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La Adecuacin al Uso de los

Mtodos Analticos
Una Gua de Laboratorio para Validacin de Mtodos y
Temas Relacionados

Segunda Edicin Inglesa


Primera Edicin Espaola
Gua Eurachem

La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos


Una Gua de Laboratorio para Validacin de Mtodos y Temas
Relacionados

Segunda Edicin Inglesa


Primera Edicin Espaola

Agradecimientos
Este documento ha sido elaborado por los miembros del Grupo de Trabajo de Validacin de Mtodos de
Eurachem y otros colaboradores asignados a esta tarea. Han contribuido a esta edicin:

Grupo del proyecto

Vicki Barwick LGC (UK)


Pedro P. Morillas Bravo Canal de Isabel II Gestin (ES)
Stephen L. R. Ellison LGC (UK)
Joakim Engman National Food Agency (SE)
Elin L. F. Gjengedal Norwegian University of Life Sciences (NO)
Ulla Oxenbll Lund Eurofins Milj A/S (DK)
Bertil Magnusson (editor) SP Technical Research Institute of Sweden (SE)
Hans-Thomas Mller Mersin (TR)
Marina Patriarca Istituto Superiore di Sanit (IT)
Barbara Pohl Merck KGaA (DE)
Piotr Robouch European Commission (EU)
Lorens P. Sibbesen (chairman) Labquality International (DK)
Elvar Theodorsson University Hospital in Linkping (SE)
Florent Vanstapel University Hospital Leuven, Leuven (BE)
Isabelle Vercruysse BELAB (BE)
Aysun Yilmaz Cevre Food and Industrial Analysis Laboratory (TR)
Perihan Yolci meroglu Okan University (TR)
Ulf rnemark (editor) Emendo Dokumentgranskning (SE)

Copyright
Los derechos de autor de este documento estn en manos de los autores colaboradores. Todas las consultas
relativas a la reproduccin en cualquier medio, incluida la traduccin, deben dirigirse a la secretara Eurachem.
El texto no puede ser copiado para su venta.

Cita recomendada
Esta publicacin debe ser citada* como: B. Magnusson and U. rnemark (eds.) Eurachem Guide: The Fitness
for Purpose of Analytical Methods A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics, (2nd ed.
2014). ISBN 978-91-87461-59-0. Available from www.eurachem.org.
La versin espaola debe ser citada como: Eurolab Espaa. P.P. Morillas y colaboradores. Gua Eurachem: La
adecuacin al uso de los mtodos analticos Una Gua de laboratorio para la validacin de mtodos y temas
relacionados (1 ed. 2016). Disponible en www.eurachem.org
*Sin perjuicio de los requerimientos de revistas

i
ii
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

ndice
Prlogo a la primera edicin espaola ..................................................................................... 1
Prlogo a la segunda edicin en ingls .................................................................................... 2
Prlogo a la primera edicin en ingls ..................................................................................... 3
Abreviaturas y smbolos ............................................................................................................ 4
1 Introduccin ....................................................................................................................... 6
1.1 Justificacin y alcance de esta Gua ..................................................................................... 6
1.2 Notas sobre el uso de esta Gua ............................................................................................ 6
1.2.1 Terminologa ..................................................................................................................................... 6
1.2.2 Referencias rpidas ........................................................................................................................... 7
2 Qu es validar un mtodo? .............................................................................................. 8
2.1 Definiciones ............................................................................................................................ 8
2.2 Cul es la diferencia entre validacin y verificacin? ...................................................... 8
3 Por qu es necesario validar un mtodo? ..................................................................... 10
3.1 Importancia de la medicin analtica ................................................................................ 10
3.2 El deber profesional del qumico analtico ........................................................................ 10
3.3 Desarrollo de mtodos ......................................................................................................... 10
4 Cundo debe validarse o verificarse un mtodo? ......................................................... 12
4.1 Validacin de un mtodo .................................................................................................... 12
4.2 Verificacin de un mtodo .................................................................................................. 12
5 Cmo debe validarse un mtodo? .................................................................................. 13
5.1 Quin debe validar un mtodo? ....................................................................................... 13
5.1.1 Estrategias para validar un mtodo ..................................................................................................13
5.1.2 Resultados interlaboratorios .............................................................................................................13
5.1.3 A partir de datos individuales del laboratorio ..................................................................................13
5.2 Extensin de los estudios de validacin ............................................................................. 13
5.3 Plan e informe de validacin .............................................................................................. 14
5.4 Herramientas de validacin ................................................................................................ 15
5.4.1 Blancos .............................................................................................................................................15
5.4.2 Muestras de rutina ............................................................................................................................15
5.4.3 Soluciones/material fortificado ........................................................................................................15
5.4.4 Materiales pre-adicionados ..............................................................................................................15
5.4.5 Patrones de medida ..........................................................................................................................15
5.4.6 Estadstica ........................................................................................................................................16
5.5 Requisitos de validacin ...................................................................................................... 16
5.6 Proceso de validacin de mtodos ...................................................................................... 16
6 Caractersticas de desempeo de los mtodos ................................................................. 19
6.1 Selectividad .......................................................................................................................... 19
6.1.1 Trminos y definiciones ...................................................................................................................19
6.1.2 Efectos de las interferencias .............................................................................................................19
6.1.3 Evaluacin de la selectividad ...........................................................................................................19
6.2 Lmite de deteccin y lmite de cuantificacin .................................................................. 20
6.2.1 Trminos y definiciones ...................................................................................................................20
6.2.2 Determinacin de la desviacin estndar a niveles bajos .................................................................21
iii
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

6.2.3 Estimacin del LOD .........................................................................................................................24


6.2.4 Estimacin del LOQ .........................................................................................................................24
6.2.5 Procedimientos alternativos .............................................................................................................25
6.2.6 Capacidad de deteccin para un anlisis cualitativo ........................................................................26
6.3 Intervalo de trabajo............................................................................................................. 27
6.3.1 Definicin.........................................................................................................................................27
6.3.2 Consideraciones para el estudio de validacin .................................................................................27
6.3.3 Intervalo de trabajo del mtodo y del instrumento ...........................................................................27
6.3.4 Evaluacin del intervalo de trabajo del instrumento ........................................................................27
6.3.5 Evaluacin del intervalo de trabajo del mtodo ...............................................................................28
6.4 Sensibilidad analtica .......................................................................................................... 30
6.4.1 Definicin.........................................................................................................................................30
6.4.2 Aplicaciones .....................................................................................................................................30
6.5 Veracidad ............................................................................................................................. 30
6.5.1 Terminologa para describir la calidad de medicin ........................................................................30
6.5.2 Determinacin del sesgo ..................................................................................................................31
6.5.3 Interpretacin de las mediciones de sesgo........................................................................................34
6.6 Precisin ............................................................................................................................... 35
6.6.1 Repeticin ........................................................................................................................................35
6.6.2 Condiciones de precisin .................................................................................................................35
6.6.3 Lmites de precisin .........................................................................................................................36
6.6.4 Determinacin simultnea de la repetibilidad y la precisin intermedia ..........................................36
6.7 Incertidumbre de medida ................................................................................................... 38
6.8 Robustez ............................................................................................................................... 38
6.8.1 Definicin.........................................................................................................................................38
6.8.2 Ensayo de robustez ...........................................................................................................................38
7 Uso de mtodos validados ................................................................................................ 40
8 Empleo de los datos de validacin para el diseo del programa de control de calidad 42
8.1 Introduccin ......................................................................................................................... 42
8.2 Control de calidad interno .................................................................................................. 42
8.3 Control de calidad externo ................................................................................................. 43
9 Documentacin de los mtodos validados ....................................................................... 44
9.1 Desde el borrador a la versin final ................................................................................... 44
9.2 Recomendaciones................................................................................................................. 44
9.2.1 Comprobacin de las indicaciones ...................................................................................................44
9.2.2 Recomendaciones en normas ...........................................................................................................44
9.2.3 Control de los documentos ...............................................................................................................44
10 Implicaciones de los datos de validacin para el clculo e informe de resultados .... 46
Anexo A Protocolo para la documentacin del Mtodo ..................................................... 47
Anexo B Bases estadsticas del clculo del lmite de deteccin .......................................... 51
Anexo C Anlsis de la varianza (ANOVA) .......................................................................... 52
Anexo D Notas sobre los anlisis cualitativos..................................................................... 54
Bibliografa .............................................................................................................................. 57

iv
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Prlogo a la primera edicin espaola

Con mi incorporacin como representante nacional, a travs de Eurolab Espaa, al foro de


EURACHEM pretendo extender las actuaciones del mismo a nuestro mbito geogrfico, as como
participar de forma activa en los diferentes grupos de trabajo ya constituidos y activos.

En este sentido, en el ao 2012 se propone la revisin de esta gua, constituyndose un Grupo de


Trabajo cuyo resultado se cierra en octubre de 2014 con la publicacin de la segunda edicin de la
versin original en ingls.

Esta revisin era necesaria consecuencia de los avances producidos en el conocimiento tcnico y en la
entrada, inevitable por otro lado, de los conceptos metrolgicos en el mundo de los ensayos qumicos.
La experiencia de los laboratorios ha permitido tambin mejorar la comprensin de conceptos casi
exclusivos de la metrologa fsica como veracidad, repetibilidad, reproducibilidad o incertidumbre, e
incorporar las particularidades propias relacionadas con, por ejemplo, la selectividad o la robustez de
los anlisis qumicos.

Durante este tiempo se han recibido gran nmero de consultas sobre la disponibilidad de una versin
de la gua en espaol, que ahora se publica gracias al esfuerzo realizado por el Grupo de Trabajo
creado al efecto.

He tenido el placer de colaborar en la traduccin y coordinar a las personas que desinteresadamente


han participado en este Grupo de Trabajo, constituido por:

Ana Ins Silva Terra LATU Uruguay (www.latu.org.uy)


Christian Uribe / Steve Acco INACAL Per (www.inacal.gob.pe)
Gladys Mastromonaco INTI Argentina (www.inti.gob.ar)
Jos Luis Prieto LOMG Espaa (www.lomg.net)
Mercedes Torres Roldn SOCIEDAD ESPAOLA DE QUMICA ANALTICA
(http://seqa.es)
Pedro Pablo Morillas CANAL DE ISABEL II GESTIN (www.canalgestion.es)
Eurolab Espaa (www.eurolab.org.es)

En la revisin completa del documento he recibido la inestimable ayuda de Mercedes Torres


(Sociedad Espaola de Qumica Analtica - SEQA), y Christian Uribe y Steve Acco del Instituto
Nacional de Calidad (INACAL) de Per. Espero que esta traduccin permita facilitar la difusin y
acceso a esta gua.

Pedro Pablo Morillas Bravo


Representante Nacional de EURACHEM para Espaa

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Prlogo a la segunda edicin en ingls


Desde la publicacin de la primera edicin de esta Gua en 1998, han ocurrido acontecimientos
importantes en el campo de la calidad analtica. En primer lugar, ha sido revisada la serie de la norma
ISO 9000, utilizada muy frecuentemente como base de los sistemas de gestin de la calidad. Su
filosofa es parte integrante de las normas y guas internacionales de evaluacin de la conformidad, en
las que se sustentan los requisitos de competencia de los laboratorios, de proveedores de Ensayos de
Aptitud (PT, por sus siglas en ingls) y productores de Materiales de Referencia (RM, por sus siglas
en ingls). En todos estos documentos se hace hincapi en la importancia de emplear mtodos
validados.
En segundo lugar, se han revisado o desarrollado guas de carcter general o ms especfico sobre
validacin de mtodos. La legislacin europea incluye requisitos obligatorios para las mediciones
analticas en muchos sectores.
En tercer lugar, la comunidad analtica ha invertido un gran esfuerzo en la aplicacin del concepto de
incertidumbre. Por ejemplo, la IUPAC en su Gua armonizada para la validacin de mtodos de
anlisis por un laboratorio (2002) predijo que, ...con una dependencia creciente sobre la
incertidumbre de medida como indicador de la adecuacin al uso y de la fiabilidad de los resultados,
los qumicos analticos orientarn la validacin de las medidas hacia una mejor evaluacin de la
incertidumbre.... Posteriormente, las entidades de acreditacin difundieron polticas y guas
reconociendo claramente el uso de los datos de validacin de los mtodos en el proceso de evaluacin
de la incertidumbre de las medidas.
Por otro lado, se ha revisado a fondo el Vocabulario Internacional de Metrologa - conceptos bsicos
y generales y trminos asociados (VIM), teniendo en cuenta las medidas qumicas y biolgicas
Aunque la terminologa relacionada con la validacin de mtodos est lejos an de ser armonizada, la
situacin ha mejorado. VIM es tambin un documento normativo para los laboratorios acreditados
para, por ejemplo, ISO/IEC 17025 e ISO 15189.
La segunda edicin de esta Gua tiene como objetivo reflejar los cambios ocurridos en las normas y
guas internacionales, poniendo menos nfasis en los trminos y definiciones. En su lugar, la Gua
hace referencia al VIM y a otras fuentes de fcil acceso. Como consecuencia, se ha eliminado del
Anexo la lista de trminos y definiciones. Las referencias citadas en esta edicin se incluyen en un
apartado final de Bibliografa. Otras fuentes y referencias adicionales relacionadas con el desarrollo de
mtodos y su validacin est disponible en el documento Reading list bajo la opcin de men
Publications en la pgina web de Eurachem (www.eurachem.org). El anexo A se ha revisado para
responder a los cambios en la norma ISO 78-2. Esta edicin tambin se ha ampliado para incluir
informacin sobre las bases estadsticas del clculo del lmite de deteccin (Anexo B), el anlisis de
varianza (Anexo C) y ensayos cualitativos (Anexo D).
Cada vez es ms comn entre los laboratorios de rutina, especialmente en el sector clnico, el uso de
sistemas de medida disponibles en el mercado. Esto significa que la responsabilidad de la validacin
reside principalmente en el fabricante. El trabajo del laboratorio se orientar en la verificacin de los
datos de desempeo publicados del fabricante y en demostrar que el mtodo funciona en las
instalaciones del usuario final.
Sin embargo, considerando el prlogo de la primera edicin, an podemos decir que los seis principios
en l recogidos siguen siendo relevantes, y consistentes con los requisitos de normas internacionales
como la ISO/IEC 17025.

VM 2016 2
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Prlogo a la primera edicin en ingls*


Una iniciativa para promover buenas prcticas en la medicin analtica en el Reino Unido ha
identificado seis principios de la prctica analtica que, en conjunto, se considera que constituye la
mejor prctica. Los seis principios que se describen en ms detalle en esta gua son:
1. Las medidas analticas deberan realizarse para satisfacer un requisito acordado (ej.: con un
objetivo definido).
2. Las medidas analticas deberan realizarse con mtodos y equipos que previamente han sido
probados para asegurar su adecuacin al uso.
3. El personal que realiza medidas analticas debera estar cualificado y ser competente para
realizar sus tareas. (y demostrar que pueden realizar correctamente los anlisis).
4. Debera existir una evaluacin peridica e independiente del desempeo tcnico de un
laboratorio.
5. Las medidas analticas realizadas en un lugar deberan ser consistentes con las realizadas en
otros lugares.
6. Las organizaciones que realizan medidas analticas deberan definir procedimientos
adecuados de control y de aseguramiento de calidad.
Estos principios son aplicables tanto a laboratorios que trabajan independientemente como a aquellos
cuyos resultados deben ser comparados con los de otros laboratorios.
Este documento est destinado principalmente a ayudar a los laboratorios a aplicar el Principio 2,
dando una orientacin sobre la evaluacin de los mtodos de ensayo en su adecuacin al uso.

*
La primera edicin (1998) de esta Gua ha sido elaborada por un Grupo de Trabajo de Eurachem a partir de un
borrador preparado inicialmente por LGC. Las siguientes personas han sido miembros del grupo de Eurachem:
D. Holcombe, P. De Bivre, D. Bttger, C. Eastwood, J. Hlavay, M. Holmgren, W. Horwitz, M. Lauwaars, B.
Lundgren, L. Massart, J. Miller, J. Morkowski, B. te Nijenhuis, B. Nyeland, R. Philipp, P. Radvila, J. Smeyers-
Verbeke, R. Stephany, M. Suchanek, C. Vandervoorst, H. Verplaetse, H. Wallien, M. Walsh, W. Wegscheider,
D. Westwood, H. J. van de Wiel.

The managers guide to VAM, UK Department of Trade and Industry, Valid Analytical Measurement
Programme. Published as VAM Principles M. Sargent. Anal. Proc., 1995, 32, 201-202.

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Abreviaturas y smbolos
En esta gua se utilizan las siguientes abreviaturas, acrnimos y smbolos.

AMC Comit de Mtodos Analticos


ANOVA Anlisis de varianza
AOAC International Organizacin reconocida globalmente para la elaboracin de normas
ASTM International Organizacin reconocida globalmente para la elaboracin de normas
BIPM Oficina Internacional de Pesos y Medidas
CCQM Comit Consultivo de Cantidad de Sustancia Metrologa Qumica
CEN Comit Europeo de Normalizacin
CITAC Cooperacin sobre Trazabilidad Internacional en Qumica Analtica
CLSI Instituto de Normas Clnicas y Laboratorios
CRM Material de referencia certificado
DER Desviacin estndar relativa
EA Cooperacin Europea para la Acreditacin
EC Comisin Europea
EPA Agencia de Proteccin Medioambiental
EQA Evaluacin externa de la calidad
EU Unin Europea
EPTIS Sistema de Informacin Europeo de Ensayos de Aptitud
GUM Evaluacin de datos de medida Gua para la expresin de la incertidumbre de
medida
ICH International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for
Registration of Pharmaceuticals for Human Use
IEC Comisin Internacional de Electrotecnia
ISO Organizacin Internacional de Normalizacin
IUPAC Unin Internacional de Qumica Pura y Aplicada
JCGM Comit Conjunto de Guas en Metrologa
LOD Lmite de deteccin
LOQ Lmite de cuantificacin
MR Material de referencia
MRC Material de referencia certificado
NATA Asociacin Nacional de Entidades para los Ensayos
NT Nota del Traductor
QA Aseguramiento de calidad
QC Control de calidad
RSC Real Sociedad de Qumica
SANCO Comisin Europea de la Direccin General de Sanidad y Proteccin de los
Consumidores
PNT Procedimiento normalizado de trabajo
PT Ensayo de aptitud

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

UV/VIS Ultravioleta/visible
VIM Vocabulario Internacional de metrologa conceptos bsicos y generales y trminos
relacionados

b Sesgo absoluto
b(%) Sesgo relativo en porcentaje
kQ Factor utilizado en el clculo del lmite de cuantificacin
m Nmero de medidas
n Nmero medio de observaciones repetidas al reportar los resultados
nb Nmero medio de observaciones del blanco al calcular la correccin por el blanco
r Lmite de repetibilidad
R Lmite de reproducibilidad
(%) Recuperacin relativa (recuperacin aparente) en tanto por ciento
 (%)
 Recuperacin relativa por fortificacin en tanto por ciento
s Desviacin estndar
s0 Desviacin estndar estimada de los resultados individuales en o cerca de una
concentracin de cero
 Desviacin estndar utilizada en el clculo de un LOD o LOQ
sI Desviacin estndar por precisin intermedia
sr Desviacin estndar por repetibilidad
sR Desviacin estndar por reproducibilidad
u Incertidumbre tpica
x Valor medio (media aritmtica)

xref Valor de referencia


Valor medio de medidas obtenidas con un mtodo alternativo, ej.: un mtodo de
referencia
  Valor medio de una muestra enriquecida en un experimento de recuperacin
  Concentracin adicionada en un experimento de recuperacin

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

1 Introduccin
1.1 Justificacin y alcance de esta referencias a material adicional sobre
Gua determinados aspectos tcnicos de la validacin.
La validacin de mtodos es un requisito Esta Gua se centra en la validacin de mtodos
importante en la prctica de los anlisis cuantitativos. Sin embargo, algunos de los
qumicos. Si bien la mayora de los qumicos principios descritos en ella son aplicables
analticos son conscientes de ello, no siempre tambin para determinar la presencia de uno o
est claro por qu y cundo debe realizarse y qu ms analitos en los mtodos cualitativos, como
es necesario hacer. Algunos consideran que la por ejemplo, los conceptos de selectividad y de
validacin de mtodos debe realizarse en lmite de deteccin (LOD).
colaboracin con otros laboratorios, por lo que
La Gua evita hacer hincapi en el uso de la
no la llevan a cabo. Los requisitos de las normas
estadstica, aunque es indudable que el
ISO/IEC 17025 [1], ISO 15189 [2] e ISO 15195
conocimiento prctico de estadstica elemental
[3] han ayudado a clarificar este tema. Por
facilita la comprensin y aplicacin del proceso
ejemplo, la necesidad de demostrar que los
de validacin. Se incluyen varias referencias a
mtodos deben adecuarse a su uso previsto se
publicaciones de estadstica bsica para qumicos
indica claramente en el apartado 5.4.2 de la
[4, 5, 6].
ISO/IEC 17025:
La comprensin de la validacin de mtodos por
El laboratorio debe utilizar los mtodos de
los analistas se ve frenada porque los trminos
ensayo o de calibracin, incluidos los de
metrolgicos y tcnicos utilizados para describir
muestreo, que satisfagan las necesidades del
los procesos de evaluacin de mtodos varan en
cliente y que sean apropiados para los ensayos o
los diferentes sectores de las mediciones
las calibraciones que realiza... y adems:
analticas. Esta Gua no dice cuando un trmino
Cuando el cliente no especifique el mtodo a
se usa correcta o incorrectamente, pero s
utilizar, el laboratorio debe seleccionar los
proporciona alguna aclaracin. El mejor consejo
mtodos apropiados....
para el uso de un trmino que puede inducir a
La finalidad de esta gua es analizar las error es proporcionar la fuente y el convenio de
cuestiones relacionadas con la validacin de aplicacin.
mtodos y aumentar la comprensin de los
En el proceso de validacin de mtodos est
lectores de lo que implica, por qu es importante,
implcito que los estudios para determinar sus
y dar una idea de cmo puede llevar a cabo.
caractersticas de desempeo* se llevan a cabo
Se prev que la Gua sea de mayor utilidad para: empleando equipos que funcionan
a) los jefes de laboratorio encargados de velar correctamente, debidamente calibrados y dentro
por que los mtodos bajo su supervisin se de especificacin. Por tanto, esta Gua no
validen adecuadamente y b) los analistas contempla especficamente conceptos como
responsables de la planificacin y la realizacin cualificacin del equipo o cualificacin
de estudios de validacin de mtodos. Otros instrumental. Asimismo, el analista que realice
miembros del personal pueden encontrar en la los estudios debe ser competente en el campo de
gua un recurso de informacin de referencia - el trabajo concreto, y contar con los conocimientos
personal directivo verla desde el punto de vista suficientes para poder tomar las decisiones que
de gestin y el personal subordinado desde un puedan ser necesarias al avanzar el estudio.
punto de vista tcnico o educativo.
1.2 Notas sobre el uso de esta Gua
La Gua se centra en la validacin interna de
mtodos, realizada por el propio laboratorio. Su 1.2.1 Terminologa
objetivo es dirigir al lector hacia protocolos ya El foco de atencin principal en la revisin de
establecidos y, en caso de no existir, dar una esta Gua ha sido la actualizacin de las
introduccin sencilla a los procesos involucrados referencias bibliogrficas para incorporar los
en la validacin, proporcionando algunas ideas
bsicas que permitan al lector disear sus propias *
Sinnimos de uso comn para las caractersticas de
estrategias de validacin. Incluye adems desempeo del mtodo son parmetros de
desempeo del mtodo, caractersticas
metrolgicas y propiedades de desempeo.

VM 2016 6
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

cambios y avances ocurridos desde la En los procesos de muestreo, preparacin de


publicacin de la primera edicin hace ya quince muestras y anlisis pueden emplearse trminos
aos. En cuanto a la terminologa, hemos como objetivo del muestreo, muestra
empleado, donde ha sido posible, la 3 edicin elemental, incremento, muestra compuesta,
del VIM, primera publicacin de 2007 [7, 8]. submuestra, muestra de laboratorio, muestra
Cuando ha sido necesario, se ha completado con a ensayo, porcin de ensayo y disolucin a
los trminos usados en la ISO/IEC 17025:2005 examen [15, 16]. En esta Gua se utiliza
[1], otros documentos ISO [9, 10, 11] y la Gua normalmente el trmino muestra o muestra a
Armonizada de la IUPAC para la Validacin ensayo [17].*En el texto de la Gua se han
Interna de 2002 [12] contemplando as los incluido las definiciones de los trminos ms
trminos usados habitualmente en los importantes empleados. Siempre que ha sido
laboratorios analticos. posible, se han facilitado las definiciones de
VIM, ISO 9000 [9] y la IUPAC [17, 18]. Los
Cuando existen varios trminos en uso, puede
trminos de VIM relacionados con la qumica
resultar complicado decidir cul de ellos
analtica tienen mayor desarrollo en la Gua
emplear. Para ayudar en estas situaciones, en la
Eurachem Terminology in analytical
Gua se ha decidido usar siempre el mismo
measurement [8]. Los lectores deben tener en
trmino. Un ejemplo es el trmino utilizado para
cuenta que an no hay un acuerdo universal
describir el documento que describe con detalle
sobre las definiciones de los trminos usados en
el mtodo a validar empleando equipos y
la validacin de mtodos.
personal de un laboratorio en particular. Para
anlisis cuantitativos VIM se refiere al 1.2.2 Referencias rpidas
procedimiento de medida, en ISO/IEC 17025 se En la Seccin 6, las casillas sombreadas
menciona como el mtodo, en ISO 15189 [2] es proporcionan una Referencia Rpida sobre las
el procedimiento de examen y en muchos otros caractersticas de desempeo especficas del
laboratorios se llama procedimiento normalizado mtodo. Sin embargo, se asume que en muchos
de trabajo (PNT). El grupo de trabajo decidi casos, los laboratorios no disponen de tiempo ni
utilizar el trmino de la ISO/IEC 17025 y recursos para realizar los experimentos con el
emplear el trmino genrico mtodo. Por tanto, detalle que aqu se describe. El empleo de un
esta Gua utiliza la locucin validacin del menor nmero de rplicas que las indicadas en
mtodo reconocida habitualmente, aunque las cajas siempre ser mejor que no llevar a cabo
validacin del procedimiento sera ms ninguna de las operaciones indicadas. En este
correcto. caso, no hay que olvidar que la informacin
Se ha empleado los trminos robustez y obtenida ser menos fiable que al considerar
selectividad en lugar de resistencia y todas las rplicas propuestas.
especificidad [13] ya que los primeros son
empleados por la IUPAC [12].
Otros trminos se utilizan para describir el
trabajo del laboratorio, como calibracin,
medicin, prueba, anlisis y examen. Esta
Gua utiliza anlisis en un sentido general
especificando, donde sea necesario, las
circunstancias. Del mismo modo, esta Gua
utiliza el trmino concentracin medida aunque
en los laboratorios qumicos se evalan tambin
otras magnitudes [14].

*
Muestra a ensayo: Muestra, preparada a partir de la
muestra del laboratorio, de la que se extraen porciones
para ensayo o anlisis [17].

VM 2016 7
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

2 Qu es validar un mtodo?
2.1 Definiciones 2.2 Cul es la diferencia entre
En la Tabla 1 se incluyen las definiciones de validacin y verificacin?
validacin de tres documentos internacionales. La ISO 9000 [9] define verificacin como
Validar un mtodo es bsicamente el proceso confirmacin, a travs de la aportacin de
para definir un requisito analtico, y la evidencias objetivas, de que se cumplen los
confirmacin de que cuenta con capacidades requisitos especificados. Esta es muy similar a
consistentes con las aplicaciones requeridas. la definicin de validacin dada en la Tabla 1. El
Inherente a esto est la necesidad de evaluar el VIM [7] establece que la verificacin es la
desempeo del mtodo. Es importante la aportacin de evidencia objetiva de que un
valoracin de la idoneidad del mtodo; en el elemento dado satisface los requisitos
pasado la validacin del mtodo se centraba solo especificados y que validacin es una
en la evaluacin de las caractersticas de verificacin, donde los requisitos especificados
desempeo. son adecuados para un uso previsto.
Las actividades de validacin de mtodos y el Un laboratorio puede adoptar un procedimiento
desarrollo de mtodos estn estrechamente validado que, por ejemplo, ha sido publicado
ligadas. Muchas de las caractersticas de como una norma, o adquirir un sistema de
desempeo (Tabla 2) que se evalan durante la medida completo y emplearlo para una
validacin, tambin lo son en mayor o menor aplicacin especfica a partir de un desarrollo
medida, durante el desarrollo del mtodo. Sin comercial. En ambos casos el trabajo de
embargo, es importante recordar que debe validacin bsica se ha realizado, pero el
realizarse la validacin formal de la versin final laboratorio debe confirmar su capacidad para
del mtodo (el procedimiento documentado). aplicar el mtodo. Esta es la verificacin. Esto
Algunos sectores utilizan los conceptos de implica que debe realizarse algn trabajo
validacin primaria y validacin secundaria, experimental para demostrar que el mtodo
esta ltima con el sentido de verificacin [19]. funciona adecuadamente en el laboratorio. Sin
Los conceptos de cualificacin y confirmacin embargo, la carga de trabajo es probable que sea
metrolgica [20] tambin cubren el sentido de considerablemente menor en comparacin con la
verificacin (Tabla 1). validacin de un mtodo que se ha desarrollado
internamente. Los trminos validacin y
verificacin se discuten en detalle en la Gua
Eurachem sobre terminologa en las medidas
analticas [8].
Tabla 1 Definiciones del concepto de validacin en ISO 9000, ISO/IEC 17025 y VIM
Definicin Referencia
confirmacin, a travs de la aportacin de evidencia objetiva, de que se han cumplido ISO 9000 [9]a
los requisitos para un uso o aplicacin especfico previsto
confirmacin, a travs del examen y aportacin de evidencias objetivas, de que se ISO/IEC 17025 [1]
cumplen los requisitos particulares para un uso especfico previsto
verificacin, donde los requisitos especificados son adecuados para un uso previsto VIM [7]b
a
ISO 9000 define proceso de calificacin , como el proceso para demostrar la capacidad de cumplir los
requisitos especificados
b
VIM define verificacin como aportacin de evidencia objetiva de que un elemento dado satisface los
requisitos especificados

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Tabla 2 Informacin general sobre las caractersticas de desempeo evaluadas


habitualmente durante la validacin del mtodo
Caractersticas de desempeo
Selectividad
Lmite de deteccin (LOD) y lmite de cuantificacin (LOQ)
Intervalo de trabajo
Sensibilidad analtica
Veracidad
Sesgo, recuperacin
Precisin
repetibilidad, precisin intermedia y reproducibilidad
Incertidumbre de medidaa
Robustez
a
En sentido estricto, la incertidumbre de medida no es una caracterstica del desempeo de un procedimiento
de medida particular pero s de los resultados obtenidos al usar dicho procedimiento.

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3 Por qu es necesario validar un mtodo?


3.1 Importancia de la medicin Para un resultado analtico, ser apto para su uso
analtica implica que ste debe ser lo suficientemente
Millones de pruebas, mediciones y exmenes se fiable para que cualquier decisin basada en l,
hacen cada da en miles de laboratorios de todo pueda ser tomada con confianza. Debe validarse
el mundo. Hay innumerables razones que las el desempeo de un mtodo y estimar la
sustentan, por ejemplo para valorar bienes con incertidumbre del resultado, para un determinado
fines comerciales; apoyar la asistencia sanitaria; nivel de confianza. La incertidumbre se debe
controlar la calidad de agua potable, alimentos y evaluar y citar de tal manera que sea
piensos; analizar la composicin elemental de ampliamente reconocida, internamente
una aleacin para confirmar su idoneidad para su consistente y fcil de interpretar [21].La mayor
uso en la construccin de aviones; el anlisis parte de la informacin requerida para evaluar la
forense de los fluidos corporales en las incertidumbre puede ser obtenida durante la
investigaciones criminales. Prcticamente todos validacin del mtodo. Este tema se aborda
los aspectos de la sociedad se apoyan, de alguna brevemente en la Seccin 6.7 y en ms detalle en
manera, en el trabajo analtico. la Eurachem / CITAC Gua de Cuantificacin de
la Incertidumbre en Mediciones Analticas [22].
El coste de llevar a cabo estas mediciones es alto
y pueden surgir costes adicionales en base a las Independientemente de la bondad de un mtodo
decisiones tomadas a partir de los resultados. Por y de uso rutinario, un problema analtico puede
ejemplo, los ensayos que demuestren que los ser resuelto mediante el anlisis de muestras slo
alimentos son no aptos para el consumo pueden si stas son adecuadas. Tomar las muestras
derivar en indemnizaciones por reclamacin; los apropiadas es un trabajo especializado, que
ensayos que confirman la presencia de sustancias requiere de una comprensin del problema y su
prohibidas pueden generar sanciones relacin qumica. Un laboratorio debe, siempre
econmicas, encarcelamiento o incluso, en que sea posible, ofrecer asesoramiento al cliente
algunos pases, la ejecucin. Est claro que es sobre la toma de muestras como parte de su
importante hacer una correcta medicin y ser atencin al cliente. Es evidente que habr
capaz de demostrar que el resultado es correcto. ocasiones en las que el laboratorio no pueda
realizar o influir en la toma de las muestras. En
3.2 El deber profesional del qumico estos casos, los resultados de los anlisis tendrn
analtico que ser informados haciendo clara mencin a
Si el resultado de un anlisis no genera esta situacin.
confianza, entonces tiene poco valor y el anlisis Nos hemos centrado esencialmente (y con razn)
puede mejor no llevarse a cabo. Cuando los en el objetivo general de realizar la validacin de
clientes solicitan trabajos analticos a un un mtodo, es decir, demostrar que los mtodos
laboratorio, se supone que el laboratorio tiene un son adecuados al uso previsto. Sin embargo,
grado de conocimiento tcnico que los clientes hay que reconocer que un estudio de validacin
no tienen. El cliente espera confiar en los del mtodo proporciona beneficios adicionales al
resultados recibidos y, por lo general, slo los laboratorio que lo realiza. Proporciona un
cuestiona cuando surge una controversia. As, el conocimiento slido y experiencia en los detalles
laboratorio y su personal tienen la prcticos para llevar a cabo el mtodo,
responsabilidad de brindar confianza al cliente, incluyendo el conocimiento de las etapas crticas
proporcionando una respuesta correcta a la parte del proceso. La validacin da al laboratorio y sus
analtica del problema, en otras palabras, empleados una mayor confianza en sus propios
demostrar la adecuacin al uso. Implcitamente resultados.
los ensayos llevados a cabo son apropiados para
responder a la parte analtica del problema que el 3.3 Desarrollo de mtodos
cliente desea resolver, y el informe final presenta El trabajo de validacin est precedido de una
los datos analticos de tal manera que el cliente fase de desarrollo que incluye a diferentes
pueda comprender fcilmente y sacar las miembros del personal y que puede realizarse de
conclusiones pertinentes. La validacin del varias formas.
mtodo permite a los qumicos demostrar que un
Por un lado, puede implicar la adaptacin de un
mtodo es 'adecuado para el uso previsto.
mtodo ya existente realizando cambios menores
VM 2016 10
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

para adecuarlo a una nueva aplicacin. Por conocimiento y experiencia para idear un mtodo
ejemplo, un mtodo para determinar tolueno en adecuado. Esto implica claramente mucho ms
agua puede ser adaptado a partir de un mtodo trabajo y ms dudas sobre la idoneidad del
establecido para el benceno en agua. La matriz es mtodo final. No es inusual para el desarrollo del
la misma, y los dos analitos tienen propiedades mtodo trabajar con varias ideas
muy similares. Es probable que los mismos simultneamente antes de elegir finalmente la
principios de separacin, identificacin, ms adecuada.
cuantificacin que se aplican al benceno tambin
A pesar del esfuerzo invertido en el desarrollo
puedan ser aplicables al tolueno. Si, por el
del mtodo, no hay ninguna garanta de que el
contrario, se requiere un mtodo para determinar
mtodo vaya a funcionar adecuadamente durante
el benceno en el suelo, la adaptacin del mtodo
la validacin (o bajo condiciones de rutina en un
de benceno en agua puede no ser la mejor
laboratorio particular). Al implicar a diferente
opcin. La adaptacin de algn otro mtodo para
personal en la fase de desarrollo y de validacin,
la determinacin de materia orgnica en el suelo
se puede comprobar que las instrucciones (del
puede ser un mejor punto de partida.
procedimiento de medicin) se entienden y se
Por otro lado, el qumico analtico puede aplican.
comenzar a esbozar algunas ideas y aplicar su

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4 Cundo debe validarse o verificarse un mtodo?


4.1 Validacin de un mtodo 4.2 Verificacin de un mtodo
Un mtodo debe ser validado cuando es Para los mtodos normalizados, tales como los
necesario demostrar que sus caractersticas de publicados por, ejemplo, ISO o ASTM, no es
desempeo son adecuadas para el uso previsto. necesario validar el mtodo utilizado por el
Por ejemplo, se indica en el apartado 5.4.5.2 de laboratorio. Sin embargo, el laboratorio necesita
la Norma ISO/IEC 17025 [1] que el laboratorio verificar el desempeo del mtodo como se
debe validar: detalla en la norma ISO/IEC 17025 apartado
5.4.2:
mtodos no normalizados;
... El laboratorio debe confirmar que puede
mtodos diseados/desarrollados por el operar adecuadamente los mtodos
laboratorio; normalizados antes de introducir los ensayos o
mtodos normalizados usados fuera de su calibraciones.
mbito de aplicacin; Tambin es necesaria la verificacin cuando hay
ampliaciones o modificaciones de mtodos cambios importantes, como el uso de un equipo
normalizados. nuevo (pero similar), traslado de equipos, etc.
La validacin debe ser tan amplia como sea En los laboratorios clnicos la mayor parte de los
necesaria para cumplir con los requisitos en ensayos se realizan con procedimientos
relacin con el uso dado o la aplicacin [23].La comerciales previamente validados por los
extensin (alcance) de la validacin depender fabricantes y que deben ser verificados por el
de la aplicacin, la naturaleza de los cambios usuario final [24]. La ISO 15189 [2] hace
realizados y de las circunstancias en que el hincapi en que los procedimientos de examen
mtodo se va a utilizar. usados sin modificaciones deben estar sujetos a
una verificacin independiente antes de ser
Tambin debe validarse cuando es necesario usados como mtodos de rutina. Tambin puede
demostrar la equivalencia de los resultados tenerse en cuenta la actualizacin del software de
obtenidos por dos mtodos, por ejemplo, un un equipo, o cuando los resultados de control de
mtodo recientemente desarrollado y un mtodo calidad indica que el desempeo del mtodo
normalizados existente. cambia con el tiempo.

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5 Cmo debe validarse un mtodo?


5.1 Quin debe validar un mtodo? validacin a partir de datos individuales del
laboratorio es el apropiado [12].
5.1.1 Estrategias para validar un
mtodo Los mtodos validados por un solo laboratorio
sern aceptables con fines regulatorios
Una vez finalizado el desarrollo inicial del
dependiendo de las directrices que cubre el rea
mtodo, el laboratorio debe documentar en
de medicin afectada. Normalmente debera ser
detalle el procedimiento de medicin (ver Anexo
posible obtener una declaracin poltica clara del
A). Este procedimiento documentado es el que se
organismo regulador correspondiente.
toma para la validacin formal del mtodo.
Existen dos estrategias fundamentales; el uso de 5.2 Extensin de los estudios de
resultados interlaboratorios y la validacin del validacin
laboratorio individual. En cualquier caso, es El laboratorio tiene que decidir cules son las
responsabilidad del laboratorio que utiliza el caractersticas de desempeo (ver Tabla 2 y
mtodo el asegurar la adecuacin al uso del Seccin 6) que deben ser investigadas para
mismo, considerando entonces la necesidad de validar el mtodo y, en algunos casos, el grado
ampliar los trabajos de validacin. de detalle para una caracterstica particular. El
protocolo de la IUPAC [12] enumera una serie
5.1.2 Resultados interlaboratorios de situaciones, que tienen en cuenta, entre otras
Hay un gran nmero de publicaciones sobre el cosas, el estado del mtodo y la competencia
uso de las comparaciones entre laboratorios, tcnica del laboratorio.
referidos como estudios colaborativos o
estudios cooperativos, como herramienta para Cuando el alcance del trabajo de anlisis est
validar mtodos. Existen numerosos protocolos bien definido y sus aplicaciones son similares en
relacionados con este tipo de validacin [25, 26, el tiempo, puede ser posible que una
27, 28], as como la familia de normas ISO 5725 organizacin o un sector puedan emitir guas
[29] reconocida como aplicable de forma generales para la extensin de las validaciones.
general. Si se est desarrollando un mtodo con En la Tabla 3 se muestra un ejemplo para el
un alcance amplio, a partir de un mtodo sector farmacutico.
normalizado disponible, puede preferirse el uso Se puede empezar con una cuidadosa descripcin
de un estudio colaborativo entre varios analtica en el alcance del procedimiento
laboratorios como forma de validacin. Un documentado (ver A.5 en el Anexo A) lo que
mtodo publicado validado por esta va proporcionara una buena base para planificar el
proporciona gran robustez. La informacin proceso de validacin; sin embargo en la
publicada contiene normalmente informacin prctica, esto no siempre es posible. La
sobre la precisin (repetibilidad, reproducibilidad evaluacin del desempeo del mtodo puede
o los correspondientes lmites de precisin) y, a verse limitada. As se reconoce en la ISO/IEC
veces, una estimacin del sesgo. Cuando un 17025, apartado 5.4.5.3 como La validacin es
mtodo ha sido validado por una organizacin siempre un equilibrio entre costos, riesgos y
internacional, como ISO, CEN o AOAC, el posibilidades tcnicas. El laboratorio debe
usuario solo necesita verificar los datos de hacerlo lo mejor posible, teniendo en cuenta las
desempeo publicados o establecer y confirmar limitaciones impuestas, los requisitos legales y
sus propios valores de desempeo del mtodo. de clientes, las experiencias y herramientas
Esta aproximacin reduce, adems, la carga de disponibles, (Seccin 5.4), y la necesidad de
trabajo del laboratorio para el uso del mtodo. compatibilidad metrolgica [7] con otros
mtodos similares en uso dentro o fuera del
5.1.3 A partir de datos individuales
laboratorio. Durante fase de desarrollo e
del laboratorio implementacin del mtodo pueden determinarse
No siempre los mtodos que pueda necesitar un algunas caractersticas de desempeo. Una
laboratorio se encuentran publicados como planificacin cuidadosa puede minimizar el
normas. Si el mtodo ha sido desarrollado para esfuerzo a realizar, ya que un conjunto de
usarlo por un solo laboratorio, por ejemplo, experimentos puede proporcionar informacin
porque no es de inters general o por que otros sobre diferentes caractersticas del mtodo.
laboratorios son competidores, el enfoque de
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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Tabla 3 Extensin de la validacin para cuatro tipos de aplicaciones analticas. Ejemplo para el sector
farmacutico [13]. x significa una caracterstica de desempeo que normalmente se valida
Tipo de aplicacin analtica

Caracterstica de desempeo Ensayo de Ensayo de Ensayo para Cuantificacin del


identificacin cuantificacin de lmite de component principal
impurezas impurezas
Selectividad x x x x
Lmite de deteccin x
Lmite de cuantificacin x
Intervalo de trabajo incluyendo x x
linealidad
Veracidad (sesgo) x x
Precisin (repetibilidad y x x
precisin intermedia)
NOTA La tabla se ha simplificado y adaptado a la estructura y terminologa de esta Gua.

Las implicaciones de las limitaciones discutidas descripcin del mtodo, as como la


anteriormente son particularmente crticas, informacin sobre el estado del mtodo (por
cuando el mtodo no va a ser utilizado de forma ejemplo, una norma internacional, un mtodo
rutinaria. El proceso de validacin de mtodos desarrollado internamente, etc.), el analito, el
que van a ser utilizado de forma rutinaria est mensurando, unidad de medida, el tipo de
relativamente bien definido. Los mismos muestra y el uso previsto. Si el muestreo y el
principios aplican claramente tanto para un submuestreo son parte del procedimiento de
anlisis ad hoc como para ensayos de rutina. Es medida deben ser validados. Incluso si estos
necesario contar con un adecuado nivel de pasos se llevan a cabo en otros lugares, es til
confianza en los resultados obtenidos. Establecer incluir informacin sobre ellos en el plan de
el equilibrio entre las limitaciones de tiempo y validacin/informe.
costes y la necesidad de validar el mtodo es Planificacin: Esta seccin debe describir el
difcil. En algunas circunstancias, puede ser ms propsito, por ejemplo, validacin completa
apropiado subcontratar los anlisis a otro de un nuevo mtodo, verificacin del
laboratorio en el que se realicen de manera desempeo de un mtodo normalizado,
rutinaria. extensin del alcance del mtodo, etc. Debe
indicarse la extensin de la validacin, por
5.3 Plan e informe de validacin
ejemplo, indicando las caractersticas de
Tanto los trabajos de validacin como la desempeo que van a evaluarse y los
informacin de sus resultados se realizarn requisitos asociados.
atendiendo a un procedimiento documentado. Caractersticas de desempeo: Esta seccin
El esquema del plan de validacin (protocolo de incluir una breve explicacin de las
validacin) y el informe de la validacin puede caractersticas de desempeo del mtodo,
establecerse en guas sectoriales (ver Seccin requerimientos especficos, descripcin de los
5.5). Las Entidades Nacionales de Acreditacin experimentos a realizar y la evaluacin de los
pueden establecer requisitos mnimos para esta resultados obtenidos. Deben declararse los
documentacin [23]. No obstante, un modelo resultados y conclusiones derivados de los
sencillo combinando el plan y el informe de experimentos. Cada caracterstica de
validacin puede incluir, por ejemplo, las desempeo se recoge en secciones separadas
siguientes secciones. del informe.
Resumen: La ltima seccin debe recapitular
Ttulo: En esta seccin debe identificarse el el trabajo de validacin y sus resultados.
mtodo, el momento y quin realiz la Pueden contemplarse adems actuaciones
validacin. Se debe dar una breve relacionadas con el uso rutinario del mtodo y
informacin sobre el alcance y una sencilla con requisitos de control de calidad interno y

VM 2016 14
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

externo. Y lo ms importante, debe realizarse mtodo. Tener en cuenta que esto es un


una declaracin sobre la adecuacin al uso del requisito en la ISO/IEC 17025 [1].
tener el mismo comportamiento sobre la matriz
en comparacin con el analito presente
5.4 Herramientas de validacin naturalmente. Por tanto, la estimacin del sesgo
5.4.1 Blancos por esta va puede resultar demasiado optimista.
El uso de diversos tipos de blancos permite La adicin no tiene que limitarse al analito de
evaluar cunta seal de medida es atribuible al inters. Se pueden adicionar otros componentes
analito y cunta a otras causas. Varios tipos de para medir el efecto de la adicin. As, se puede
blanco estn disponibles para el analista: fortificar la muestra con cantidades de variables
Blancos de reactivos*: Los reactivos de un interferente particular para evaluar la
utilizados durante el proceso analtico concentracin del interferente a la cual la
determinacin del analito se ve afectada
(incluyendo disolventes utilizados para
extraccin o disolucin) se analizan para negativamente. Obviamente, es necesario
identificar la naturaleza de la adicin.
determinar si contribuyen a la seal de la
medida. 5.4.4 Materiales pre-adicionados
Blancos de muestra. Se trata de Muestras Son materiales en los que el analito de inters
matriz sin presencia de analito, por ejemplo, puede ser bsicamente extrao, pero ha sido
muestra de orina humana sin frmaco incorporado en algn momento anterior al
especfico, o una muestra de carne sin residuo muestreo. El analito est as ms estrechamente
de hormonas. Los blancos de muestra pueden ligado en la matriz que en el caso de la adicin.
ser difciles de obtener, pero son necesarios El valor del analito depender de la cantidad de
para tener una estimacin ms real de las analito en contacto con el material, la tasa de
interferencias que pueden aparecer en un absorcin y prdida por efecto de la matriz y
anlisis de muestras de rutina. cualesquiera otras prdidas a travs del
5.4.2 Muestras de rutina metabolismo, desintegracin espontnea u otros
procesos qumicos o fsicos. La utilidad en la
Las muestras de rutina son tiles ya que
validacin de las muestras pre-adicionadas
proporcionan informacin sobre precisin,
depende de en qu medida el analito puede ser
interferencias, etc., que pueden aparecer durante
caracterizado. Son ejemplos de materiales pre-
el trabajo diario. Si se conoce adecuadamente el
adicionados:
analito contenido en el material a ensayo, se
puede realizar una evaluacin del sesgo de 1. Herbicidas en harina a partir de cereales
medida. El uso de un mtodo de referencia puede pulverizados con herbicidas durante su
proporcionar una estimacin precisa sobre el crecimiento;
contenido del analito, aunque estos mtodos no 2. Componentes activos en formulaciones
siempre estn disponibles. farmacuticas aadidos durante la fase de
formulacin.
5.4.3 Soluciones/material fortificado 3. Polvo de clara de huevo (de contenido
Son materiales o soluciones en los que el proteico conocido) aadido a una masa de
analito(s) ha sido adicionado a valores galleta antes de hornear para la investigacin
conocidos. Debe ponerse atencin en los valores de alrgenos.
de concentracin de modo que la adicin no
supere el intervalo de trabajo del mtodo. La 5.4.5 Patrones de medida
fortificacin con una cantidad conocida de En ingls, el trmino standard tambin hace
analito permite incrementar la respuesta del referencia a las normas o documentos escritos,
analito medido, calculando los valores en como por ejemplo las normas ISO. Al referirse a
trminos de cantidad aadida, an cuando el sustancias empleadas con fines de identificacin
valor absoluto del analito presente no se conozca o calibracin es preferible hablar de patrones de
ni antes ni despus de la adicin. Hay que tener medida o calibrantes [7]. Tradicionalmente se
en cuenta que la adicin de analito puede no identifican con soluciones de sustancias
individuales, pero en la prctica puede ser todo
*
Un blanco de reactivo aplicado a todo el aquello en lo cual ha sido caracterizado un
procedimiento analtico se llama a veces blanco de parmetro o propiedad particular y que puede
ensayo. emplearse como referencia metrolgica.

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Hay que distinguir entre material de referencia 5.6 Proceso de validacin de


(MR) y material de referencia certificado (MRC) mtodos
[7, 30] ya que su uso en el proceso de validacin Ante una necesidad particular de un cliente, el
es diferente (6.5.2). Los MR pueden ser laboratorio debe establecer en primer lugar el
cualquier material empleado como valor de requisito analtico que define las caractersticas
referencia, ya sean reactivos de laboratorio de de desempeo que el mtodo debe cumplir para
pureza conocida, productos qumicos industriales resolver la necesidad (Figura 1). Como respuesta
u otros dispositivos. La propiedad o analito debe a esos requisitos, el laboratorio necesita
ser estable y homognea pero no necesita contar identificar un mtodo existente adecuado, o si es
con el alto grado de caracterizacin, trazabilidad necesario desarrollar o modificar un mtodo.
metrolgica, incertidumbre y documentacin Hay que tener en cuenta que algunas normas
exigida a los MRC. legales obligan a seguir determinados mtodos.
La caracterizacin del parmetro de inters en un La Tabla 4 muestra preguntas tipo a la hora de
MRC se controla de manera ms rigurosa que un formalizar un requisito analtico (columna 1) y la
MR, y el valor caracterizado se certifica con un caracterstica correspondiente de desempeo del
documento que demuestra su trazabilidad mtodo que necesita ser evaluada (columna 2),
metrolgica y en el que se declara su para a partir de aqu, identificar y evaluar las que
incertidumbre. La caracterizacin se realiza correspondan frente al requisito analtico. El
empleando varios mtodos o con un proceso de validacin finaliza con una
procedimiento de medida primario, de modo que conclusin y declaracin del cumplimiento o no
se elimine o minimice cualquier sesgo. del requisito establecido. Si el requisito no se
cumple, el mtodo requiere un mayor desarrollo.
La evaluacin del sesgo requiere de un valor de
Este proceso de desarrollo y evaluacin se
referencia fiable, preferiblemente un MRC con la
mantiene hasta que el mtodo demuestra su
misma matriz y en concentraciones del analito
capacidad de cumplir el requisito.
similares a las muestras reales.
En realidad, no es habitual acordar de antemano
5.4.6 Estadstica con los clientes los requisitos analticos.
Las tcnicas estadsticas son esenciales para Normalmente, los clientes definen sus requisitos
agrupar los datos obtenidos y realizar un anlisis en trminos de tiempo y/o costes y desconocen
objetivo de las diferencias entre conjuntos de los requisitos tcnicos reales, aunque estos deben
datos (pruebas de significacin). Los analistas estar bien establecidos cuando se trata de
deben familiarizarse con los elementos bsicos mtodos que dan apoyo a un requisito
de la teora estadstica como ayuda para la reglamentario o al cumplimiento de una
evaluacin de la precisin, sesgo, rango lineal, especificacin. Por ejemplo, La Unin Europea
LOD, LOQ e incertidumbre de medida. En la (EU) ha publicado requisitos para los anlisis de
gua se incluyen varias referencias a libros de agua de consumo humano [36], para los anlisis
introduccin a la estadstica en qumica analtica relacionados con la directiva marco del agua
[5, 6, 31, 32, 33, 34]. [37], para la determinacin de los niveles de
5.5 Requisitos de validacin residuos de frmacos de uso veterinario en
alimentos de origen animal [38] y de residuos de
Los requisitos de cmo realizar la validacin de pesticidas en alimentos y piensos [39]. Sin
un mtodo pueden estar recogidos en guas embargo, es usual dejar a la discrecin del
sectoriales [13, 25, 35 por ejemplo]. Se analista la decisin del requisito de desempeo.
recomienda seguirlos, cuando estos requisitos Esto supone, muy a menudo, establecer el
existen. Esto permite asegurar que tanto la requisito en base a la capacidad conocida del
terminologa como la estadstica empleada se Mtodo (por ejemplo, tal y como se publica en
interpretan y aplican de manera consistente para mtodos normalizados, lo observado en ensayos
el sector en particular. El reconocimiento de un de aptitud (PT) o las estimaciones de modelos
mtodo como oficial puede requerir una matemticos como la funcin de Horwitz [40]).
caracterizacin mediante un estudio Limitaciones financieras pueden condicionar que
colaborativo. el desarrollo de un mtodo que satisfaga unos
requisitos analticos particulares sea
econmicamente viable, en cuyo caso debe
plantearse modificar los requerimientos o
repensar la justificacin de su puesta en rutina.
VM 2016 16
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Necesidad del cliente


a resolver.
Establecer requisitos
analticos

Identificar/modificar Evaluarel Continuar con el


un mtodo existente rendimiento del desarollo del
o desarrollar un mtodo mtodo
nuevo mtodo SI

El Revisin Es
mtodo se NO de NO factible un
adeca al requisitos desarrollo
uso? analticos? mayor?

SI SI NO
Edicin del informe Redefinir requisitos
de la validacin analticpos

Imposible utilizar el
Utilizar el mtodo
mtodo

Figura 1 El proceso de validacin de un mtodo: desde la necesidad del cliente hasta la decisin del
laboratorio sobre la idoneidad del mtodo. Nota: la validacin del mtodo comporta una fase en la que se
evala el desempeo del mtodo y se compara con los requisitos analticos. Independientemente de los
datos de desempeo existentes, la adecuacin al uso se determina por el comportamiento del mtodo al ser
utilizado por un analista autorizado con los medios y equipos disponibles.

VM 2016 17
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Tabla 4 Preguntas que pueden plantearse para formalizar un requisito analtico, y que relacionan las
caractersticas de desempeo con la seccin correspondiente en esta Gua
Pregunta Caracterstica de desempeo Seccin Nota
Hay restricciones en los recursos y cmo se aplican
el personal, el tiempo, el dinero, los equipos y los
reactivos, las instalaciones de laboratorio?
Se require muestreo y submuestreo (y se realiza por
el laboratorio)?
Hay limitaciones en el tamao o disponibilidad de
- - a)
la muestra?
Cul es la naturaleza qumica, biolgica y fsica de
la matriz?
El analito est disperso o localizado?

Se require una respuesta cualitativa o cuantitativa? Selectividad 6.1


LOD y LOQ 6.2
Cules son los analitos de inters presentes y los Selectividad 6.1
niveles probables (%,g g-1, ng g-1, etc)? Estn LOD y LOQ 6.2
presentes en ms de una forma qumica (i.e. estados Intervalo de trabajo y linealidad 6.3
de oxidacin, estereoismeros), y es necesario
distinguir entre las diferentes formas?
Qu magnitud requiere ser medida (el Recuperacin 6.5
mesurando)? Interesa medir la concentracin total
del analito presente o la cantidad extrada bajo
condiciones concretas?
Qu veracidad y precisin se requieren? Cul es la Veracidad y recuperacin 6.5
incertidumbre objetivo y como debe expresarse? Repetibilidad, precisin
6.6 b)
intermedia, reproducibilidad
Incertidumbre 6.7
Cules son las interferencias ms probables del Selectividad 6.1
analito(s)?
Se han establecido tolerancias para los parmetros Robustez 6.8
crticos de desempeo del anlisis (i.e. tiempo de c)
extraccin, temperatura de incubacin)?
Los resultados necesitan ser comparados con los de Incertidumbre 6.7
b)
otros laboratorios?
Los resultados necesitan ser comparados con Incertidumbre 6.7
b)
especificaciones externas?
a) No todos los elementos de requerimiento analtico enlazan directamente con los requisitos de validacin pero
determinan de forma ms general en qu medida son aplicables tcnicas particulares. Por ejemplo, pueden
emplearse diferentes tcnicas si el analito est disperso en la muestra o aislado en su superficie.
b) Un elemento esencial del requisito analtico es si es posible evaluar cundo un mtodo es adecuado al uso
previsto, por lo que debe incluir la incertidumbre estimada expresada como incertidumbre estndar o
incertidumbre expandida.
c) Los procedimientos normalizados publicados generalmente han demostrado ser rigurosos en el alcance del
procedimiento, es decir, tipos de matriz e intervalo de trabajo. Por lo tanto, la verificacin del laboratorio
para la aplicacin de estos procedimientos normalmente no necesita incluir robustez.

VM 2016 18
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

6 Caractersticas de desempeo de los mtodos


6.1 Selectividad No es inusual que ambos efectos proporcionales
y traslacionales se encuentren presentes
6.1.1 Trminos y definiciones simultneamente. El mtodo de adiciones
La selectividad analtica se relaciona con el estndar solo permite corregir los efectos
grado en el que un mtodo puede ser utilizado proporcionales.
para determinar analitos particulares en mezclas
o matrices sin interferencias de otros 6.1.3 Evaluacin de la selectividad
componentes de comportamiento similar [41]. La selectividad de un procedimiento debe ser
establecida para mtodos desarrollados
Las definiciones encontradas en diversos
internamente en el laboratorio, mtodos
documentos [7, 18, 42] concuerdan relativamente
adaptados de la literatura cientfica y mtodos
con esta interpretacin. Si bien IUPAC publicados por organismos de estandarizacin
recomienda el trmino selectividad, algunas
utilizados fuera del alcance especificado en el
reas, p. ej. el sector farmacutico [13], utiliza
mtodo estndar. Cuando los mtodos publicados
especificidad o especificidad analtica. Este
por organismos de normalizacin son aplicados
ltimo trmino es recomendado para evitar
dentro de su alcance, la selectividad usualmente
confusin con especificidad diagnstica, tal habr sido estudiada como parte del proceso de
cual se utiliza en medicina de laboratorio [43].
normalizacin.
6.1.2 Efectos de las interferencias Generalmente, la selectividad de un mtodo se
En general, se puede decir que los mtodos investiga estudiando su habilidad de medir el
analticos consisten de una etapa de medicin, la analito de inters en muestras a la cuales se le
cual puede o no ser precedida por una etapa de agregaron intencionalmente interferencias
aislamiento. En la etapa de medicin, especficas (aquellas que se considere probable
normalmente no se mide la concentracin de un de encontrar en las muestras). En aquellos casos
analito directamente. En su lugar, se cuantifica donde no est claro si las interferencias ya estn
una propiedad especfica (p. ej. la intensidad de presentes o no, la selectividad del mtodo puede
la luz). Por lo tanto, es crucial establecer que la ser investigada estudiando su habilidad de medir
propiedad medida slo se debe al analito y no a el analito comparado con otros mtodos
algo qumica o fsicamente similar, o que surja independientes. El Ejemplo 1 y el Ejemplo 2
como una coincidencia, causando as un sesgo en junto con la Referencia Rpida 1 ilustra
el resultado de medicin. Puede ser necesario consideraciones prcticas sobre la selectividad.
que la etapa de medicin sea precedida por una
etapa de aislamiento para mejorar la selectividad Las tcnicas de confirmacin pueden ser tiles
de un sistema de medicin. como medio para verificar identidades. Cuanta
mayor cantidad de evidencia pueda recaudarse,
Las interferencias pueden causar un sesgo al mejor. Inevitablemente, es necesario alcanzar un
exacerbar o disminuir la seal atribuida al equilibrio entre el costo y tiempo invertido en la
mensurando. Usualmente, el grado en el que identificacin del analito y la confianza con la
ocurre este efecto para una matriz particular es que uno decide si la identificacin se efectu
proporcional a la seal y por lo tanto, en correctamente.
ocasiones es denominado efecto proporcional.
Esto cambia la pendiente de la funcin de Mientras que la evaluacin de repetibilidad
calibracin pero no la ordenada en el origen. Este requiere que la medicin se repita varias veces
efecto es tambin denominado rotacional [44]. por una misma tcnica, la confirmacin de la
identidad de un analito requiere que la medicin
Un efecto traslacional o fijo surge a partir de se realice por varios mtodos, preferentemente
una seal producida por interferencias presentes independientes. La confirmacin incrementa la
en la solucin de estudio. Por lo tanto, es confianza de la tcnica en examen y es
independiente de la concentracin del analito. especialmente til cuando la tcnica
Usualmente, se le refiere como interferencia de confirmatoria opera bajo principios
fondo o lnea de base. Afecta a la ordenada significativamente diferentes. En algunas
en el orgien en una funcin de calibracin, pero aplicaciones, por ejemplo, el anlisis de
no su pendiente. compuestos orgnicos desconocidos por
cromatografa gaseosa, el uso de tcnicas
VM 2016 19
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

confirmatorias es esencial. Cuando el mtodo de analito pueda existir en la muestra en ms de una


medicin en evaluacin es altamente selectivo, el forma, como ser: ligada o no, inorgnica u
uso de otras tcnicas confirmatorias puede no ser organometlica, o en diferentes estados de
necesario. oxidacin. En ese caso, la definicin del
mensurando es crtica para evitar confusin.
Un aspecto importante de la selectividad que
debe ser considerado es el caso en el que un

Ejemplo 1 Cromatografa. Un pico en un Ejemplo 2 Espectroscopia. En espectroscopia


cromatograma puede ser identificado como infrarroja, la identificacin de compuestos
correspondiente al analito de inters basndose en desconocidos puede realizarse comparando seal
que un MR conteniendo este analito genera una seal de absorbancia (es decir picos) en el espectro del
en el mismo punto en el cromatograma. Pero, la analito con espectros de referencia almacenados en
seal se debe al analito o a algo ms que una biblioteca espectral. Una vez que se considere
incidentemente co-eluye, es decir un efecto fijo? Es que la identificacin se realiz correctamente, se
posible que cualquiera de estas opciones sea cierta o debera grabar el espectro de un MR del analito
incluso ambas. La identificacin del analito con exactamente las mismas condiciones que la
nicamente por este medio es poco confiable y por lo muestra de estudio. Cuanta mayor cantidad de
tanto se necesita evidencia complementaria. Por picos coincidan entre el analito y el MR, mayor
ejemplo, la separacin cromatogrfica podra confianza se puede tener en que la identificacin se
repetirse usando una columna de polaridad distinta, realiz correctamente. Adicionalmente sera
empleando un principio de separacin diferente para beneficioso examinar como vara la forma del
establecer si la seal y la seal generada por el MR espectro en funcin de cmo se aisl y prepar el
continan apareciendo al mismo tiempo. Cuando un analito para el anlisis por infrarrojo. Por ejemplo,
pico se debe a ms de un compuesto, una columna de si el espectro se grab en un disco de sal, la
polaridad diferente puede ser una buena forma de distribucin de tamao de partcula de la muestra
separar estos compuestos. En muchos casos, los en el disco puede influenciar la forma del espectro.
instrumentos de espectrometra de masas modernos
pueden ofrecer una gran selectividad, p. ej.
cromatografa gaseosa o lquida con deteccin por
espectrometra de masas.

Referencia Rpida 1 Selectividad

Cuntas Qu calcular/determinar a partir de la


Qu hacer Comentarios
veces informacin

Analice muestras de 1 Use los resultados de las tcnicas Decida qu cantidad


ensayo y MR por el confirmatorias para evaluar la capacidad razonable de informacin
mtodo candidato y del mtodo para confirmar la identidad adicional es necesaria para
otros mtodos del analito y su capacidad para medir el conferir suficiente
independientes. analito aislado de otras interferencias. confiabilidad.
Analice muestras de 1 Examine el efecto de las interferencias. Si la deteccin o
ensayo conteniendo La presencia de la interferencia inhibe cuantificacin es inhibida por
varias interferencias la deteccin y cuantificacin de los las interferencias, ser
sospechadas en la analitos? necesario continuar con el
presencia de los desarrollo del mtodo.
analitos de inters.

6.2 Lmite de deteccin y lmite de ser necesario establecer un valor de resultado que
cuantificacin es considerado un nivel de analito
significativamente diferente de cero.
6.2.1 Trminos y definiciones Regularmente, alguna accin es requerida a este
Cuando las mediciones se realizan a nivel, tal como declarar un material
concentraciones bajas, existen tres conceptos contaminado. Este nivel es conocido como
generales a considerar. En primer lugar, puede

VM 2016 20
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valor crtico, lmite de decisin, o segn deteccin del mtodo, por lo que ser el enfoque
directivas de la UE, CC [38]. para esta Gua.
En segundo lugar, es importante conocer la Los siguientes prrafos describen la estimacin
concentracin ms baja del analito que puede ser experimental de LOD y LOQ. La base estadstica
detectada por el mtodo a un nivel de confianza para el clculo del LOD es suministrada en el
especificado. Es decir, a qu concentracin real Anexo B. Dado que ambos el LOD y LOQ
se exceder con seguridad el valor crtico dependen de la precisin en, o cerca de, cero, la
descrito anteriormente? Los trminos como Seccin 6.2.2 primero describe la estimacin
lmite de deteccin (LOD), valor mnimo experimental de la desviacin estndar de
detectable, o, en las directivas de la UE, CC resultados cercanos a cero.
[38], son utilizados para este concepto.
6.2.2 Determinacin de la desviacin
En tercer lugar, es adicionalmente importante estndar a niveles bajos
establecer el nivel ms bajo en el cual el Ambos LOD y LOC normalmente se calculan
multiplicando una desviacin estndar () por
desempeo es aceptable para una aplicacin
tpica. Este tercer concepto usualmente es
un factor adecuado. Es importante que esta
referido como el lmite de cuantificacin (LOQ)
* desviacin estndar sea representativa de la
.
precisin obtenida para muestras de ensayo
La terminologa relacionada con estos conceptos tpicas, y que se realicen suficientes rplicas de

En esta seccin, la desviacin estndar  se basa


es muy diversa y vara entre sectores. Por medicin para brindar una estimacin confiable.
ejemplo, los trminos lmite de deteccin
(LOD) o lmite detectable (LD) previamente en la desviacin estndar s0 para un nico
no eran generalmente aceptados, aunque se resultado cerca de cero, ajustado por cualquier
utilizaran en algunos documentos sectoriales [13, promedio o correccin por blanco utilizado en la
38]. Sin embargo, ahora estn incluidos en el prctica (vase abajo). Se discuten planteos
VIM [7] y la IUPAC Gold Book [17]. ISO utiliza alternativos en la Seccin 6.2.5.
como trmino general valor mnimo detectable
Los siguientes puntos deberan ser considerados
de la variable en estado neto lo cual se traduce
en el momento de determinar LOD y LOQ en un
para qumica como la concentracin neta
experimento que consiste en una nica rplica.
mnima detectable [45, 46, 47, 48]. En esta Gua
los trminos valor crtico, lmite de deteccin Muestras adecuadas para estimar LOD y
(LOD) y lmite de cuantificacin (LOQ) son LOQ: Las muestras usadas deberan ser
utilizados para los tres conceptos anteriores. En preferentemente o bien a) muestras blanco, es
validacin de mtodos, comnmente se decir, muestras que no tengan cantidades
determinan el LOD y el LOQ. detectables de analito, o b) muestras de ensayo
con concentraciones de analito cercanas o por
Tambin es necesario distinguir entre el lmite de
debajo del LOQ esperable. Las muestras blanco
deteccin del instrumento y el lmite de
funcionan bien en mtodos en los cuales se
deteccin del mtodo. El lmite de deteccin del
obtiene una seal medible para un blanco, como
instrumento puede basarse en el anlisis de una
son la espectrofotometra y la espectroscopia
muestra, usualmente un blanco de reactivo,
atmica. Sin embargo, para tcnicas como la
sometido directamente al instrumento (es decir,
cromatografa que se basan en detectar un pico
omitiendo cualquier paso de preparacin de
por encima del ruido, se requieren muestras con
muestra), o en la relacin seal/ruido en p.ej. un
niveles de concentracin cercanas o por encima
cromatograma. Para obtener el lmite de
del LOD. Por ejemplo, estas pueden ser
deteccin de un mtodo, el LOD debe basarse en
preparadas mediante el fortificado de una
el anlisis de muestras que hayan sido sometidas
muestra blanco (vase Seccin 5.4). Cuando no
a todo el proceso de medicin obteniendo
se encuentran disponibles muestras blanco o
resultados calculados con la misma ecuacin que
muestras de ensayo con bajas concentraciones,
para las muestras de ensayo. El dato ms til
usualmente se pueden utilizar blancos de
para la validacin del mtodo es el lmite de
reactivo. Cuando estos blancos de reactivo no

*
Algunos sinnimos utilizados incluyen lmite de Existe confusin sobre la terminologa relacionada a
determinacin, lmite de reporte y lmite de los blancos para informacin adicional vase la
aplicacin. Seccin 5.4.1.

VM 2016 21
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

son sometidos a todo el proceso de medicin, y mismo valor de blanco lo cual se recomienda
se presentan directamente frente al instrumento, aqu por simplicidad la desviacin estndar de
los clculos basados en estas mediciones darn los resultados ser menor que la que se ver en la
como resultado el LOD/LOQ del instrumento. prctica cuando los resultados se corrijan por
diferentes valores de blanco obtenidos en
Cubrir el alcance del mtodo: Para aquellos
diferentes series. En este caso s0 debera ser
 
corregido multiplicndolo por  +
mtodos que cubren dentro de su alcance
 
matrices muy diversas, puede ser necesario donde n

determinar la desviacin estndar para cada
matriz por separado. es el nmero de rplicas de observaciones
promediadas cuando se dan resultados para los
Asegurr un replicado representativo: La que cada rplica es obtenida siguiendo la
desviacin estndar debera ser representativa del totalidad del procedimiento de medicin, y nb es
desempeo del mtodo tal como se aplica en el el nmero de observaciones blanco usadas para
laboratorio, es decir, la desviacin estndar debe calcular la correccin del blanco. Hay que
ser calculada basndose en resultados obtenidos considerar que bajo condiciones de precisin
cuando el anlisis se efecta exactamente de intermedia, los resultados se corregirn por
acuerdo a todo el procedimiento de medicin valores de blanco diferentes, por lo que no es
documentado, incluyendo cualquier paso de necesario corregir la desviacin estndar (vase

calcular la desviacin estndar  deberan


preparacin de muestra. Los valores usados para Seccin 6.2.5). El Ejemplo 3 ilustra estos
clculos y el diagrama de flujo en la Figura 2
informarse en las unidades de medicin resume las correcciones necesarias para el
especificadas en el procedimiento. promedio y la correccin del blanco.
Condiciones de medicin: La desviacin Ejemplo 3 Un ejercicio de validacin se basa en el
estndar se obtiene normalmente bajo anlisis de una muestra blanco. Diez (m) mediciones
condiciones de repetibilidad y este es el independientes de una muestra blanco se realizan bajo
procedimiento descrito en esta seccin. Sin condiciones de repetibilidad. El promedio de estos
embargo, se puede obtener una estimacin ms resultados tiene un valor de 2 mg kg-1 y una
confiable a partir del uso de condiciones de desviacin estndar s0 de 1 mg kg-1.
precisin intermedia. Este enfoque se discute con Caso 1- El procedimiento de medicin establece
mayor detalle en la Seccin 6.2.5. que las muestras de ensayo deberan ser medidas
Nmero de observaciones: El nmero de una vez (n=1) y que los resultados deberan
rplicas (m) debera ser suficiente para obtener corregirse por el resultado de una nica muestra
un estimado adecuado de la desviacin estndar. de blanco de muestra (nb=1). En una serie de
Tpicamente se consideran necesarias de 6 a 15 mediciones cada corrida consiste de una nica
rplicas; usualmente se recomiendan 10 rplicas rplica de muestras de rutina y una (nb) muestra
en procedimientos/protocolos de validacin blanco. Entonces, la desviacin estndar para
(vase Seccin 6.2.5.1). calcular LOD/LOQ, segn la Figura 2 es igual a:
   
Considerar el promedio: En varios  =   +  = 1 +  = 12 =1,4 mg kg-1
procedimientos de medicin se reporta el 

promedio de las rplicas durante el uso de rutina Caso 2 El procedimiento de medicin establece
del mtodo, donde cada replicado se obtiene que las muestras de ensayo deberan ser
siguiendo el procedimiento de medicin entero. analizadas por duplicado (n=2) y tambin que la
En este caso, la desviacin estndar de cada muestra blanco debera ser analizada por
resultado nico s0 debera ser corregida duplicado. En una serie de mediciones cada serie
dividindola por la raz cuadrada de n, donde n consiste en duplicados (n=2) de muestras de
es el nmero de rplicas promediadas en el uso rutina y dos (nb) muestras blanco. La
de rutina. concentracin obtenida para las muestras de
Considerar el efecto de correcciones por el rutina es corregida sustrayendo el valor promedio
blanco: Si se especifican correcciones por de los dos blancos de muestra. Entonces, la
blanco en el procedimiento de medicin, se debe desviacin estndar para calcular LOD/LOQ,
tener precaucin cuando se determina la segn la Figura 2 es igual a:
   
 =   +  = 1 +  = 1 mg kg-1
desviacin estndar utilizada para calcular LOD
o LOQ. Si todos los resultados obtenidos durante

el estudio de validacin fueron corregidos por el
VM 2016 22
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

A partir de resultados de m rplicas


de medida durante la validacin
calcular la desviacin estndar,

Los resultados se
SI
corregirn por el
blanco durante el
uso de rutina del
mtodo?

NO

Usar la desviacin estndar calculada,


, para calcular el LOD y LOQ

0 es la desviacin estndar estimada de m resultados individuales en o cerca de concentracin cero.


 es la desviacin estndar usada para calcular LOD y LOQ.
n es el nmero de rplicas de observacin promediadas cuando se informan resultados donde cada rplica es
obtenida siguiendo enteramente el procedimiento de medicin.
 es el nmero de observaciones de blanco promediadas cuando se calcula la correccin del blanco de acuerdo
al procedimiento de medicin.

Figura 2 Clculo de la desviacin estndar,  para ser usada en la estimacin de LOD y LOQ. El
diagrama de flujo comienza con una desviacin estndar experimental, s0 calculada a partir de los
resultados de rplicas de medicin bajo condiciones de repetibilidad en una muestra de concentracin
cercana a cero, ya sea sin correccin de blanco o con una correccin de blanco aplicada a todos los
resultados segn lo especificado por el mtodo. Esta correccin de blanco puede basarse en una
observacin de blanco o en un promedio de varias observaciones de blanco.

VM 2016 23
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

6.2.3 Estimacin del LOD 6.2.4 Estimacin del LOQ


Con el propsito de la validacin, normalmente El LOQ es el mnimo nivel de analito que puede
es suficiente con proveer un valor aproximado ser determinado con desempeo aceptable.
del LOD, es decir, el nivel en el cual la deteccin Desempeo aceptable es considerado de
del analito se vuelve problemtica. Para este diversas formas por diferentes guas incluyendo
propsito ser normalmente suficiente el enfoque precisin y veracidad, o incertidumbre de
de 3s mostrado en la Referencia Rpida 2. medicin [52].En la prctica, sin embargo, el
LOQ se calcula de acuerdo a la mayora de las
Cuando el trabajo ofrezca soporte para el
convenciones como la concentracin del analito
cumplimiento reglamentario o de
correspondiente a la desviacin estndar
obtenida () a niveles bajos multiplicada por un
especificaciones, se requiere un enfoque ms
exacto, en particular teniendo en cuenta los
factor, kQ. El valor por defecto para kQ es 10
grados de libertad asociados con s0. Esto se
segn IUPAC [49] y si la desviacin estndar es
describe en detalle por la IUPAC [49] y otros
aproximadamente constante a bajas
[50, 51]. Cuando el valor crtico y/o el LOD son
concentraciones este multiplicador corresponde a
usados para tomar decisiones, la precisin
una desviacin estndar relativa (RSD) de 10 %.
debera ser monitoreada y los lmites pueden
Los multiplicadores 5 y 6 tambin ha sido usados
necesitar ser recalculados de vez en cuando.
ocasionalmente lo cual corresponde a valores de
Diferentes sectores y/o reglamentaciones pueden
RSD de 20 % y 17 % respectivamente [53, 54].
usar diferentes enfoques en cuanto a la
Vase ms en la Referencia [8] y la Referencia
estimacin del LOD. Se recomienda que la
Rpida 3.
convencin usada se detalle cuando se cite un
lmite de deteccin. En ausencia de alguna lnea
sectorial para la estimacin de LOD, los
enfoques dados en la Referencia Rpida 2
pueden ser usados como tendencias generales.
Referencia Rpida 2 Lmite de deteccin (LOD)
Cuntas Qu calcular a partir de
Qu hacer Comentarios
veces los datos

estndar,  de los
a) Medidas replicadas de 10 Calcule la desviacin
muestras blanco, es decir

Calcule  a partir de 


matrices que no contengan resultados.
cantidades detectables del
analito. siguiendo el diagrama de
o flujo de la Figura 2.
Medidas replicadas de la
LOD = 3  .
Calcule LOD como
muestra de ensayo con una
baja concentracin del analito.
b) Medidas replicadas de 10 Calcule la desviacin El mtodo b) es aceptable cuando no es
blancos de reactivo. estndar,  de los posible obtener muestras blanco o
muestras de ensayo con una baja
Calcule  desde 
resultados.
o concentracin.

Medidas replicadas de blancos siguiendo el diagrama de Cuando estos blancos de reactivo no son
de reactivos fortificados con flujo de la Figura 2. sometidos a todo el procedimiento de
una baja concentracin del medicin, y se presentan directamente al

LOD = 3  .
analito. Calcule LOD como instrumento, los clculos resultarn en el
LOD del instrumento.
NOTAS
1) Para algunas tcnicas analticas, p. ej. Cromatografa, puede ser necesario fortificar muestras de ensayo conteniendo
una concentracin demasiado baja o blancos de reactivo, para obtener una desviacin estndar diferente de cero.
2) El procedimiento de medicin debera ser repetido enteramente para cada determinacin.

mbito de la seal, el LOD es la concentracin correspondiente a la seal del blanco $% + 3  .


3) La desviacin estndar se expresa en unidades de concentracin. Cuando la desviacin estndar se expresa en el

4) Un ejemplo corto de clculo de LOD en el mbito de la seal se proporciona tambin en la Referencia [5].

VM 2016 24
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Referencia Rpida 3 Lmite de cuantificacin (LOQ)

Cuntas Qu calcular a partir de


Qu hacer Comentarios
veces los datos

a) Medidas replicadas de 10 Calcule la desviacin El valor del multiplicador kQ


muestras blanco, es decir estndar,  de los usualmente es 10, pero se usan
matrices que no contengan resultados. comnmente otros valores como 5 o 6

Calcule  a partir de 


cantidades detectables del (basado en criterios de adecuacin al
analito. uso).
siguiendo el diagrama de
o
flujo de la Figura 2.
Medidas replicadas de la
muestra de ensayo con una
baja concentracin del Calcule LOD como
analito. LOQ = kQ  .
b) Medidas replicadas de 10 Calcule la desviacin El mtodo b) es aceptable cuando no
blancos de reactivo. estndar,  de los es posible obtener muestras blanco o
resultados. muestras de ensayo con una baja
o
Calcule  desde 
concentracin.
Medidas replicadas de
blancos de reactivos siguiendo el diagrama de
fortificados con una baja Cuando estos blancos de reactivo no
flujo de la Figura 2. son sometidos a travs de todo el
concentracin del analito.
procedimiento de medicin, y se
presentan directamente al
LOQ = kQ  .
Calcule LOD como
instrumento, los clculos resultarn en
el LOQ del instrumento.
NOTAS
1) Para algunas tcnicas analticas, p. ej. Cromatografa, puede ser necesario enriquecer muestras de
ensayo conteniendo una concentracin demasiado baja o blancos de reactivo, para obtener una
desviacin estndar diferente de cero.
2) El procedimiento de medicin debera ser repetido enteramente para cada determinacin.
3) La desviacin estndar se expresa en unidades de concentracin.

6.2.5 Procedimientos alternativos correccin del blanco mostrado en la Figura 2 no


Las secciones previas han descrito un mtodo es necesario. Por lo tanto la desviacin estndar
general para estimar LOD y LOQ, basado en la experimental obtenida a partir del control de

 a utilizar para calcular LOD y LOQ. La ISO


desviacin estndar de resultados en calidad interno es igual a la desviacin estndar
concentraciones cercanas a cero, obtenidas en
condiciones de repetibilidad. Este enfoque es 11843-2 [46] describe como el LOD de un
aplicado extensamente pero hay disponibles instrumento puede ser obtenido directamente de
procedimientos alternativos en otras normas y una curva de calibracin.
protocolos. 6.2.5.1 Fiabilidad de la estimacin del
En algunos casos, p. ej. cuando los valores de LOD y LOQ
blanco difieren significativamente entre das, las Debera tenerse en cuenta que an con las 10
condiciones de precisin intermedia son rplicas indicadas en la Referencia Rpida 2 y la
preferidas a las condiciones de repetibilidad. Por Referencia Rpida 3, las estimaciones de la
ejemplo, si se encuentran disponibles resultados desviacin estndar son inherentemente
de control de calidad para muestras de ensayo a variables. Por consiguiente, la estimacin de
niveles de concentracin bajos, la desviacin LOD/LOQ obtenida durante la validacin
estndar de estos resultados puede ser utilizadas debera ser tomada como un valor indicativo.
en la estimacin de LOD y LOQ. Cuando la Esto ser suficiente si se necesita una estimacin
desviacin estndar usada para calcular LOD y de LOD/LOQ simplemente para demostrar que
LOQ se obtiene bajo condiciones de precisin las concentraciones de las muestras se
intermedia, el ajuste para contemplar la encontrarn muy por encima del LOD/LOQ. En

VM 2016 25
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

casos donde se espere que las muestras de puede ser expresada como tasas de verdaderos y
laboratorio contengan concentraciones bajas del falsos positivos y negativos.
analito, el LOD/LOQ debera ser monitoreado
En un estudio de validacin la concentracin de
regularmente.
corte puede ser determinada estableciendo las
6.2.6 Capacidad de deteccin para tasas de falsos positivos y negativos en una
un anlisis cualitativo cantidad de niveles por encima y por debajo de la
Un anlisis cualitativo (Anexo D) involucra la concentracin de corte esperada. El lmite de
identificacin o clasificacin de substancias y es corte, las tasas de falsos negativos son bajos para
efectivamente una respuesta si/no a una concentraciones por encima del lmite con una
concentracin de corte dada para un analito probabilidad establecida, p. ej. 5%. Durante la
[55].Para mtodos cualitativos, la precisin no validacin, se evala el lmite de corte propuesto
puede ser expresada como una desviacin en el procedimiento documento. (Vase Ejemplo
estndar o desviacin estndar relativa, pero 4 y Referencia Rpida 4).

C (g L-1) No. de resultados


Ejemplo 4 Determinacin de la concentracin de corte
para un mtodo cualitativo con un nivel de corte positivos/negativos
indicado igual a 100 g L-1. Se registraron diez 150 10/0
observaciones a cada nivel. A partir de la curva que 130 10/0
representa la fraccin (en %) de resultados positivos 100 9/1
frente a la concentracin, fue posible determinar, por 75 5/5
inspeccin, la concentracin umbral a la cual el ensayo 50 1/9
se vuelve poco fiable. Con un criterio < 5 % de 20 0/10
resultados falso negativos, la concentracin de corte est 10 0/10
entre 100 y 130 g L-1

Referencia Rpida 4 Lmite de deteccin (LOD) para anlisis cualitativos

Cuntas
Qu hacer Qu calcular/determinar a partir de los datos
veces

Mida en orden aleatorio, muestras 10 Se debera construir una curva de respuesta de


blanco enriquecidas con el analito en porcentajes de resultados positivos o negativos frente
un intervalo de niveles de a la concentracin, de la cual ser posible determinar,
concentracin. por inspeccin, la concentracin umbral a la cual el
ensayo se vuelve poco confiable.

VM 2016 26
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

6.3 Intervalo de trabajo ensayo. La concentracin medida es el resultado


obtenido aplicando el procedimiento de medicin
6.3.1 Definicin (incluyendo cualquier preparacin de muestras)
El intervalo de trabajo* es el intervalo en el cual usando el instrumento calibrado de acuerdo con
el mtodo proporciona resultados con una el mtodo documentado.
incertidumbre aceptable. El extremo inferior del
intervalo de trabajo est determinado por el Durante la validacin, se debe evaluar tanto el
lmite de cuantificacin, LOQ. El extremo intervalo de trabajo del instrumento como el del
superior del intervalo de trabajo est definido por mtodo. Los datos sobre el intervalo de trabajo a
las concentraciones a las cuales se observan menudo se generan durante el desarrollo del
anomalas significativas en la sensibilidad mtodo. En tales casos, ser suficiente incluir
analtica. Un ejemplo de esto es el efecto meseta estos datos en el informe de validacin.
a altos valores de absorbancia en la 6.3.4 Evaluacin del intervalo de
espectroscopia UV/VIS. trabajo del instrumento
6.3.2 Consideraciones para el Entre el LOQ y el extremo superior del intervalo
estudio de validacin de trabajo del instrumento, la respuesta de ste
El intervalo de trabajo del mtodo que se va a sigue una relacin conocida, por ejemplo, lineal,
validar, debe indicarse en el alcance del curvilineal, etc. Durante la validacin, es
procedimiento documentado (ver A.5 del anexo necesario i) confirmar esta relacin, ii)
A). Durante la validacin, es necesario confirmar demonstrar que el intervalo de trabajo del
que el mtodo puede utilizarse en este intervalo. instrumento es compatible con el rango indicado
Para evaluar el intervalo de trabajo, el laboratorio en el alcance del mtodo, y iii) verificar que el
tiene que considerar tanto la linealidad del procedimiento de calibracin instrumental
mtodo como el procedimiento de calibracin propuesto (un solo punto, bracketing,
propuesto indicado en el mtodo. multipunto) sea adecuado.
Para evaluar el intervalo de trabajo del
6.3.3 Intervalo de trabajo del mtodo
instrumento y confirmar su aptitud para el uso, se
y del instrumento deberan estudiar patrones de calibracin con un
Muchos mtodos se basan en que la muestra de alcance de concentracin que sobrepase el rango
ensayo recibida en el laboratorio (la muestra de de concentracin esperado en 10 % o incluso
laboratorio) sea procesada (digerida, extrada, _20_% y graficar las seales (ver paso 1 de la
diluida) antes de que pueda presentarse al Referencia Rpida 5). Para un rango de 1 a
instrumento de medicin y se registre una seal. 100_mg L-1, 20 % indica de 0,8 a 120 mg L-1.
En estos casos, hay dos intervalos de trabajo. El Se deben espaciar uniformemente las
intervalo de trabajo del mtodo, dado en el concentraciones seleccionadas en el rango. La
alcance del mtodo (por ejemplo, seccin A.5 del evaluacin inicial del intervalo de trabajo se
anexo A), se relaciona con la concentracin de la realiza mediante una inspeccin visual de la
muestra de laboratorio. Se expresa, por ejemplo, curva de respuesta. El siguiente paso es
en mg kg-1 para una muestra de ensayo slida. confirmar la relacin entre la concentracin y la
El intervalo de trabajo del instrumento est respuesta del instrumento revisando las
definido en trminos de la concentracin de una estadsticas de regresin y el grfico de
muestra de ensayo procesada presentada al residuales del modelo elegido (por ejemplo,
instrumento para su medicin (por ejemplo, mg lineal, cuadrtico) (ver paso 2 de la Referencia
L-1 en una solucin despus de extraer la Rpida 5). La evaluacin tambin puede incluir
muestra). En la Figura 3A se da un ejemplo del medidas estadsticas especiales, tales como
intervalo de trabajo de un instrumento en el que pruebas de la bondad del ajuste [56, 57]. A
se representa la seal del instrumento en funcin partir de la curva de respuesta y las estadsticas
de las concentraciones de los patrones de de apoyo obtenidas en el intervalo de trabajo del
calibracin. En la Figura 3B se da un ejemplo del instrumento, el analista puede evaluar si el
intervalo de trabajo de un mtodo en el que se procedimiento de calibracin propuesto indicado
grafican la concentracin medida en funcin de en el mtodo es apropiado. Adems, esto se
las concentraciones conocidas de la muestra de determina evaluando el intervalo de trabajo del
mtodo.
*
El trmino del VIM [7] es intervalo de medicin o
intervalo de trabajo

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Intervalo de
trabajo
Intervalo lineal
Seal del instrumento

Concentracin medida
sensibilidad
analtica

Concentracin de los patrones utilizados para Concentracin de la muestra de ensayo


calibracin

Figura 3 A) Ejemplo tpico de una curva de respuesta obtenida con un mtodo instrumental. Se
identifican las caractersticas de desempeo intervalo de trabajo, intervalo lineal, sensibilidad
analtica, LOD y LOQ. B) Ejemplo tpico de una curva obtenida con un procedimiento de medicin en
el que se representa la concentracin medida en funcin de la concentracin de la muestra de ensayo.

6.3.5 Evaluacin del intervalo de El intervalo de trabajo y la linealidad del mtodo


trabajo del mtodo se evalan mediante una inspeccin visual del
Para evaluar el intervalo de trabajo del mtodo, grfico, con el apoyo de estadsticas y un grfico
1) muestras con concentraciones conocidas y de residuales de una regresin lineal.
blancos de muestra deberan estar disponibles; 2) La evaluacin del intervalo de trabajo se
las muestras utilizadas deberan someterse al sustentar con datos de estudios de precisin y
procedimiento de medicin completo; 3) las sesgo (ver Secciones 6.5.2 y 6.6.2.1), siempre
concentraciones de las diferentes muestras deben que estos estudios cubran las concentraciones en
cubrir, de preferencia, todo el rango de inters; y todo el intervalo de trabajo del mtodo.
4) el instrumento debera haber sido calibrado de
Se debe establecer el intervalo de trabajo del
acuerdo con el procedimiento de calibracin
mtodo para cada matriz cubierta en el alcance
propuesto. El resultado de medicin para cada
del mtodo. Esto se debe a que las interferencias
muestra de ensayo se calcula de acuerdo con el
pueden producir respuestas no lineales, y la
procedimiento documentado (ver el paso 3 en la
capacidad del mtodo para extraer/recuperar el
Referencia Rpida 5). Estos valores se grafican
analito puede variar con la matriz de la muestra.
en el eje y en funcin de las concentraciones
conocidas de las muestras (eje x) como en la
Figura 3B.

VM 2016 28
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Referencia Rpida 5 Intervalo de trabajo e intervalo lineal


Qu hacer Cuntas Qu calcular a partir de los datos Qu hacer
veces
1) Medir un blanco 1 Graficar la respuesta (eje y) en Esto dar una confirmacin visual de si
ms patrones de funcin de la concentracin (eje x). el intervalo de trabajo del instrumento
calibracin, a 6-10 es lineal o no.
Examinar visualmente para
concentraciones
identificar el rango lineal aproximado Nota: Cuando la seal no es
espaciadas
y los lmites superior e inferior del directamente proporcional a la
uniformemente en el
intervalo de trabajo del instrumento. concentracin, por ejemplo, al trabajar
rango de inters.
con pH u otros electrodos de in
Luego pasa a 2)
selectivo o mtodos inmunomtricos,
se requiere una transformacin de los
valores medidos antes de que se pueda
evaluar la linealidad.
2) Medir un blanco 1 Graficar la respuesta (eje y) en Esta etapa es necesaria para ensayar un
ms patrones de funcin de la concentracin (eje x). intervalo de trabajo, que se considere
calibracin, 2-3 veces Examinar visualmente para lineal y especialmente en el que el
a 6-10 determinar valores atpicos que quiz mtodo utilice una calibracin de dos
concentraciones no se reflejen en la regresin. puntos.
espaciadas
Calcular las estadsticas de regresin Si la desviacin estndar es
uniformemente en el
apropiadas. Calcular y graficar los proporcional a la concentracin,
rango lineal.
residuales (la diferencia entre el valor entonces considerar utilizar un clculo
observado de y y el valor calculado de regresin ponderado en vez de una
de y pronosticado por la lnea recta, regresin lineal no ponderada simple.
para cada valor de x). La distribucin
Es peligroso eliminar un valor atpico
aleatoria de residuales en torno a cero
sin verificarlo primero utilizando otras
confirma la linealidad. Las
mediciones a concentraciones cercanas.
tendencias sistemticas indican la no
linealidad o un cambio de varianza En ciertas circunstancias, para la
con el nivel. calibracin de instrumentos, puede ser
mejor tratar de ajustar una curva no
lineal a los datos. En ese caso, se debe
incrementar el nmero de muestras.
Por lo general, no se recomienda el uso
de funciones superiores a las
cuadrticas.
3) Calibrar el 1 Graficar la concentracin medida (eje Este paso se requiere para evaluar si el
instrumento de y) en funcin de la concentracin de rango propuesto del instrumento y el
acuerdo con el las muestras de ensayo (eje x). procedimiento de calibracin son aptos
procedimiento de para el uso.
Examinar visualmente para
calibracin propuesto.
identificar el rango lineal aproximado Si pueden encontrarse datos en estudios
Medir, de acuerdo con
y los lmites superior e inferior del de precisin y sesgo que cubren el
el mtodo
intervalo de trabajo. rango de inters, quizs no se requiera
documentado, un
otro estudio del intervalo de trabajo del
blanco ms materiales Calcular las estadsticas de regresin
mtodo.
de referencia o blancos apropiadas. Calcular y graficar los
de muestra residuales (la diferencia entre el valor
adicionados 2-3 veces observado de y y el valor calculado
a 6-10 concentraciones de y pronosticado por la lnea recta,
espaciadas para cada valor de x). La distribucin
uniformemente en el aleatoria de residuales en torno a cero
rango de inters. confirma la linealidad. Las tendencias
sistemticas indican la no linealidad.

VM 2016 29
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

6.4 Sensibilidad analtica ley de Beer-Lambert. Esto puede utilizarse


como una verificacin del desempeo del
6.4.1 Definicin instrumento, y a veces las normas exigen
La sensibilidad analtica es la variacin de la realizar dichas verificaciones [58].
respuesta del instrumento que corresponde a una
variacin de la magnitud medida (por ejemplo, 6.5 Veracidad
una concentracin de analito), es decir, el 6.5.1 Terminologa para describir la
gradiente de la curva de respuesta [7, 18]. Se calidad de medicin
recomienda utilizar el adjetivo analtica para
En esta Gua, utilizamos las tres caractersticas
evitar confusin con el trmino sensibilidad de
diagnstico utilizado en laboratorios de de desempeo relacionadas, veracidad, precisin
medicina [43]. A veces se utiliza el trmino e incertidumbre para describir la calidad de los
resultados obtenidos con un mtodo. Sin
sensibilidad para referirse al lmite de
deteccin, pero se desaconseja este uso en el embargo, los cientficos con frecuencia utilizan
diferentes conceptos, tales como tipos de error
VIM.
(errores aleatorios, sistemticos y groseros),
6.4.2 Aplicaciones exactitud (veracidad y precisin) e
La sensibilidad analtica no es una caracterstica incertidumbre. Algunos de estos conceptos
de desempeo muy importante. Sin embargo, tienen un significado cualitativo y otros son
existen al menos dos aplicaciones tiles: cuantitativos. Con los aos, los trminos as
como las definiciones han cambiado, y se han
1. A veces se conoce la sensibilidad analtica introducido nuevos trminos. Adems, sectores
terica. Muchos electrodos de in selectivo diferentes siguen prefiriendo trminos diferentes,
muestran un comportamiento Nernstiano, i.e., todo lo cual conduce a mucha confusin. La
se espera que la seal de un electrodo de Figura 4 ilustra las relaciones entre los trminos
vidrio que funcione bien, vare en 59 mV/pH. y se dan mayores detalles en el VIM [7] y la
2. En sistemas de medicin espectrofotomtrica, Gua Eurachem sobre terminologa [8].
se puede predecir la absorbancia a partir de la

Tipo de error Descripcin cualitativa Medida cuantitativa

error sistemtico veracidad sesgo

usesgo

error (total) exactitud incertidumbre

medidas de dispersin
error aleatorio precisin (s, RSD) en condiciones
especificadas

Figura 4 Ilustracin de las relaciones entre algunos conceptos fundamentales utilizados para describir la
calidad de los resultados de medicin (basada en el trabajo de Menditto et al. [59]).Una evaluacin de la
incertidumbre de acuerdo con GUM [21] supone una correccin por sesgo conocido y que la
incertidumbre de la correccin del sesgo usesgo est incluida en la declaracin final de incertidumbre. Esto
se infiere de la flecha punteada que aparece debajo del recuadro 'sesgo'. Tanto el concepto de exactitud
como el concepto de incertidumbre suponen que las mediciones se realizan de acuerdo con el
procedimiento documentado y que no se incluyen los efectos de los 'errores groseros' (equivocaciones).

VM 2016 30
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

( .)(
La exactitud de medicin expresa la  (%) = 100
(/01213
(Ec. 3)

donde   es el valor medio de la muestra


proximidad de un nico resultado a un valor de
referencia * [29, 48]. (para una definicin exacta,
ver VIM 2.13). La validacin de mtodos trata de adicionada y adicin es la concentracin aadida.
investigar la exactitud de los resultados
evaluando los efectos sistemticos y aleatorios Sin embargo, en algunos sectores de medicin
sobre resultados individuales. Por lo tanto, analtica, tambin se utiliza la recuperacin
normalmente la exactitud se estudia como dos relativa ('recuperacin aparente') en porcentaje
componentes: veracidad y precisin. Adems, [60].
(%) = 100 (Ec. 4)
una expresin cada vez ms comn de exactitud (
(*+,
es "incertidumbre de medicin', la cual
proporciona un solo valor. La evaluacin de Para determinar el sesgo utilizando un MR, se
veracidad se aborda a continuacin, mientras que determinan la media y la desviacin estndar de
la precisin se trata en la Seccin 6.6 y la una serie de mediciones repetidas y se comparan
incertidumbre, en la Seccin 6.7. los resultados con el valor asignado para la
propiedad del MR. El MR ideal es un material de
Veracidad de medicin es una expresin de la
referencia de matriz certificado con valores de
proximidad de la media de un nmero infinito de
las propiedades prximos a los de las muestras
resultados (producidos con el mtodo) a un valor
de ensayo de inters. Se acepta en general que
de referencia. Puesto que no es posible realizar
los MRC proporcionan valores trazables [61, 62].
un nmero infinito de mediciones, no se puede
Tambin es importante recordar que un
medir la veracidad. Sin embargo, podemos
determinado MR debera utilizarse nicamente
realizar una evaluacin prctica de la veracidad.
para un fin durante un estudio de validacin. Por
Por lo general, esta evaluacin se expresa
ejemplo, un MR usado para la calibracin no
cuantitativamente en trminos de 'sesgo'.
debera utilizarse para evaluar el sesgo.
6.5.2 Determinacin del sesgo En comparacin con la amplia variedad de tipos
Una determinacin prctica del sesgo se basa en de muestra y analitos que los laboratorios
la comparacin de la media de los resultados( x ) encuentran, la disponibilidad de MR es limitada,
del mtodo candidato con un valor de referencia pero es importante que el material seleccionado
adecuado ( xref ).*Existen tres enfoques sea apropiado para su uso. Puede ser necesario
generales: a) anlisis de materiales de referencia, considerar cmo fue caracterizado el MR, por
b) experimentos de recuperacin utilizando ejemplo, si el procedimiento de preparacin de
muestras adicionadas, y c) comparacin con muestras utilizado durante la caracterizacin del
resultados obtenidos mediante otro mtodo ver material no tiene por objeto dar la concentracin
Referencia Rpida 6. Los estudios de sesgo total del analito sino la cantidad extrada en
deben cubrir el alcance del mtodo y, por lo ciertas condiciones. Para trabajos normativos, se
tanto, pueden requerir el anlisis de diferentes debe utilizar un material certificado adecuado,
tipos de muestra y/o diferentes niveles de analito. idealmente de la misma matriz si est disponible.
Para lograr esto, se puede requerir una Para mtodos usados en trabajos internos a largo
combinacin de estos enfoques diferentes. plazo, se puede utilizar un material interno
estable para monitorear el sesgo, pero se debera
El sesgo puede expresarse en trminos absolutos utilizar un MRC en la evaluacin inicial.
& =  
(Ec. 1) En ausencia de MR adecuados, se pueden utilizar
o en trminos relativos en porcentaje estudios de recuperacin (experimentos con

&(%) = 100
( )(*+,
adiciones) para dar una indicacin del nivel de
(*+,
(Ec. 2) sesgo probable. Los analitos pueden estar
presentes en una variedad de formas en la
o como recuperacin relativa de adiciones muestra y a veces solo algunas de stas son de
inters para el analista. De este modo, el mtodo
puede disearse deliberadamente para determinar
solo una determinada forma del analito. La
incapacidad de un mtodo para determinar todo o
parte del analito presente puede reflejar un
*
A veces al valor de referencia se le denomina valor problema inherente al mtodo.
verdadero o valor convencionalmente verdadero.

VM 2016 31
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Por consiguiente, es necesario evaluar la En ambos casos, se comparan los resultados del
eficiencia del mtodo para detectar todo el mtodo candidato y del mtodo alternativo, para
analito presente [60, 63]. la misma muestra o muestras. La muestra o
muestras pueden ser MR internos, o simplemente
Debido a que por lo general no se conoce la
muestras de ensayo tpicas. La ventaja de este
cantidad de un determinado analito que est
enfoque es que los materiales no tienen que ser
presente en una porcin de ensayo, es difcil
MRC puesto que el mtodo alternativo
estar seguro de cunto xito ha tenido el mtodo
proporciona el valor de referencia. Por lo tanto,
para extraer el analito de la matriz de muestra.
se puede poner a prueba el mtodo en muestras
Una forma de determinar la eficiencia de
'reales' que sean representativas de las que el
extraccin es adicionar porciones de ensayo con
laboratorio encontrar de manera rutinaria.
el analito en diferentes concentraciones, luego
extraer las porciones de ensayo adicionadas y
medir la concentracin del analito. El problema
inherente a este proceso es que el analito
introducido de esta manera probablemente no
estar tan fuertemente ligado como el que est
naturalmente presente en la matriz de la porcin
de ensayo y, por lo tanto, la tcnica dar una
falsa impresin de una alta eficiencia de
extraccin.
Puede ser posible evaluar el sesgo comparando
los resultados del mtodo candidato con los
obtenidos de un mtodo alternativo. Pueden
encontrarse dos tipos generales de mtodo
alternativo - un mtodo de referencia o un
mtodo que actualmente se utiliza de manera
rutinaria en el laboratorio. Un mtodo de
referencia tiene por objeto proporcionar un valor
de referencia aceptado para la propiedad medida
y por lo general dar resultados con una menor
incertidumbre que el mtodo candidato. Un
determinado tipo de mtodo de referencia es un
mtodo primario.* El segundo caso se presenta
cuando el propsito de la validacin es demostrar
que el mtodo candidato da resultados que son
equivalentes a los de un mtodo existente. Aqu
el objetivo es establecer que no hay un sesgo
significativo en relacin con los resultados
generados por el mtodo existente (aunque este
mtodo por s mismo puede estar sesgado).

*
Mtodo primario: un mtodo que tiene las
cualidades metrolgicas ms altas, cuyo
funcionamiento se describe completamente y se
entiende en trminos de unidades SI y cuyos
resultados son aceptados sin referencia a un patrn de
la misma magnitud (CCQM). El trmino
correspondiente del VIM (ver 2.8 en [7 es
procedimiento de medicin de referencia primario

VM 2016 32
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Referencia Rpida 6 Veracidad


Qu hacer Cuntas Qu calcular a partir de los Comentarios
veces datos
Comparar el valor medio,  con
el valor de referencia ref para el
a) Medir el MR 10 Da una medida del sesgo tomando en
utilizando el mtodo cuenta los efectos del sesgo del
candidato. MR. Calcular el sesgo, b, el mtodo y del laboratorio.
sesgo relativo en porcentaje, b
(%) o la recuperacin relativa en
porcentaje (recuperacin
aparente).

& =  

 x

&(%) =


100


(%) = 100


valor medio de adiciones  y el


b) Medir blancos de 10 Comparar la diferencia entre el Se deben comparar las muestras

valor medio  , con la


matriz o muestras de adicionadas con la misma muestra no
ensayo no adicionada para evaluar la
adicionadas y concentracin aadida xadicin. recuperacin neta de la adicin.
adicionadas con el Calcular la recuperacin relativa
Las recuperaciones a partir de
analito de inters en de adiciones R (%) a las
muestras adicionadas o blancos de
un intervalo de diferentes concentraciones:
matriz generalmente sern mejores
  
concentraciones.

(%) = 100
que para muestras de rutina en las

adicin
cuales el analito est ms fuertemente
ligado.

c) Medir el 10 c) Medir el MR/muestra de Da una medida del sesgo en relacin


MR/muestra de ensayo utilizando el mtodo con el mtodo alternativo. El mtodo
ensayo utilizando el candidato y el mtodo alternativo puede ser un mtodo de
mtodo candidato y alternativo referencia o, si la intencin es

& =  

el mtodo sustituir un mtodo por otro y hace
alternativo. falta demostrar el desempeo

 x6

equivalente, un mtodo utilizado
&(%) =
actualmente en el laboratorio.


100
El mtodo alternativo por s mismo

puede estar sesgado, en cuyo caso el
(%) = 100


experimento no dar una medicin
absoluta de la veracidad.

NOTA El sesgo puede variar con la matriz y el nivel de concentracin, lo cual significa que el nmero de
matrices y niveles de concentracin que se va a examinar, debe indicarse en el plan de validacin.

VM 2016 33
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

6.5.3 Interpretacin de las utilizar materiales alternativos, pero debera tener


mediciones de sesgo cuidado de considerar cualquier diferencia
La Figura 5 muestra dos componentes del sesgo, conocida entre el mtodo objeto de investigacin
denominados aqu sesgo del mtodo y sesgo y el mtodo o mtodos utilizados para obtener el
del laboratorio. valor de referencia cuando interpreta los
resultados.
El sesgo del mtodo surge de los errores
sistemticos inherentes a ste, Para cumplir con un determinado requisito
independientemente del laboratorio que lo analtico, el mismo analito puede medirse
utilice. El sesgo del laboratorio surge de errores utilizando varios instrumentos de medicin
sistemticos adicionales especficos del diferentes en muchos puntos dentro de la misma
laboratorio y la interpretacin que ste hace del organizacin. En este caso, numerosas y
mtodo. En forma aislada, un laboratorio solo complejas fuentes de sesgo surgen dentro de la
puede calcular el sesgo combinado (total) a partir organizacin. En esta situacin comn y
de estas dos fuentes. Sin embargo, en la compleja, la organizacin puede establecer
verificacin del sesgo, es importante conocer las procedimientos para calcular una incertidumbre
convenciones correspondientes al propsito representativa que cubra todos los
especfico. Por ejemplo, para algunas puntos/instrumentos para cada aplicacin. sta
aplicaciones en alimentos, los lmites normativos debera utilizar, de preferencia, material que
se establecen en trminos de los resultados tenga las mismas propiedades, incluyendo la
obtenidos del mtodo normalizado emprico matriz de muestra, para las muestras que se
('definido operativamente') especificado. El pretende medir. El anlisis de componentes de
sesgo del mtodo para procedimientos de varianza puede utilizarse para identificar las
medicin 'empricos' es, por definicin, cero. En principales causas de la variacin que
ese caso, el sesgo que surge nicamente del contribuyen a la incertidumbre de medicin
mtodo especfico (ver Figura 5 se ignora, y la general, permitiendo acciones de seguimiento
comparabilidad metrolgica con otros para reducir las diferencias en la organizacin.
laboratorios que utilizan el mismo mtodo, es la Sin embargo, para la mayora de los propsitos,
principal preocupacin. En esta situacin, el la aceptabilidad del sesgo debera decidirse sobre
laboratorio debera determinar idealmente el la base del sesgo general medido en relacin con
sesgo utilizando un material de referencia MR, materiales adicionados o mtodos de
certificado con el mtodo especfico, normativo referencia apropiados, tomando en cuenta la
o emprico, que es objeto de investigacin, en precisin del mtodo y cualquier incertidumbre
cuyo caso se aplican las directivas habituales de los valores de referencia, y la exactitud
para la verificacin e interpretacin del sesgo. requerida para el uso final. Se recomiendan las
Cuando no est disponible dicho material, o para pruebas de significacin estadstica [64, 65].
agregar ms informacin, el laboratorio puede

Valor medido
(media de laboratorio) Valor de referencia

Sesgo total Tipo de error


Media
interlaboratorios

Sesgo del laboratorio Sesgo del mtodo

Figura 5 El sesgo medido total est compuesto del sesgo del mtodo y el sesgo del laboratorio. Nota:
Aqu se muestra el sesgo de laboratorio y el sesgo del mtodo actuando en la misma direccin. En
realidad, no siempre es este el caso.

VM 2016 34
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

6.6 Precisin Entre estos dos extremos, la precisin


intermedia (de medida) ofrece una estimacin
6.6.1 Repeticin de la variacin en los resultados cuando las
La repeticin es esencial para obtener mediciones se realizan en un solo laboratorio,
estimaciones fiables de caractersticas de pero en condiciones que son ms variables que
desempeo del mtodo, tales como la precisin y las condiciones de repetibilidad. Las condiciones
el sesgo. Los experimentos que implican anlisis exactas utilizadas deben establecerse en cada
repetidos deben ser diseados para tener en caso. El objetivo es obtener una estimacin de la
cuenta todas las variaciones en las condiciones precisin que refleje todas las fuentes de
operativas que se pueden esperar durante el uso variacin que se producirn en un solo
rutinario del mtodo. El objetivo debera ser laboratorio en condiciones de rutina (diferentes
determinar la variabilidad tpica y no la analistas, perodos de tiempo prolongado,
variabilidad mnima. diferentes piezas de equipos etc.).
6.6.2 Condiciones de precisin 6.6.2.1 Estimacin de la precisin
Precisin (precisin de la medida) es una medida aspectos generales
de cun cerca estn los resultados entre s [7, 29]. La precisin es generalmente dependiente de la
Por lo general, se expresa mediante parmetros concentracin de analito, y as debe determinarse
estadsticos que describen la propagacin de los en una serie de concentraciones a travs del
resultados, tpicamente la desviacin estndar (o intervalo de inters. Esto podra incluir una
desviacin estndar relativa), calculada a partir concentracin particular de inters (tal como un
de los resultados obtenidos mediante la lmite reglamentario) ms concentraciones a los
realizacin de mediciones repetidas en un lmites del intervalo de medicin. Si procede, la
material adecuado en condiciones especficas. relacin entre la precisin y la concentracin de
La decisin sobre las "condiciones especficas" analito debe estar establecida. En los casos en
es un aspecto importante de la evaluacin de la que la concentracin medida est muy por
precisin de la medida - las condiciones encima del lmite de deteccin, la precisin que
determinan el tipo de estimacin obtenida de la se determina, es a menudo proporcional a la
precisin. concentracin de analito. En tales casos, puede
ser ms apropiado expresar la precisin como
Repetibilidad de medicin y reproducibilidad
una desviacin estndar relativa ya que sta es
de medicin representan las dos medidas de
aproximadamente constante a lo largo del rango
precisin que se pueden obtener. La
de inters.
documentacin de mtodos estandarizados (por
ejemplo de ISO) incluir normalmente tanto la Para los mtodos cualitativos, la precisin no se
repetibilidad y reproducibilidad de datos, donde puede expresar como una desviacin estndar o
sean aplicables. desviacin estndar relativa, pero puede
expresarse como tasas verdaderos y falsos
Repetibilidad, supone dar la ms pequea
positivos (y negativos) [55] (ver la Seccin
variacin en los resultados, es una medida de la
6.2.6).
variabilidad en los resultados cuando una
medicin se lleva a cabo por un solo analista La evaluacin de la precisin requiere la
utilizando el mismo equipo en un corto plazo de realizacin de mediciones repetidas en materiales
tiempo.* adecuados. Los materiales deben ser
representativos de las muestras de ensayo en
Reproducibilidad, supone dar la mayor variacin
trminos de la matriz y la concentracin de
en los resultados, es una medida de la
analito, la homogeneidad y la estabilidad, pero
variabilidad en los resultados entre laboratorios.
no necesitan ser MRC. Las rplicas tambin
deben ser independientes, esto es, todo el
*
La repetibilidad se refiere algunas veces como proceso de medicin, incluyendo los pasos de
precisin dentro de la serie de medida, dentro de preparacin de muestras, debe repetirse. El
un lote o intra-ensayo. nmero mnimo especificado de repeticiones

En validacin, reproducibilidad se refiere a la


variacin entre laboratorios utilizando el mismo

mtodo. Reproducibilidad tambin puede referirse a la La precisin intermedia hace referencia a veces a "la
variacin observada entre laboratorios utilizando reproducibilidad dentro del laboratorio, variacin
diferentes mtodos, pero con la intencin de medir la entre series de medida, variacin entre lotes o
misma magnitud [7]. variacin inter-ensayo.

VM 2016 35
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

vara con los diferentes protocolos, pero est El lmite de precisin intermedia y el lmite de
tpicamente entre 6 y 15 para cada material reproducibilidad (R) se calculan de manera
utilizado en el estudio. similar, sustituyendo sr con sI y sR,
respectivamente.
Debe tenerse en cuenta que es difcil de estimar
una desviacin estndar fiable a partir de La documentacin de mtodos estandarizados
conjuntos de datos con pocas repeticiones. De ser (por ejemplo, de la ISO) normalmente incluir
admisible, los valores calculados a partir de datos tanto para el lmite de repetibilidad como
varias pequeas series de mediciones repetidas se para el lmite de reproducibilidad, segn el caso.
pueden combinar (agrupar) para obtener
estimaciones con suficientes grados de libertad. 6.6.4 Determinacin simultnea de la
repetibilidad y la precisin
Algunos diseos experimentales, analizados intermedia
mediante anlisis de varianza (ANOVA), son
Los enfoques para la determinacin simultnea
una forma eficiente de obtener estimaciones de
de la repetibilidad y de la precisin intermedia se
repetibilidad y precisin intermedia con un
describen en la norma ISO 5725-3 [29].
nmero adecuado de grados de libertad (ver la
Adems, un diseo basado en las Directrices
Seccin 6.6.4 y el Anexo C para una explicacin
armonizadas para la validacin de mtodos de
ms detallada de este mtodo). Ver la Referencia
anlisis en un solo laboratorio [12] ofrece la
Rpida 7 para obtener informacin sobre los
posibilidad de determinar la repetibilidad y
experimentos para evaluar la precisin.
precisin intermedia de un nico estudio. Las
6.6.3 Lmites de precisin submuestras del material de ensayo seleccionado
La desviacin estndar s es til para calcular un se analizan por replicado en condiciones de
"lmite de precisin [29, 48]. Esto permite al repetibilidad a travs de un nmero de diferentes
analista decidir si existe una diferencia series de medida, con una variacin mxima en
significativa, a un determinado nivel de condiciones entre las series de medida (diferentes
confianza, entre los resultados de los anlisis por das, diferentes analistas, diferentes equipos,
duplicado de una muestra obtenida en etc.). Mediante ANOVA de un factor [5, 6], la
condiciones especificadas. El lmite de repetibilidad puede calcularse como la precisin
repetibilidad (r) se calcula como sigue: dentro del grupo, mientras que la precisin
intermedia se obtiene como la raz cuadrada de la
r = 2 t s r (Ec. 5) suma de los cuadrados de la precisin dentro del
grupo y entre grupos. Este tipo de diseo puede
donde el factor 2 refleja la diferencia entre proporcionar una forma eficaz de obtener
dos mediciones, t es la t de Student-a dos colas suficientes grados de libertad para las
para un determinado nmero de grados de estimaciones de la repetibilidad y precisin entre
libertad (que se refiere a la estimacin del sr) y los grupos. Por ejemplo, 8 grupos de 2
en el nivel requerido de confianza. Para un repeticiones conducen a 8 y 7 grados de libertad
nmero relativamente grande de grados de para la estimacin de la repetibilidad y precisin
libertad, t 2 a nivel de confianza del 95%, por entre series, respectivamente. Ver ms
lo que el lmite de repetibilidad se suele informacin en el Anexo C.
aproximar como:
r = 2.8 s r (Ec. 6)

VM 2016 36
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Referencia Rpida 7 Repetibilidad, precisin intermedia y reproducibilidad

Qu calcular/determinar de
Qu hacer Cuntas veces los datos Comentarios

Medir materiales de
referencia (MR), muestras
excedentes de ensayo o
blancos de muestra
adicionados a diversas
concentraciones en todo
el intervalo de trabajo. La
repetibilidad y la
precisin intermedia se
pueden determinar a
partir de estudios por
separado (vase a) y b) o
simultneamente en un
solo estudio (ver c).
a) Mismo equipo y 6-15 rplicas para Determinar la desviacin Estimar la desviacin
mismo analista, mismo cada material. estndar (s) de los resultados estndar de repetibilidad
laboratorio, corto plazo para cada material. sr para cada material.a
de tiempo.
b) Analistas y equipos 6-15 rplicas para Determinar la desviacin Estimar la desviacin
diferentes, mismo cada material. estndar (s) de los resultados estndar de la precisin
laboratorio, plazo para cada material. intermedia sI para cada
prolongado de tiempo. material.

c) Analistas y equipos 6-15 grupos de Calcular la desviacin Estimar la desviacin


diferentes, mismo medidas duplicadasb estndar de repetibilidad de estndar de repetibilidad
laboratorio, plazo obtenidas bajo los resultados de ANOVA sr para cada material.
prolongado de tiempo. condiciones de para cada material.
repetibilidad en
das/equipos Calcular la desviacin Estimar la desviacin
diferentes para cada estndar entre grupos de los estndar de la precisin
material. resultados de ANOVA y intermedia sI para cada
combinarla con la desviacn material.
estndar de repetibilidad para
cada material.
d) Analistas y equipos 6-15 grupos de Calcular la desviacin Estimar la desviacin
diferentes, laboratorios medidas duplicadasb estndar de repetibilidad de estndar de repetibilidad
diferentes, plazo obtenidas bajo los resultados de ANOVA sr para cada material.
prolongado de tiempo. condiciones de para cada material.
repetibilidad en Estimar la desviacin
diferentes laboratorios Calcular la desviacin estndar de
para cada material. estndar entre laboratorios de reproducibilidad sR para
los resultados de ANOVA y cada material. Esto
combinarla con la desviacin requiere una comparacin
estndar de repetibilidad para especial entre
cada material. laboratorios (ensayo
colaborativo).
a
Una desviacin estndar de repetibilidad tambin se puede estimar al reunir varios conjuntos pequeos de datos ,
por ejemplo, n = 2, de diferentes das.
b
Las mediciones duplicadas dentro de cada grupo proporcionar un nmero equilibrado de grados de libertad
para las estimaciones las desviaciones estndar inter y entre grupos. Aumentando el nmero de repeticiones por
grupo aumentar el nmero de grados de libertad asociados con la estimacin de la repetibilidad.

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6.7 Incertidumbre de medida estudio colaborativo, la desviacin estndar de


Un tratamiento detallado sobre la incertidumbre reproducibilidad configura una estimacin de
de medida est fuera del alcance de esta Gua, trabajo de la incertidumbre tpica combinada
pero informacin ms completa se puede siempre que el sesgo del laboratorio, medido en
encontrar en las referencias [21, 22]. La los materiales aplicables, es pequeo con
incertidumbre es un intervalo asociado con un respecto a la desviacin estndar de la
resultado de medida que expresa el intervalo de reproducibilidad, la repetibilidad interna es
valores que razonablemente pueden atribuirse a comparable con la repetibilidad del mtodo
la cantidad que se est midiendo. Una estimacin estndar, y la precisin intermedia del
de la incertidumbre debe tener en cuenta todos laboratorio no es mayor que la desviacin
los efectos reconocidos que operan en el estndar de la reproducibilidad publicada [67].
resultado. Las incertidumbres asociadas con cada 6.8 Robustez
efecto se combinan de acuerdo con
procedimientos bien establecidos. 6.8.1 Definicin
Se describen varios enfoques para obtener una La robustez de un procedimiento analtico es
estimacin de la incertidumbre de los resultados "una medida de su capacidad para permanecer no
de las mediciones qumicas [22, 66, 67, 68]. afectado por pequeas variaciones premeditadas
Estos tienen en cuenta: de los parmetros del mtodo. La robustez
proporciona una indicacin de la fiabilidad del
la precisin a largo plazo global del mtodo mtodo durante su uso normal [13].
(es decir, la precisin intermedia o la
reproducibilidad); 6.8.2 Ensayo de robustez
el sesgo y su incertidumbre, incluyendo la En cualquier mtodo habr ciertas etapas que, si
incertidumbre estadstica que corresponde a no se realizan con suficientemente cuidado,
las medidas de sesgo, y la incertidumbre en el tendrn un efecto significativo en el desempeo
valor de referencia [69, 70, 71, 72, 73]; del mtodo e incluso puede resultar que el
la calibracin de equipos. Las incertidumbres mtodo no funciona en absoluto. Estas etapas
asociadas con la calibracin de equipos tales deberan ser identificadas, por lo general como
como balanzas, termmetros, pipetas y parte del desarrollo del mtodo, y si es posible,
frascos son a menudo insignificantemente su influencia en el desempeo del mtodo
pequea en comparacin con la precisin evaluado utilizando una "prueba de resistencia"
global y la incertidumbre en el sesgo. Si esto ("prueba de robustez '). La AOAC ha definido
se puede verificar entonces las este trmino y describe una tcnica establecida
incertidumbres de calibracin no necesitan ser para la forma de llevar a cabo una prueba de este
incluidas en la estimacin de la tipo utilizando un diseo experimental Plackett-
incertidumbre; Burman [74].
cualquier efecto significativo que opera Un "ensayo de robustez" implica hacer cambios
adems de lo anterior. Por ejemplo, los deliberados en el mtodo, e investigar el efecto
intervalos de temperatura o el tiempo subsiguiente en el desempeo.* A continuacin,
permitidos por el mtodo no pueden es posible identificar las variables en el mtodo
ejecutarse plenamente en los estudios de que tienen el efecto ms significativo y
validacin, y sus efectos pueden necesitar ser garantizar que, cuando se utiliza el mtodo,
aadidos. Tales efectos pueden ser tilmente estn controladas estrictamente. Donde hay una
cuantificados mediante estudios de robustez necesidad de perfeccionar ms el mtodo, las
(ver Seccin 6.8), o estudios relacionados que mejoras se pueden probablemente hacer
establecen el tamao de un efecto dado en el mediante la concentracin en aquellas partes del
resultado. mtodo conocidas por ser crticas.
Cuando la contribucin de los efectos robustez de un procedimiento debe ser
individuales es importante, por ejemplo, en los establecida para los mtodos de desarrollo
laboratorios de calibracin, ser necesario tener interno, mtodos adaptados de la literatura
en cuenta las contribuciones individuales de
todos los efectos individuales por separado. *
El efecto en el mesurando se estudia normalmente,
Tener en cuenta que, sujetos a consideracin pero una alternativa es investigar el efecto sobre un
parmetro experimental, por ejemplo, la resolucin de
adicional de los efectos fuera del alcance de un
los picos en un cromatograma.

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

cientfica y los mtodos publicados por robustez se encuentra en la mayora de los casos
organismos de normalizacin utilizados fuera del no necesariamente en el nivel de un solo
alcance especificado en el mtodo estndar. laboratorio. La informacin sobre la robustez se
Cuando se utilizan mtodos publicados por debe indicar en el procedimiento del laboratorio
organismos de normalizacin dentro del alcance en forma de los lmites de tolerancia establecidos
de aplicacin del mtodo, la robustez por lo para los parmetros experimentales crticos (Ver
general ha sido estudiada como parte del proceso Ejemplo 5 and Referencia Rpida 8).
de normalizacin. Por lo tanto un estudio de

Ejemplo 5 Citas de la ISO 11732 [58]. Las instrucciones indican la criticidad de algunos parmetros
experimentales.
NH4Cl secado hasta masa constante a 105 2 C.
Las cantidades dadas se pueden reducir (p.ej.: un dcimo).
Almacenada en una botella de plstico (polietileno) a la temperatura de la sala, la solucin es estable
alrededor de 1 mes.
La absorbancia de la solucin debera ser 0,3 0,5.
Degasificar y purificar la solucin..., llenarla en el depsito de reactivo y dejarla reposar durante al menos 2
horas.
Esta solucin puede ser almacenada en frigorfico a lo sumo una semana.
Recipientes de vidrio, polialquenos o politetrafluoretileno (PTFE) son adecuados para recoger muestra.
En casos excepcionales, la muestra puede almacenarse hasta dos semanas, siempre que la muestra haya sido
filtrada por membrana despus de la acidificacin.

Referencia Rpida 8 Robustez

Qu calcular/determinar de
Qu hacer Cuntas veces Comentarios
los datos

Identificar las variables que Evaluado ms Determinar el efecto de cada Disear el control
podran tener un efecto efectivamente cambio de condicin en los de calidad o
significativo en el utilizando diseos de resultados de la medida. modificar el mtodo
desempeo del mtodo. experimentos. Por para controlar las
ejemplo: 7 parmetros Clasificar las variables segn el variables crticas,
Establecer experimentos se pueden estudiar en 8 mayor efecto sobre el por ejemplo,
(analizando MR o muestras experimentos desempeo del mtodo. indicando los
de ensayo) para supervisar el utilizando un diseo de lmites de tolerancia
efecto en los resultados de la experimentos Plackett- Realizar pruebas de adecuados en el
medida cambiando de forma Burman [74]. significacin para determinar si procedimiento
sistemtica las variables. los efectos observados son operativo estndar.
estadsticamente significativos.

VM 2016 39
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

7 Uso de mtodos validados


Cuando no se utiliza un mtodo propio, ya sea un Del mismo modo, a menudo se asume que los
mtodo desarrollado en otro lugar dentro del mtodos estndar se pueden utilizar directamente
laboratorio, un mtodo publicado, o incluso un de la estantera y los datos de desempeo
mtodo normalizado o reglamentario, hay dos publicados lograrse de inmediato por quien
cuestiones que deben tenerse en cuenta. utiliza el mtodo. Esto no es una suposicin
segura. Incluso aquellos que estn familiarizados
En primer lugar, la validacin existente es
o expertos en el campo particular de la qumica
adecuada para el uso previsto del mtodo o es
cubierto por el mtodo tendrn que practicar
necesario realizar alguna actividad adicional?
antes de ser plenamente competentes.
Cabe sealar que, adems de la cantidad de
informacin proporcionada sobre el desempeo Al utilizar mtodos validados (o para el caso
del mtodo, la fiabilidad de las fuentes de datos cualquier mtodo) se recomiendan las siguientes
de validacin es tambin un problema. Los datos reglas para asegurar que se logra un desempeo
obtenidos en estudios colaborativos o por aceptable.
organizaciones de normalizacin reconocidas
1. En primer lugar, el analista debe estar
generalmente se consideran fiables, siendo
completamente familiarizado con un nuevo
menos aquellos datos publicados en la literatura
mtodo antes de usarlo por primera vez. Lo
cientfica o proporcionados por los fabricantes de
ideal sera que el mtodo primero se
equipos y / o reactivos. En segundo lugar, siendo
presentara al analista por alguien ya experto
adecuados los datos de validacin disponibles
en su uso. Inicialmente el analista debe
est el laboratorio en disposicin de verificar el
utilizarlo entonces bajo estrecha supervisin.
desempeo declarado para el mtodo? (ver
El nivel de supervisin se relajar hasta que el
Seccin 2.2). Son los equipos e instalaciones
analista se considera suficientemente
disponibles adecuadas? Si el mtodo ha sido
competente para 'ir en solitario'. Por ejemplo
validado exhaustivamente en todas las
la competencia podra establecerse en
condiciones extremas de operacin, entonces la
trminos de la capacidad del analista para
incorporacin de un nuevo analista autorizado
alcanzar los niveles de desempeo
probablemente funcionar satisfactoriamente. Sin
establecidos en el mtodo, como la
embargo, esto debera revisarse previamente.
repetibilidad, lmite de deteccin, etc. Esto es
Habitualmente, es suficiente para probar la
tpico de la forma en que alguien podra estar
competencia del analista obtener la repetibilidad
capacitado para utilizar un nuevo mtodo y
indicada y comprobar si hay algn sesgo,
los procedimientos de entrenamiento del
siempre que el mtodo normalizado se emplee
laboratorio se pueden, con frecuencia, disear
dentro de su alcance. Esto se trata con ms
de esta manera con medidas objetivas en
detalle a continuacin.
lugar de probar la competencia a intervalos
Los mtodos normalizados se desarrollan durante el entrenamiento. En cualquier caso,
generalmente por algn tipo de estudio los analistas deben haber ledo el mtodo y
colaborativo y los organismos de normalizacin familiarizarse con la teora detrs de la
que los dirigen, tienen, con frecuencia, expertos medicin, ensayando mentalmente las
en estadstica para ayudar a asegurar que los distintas etapas, identificando los puntos
estudios de validacin estn correctamente donde se pueden tomar descansos, y las partes
diseados, realizados y evaluados. La norma ISO del proceso en el que los analistas estn
5725 [29] describe un modelo en el que deben sometidos a trabajo continuo. Cundo tienen
basarse las comparaciones de mtodos entre que estar preparados los reactivos, qu tan
laboratorios, a fin de proporcionar informacin estables son una vez que estn preparados?
fiable sobre el desempeo del mtodo. Este Necesitan estar preparados de antemano? Un
modelo se aplica cada vez ms, pero no todos los error tpico es pasar varias horas preparando
mtodos normalizados han sido sometidos al una serie de muestras y luego encontrarse que
mismo. Sera arriesgado suponer que todos los la preparacin del reactivo necesario para la
mtodos normalizados se han validado siguiente etapa del trabajo consiste en una
adecuadamente y es responsabilidad del analista, sntesis complicada, mientras tanto las
comprobar si la informacin proporcionada sobre muestras en s mismas pueden degradarse.
el desempeo del mtodo es adecuada.

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

2. En segundo lugar, se ha de hacer una patrones (con alguna preparacin auxiliar), y


evaluacin de cuntas muestras pueden ser tal vez la reserva de espacio en las campanas
manipuladas convenientemente a la vez. Es de extraccin, etc.
mejor analizar una pocas muestras que tratar
Si es necesario adaptar o cambiar el mtodo
de analizar un gran nmero y tener que repetir
validado por alguien ms, entonces ser
la mayora de ellas.
necesaria la revalidacin correspondiente. En
3. Por ltimo, asegurarse de que todo lo funcin de su naturaleza, los cambios pueden
necesario para ejecutar el mtodo est tambin hacer que los datos de la validacin
disponible antes de iniciar el trabajo. Esto originales sean irrelevantes.
implica reunir el equipo adecuado, reactivos y

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

8 Empleo de los datos de validacin para el diseo del programa


de control de calidad
8.1 Introduccin muestras adicionadas, muestras ciegas y
Aseguramiento de la Calidad (AC) y Control muestras de CC [76].Se recomienda el uso de
de Calidad (CC) son trminos cuyo significado grficos de control para monitorizar los
vara segn el contexto. De acuerdo con ISO, el resultados de CC [76, 77]. El CC puesto en
aseguramiento de la calidad se ocupa de las marcha debe demostrar que es suficiente para
actividades que el laboratorio realiza para asegurar la validez de los resultados. Se pueden
garantizar que se cumplen los requerimientos de emplear distintos tipos de control de calidad en
calidad aplicables, en tanto que el control de funcin del tipo de seguimiento que se quiera
calidad describe las medidas individuales realizar sobre las variaciones del proceso. Las
utilizadas para que los requerimientos se muestras de CC analizadas a intervalos dentro
cumplan de manera efectiva [9]. del lote analtico proporcionan informacin sobre
deriva en el sistema; el uso de varios tipos de
La validacin de un mtodo proporciona una blanco indicar cul es la contribucin de la
idea de la capacidad y limitacin del mtodo seal instrumental adems de la propia del
usado de manera habitual, en tanto que el mtodo analito; los anlisis duplicados dan informacin
est bajo control. Para comprobar que el mtodo sobre la repetibilidad.
permanece bajo control, es decir, se comporta de
la manera esperada, deben ponerse en marcha Las muestras de CC son muestras especiales que,
controles especficos. Durante el proceso de para un periodo de tiempo determinado, son
validacin el mtodo se utiliza sobre muestras suficientemente estables y homogneas para dar
con concentracin conocida. Una vez que es el mismo Resultado (sujeto a la variacin
utilizado rutinariamente, las muestras evaluadas aleatoria del funcionamiento del mtodo), y que
son de concentracin desconocida. Puede estn disponibles en cantidad suficiente para
aplicarse un CC interno adecuado incluyendo repetir los anlisis a lo largo del tiempo. Durante
medidas de muestras de control estables, este periodo se puede supervisar la precisin
permitiendo al analista discernir si la variedad de intermedia del mtodo, representando los
respuestas obtenidas se debe a la variabilidad de resultados en un grfico de control. Previamente
las muestras ensayadas o a cambios inesperados se han configurado los lmites en el grfico (de
y no deseados en el comportamiento del mtodo. manera habitual los lmites de aviso se definen
En la prctica estas muestras de valor conocido como 2s el valor de a media, y los lmites de
deben incluirse en cada lote de Muestras como accin se fijan como 3s el valor de la media).
parte del proceso de control de calidad. Las Siempre que los valores de CC cumplan las
comprobaciones dependern de la naturaleza, reglas establecidas, el CC se considera
criticidad y frecuencia de los anlisis, el tamao satisfactorio. En tanto que el valor de la muestra
del lote, el grado de automatizacin o la de CC es aceptable, se asume que son fiables los
complejidad del ensayo, as como de la resultados de las muestras de rutina del mismo
experiencia adquirida durante los procesos de lote. Debe comprobarse lo antes posible la
desarrollo y validacin. El control de calidad validez del resultado de CC para minimizar, en
puede plantearse de diversas formas, bien por caso de problemas, los esfuerzos realizados y la
mecanismos propios del laboratorio (interno) o fiabilidad de los resultados de las muestras de
en relacin con otros laboratorios (externo). rutina.

8.2 Control de calidad interno Durante la validacin del mtodo se obtienen


estimaciones iniciales de diferentes medidas de
El CC interno supone la aplicacin de
precisin. Para establecer lmites ms objetivos
procedimientos por parte del personal del
en los grficos de control, las medidas deben
laboratorio para la supervisin continuada de las
reflejar la adecuacin al uso del mtodo. Por lo
operaciones y resultados de medida con el fin de
tanto, las medidas realizadas durante la
decidir si estos resultados son suficientemente
validacin debern tener en cuenta todas las
fiables como para ser liberados [18, 75]. Esto
posibles variaciones operativas: diferentes
incluye anlisis duplicados de Muestras estables,
analistas, temperatura del laboratorio, etc. Si no
blancos, soluciones patrn o materiales similares
es as, los valores obtenidos para la desviacin
a los utilizados en la calibracin instrumental,

VM 2016 42
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

estndar sern anormalmente bajos, afectando a de forma intencionada un valor conocido de


los lmites establecidos para los grficos de concentracin). Los anlisis realizados con
control e imposibilitando su cumplimiento mayor frecuencia deberan contemplar el uso
durante los ensayos de rutina. Por esta razn, se habitual muestras de control y su monitorizacin
recomienda revisar los lmites fijados en grficos de control.
transcurrido un ao de la puesta en
funcionamiento del mtodo o una vez se dispone 8.3 Control de calidad externo
de un nmero suficiente de resultados de control La participacin regular en Ensayos de Aptitud
[76]. (PT), conocido tambin como Evaluacin
Externa de la Calidad (EQA), es una forma
El uso de varios tipos de blancos permite al reconocida para realizar el seguimiento del
analista asegurar que los clculos asociados al desempeo del mtodo frente a los requisitos
valor del analito pueden ser corregidos para internos y en comparacin con laboratorios
eliminar contribuciones no atribuibles al analito similares. Los PT permiten identificar tanto
mismo. El anlisis de duplicados sobre Muestras variaciones entre laboratorios (reproducibilidad)
de rutina permite comprobar si se han producido como errores sistemticos * (sesgo).
cambios en la precisin del mtodo, lo que
podra afectar negativamente al resultado [78]. Los programas PT y otros tipos de comparacin
Las muestras duplicadas analizadas entre laboratorios se aceptan como un
consecutivamente permiten comprobar la instrumento til para realizar el seguimiento del
repetibilidad. grado de equivalencia de resultados analticos a
nivel nacional e internacional. Las Entidades de
El anlisis repetido de muestras ciegas es una Acreditacin reconocen la utilidad de estos
forma efectiva de comprobar la precisin. programas y animan a los laboratorios a
Consiste en la colocacin, dentro del lote, de participar en los mismos como parte esencial de
replicas de una misma muestra. Su nombre se sus sistemas de gestin [79].Es importante
debe a que el analista desconoce su existencia monitorizar los resultados de los PT como parte
dentro del lote, de modo que este no tiene ideas de los procedimientos de CC y tomar las
preconcebidas sobre la relacin de los resultados acciones oportunas cuando sea necesario.
para esas rplicas.
En algunos casos, las Entidades de Acreditacin
El uso de patrones o materiales similares a los pueden establecer la participacin en programas
empleados en la calibracin instrumental, PT particulares como requisito para la
colocados a lo largo del lote analtico, permite acreditacin. La utilidad de los PT es tanta como
que la respuesta del proceso analtico sea estable. el valor de sus propios esquemas. Los requisitos
Es responsabilidad de la direccin del laboratorio de competencia tcnica para los organizadores de
establecer y justificar un nivel apropiado de programas PT se describen en la norma ISO/IEC
control de calidad, basado en la evaluacin de 17043 [80].Adems, la Gua Eurachem [81]
riesgos, teniendo en cuenta la fiabilidad del incluye informacin prctica sobre la seleccin,
Mtodo, la criticidad de los ensayos y la uso e interpretacin de programas PT. En la base
posibilidad de repetir los ensayos en caso de ser de datos EPTIS puede encontrarse informacin
necesario. De forma general, se acepta un nivel sobre gran nmero de programas
de CC interno del 5% sobre muestras de rutina, (www.eptis.bam.de). Sin embargo, puede que no
es decir, que una de cada 20 muestras analizadas existan programas totalmente adecuados para
debera ser una muestra de CC. Sin embargo, anlisis en campos emergentes o en aplicaciones
para mtodos de rutina ms robustos, con gran raras. Estas y otras limitaciones han sido
cantidad de Muestras, puede ser razonable un consideradas en un nuevo documento gua [82] y
nivel de control ms bajo. Para procedimientos que lleva a los laboratorios acreditados a
ms complejos, es usual un nivel de control del establecer una estrategia para su participacin en
20%, e incluso puede ser necesario alcanzar el programas PT.
50%. Para anlisis con escasa frecuencia de
realizacin, debera realizarse una validacin
*
completa en cada caso. Generalmente, esto N.T.: En este caso hay que tener en cuenta como se ha
supone usar un material de referencia (MR) de obtenido el valor asignado.

N.T.: El laboratorio puede verse obligado a participar en
concentracin certificada o conocida, seguido de un ejercicio irrelevante para l (diferencia de intervalos de
anlisis de duplicado de la muestra y una muestra trabajo, matrices, etc.) o tener que participar en PT de
enriquecida (muestra a la que se ha adicionado escasa calidad por ser los nicos disponibles en el mercado.

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

9 Documentacin de los mtodos validados


9.1 Desde el borrador a la versin elaborar un nuevo documento con mayor detalle
final y menor ambigedad.
El mtodo objeto de la validacin se utiliza 9.2.2 Recomendaciones en normas
inicialmente con un procedimiento que debe Existen normas que proporcionan orientacin
considerarse un borrador hasta que se aprueba el sobre la informacin a tener en cuenta a la hora
informe de validacin. Una vez completada la de documentar un mtodo. Desde el punto de
validacin es importante documentar el vista qumico, quizs la ms til sea la serie ISO
procedimiento analtico de modo que el mtodo 78, ya que establece los principios aplicables al
sea usado sin ambigedades. Hay varias razones diseo y redaccin de mtodos de anlisis
que lo justifican. qumico descritos en las normas internacionales
Las diferentes evaluaciones del mtodo (los organismos de normalizacin producen,
realizadas durante el proceso de validacin validan y documentan gran nmero de mtodos
suponen, que en uso rutinario, el mtodo se cada ao, necesitando un enfoque coherente para
emplea siempre de la misma manera. De no la elaboracin de normas en beneficio de sus
ser as, el desempeo actual no se propios comits tcnicos). La ISO 78-2 [83]
corresponde con los datos obtenidos en la propone una forma de documentar los mtodos
validacin. De este modo, la documentacin qumicos generales. El Anexo A incluye un
debe limitar la posibilidad de introducir ejemplo de diseo. Las normas sugieren un orden
cambios accidentalmente. lgico de redaccin con propuestas de apartados
La documentacin tambin es necesaria para y el contenido de cada uno de ellos. Al usar estas
fines relacionados con auditoras y normas el lector no debe olvidar el equilibrio
evaluaciones, as como por requisitos entre la flexibilidad y la coherencia de la
contractuales o reglamentarios. redaccin. Si bien resulta deseable que todos los
Un mtodo documentado adecuadamente mtodos cuenten con el mismo formato, hay que
permite su uso de una manera consistente. Ya considerar que no todos requieren el mismo nivel
que la calidad de la documentacin tiene un de detalle, por lo que en algunos casos pueden
efecto directo en el uso del mtodo, es omitirse alguna de las recomendaciones dadas.
probable que tenga influencia en la precisin 9.2.3 Control de los documentos
e incertidumbre de las medidas. De hecho,
Un laboratorio que documenta sus mtodos
esta contribucin puede hacer que el mtodo
puede desarrollar un estilo propio. Adems de
sea inoperante. Cualquier error documental
presentar la informacin relevante de una forma
debe resolverse previo a obtener una
lgica y fcil de usar, puede distribuir el trabajo
estimacin razonable de la incertidumbre.
de elaboracin entre varios miembros del
9.2 Recomendaciones laboratorio y asignar una nica persona para la
revisin de la coherencia de todos los borradores
9.2.1 Comprobacin de las elaborados.
indicaciones
Los mtodos documentados son una parte
No es fcil documentar un mtodo
importante del sistema de gestin de calidad del
correctamente. La informacin debe aparecer
laboratorio, y deben estar sujetos a un nivel de
ms o menos en el orden en que se espera que el
control adecuado. El objeto de este control es
usuario la necesite. Un error comn es asumir
asegurar que solo se usan aquellos mtodos que
que todo el mundo va a entender la mecnica del
previamente han sido autorizados para ello. Por
mtodo igual que la persona que lo ha
lo tanto, como parte del proceso de
desarrollado y documentado. Esta presuncin
documentacin, los mtodos deben contar con
puede resultar peligrosa. Una manera til de
informacin que permita saber si el mtodo ha
comprobar la utilidad de la documentacin es
sido autorizado, su nmero de versin y la fecha
proponer su uso a una persona con
de edicin, el autor, nmero de copias
conocimientos tcnicos solicitando su aplicacin
distribuidas y cualquier restriccin a ser
tal cual se ha escrito. Si el resultado es favorable,
reproducido.
el mtodo debe difundirse y permitir obtener
resultados fiables. De lo contrario, es necesario

VM 2016 44
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

En ocasiones los mtodos deben ser revisados. informticas especficas. Los cambios deberan
As por ejemplo, el avance tecnolgico puede hacerse solo por personal autorizado, lo que
permitir mejorar el mtodo. El control de los puede gestionarse mediante niveles apropiados
documentos permite retirar los documentos de acceso a las aplicaciones informticas, por
obsoletos y distribuir los revisados. Este proceso ejemplo con perfiles de solo lectura o
se simplifica con el empleo de aplicaciones escritura.

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

10 Implicaciones de los datos de validacin para el clculo e


informe de resultados
Es importante que el analista sea capaz de decisiones tomadas a la luz del conocimiento de
convertir los datos, generados durante el anlisis dicha incertidumbre.
de muestras utilizando mtodos validados, en
Hay que tener precaucin al utilizar un resultado
resultados que contribuyan directamente a la
analtico y su incertidumbre asociada para
resolucin del problema del cliente. Las
pretender decidir si la partida original de la que
caractersticas de desempeo establecidas
se ha obtenido la muestra cumple con una
durante el proceso de validacin ayudan en este
especificacin o lmite [84].Esta decisin no
aspecto. Se pueden utilizar los datos de
debe ser responsabilidad del analista, si bien es l
repetibilidad, precisin intermedia y
quin ser requerido para aportar asesoramiento
reproducibilidad para establecer si las diferencias
tcnico para ayudar en el proceso de toma de
encontradas al analizar las muestras son
decisiones.
significativas. Los controles de calidad basados
en los datos de validacin se pueden utilizar para Al informar de los resultados, el analista debe
confirmar que el mtodo est bajo control y que decidir si corregir los errores de stos que han
produce resultados vlidos. La estimacin de la sido detectados o presentar los resultados sin
incertidumbre de la medida permite expresar los corregir, pero admitiendo la existencia del sesgo.
resultados como un intervalo de valores con un Debera prestarse atencin al informar de los
nivel de confianza aceptado. resultados como no detectado. En s misma,
Es importante que el analista tenga acceso a los esta afirmacin no es informativa y debera ir
datos de validacin que puedan ser utilizados acompaada por una explicacin de cul es el
para apoyar la validez de los resultados. Otra lmite de deteccin en ese caso. En ocasiones, es
cuestin es si esa informacin se hace llegar o no apropiado resear un valor numrico, aunque
al cliente. Frecuentemente, el cliente no tendr este sea inferior al lmite de deteccin aparente.
las habilidades tcnicas para apreciar el Las autoridades pueden, en ocasiones, solicitar
significado de los datos. En esas circunstancias, que se indique el valor del lmite de
lo ms apropiado es que los datos estn cuantificacin.
disponibles bajo peticin. Si se solicita declarar la incertidumbre con el
Asuntos tales como la validacin del mtodo, la resultado, sera adecuado dar el valor de la
variabilidad e incertidumbre de la medida deben incertidumbre expandida, aplicando el factor de
ser tratados con cuidado en determinadas cobertura adecuado. Por ejemplo, un factor de 2
circunstancias, por ejemplo, en contextos para un intervalo con un nivel de confianza de,
forenses. Es mejor ser receptivo a la existencia aproximadamente, el 95 %. Para mayor
de la incertidumbre asociada a las medidas y informacin sobre cmo informar de la
encontrarse preparado para justificar las incertidumbre, consulte la Seccin 9 de la Gua
Eurachem/CITAC [22].

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Anexo A Protocolo para la documentacin del Mtodo

En la Seccin 9 de la Gua se analiza la documentacin adecuada del mtodo. Se incluye el formato


siguiente como referencia para un diseo adecuado. Este formato est basado en la norma ISO 78-2
[83], pero contiene algunos consejos adicionales sobre calibracin, control de calidad y control de
documentos. El Anexo A es, nicamente, orientativo y debera adaptarse a cualquier requerimiento
especial.
A.1 Prembulo
A.1.1 Actualizacin y resumen de la revisin
Esta seccin tiene un doble objetivo. En primer lugar, est concebida para hacer posible realizar
cambios mnimos en el texto del mtodo, sin necesidad de realizar una revisin completa y reedicin
del mtodo. En segundo lugar, se recomienda que la adecuacin al propsito de cada mtodo se revise
peridicamente y que el resumen se emplee como registro de que as se ha hecho. El resumen se
situar en la parte delantera del mtodo, justo en el interior de la cubierta frontal.
A.1.2 Actualizaciones
Cualquier modificacin por escrito del texto del mtodo debera ser aceptada siempre y cuando las
modificaciones se registren en la tabla inferior (se aceptan las entradas manuscritas) y sean
debidamente autorizadas. Se sobreentiende que la autorizacin respalde el hecho de que se han
investigado las consecuencias de los cambios en la validacin del mtodo, sin haber causado
problemas, y que se han realizado los cambios en todas las copias del mtodo.

# Seccin ndole de la correccin Fecha Autorizacin


1 (p. ej.) 3.4 Modificacin del flujo a 1,2 ml min-1 2/8/96 DGH

A.1.3 Revisin
La fecha en la que se ha observado que el mtodo est en uso ha de estar, siempre, comprendida entre
las fechas de la revisin y la de la prxima revisin, segn se muestra en la tabla.
Fecha de Resultado de la revisin Fecha de la prxima Autorizacin
revisin revisin

A.2 Introduccin
La introduccin se utilizar, si es necesario, para presentar informacin, como por ejemplo,
comentarios sobre el contenido tcnico del procedimiento o la necesidad de su preparacin. Si se
requiere informacin sobre los antecedentes del mtodo, sta debera incluirse, preferentemente, en
esta clusula.

A.3 Ttulo
En el ttulo se indicarn los tipos de muestra a los que se aplica el mtodo de prueba, el analito o la
caracterstica a determinar, as como el principio en el que se basa dicha determinacin. Debera
limitarse, en la medida de lo posible, a la informacin que se indica a continuacin. Formato preferido:
Determinacin de A {analito o mensurando} (en presencia de B{interferencia}) en C{matriz}
utilizando D {principio}.

A.4 Precauciones
Debe prestarse atencin a cualquier riesgo y describir las precauciones detalladas para evitarlo. Si bien
se deben detallar las precauciones en las secciones relevantes, la existencia de riesgos y su prevencin
deben mencionarse aqu. Proporcione las advertencias adecuadas para cualquiera de los riesgos
relacionados con:

VM 2016 47
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

manipulacin de las muestras;


manipulacin o preparacin de disolventes, reactivos, patrones u otros materiales;
operacin de equipos;
requerimiento de lugares de manipulacin especiales, p. ej., campanas extractoras de humos;
consecuencias de los experimentos a escala (lmites de explosin).
A.5 Alcance
Esta seccin permite al potencial usuario observar rpidamente si el mtodo puede ser apropiado para
la aplicacin deseada o si existe alguna limitacin. Se deben contemplar los siguientes aspectos:
una descripcin del problema subyacente (por qu se necesita el mtodo);
el analito o mensurando que pueden ser determinados con el mtodo;
la forma en la que se determina el analito o analitos especiacin, total/disponible, etc.;
la matriz o las matrices de la muestra que contienen al analito a determinar;
el intervalo de trabajo (intervalo de medida) en el que se puede aplicar el mtodo. Debe hacer
referencia a propiedades como concentraciones en la muestra de laboratorio;
interferencias conocidas que limitan o impiden el uso del mtodo;
la tcnica instrumental utilizada en el mtodo;
la cantidad mnima de muestra.

El sector alimenticio [35] utiliza el trmino aplicabilidad como sinnimo de alcance y lo define
como los analitos, matrices y concentraciones para las cules el mtodo de anlisis se puede usar
satisfactoriamente.
A.6 Referencias (normativas)
Este apartado proporcionar una lista de aquellos documentos que son necesarios para la aplicacin
del mtodo. Los documentos que nicamente han servido para la preparacin del mtodo, deben ser
referenciados en la bibliografa, al final del documento.
A.7 Definiciones
Proporcione cualquier definicin de los trminos usados en el texto, que pueda ser necesaria para la
comprensin completa del mismo. Utilice las definiciones ISO siempre que sea posible. Cite las
fuentes. Se pueden incluir aqu las estructuras analticas, si lo considera relevante.
A.8 Principio
Describa las etapas esenciales del mtodo, el principio en el que se basan las tcnicas analticas
empleadas. Puede ser til mostrar un diagrama de flujo o de causa-efecto. Se debe escribir esta seccin
de manera que se pueda tener, a simple vista, un resumen del funcionamiento del mtodo. Incluya la
explicacin del mtodo de clculo. Siempre que sea necesario, y con el fin de aclarar el mtodo de
trabajo o los clculos realizados, incluya los detalles de cualquier reaccin qumica pertinente (esto
puede ser importante, p. ej., cuando sea necesaria la derivatizacin o en las valoraciones).
P. ej. La concentracin se obtiene a partir de una curva de calibrado de seis puntos, mediante la
lectura de la concentracin correspondiente a la absorbancia de la muestra, corregida por el valor del
blanco y multiplicada por el factor de concentracin.
A.9 Reacciones
Este apartado mostrar las reacciones esenciales, siempre que se consideran necesarias para la
comprensin del texto o de los clculos. stas justifican los clculos realizados a partir de los datos
obtenidos en las determinaciones y facilitarn el entendimiento del mtodo, especialmente si se
producen varios cambios sucesivos en el estado de oxidacin del elemento a determinar. Asimismo, en
el caso de las valoraciones, son tiles para indicar el nmero de equivalentes por cada mol de reactivo.
A.10 Reactivos y materiales
Detalle todos los reactivos y materiales requeridos para el proceso analtico, junto a sus caractersticas
esenciales (concentracin, densidad, etc.) y numrelos para posteriores referencias. Indique:
nmeros de registro CAS (Chemical Abstract Service), si est disponible;
detalles de cualquier peligro asociado, con indicaciones sobre su disposicin;

VM 2016 48
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

grado analtico o pureza;


necesidad de materiales para calibracin y control de calidad, que provengan de lotes
independientes;
detalles de preparacin, indicado la posibilidad de hacerla por adelantado;
caducidad del material sin preparar y de los reactivos preparados;
composicin requerida, con detalles de concentracin o de otra cantidad;
requisitos para el etiquetado.

A.11 Aparatos
Describa, con suficiente detalle, el equipamiento individual y cmo est conectado, para evitar su
manipulacin incorrecta. Numere sus componentes, para referenciarlos posteriormente. Los diagramas
y grficos de flujo pueden resultar clarificadores. En el apartado de Procedimiento, dentro de un
subapartado titulado Prueba preliminar o Prueba de comprobacin (vea A.13) ha de describirse
cualquier comprobacin necesaria para el funcionamiento de los aparatos ensamblados.
Detalle los requerimientos mnimos de funcionamiento y verificacin, con referencia cruzada a la
seccin de calibracin (A.13) y a cualquier manual del instrumento que sea relevante. Si es necesario,
refirase a los Estndares Internacionales u otros documentos aceptados internacionalmente con
respecto al material de vidrio de laboratorio y otros aparatos. Incluya exigencias medioambientales
(campanas de extraccin, etc.).
A.12 Toma de muestra
La toma de muestra incluye, en este protocolo, tanto el muestreo realizado para obtener la muestra de
laboratorio como la etapa de submuestreo realizada en el propio laboratorio con el fin de obtener la
submuestra, de la cual se tomar la porcin del ensayo.
Si el muestreo para la obtencin de la muestra de laboratorio es independiente del anlisis qumico
como tal, es suficiente con hacer referencia, a ttulo informativo, al procedimiento pertinente, tratando
especficamente este aspecto. Si no existe ese procedimiento de muestreo apropiado, el apartado de
toma de muestra podra incluir un plan y procedimiento de muestreo, mostrando orientacin sobre
cmo evitar la alteracin del producto y teniendo en cuenta los requisitos relativos a la aplicacin de
mtodos estadsticos.
El apartado de toma de muestra debe proporcionar toda la informacin necesaria para la preparacin
de la muestra de ensayo a partir de la muestra de laboratorio. Deben incluirse los detalles sobre el
almacenamiento, acondicionamiento/pretratamiento y eliminacin de residuos. Si esta etapa es
especialmente complicada, se justifica la inclusin de un documento adicional, que describa las
distintas etapas individualmente.
A.13 Procedimiento
Describa toda la secuencia de operaciones realizadas. Si el mtodo que se describe ya se ha aportado
en otra norma, se utilizar la frase aplique el mtodo especificado en ISO 12345 o aplique uno de
los mtodos especificados en ISO 12345, indicando alguna modificacin, si fuese necesario.
Mencione aquellas operaciones para las que es necesario tomar precauciones especiales de seguridad.
Este apartado incluir subapartados con los siguientes aspectos.
porcin de ensayo (su preparacin a partir de la muestra de ensayo o muestra de laboratorio y
la masa o volumen requerido);
prueba blanco (condiciones y limitaciones);
pruebas preliminares o de comprobacin (p. ej., verificar el funcionamiento correcto de un
instrumento de medida);
determinacin (determinaciones) o prueba (pruebas). Se debe incluir el nmero de medidas o
pruebas (p. ej., duplicados) y la descripcin detallada de todas las etapas;
calibrado. Identifique las partes crticas del proceso analtico. stas debern ser controladas
mediante un meticuloso procedimiento y calibrado. Haga referencias cruzadas a las secciones
anteriores. Incluya la calibracin de los equipos los que necesitan ser calibrados, cmo

VM 2016 49
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

hacerlo, con qu y la frecuencia del calibrado. Considere la trazabilidad metrolgica apropiada


de los calibrantes.
A.14 Clculos
Describa los clculos realizados para obtener los resultados. Incluya informacin sobre las unidades en
las que se deben expresar los resultados y otras cantidades; la ecuacin utilizada para el clculo; el
significado de los smbolos algebraicos que aparecen en la ecuacin; el nmero de cifras decimales o
de cifras significativas con las que se debe expresar el resultado. Los smbolos de las cantidades deben
estar de acuerdo con la norma ISO 80000 [14].
A.15 Precisin
Para aquellos mtodos que han sido objeto de comparaciones interlaboratorio, se indicarn los datos de
precisin (p. ej., la repetibilidad y reproducibilidad). Se calcular la precisin de los datos y se
publicar, de acuerdo con la parte relevante de la norma ISO 5725 o de acuerdo con otro Estndar
Internacional apropiado, del que se debe aportar la referencia. Exponga con claridad si los valores de
precisin se expresan en trminos absolutos, relativos o como lmites de precisin.
A.16 Aseguramiento de la calidad y control de calidad
Una consecuencia del ejercicio de validacin debera ser la descripcin de los procedimientos a seguir
para el control de calidad interno y externo (Ensayos de Aptitud). Explique qu tipo de control de
calidad se aplica, la frecuencia de las comprobaciones del control de calidad durante el anlisis de
lotes, los criterios de aceptacin y rechazo, las acciones a tomar en el proceso en el caso de fallo.
Establezca referencias cruzadas a las secciones relevantes presentadas anteriormente.
A.17 Casos especiales
Incluya cualquier modificacin al procedimiento requerida por la presencia o ausencia de
determinados componentes en el producto analizado. Las modificaciones se debern referenciar
tambin en el apartado Alcance. Cada caso especial deber incluirse en un ttulo diferente.
A.18 Informe de ensayo
Este apartado debera especificar la informacin que hay que aportar en el informe de prueba. Se
debern incluir, por lo general, los siguientes aspectos:
una referencia al mtodo empleado;
el resultado (los resultados) y un indicador de calidad asociado (precisin; incertidumbre
especificada; intervalo de confianza), si es relevante, incluyendo, asimismo, una referencia al
apartado Clculos;
cualquier desviacin del procedimiento;
cualquier caracterstica poco frecuente observada;
la fecha del ensayo.
A.19 Anexos
Para mejorar su lectura, es conveniente presentar parte de la informacin en un anexo. Deber
aclararse si el anexo es normativo o informativo. Se pueden anexar datos del trabajo para la validacin
del mtodo, anlisis de riesgos y clculos de incertidumbre. En este ltimo caso, se deben identificar
las fuentes principales de incertidumbre debida al mtodo y presentar la relacin de valores asignados.
Hay que mencionar aquellas contribuciones insignificantes, que no se han utilizado en los clculos
finales. Se debe detallar la incertidumbre estndar combinada y/o la incertidumbre expandida, as
como la explicacin sobre cmo se ha obtenido esta ltima. Se puede incluir el tratamiento ms
detallado en un archivo referenciado.
A.20 Bibliografa
Si es necesario proporcionar referencias informativas, stas podran presentarse en el lugar del texto en
el que se han citado o, si son numerosas, en la bibliografa del final del documento.

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Anexo B Bases estadsticas del clculo del lmite de deteccin*


La Referencia Rpida 2 en la Seccin 6.2.3 indicaba que el lmite de deteccin (LOD) se puede
calcular multiplicando la desviacin estndar adecuada por un factor igual a 3. Este Anexo describe la
base estadstica de este factor.
El objetivo de la determinacin del lmite de deteccin es, habitualmente, establecer la concentracin
ms baja del analito presente en una muestra, que puede ser detectada utilizando un procedimiento de
medida dado, con un nivel de confianza especfico. La definicin del LOD es un proceso de dos pasos.
En primer lugar, se establece un valor crtico. Este valor es tal que la probabilidad de obtener un
resultado en la medida que exceda el valor crtico no es superior a , si una muestra realmente no
contiene al analito. El valor crtico establece un criterio para declarar una muestra como positiva. Se
utiliza, generalmente, una probabilidad de falso positivo de = 0,05; ello implica un valor crtico
prximo a 1,65s (donde s es la desviacin estndar de un gran nmero de resultados correspondientes
a una muestra blanco o a una muestra que contiene una concentracin baja del analito y 1,65 es el
valor del parmetro t de Student de una cola para un nmero infinito de grados de libertad y un nivel
de significacin, = 0,05). El valor crtico se expresa de manera ms adecuada en trminos de
concentracin aunque puede ser cualquier observacin, p. ej., rea de pico. Cualquier resultado que
exceda el valor crtico debera ser considerado positivo.
Sin embargo, si el valor verdadero de la concentracin en una muestra fuera exactamente igual al valor
crtico (expresado en trminos de concentracin), se podra esperar que, aproximadamente, la mitad de
los resultados de la medida se encuentre por debajo del valor crtico, proporcionando una tasa de falsos
negativos de, aproximadamente, un 50 %. Una tasa de falsos negativos del 50 % es, obviamente,
demasiado elevada para ser de uso prctico; el mtodo no da resultados de forma fiable por encima del
valor crtico si la concentracin es igual al valor crtico. El LOD representa la concentracin verdadera
para la cual es aceptable la tasa de falso negativo para un valor crtico dado. El error de falso negativo,
, se sita, habitualmente, en el valor del error falso positivo, siendo as por razones histricas (IUPAC
recomienda valores predeterminados de = = 0,05 [49]). Para = = 0,05, el LOD debe superar
1,65s veces el valor crtico especificado. El factor para calcular el LOD con = = 0,05 es,
consecuentemente, 1,65+1,65 = 3,30. Este valor se redondea frecuentemente para dar el clculo de
3s mostrado en la Referencia Rpida 2. Este enfoque se basa en varias de las aproximaciones
descritas en la literatura [49].
El multiplicador 3, calculado segn se describe en el prrafo anterior, surge del valor de la t de Student
de una cola para infinitos grados de libertad, redondeado por defecto a una cifra significativa. Para una
estimacin estadstica rigurosa del LOD, el factor multiplicativo utilizado debera tener en cuenta el
nmero de grados de libertad asociado a la estimacin de s. Por ejemplo, si se obtiene s a partir de 10
rplicas, el valor de t de Student para = 0,05 es 1,83 (9 grados de libertad). Esto conduce a un valor
de LOD calculado como 3,7s.

*
El texto est basado en la Gua Eurachem sobre Terminologa en la Medida Analtica [8].

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Anexo C Anlsis de la varianza (ANOVA)


La idea central del anlisis de varianza (ANOVA) es que cuando en una serie de datos replicados
estos se pueden agrupar de una misma manera, p. ej., por analista, instrumento, da, laboratorio,
mtodo, etc., la variacin total en la serie completa se puede representar como la combinacin de las
varianzas (s2) entre grupos y dentro de los grupos. Se puede usar ANOVA para evaluar los resultados
a partir del tipo de estudio experimental mostrado en la Figura C 1. En este diseo anidado, se repiten
las medidas replicadas (obtenidas generalmente en condiciones de repetibilidad) en series diferentes de
medida para obtener p grupos de datos. Para estimar la precisin intermedia de dicho estudio debera
existir la mxima variacin en las condiciones en las que realizan las series (diferentes das, analistas,
etc.).

Grupo 1 Grupo 2 Grupo p

Figura C 1 Ejemplo de un diseo anidado correspondiente a un


experimento en el que se pueden evaluar distintas medidas de precisin
utilizando ANOVA

En la Figura C 2 se muestra la forma general de una tabla ANOVA de un factor, para un total de N
resultados, distribuidos en p grupos de n observaciones y con grados de libertad. Cada lnea de la
tabla hace referencia a una fuente de variacin distinta. La primera fila responde a la variacin entre
las medias de los grupos; la segunda describe la variacin dentro de los grupos y la tercera describe la
variacin del conjunto de los datos en su totalidad. Las hojas de clculo y el software estadstico
tambin proporcionan los valores de F y de F crtico, as como el valor correspondiente de P
(probabilidad).

Fuente de variacin Suma de cuadrados (SS) Cuadrado medio (MS) F P Fcrit


Entre grupos SSe p-1 MSe = SSe/(p-1) MSe/MSi
Intra grupo SSi N-p MSd = SSd/(N-p)
(residuales)
Total SStot = SSe+SSi N-1

Figura C 2 Estructura de una tabla ANOVA de un factor

A los valores relacionados con la variacin entre grupos se les designa, casi siempre, con los trminos
entre grupos o se identifican por el factor de agrupamiento (p. ej., analista, da o laboratorio). Se usan
diferentes trminos en software, libros de texto, etc., para describir la variacin dentro del grupo,
siendo los ms comunes intra- grupo, residual, error o medida.
Asumiendo que el diseo anidado que se muestra en la Figura C 1 se realiza en un nico laboratorio,
que las rplicas dentro de cada grupo se han obtenido en condiciones de repetibilidad y que las

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

condiciones analticas variaron entre grupos, la repetibilidad y la precisin intermedia se puede


calcular segn se indica a continuacin.
1. La desviacin estndar de la repetibilidad sr, se obtiene calculando la raz cuadrada del
trmino del cuadrado medio dentro del grupo, que representa la varianza intra-grupo:

7 = 89:; (Ec. C1)

2. La contribucin a la variacin total del factor de agrupamiento (si) tambin se obtiene a partir
de la tabla ANOVA:

9:= 9:;
; = <
 (Ec. C2)

3. La precisin intermedia sI puede, en consecuencia, calcularse combinando los componentes


de la varianza intra-grupo y entre grupos, descritos anteriormente:

> = 7 + ; (Ec. C3)

El experimento mencionado en la Seccin 6.6.4 se puede ilustrar como sigue. Como parte de un
ejercicio de validacin de un mtodo en un nico laboratorio, se realizaron duplicados durante cada
uno de los ocho das (Tabla C1). Cada da, las medidas se realizaron en condiciones de repetibilidad
pero con diferentes analistas, diferentes equipos, etc. en los distintos das, de manera que se imitan las
condiciones en las cuales se usar el mtodo de manera rutinaria.
Tabla C1 Ejemplo de una configuracin experimental que permite evaluar la repetibilidad y
precisin intermedia mediante el ANOVA de un factor con un nmero aceptable de grados de
libertad
Da: 1 2 3 4 5 6 7 8
Resultado: x1,1 x1,2 x2,1 x2,2 x3,1 x3,2 x4,1 x4,2 x5,1 x5,2 x6,1 x6,2 x7,1 x7,2 x8,1 x8,2

Se puede usar el ANOVA de un factor para separar la variacin inherente al mtodo (repetibilidad) de
la debida a diferencias en las condiciones de medida, p. ej., diferentes analistas, equipo, perodo
amplio de tiempo (precisin intermedia). Observar que con este enfoque, no es posible alcanzar
conclusiones sobre qu parmetros analista, equipo, tiempo- contribuyen en mayor medida a la
precisin intermedia, si bien esto no se necesita generalmente en la etapa de validacin.
La aplicacin de un ANOVA de una va a los resultados de la Tabla C1 conducir a una tabla de
resultados similar a la de la Figura C 2. Los valores F, F crtico y P permitirn extraer conclusiones
sobre si la variacin entre resultados obtenidos en das diferentes es significativamente superior a la
variacin de los resultados obtenidos en un mismo da. Los valores para las dos medidas de precisin
(sr and sI) se calculan, entonces, de forma inmediata, a partir de las ecuaciones Ec. C1 Ec. C3,
mostradas anteriormente. El nmero de grados de libertad asociado () ser N-p = 16-8 = 8 para sr. El
valor de para la precisin intermedia es ms complejo pero no ser inferior a p-1, p. ej. 7 en este
ejemplo (vase la Figura C 2). Esto lleva a un compromiso razonable entre la carga de trabajo y la
incertidumbre en el clculo de la precisin.

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Anexo D Notas sobre los anlisis cualitativos


Los anlisis cualitativos siguen los principios bsicos del anlisis cuantitativo pero es necesario aplicar
conceptos singulares, tanto al describir las propiedades del mtodo como para la interpretacin de los
resultados. Este apndice introduce brevemente el anlisis cualitativo y apunta hacia la orientacin
pertinente.
La IUPAC define el anlisis Cualitativo como: anlisis en el que se identifican o clasifican las
sustancias en base a sus propiedades fsicas o qumicas, tales como la reactividad qumica,
solubilidad, masa molecular, punto de fusin, propiedades radiactivas (emisin, absorcin), espectro
de masas, vida media nuclear, etc. [17]. Esto significa que los resultados se expresan en una escala
nominal, que es inferior a la expresin de los resultados en una escala de proporcin. Se recomienda
usar el anlisis cualitativo en lugar del cuantitativo principalmente con el propsito de deteccin
utilizando mtodos de bajo coste o para concentraciones del analito prximas al lmite de deteccin
(LOD).
Un mtodo cualitativo proporciona, efectivamente, una respuesta S/No para una concentracin
de corte dada de un analito [55]. La validacin supone la identificacin de la concentracin de corte
para clasificar/diagnosticar una condicin, p. ej., la presencia o ausencia de un agente contaminante
en agua, para la que existe una directiva, ley, etc., que define qu concentracin de corte se debe
aplicar.
Para caracterizar las propiedades de un mtodo cualitativo, es ptimo utilizar un mtodo cuantitativo
con propiedades metrolgicas superiores (mtodo confirmatorio), p. ej., menor LOD, de manera que se
pueda determinar el estado verdadero con o sin una condicin dada. Se debera determinar las
propiedades de un mtodo cualitativo para un nmero de concentraciones inferiores, coincidentes y
superiores a la concentracin de corte. Es preferible el empleo de un mtodo cuantitativo
confirmatorio al uso de muestras blanco adicionadas y no adicionadas.
En los mtodos cualitativos, la precisin no se puede expresar como una desviacin estndar o
desviacin estndar relativa, pero puede ser expresada como tasa de verdaderos positivos y falsos
positivos, y de verdaderos negativos y falsos negativos [55, 85, 86, 87]. Esto se ilustra en la Figura D1.

Muestras por encima de Muestras por debajo de la


la concentracin de corte concentracin de corte

Prueba positiva Pruebas positivas Pruebas positivas falsas Nmero total de


verdaderas pruebas positivas
(error del tipo I)

Prueba negativa Pruebas negativas falsas Pruebas negativas Nmero total de


verdaderas pruebas negativas
(error del tipo II)

Nmero total de muestras Nmero total de muestras


por encima de la por debajo de la
concentracin de corte concentracin de corte

Figura D1 Tabla A 2 2 que proporciona las bases para el clculo de las tasas de falso positivo y de falso
negativo

La sensibilidad diagnstica es la proporcin de muestras con una determinada condicin, p. ej.,


concentracin superior a la concentracin de corte, que proporciona resultados positivos al anlisis. La
sensibilidad diagnstica es una caracterstica fundamental del mtodo cualitativo, que expresa su
capacidad para detectar pequeas cantidades del analito en una muestra, de manera que se obtenga la
respuesta binaria S/No para un nivel de probabilidad predefinido.

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

H?IJ B? HK?EIC L?IBCB?IJ MJ@E@LJ


:?@&@A@BCB B@CDE@FC =
(Ec. D1)
H?IJ EJECA B? HK?EIC FJ FJB@F@

La especificidad diagnstica es la proporcin de muestras sin condicin alguna, p. ej., concentracin


inferior a la concentracin de corte, que dan resultados negativos al anlisis cualitativo.

H?IJ B? HK?EIC L?IBCB?IJ ?DCE@LJ


NM?F@O@F@BCB B@CDE@FC =
(Ec. D2)
H?IJ EJECA B? HK?EIC @ FJB@F@

Si es posible, se debe utilizar datos comparativos de un mtodo confirmatorio. En caso contrario, se


pueden medir muestras blanco adicionadas y no adicionadas.
Los parmetros importantes para medir la calidad en anlisis cualitativo son el LOD y el lmite de
corte (Figura D2). El LOD se define de manera anloga a como se hace en anlisis cuantitativo; la
concentracin de un analito que proporciona una seal que se puede distinguir estadsticamente del
valor medio de la sea de muestras blanco pertinentes. El lmite de corte, si se determina
correctamente, se encuentra donde la tasa de falsos negativos, para concentraciones superiores al
lmite, es baja. En la validacin, se evala el lmite de corte propuesto en el procedimiento
documentado.

Limite de
Limite de
deteccin
corte
(LOD)
Escala relativa
de aumento de
la concentracin
No Deteccin del analito
deteccin
Deteccin
No
deteccin

Con un nivel de
probilidad dado

Si Resultados
No binarios

Figura D2 Hay dos referencias cuantitativas que originan una respuesta binaria en el tipo de
cuantificacin/clasificacin en anlisis cualitativo: 1. El lmite de deteccin (LOD), que es inherente al
mtodo, 2. El lmite de corte, dado en el procedimiento documentado. Ambos se sitan en una escala
imaginaria de concentracin creciente. En la zona de deteccin, por encima del lmite de deteccin, el
lmite de corte nos permite distinguir regiones de concentracin del componente en las cuales se obtiene la
respuesta binaria correcta: p. ej., No por debajo de los lmites y S por encima de ellos.

Se utilizan varios conceptos adicionales en anlisis cualitativo (Tabla D1). Los valores predictivos de
los resultados se pueden incrementar aumentando el predominio de la concentracin por encima de la
de corte en las muestras analizadas por el mtodo cualitativo, p. ej., fuentes de informacin distintas a
las del mtodo qumico cualitativo. Esto mejorar sustancialmente el valor prctico del mtodo de
medida cualitativo.
La selectividad de un mtodo de medida cualitativo es un concepto ordinal: la extensin en la que
analitos distintos al incluido en la especificacin interfieren en el anlisis. Esta caracterstica

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La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

fundamental del mtodo se puede definir tambin como su capacidad para producir resultados que no
estn influidos por efectos de matriz.

Tabla D1 Definicin y clculo de los conceptos que describen las propiedades diagnsticas de los
mtodos de medida, incluyendo los mtodos de medida cualitativos
Concepto (smbolo) Descripcin Frmula

?@&@A@BCB B@CDE@FC
Relacin de probabilidad La relacin de la tasa de verdadero
P+=
1 ?M?F@O@F@BCB B@CDE@FC
positiva (RP+) positivo con respecto a la tasa de
falso positivo.

1 ?@&@A@BCB B@CDE@FC
P=
Relacin de probabilidad La relacin de la tasa de falso
?M?F@O@F@BCB B@CDE@FC
negativa (RP-) negativo con respecto a la tasa de
verdadero negativo.
Relacin de probabilidad Combina los conceptos de
P +
PQ =
diagnstica (RPD) sensibilidad diagnstica,
P
especificidad diagnstica y las
relaciones de probabilidad en un
nico nmero.
Valor predictivo positivo La proporcin de muestras con un

SH?IJ B? L?IBCB?IJ MJ@E@LJ


(VPP) resultado positivo en el anlisis
RPP =
SH?IJ EJECA B? MJ@E@LJ
cualitativo que tienen la condicin.
Se tiene en cuenta la prevalencia de
la condicin en la poblacin
objetivo de las muestras.
Valor predictivo negativo La proporcin de muestras con un

SH?IJ B? L?IBCB?IJ ?DCE@LJ


(VPN) resultado negativo en el anlisis
RPS =
SH?IJ EJECA B? ?DCE@LJ
cualitativo que no tienen la
condicin. Se tiene en cuenta la
prevalencia de la condicin en la
poblacin objetivo de las muestras.

VM 2016 56
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

Bibliografa
(Para actualizar las referencias ms importantes consultar el documento Reading List localizado en
el apartado de Publicaciones de la web de Eurachem, www.eurachem.org.)

1. ISO/IEC 17025:2005 General requirements for the competence of testing and calibration
laboratories, ISO Geneva.
2. ISO 15189:2012 Medical laboratories Requirements for quality and competence, ISO Geneva.
3. ISO 15195:2003 Laboratory medicine Requirements for reference measurement laboratories,
ISO Geneva.
4. J. N. Miller, Basic statistical methods for analytical chemistry. Part 2. Calibration and regression
methods. A review, Analyst, 1991, 116, 3.
5. J. C. Miller, J. N. Miller, Statistics and chemometrics for analytical chemistry, 6th ed., Pearson,
Harlow, 2010, ISBN 978-0-273730422.
6. S. L. R. Ellison, V. J. Barwick, T. J. Duguid Farrant, Practical statistics for the analytical scientist.
A bench guide, 2nd ed., RSC Publishing, Cambridge, 2009, ISBN 978-0-85404-131-2.
7. International vocabulary of metrology Basic and general concepts and associated terms (VIM),
JCGM 200:2012, www.bipm.org. A previous version is published as ISO/IEC Guide 99:2007,
ISO Geneva.
8. V. J. Barwick, E. Prichard (eds.), Eurachem Guide: Terminology in analytical measurement
Introduction to VIM 3, Eurachem, 2011, ISBN 978-0-948926-29-7, www.eurachem.org.
9. ISO 9000:2005 Quality management systems Fundamentals and vocabulary, ISO Geneva.
10. ISO 9001:2008 Quality management systems Requirements, ISO Geneva.
11. ISO online browsing platform (OBP), https://www.iso.org/obp/ui/.
12. M. Thompson, S. L. R. Ellison, R. Wood, Harmonized guidelines for single-laboratory validation
of methods of analysis (IUPAC technical report), Pure Appl. Chem., 2002, 74(5), 835.
13. Validation of analytical procedures: Text and methodology Q2(R1), ICH harmonised tripartite
guideline, 2005, www.ich.org.
14. ISO 80000-1:2009 Quantities and units Part 1: General, ISO Geneva.
15. M. H. Ramsey and S. L. R. Ellison (eds.), Eurachem/EUROLAB/CITAC/Nordtest/AMC Guide:
Measurement uncertainty arising from sampling: a guide to methods and approaches, Eurachem,
2007, ISBN 978-0-948926-26-6, www.eurachem.org.
16. AMC technical brief No. 19, March 2005, M. Thompson (ed.), Terminology the key to
understanding analytical science. Part 2: Sampling and sample preparation, www.rsc.org.
17. Compendium of chemical terminology (IUPAC Gold Book), www.iupac.org.
18. Compendium of analytical nomenclature (IUPAC orange book), www.iupac.org.
19. Method validation of U.S. Environmental Protection Agency microbiological methods of analysis.
Prepared for The EPA forum on environmental measurements (FEM). The FEM Microbiology
Action Team, FEM Document Number 2009-01, 7 Oct., 2009.
20. ISO 10012:2003 Measurement management systems - Requirements for measurement processes
and measuring equipment, ISO Geneva.
21. Evaluation of measurement data Guide to the expression of uncertainty in measurement (GUM),
JCGM 100:2008 (corrected version 2010), www.bipm.org. Printed as ISO/IEC Guide 98-3:2008,
ISO Geneva.
22. S. L. R. Ellison, A. Williams (eds.), Eurachem/CITAC Guide CG4: Eurachem/CITAC,
Quantifying uncertainty in analytical measurement, 3rd ed., Eurachem, 2012, www.eurachem.org.
23. Guide to method validation for quantitative analysis in chemical testing laboratories, INAB Guide
PS15, 3 April 2012, www.inab.ie.

VM 2016 57
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

24. CLSI, User verification of performance for precision and trueness; Approved guideline 2nd ed.
CLSI document EP15-A2. Wayne PA, Clinical and Laboratory Standards Institute 2005,
www.clsi.org.
25. AOAC Guidelines for collaborative study procedures to validate characteristics of a method of
analysis, 2002, www.aoac.org.
26. Protocol for the design, conduct and interpretation of method-performance studies, (IUPAC
technical report), Pure Appl. Chem., 1995, 67(2), 331.
27. ASTM E1601-12 Standard practice for conducting an interlaboratory study to evaluate the
performance of an analytical method, 2012, www.astm.org.
28. CEN/TR 10345:2013 Guideline for statistical data treatment of inter laboratory tests for validation
of analytical methods, CEN Brussels.
29. ISO 5725 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results Parts 1-6, ISO
Geneva.
30. ISO Guide 30:1992/Amd 1:2008 Terms and definitions used in conjunction with reference
materials, ISO Geneva.
31. M. Thompson, P. J. Lowthian, Notes on statistics and data quality for analytical chemists,
Imperial College Press, 2011, ISBN 978-1848166172.
32. E. Mullins, Statistics for the quality control chemistry laboratory, RSC, Cambridge, 2003, ISBN
978-0-854074-671-3.
33. W. Funk, V. Dammann, G. Donnevert, Quality assurance in analytical chemistry: Applications in
environmental, food, and materials analysis, biotechnology, and medical engineering, 2nd ed.,
Wiley-VCH, Weinheim, 2006, ISBN 978-3-527-31114-9.
34. A. Kallner, Laboratory statistics. Handbook of formulas and terms (1st ed.), Elsevier, 2013, ISBN
978-0-12-416971-5.
35. Codex Alimentarius Commission, Procedural manual 21st ed., 2013.
36. Council Directive 98/83/EC (3 November 1998) on the quality of water intended for human
consumption.
37. Commission Directive 2009/90/EC (31 July 2009) laying down, pursuant to Directive
2000/60/EC of the European Parliament and of the Council, technical specifications for chemical
analysis and monitoring of water status.
38. Commission Decision 2002/657/EC (12 August 2002) implementing Council Directive 96/23/EC
concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results.
39. SANCO/12571/2013 (19 Nov. 2013) Guidance document on analytical quality control and
validation procedures for pesticide residues analysis in food and feed.
40. AMC technical brief No. 17, July 2004, M. Thompson (ed.), The amazing Horwitz function,
www.rsc.org.
41. Selectivity in analytical chemistry (IUPAC recommendations 2001), Pure Appl. Chem., 2001,
73(8), 1381.
42. NATA Technical report #17 Guidelines for the validation and verification of quantitative and
qualitative methods, 2012.
43. E. Theodorsson, Validation and verification of measurement methods in clinical chemistry,
Bioanalysis, 2012, 4(3), 305.
44. AMC technical brief No. 37, March 2009, M. Thompson (ed.), Standard additions: myth and
reality, www.rsc.org.
45. ISO 11843-1:1997/Cor 1:2003 Capability of detection Part 1: Terms and definitions, ISO
Geneva.
46. ISO 11843-2:2007 Capability of detection Part 2: Methodology in the linear calibration case,
ISO Geneva.

VM 2016 58
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

47. ISO 11843-3:2002 Capability of detection Part 3: Methodology for determination of the critical
value for the response variable when no calibration data are used, ISO Geneva.
48. ISO 3534 Statistics Vocabulary and symbols Parts 1-3, ISO Geneva.
49. Nomenclature in evaluation of analytical methods, including detection and quantification
capabilities (IUPAC Recommendations 1995), Pure Appl. Chem., 1995, 67, 1699.
50. L. A. Currie, Detection in analytical chemistry Importance, theory, and practice, ACS
Symposium Series 361, American Chemical Society, Washington, DC 1988.
51. Analytical Methods Committee, Recommendations for the definition, estimation and use of the
detection limit, Analyst, 1987, 112, 199.
52. A. Shrivastava, V. B. Gupta, Methods for the determination of limit of detection and limit of
quantitation of the analytical methods, Chronicles of Young Scientists, 2011, 2(1), 21.
53. United States Pharmacopeia, Validation of compendial methods, 26th revision, National
Formulary, 21st ed. Rockville, MD: The United States Pharmacopeial Convention Inc., 2003.
54. Commission Regulation (EC) No 333/2007 (28 March 2007) laying down the methods of
sampling and analysis for the official control of the levels of lead, cadmium, mercury, inorganic
tin, 3-MCPD and benzo(a)pyrene in foodstuffs, Off. J. EU, L 88/29, 29 March 2007.
55. M. Valcrcel, S. Crdenas, D. Barcel et al., Metrology of qualitative chemical analysis, report
EUR 20605 EN, European Commission, 2002, ISBN 92-894-5194-7.
56. H. Sahai, R. P. Singh, The use of R2 as a measure of goodness of fit: An overview, Virginia
Journal of Science, 1989, 40(1), 5.
57. Analytical Methods Committee, Uses (proper and improper) of correlation coefficients, Analyst,
1988, 113, 1469.
58. ISO 11732:2005 Water quality Determination of ammonium nitrogen Method by flow
analysis (CFA and FIA) and spectrometric detection, ISO Geneva.
59. A. Menditto, M. Patriarca, B. Magnusson, Understanding the meaning of accuracy, trueness and
precision, Accred. Qual. Assur., 2007, 12, 45.
60. D. T. Burns, K. Danzer, A. Townshend, Use of the terms recovery and apparent recovery in
analytical procedures (IUPAC Recommendations 2002), Pure Appl. Chem., 2002, 74(11), 2201.
61. S. L. R. Ellison, B. King, M. Rsslein, M. Salit, A. Williams (eds.), Eurachem/CITAC Guide
Traceability in chemical measurement. A guide to achieving comparable results in chemical
measurement, 1st ed, Eurachem, 2003, www.eurachem.org.
62. P. De Bivre, R. Dybkaer, A. Fajgelj, D. Brynn Hibbert, Metrological traceability of measurement
results in chemistry: Concepts and implementation (IUPAC Technical Report), Pure Appl. Chem.,
2011, 83(10), 1873.
63. AMC technical brief No. 21, Sept. 2008, M. Thompson (ed.), The estimation and use of recovery
factors, www.rsc.org.
64. ISO Guide 33:2000 Uses of certified reference materials, ISO Geneva.
65. T. Linsinger, Application note 1, Rev. 3 2010. Comparison of a measurement result with the
certified value, www.erm-crm.org.
66. B. Magnusson, T. Nykki, H. Hovind, M. Krysell, Handbook for calculation of measurement
uncertainty in environmental laboratories, Nordtest Report TR 537 (ed. 3.1) 2012,
www.nordtest.info.
67. ISO 21748:2010 Guidance for the use of repeatability, reproducibility and trueness estimates in
measurement uncertainty estimation, ISO Geneva.
68. Eurolab, Measurement uncertainty revisited: Alternative approaches to uncertainty evaluation,
Technical report No. 1/2007, www.eurolab.org.
69. S. L. R. Ellison, A. Williams, Measurement uncertainty: the key to the use of recovery factors?
From The use of recovery factors in trace analysis, M. Parkany (ed.), RSC, Cambridge, 1996,
ISBN 0-85404-736-0.

VM 2016 59
La Adecuacin al Uso de los Mtodos Analticos Gua Eurachem

70. V. J. Barwick, S. L. R. Ellison, Measurement uncertainty: approaches to the evaluation of


uncertainties associated with recovery, Analyst, 1999, 124, 981.
71. S. L. R. Ellison, V. J. Barwick, Estimating measurement uncertainty: Reconciliation using a cause
and effect approach, Accred. Qual. Assur., 1998, 3, 101-105.
72. G. E. ODonnell, D. B. Hibbert, Treatment of bias in estimating measurement uncertainty,
Analyst, 2005, 130, 721.
73. B. Magnusson, S. L. R. Ellison, Treatment of uncorrected measurement bias in uncertainty
estimation for chemical measurements, Anal. Bioanal. Chem., 2008, 390, 201.
74. W. J. Youden, E. H. Steiner, Statistical Manual of the AOAC, AOAC International, 1975, ISBN
0-935584-15-3.
75. Harmonised guidelines for internal quality control in analytical chemistry laboratories, (IUPAC
technical report), Pure Appl. Chem., 1995, 67(4), 649.
76. H. Hovind, B. Magnusson, M. Krysell, U. Lund, and I. Mkinen, Internal quality control
Handbook for chemical laboratories, Nordtest technical report 569, 4th ed., 2011,
www.nordtest.info.
77. ISO 7870 Control charts Parts 1-5, ISO Geneva.
78. AMC technical brief No. 9, Feb. 2002, M. Thompson (ed.), A simple fitness-for-purpose control
chart based on duplicate results obtained from routine test materials, www.rsc.org.
79. ISO/IEC 17011:2004 Conformity assessment General requirements for accreditation bodies
accrediting conformity assessment bodies, ISO Geneva.
80. ISO/IEC 17043:2010 Conformity assessment General requirements for proficiency testing, ISO
Geneva.
81. I. Mann, B. Brookman (eds.), Eurachem Guide: Selection, use and interpretation of proficiency
testing (PT) schemes by laboratories, 2nd ed., Eurachem, 2011, www.eurachem.org.
82. EA-4/18 TA, Guidance on the level and frequency of proficiency testing participation, European
co-operation for Accreditation, 2010, www.european-accreditation.org.
83. ISO 78-2:1999 Chemistry Layouts for standards - Part 2: Methods of chemical analysis, ISO
Geneva.
84. S.L.R. Ellison, A. Williams (eds.), Eurachem/CITAC Guide: Use of uncertainty information in
compliance assessment, Eurachem, 2007, www.eurachem.org.
85. R. R. Galen, S. R. Gambino, Beyond normality: The predictive value and efficiency of medical
diagnoses, John Wiley and Sons, 1975, ISBN 978-0471290476.
86. M. S. Pepe, The statistical evaluation of medical tests for classification and prediction, Oxford
University Press, Oxford, 2003, ISBN 978-0-19-850984-4.
87. X-H. Zhou, N.A. Obuchowski, D.K. Mcclish, Statistical methods in diagnostic medicine, 2nd ed.,
Wiley-Interscience, New York, 2011, ISBN 978-0-470-18314-4.

VM 2016 60
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