las condiciones favorables de anaerobiosis. es capaz de formar neuro-toxinas peligrosas y potentes sobre las personas que originan parálisis o debilidad muscular. abortos. suelo. Acción patógena e interés clínico A. etc. pescados. ciertos alimentos (conservas. mordeduras. es rara que se produzca de forma local en la zona de entrada.tetanii y C. para su penetración en el organismo se requieren lesiones previas. Clostridium que ejercen acción neuro-toxica sobre las personas (C. su accion patógena sobre el organismo sera neuro-paralizante y con una dosis de 10 elevado a -8 (10 nanogramos) de su toxina es suficiente para causar la muerte (es el veneno mas . formadora de esporas (aspecto de tambor o cerilla). tras una herida profunda (cortante. Para que se produzca el tétanos es necesario una serie de condiciones tales como que el microorganismo germine (condiciones adecuadas de anaerobiosis). las esporas son distribuidas ampliamente en el aire.). responsable de trastornos gastrointestinales no graves. bacilos Gram+ anaerobios estrictos. de otras bacterias anaerobias. arañazos. quemaduras. germinan y tras un periodo de incubación (5-7 días). es frecuente la presencia ademas.agente etiológico de la gangrena gaseosa. se origina su acción patógena.

disartria (dificultad al hablar). capaz de formar toxinas que actúan sobre los tejidos. pH neutro o ligeramente acido y permiten que germine la espora.difficile. vómitos y estado de shock producido por C. es frecuente que se contaminen con otro tipo de bacterias aerobias que consiguen agotar el oxigeno aumentando las condiciones de anaerobiosis.perfringes es también el agente etiológico de una toxo-infección alimentaria producida por la ingestión de carne contaminada provocando cuadros diarreicos y dolor abdominal leve. . debilidad de los musculos (flacidez)incluyendo los respiratorios que puede llegar mortal por fallo respiratorio y arritmias cardíacas (depende de la cantidad de toxina o del germen). se romperán las estructuras celulares a nivel de sus membranas. entero- toxina. Clostridium que ejercen acción histo-toxica en múltiples tejidos Clostridium perfringes . fotofobia. las celulas endoteliales. B. su periodo de incubación en torno 18-36 horas después de la ingestión del alimento contaminado y los cuadros mas graves se originan en un periodo de incubación inferior a 24 horas. Ademas de provocar la gangrena gaseosa a traves de heridas infectadas. también puede encontrarse en la flora intestinal. temperatura en torno a 30ºC. las membranas de las celulas musculares originando procesos de dermo-necrosis con daño tisular (gangrena). hemolisina. que solo se producen en condiciones adecuadas de anaerobiosis. El mecanismo de acción de las toxinas botulínicas => a traves de los alimentos contaminados llega esta neuro-toxina al tubo digestivo del hombre y producirá toxinfección alimentaria inicialmente. lengua y faringe. ampliamentedistribuida en el suelo. la única especie capsuladas. disfagia. C. germinan las esporas y proliferan.ejercen un efecto toxico importante pero no actúan sobre SNC. neuroaminidasa.potentes hasta ahora). de aquí a traves de heridas profundas. se destruirán las celulas hemáticas. existen otros casos mas excepcionales y graves que da lugar a cuadros diarreicos muy acuosos y sanguinolentos. originando parálisis en el musculo esquelético y otras manifestaciones neurológicas como visión borrosa. son Gram+. sus toxinas son de carácter proteico y termolábiles (se destruyen a temperatura 100ºC durante 5 minutos o 70ºC de 30- 60 minutos). puede pasar al hombre produciendo gangrena gaseosa. sequedad de boca. se disminuye el pH aumentando el acido láctico y facilitando la liberación de las enzimas proteolíticas y sustancias toxicas. se producirán los efectos lesivos y graves sobre los tejidos extendiéndose a los vecinos. El mecanismo de acción => tras la vía de entrada (heridas) en condición anaerobiosis adecuadas. anaerobia estricta. de aquí via sanguínea y linfática llega hasta sistema nervioso periférico donde actúa en las terminaciones nerviosas.

gran parte de ellos forman parte de la flora gastrointestinal. forman parte de la flora normal intestinal. tracto urinario y piel.Pruebas bioquímicas => cuando existe crecimiento en el medio anaerobio.no esporulados: . utilizando unacampana con un sobre generador de gas CO2. vaginal o bucal del hombre. crecen mejor en anaerobiosis. . . . . también hay que introducir un indicador de anaerobiosis (una tira reactiva). B. el O2 que existe en el anterior de la campana. . vagina e intestino del hombre. da lugar a la liberación de H y CO2. incubación a 37ºC en 48 horas en condición anaerobisis. son flora habitual de laboca. se monta directamente el API en un recipiente/ una caja. no ejerciendo efecto patógeno alguno. Bacilos Gram+ no esporulados: . adecuada y estéril en medios específicos de transporte anaerobiosis con sustancias reductoras (bolsas generadoras de CO2) que crean atmósferas sin O2 o en una jeringa sin aire (tapando la aguja). son ampliamente distribuidos en la naturaleza y muy pocas capaces de producir cuadros patógenos graves al hombre.Toma de muestra representativa. se une al H. también anaerobio. Las especies mas importantes A. Bacterias anaerobias no formadoras de esporas .crecen en ambientes de bajo potencial oxido reductor o ambientes microaerófilos. Bacilos Gram. forman H2O que se depositan en forma de gotitas en las paredes.Bifidobacterium => es flora intestinal del hombre y no son patógenos.Propionibacterium => son anaerobios. diagnostico .Aislamiento . no intervienen en ningún proceso patógeno para el hombre. caracteres bioquímicos . también se puede realizar tinción de esporas. pueden crecer en ambientes microaerófilos.Se hará un examen directo (tinción de Gram) donde se pueden apreciar las formas de esporas (palillos de tambor). son de gran utilidad a nivel industrial (produce acido láctico para los yogures).Se cultivaran en medios de cultivos específicos como ASA (agar sangre anaerobio).Lactobacillus => microaerófilos.

Cocos Gram.. el suelo y como agentes comensales en las mucosas del hombre y animales. muy finas. Acción patógena e interés clínico Salvo excepciones. C. corresponden a especies bacterianas cuya morfología es filamentosa. presenta una pared celular fina y flexible de lipo-polisacárido y lipo- proteica donde se encuentran la mayoría de Ags específicos de estas.Genero Cristispira => son de tamaño algo menor que el Espiroqueta y no es patógeno para el hombre.Ciertos Streptococcus anaerobios que se encuentran frecuentemente en la floragastrointestinal y bucal. . helicoidal o espiral con filamentos axiales relacionados con su movilidad. Toma de muestra en condiciones adecuada (anaerobiosis) . son microaerofílicas y presentan un metabolismo fermentativo. complicaciones de escaras o ulceras por decubito. diagnostico . no son patógenos.no esporulados: . . existen especies patógenas para el hombre .Genero Borrelia => son espiroquetas mas grandes que Treponema.Treponema pallidum (el agente etiológico de la sífilis). especialmente Bacteroides fragilis que actúa comooportunista. son Gram- (difícilmente se tiñe). no son relacionados con procesos patógenos y la patogenicidad que pudiera desencadenar alguno de ellos depende sobre todo de las circunstancias del huésped (oportunistas). presentan un metabolismo oxidativo y/o fermentativo (aerobias o anaerobias facultativas).Bacteroides => son flora intestinal. pequeñasy móviles. Borella y Leptospira).Genero Treponema => son espiroquetas muy helicoidales. de carácter oportunista. Examen directo (tinción de Gram) .Se aislaran en medios anaerobiosis (ASA/ANA . patología e identificación La familia Espiroquetaceas (con interés clínico para el hombre) .Veillonella => forma parte de la flora intestinal y bucal y no son patógenos para el hombre.Fusobacterium => solo la especie Fusobacterium nucleatum se asocia a algunosprocesos patógenos en el aparato respiratorio y tracto genital femenino. vaginal y bucal del hombre y se ha asociado en ocasiones a procesos gastrointestinales. . La familia Espiroquetaceae se divide en 5 generos: .Peptococcus => no produce efecto patógeno sobre el hombre D. caracteres bioquímicos .Espiroquetas (Treponema. pueden producir infecciones post-quirúrgicas. Borrelia y Leptospira. Pruebas bioquímicas se realiza con API en condición anaerobia Tema 24 . Cocos Gram+ no esporulados: .Genero Espiroqueta => espiroquetas mas grandes y no existen especies patógenas para el hombre. también se pueden visualizar por el microscopio de contraste de fases. Aislamiento .Treponema. . complicaciones de herida en general.agar sangre anaerobio) . . . difundidas en las aguas.

Periodo primario de la sífilis => comienza tras un primer contacto con lesiones ricas en treponemas presentes en las mucosas. pueden provocar fiebres recurrentes al hombre transmitido por artrópodos. no son capaces de vivir fuera del organismo humano. Treponema pallidum es la especie mas importante por su difusión cosmopolitana. crece bien en situaciones de bajo potencial oxido-reductor (microaerofila). que no son patógenos para el hombre y se pueden cultivar. con gran movilidad.son microaerofílicasy presentan pocas espiras que son amplias e irregulares. muy ricas en treponemas y altamente infecciosas. etc. vaginal. . tubo digestivo. son aerobias con un metabolismo oxidativo. es difícil su visualización aunque se suele utilizar microscopia de contraste de fases. es frecuente su multiplicación en ganglios próximos a la zona genital originando pequeñas tumoraciones (adenopatias). su transmisión es por contacto directo (vía sexual) y si no se detecta a tiempo puede durar toda la vida. existen dentro del genero Treponema especies comensales de las mucosas. presentando en ocasiones una respiración anaerobia y un metabolismo fermentativo. ampliamente distribuidas en la naturaleza. ya que mueren por desecación.son espiroquetas pequeñas. muy finas y con numerosas espiras. de forma súbita se produce una espiroquetemia en general muy florida por las manchas en la piel y en las mucosas.Genero Leptospira => son espiroquetas largas. no crece en medios de cultivo in vitro y requiere un medio de cultivo in vivo para crecer (testículo de conejo). mecanismo de acción: .Periodo secundario o sífilis florida => surge después de un tiempo entre 2 meses y 2 años de la fase silente. el especie patógena para el hombre es Treponema pallidum que transmite la sífilis por contacto directo. fiebre en . especialmente en las aguas. profundas y regulares. periodo de incubación 10- 90 días (termino medio de 21 días) aparece en la zona genital un chancro primario con abundantes treponemas. finas con un numero de espiras entre 5-20 distribuidas de forma regular. también puede surgir excepcionalmente una forma eruptiva como lesiones en otros órganos. su metabolismo es fermentativo y son difíciles de cultivar en medios artificiales. transcurrido un tiempo corto de 2-6 semanas estos signos desaparecen espontáneamente y entra en una fase silente. es el agente causal de sífilis. pueden parasitar al hombre provocando leptospirosis. se van diseminando vía hemática y linfática a otras localizaciones convirtiendo-se en una enfermedad sistémica. tracto urinario. se tiñe difícilmente con Gram y se tiñe mejor con Giemsa o tincion de plata y se visualiza con la microscopia de campo oscuro y de contraste de fases. . Genero Treponema . se cultivan con facilidad en medios artificiales.

2 tipos de pruebas => VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) y RPR (reagina plasmática rápida) son pruebas de aglutinación con partículas de carbón (darán grumitos grises).Examen directo al microscopio de campo oscuro o microscopio de contraste de fases o microscopio de fluorescencia de una tinción de Giemsa o tinción Nitrato de plata (sales de plata. hay que confirmar con pruebas treponémicas.existe 2 tipos de pruebas (no treponémicas y treponémicas) a) No treponémicas => son de gran sensibilidad y fácil de hacer.fase silente (2 meses . solo lo hace en medios in vivo (testículos de conejo) y el diagnostico de la infección se establece durante los periodos primario y secundario mediante muestras de exudados.ocasiones. parálisis general progresiva. hongos. . Rickettsias).Pruebas serologícas => se realiza la prueba de la presencia de Acs anti Treponema pallidum en el suero del paciente con Ags específicos de Treponema pallidum que presentan una sensibilidad y fiabilidad del 100%. volviendo a entrar en una nueva fase de latencia. Resumen de la evolución de sífilis => Incubación 10-90 días (termino medio 21 días) . Treponema. se usa para prueba de screening y si resulta (+). es una técnica difícil de efectuar. este cuadro clínico de carácter sistémico remite a las pocas semanas (2-6 semanas). reaccionaran con la cardiolipina (+). necrosis. Diagnostico serológico de las sífilis .fase latente (3-30 años) . Aislamiento . . . pústulas o pápulas muy ricas en treponemas. también se utiliza como un seguimiento de la enfermedad. reservada a los laboratorios especializados. el numero de treponemas en sangre es muy escaso y muy abundante en ganglios. los resultados dependen del periodo de sífilis en el que se encuentre. también se incluyen las inmunofluorescencia indirecta. pero al no ser la cardiolipina un Ags treponémicos. una forma muy grave con mal pronostico. consiste en enfrentar el suero del paciente con sustancia lipídica "cardiolipina" que no es Ags treponémicos. bazo. Legionella.Periodo primario (2-6 semanas) .Treponema pallidum se aísla muy difícilmente.Periodo terciario o sífilis terciaria => surge tras la fase de latencia entre 3- 30 años. gomas. condilomas. etc. huesos.caracteres bioquímicos . aneurisma aórtico.2 años) .Periodo secundario/ sífilis florida (2-6 semanas) . no crece en medios in vitro. es frecuente la formación de granulomas. . puede dar lugar falsos positivo con otras enfermedades. si existen Acs anti Tp en el suero. sistema nervioso (neuro-sífilis) y aparato cardiovascular.Periodo terciario/ Neuro-sífilis forma muy grave con mal pronostico. útil en la detección de Pneumocytis carinii. así como las de hemo-aglutinación pasiva partiendo de hematíes tratados con Treponema pallidum que es muy sensible y económica. etc.diagnostico del genero Treponema pallidum . se le llama también prueba de WASSERMANN.

Genero Borrelia . no es una enfermedad grave y es fácil de tratar. existe en la naturaleza leptospiras saprofitas y parásitas. las especies patógenas para el hombre y los animales. se tiñen con facilidad de Gram.Rickettsias.y se puede cultivar in vitro. todas son pruebas muy especificas. también se pueden teñir con Giemsa. no se utilizan para el seguimiento. pasan las borrelias a la sangre del huésped. puede originar de forma casual leptospirosis en el hombre con cuadros febriles. muy numerosas y apretadas. (2) FTA abs donde previamente se absorben posibles Acs naturales anti Tp saprofitos. especialmente con tetraciclinas. su metabolismo es oxidativo (crecimientoaerobio). se transmiten por piojos y por garrapatas. tras la picadura del vector. consideradas como zoonosis. Genero Leptospira . originan fiebres recurrentes endémicas y epidémicas. ayudadas por el rascado que provoca el aplastamiento del piojo /garrapata. en ocasiones endémica a condiciones de salubridad muy baja. Chlamydias y Micoplasmas (patología e identificación) Genero Rickettsia . clínica que dura unos 10 días y luego desaparecer. es microaerofílica con un metabolismo fermentativo. que dará lugar a micro-traumas en la piel y facilitan el paso de dichas borrelias. (3) TPHA (Tp Haemagglutination Assay) que tiene como base hemaglutinación y sencillo de realizar (no se necesita microscopio fluorescencia). las especies mas importantes del genero Borrelia. cefalea.b) Treponémicas => se utilizan como prueba confirmativas con varias técnicas:(1) FTA (técnica fluorescencia de Acs anti Tp) enfrentando Ags de Tp con posibles Acs anti Tp en el suero del paciente.(4) también se puede utilizar pruebas de ELISA para detectar IgM y IgG. produciendo posteriormente recurrencias. el reservorio son animales. Tema 25 .son espiroquetas de mayor tamaño con espiras mas amplias e irregulares con extremos afilados y son móviles.las fiebres recurrentes son una enfermedad muy cosmopolita. son parásitos celulares estrictos (porque su dotación enzimática es muy escasa) de los artrópodos (crecen muy bien en el . después de unos7 días de incubación se originan fiebres. ya sea garrapata o piojo. con sus extremos ligeramente incurvados y móviles. etc. se tiñen débilmente con Gram. dolores musculares. porque sera siempre resulta (+). Acción patógena e interés clínico . pero requiere medios muy específicos.son espiroquetas muy finas con espiras regulares.

vénulas. Rochalimaea y Coxiella (Coxiella burnetti es coco-bacilo Gram+ que origina la fiebre Q). cefaleas. tras el periodo de incubación de 3 semanas. la vía de entrada no se conocen hasta la fecha.typhi mediante la picadura de la pulga. transmitida al hombre por la garrapata (sobre todo del perro). el sedimento también se usa para sembrar en medios de cultivo celular o embriones. mialgias generalizada y manchas maculo-papulosas. seroaglutinación o ELISA.caracteres bioquímicos .producido por R. tras el periodo de incubación de 4-15 días. es frecuente la formación de maculas rosadas y posteriormente pápulas y petequiales.prowazekii. Especies mas importantes de la familia Rickettsiaceae . (3) Fiebres manchadas de las montañas rocosas . pulgas y ácaros.producido por R. la piel y musculos (dificulta la corriente sanguínea y en casos gravespuede provocar gangrena en las extremidades). no se suelen complicar y responden bien al tratamiento. tras el periodo de incubación de 1-2 semanas. artralgias.rickettsiitrasmitidas por las garrapatas. fiebres altas (40ºC). mialgias generalizadas y una mancha negra en la zona de la picadura.diagnostico del genero Rickettsia Se toma 2 muestras de sangre en estadios febriles (cuando hay mas Rickettsia): . el agente de la fiebre botonosa o exantemática mediterránea. tinción inmunofluorescencia y estudios de microscopia electrónica (para observar).citoplasma). tras el periodo de incubación de 2- 6 días provoca una mancha negra a modo de botón en el lugar de la picadura. cefaleas. (2) Tifus murino o endémico . con tecnicas inmunofluorescencia. tras el periodo de incubación de 3- 6 días.producida por R. Aislamiento . en España la especie mas extendidas es R. May-Grunwald-Giemsa (las rickettsias aparecen de color purpura). . (4) Fiebre Q . nódulos inflamatorio de los capilares.La 1ª se centrifuga para obtener un sedimento sanguíneo (concentración alta de Rickettsia).ej. dolores generalizados. tinción Gram (resulta negativo para Rickettsia y positiva para Coxiella burnetii). Acción patógena e interés clínico: (1) Tifus exantemático epidémico . se usa para realizar varias tinciones p. se produce fiebres altas. .hay 3 géneros importantes => Rickettsia. producen en el hombre enfermedades transmitidas por piojos. arteriolas.producida por Coxiella burnetii mediante inhalación de esta u otras(presencia de artrópodos). son coco-bacilos Gram-.conorii. garrapatas y ácaros. aparecen escalofríos. se produce un estado febril con mialgias generalizadas ycuadro clínico leve. mediante lapicadura de piojo. fiebre.De la 2ª se obtiene sueros para pruebas serologícas (buscando títulos de Acs). artralgias y mialgias generalizadas con un cuadro clínico leve sin complicaciones ni recidivas como el tifus exantemático. garrapatas. aparecen fiebres altas.

El proceso del ciclo => la forma infectiva (corpúsculo elemental) penetra en la célula que va a parasitar ayudado por los Ags específicos. a partir de aquí este corpúsculo elemental aumenta su tamaño. presentando un ciclo con 2 tipos celulares diferentes: . ATP y otras sustancias que van a necesitar de la célula que parasitan. poseen ADN y ARN y su multiplicación es por división binaria (a diferencia de virus). Acción patógena e interés clínico .Genero Chlamydia . que es responsable de la división binaria y por tanto decrecimiento clamidias. provocandoinfecciones sistémicas o locales de distinta gravedad y afectando especialmente a los genitales y a los ojos. Especies mas importantes . son cocos pequeños de Gram-. son parásitos intracelulares estrictos (carecen de mecanismo biosintético auto- suficiente) del hombre y animales. es capaz de vivir en medios intracelulares durante mucho tiempo sin presentar una sintomatología clara lo que facilita la cronificación de procesos infecciosos.dentro de la familia Chlamydiaceae: . .Chlamydia psittaci => parásito intracelular de animales y excepcionalmente del hombre (tras la inhalación de heces de pájaros infectados).En 1er periodo formara una célula densa o corpúsculo elemental con gran resistencia a la sequedad. donde comienza a multiplicarse por división binaria.se multiplican en el citoplasma de la célula que parásita. lo que permitirá la dispersión de Chlamydia. inmóviles.se consideran mas próximos a virus que a bacterias. se produce infección celular. es la forma infectiva. el citoplasma de la clamidia se hace mas denso y esponjoso y aparece la segunda forma.En 2nd periodo formara una célula mas grande de menor densidad o corpúsculo reticulado.Chlamydia trachomatis => parásito intracelular del hombre. provocandobrotes neumónicos de distinta gravedad. . se forma una vesícula citoplasmática que bloqueara los mecanismos de defensa de la propia célula. su pared se hace mas fina y permeable permitiendo el paso de complejos enzimáticos. .

Tracoma => tras un contacto directo se produce una infección crónica en el epitelio conjuntival y corneal.Linfogranuloma venéreo => es una infección que se trasmite por contacto venéreo.Conjuntivitis neonatal => aparece entre la primera y la segunda semana después del nacimiento. existe un kit para buscar clamidias. . siendo frecuentes las recaídas y sobre infecciones con evolución lenta hacia la ceguera. son comensales de la mucosa del hombre. dentro de la familiaMicoplasmataceae están los géneros Micoplasma y Ureaplasma.es uno de los microorganismos mas pequeños existentes en bacteriología y se caracteriza por no contener pared celular => sensible a la presión omotica del medio (se lisan facilmente). la mas importante para el hombre es Micoplasma pneumoniae(produce neumonías).caracteres bioquímicos . .Se realizaran exámenes indirectos mediante técnicas serologícas (la mas frecuente ELISA) que son mas seguras y fiables.diagnostico del genero Chlamydia Debido al elevado riesgo de infección en el laboratorio al manipular clamidias se suelen utilizar metodos indirectos (serológicos) a veces tambien se realiza examenes citologicos en cultivos específicos. Se toman muestras de secreciones oculares y/o genitales . se dividen por división binaria y vivir de forma independiente y crece bien in vitro a partir de medios artificiales enriquecidos. Aislamiento . surge una conjuntivitis purulenta al neonato. puede evolucionar positivamente o hacia lesiones análogas al Tracoma. su morfología es pleomorfismo yresistente a ciertos antibióticos cuya mecanismo de acción se establece en la pared bacteriana.Cuadros clínicos de Chlamydia trachomatis: . frecuente en edades infantiles.Se realiza un examen directo que incluyen una tinción de Giemsa y de Gram. Se realizan técnicas citológicas . solo unas 10 especies pueden producir algún efecto patógeno en las membranas celulares de las mucosas oro-faríngeas y uro-genitales. asociada a infecciones genitales por clamidias en la madre. el Ureaplasma . . Especies mas importantes . . Genero Micoplasma . existe especies patógenas como Micoplasma pneumoniae que afecta al aparato respiratorio. se encuentra extendidos en la naturaleza.

. diagnostico . móviles por un único flagelo polar. existe un kit de la detección micoplasmas. caracteres bioquímicos . cervicitis. ureasa. los cilios de las celulas epiteliales que tapizan la mucosa se paralizan y provoca alteraciones metabólicas en dichas celulas epiteliales. mas fiables y mas utilizados en la actualidad (inmunofluorescencia y ELISA). siendo Micoplasma pneumonia es mas importante como el agente causal mas frecuente de las neumonías atípicas. oxidasa+ y catalasa+. no fermentan los carbohidratos.Su infectividad se relaciona con su adherencia (debido a una glicoproteína especifica) a los epitelios de las mucosas. espiral o alas de gaviota (en cultivos jóvenes). vaginitis. son microaerofílicos. . etc. . una vez adherida. .son bacilos Gram.Se realiza un frotis de la muestra que se puede observar en campo oscuro con nigrosina. . secreciones uretrales. etc. su pleomorfismo puede adoptar formas filamentosas y alargadas que aumenta la superficie de contacto a las estructuras epiteliales a las que se une.Se siembra en medios específicos y con un alto grado de humedad para evitar la desecación.Se realiza pruebas bioquímicas => fermentacion de glucosa. etc según la patología. Acción patógena e interés clínico . prostatitis.cortos con forma de coma. de sangre.urealyticum es otra especie patógeno que se asocia a ETS junto con el Micoplasma hominis.En casos excepcionales se han podido aislar Micoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum en procesos uretrales y genitales como salpingitis. habitan el tracto gastrointestinal de muchos animales. en el hombre se asocian . exudados. al microscopio de contraste de fases o con la tinción de Giemsa (se tiñe débilmente).Se toman muestras de la mucosa faríngea.. muestras de esputo.Metodos serológicos son mas rápidos. (son casos muy raros) Aislamiento . Genero Campylobacter . . prueba de arginina.Cuadros clínicos => cuadro pulmonares y mas raramente cuadros genitales o uro-genitales.

Si pretende aislar otras especies de campylobacter distintas a C.a infecciones gastrointestinales (via de entrada oral/ digestiva).coli. 10% de CO2 y 85% de N2 o campanas anaerobios con sobres comerciales que generan la atmósfera deseada.la siembra inmediata en medios selectivos a la toma de muestra. artritis séptica). en ocasiones puede pasar al torrente circulatorio y desarrollarse un cuadro de fiebre entérica. se les hace una tinción Gram (bacilos Gram- con forma de S en cultivo joven y en cultivo viejo pueden dar formas cocoideas).ej. dolor de cabeza y fiebre.C. se monta un fresco para observar la movilidad. C. especialmente en pacientes con SIDA.la infección es autolimitada resolviendose en una semana sin necesidad de ATB. a esta temperatura se consigue el máximo aislamiento de C. "Campylosel" contiene sangre de cordero con ATB y antifúngico o "Skirrow" contiene sangre de caballo con ATB (2) uso de atmósfera reducida de O2/ microaerofílica se consigue mediante sistema de evacuación-reemplazo hasta lograr 5% de O2. hipurato+. incubación de 7 días. fundamentalmente. son oxidasa y catalasa positivos. se utilizaran medios de transporte especiales (Cary-Blair o Campy-Thio) donde se mantiene viables. Campylobacter jejuni => crecimiento a 42ºC. resistente a Nalidixico y sensible a Cefalotina Campylobacter laridis => crecimiento a 42ºC.jejuni => ha de emplear medios selectivos sin cefalosporinas. se adquiere por via oral (comida y bebidas contaminadas) o por contacto con animales infectados. (3) temperatura de 42ºC en aislamiento inicial entre 24-48 horas (para inhibir la flora fecal acompañante). Aislamiento a partir de "heces" . para diferenciar entre las especiesse puede montar un API o se realizan varias pruebas => (1) crecimiento a distintas temperaturas. se multiplica en el intestino delgado.coli y C. Especies clínicamente importantes para el hombre . incoloras. C. incubación a 37ºC.jejuni.coli y C. sensibilidad a Nalidixico y resistente a Cefalotina Campylobacter fetus => no crecen a 42ºC. (2) sensibilidad al acido nalidixico y a la cefalotina (3) hidrólisis del hipurato (se introduce una tableta dentro de un tubo inoculado. .C. después pasa a 37ºC el 3º día. sensibilidad a Nalidixico y resistente a Cefalotina Campylobacter coli => crecimiento a 42ºC. si se tiene que posponer. dará + si cambia a color amarillo). fetus produce septicemia en pacientes inmuno-suprimidos. mucosa y no hemolíticas. el cultivo de campylobacter tiene que cumplir 3 requisitos => (1) empleo de medios selectivos p. resistente a ambos Nalidixico y Cefalotina Patogenia y patologia .jejuni y C. invade el epitelio y produce inflamación. hipurato-. la diarrea acompañada de dolor abdominal agudo. hipurato-. laridis sonagentes etiológicos de diarrea. las placas han de incubar hasta 72 horas antes de descartarse como negativas.jejuni es la especie con mayor frecuencia se asocia a infeccion en el hombre (gastroenteritis con eliminación de sangre en heces). sensible a pH gástrico (debe ingerirse una concentración elevada de ellos para que se produzca infeccion). atmósfera microaerofílica. y cada vez en mayor grado a infecciones extra-intestinales (meningitis.los campylobacter termofílicos dan lugar a colonias grises. los casos graves se trata con eritromicina. hipurato-.fetus subsp. endocarditis. Identificación .

Metodos indirectos: .Incubación => las placas deben incubarse en condiciones reducidas de O2 (5%). una porción de la biopsia se invertirá en la realización de un frotis para la tinción Gram o Giemsa.se aislaron por 1ª vez (1982) del estomago de pacientes con lesiones gástricas y ulcera péptica. pero se cuestiona como la causa de dichas infección. en las ulceras . pero requiere un equipo especial par al lectura).pylori esta implicado en diversas patologías gástricas. se remitirán directamente al laboratorio para proceder a su cultivo inmediato en medios específicos para H.Metodos directos => las muestras mas idóneas para el aislamiento de H. catalasa+.(algunas cepas son capaces de virar la urea de Christensen en minutos). en aislamiento primario.pylori son las biopsias de las zonas pliegues de la mucosa gástrica del antro. es sensible a la cefalotina y resistente al nalidixico (algunas cepas pueden ser sensibles). translucidas y poco hemolíticas. ureasa+. se propuso la creación de un nuevo genero Helicobacter que se incluyo la especie de Helicobacter pylori. son bacilos curvados Gram.Identificación => son oxidasa+. 30ºC ni 42ºC). se les denomino Campylobacter pyloridis. Las colonias son de 1-2 mm de diámetro.Prueba serología => para detectar Acs utilizando la técnica de ELISA. posteriormente se rectifico a Campylobacter pylori y cuando demostraron que difería morfologicamente del genero Campylobacter. no son fermentadora de carbohidrato. implicada en procesos de infección gástrica.pylori .pylori.Prueba de la urea respiratoria => el paciente ingiere urea marcada y tras un periodo de tiempo se mide el nivel de CO2 espirado. se piensa que también pueda tener un papel en la gastritis crónica activa. es conveniente incubar las placas hasta 7 días. .Helicobacter Pylori .existen pruebas claras de que H.Prueba de la urea rápida (de Christensen) => un trozo de biopsia se inocula en un medio con alta concentración de urea y un indicador de pH. Se consigue mediante sistema de evacuación-reemplazo o usando jarras de anaerobios con sobres comerciales que generan dicha atmósfera. cuerpo y fundos. . parece claro que es agente etiológico de gastritis aguda. crece a 37ºC.con forma de espiral y gran actividad ureasa. Patología . . Metodos de detección de H. la temperatura optima es de 37ºC (no se desarrolla a 25ºC. que se detecta con un espectrofotómetro de masas y urea marcada con C14 detectada con un contador de centelleo (un método diagnostico rápido y no invasivo. hipurato. de 10% CO2 y 85% N2. . se trata de una especie de reciente descubrimiento. se puede emplear urea marcada con C13.

pero.pylori es sensible in vitro a un gran numero de ATB. por lo que son frecuentes las recaídas tras la supresión de la terapia. parece ser que su presencia no es suficiente para desarrollar la ulcera. nunca se emplea mono-terapia porque no es eficaz. seguido por el bazo y nódulos linfáticos. en el cerebro se detecta acumulación anormal de proteína-prion en el genoma del huésped. hasta 50% de la población adulta de >60 años es portadora de este microorganismo. en los últimos años se han descubierto otros agentes infecciosos mas simples como los viroides y los priones.H. en el reflujo gastro-esofágico y en el carcinoma gástrico. son de muy pequeños tamaños (filtrables) y se caracteriza por su mecanismo de replicación. . .los viroides => moleculas circulares de ARN de bajo Pm sin cubierta proteica que causan enfermedades a las plantas.los priones => son proteínas que parecen estar codificadas por genes celulares y actúan como señales reguladoras en las celulas que invaden.o. demencia. provocan prurigo lumbar de las ovejas y cabras (scrapie). deterioro cognitivo y motor. encefalopatía espongiforme en las vacas y enfermedades neuro- degenerativastransmisibles en el hombre (p. tras un periodo de incubación largo (meses o años). Creutzfeldt- Jacob /encefalopatía espongiforme progresiva y síndrome de Gerstman- Straussler-Streinker y el kuru). . se ha propuesto una posible adquisición del mismo por contacto con animales.virus es un parásito intracelular estricto que requiere infestar una célula para sintetizar sus componentes y ensamblar nuevos viriones. resistentes a los procesos físico-químicos que inactivan a los virus y no producen respuesta inmune o inflamatoria en el huésped. región periodontal y transmisión persona-persona (ninguno están demostrados) Sensibilidad antibiótica . el tropismo de la infectividad es SNC. aparecerá los sintomas clínicos. la patogenia (de todas)se caracterizan por desordenes progresivos como ataxia (dificultad motórica). el tratamiento in vivo es difícil. los priones son resistentes a las proteasas e induce una degeneración neuronal. infectar a los hombres y animales.pépticas se aísla 100% de pacientes con ulcera duodenal y 77% de ulcera gástrica. virología clínica se remonta al siglo XX y la composicion de un virus fue determinada por Schlesinger en 1933. no esta claro el papel que desempeña en la dispepsia no ulcerosa. se desconoce su modo de transmisión.ej. organización y composicion. Tema 26 - VIROLOGÍA CLÍNICA (características genera les de los virus) Introducción . suelen administrarse varios fármacos juntos y aun así no se consigue erradicar al m.

Estructura de la cápside => su función es de proteger el genoma del medio . vegetales. pero si poseen algunos enzimas (nucleasas. bacteriófagos) Estructura y morfología de los virus .son de tamaño entre 20-25 nm hasta 200-300 nm. por lo que necesitan la maquinaria de una célula huésped. transcriptasas. algunos presenta membrana lipídica (envuelta) que se adquieren de la membrana citoplasmática de la célula infectada durante el proceso de salida. . los virus ADN suelen ser bicatenario.Estructura del genoma => ADN o ARN mono-catenario o bicatenario. los virus envueltos tienen un matriz proteica que sirve como puente entre la nucleocápside y la envoltura. excepto parvovirus (mono-catenario). etc. carecen de organelas citoplasmáticas para crecer y multiplicarse. los genomas (core o núcleo) pueden ser moleculas lineales o circulares únicas o segmentadas en varios fragmentos. . se clasifican por el tipo de huésped que parasitan (virus animales.Concepto de virus . su observación requiere un microscopio electrónico.). virión es la partícula viral completa (genoma + nucleocápside). la mayoría de virus ARN tienen genomas mono-catenaria excepto los reovirus/rotavirus (bicatenario).es un bloque de material genético (ADN o ARN) rodeado de una cubierta proteína (cápside) que le sirve como vehículo para su transmisión.

pero las proteínas suelen ser virales desplazados a las proteínas celulares originales.penetración .decapsidación . . en algunos casos. pero en general conlleva pasos de => adsorción/ adherirse . se penetra el virión completo o solo el genoma y las polimerasas entran en el citoplasma celular. según la disposición que adopten los capsómeros /la cápside.ensamblaje - liberación. están compuestas de subunidades proteicas repetidas (capsómeros) que a su vez están compuestas de moleculas proteicas (protómeros). la proteína de adherencia viral son las espículas de la capa externa de la envoltura. intervienen moleculas proteicas de la superficie del virión (proteínas de unión) y proteínas de la superficie de la membrana de la célula diana (proteínas receptoras).Adsorción => la unión de la partícula viral a la superficie de la célula. . icosaedrica (20 caras triangulares y 12 vértices) y compleja. no requiere energía y no depende de la temperatura. se clasificanen virus de simetría helicoidal (normalmente son virus ARN). en los virus envueltos. Ciclo vital de los virus . los virus envueltos tienen estructuras glucoprotéicas (espículas) importantes para los procesos de adsorción y penetración al interior de la célula.Penetración => tras ser adherido.extracelular y facilitar la entrada al interior de la célula. las proteínas incluyen una matriz (proteína M) que contacta/ engancha con la nucleocápside. .Estructura de la envoltura => los lípidos de la envoltura es lipoprotéica y procede de la membrana célula infectada. esto se lleva a cabo por 3 .las estrategias de replicación varían dependiendo de la estructura del virus y de su material genómico.replicación .

en la mayoría la penetración y la decapsidación se produce a la vez. quedan rodeados por la membrana citoplasmática de la célula huésped formándose una vesícula endosómica (mecanismo mas utilizados de losvirus sin envuelta). . parvovirus) => necesitan un intermediario replicativo para formar ADN bicatenario que puede transcriben el ARNm (ARN polimerasa celular necesita como plantilla una ADN bicatenario). para el proceso de traducción => ARNm emigra al citoplasma celular y es traducido para formar las proteínas de la cápside => que posteriormente son transportadas al núcleo para ensamblar el virión completo que serán liberados por lisis celular. es esencial que los ARNm transcriban la información viral y la replicación de la información genética y que posteriormente mediante los componentes celulares se traducen para fabricar proteínas que se necesitan.mecanismos: penetración directa. endocitosis o fusión.Decapsidación => se degrada la cápside viral para que el genoma viral pueda liberarse e iniciar la transcripción y la traducción. la excepción dará al virus ADN poxvirus (grande y de simetría compleja) que realiza el proceso de transcripción y traducción en el citoplasma celular utilizando su propia ARN polimerasa dependiente del ADN viral. a. .Replicación => es la fase donde se produce la síntesis de todas las macro- moleculas virales. su envuelta se fusiona con la membrana citoplasmática directamente y la nucleocápside se libera al interior del citoplasma. la envoltura viral se fusiona con la membrana celular formándose una vesícula endosómica que posteriormente libera la partícula viral hacia el citoplasma. penetración directa => la membrana solo permite la entrada del genoma viral (ocurre en virus sin envuelta p. fagos). fusión => utilizado por los virus envueltos. Replicación de virus ADN mono-catenario (fagos. endocitosis => los viriones adsorbidos. existen 2 maneras de fusión: en los paramyxovirus. como resumen: ADN mono-catenario + ADN polimerasas de la célula huésped => produce ADN bicatenario + ARN polimerasas celulares => forma ARNm . pero en otros casos apenas se alteran. el ADN viral es liberado y penetra en el núcleo + ARN polimerasas celulares => ARNm transcrito y traducido para la síntesis ADN viral. en el resto de virus envueltos. ya que no pueden utilizar ARN de la célula huésped que se localiza en el núcleo.ej. la célula huésped debe proporcionar la energía y los medios suficientes que a veces puede afectar su propio metabolismo celular. Replicación de virus ADN bicatenario => tras la adsorción y la penetración. b.

mediante su propio ARN polimerasas sintetizara el ARNm que después le servirá de molde para la síntesis de nuevo ARN de polaridad (-) y también para la traducción de sus proteínas utilizando la maquinaria celular. dando lugar a un virión viable.c. el virus no se libera de la célula sino que se integra en su genoma y permanecer así largo tiempo o de por vida. fusionándose a la membrana. los viriones se ensambla y se libera de la célula huésped. Un caso especial de Retrovirus => virus ARN mono-catenario de polaridad (+) que poseen un enzima transcriptasa de reversión (transcriptasa inversa / retro- transcriptasa). la zona de la membrana por donde se producirá la gemación. el proceso de ensamblaje y liberación es a veces ineficaz. en caso de poxvirus (mas grandes y complejos). . que atrae a la nucleocápside. tras la replicación del genoma viral y la transcripción de las proteínas virales. en caso de virus envueltos. Replicación de virus ARN mono-catenario de polaridad (-) => su ARN de polaridad (-) complementa el ARNm que es de polaridad (+). en caso de retrovirus. salen al exterior por gemación de una zona de la membrana nuclear o citoplasmática (depende si son virus ADN o ARN). formándose partículas no infectivas. formándose la envuelta y liberándose el virión al exterior. los cuales la captan e inician su traducción a proteínas virales y también un enzima RNA polimerasa (transcriptasa). su genoma ARN + retro-transciptasa => produce ADN de polaridad (-) + (la misma) retrotranscriptasa => origina ADN bicatenario que se integran al ADN celular y permanece alli durante tiempo prolongado. la liberación de los virus sin envuelta (desnudos) se produce por lisis celular. d. e. adquiere primero las espículas y las proteína de la matriz (codificadas por el virus).Ensamblaje y liberación => se puede producir tanto en el núcleo como en el citoplasma. consiste en la unión ordenada del acido nucleico y de las proteínas para formar la nucleocápside. Replicación de virus ARN mono-catenario de polaridad (+) => ARN viralpenetrado en el citoplasma de la célula huésped es reconocida de inmediato como ARNm por los ribosomas. RNA polimerasa producida + ARN viral (se utiliza como molde) => replicación del ARN viral (todo ocurre en el citoplasma independientes del ADN del huésped). . estospueden sintetizar sus propias envueltas. se completa el ciclo replicativo. En un momento dado el ADN integrado se reactiva y es transcrito a ARNm vírico por la polimerasa del huésped y entonces.

tiene forma redonda. estructura. De simetría cubica o icosaedrica sin envuelta .Taxonomía vírica . etc. . según el tipo de genoma que contienen y su estructura => se clasifica en virus ARN y virus ADN. forma. todos se ensamblan en el citoplasma de la célula huésped y son resistentes al éter. sintomatología clínica que producen. genero. Virus ARN 1. tropismo celular.Familia Reo-viridae => tamaño intermedio (60-80 nm de diámetro). . tamaño. los únicos bicatenarios. el mas importante para el hombre es el Rotavirus (provoca problemas diarreicos). especie o tipo y según su forma del genoma.los virus se dividen en familias.mono-catenario de polaridad (+) que utiliza su propio ARN como mensajero (pueden ser inmediatamente traducidos por la célula huésped ya que no se necesita transcribir ARNm) con la excepción de Reoviridae(bicatenarios) que utilizan su propia ARN polimerasa para transcribir ARNm.

Familia Toga-viridae => son de 40-70 nm y adquieren su envoltura en la membrana citoplasmática. el mas importante /patógeno para el hombre es el virus de Norwalk (productor de gastroenteritis) y el virus de Hepatitis E (su inclusión no es definitiva) .Familia Retro-viridae => son grandes +/. de elevado Pm. Cosxackievirusy el virus de la hepatitis A) y los Rhinovirus (>100 rhinovirus). Arenaviridae.mono-catenario de polaridad (+). Pestivirus con el virus de la diarrea mucosa como su principal tipo y Rubivirus con rubeolavirus su principal tipo. se incluyen la mayoría de los arbovirus (transmitidos por artrópodos . se divide 3 subfamilias: Oncoviridae (causan tumores y canceres). .Familia Calici-viridae => son pequeños (35-39 nm). se engloban todos los virus ARN tumorales.los arbovirus pertenecen a numerosas familias como Togaviridae. 2. se incluyen también los no arbovirus:Alphavirus con virus Sindbis su principal tipo.100nm. adquieren su envoltura en la membrana citoplasmática de la célula huésped. Flaviviridae..Familia Picorna-viridae => son pequeños (20-30 nm). Echovirus. contienen trazas de ADN y poseen transcriptasa inversa (retro-transcriptasa) en su dotación. tienen poca importancia en microbiología clínica. . . Reoviridae).Spumaviride y Lentiviridae (dentro de esta estaría VIH). De simetría cubica o icosaedrica con envuelta . los géneros mas importantes son los Enterovirus (>70 enterovirus que incluyen el Poliovirus. todos se ensamblan en el citoplasma de la célula huésped y son sensibles al éter.

adquieren su envoltura en . se incluyen 3 géneros: Paramyxovirus (virus de la parotiditis/paperas. los Morbilivirus (virus del sarampión.Familia Rhabdo-viridae => de forma bala o bastón.Familia Flavi-viridae => son de 40-50 nm y adquieren su envoltura en las membranas intra-citoplasmáticas (antes se incluyen dentro de la familia Togaviridae y los han separado por su menor tamaño y por el lugar de su ensamblaje que ocurre en el retículo endo-plasmático). 3. entre otros) y los Pneumovirus (virus sincitial respiratorio . De simetría helicoidal . .. parecidos también a la familia Rhabdoviridae (los 3 proceden de un ancestro común).causan bronquiolitis en niños pequeños). parainfluenza tipos 1.todos son envueltos. incluyen 2 géneros de importancia clínica: (1) Flavivirus(antes llamados arbovirus del grupo B) que destaca el virus de la fiebre amarilla y deldengue.3.4A. ..Familia Paramyxo-viridae => de tamaño 150-300nm. el genero mas importante es virus de la rabia.. adquieren su envuelta en la membrana citoplasmática. mono-catenario de polaridad (- ) que utiliza su propia transcriptasa (ARN polimerasa) para transcribir ARNmensajero. se ensamblan en el citoplasma y son sensibles al éter. .Familia Orthomyxo-viridae => morfológicamente semejante a la familia Paramyxoviridae pero mas pequeños 80-120nm.2.). (2) virus de la Hepatitis C. actualmente se incluye de manera no definitiva al virus de la hepatitis G. el diámetro del cilindro +/- 70nm con longitud de 175nm. adquieren su envuelta en la membrana citoplasmático.4B. son pleomórficos predominandoformas esféricas rugosas y filamentosas.

la membrana citoplasmática. la mayoría de los géneros son arbovirus. adquieren su envoltura en el aparato de Golgi. se incluyen 2 géneros: los virus de la influenza o de la gripe tipos A. algunos producen infecciones virales "lentas".Familia Bunya-viridae => de tamaño 80-100nm. . la mayoría de los géneros son virus respiratorios de vías altas. morfológicamente se parecen a Orthomyxovirus. adquieren su envoltura en las membranas intra-citoplasmáticas. de forma esférica.Familia Corona-viridae => de tamaño 80-130nm. . . . pero sus proyecciones en la superficie a modo de pétalos o "corona solar".Familia Arena-viridae => de tamaño 50-300nm. B y C. el mas importante es virus de la fiebre de Lassa (en Africa). adquieren su envoltura de la membrana citoplasmática.

adquieren su envoltura en la membrana nuclear y son sensibles al eter. (2)Betaherpesviridae con géneros Citomegalovirus al . el genero mas importante es el Papilomavirus o virus de las verrugas con 66 tipos depapilomavirus humanos (PVH). se conocen 34 tipos que afectan al hombre y mucho de ellos afectan el tracto respiratorio. la mayoría no tienen importancia clínica. . De simetría cubica o icosaedrica con envuelta .Virus ADN a.Familia Herpes-viridae => de tamaño medio +/-100nm. b. .Familia Adeno-viridae => de tamaño mediano 70-90nm. pertenece al genero Parvovirus que causa eritema infeccioso.Familia Papova-viridae => son de tamaño pequeños 45-55nm con ADN de tira circular. todos se ensamblan en el núcleo y sonresistentes al éter . solo 8 tienen interés clínico para el hombre y se divide en 3 subfamilias: (1) Alphaherpesviridaecon géneros importantes el virus Herpes simples tipo 1 y 2 y el virus Varicella-zoster.son bicatenarios y todos se ensamblan en el núcleo con excepción de Irido-viridae que se ensamblan en el citoplasma. excepto parvovirus B19.su genoma es ADN bicatenario con excepción de Parvo-viridae (mono-catenario).Familia Parvo-viridae => de tamaño muy pequeño 18-26nm con genoma ADN mono-catenario. de los 80 virus que existen. . De simetría cubica o icosaedrica sin envuelta . los Papovavirus en general producen enfermedades latentes y crónicas y algunos son oncogénicos.

son resistentes al éter y poseen un genoma ADN parcialmente bicatenario. no tienen importancia clínica para el hombre.Familia Irido-viridae => de tamaño grande 130-300nm. . c. pero si en veterinariacomo el virus de la fiebre porcina africana. De simetría compleja . . los mas importante son virus de la viruela.Familia Hepadna-viridae => de tamaño 40-50nm. adquieren su envoltura en la membrana citoplasmática y también se ensamblan en el citoplasma (a diferencia de otros). se caracteriza como la única familia de virus ADN que se replica y ensambla en el citoplasma. de hecho su replicación es posible en celulas a-nucleadas (sin núcleo).citomegalovirus humano (Herpesvirus humano tipo 5) y al Herpesvirus humano tipo6. son resistentes al éter y poseen una doble envuelta (una la adquieren en el aparato Golgi y la otra en la membrana citoplasmática.Familia Pox-viridae => son virus animales mas grandes 230x400nm de forma ladrillo o ovoide. pues contienen una RNA polimerasa ADN dependiente (no necesita la maquina nuclear). pertenece al generoLimphocriptovirus. virus de la vacuna o vaccinia y virus del molluscum contagiosum. adquieren su envoltura en el citoplasma. y al genero Roseoloviruscon el herpesvirus humano tipo 7. el mas importante es el virus de la hepatitis B. (3) Gammaherpesvirus que incluyen virus de Epstein-Barr (herpesvirus humano tipo 4) que provoca enfermedad de Beso. sensibles al éter. .

3.de polaridad+) . siendo el tipo 72 es el virus de laHepatitis A.1.icosaedrico .de polaridad+) . la vacuna de poliomielitis se administra a los niños de 2-4-6-18 meses.se ensamblan en el citoplasma) => tiene poca importancia en clínica. Familia Picorna-viridae (virus muy pequeños 20-30nm . periodo de incubación 1- 3 días. la infección suele ser asintomática en neonatos. el virus se detecta en heces (dura bastante horas fuera del huésped) 1.contiene 6 géneros. pleurodinia. Virus ARN (mono-catenario) 1.se ensamblan en el citoplasma) . afecta principalmente a niños entre 6-24 meses.icosaedrica .sin envuelta . únicamente cabe destacar Rotavirus) Rotavirus (forma de rueda .Principales familias de virus de interés clínico 1. Enterovirus . se incluye de forma no definitiva el virus de Hepatitis E. precediendo los vómitos a la diarrea que suele mantenerse de 4-5 días. herpangina.se asocian con distintos síndromes clínicos como parálisis. también Salk(virus inactivados). infecciones agudas del tracto respiratorio y fiebre aftosa.posibles agentes causales de gastroenteritis en cualquier día del año y a cualquier edad. los mas importantes son Poliovirus. existen >70 sero-tipos. meningitis aséptica. Echovirus y Coxsackievirus.el único bicatenario) => descubiertos en 1973 en niños con gastroenteritis.sin envuelta .2. mas temidos normalmente por la parálisis flácida (de cintura para-bajo) y deformidades aunque son complicación infrecuente. 1. son habitantes transitorios del tracto digestivo humano. pericarditis. miocarditis. todos se diseminan por vía fecal-oral y la mayoría son asintomáticas. Familia Reo-viridae (tamaño mediano 60-80nm . es el agente Norwalk (virus que causan gastroenteritis en EEUU) que ahora esta dentro deParvovirus .sin envuelta . encefalitis.Parvoviridae. el único con importancia clínica (agente causal degastroenteritis esporádica y epidémica en lactantes y niños.2 y 3). destacando 2 géneros Enterovirus y Rhinovirus.icosaedrica . Familia Calici-viridae (pequeños 35-40 nm . . la prevalencia máxima en invierno y raramente en verano. .Los virus de poliomielitis /Poliovirus son tres (tipos 1.es una familia importante y una de las que mayor numero de virus presenta. la vacuna es de Sabin (virus atenuados).

Familia Toga-viridae y Familia Flavi-viridae (toga=envuelta - icosaedrica . Clínica de Rubeola => empieza con eritema en la cara y se extiende hacia . ambos son de forma icosaedrico. diagnosticopor método serológico (técnica de ELISA) para detectar IgG y sobre todo IgM en las embarazadas y un resultado positivo indica inmunización frente al virus. Para el diagnostico debe recurrirse al cultivo. de genero flavivirus que pertenecen a los arbovirus tipo B (transmitidos por artrópodos). losv. en adultos se puede complicar con artritis transitoria o artralgias. erupción eritematosa y linfadenopatía sub-occipital y retro-auriculares. existen >100 tipos 1. el aislamiento de un enterovirus de heces o de faringe no indica necesariamente una relacion causal con el cuadro clínico. dengue.Los virus Echo y Coxsackie tienen distintas manifestaciones (muy ubicuo/ de todo tipo). sarampión y rubeola) que se pone a los niños de15 meses (suele dar inmunidad permanente) y una dosis de recuerdo a los 6 años (solo las niñas). Pestivirus y Rubivirus (rubeola) dentro de Flaviviridae esta el virus Hepatitis C y otros que producen enfermedades como fiebre amarilla.de polaridad+ .agentes etiológicos mas frecuentes del resfriado común (rinitis agudas). consta la importancia como agente causal de malformaciones congénitas desde la epidemia de 1940 en Australia (un oftalmólogo australiano constato un elevado numero decataratas congénitas y ceguera asociados a esta enfermedad). lo adquieren de retículo endo-plasmático.se ensamblan en el citoplasma). se incluyen la mayoría de los arbovirus. por el contrario si se trata de LCR. Virus de la Rubeola del genero Rubivirus (no es un arbovirus) . cataratas. Rhinovirus . actualmente es poco frecuente debido a la vacuna obligatoria que se incluye en latriple vírica (paperas. y deben descartarse otras causas. a los 11 años solo se dan vacuna de varicela. la infección suele serbenigna y auto- limitada.descrito hace >200 años. retraso del crecimiento y sintomas encefalíticos.4. sintomas => procesos respiratorios superiores leves. adquiere su envuelto en la membrana citoplasmática de la célula mientras los v. dentro de Togaviridae están los arbovirus y los géneros no arbovirus como Alphavirus (sindbis). muy importante la infección en gestantes por posibles aparición de sordera neuro-sensitiva..Flaviviridae (40-50 nm. la incubación dura 14- 21 días. rara vez produce encefalitis o purpura trombocitopénica. virus de RNA mono-catenario con envuelta.Togaviridae (pequeño 40-70 nm. alteraciones cardíacas.

el 3 de bronquiolitis y neumónia en niños (segundo agente después del VRS). todos ellos son causas importantes de enfermedad respiratoria en los niños.con envuelta . B y C (A y B causan epidemias de importancia).los 5 tipos de VPI producen infecciones del tracto respiratorio. el diagnostico es clínico.de polaridad+ . a esta familia pertenece el virus de la inmuno-deficiencia humana VIHque se estudia aparte. Familia Orthomyxo-viridae (de tamaño 80-120nm . infección respiratoria aguda epidémica normalmente durante mes de noviembre-abril. Virus Influenza /la gripe española (empezó en España) .helicoidal . ya que presentan gran variabilidad antigénica segun el serotipo que causa la epidemia (tiene gran poder mutagénico). el de mayor importancia clínica es virus respiratorio sincitial (VRS). los influenza A se subdividen según la diferente composicion antigénica (en la envoltura) de la hemaglutinina y la neuraminidasa.en1918 tras la Guerra Mundial. Familia Retro-viridae (de tamaño grande +/. Pneumovirus(virus sincitial respiratorio) Virus Parainfluenzae (VPI) del genero Paramyxovirus . 1.icosaedrica . 1. el 4 y el 5 causan infecciones mas . siendo el 1 y el 2 los principales causantes de laringo-traqueobronquitis.5. para el diagnostico rápido se usa la inmuno-fluerescencia directa en aspirados naso- faringeos. se realizan campañas de vacunación todos los años (sobre todo a los ancianos y pacientes bronco-pulmonares). la vía de transmisión es aérea. periodo de incubación 1-4 días.envuelta - de polaridad (-) y se ensamblan en el citoplasma) . mato mas personas que la propia guerra. se incluyen 3 géneros Paramyxovirus (virus de la parotiditis/paperas y parainfluenza). Morbilivirus (virus del sarampión). esta compuesta por los distintos tipos de virus influenza/ Gripe (tipo A. B y C).6.abajo (es un eritema maculo papuloso). 1. mas grave en los ancianos.3 días y puede haber enantema palatino.7. dura +/.se ensamblan en el citoplasma) => poseen enzima transcriptasa inversa / retro-transcriptasa. es menos llamativo que de la sarampión.de polaridad (-) y se ensamblan en el citoplasma) => morfológicamente parecida al de anterior/ Orthomyxoviridae. existe un kit con Ags virales para detectarlos. recientemente se introduce metodos de diagnostico de muestras clínicas de antígenos virales. seguido de clínicas tipo respiratorias superior.helicoidal - envuelta . existe 3 tipos => A.100nm . Familia Paramyxo-viridae (de tamaño grande 150-300nm .causan gripe. esputos o biopsia de pulmón.

las infecciones graves se trata con la ribavirina (inhibe la síntesis del ARN viral). orquitis.es la causa mas importante de neumónia y bronquiolitis en niños y recién nacidos. cara rubicunda. primero retro- auricularmente. Virus del Sarampión . Virus respiratorio sincitial (VRS) del genero Pneumovirus .es una enfermedad endémica con incidencia todo el año. aparecerán dolor y tumefacción de retro-parotidia y oído. sube a la fiebre y el exantema tenue se hace muy eritematoso. produce un amplio espectro de infecciones. luego aparece fiebre. se transmite por vía aérea y por objetos introducidos a la boca (dará inmunidad permanente). es rara en niños < 1 año. por lo que al ingresar un niño en el hospital durante 1 o 2 semanas. clínica => tras 24horas de clínica inespecifica.sintomas clínico => los primeros días como un catarro naso-oculo- faringo-laringeo. exantemática. Virus de la parotiditis . gracias a la inmunidad de la madre. el diagnostico es clínico. el diagnostico es por metodos serológicos. pancreatitis o artritis. despues se extiende a todo el cuerpo.suaves. el diagnostico rápido es la inmunofluorescencia en secreciones respiratorias. afecta a niños de 5-14 años. congestión de mucosa y a los 3-4 días aparece "manchas Koplik" (manchas blanquecinas diminutas delante del 1º y 2º molar) dura un par de días. puede haber afectación de nervio facial leve y bilateral. las palmas y las plantas de los pies mas tenue en zonas distales. diagnostico es por vía serológico.causa una enfermedad aguda. complicación => meningitis. tras 2-3 días mejora bruscamente y desapareciendo los signos en el orden del aparecimiento (dará inmunidad permanente). siendo la mas frecuente es el resfriado común con abundante rinorrea. febril. el diagnostico es por metodos serológicos. se contagia por vía respiratoria y conjuntival. VRS es muy contagioso y se manifiesta en forma de brotes invernales. . Es importante que la excreción de virus se mantenga durante 2 o 3 semanas (mas tiempo para los inmunodeprimidos). de gravedad variable que afecta a niños de 5-9 años. la inmunidad no es completa por lo que se dan las re-infecciones (mas suaves). aumento de fiebre. empieza aparecer exantema. puede ser contagioso todavía (es el agente mas frecuente de infección nosocomial en pediatría).

Familia Rhabdo-viridae (de tamaño grande en forma de bastón. después mueren.causa enfermedad infecciosa aguda del SNC. Virus de la rabia .sin . clínica de animales => cambian de carácter. únicamente causan el resfriado común y pueden estar involucrados en cuadros de gastroenteritis.con envuelta . para provocar lo). existen 2 formas epidemiológicas => urbana (lo adquieren perros y gatos no inmunizados) y salvática (los zorros). Familia Corona-viridae (de tamaño 80-130nm . diámetro 70nm y longitud 175nm . irritabilidad creciente y muerden a personas y animales. mueren en 2 semanas. 1. el diagnostico solía realizarse postmortem. Familia Parvo-ridae (de tamaño muy pequeño 18-26nm .helicoidal . mediante la observación de los cuerpos de Negri (cerebro).1. comienza con la alteración del sueño.icosaedrico . dolor de la mordedura. ya que es una zoonosis en la que el hombre es un eslabón irrelevante. ingerir objetos no engullibles autllan con ronca. existe la obligación de vacunar todos los años a perros y gatos.8. clínica de humanos => la incubación 1-3 meses depende del lugar de la mordedura.de polaridad (-) y se ensamblan en el citoplasma) => adquieren su envoltura (con proyecciones a modo de pétalos/ corona solar) en las membranas intra- citoplasmáticas. de gran importancia histórica por los trabajos de Pasteur. pierden apetito.1. se vuelven caprichosos. salivación espumosa y espasmos en las extremidades (basta con pequeños estímulos de luz o ruidos.de polaridad (-) y se ensamblan en el citoplasma) => característica típica de su morfología es forma de "bala".9.escasa importancia en patología. trastornos respiratorios (en la voz). el cuadro normal es de 3-6 días.helicoidal . el mas importante es el causante de la rabia o hidrofobia (se atraganta con el agua). las personas suelen morir por parálisis en pocas horas tras la afectación de bulbo-raquídeo. el virus se propaga por los nervios a una velocidad 1mm/hora. posteriormente aparece espasmos faríngeos tras la ingestión de líquidos o solo de verlo (hidrofobia).envuelta . también parestesias/ hormigueos de la zona. transmitiéndose por mordeduras (son fuentes de infección humana). también se pueden cultivar en laboratorio. 2. VIRUS ADN (bicatenario) 2. normalmente el virus esta presente en la saliva de animales rabiosos.

icosaedrico . Virus Herpes Simple (VHS) .2.producen infecciones latentes que se reactivan con o sin lesiones que sirven de fuente de infección para individuos susceptibles (los virus de Herpes no se cura. todos los virus producen infecciones latentes. el diagnostico se realiza mediante clínicas y técnicas serologícas.resistente al éter) => son unosviruses oncogénicos (efecto cancerígeno). Parvovirus B19 (estaban incluidos en virus Norwalk) . 2.envuelta .3. que se resuelve en 2-4 semanas. costra . en esta familia se encuentra virus hepatitis B que se estudiara a parte.se ensamblan en el núcleo - resistentes al éter) => su envuelta se adquiere en la membrana citoplasmática y se ensamblan en el núcleo. producen enfermedades latentes y crónicas.se ensamblan en el núcleo .se ensamblan en el núcleo . transmitiéndose por vía venérea). los adultos son propensos a artropatía asociada.icosaedrico . 2. Familia Herpes-viridae (de tamaño medio +/-100nm . el diagnostico es de tipo clínico y serológico. Gammaherpesvirus (VEB/Limphocriptovirus). 2. causantes verrugas genitales o condilomas (se asocian a carcinoma de cérvix) ypapilomas (Papilomavirus/ virus Papiloma humano).4.se ensamblan en el núcleo .resistentes al eter) => son de tamaño muy pequeño y son los únicos que presentan ADN de una sola hebra (mono-catenario).icosaedrico - envueltos . es benigna y afecta niños en edad escolar.envueltos . comienza con hormigueo y luego aparecen vesículas. Familia Papova-viridae (de tamaño pequeño 45-55nm . Betaherpesviridae (CMV y Roseolovirus). las infecciones respiratorias solo son significativas en niños <6 años. 2.ADN parcialmente bicatenario . capaces de reactivarse. las plantas y los labios). diagnostico por método serológico y metodos de ELISA. presentan una erupción eritematosa en las mejillas (cara enbofetada) y un exantema en extremidades y tronco (respeta a las palmas.resistente al éter) => producen principalmente patología al tracto respiratorio. Familia Hepadna-viridae (de tamaño pequeño 40-50nm . suele ser bucal.5. algunos tienen importancia en veterinaria y solo destaca uno como patógeno humano (Parvovirus B19).sin envuelta .icosaedrico . existen 2 tipos => VHS-1(tropismo por lesiones por encima de la cintura y suele ser leve) y VHS-2 (se encuentra principalmente en los genitales. destaca 3 subfamilias => Alphaherpesviridae (VHS 1y2.fue vinculado al eritema infeccioso en 1983.sin envuelta . ocular y gastroenteritis. prevención => se vacunan a las niñas de < 14 años.sensibles al éter) => adquiere su envuelta de la membrana nuclear y se ensamblan en el núcleo.se ensamblan en el núcleo . cada individuo tiene un tropismo estable. solo se acantona y se puede reactivar).ADN de tira circular . virus Varicella-Zooster). Familia Adeno-viridae (de tamaño mediano 70-90nm .

pero con gran importancia en huéspedes inmuno-comprometidos. los estadios son => macula . esofagitis. también se transmite por transfusiones o trasplantes. puede producir cáncer cervical. orina. la varicela es mas frecuente en niños y se caracteriza por fiebre y exantema vesicular generalizado. leche materna.pápula . el diagnostico se realiza mediante la tinción de Giemsa de celulas raspadas de lesiones herpéticas. si da clínica va a ser semejante a mononucleosis infecciosa (virus Epstein-Barr). el diagnostico => por serología buscando Acs anti CMV (metodos ELISA). el diagnostico sera tipo clínico y también por los distintos metodos en laboratorio => examen directo previa tinción Giemsa por microscopio electrónica.1 semana. también se cultivan en SHELL-VIAL. neumonitis. Citomegalovirus (CMV) . para observar las características de las celulas gigantes multi-nucleadas. es una infección primaria mientras su re-activación producirá el herpes zóster. adenopatias.la varicela y el herpes zóster representan diferentes manifestaciones clínicas de un mismo virus. característicamente existe estados evolutivos todos mezclado a la vez y prurito sobre todo en el tronco y cara (menos en las extremidades). en paciente inmunodeprimidos es diferente. cultivo en SHELL-VIAL(artificial) ya que no se pueden cultivar en celulas vivas. aparece normalmente en adultos(cuando hay una disminución de la inmunidad) que consiste en una erupción dolorosa circunscrita de lesiones vesiculares. ictericia y sordera. también otras zonas como los ojos. infección a nivel peri-oral. en pacientes inmuno-competentes. acompañada de inflamación de las raíces dorsales de los nervios raquídeos o de los ganglios sensitivos craneales. por serología (ELISA) y por cultivo celular. puede dar retraso mental. VHS-2 normalmente daran infección genital y se contrae por vía sexual. el CMV se ha detectado en saliva. como fiebre. en general estos virus tienen capacidad oncogénicos como VEB (virus Epstein-Barr). es la enfermedad venérea mas frecuente. las infecciones se pueden clasificar en congénitas. peri-natales o pos-natales (antes o después del parto). en mujer gestante se puede transmitir al bebe vía placenta o canal de parto o en los primeros días de vida. en EEUU en ciertas capas sociales.y desaparece en +/.costra. VHS-1 se transmite por secreción oral. en general dará fiebre. es la causa mas frecuente de infección congénita. hepatomegalia. Virus Varicela-Zóster (VVZ) . semen. por lo que su transmisión es variada. normalmente son asintomática. hepatitis.producen infección asintomática. .vesícula - umbilicación . colitis. infección congénita y perinatal.

Viruela se contagia por inhalación y tras 15 días aparece fiebre. se replica en citoplasma y se ensamblan en el citoplasma.Virus de Epstein-Barr (VEB) . mialgias y erupción pápula vesicular dura y luego evoluciona a pústulas y a la curación. 2.6.VEB también se ha asociado a carcinoma naso- faríngeo y al linfoma de Burkitt. . Herpesvirus Humano 6 (HHV-6) .doble membrana) . linfotrópico y oncogénico. tiene tropismo por los linfocitos T.es un virus de muy reciente aparición. provocando exantema súbito.son de tamaño grande 230-400nm.diagnostico => la prueba de Paul Bunnell es la detección de Acs heterofilos y también por método de ELISA. la infección primaria suele pasar en la infancia. aumentando su sero-prevalencia 60-70% en jóvenes y 80-90% en adultos. se ha aislado en síndromes linfo-proliferativos y se ha vinculado alexantema súbito (elevación brusca de la temperatura hasta 40ºC de 2-4 días. adenopatias. seguida de un descenso rápido que coincide con la aparición de un exantema maculo-papular que persiste 1-2 días. el mas importante es el virus de la viruela.se descubrió en 1989 (reciente). el diagnostico sera clínico y serológico. se investiga si tiene relacion con síndrome de fatiga crónica (que lo padecen sobre todo mujeres mayores). Herpesvirus Humano 7 . .el síndrome clínico mas frecuente es la mononucleosis infecciosa (enfermedad de beso) que presenta fiebre. con forma de ladrillo.es uno de los virus humanos masubicuos. faringitis y linfocitosis con linfocitos atípicos. virus de Moluscum Contagiosum y virus de la Vaccinia. a veces puede provocar muerte por exantema hemorragica o una sobre infección bacteriana. Familia Pox-viridae (ADN bicatenario .

. desaparece entre 2 meses y 1 año. en individuos inmunodeprimidos puede provocar complicaciones. aparece en epidermis lesiones nodulares blancas de aspecto nacarado de 2-10 mm que son indoloras. Herpes simple y VIH. pero en los inmuno- competentes es auto-limitado.. es importante en los principios de la vacunación (Jennen). con lo cual tendríamos Acs contra estos virus. contagiosa que pueda adquirir por compartir objetos o contacto sexual. cualquier traumatismo provoca su contagio. Esquema de Virus Respiratorio .Virus de Moluscum Contagiosum - provoca enfermedad cutánea benigna.Virus de la Vaccinia es muy próximo al virus de la viruela. ya que su genoma es susceptible de poder insertarle secuencias de genes que codifiquen proteínas de otros virus y que se expresarían posteriormente cuando el virus se replique. últimamente se investiga su utilización como vector para actuar como vacuna contra virus de Hepatitis B.

dolor de cabeza o dolor en epigastrio y aumento de las transaminasas (GPT. en general.C. denominados A. la mayoría de infecciones son aguda sin cronificarse (<1% fulminante). el método más utilizado es ELISA detectando Acs IgMVHA en su fase aguda. sin envuelta.HEPATITIS VIRAL . virus ARN de la familia Picornaviridae (de pequeño tamaño 20-30nm.es una enfermedad sistémica que afecta fundamentalmente el Hígado. VHC. se encuentra en las heces durante el periodo de incubación (hasta 2 semanas). polaridad+) dentro del género Enterovirus. VHE y VHF (2) transmisión parenteral y pueden cronificar: VHB.se disemina por la ruta fecal-oral (estrecho contacto persona- persona) con la implicación de agua y alimentos que pueden causar brotes epidémicos. se pueden clasificar según la principal vía de transmisión y la tendencia a la cronicidad en 2 grandes grupos(1) transmisión fecal-oral y no cronifican: VHA.D. el tipo 72. se observó el virus por la primera vez por Feinstone en 1973 y es cultivable.aislado en 1973. icosaédrica. otras vías de transmisión del virus son posibles pero poco probables. existen además otros virus que producen hepatitis. con un pico en otoño. IgM suele durar 6 . a continuación suele aparecer fiebre. Transmisión . pero que tienen todos un tropismo hepático (no tienen relación taxonómica). anorexia. la infección es asintomática y la gravedad aumenta con la edad. Diagnostico – requiere la confirmación del laboratorio. pero se utiliza la serología basada en la respuesta inmunitaria. ictericia. existe casos durante todo el año. Sintomatología clínica – suele ser menos grave que la hepatitis B.B. se conocen 7 virus de la hepatitis. comoCitomegalo virus y el virus de Epstein-Barr. mialgias.F y G que pertenecen cada uno a familias y géneros distintos. Virus de la Hepatitis A (VHA) . la mayor excreción del virus en heces se da en las semanas previas a la aparición de la ictericia. GOT) y hepatomegalia. fatiga. también se pueden detectar Ags virales en heces (detectar Acs total de IgG y IgM no tiene utilidad clínicamente). sobre todo en la fase tardía de la incubación. VHD y VHG. pero se sospechó mucho antes. el periodo de incubación 20-45 días.E.

IgG confiere inmunidad y la mayor parte de nuestra población de >40 años los tienen.El virión completo se denomina partícula de Dane. 6 meses y al año (3x). Infección por VHB – la mayoría son sub-clínicas/ asintomática (50-80%) y solo se detectan en controles serológicos. cloración y nivel higiénico-sanitarias. no es necesario el estricto aislamiento del paciente mientras se mantiene las medidas de desinfección- esterilización. -Ag soluble => HBeAg que induce al HBeAc (HBeAg es el marcador de pronóstico de la enfermedad. ya que existen formas incompletas en sangre (como p. HBsAg). Estructura – se distinguen una serie de estructura del virus que dan lugar a losmarcadores serológicos: -Ag de superficie => HBsAg o Ag Australia (marcador de infecciosidad. -Ag del core o nucleo-cápside => HBcAg codificado por el gen C que no se detecta en sangre pero si su HBcAc (marcador epidemiológico que se mantiene de por vida). de gran importancia socio-sanitaria y distribución mundial (250 millones portadores asintomático– 1% desarrollan cirrosis hepática o carcinoma hepato-celular que son complicaciones más importantes). la mayoría de las infecciones sintomáticas son auto limitadas y se resuelven en menos de 6 meses (Hep. ya que se correlacionan con el nivel de replicación del virus. . Virus de la Hepatitis B (VHB) – es un virus ADN de la familia Hepadnaviridae (ADN parcialmente bicatenario. por la administración de la vacuna de la viruela que contiene suero humano. inmunización activa=> existe una vacuna con buenos resultados (virus inactivados) que se pone al mes. IgM-HBcAc se detecta como marcador más fiable de hepatitis B aguda. la lesión hepática puede ser nula o leve o llegar a casos de hepatitis fulminante (> de 6 meses se pueden cronificar). un . lasintomatología clínica es similar a la de Hepatitis A. -Además se distinguen su genoma ADN y una polimerasa. Prevención – las medidas más importantes son la higiene personal. en 1965 Blumberg descubrió el Ag Australia y se identificó el virus. inmunización pasiva => se dispone una inmunoglobulina eficaztanto para profilaxis pre-exposición (se estudia la relación coste-eficacia antes de utilizarla/ solo si viajan a zonas endémicas) como post-exposición. HBeAc es unmarcador de buena evolución). lavado y desinfección de manos y objetos contaminados. hasta la fecha no se han descrito casos de cronicidad. primeros casos se describieron en 1833 en Bremen (Alemania). resistentes al éter).meses.aguda).ej. codificado por el gen S) que induce a la formación de HBsAc o anti-HBs que confiere inmunidad. icosaédrica con envuelta. pero hasta los años 40-50 no se distinguió de la hepatitis A.

Marcadores en la infección aguda auto-limitada (en el orden de aparición): -HBsAg (aparece antes del 1º mes y desaparece antes de 6º mes) -HBeAg (aparece el 1º mes y desaparece antes del 3º mes) -DNA viral (aparece después del 1º mes y desaparece al 3º mes) -Anti HBc (aparece entre 1º-2º mes. la existencia de HCP presenta un reservorio estable para el virus y asegura su supervivencia indefinida que se detecta en líquidos corporales (sangre. lagrimas. . entre 5-10% de las infecciones se hacen persistentes y se mantiene de por vida (como portador asintomático o sintomático). Epidemiologia – existen áreas hiper-endémicas. heces. en la mayoría de ocasiones la función hepática y la histología son normales. leche materna. liquido sinovial y sangre de cordón). secreciones vaginales. es un virus muy contagioso cuando hay exposición parenteral. orina. LCR. existe inmunización pasiva(gammaglobulina hiper-inmune eficaz en situaciones de pre y post- exposición ) y inmunización activa (vacuna de HBsAg que se administra universalmente a 0-1-6 meses que produce respuesta inmunitaria de 90-95%). el único reservorio importante es el hombre que transmite el virus por contacto íntimo (vía sexual. Anti-HBc IgM desaparece antes del 5º mes => Hepatitis aguda) -Anti HBe (aparece al 3º mes) -Anti HBs (aparece antes del 7º mes) Prevención – es la medida más eficaz para combatir la infección. bilis. pero en otras ocasiones dan lugar a síndromes hepatitis crónica persistentes (HCP) y hepatitis crónica activa (HCA). HCP es menos progresiva que HCA (puede ser más grave y desembocar en cirrosis). parenteral y vertical-perinatal) y mediante objetos personales o materiales de hospitales (familiares y personal sanitario corre un mayor riesgo). sudor.periodo de incubación es de 1-6 meses. semen. endemia media y baja (España está en baja).

es la causa más frecuente de hepatitis post-transfusional. cuando no hay marcadores de replicación => puede evolucionar a la curación. el curso es indolente y prolongado. re resuelve también la de VHD. clínicamente la hepatitis es más grave y la tasa de hepatitis fulminantes es mayor (hasta 20%). es un virus ARN incompleto /defectivo que requiere HBsAg para su replicación (adquieren su envuelta del virus B y si no hay infección de por VHB no la hay por VHD).aunque se sospechó desde hace mucho tiempo) del que quedan aún muchos interrogantes por resolver. Infección por VHC – se diseminan fundamentalmente por la vía parenteral. Prevención – tratar todo tipo liquido corporal como potencialmente infeccioso. Tipos de infección: 1-Coinfección => infección simultáneamente por ambos virus (VHB y VHD). es un virus del tamaño medio dentro de la familia Flaviviridae (virus ARN icosaédrica pequeño de tamaño 40-50nm con envuelta. al resolverse la infección de VHB. 25% cursan conictericia y la tasa de mortalidad es <1%. el core (C) y otras no estructurales (NS). es frecuente las recurrencias.Virus de la Hepatitis D (VHD) – descubierto en 1977. de polaridad+ y sensibles al éter). 2-Sobreinfección => cuando el VHD sobre infecta a portadores crónicos de VHB. se puede transmitir por contacto sexual o convivencia con portadores (menor importancia que Hep. El pronóstico de VHD depende de marcadores de replicación del virus (anti-HBe) => puede acabar en hepatitis crónica o cirrosis. la clínica es similar a la de la hepatitis B. aquí sise modifica el curso natural de VHB y la mayoría de las sobreinfecciones (70%) desembocan en hepatitis crónica y acaban en cirrosis entre 15-20 años. 50-70% tienden a cronificar y 20-25% acaban desarrollando cirrosis. porque la sensibilidad de las técnicas más utilizadas . en actualidad se sabe que VHC es responsable del 80-90% de los casos de hepatitis post-transfusional y del 20-50% de los hepatitis esporádica. el inicio no es muy brusco. un paciente con VHC negativa no significa que no lo padece. pacientes en diálisis y hemofílicos. Virus de la Hepatitis C (VHC) – es de reciente descubierto (1988 . todavía no se dispone inmuno-profilaxis. el curso natural de VHB no se modifica.B). se distingue regiones para la envoltura (E). hepatitis esporádica y ampliamente distribuido entre ADVP (adicto a la droga de vía parenteral).

con envuelta de polaridad+). más grave en gestantes del 3º trimestre del embarazo (mortalidad de 20%). de polaridad+). Virus de la Hepatitis G (VHG) – se transmite por vía parenteral. se encuentra en las heces durante el periodo de incubación (hasta 2 semanas). provoca aisladamente un cuadro benigno. el curso es corto y parece ser que se puede transmitir parenteralmente. el virus todavía no está catalogado. pero no transfusional-mente. clínica => aunque no se cronifica al igual que VHA. se parece más a los calcivirus da la familia Calciviridae (virus ARN icosaédrica de tamaño pequeño 35-40nm sin envuelta. Virus de la Hepatitis E (VHE) – se descubrió en 1983 y es responsable de la epidemias por transmisión fecal-oral en India. África del Norte y Méjico (países de baja salubridad). existen evidencias de que VHC puede estar implicada en cáncer hepático.no es 100% fiable. si se sufre un accidente en el laboratorio o en la práctica clínica con sangre anti-VHC+. Virus de la Hepatitis F (VHF) – se transmite por vía entérica (fecal-oral) SEROLOGIA DE LAS HEPATITIS VIRICAS (1993) Marcadores serológicos para el diagnóstico de la hepatitis A – la mayoría de infecciones son aguda sin cronificarse (<1% se fulmina). pero puede dar una coinfección con el VHB y VHC con mayor tendencia a la cronicidad. . tiene un pronóstico peor (la mortalidad 1- 2%). esta relacionado con virus de la familia Flaviviridae (virus ARN icosaédrica de tamaño pequeño 40-50nm. la habitual vía de transmisión es a través del agua de bebida. Paquistán. su detección con fines diagnósticos no se emplea rutinariamente. se debe realizar un protocolo de seguimiento serológico de la persona.

-Ac anti-HBe => es el 5º marcador. persiste durante mucho tiempo neutralizando al virus y confiriendo protección.Ac anti-HBc => Ag HBc pertenece a la cápside y no se detecta serológicamente. por el contrario. el VHB-DNA es positivo en un elevado número de pacientes HBeAg (+).-Ac Anti-VHA IgM => siempre es positivo en el inicio de la sintomatología clínica (hasta 3-6 meses).a los 3 meses de su evolución). -Ag e (HBeAg) => es parte del Ag core. en la fase aguda de la enfermedad y en el estadio crónico. -DNA viral libre (VHB-DNA) => es el 3º marcador. -Ac anti-HBs => es el indicador de recuperación de la enfermedad y el ultimo en aparecer(+/. a pesar de tratarse de un marcador muy sensible tanto de la presencia del virus como de su actividad replicativa. solo se detecta Anti-HBc. es indicio de mal pronóstico y de evolución a la cronicidad. se usa como marcador de infección aguda. debido a que los hepatocitos fabrica un exceso de estos. es el 1º Ac que aparece en la enfermedad. . su aparición indica buena evolución y una baja infectividad del paciente. una parte es liberada a la sangre y puede ser detectada durante el periodo de incubación (es el 1º marcador que aparece. si la evolución es favorable desaparecerá a los 3-6 meses de la enfermedad. en Ag viral es detectado solamente en el hígado y no se utiliza para el diagnóstico. en la mayoría de los casos es detectable poco antes de que desaparezca HBsAg. sino en el virus entero. proteolíticamente degradado y antigénicamente diferente. la determinación cualitativa y cuantitativa de ciertas proteínas virales (Ags) y de los Acs nos sirve para evaluar la situación actual y pronosticar el futuro de la infección. su detección en el suero mediante la hibridación no es una técnica de rutina. ya que no se encuentra libre. detectable en la fase aguda y en algunas formas de enfermedad crónica en las que histológicamente se corresponde con hepatitis crónica activa (HCA). -Ag de superficie HBs Australia (HBsAg) => se sintetiza en el citoplasma del hepatocito. incluso 2-6 semanas antes de que aparezca los síntomas. aunque pueda haber de 5-10% de hepatitis aguda sin este marcador). detectable con los primeros síntomas de la enfermedad en la fase aguda y en la crónica (entre 3-5 semanas después de Ag Australia y es el 4º marcador en hacerse positiva). en los individuos vacunados es el único marcador presente. la cirrosis o forma fulminante fatal). su estudio es obligatorio en todos los sueros de HBsAg (+). -Ac Anti-VHA IgG => su presencia demuestra un contacto previo con el virus (se mantiene durante largos periodos de tiempo). si se mantiene más de 6-8 semanas después o si no existe una disminución significativa de su título. es el 2º marcador. la sangre con HBeAg (+) se debe considerar como infecciosa. . pudiendo encontrarlo (+) durante varios años después de la infección. Marcadores serológicos para el diagnóstico de la hepatitis B – la evolución clínica es variable (desde asintomática y anictérica hasta una enfermedad aguda que se puede complicar hacia la cronicidad. es evidente su relación con el carcinoma hepato-celular. puede significar una infección pasada o curada dada la larga persistencia de estos Acs en el suero (su positividad confirmada en solitario no asegura la protección frente a la enfermedad). su valor clínico se funda en su excelente correlación con la presencia de replicación viral y viremia.

Anti-HBc IgM (-) y Anti-HD IgM (+) 4º. -La presencia simultánea de anti-VHD IgM y anti-HBc IgM asociada a hepatitis aguda => se considera diagnostica de coinfección aguda por ambos VHB y VHD. DIAGNOSTICO DE LA INFECCION A-Hepatitis Aguda Marcadores de rutina (los que se suelen pedir al laboratorio): VHA => anti-VHA IgM VHB => HBsAg o Ag Australia y HBc IgM VHC => anti-VHC (totales) VHD => anti-VHD IgM (en pacientes ADVP) Criterios generales de interpretación: -La presencia de anti-VHA IgM => es diagnostica de infección aguda por VHA.RNA Viral (HD-RNA) => la positividad por técnicas de hibridación o PCR indica presencia del virus.Anticuerpos Anti-Delta IgG (Anti-HD IgG) => aparecen más tardía y se mantiene positivo durante largos periodos de tiempo. Marcadores serológicos para el diagnóstico de la hepatitis C -Anticuerpos Anti-VHC => se detecta empleando Ags sintéticos o recombinantes. Esquema evolutivo: -Coinfección de VHB y VHD = Ag Australia (+). pruebas confirmatorias de Acs Anti-VHC => se detectan por método Western Blot para ver las bandas. Marcadores serológicos para el diagnóstico de la hepatitis E – se están comercializando pruebas que detectan Ag y Acs específicos (IgG y IgM) mediante técnica de ELISA. su detección indica solamente contacto con el virus. -La presencia de HBsAg y anti-HBc IgM => es diagnostica de infección aguda por VHB.Anticuerpos Anti-Delta (Anti-HD IgM) => es el marcador más importante que aparece después de la aparición del Ag y se mantiene positivo a bajos títulos a un tiempo limitado si la evolución es favorable. 3º.Antígeno delta (HDcAg) => aparece fugazmente en sangre en la primo infección y su utilizad clínica es muy limitada. persistirá su positividad a títulos altos en casos que evolucionan a la cronicidad. la presencia de anti-VHD IgM y HBsAg en ausencia de anti-HBc IgM => indica sobre . Anti-HBc IgM (+) y AntiHD IgM (+) -Sobre infección de VHD en paciente con VHB = Ag Australia (+). 2º. -RNA viral (VHC-ARN) => no se suele hacer porque la epidemia es corta.Marcadores serológicos para el diagnóstico de la hepatitis D 1º.

infección por VHD en un portador crónico de VHB. -La seroconversión de anti-VHC es un criterio fiable para un diagnóstico de infección aguda por VHC (cambio de negativo a positivo). es suficiente para establecer la presencia de anti-VHC en pacientes con hepatitis crónica. ya que la viremia es intermitente en muchos casos. entre los ADVP crónicamente infectados por VHB (positivos para HBsAg). dado el alto costo de métodos de confirmación de anti-VHC. VIH o SIDA Descubrimiento del virus – se sospechó desde 1981 en 5 casos de neumonía porPneumocystis carinii en varones homosexuales previamente sanos y va aumentando el número de casos y se fue asociando esta inmunodeficiencia . la detección de ARN viral en suero mediante PCR ayuda a establecer el diagnostico. se considera que una re comprobación del resultado positivo mediante un segundo método de cribado (método screening con técnica de ELISA) que utilice Ags obtenidos por tecnología diferente. no parece recomendable la búsqueda rutinaria de la infección delta en pacientes ADVP. la seroconversión suele retrasarse mas de 3 meses desde el comienzo de los síntomas. es frecuente que los ADVP se hallen crónicamente infectados por uno o más de dichos agentes en un episodio de hepatitis aguda. B-Hepatitis Crónica Marcadores de rutina: VHB => HBsAg y anti-HBc total (IgM + IgG) VHD => anti-VHD total (en pacientes ADVP positivos para HBsAg) VHC => anti-VHC Criterios de interpretación: -La presencia de HBsAg y anti-HBc total asociada a hepatitis crónica => es diagnostica de hepatitis B crónica. no se ha demostrado que la detección de anti-HVC IgM sea de utilidad en el diagnóstico de la hepatitis C aguda. aunque no es un diagnostico seguro. -La presencia de anti-VHC asociada a hepatitis crónica => es altamente indicativa de hepatitis C crónica. En cualquier caso. pero un resultado negativo aislado no lo descarta. por lo que requiere el estudio de muestras de seguimiento al menos hasta el 6º mes. la presencia adicional de anti-VHD total => indica una sobre infección crónica por ambos VHB y VHD. Criterios de interpretación en pacientes ADVP – las tasas de seropositividad para VHB (anti-HBc total) y VHC (anti-VHC) en individuos ADVP superan el 80%. dada la situación epidemiológica actual en España. la seropositividad para VHD (anti-VHD total) se aproxima a dicho porcentaje. resultando imposible precisar su etiología.

el ciclo biológico se resumen => .adquirida al sarcoma de Kaposi. el virus se une principalmente a receptores CD4 gracias a gp41 y gp120. 120 y 160 -POL (Polimerasa) => es importante b) Reguladores => genes que regulan la replicación viral y el papel de todos ellos no está completamente dilucidado Patogenia – en la infección aguda. a los macrófagos. a continuación el ARN se copia a ADN por acción de la transcriptasa inversa. mediante una retro- transcriptasa. latencia o crecimiento es clave de la patogenia de la enfermedad. en febrero del mismo año Montagnier expone la hipótesis de un retrovirus linfotropico pudiera ser el agente causante del síndrome. sus principales genes son: a) Estructurales: -Gen GAG (Core) => proteínas 24 -ENV (Envoltura) => glicoproteínas 41. El virus – es un virus ARN de la familia Retroviridae. esta familia de virus se caracteriza por sintetizar ADN a partir de ARN viral. a las células cerebral. por lo tanto. sus células diana fundamentalmente son los linfocitos T4 (aunque también se unirá a los linfocitos B que tiene CD4. en Mayo de 1983 se aislo por primera vez el virus por Montagnier en Francia a partir de un ganglio linfático de un paciente con linfadenopatia persistente (LAV) y Gallo en EEUU de un enfermo de SIDA (HTLV-III). es importante saber que la respuesta inmunitaria en forma de Acs frente al virus se puede demorar 6-8 semanas (periodo de ventana +/. y a los precursores de hematíes). este episodio se manifiesta como un cuadro pseudogripal. consta de nucleo-cápside y envoltura. se pone en circulación y se integra en el ADN de la célula (periodo de latencia). normalmente la fase de latencia se prolonga durante periodos largos de tiempo (2-8 años incluso más).3 semanas). es muy sensible a los agentes químicos y calor. subfamilia Lentiviridae(=incubación lenta >10 años) con tipos 1 y 2. pero en un momento dado puede progresar la enfermedad con un progresivo deterioro de la inmunidad hasta desarrollar el SIDA. en junio de 1982 se contabilizaron 439 casos y en EEUU se emite un informe para definir los casos de SIDA.

a diferencia de Francia o EEUU. eritema. el VIH se multiplica a gran velocidad. adenopatías y sensación de mal estar. (2) fase asintomática que puede durar 10 años o incluso mas. el estudio de la evolución de SIDA puede realizarse por las manifestaciones clínico que van apareciendo o por marcadores bioquímicos (el descenso de la cifra de linfocitos T4). (4) fase avanzada en la que aparecen infecciones y tumores. durante esta fase. causando destrucción progresiva del sistema inmune. Fases de la enfermedad (1) fase de la infección aguda => la mayoría de los pacientes experimentan al cabo de unas 3 semanas de haber infectado con el virus una serie de síntomas pseudogripales como fiebre. el virus continua replicándose. durante este periodo. apareciendo infecciones oportunistas de carácter leve p.ej. se suele iniciar el desarrollo del síntoma clínico característica de la enfermedad. de tipo bacterianas => Mycobacterium. algunos hongos => Aspergillus yCándida. cefalea. Legionella. debido a la acción directa del virus sobre SNC. Epidemiologia – las vías de transmisión del virus => por sangre. puede complicarse con un cuadro neurológico (demencia del SIDA) con alteraciones motoras y del área cognitiva. pero dentro de poco alcanzan las cifras normales en respuesta de una activación del sistema inmunológico. esto hace que se destruye los T4. cobrando una especial importancia en África. Herpes zoster. (3) fase sintomática precoz. donde los mas afectados son homosexuales. Cryptosporidium. de tipo viral => CMV. durante esta fase. infestación de parásitos => Pneumocystis carinii. sexual y vertical-perinatal. Sintomatología clínica de SIDA – desde que una persona se infecta hasta que se desarrolle la enfermedad. definitorios del SIDA(sarcoma de Kaposi) que además. en un primer momento se produce un descenso de la cifra de linfocitos (total).2% y requiere contacto con mucosas de la sangre o liquido corporal infeccioso (o también de líquidos donde se haya cultivado al virus). en España la tasa de transmisión por sangre es importante (el principal grupo afectado son los UDVP/ ADVP y homosexual). desaparecen después de 1-2 semanas.Entrada de virus – transcripción de ARN al ADN – integración en la genoma de T4 – formación de nuevos viriones tras periodo de latencia (al salir. a partir del 1996 la determinación de la cantidad de virus circulante en la sangre de la persona infectada (carga viral) se ha convertido en principal marcador de la evolución de la enfermedad. la transmisión al personal sanitario o similar es 0. el recuento de los linfocitos es normal. el virión tomara en su salida parte de la membrana celular para utilizarla como su envuelta. en cuanto a las tasas de transmisión madre-hijo oscilan 15-50%. se paraliza el sistema inmunológica y acaba provocando el SIDA. suele transcurrir 6-10 años. la supervivencia media de los . los individuos son altamente contagiosos durante esta fase.

-Negativo => ausencia de banda o que no se corresponde a ninguna del virus (a estas personas se hace un seguimiento durante 6 meses. en ningún caso habrá supervivencia cuando están en esta fase. aplicando a los positivos. tras cual se revela la presencia de Acs frente a diferente proteínas del virus mediante diferentes técnicas inmuno-enzimáticas dependiendo del fabricante. -Indeterminados => se detecta la presencia de alguna banda frente a alguna proteína del virus (solo algunas proteínas del core en pacientes con lupus y factor reumatoide). la lectura puede hacerse de manera manual. CDC. **) El Western Blot es más utilizado y permite diferenciar los Acs frente a las distintas proteínas del virus. Cruz Roja) y los resultados se clasifiquen en: -Positivos => lo más aceptado es que haya bandas de envoltura (g41. se realiza mediante técnicas de ELISA en primera instancia (técnica de cribado). las de CD8 600-900 linfocitos/m3 de sangre. cuando la cifra de CD4 disminuye por debajo de las 200- 400 linfocitos/m3 de sangre. la cifra de CD4 900-1500 linfocitos/m3 de sangre (en valores relativos 35-45%). será indicativo de SIDA. comparando las bandas con un control (+) o de manera automatizada por densitometría. dependiendo del tipo de infección que tenga. tiene distintos criterios para la interpretación de los resultados (OMS. p31 y p66) o de la polimerasa o de ambos. por la importancia y las implicaciones que conlleva.pacientes con la SIDA ya desarrollado suelen ser 18-125 semanas. La técnica de WB consiste básicamente en la incubación de unas tiras de nitrocelulosa en los que sean transferido las proteínas de los virus. inmunofluorescencia (IFI) o radioinmuno-precipitacion (RIPA). básicamente las estructuras con el suero del problema durante un tiempo que oscila 2-4 horas hasta los 18 horas. métodos de confirmación => Western Blot (WB). para descartar que no sean falsos negativos). Diagnóstico de laboratorio de la infección por VIH – en España fundamentalmente serológico. gp120 y gp160) y además bandas del core (p24. . recordar en valores absolutos. el resultado será la aparición de bandas coloreadas de mayor o menor intensidad en el lugar de la tira donde están situadas las proteínas de VIH contra las cuales existen Acs en el suero del problema.

b) Microscópia => con la Microscópia óptica solo se puede identificar los cambios celulares (efecto citopático) sufrido por las celulas infectadas y con la Microscópia electrónica se puede visualizar el virus (en laboratorios de experimentación). porque se ha de hacer mediante la detección de sus componentes. . por las características físicas y biológicas del virus. presencia de sangre. *) Marcadores de monitorización o seguimiento de la enfermedad (detección del Ag p24). etc. acortando el periodo de ventana. *) Las técnicas de centros especializados => cultivo y PCR. el que más se utiliza para un diagnóstico de SIDA es el recuento celular de los linfocitos CD4 o T4 (o el cociente respecto a los T8). *) También existen métodos rápidos. siendo lo más novedoso los de 3ª generación con capacidad de detectar IgG e IgM. moco. pero no están al alcance de la mayor parte de los laboratorios. . Ags o ácidos nucleicos).Dº indirecto (la identificación de los componentes de la respuesta inmune especifica/Acs generados).*) Los métodos de cribado (ELISA) son más sensibles y más específicos. se puede observar el declinar de los Acs anti p24 que se pueden utilizar con el mismo fin. aplicables en situación de urgencia como la aglutinación con partículas de látex o los que utilicen Ags fijados a soportes solidos o membranas (se llama Dot-Blot). una importancia aplicación de estas técnicas es el diagnostico de hijos y madres portadoras del VIH. en fases tardías.ej. p. la PCR es una técnica con mucho futuro que presenta una enorme sensibilidad y especificidad. MÉTODOS DIAGNÓSTICOS EN VIROLOGÍA CLÍNICA Objetivo de laboratorio . de manera simultanea se intenta practicar 2 tipos de diagnostico => . *) De todos modos.Dº directo (visualizar o aislar el germen mediante el cultivo e identificarlo => en virología clínica no es posible.proporcionar el diagnóstico etiológico y orientar correctamente el tratamiento en el menor tiempo posible. Metodos de diagnostico directos: a) Examen directo de la muestra (macroscópica /a simple vista) => aspecto purulenta (en una infección viral nunca hay pus).

se originan de tejido maligno o por mutación de una célula diploide. tipos de cultivos celulares: *) cultivos primarios => es el primer pase in vitro.los virus al multiplicarse provocan cambios en la célula donde se replican que se manifiesta por una modificación en la morfología celular que se pueden observar (p. la ventaja => la rapidez de obtención de resultados en 24-48 horas. por ello debemos preparar previamente un soporte celular que permita su crecimiento in vitro mediante siguientes técnicas: . porque inoculamos el mismo volumen de muestra en un área mas pequeña y mas fácil la observación al microscopio de fluorescencia. herpesvirus. detectamos los Ags a las pocas horas de iniciarse la infección. virus sincitial respiratorio (VRS) mediante secciones de tejido respiratorio.cultivos celulares => celulas aisladas obtenidas por disociación mecánica y con enzimas proteolíticas a partir de tejidos. las celulas se multiplican hasta que cubran la pared formando una capa continua de crecimiento sobre las que se podrán replicar los virus del problema. conservan el numero de cromosomas (46) y con ventaja de que se mantiene durante mas tiempo que cultivo primario. adenovirus o poxvirus tienen como efecto citopático la destrucción o lisis celular en 24-48 horas.ej. Efecto citopático . Identificación del crecimiento en el cultivo celular . tiene una sensibilidad superior al cultivo celular. las celulas se siembran en un frasco con medio de crecimiento. el método se basa en la centrifugación (suave) de la muestra sobre la mono capa.ej. hinchazón del citoplasma.ej. *) Shell-vial => es una técnica de cultivo celular que se ha desarrollado en los últimos años y que permite obtener el crecimiento de numerosos virus y ciertas bacterias en un corto periodo de tiempo (24-48 horas). las celulas disociadas y separadas se colocan en un frasco de cristal o de plástico. las celulas se adhieren a las paredes del frasco y se cubren con medios nutritivos para mantenerlas viables. embrión de pollo). formación de celulas gigantes multi-nucleadas) en la célula sin teñir o teñidas (se ve mas detalladas). . y tras un corto periodo de incubación se pone de manifiesto la expresión de los Ags virales en la mono capa mediante tinción inmunológica. lineas celulares Hep-2 y Vero). tienen un periodo de vida corto y permiten el crecimiento de gran variedad de virus (p. *) lineas celulares continuas => se cultivan in vitro indefinidamente y tiene un cariotipo heteroploide (numero menor que las celulas somáticas). enterovirus.2 ml de la muestra problema. cada virus presenta un tipo de efecto citopático característico que puede ser identificado en menos de 1 semana (p. y sobre ello se coloca 0. .las mas frecuentes y disponibles en el laboratorio: 1). *) lineas diploides => son celulas de un solo tipo (somáticas) que se pueden cultivar durante un tiempo limitado.cultivo de órganos => las secciones de algunos órganos pueden ser viables varias semanas y nos permiten cuidadosamente aislar por ej. el cultivo se multiplican de forma indefinida y suelen presentar aberraciones en el numero de cromosomas.ej. tomados directamente de un organismo vivo.c) Cultivo => los virus se multiplican exclusivamente en el interior de las celulas vivas. conservan el numero de cromosomas. celulas del riñon de conejo y mono. en condiciones optimas. inclusiones dentro de las celulas.cultivo de tejidos => fragmentos de tejidos en suspensión (cultivar adenovirus en untejido adenoideo) . estas celulas se pueden mantener a -70ºC o -90ºC indefinidamente (p. sobre un vial se coloca una mono capa de celulas con 1ml de medio de crecimiento.

de los Ags virales mediante Acs específicos para los cuerpos de inclusión celular.aves. carnero). etc. con este fundamento se colocan las soluciones de Acs conocidos y del Ag problema en unas cavidades realizadas en un gel de agarosa de tal manera que puedan difundir libremente. sera fácil detectarlos) son: . frotis faríngeo. sensible. Detección mediante metodos inmuno-enzimáticos o por inmunofluorescencia.es la capacidad que adquieren las celulas infectadas por un virus para adherir a su superficie los hematíes de diversas especies (p. se pueden conservar a 4ºC durante 24 horas y si no. cuando se aplica una corriente eléctrica. se forma una banda de precipitación visible. d) Detección de los componentes estructurales virales . que mantiene la capacidad de canalizar la reacción Ag- Ac.Contra-inmunoelectroforesis => esta basada en el principio de que los Ags virales (o bacterianos en su caso) suelen tener carga (-) y los Acs (+).Enzimoinmunoensayo => se basa en la detección de Ags mediante el empleo de un Ac unido a una enzima. cada virus produce unos cuerpos de inclusiones característicos.la fusión celular/ formación de sincition son característico de herpes virus. los Acs son arrastrados por el buffer levemente alcalino y. Hem-adsorción . el enzima utilizado puede ser peoxidasa de rabano. en medio alcalino. Formación de cuerpos de inclusión . Hem-aglutinación .las técnicas mas usadas que permiten detectar Ags en suero y líquidos orgánicos (cuando existe una alta concentración viral. es una técnica sencilla.ej. etc. las muestras que se utilizan con mayor frecuencia son secreciones nasales. re-producible y barata. es una técnica de alta sensibilidad pero laboriosa. Las muestras para el aislamiento de virus se deben recoger lo antes posible. raspados de piel. . virus herpes zóster.) 2). se colocan unas mechas en los extremos de la capa de agarosa. 3). 4).Aglutinación en látex => a las moleculas de látex se les une varias moléculas de Acs conocidos y cuando se pone en contacto con una solución que contiene el Ag (la muestra problema) se origina una aglutinación que puede visualizarse. se deben congelar a -70ºC porque muchos virus son lábiles a -20ºC. 5). . líquidos vesiculares. en el citoplasma o en ambos y se clasifican según su tinción en eosinófilos o basófilos. orina. heces. por la formación en su membrana de este tipo de proteínas. Beta-galactosidasa o fosfatasa alcalina.son cambios histológicos que se producen en las celulas por los componentes virales o por variaciones en las estructuras celulares. las moléculas de Ags con carga (-) migran hacia el ánodo que esta en el extremo opuesto de la placa. LCR. no después de los 3-7 primeros días del inicio de la enfermedad. pueden localizarse en el núcleo. las hemaglutininas. exudado conjuntival. Su sensibilidad dependerá de la pureza del Ac utilizado. que precisa una alta concentración de Ag y Ac. la presencia del inmuno-complejo es detectada por una reacción coloreada que se produce al añadir el sustrato. CMV.la capacidad que adquieren las celulas infectadas por el virus de aglutinar diversos tipos de hematíes. el empleo de enzimas tiene una serie de ventajas: *) el enzima se une al Ac pero deja libre los lugares de unión al Ag . que conectan con unas cubetas que contienen un buffer con una composicion diferente dependiendo del sistema Ag-Ac. en el punto en que ambas lineas se encuentran.

en este caso un portaobjetos. rodamina. esta técnica nos permite demostrar no solo la reacción Ag-Ac.). núcleo. europio. La reacción tiene lugar en 2 fases => en la 1ª. isocianato de fluoresceina.).Inmunofluorescencia directa (IFD) => el Ag unido a una fase solida. se lava para eliminar el exceso de Acs y se observa al microscopio de luz ultravioleta.Radioinmunoanalisis => tiene el mismo fundamento que el ELISA. pero es mas costosa y se necesita trabajar con material radioactivo. al agregarle la muestra que puede contener los Ags.ej. es una técnica que necesita varias horas para su realización. es una técnica con la misma sensibilidad que el ELISA. . y lo que se mide en ultima instancia es la radiactividad que estará en proporción directa a la cantidad de Ag que había en la muestra problema.en unos pocillos sobre los que se ha fijado un Ac especifico. sino también la localización exacta donde se produce (superficie celular.. "de visu". en la 2ª. lo que plantea problemas en cuanto al personal y las instalaciones. citoplasma. . da lugar a una reacción coloreada. se le une un radioisótopo. pero en vez de unir un enzima al Ac. se pone en contacto con el Ac marcado con una sustancia fluorescente (p. tras un periodo de incubación. posteriormente se hace un lavado para eliminar el resto de Ags no unidos a los Acs de la placa y otras partículas que pudieran interferir. .se agrega un Ac marcado con un enzima que se une a los sitios de unión del Ag y al añadirse un sustrato. etc..*) el enzima no se modifica con la reacción Ag-Ac y queda unido al inmuno- complejo junto con el sustrato amplificando la reacción y aumentando la posibilidad de detección *) los conjugados con enzimas son muy estables *) la lectura de la reacción se realiza en un espectrofotómetro y la cantidad de sustrato liberado es directamente proporcional a la cantidad de Ag fijado en la reacción *) la lectura también puede hacerse cualitativamente de forma manual. esta técnica se utilizo por primera vez para detectar el Ag de superficie del virus de la hepatitis B. se unen formando el complejo Ag-Ac. que procederemos a medir en un espectrofotómetro.