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MICROBIOTA DE LA NASOFARINGE

Cada regin del cuerpo humano ofrece un nicho ecolgico que condiciona el
establecimiento de una microbiota normal, la cual permanece notablemente
constante.
La piel y las mucosas del cuerpo son directamente accesibles al ambiente
exterior. Poco despus de nacer un nio esas superficies son pobladas por
microorganismos que no causan enfermedad, a menos que sean introducidos
accidentalmente en regiones protegidas o haya un cambio fisiolgico importante en el
hospedador.
En el tracto respiratorio superior, si bien la mayora de microorganismos que
entran con el aire quedan atrapados en las vas nasales y son expelidos nuevamente
con las secreciones nasales, existe un grupo restringido de microorganismos que
colonizan las superficies mucosas respiratorias de todos los individuos. A menudo en la
microbiota normal de individuos sanos se pueden hallar microorganismos
potencialmente patgenos. Estos individuos son portadores de los patgenos, pero no
suelen desarrollar enfermedad debido a que el resto de microorganismos residentes
compiten con xito por los recursos y limitan el crecimiento del patgeno.
Adicionalmente el sistema inmunitario innato y los componentes del sistema
inmunitario adaptativo, como IgA, son especialmente activos en las superficies
mucosas contribuyendo a inhibir el crecimiento de microorganismos patgenos.

En esta prctica se tratar de identificar los grupos ms representativos de la


regin nasofarngea. Para el cultivo de los microorganismos se utiliza el medio
complejo AGAR SANGRE. Este medio est suplementado con sangre (de cordero,
conejo o caballo) al 5%, lo que proporciona un alto nmero de factores de crecimiento,
facilitando el crecimiento de aquellos microorganismos que tengan mayores
requerimientos nutricionales. Por otra parte, este medio ofrece una primera
aproximacin a la posible patogenicidad de un microorganismo segn su capacidad de
producir hemolisis, generando un halo de lisis de los glbulos rojos alrededor de la
colonia.
Segn el tipo de halo, se diferencian los siguientes tipos de microorganismos:
- -hemolticos: Halo transparente alrededor de la colonia. Lisis completa de
los glbulos rojos.
- -hemolticos: Halo verdoso alrededor de la colonia. No se debe a una
autntica hemolisis, sino que se produce una prdida de potasio por parte
de los hemates y cambio en el estado de oxidacin del grupo hemo.
- -hemolisis: No hemolisis, no aparece halo alrededor de la colonia.
Desarrollo prctico
Toma de muestra y siembra en medio de cultivo AGAR-SANGRE:
- Introducir una torunda estril en la boca y tocar, girando la torunda, la
regin nasofaringea, evitando el contacto con la lengua y otras zonas de la
boca. Seguidamente, descargarla en un tubo que contiene 5ml de suero
fisiolgico estril.
- Tomar 100 l de muestra con una micropipeta provista de una punta estril
y sembrar en csped en una placa de AGAR-SANGRE. Incubar a 37oC
durante 24 horas. Transcurrido ese tiempo:
1- Se observarn los distintos tipos de colonias que han crecido,
determinando la presencia o ausencia de halo en cada caso.
2- De cada tipo de colonia se har una tincin Gram.

Anotacin de resultados
Se anotan los microorganismos identificados (aspecto de la colonia,
presencia/ausencia de halo y respuesta a la tincin Gram)

* Tincin Gram:
- Cristal violeta (1 minuto)
- Lavar con agua
- Lugol (1 minuto). Verter
- Decolorar con etanol
- Lavar con agua
- Safranina (30 segundos)
- Lavar, secar y observar con el objetivo de inmersin

Interpretacin de los resultados. Microorganismos ms habituales.

COCOS GRAM +

Streptococcus: cocos anaerobios facultativos, no esporulados e inmviles. Forman


parejas o cadenas. Para la identificacin especfica sera necesario hacer un serotipado.

Streptococcus pyogenes: -hemoltico Streptococcus pneumoniae: -


Streptococcus mutans: -hemolisis hemoltico. Es capsulado y se dispone
Streptococcus salivarius: algunas cepas en parejas
son-hemolticas
Staphylococcus: se dividen en varios planos, dando lugar a racimos ms o menos
irregulares.
Staphylococcus aureus: -hemoltico. Colonias pigmentadas
Staphylococcus epidermidis: -hemoltico. Colonias no pigmentadas

Gemella
Gemella haemolysans: -hemoltico. Parejas de cocos G+ que pueden aparecer
ligeramente decolorados

COCOS GRAM

Neisseria Neisseria meningitidis: parejas de cocos. Su forma es oval-arrionada

Moraxella
Moraxella catharralis: parejas de cocos. Forma que recuerda a un grano de caf

BACILOS GRAM +

Lactobacillus: cadenas de bacilos

Lactobacillus salivarius
Corynebacterium: bacilos irregulares con engrosamientos en los extremos. Divisin
por desgarro, aparecen asociados en empalizadas o formando letras chinas.

Corynebacterium diphtheriae

BACILOS GRAM

Haemophilus
Haemophilus inlfuenzae: Bacilos pequeos que a veces forman filamentos

Bacteroides: anaerobios. Bacilos de forma irregular.

Espiroquetas: Largas y delgadas, forma helicoidal con una o varias vueltas de espira.

* Imagen de microscopa
de campo oscuro

Treponema oralis: Anaerobio.

LEVADURAS
Candida: microorganismo eucariota de un tamao considerablemente mayor que las
bacterias. Forma ovalada. En la tincin Gram retiene el colorante cristal violeta.

Candida albicans