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Revista Colombiana de Biotecnologa

ISSN: 0123-3475
revcbib_bog@unal.edu.co
Universidad Nacional de Colombia
Colombia

Canales, Pamela E.; Chvez-Hidalgo, Elizabeth L.; Zavaleta, Amparo I.


Caracterizacin de bacterias halfilas productoras de amilasas aisladas de las Salinas de San Blas en
Junn
Revista Colombiana de Biotecnologa, vol. XVI, nm. 2, diciembre, 2014, pp. 150-157
Universidad Nacional de Colombia
Bogot, Colombia

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=77632757018

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ARTCULO DE INVESTIGACIN

Caracterizacin de bacterias halfilas productoras de amilasas


aisladas de las Salinas de San Blas en Junn
Characterization of halophilic bacteria producing amylase isolated
from San Blas Salterns in Junin
Pamela E. Canales*, Elizabeth L. Chvez-Hidalgo**, Amparo I. Zavaleta***

Resumen
El objetivo de este estudio fue caracterizar bacterias halfilas con actividad amiloltica provenientes de las Salinas de San
Blas-Junn, ubicadas en los Andes peruanos aproximadamente a 4100 m de altitud. Este estudio se realiz con 34 bacterias
aisladas de muestras de suelos las cuales se cultivaron en agar agua de sales (SW) 5 % conteniendo extracto de levadura
0,5 % y almidn 1 %. El 41 % de bacterias mostr la capacidad de hidrolizar almidn, stas fueron caracterizadas median-
te pruebas fisiolgicas y bioqumicas convencionales. Tres bacterias fueron Gram-negativas y once Gram-positivas. El 21
% (3/14) creci en un amplio rango de concentracin de sales, entre 5 y 20 %. El 14 % (2/14) de las bacterias present
actividad lipoltica, proteoltica y nucleoltica, y el 29 % (4/14), present actividad proteoltica y nucleoltica. Las bacterias
se identificaron mediante los perfiles de restriccin de los genes ribosmicos 16S amplificados, las enzimas usadas fueron
Hae III, BstU I, Hinf I y Cfo I. Los genes ribosmicos 16S de siete bacterias que presentaron perfiles de ADN diferentes se
amplificaron, secuenciaron y analizaron mediante programas bioinformticos. Del anlisis fenotpico y molecular de las 14
bacterias amilolticas se obtuvieron dos grupos, uno perteneciente al gnero Halomonas (3) y el otro, al gnero Bacillus
(11). Las bacterias amilolticas caracterizadas podran ser de potencial uso a nivel industrial.
Palabras clave: Salinas de San Blas, amilasas, genes ribosmicos 16S, ARDRA, Bacillus, Halomonas.

Abstract
The aim of this study was to characterize halophilic amylolytic bacteria from San Blas Salterns-Junin, located in the Peruvian
Andes at approximately 4 100 m of altitude. This study was conducted with 34 bacteria isolated from soil samples which
were cultured in salt water medium (SW) 5 % containing 0,5 % yeast extract and 1 % starch. It was found that 41 % were
starch-degrading bacteria, which were further characterized with conventional physiological and biochemical tests. Three
bacteria were Gram-negative and eleven Gram-positive. Also, 21 % (3/14) was able to grow in a wide range of saltconcen-
tration from 5 to 20 %. We reported that 14 % (2/14) of bacteria had all lipolytic, proteolytic and nucleolytic activity, and 29
% (4/14) had both proteolytic and nucleolytic activity. Bacteria were identified by restriction 16S ribosomal genes profiles,
enzymes used were Hae III, BstU I, Hinf I and Cfo I. 16S ribosomal genes of seven isolated wich showed different DNA
profiles were amplified, partial sequenced and analyzed using bioinformatic programs. By both phenotypic and molecular
analysis of 14 amylolytic bacteria two groups were obtained, one belonged to the genus Halomonas (3) and the other, to
the genus Bacillus (11). The characterized amylolytic bacteria could have a potential industrial use.
Key words: San Blas Salterns, amylases, 16S ribosomal genes, ARDRA, Bacillus, Halomonas.

Recibido: mayo 19 de 2014 Aprobado: octubre 24 de 2014

* Qumico Farmacutica. Laboratorio de Biologa Molecular de la Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad Nacional Mayor de San
Marcos. Lima 1 - Per. p.canales.mormontoy@gmail.com.
** Qumico Farmacutica, Magster en Biotecnologa. Laboratorio de Biologa Molecular de la Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad
Nacional Mayor de San Marcos. Lima 1 - Per. echavezhidalgo@yahoo.com.
*** Qumico Farmacutica, Magster en Ciencias, Doctor en Medicina. Laboratorio de Biologa Molecular de la Facultad de Farmacia y Bioqumi-
ca, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima 1 - Per. azavaletap@unmsm.edu.pe.

150 Rev. Colomb. Biotecnol. Vol. XVI No. 2 Diciembre 2014 150-157
Introduccin A nivel industrial, la degradacin del almidn requiere
Los ambientes hipersalinos poseen por lo general en- diversas condiciones catalticas desde muy suaves has-
tre 8 y 10 veces mayor concentracin salina que la ta extremas, por ello la bsqueda de bacterias produc-
del agua de mar, por ello son considerados extremos, toras de amilasas de ambientes hipersalinos permitira
varan en trminos de salinidad, composicin inica, obtener fuentes alternativas de enzimas con nuevas
temperatura, pH y nutrientes; influenciados por la caractersticas. En ese sentido, este estudio describe
zona geogrfica, el clima, la altitud, entre otros facto- las caractersticas fenotpicas y genotpicas de bacte-
res. Sin embargo, a pesar de las condiciones adversas rias amilolticas aisladas de las Salinas de San Blas, ubi-
son ecosistemas dinmicos y presentan gran diversi- cadas en los Andes peruanos.
dad microbiana (Bell 2012). Los microorganismos de
estos ambientes producen compuestos tales como Materiales y Mtodos
metabolitos y enzimas extracelulares con gran poten- Muestras. El estudio se realiz con 34 bacterias aisla-
cial industrial (Delgado-Garca et al., 2012; Enache y das de muestras de suelos de las Salinas de San Blas
Kamekura, 2010). Muchas de estas enzimas pueden ubicadas en el distrito de Ondores, provincia de Junn,
ser estables y activas en ms de una condicin extre- departamento de Junn (Per), aproximadamente a
ma, como elevada salinidad y temperatura, y/o amplio 4100 de altitud entre las coordenadas geogrficas
rango de pH (Delgado-Garca et al., 2012). Actualmen- 110625 L.S. y 761058 L.O. Para el aislamiento de
te, diversos procesos industriales se llevan a cabo en los microorganismos se emple el medio lquido agua
estas condiciones exigentes como en la hidrlisis del de sales (SW) 5 % suplementado con extracto de leva-
almidn, celulosa, entre otros. dura 0,5 % (Dyall-Smith 2006). El medio agua de sales
Las amilasas hidrolizan el almidn para la obtencin a la concentracin final de 5 % (g/L) contiene: NaCl
de dextrinas y polmeros pequeos compuestos por 40,0; MgSO4.7H2O 5,83; MgCl2.6H2O 5,0; KCl 1,17;
unidades de glucosa (Gupta et al., 2003). Estas enzi- NaBr 0,13; CaCl2 0,083; NaHCO3 0,03, y suplementa-
mas poseen aplicaciones en diversas industrias como do con extracto de levadura 0,5 %. Medios slidos SW
la alimentaria, textil, papelera, de fabricacin de deter- fueron preparados adicionando 15 g/L de agar. Des-
gentes, entre otras (Aiyer 2005; Pandey et al., 2000). pus, se realizaron tres pasajes sucesivos alternando
Aunque estas enzimas son producidas por procariotas medios slidos y lquidos de SW 5 %. Finalmente, las
y eucariotas; la fuente bacteriana es la preferida indus- bacterias se conservaron en agar SW 5 % con glicerol
trialmente por su crecimiento rpido y medios de cul- 5 % en refrigeracin.
tivo poco exigentes. As, las bacterias productoras de Seleccin de bacterias amilolticas. Las bacterias
amilasas ms descritas pertenecen al gnero Bacillus, se cultivaron en placas con medio agar almidn su-
entre stas: B. subtilis, B. stearothermophilus, B. licheni- plementado con 5 % de sales, se incubaron a 37 C
formis y B. amyloliquefaciens (Prakash y Jaiswal, 2010). durante 48 h. La actividad amiloltica se detect me-
A la vez, se han reportado algunas bacterias amilolti- diante la formacin de halos translcidos alrededor de
cas halfilas como Chromohalobacter sp. (Prakash et las colonias despus de la adicin de solucin de lugol
al., 2009), Halobacillus sp. (Amoozegar et al., 2003), sobre las placas (Amoozegar et al., 2003). Las bacte-
Halomonas meridiana (Coronado et al., 2000), Bacillus rias amilolticas fueron seleccionadas para su posterior
dipsosauri (Deutch 2002) y Micrococcus sp. 4 (Khire estudio.
1994).
Caractersticas fisiolgicas. Se realiz la tincin Gram
Actualmente, con el creciente desarrollo industrial y se determinaron las caractersticas morfolgicas de
surge la necesidad de buscar nuevos microorganis- las colonias. Adems, se evalu la capacidad de creci-
mos productores de amilasas eficientes con mejores miento de las bacterias a concentraciones salinas de 0,
caractersticas catalticas. Al respecto, Babavalian et 5, 10, 15 y 20 %, p/v; y a pH de 5, 6, 7, 8 y 9. Ambas
al. (2013) aislaron bacterias con actividad hidroltica pruebas se realizaron en medio lquido SW suplemen-
del lago hipersalino Aran-Bidgol en Irn. Ghozlan et al. tado con 0,5 % de extracto de levadura.
(2006) reportan la biodiversidad y capacidad hidrolti-
Actividades hidrolticas extracelulares. Se realizaron
ca de bacterias halfilas moderadas de diferentes am-
diversos ensayos en medios slidos, todos a la con-
bientes hipersalinos en Alejandra-Egipto, Cojoc et al.
centracin de 5 % de sales, segn se describe a con-
(2009) estudiaron bacterias productoras de enzimas
tinuacin.
extracelulares aisladas de una mina de sal en Slanic
Prahova-Rumania, Snchez-Porro et al. (2003) aislaron La actividad proteoltica se determin en placas de
diversas bacterias halfilas moderadas productoras de agar SW 5 % suplementado con skim milk 1 % y ex-
enzimas hidrolticas de diferentes ambientes hipers- tracto de levadura 0,2 %. La formacin de halos trans-
alinos en Espaa. As tambin, Prakash et al. (2009) lcidos alrededor de las colonias despus de 48 h de
reportaron la produccin y purificacin de amilasas incubacin a 37 C indic la produccin de proteasas
bacterianas. (Ardakani et al., 2012).

Bacterias halfilas amilolticas de las Salinas de San Blas 151


La actividad lipoltica se determin en placas de agar de similitud obtenido mediante el anlisis de agrupa-
SW 5 % suplementado con tributirina 1 %, tritn miento de pares por medias aritmticas no pondera-
X-100 0,1 % y extracto de levadura 0,2 %. Las placas das (UPGMA).
se incubaron a 37 C por 48 h. La formacin de halos
alrededor de las colonias indic la produccin de lipa- Secuenciamiento y anlisis filogentico. Las bacterias
que presentaron perfiles de ADN ribosmico 16S dis-
sas (Sharma et al., 2001).
tintos fueron secuenciadas parcialmente. Se solicit
La actividad celuloltica se evidenci en placas de agar el servicio de secuenciacin del Instituto de Medicina
SW 5 % suplementado con carboximetilcelulosa 1 % Tropical Alexander Von Humbolt de la Universidad
y extracto de levadura 0,2 %. Las placas fueron incu- Peruana Cayetano Heredia. Las secuencias nucleotdi-
badas a 37 C por 48 h. Se us solucin rojo de congo cas obtenidas fueron comparadas con las depositadas
1 % como revelador. La formacin de halos alrede- en la base de datos GenBank del Centro Nacional de
dor de las colonias indic la presencia de celulasas Informacin Biotecnolgica (NCBI) mediante el pro-
(Teather y Wood, 1982). grama BLAST (Zhang et al., 2000).
La produccin de DNasa se determin en agar DNA El alineamiento mltiple de las secuencias de las bac-
suplementado con 5 % de sales, las placas se incuba- terias y de las obtenidas en la base de datos se realiz
ron a 37 C durante 48 h. Se emple como revelador con el programa CLUSTALX versin 2.1 (Jeanmougin et
HCl 0,1N. La formacin de halos alrededor de las co- al., 1998), el alineamiento fue editado manualmente
lonias se report como actividad positiva (Onishi et con el programa BIOEDIT versin 7.0.5.3. El rbol filo-
al., 1983). gentico fue construido con el programa MEGA ver-
sin 5.0 (Tamura et al., 2011) empleando los mtodos
Amplificacin de los genes ribosmicos 16S. Se ex-
neighbor-joining (Saitou y Nei, 1987) y minimum-evo-
trajo el ADN de las bacterias de acuerdo al mtodo
lution (Rzhetsky y Nei, 1993). El anlisis de bootstrap
de solventes orgnicos segn lo descrito por Chvez-
de 1000 replicaciones fue usado para evaluar la esta-
Hidalgo (2010). Los genes ribosmicos 16S fueron am-
bilidad relativa de las ramas del rbol filogentico (Fel-
plificados usando cebadores universales especficos
senstein 1985).
para el dominio Bacteria 16SBF 5-AGAGTTTGATCATG-
GCTCAG-3 y 16SBR 5-GGTTACCTTGTTACGACTT-3. El
Resultados y Discusin
volumen final de la reaccin de amplificacin fue de
25 L, y contena 50 M de cada cebador, 200 M de A nivel mundial, existen numerosos ambientes hiper-
cada dNTP, KCl 50 mM, Tris/HCl 10 mM, tritn X-100 salinos conteniendo gran diversidad de bacterias con
0,1 % (v/v), MgCl2 1,5 mM, Taq ADN-polimerasa 1,5 potencial biotecnolgico, sin embargo, los estudios
U y ADN 50 g. realizados son an escasos.

Las condiciones de reaccin fueron: 94 C por 4 min, Seleccin y caracterizacin de bacterias amilolticas.
seguido por 35 ciclos a 94 C por 45 s, 55 C por 1 Las bacterias fueron aisladas a partir de muestras de
min y 72 C por 45 s, con una extensin final a 72 C suelos de las Salinas de San Blas ubicadas en los An-
por 7 min. Luego, los productos de PCR se separaron des peruanos aproximadamente a 4 100 m de altitud,
por electroforesis en gel de agarosa al 1 % en buffer entre las coordenadas geogrficas 110625 L.S. y
TAE 1X. Se emple como marcador de peso molecular 761058 L.O. Las condiciones ambientales en este
DNA Ladder 1 kb (Invitrogen). lugar son agrestes, con temperatura promedio de 6 C
y fuerte radiacin solar durante el da (Morales 1998);
ARDRA. Los productos amplificados de los genes ri- a pesar de estas condiciones existe diversidad de mi-
bosmicos 16S se cortaron con 5 U de enzima de res- croorganismos. As, Maturrano et al. (2006) estudiaron
triccin por g de producto amplificado. La enzimas la diversidad microbiolgica de las Salinas de Maras
fueron: Hae III, BstU I, Hinf I y Cfo I (Fermentas). Las (Cusco) ubicadas tambin en los Andes peruanos. A
condiciones de reaccin usadas fueron segn las es- la vez, Flores et al. (2010) reportaron bacterias halfi-
pecificaciones del fabricante, a excepcin del tiempo las moderadas productoras de hidrolasas provenientes
de incubacin que fue de 8 h a 37 C. Luego de este de los ambientes salinos de Maras, Pilluana, Chilca y
periodo los productos de la digestin se separaron por Paracas.
electroforesis en geles de agarosa NuSieve 3:1 al 3 %
El 41 % (14/34) de las bacterias de las Salinas de San
con buffer TBE 0,5X, los fragmentos de ADN se visua- Blas present actividad amiloltica. Estas bacterias se
lizaron por coloracin con bromuro de etidio en un denominaron como ESB 30, ESB 31, ESB 32, ESB 34,
transiluminador UV a 254 m. Se utiliz como marca- ESB 37, ESB 42, ESB 51, ESB 53, ESB 61, ESB 66, ESB
dor de peso molecular DNA X174/Hae III. El anlisis 68, ESB 71, ESB 73 y ESB 79. De igual forma, Babava-
de los perfiles de restriccin se realiz comparando lian et al. (2013) describen que el 39 % de bacterias
los perfiles de ADN de una cepa con respecto a otra. aisladas del lago hipersalino Aran-Bidgol en Irn fueron
La similitud de los perfiles fue estimada mediante el productoras de amilasas. Adems, Cojoc et al. (2009)
coeficiente de concordancia simple y el dendrograma reportaron que el 32 % de las bacterias aisladas de

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una mina salina en Slanic Prahova-Rumania fueron pro- ria capaz de degradar celulosa, posiblemente debido
ductoras de amilasas. Por otra parte, las 14 bacterias a la baja cantidad de este polmero en el ambiente
produjeron diversos tamaos de halos de hidrlisis en hipersalino. Dos bacterias presentaron cuatro activi-
placas con agar almidn, el 21 % entre dos y tres cm dades hidrolticas combinadas (amiloltica, lipoltica,
de dimetro, el 36 % entre 1 y 2 cm, y el 43 % menor proteoltica y nucleoltica), cuatro presentaron tres y
a 1 cm (tabla 1). cinco mostraron dos actividades hidrolticas (tabla 2).
Todas las cepas fueron bacilos, tres Gram-negativos Al respecto, Snchez-Porro et al. (2003) reportaron
y once Gram-positivos, asimismo la morfologa de las slo cuatro bacterias con cinco hidrolasas (amilasa,
colonias fue variada. Trece de las bacterias fueron ca- proteasa, lipasa, DNasa y pululanasa), 36 con tres y 20
paces de crecer en medios a pH entre 5 y 9. Adems, con dos de 122 bacterias halfilas moderadas aisladas
tres crecieron en un amplio rango salino entre 5 y 20 de ambientes hipersalinos en Espaa. En el estudio de
%. De acuerdo a la clasificacin propuesta por Kush- Babavalian et al. (2013), de 83 bacterias halfilas mo-
ner (1978), el 43 % de las bacterias fueron halfilas deradas se reportaron bacterias que produjeron desde
moderadas y el 57 % halotolerantes (tabla 1). En gene- dos hasta ocho hidrolasas.
ral, los bacilos Gram-positivos presentaron capacidad
hidroltica ms diversa que los Gram-negativos, ade- Anlisis ARDRA. El producto amplificado de los ge-
ms de la actividad amiloltica presentaron capacidad nes ribosmicos 16S midi aproximadamente 1400
proteoltica, lipoltica y nucleoltica, mientras que los pb, despus la digestin con las enzimas de restriccin
Gram-negativos slo exhibieron actividad amiloltica y produjo fragmentos de diferentes tamaos. Con Hae
nucleoltica. III se obtuvieron fragmentos entre 118 y 603 pb; BstU
Actividad hidroltica de las bacterias. La capacidad I, de 61 a 1335 pb; Hinf I, de 120 a 1353 pb; y Cfo I, de
para producir cuatro diferentes enzimas hidrolticas 155 a 1306 pb (figura 1). Un total de 5, 4, 6 y 5 perfiles
fue evaluada cualitativamente en las 14 bacterias pro- de restriccin fueron identificados con Hae III, BstU I,
ductoras de amilasas. No se detect ninguna bacte- Hinf I y Cfo I, respectivamente.

Tabla 1. Caractersticas fenotpicas de las bacterias amilolticas aisladas de las Salinas de San Blas-Junn

Caractersticas

Bacterias Rango de Tamao de halo


Tincin Color de la Forma de la Rango
Morfologa sales (% de hidrlisis
Gram colonia colonia de pH
p/v) (mm)*

ESB 30 bacilo + crema claro redonda 5-15 5-9 26


ESB 31 bacilo - crema redonda 5-20 5-9 9
ESB 32 bacilo - amarillo tenue amorfa 5-20 5-9 18
ESB 34 bacilo + crema oscuro redonda 0-15 5-9 24
ESB 37 bacilo + crema redonda 0-10 5-9 6
ESB 42 bacilo + crema redonda 0-15 5-8 17
ESB 51 bacilo + anaranjado redonda 5-15 5-9 8
ESB 53 bacilo + crema amarillo redonda 0-15 5-9 25
ESB 61 bacilo + crema redonda 0-15 5-9 8
ESB 66 bacilo + crema claro amorfa 0-10 5-9 17
ESB 68 bacilo + crema claro redonda 5-10 5-9 8
ESB 71 bacilo + crema amarillo redonda 0-15 5-9 15
ESB 73 bacilo + amarillo tenue redonda 0-10 5-9 12
ESB 79 bacilo - amarillo tenue amorfa 5-20 5-9 8

* En placas de agar almidn.

Bacterias halfilas amilolticas de las Salinas de San Blas 153


Tabla 2. Hidrlisis de sustratos de las bacterias amilolticas aisladas de las Salinas de San Blas-Junn

Hidrlisis de sustratos
Cepa bacteriana
Tributirina Casena CMC* DNA
ESB 30 + + - +
ESB 31 - - - +
ESB 32 - - - -
ESB 34 - + - +
ESB 37 - + - -
ESB 42 - + - +
ESB 51 - + - +
ESB 53 - + - +
ESB 61 - + - -
ESB 66 - - - -
ESB 68 - + - -
ESB 71 + + - +
ESB 73 - + - -
ESB 79 - - - -

* CMC: carboximetilcelulosa.

ARDRA es una tcnica para el anlisis de la estructura


de comunidades microbianas cuando se cumplen de-
terminadas condiciones que eliminan las falsas simili-
tudes, como el uso de varias enzimas de restriccin o
de genes de rpida evolucin. En el dendrograma de
similitud obtenido se observan dos brazos principales,
luego a partir de los cuales se diferencian los grupos
A, B, C y D. Estos brazos principales coinciden con
las dos grandes ramas que los gneros Bacillus y Ha-
lomonas forman en el rbol filogentico. As tambin,
se puede sealar que las cepas ESB 32 y ESB 79 se
encuentran estrechamente relacionadas entre ellas en
el rbol filogentico, al igual que en el anlisis ARDRA.
Es as que, la topologa del dendrograma obtenido a
Figura 1. Electroforesis en gel de agarosa al 3 %. Se obser- partir de los perfiles de ADN es similar a la basada en
van los patrones de bandas producto de la digestin de los las secuencias nucleotdicas de los genes ribosmicos
genes ribosmicos 16S con Cfo I. 30, ESB 30; 31, ESB 31; 32, 16S (figuras 2 y 3). Esto muestra que el anlisis de los
ESB 32; 34, ESB 34; 37, ESB 37; 42, ESB 42; 51, ESB 51; 53, patrones de ADN de genes considerados cronmetros
ESB 53; 61, ESB 61; 66, ESB 66; 68, ESB 68; 71, ESB 71; 73, moleculares es consistente con las secuencias nucleo-
ESB 73; 79, ESB 79, MP, marcador de peso molecular DNA tdicas. ARDRA ha mostrado ser til en la agrupacin
X174/Hae III. de aislamientos bacterianos de diversos orgenes para
su posterior identificacin (Yeon et al., 2005).
Del anlisis de los perfiles de restriccin usando el
Secuenciamiento y anlisis filogentico. En base al
coeficiente de concordancia simple y el UPGMA se
anlisis molecular y a las caractersticas fenotpicas, las
obtuvo el dendrograma de similitud. El dendrograma
bacterias fueron identificadas como miembros de los
de similitud muestra que las bacterias en su mayora
gneros Halomonas y Bacillus (figura 3).
se asocian con un nivel de similitud de 75 % en cuatro
grupos denominados como A, B, C y D. Slo la cepa Las tres bacterias Gram-negativas fueron identificadas
ESB30 form un grupo individual (figura 2). como miembros del gnero Halomonas, mientras que

154 Rev. Colomb. Biotecnol. Vol. XVI No. 2 Diciembre 2014 150-157
Figura 2. Dendrograma de similitud de las bacterias amilolticas aisladas de las Salinas de San Blas-Junn. Obtenido de la compa-
racin de los perfiles de restriccin de los genes ribosmicos 16S amplificados.

las once bacterias Gram-positivas, como miembros del de las Salinas de San Blas tienen caractersticas propias
gnero Bacillus. Snchez-Porro et al. (2003) report de acuerdo a las condiciones en dicha salina.
resultados similares, sealando como gneros Gram-
negativos predominantes Salivinibrio y Halomonas, y Cabe mencionar que el gnero Bacillus detectado en
como Gram-positivos predominantes, Bacillus y Saliba- este estudio es ampliamente reconocido como pro-
cillus. Resultados diferentes describieron Rohban et al. ductor de enzimas para diversos procesos industria-
(2009) quienes reportan como gnero Gram-negativo les (Prakash y Jaiswal, 2010; Nascimento y Martins,
predominante a Salicola y entre los Gram-positivos, los 2004). Muchos microorganismos halfilos presentan
gneros Virgibacillus y Thalassobacillus de bacterias ha- actividad hidroltica combinada, lo cual representa
lfilas aisladas del lago hipersalino Howz Soltan-Irn. una ventaja para varios procesos industriales, como
Las caractersticas propias de cada ambiente hipersali- en el tratamiento de residuos que contienen alta sa-
no puede influir en la diversidad microbiana e incluso linidad. Las amilasas y otras enzimas provenientes de
en las caractersticas que los microorganismos pueden microorganismos halfilos se espera que muestren ac-
desarrollar (Bell 2012); es por ello que al comparar los tividades ptimas en condiciones extremas. As, este
estudios de ambientes hipersalinos, la diversidad y ca- estudio permite tener un mayor conocimiento sobre la
ractersticas de los microorganismos vara. diversidad y capacidad hidroltica de bacterias halfilas
En estudios similares, se identificaron bacterias halfi- aisladas de ambientes hipersalinos peruanos. Muchas
las productoras de amilasas, tal como Babavalian et al. de sus enzimas podran ser activas bajo condiciones
(2013) quienes identificaron como principales gneros extremas, lo cual las convertira en fuentes promisorias
amilolticos Halobacillus, Thalassobacillus y Halomonas. para uso industrial, para lo cual se requeriran estudios
Ellos tambin identificaron representantes del gnero posteriores.
Bacillus pero con crecimiento dbil en pH neutro y sin
crecimiento a valores ms bajos de pH, a diferencia Conclusiones
de nuestro estudio donde todas las cepas de Bacillus
crecieron desde pH 5 hasta 8-9. Tambin reportaron De las Salinas de San Blas, Ondores-Junn, se aislaron
la produccin de proteasas y lipasas en algunas cepas 14 bacterias con actividad amiloltica, pertenecientes
amilolticas de Halomonas, a diferencia de nuestro es- 11 al gnero Bacillus y 3 a Halomonas. Estos microor-
tudio dnde slo reportamos DNasa en cepas amilol- ganismos crecen en diversos rangos salinos y dos de
ticas de Halomonas. As tambin, Rohban et al. (2009) ellos son capaces de producir proteasas, lipasas y
reportaron como productores de amilasas, los gneros DNasas.
Salicola, Halovibrio, Halomonas, Oceanobacillus, Tha-
lassobacillus, Virgibacillus, Gracilibacillus, Halobacillus, Agradecimientos
Piscibacillus y Salinicoccus. A diferencia de nuestro es-
tudio, algunos representantes de Halomonas mostra- Este estudio fue financiado parcialmente con los con-
ron actividad celuloltica. Es as que las cepas aisladas tratos 017-Fincyt-PIBAP-2008, y VRI-UNMSM 2012.

Bacterias halfilas amilolticas de las Salinas de San Blas 155


Figura 3. rbol filogentico mostrando la posicin de las bacterias de las Salinas de San Blas-Junn. Basado en la comparacin de
las secuencias parciales de los genes ribosmicos 16S y analizado con Mega 5.0.

Referencias bibliogrficas Delgado-Garca, M.; Valdivia-Urdiales, B.; Aguilar-Gonzlez, C.N.;


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