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AULA
Mutao e reparo do DNA
objetivos

Ao final desta aula, voc dever ser capaz de:


Entender o que mutao.
Diferenciar as mutaes espontneas das
induzidas, assim como as mutaes somticas
das germinativas.
Classificar os tipos de mutao de acordo com
a mudana de aminocido introduzida.
Listar os principais agentes mutagnicos (que
causam mutaes no DNA).
Entender como as mutaes podem se
estabelecer no DNA.
Discutir a importncia das mutaes em
diversas reas da cincia.
Descrever os principais mecanismos de reparo
de DNA.

Pr-requisitos
Para acompanhar mais facilmente esta aula,
importante que voc reveja alguns conceitos
das aulas sobre cidos nuclicos (3, 4 e 5) e
replicao (9, 10, 11 e 12) de nossa disciplina.

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

INTRODUO Voc viu, na Aula 4, que o papel do DNA como molcula da hereditariedade
depende, em parte, de sua estabilidade. O armazenamento de informaes
por um longo perodo sem alterao importante para a clula. Concorda?
Contudo, voc deve saber que as reaes que alteram a estrutura do DNA
CARCINOGNESE podem ser fisiologicamente significantes. Processos como carcinognese e
Processo de envelhecimento, por exemplo, podem estar intimamente ligados ao acmulo
desenvolvimento de
cncer, doena que lento de alteraes irreversveis do DNA.
se origina de clulas
mutantes que escapam As mutaes no devem ser vistas como algo totalmente ruim. Se voc pensar
dos controles normais
de diviso celular, no como um indivduo, mas sim como uma espcie, com certeza concordar
podendo invadir e
colonizar diferentes com o lado bom das alteraes no DNA. As mutaes que no levam
tecidos do corpo. morte ou a restries drsticas de vida de cada indivduo de uma populao
podem representar uma vantagem em determinadas condies ambientais.
Essas variaes sutis, existentes entre os integrantes de uma populao, muitas
vezes asseguram a perpetuao e o processo evolutivo de uma espcie.

Tambm importante que voc saiba que mutao e recombinao (assunto


da Aula 15) constituem as duas principais causas da variabilidade existente
entre os indivduos que integram uma populao. Outro mecanismo associado
a esta variabilidade envolve os elementos genticos de transposio, que sero
discutidos nas Aulas 18 e 19.

Em uma clula, que geralmente tem apenas uma ou duas cpias de DNA
genmico, as protenas e os RNAs defeituosos podem ser rapidamente
substitudos usando a informao codificada no DNA. Entretanto, as molculas
de DNA so insubstituveis e, apesar de se reconhecer a contribuio inestimvel
de algumas mutaes, manter a integridade da informao contida no DNA
uma obrigatoriedade celular, o que assegurado por um sofisticado conjunto
de sistemas de reparo de DNA. Os danos no DNA podem ser causados por uma
variedade de processos, alguns espontneos, outros catalisados por agentes
ambientais. Voc ver que a prpria replicao pode ocasionar danos no
contedo de informao do DNA.
Nesta aula, no discutiremos o aspecto evolutivo das mutaes, mas sim como elas
ocorrem, como podem ser classificadas e sua importncia em diferentes reas, como
a da sade e a biotecnolgica. Voc tambm ter a oportunidade de conhecer como
as clulas reparam as possveis leses que surgem no DNA, de forma a minimizar
a transmisso desses erros para as futuras geraes de clulas.

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MDULO 2
Ao final da aula, sero discutidas as conseqncias para a clula de genes

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defeituosos que codificam protenas que atuam nos sistemas de reparo.

AULA
Como so muitas informaes, sugerimos que voc leia esta aula com mais
calma e ateno do que o habitual. No preciso se apressar! Lembre-se
de que voc est construindo seu conhecimento, o que requer pacincia e
perseverana.

Vamos comear?!?!

O QUE MUTAO?

Denominamos mutao qualquer alterao resultante de um


processo pelo qual os organismos sofrem mudana de um estado
hereditrio para outro, sem que envolva recombinao. O que voc
entende por sofrer mudana de um estado hereditrio para outro? Vamos
pensar juntos! Ns sabemos que, ao se duplicar, interessante que uma
clula origine clulas-filhas idnticas a ela. Para que as caractersticas
de uma clula sejam perpetuadas, necessrio que seu material gentico
esteja ntegro, sem alteraes, ou seja, que seu estado hereditrio se
apresente inalterado. Caso o material gentico seja modificado, o que
pode ocorrer at mesmo durante a replicao (estudaremos isso mais
adiante), podemos dizer que a clula sofreu uma mudana em seu
estado hereditrio e que as clulas-filhas herdaro tais modificaes.
Est claro?
importante ressaltar tambm que um dano causado no DNA
no necessariamente caracteriza uma mutao, uma vez que ele pode ser
reparado antes que ocorra a diviso celular. Um dano no reparado no
DNA uma leso tem como conseqncia mais sria uma mudana na
seqncia de bases do DNA que, se replicada e transmitida para as futuras
geraes de clulas, torna-se permanente. Esta mudana permanente
uma mutao. Podemos dizer, ento, que uma mutao se estabelece na
molcula de DNA atravs de um processo em duas etapas. Tenha certeza
de que mais adiante tudo isso ficar mais claro para voc.

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

Os cidos nuclicos, especialmente o DNA, que constitui o


material gentico das clulas, podem vir a apresentar uma seqncia
de nucleotdeos diferente da seqncia original devido substituio de
um nucleotdeo por outro ou mesmo por adio ou remoo de um ou
poucos nucleotdeos da molcula de DNA. Tais alteraes so chamadas
mutaes gnicas e sero estudadas nesta aula. Entretanto, alteraes mais
grosseiras, ou seja, que envolvem regies mais extensas do DNA, podem
ocorrer ao nvel de cromossomos, constituindo as aberraes cromossmicas,
que podem ser estruturais (translocaes, delees, duplicaes, inverses)
ou numricas (aneuploidias e poliploidias). As aberraes cromossmicas
sero discutidas nas aulas de Gentica.
A alterao da seqncia de nucleotdeos em organismos de
mais alto grau de complexidade pode ocorrer em tecidos distintos,
caracterizando a mutao somtica e a mutao germinativa. Observe
as diferenas na Figura 13.1, acompanhando o texto.

Figura 13.1: Mutao somtica vs mutao germinativa. As mutaes podem ocorrer tanto no tecido somtico
como no germinativo, entretanto, apenas as que ocorrem no tecido germinativo so transmitidas para a gerao
seguinte de clulas.

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MDULO 2
A mutao somtica se caracteriza por ocorrer em tecido somtico

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em desenvolvimento, podendo originar uma populao, denominada

AULA
clone, de clulas mutantes idnticas, todas descendentes da clula na qual
ocorreu a mutao. Este tipo de mutao, em geral, no transmitido
para a prole.
A mutao germinativa, em contrapartida, ocorre em tecido
associado formao de clulas sexuais. A mutao transmitida
para a gerao seguinte caso as clulas sexuais mutantes participem da
fertilizao. Vale lembrar que um indivduo exibindo fentipo normal
pode produzir clulas sexuais mutantes.

!
As mutaes em bactrias podem causar resistncia a antibiticos. De fato, o uso excessivo ou
a interrupo do tratamento aumenta a probabilidade de surgimento de linhagens de bactria
resistentes a diversos antibiticos, o que constitui um problema de sade pblica.
Os vrus sofrem mutao muito rapidamente, o que representa uma preocupao dos profissionais
da sade. Por exemplo, as vacinas contra gripe devem ser modificadas a cada ano para se adequarem
s mudanas virais. Outro exemplo diz respeito elevada taxa de mutao do HIV, o que dificulta
ainda mais o tratamento da AIDS.

MUTAES ESPONTNEAS E INDUZIDAS

Como grande parte das mutaes que afetam as clulas ocorre


espontaneamente, vamos comear discutindo as diferenas entre as
mutaes espontneas e as induzidas.
As mutaes so ditas espontneas quando resultam de uma
operao celular normal ou de interaes casuais com o ambiente. Ao
contrrio do que se possa imaginar, um nmero elevado de alteraes
no DNA poderia surgir, por exemplo, durante a replicao, caso no
existissem os sistemas de reparo do DNA. Sabemos tambm que as
mutaes so, em geral, eventos raros, uma vez que aquelas que ocorrem
naturalmente e que causam danos severos ao gene so, na maioria das
vezes, selecionadas durante o processo evolutivo, o que dificulta a
obteno de mutantes espontneos. Alm disso, as conseqncias
observveis de uma mutao dependem de sua localizao no gene,
portanto, nem todas as mutaes resultam em um fentipo alterado.

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!
Ns j definimos gentipo e fentipo na Aula 1. Voc j viu que a informao gentica armazenada
no DNA transcrita sob a forma de RNA, que, ento, utilizado durante a sntese de protenas,
determinando a seqncia de aminocidos na cadeia polipeptdica (Aula 5). Tambm j foi estudado
que, na maioria das vezes, apenas parte do genoma codifica alguma molcula, ou seja, est
relacionada sntese de uma molcula. Se juntarmos essas informaes, fcil entender que, se a
mutao ocorre em uma regio do genoma que no representa um gene, provavelmente no haver
alterao do fentipo. Alm disso, mesmo que a mutao ocorra dentro de um gene, a constatao
de um fentipo alterado depender do local e do tipo da mutao. Vamos entender por qu?
Nas aulas do Mdulo 3, voc ver que o gene apresenta regies no-codificadoras, ou seja, regies
que no so importantes para determinar, por exemplo, a seqncia de aminocidos em uma protena.
Voc ver tambm, nas aulas do Mdulo 4, que vrios tipos de cdon (a trinca de nucleotdeos no
RNA que determina um aminocido na protena, lembra?) determinam o mesmo aminocido na
protena. Assim, se a mutao ocorre na regio no-codificadora ou modifica o cdon sem que seja
introduzida uma mudana de aminocido na protena, o fentipo, associado protena, no se
apresentar alterado.

Voc j deve ter ouvido falar em alguns processos industriais, como,


por exemplo, a produo de antibiticos, nos quais microorganismos
so utilizados. Saiba que estes processos podem ser melhorados sob
diversos aspectos, incluindo rendimento de produto formado, atravs
da utilizao de organismos mutantes. Se as mutaes espontneas so
eventos raros, como ns j vimos, o que podemos fazer caso nosso
objetivo seja produzir mutantes?
Pois saiba que a ocorrncia das mutaes pode ser aumentada com
o uso de certos fatores, ditos agentes mutagnicos ou mutgenos, o que
caracteriza as mutaes induzidas. A maioria dos agentes mutagnicos
atua sobre uma base especfica do DNA, ou se incorpora ao cido
nuclico. Discutiremos isso mais adiante.
A essa altura, voc deve estar desesperado(a) com todos os
termos que esto sendo utilizados. Vamos, ento, dar uma paradinha
para rever cada um deles e introduzir alguns termos novos que sero
importantes para o entendimento desta aula.

Mutante refere-se ao estado gentico do organismo ou


da clula. Um organismo ou uma clula mutante aquele
que, devido a uma mutao, apresenta um conjunto de
caractersticas observveis (fentipo) diferente do fentipo
selvagem, que o normalmente encontrado ou o que
predomina entre os indivduos de uma populao.

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MDULO 2
Mutao qualquer alterao estrutural do DNA herdada,

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sem que envolva recombinao. Nem toda mutao est

AULA
associada a um fentipo mutante (j vimos isso), mas todo
mutante apresenta uma alterao estrutural no DNA, que
resulta em um fentipo mutante.
Evento mutacional expressa a ocorrncia de uma
mutao.
Agente mutagnico ou mutgeno um agente fsico ou um
reagente qumico que pode interagir com o DNA causando
uma mutao.
Mutagnese o processo de produo de mutantes, ou
seja, de induo de mutao.

Agora que voc j sabe diferenciar uma mutao espontnea


de uma mutao induzida, importante voc saber que as mutaes
se originam de um processo que envolve duas etapas: primeiramente,
um erro introduzido em uma das fitas do DNA dupla-hlice e, ento,
este erro ratificado durante a sntese de DNA. Para um melhor
entendimento, observe a Figura 13.2. Neste caso especfico, o DNA
parental teve uma base A substituda por C. Caso este erro no seja
corrigido, ao se replicar, a fita normal servir de molde para a sntese de
um DNA selvagem, idntico ao parental. Em contrapartida, ao servir
de molde na replicao, a fita contendo a base alterada (C) determina a
sntese de uma fita contendo G em lugar de T, resultando na substituio
do par T=A pelo par GC.

Figura 13.2: Mutao ao nvel molecular. Aps a introduo de uma base errada (a), a mutao ratificada
durante a replicao do DNA (b).

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COMO FEITA A SELEO DE MUTANTES?

Antes de iniciarmos o estudo sobre seleo de mutantes,


importante que voc saiba que tipo de fentipo mutante est sendo
analisado. Isto se faz necessrio porque as conseqncias fenotpicas de
uma mutao podem ser sutis, necessitando de metodologias refinadas
para se detectar o mutante, ou podem ser graves, produzindo defeitos
morfolgicos severos ou, at mesmo, a morte.
Os fentipos mutantes podem ser separados de acordo com o tipo
de mutao aos quais esto associados. A seguir, esto listados alguns
tipos de mutao que originam fentipos mutantes distintos.

Mutaes morfolgicas aquelas que levam a alteraes


morfolgicas, tais como as modificaes na forma, na cor
ou no tamanho de uma clula ou de um organismo.
Mutaes bioqumicas aquelas que resultam em perda
ou alterao de alguma funo bioqumica, como, por
exemplo, uma via metablica defeituosa devido a uma ou
mais enzimas mutadas, e por isso no observveis, podendo
ser identificadas apenas por anlise bioqumica.
Mutaes condicionais aquelas nas quais os fentipos
s se manifestam sob determinadas condies, como, por
exemplo, no caso dos mutantes sensveis temperatura.
Mutaes resistentes aquelas que conferem resistncia da
clula ou do organismo a certos tipos de drogas, incluindo
os antibiticos.
Mutaes regulatrias aquelas nas quais os fentipos
so detectados pela incapacidade de controle de expresso
de um ou vrios genes.
Mutaes letais aquelas que resultam em morte da clula
ou do organismo.

Agora que voc j est familiarizado com alguns fentipos


mutantes, vamos estudar como os mutantes espontneos ou induzidos
podem ser selecionados de acordo com suas caractersticas!

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MDULO 2
Vamos tomar como exemplo a seleo dos mutantes de bactria

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resistentes a um antibitico. Nesse caso, emprega-se meio de cultura

AULA
adicionado de antibitico, permitindo, assim, o crescimento apenas das
clulas mutantes. Este mtodo bem simples, no ?
Para a seleo de mutantes de bactria incapazes de utilizar lactose,
pode-se utilizar um meio de cultura, conhecido como EMB gar, contendo
todos os aminocidos, lactose e dois CORANTES SENSVEIS AO PH, eosina e azul CORANTES SENSVEIS
AO PH
de metileno. Vamos entender o que ocorre! As clulas LAC+ consomem
Estes compostos
lactose, por um metabolismo oxidativo, havendo liberao de on H+. apresentam colorao
Portanto, ocorre diminuio do pH do meio ao redor das clulas, o que distinta de acordo
com seu estado de
faz com que os corantes que permeiam as colnias apresentem colorao ionizao. So tambm
conhecidos como
vermelha. Ao contrrio, as clulas LAC- consomem glicina e liberam NH 3 indicadores de pH.
(amnia) que causa um aumento de pH ao redor destas clulas. Assim,
LAC+
os corantes perdem a cor, gerando colnias brancas.
Refere-se bactria
selvagem, capaz de
utilizar a lactose como
BASE MOLECULAR DAS MUTAES fonte de carbono.

Existem duas classes principais de mutaes gnicas: LAC-


Refere-se bactria
mutante que, por
substituio de bases em que ocorre substituio de um no ser capaz de
utilizar a lactose,
par de bases por outro; utiliza o aminocido
insero ou deleo de bases em que um ou mais pares glicina como fonte de
carbono.
de nucleotdeos inserido ou deletado.

O grupo de substituies de bases, por sua vez, subdivide-se em:

a) transio quando ocorre substituio de bases de


mesmo tipo, ou seja, uma pirimidina por outra ou uma
purina por outra (par A=T pelo par GC e vice-versa, ou
o par T=A pelo par CG e vice-versa);
b) transverso quando ocorre substituio de bases de
tipos diferentes, ou seja, uma purina por uma pirimidina,
ou uma pirimidina por uma purina (par A=T pelos pares
T=A ou CG e vice-versa, ou par GC pelos pares T=A ou
CG e vice-versa).

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COMO AS MUTAES GNICAS AFETAM AS PROTENAS?

Em aulas anteriores, j foi discutida superficialmente a relao


entre uma seqncia de bases no DNA e a seqncia de aminocidos em
uma protena. Este tema ser abordado mais detalhadamente nas aulas
do Mdulo 4. No entanto, para o entendimento das conseqncias de
uma mutao, fundamental que voc saiba que as trincas adjacentes
de nucleotdeos, chamadas cdons, determinam a seqncia de
aminocidos em uma protena e que qualquer alterao nestas trincas
pode resultar em mudana dos aminocidos que constituem uma cadeia
polipeptdica.
Com base na mudana causada na protena, as mutaes podem
ser de diferentes tipos. Leia a descrio deles acompanhando a figura.
Na Figura 13.3.a, voc encontra trs possveis substituies de bases que
podem ocorrer em um gene, capazes de resultar em mutaes: silenciosa,
missense e nonsense. J na Figura 13.3.b, possvel observar a diferena
resultante de insero e deleo de bases.

Mutao silenciosa no causa mudana de aminocido,


uma vez que mais de uma trinca pode codificar um mesmo
aminocido.
Exemplo: substituio do cdon UAC (Tyr) UAU (Tyr). Os
dois cdons especificam o aminocido tirosina, representado
dentro dos parnteses pelo smbolo de trs letras.
Mutao missense resulta em mudana de aminocido.
Exemplo: substituio do cdon UAC (Tyr) UUC
(Phe). Os dois aminocidos tm mesma caracterstica
qumica, so aminocidos com grupamentos aromticos,
apolares ou fracamente polares. Muitas vezes chamada
mutao neutra.
Substituio do cdon UAC (Tyr) GAC (Asp). Os dois
aminocidos tm caractersticas qumicas diferentes, Tyr
fracamente polar e Asp polar carregado negativamente.
Por vezes denominada mutao de sentido trocado.
Mutao nonsense (mutao sem sentido) determina
uma terminao prematura da traduo, resultando em
uma protena menor.

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Exemplo: substituio do cdon UAC (Tyr) UAG (Stop).

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O cdon que especifica Tyr substitudo por um cdon

AULA
que determina o trmino da traduo, gerando, assim, uma
protena menor, incompleta.
Mutao frameshift (mutao por mudana de quadro
de leitura) a adio ou deleo de pares de bases, no
mltiplos de trs dentro da regio codificadora, resulta
em mudana de todos os cdons a partir do ponto onde
ocorreu a alterao.

Figura 13.3: Tipos de mutao. a) A partir de trs bases constituintes de um gene, possvel gerar algumas
seqncias mutadas resultantes de substituies de cada uma das bases. Neste exemplo, tais alteraes origi-
naram mutaes silenciosa, missense e nonsense, associadas a protenas normal, defeituosa e incompleta,
respectivamente. b) Insero ou deleo de bases, envolvendo um nmero no mltiplo de trs, resulta em
mudana de quadro de leitura (frameshift). As conseqncias de uma mutao frameshift podem ser as mais
diversas, incluindo protenas defeituosas ou incompletas.

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Um exemplo importante da mutao causada por substituio de bases a anemia falciforme, doena
caracterizada por hemlise (quebra de hemcias) acentuada devido presena de hemoglobina
mutante, conhecida por hemoglobina S (HbS), no interior das clulas vermelhas do sangue. Esta
doena est associada substituio de adenina por timina, o que resulta em troca de cido glutmico
por valina na hemoglobina.

COMO OCORREM AS MUTAES ESPONTNEAS?

As mutaes espontneas ocorrem por erros de replicao do


DNA ou por leses espontneas.

Erros de replicao do DNA

Os erros de replicao normalmente ocorrem devido ao


tautomerismo de bases, incorporao de bases erradas e replicao
incorreta de seqncias repetitivas.
Vamos entender porque o tautomerismo das bases pode promover
uma mutao! Alis, antes, vamos entender o que tautomerismo.
Entende-se por estado tautomrico a variao da posio de um
prton (H+) em uma molcula. Em meio aquoso, as purinas e pirimidinas
possuem diferentes estados tautomricos, sendo que um deles predomina.
Observe na Figura 13.4 que as bases nitrogenadas adenina e citosina
podem se encontrar sob as forma amino (NH2), estado tautomrico mais
comum, e imino (=NH), a forma transiente. Com relao guanina e
timina, existem as formas ceto (C=O), o estado normal, e enol (=COH),
a forma transiente. Repare, tambm, nas Figuras 13.5.b e 13.5.c, os
possveis pares de bases formados pelos estados tautomricos transientes.
A forma imino de A pareia com C e a forma imino de C pareia com A.
J a forma enol de G pareia com T e a enol de T pareia com G.

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a

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b

Figura 13.4: Estados tautomricos das bases. Adenina (a) e citosina (b) apresentam-se sob as formas amino (estado
mais comum) e imino (estado transiente). Guanina (c) e timina (d) apresentam-se sob as formas ceto (estado mais
comum) e enol (estado transiente).

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c
Figura 13.5: Possveis pares de bases contendo uma das bases em seu estado tautomrico transiente. Pares de
bases Watson-Crick (a) e pares de bases formados pelas formas transientes de purinas (b), adenina e guanina,
e de pirimidinas (c), citosina e timina.

!
Ser que voc se lembra das frmulas estruturais das bases nitrogenadas? Voc sabe quais so os
grupamentos envolvidos no pareamento das bases?
No se esquea de retornar s aulas anteriores sempre que sentir necessidade. Se for necessrio,
no hesite em retornar s Aulas 3 e 4.

Agora chegou a hora de voc entender porque algumas formas


tautomricas podem resultar em alterao do pareamento de nucleotdeos!
Vamos tomar como exemplo o par de bases GC em uma molcula
de DNA durante a replicao. Para facilitar, leia o texto acompanhando a
Figura 13.6. Durante a separao das fitas, a forma normal de G poderia
originar o tautmero transiente G*, o que resultaria na formao do
par de bases G*T em lugar de GC. No prximo ciclo de replicao,
considerando a molcula de DNA contendo o par de bases G*T, muito

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MDULO 2
provavelmente, o tautmero G* retornaria forma amino e parearia

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normalmente com C. Entretanto, a outra fita de DNA, contendo a

AULA
base T, serviria de molde para a sntese de uma molcula contendo,
ento, o par de bases A=T. Esta mudana do par original GC para o
par A=T caracterizaria uma mutao. Portanto, podemos concluir que
tautmeros transientes permitem pareamentos no-padres de bases que
se encaixam na dupla-hlice de DNA, causando eventuais mutaes nos
ciclos seguintes de replicao.

a b

c
d

Figura 13.6: Erro de replicao devido ao tautomerismo das bases. a) DNA parental a ser replicado. b) No primeiro
ciclo de replicao, o tautmero transiente G* pareia com T, em lugar de C, originando o par G*T. c) Durante o
segundo ciclo de replicao, a forma imino (transiente) convertida para a forma amino, regenerado o estado
normal G. d) A fita de DNA contendo G gera uma molcula com o par de bases GC, enquanto a outra fita
contendo T gera o par de bases A=T, ratificando a mutao de GC para A=T.

Durante a replicao, algumas bases so erroneamente incorporadas.


Entretanto, as prprias polimerases, por apresentarem a funo de
edio, encarregam-se de retirar as bases erradas, permitindo, assim, a
incorporao da base correta. Reveja as aulas sobre replicao! Caso a
funo editora no seja desempenhada adequadamente, a base errada
passa a constituir a molcula de DNA e, no segundo ciclo de replicao, a
mutao , ento, ratificada. Para clarear o assunto, veja a Figura 13.7.

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

Figura 13.7: Erro de replicao devido


incorporao de bases erradas. No primeiro
ciclo de replicao (a), uma base G pareada
erroneamente com uma base A e este erro
no corrigido, o que resulta em uma
molcula de DNA contendo o par de bases
AG (b). Em um segundo ciclo de replicao
(c), a fita contendo a base A ir parear cor- a
retamente com a base T, gerando o DNA
selvagem. No entanto, a fita contendo a
base G, ao parear corretamente com a base
C, gera um DNA mutado (d), ratificando a
mutao A=T para CG.

SEQNCIA REPETITIVA
(OU SEQNCIA DE Outra possibilidade de erro se origina da replicao incorreta de
REPETIO)
SEQNCIAS REPETITIVAS (OU SEQNCIAS DE REPETIO) encontradas no genoma
As seqncias de
repetio, como o dos organismos. Observe, na Figura 13.8, que devido a um fenmeno
nome mesmo diz, conhecido como derrapagem da DNA polimerase possvel adicionar
correspondem a
unidades bsicas ou deletar uma ou mais bases. Na Figura 13.8.a, a seqncia repetitiva
de repetio que
se encontram em AAAAA propicia o desemparelhamento da base T, antes mesmo do
mltiplas cpias em
trmino da sntese da nova fita. Como resultado, temos uma fita com
srie no genoma dos
organismos. Estas seis, em lugar de cinco, bases do tipo T. Caso este erro no seja corrigido,
seqncias so mais
comumente do tipo em um segundo ciclo de replicao, a mutao por adio de base ser
mono, di, tri ou
tetranucleotdeos,
ratificada. Ao contrrio, na Figura 13.8.b, possvel observar o que
ou seja, de um, ocorre durante a replicao de uma seqncia repetitiva de CT. Nesse
dois, trs ou quatro
nucleotdeos. exemplo, a fita molde no completamente utilizada, o que resulta em

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MDULO 2
uma molcula com menos uma unidade de repetio (CT). Novamente, se

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este erro no for reparado, no ciclo seguinte de replicao, ser ratificada

AULA
a mutao por deleo de duas bases.

Figura 13.8: Replicao incorreta de seqncias repetitivas. Replicao incorreta de seqncias repetitivas,
resultando em adio (a) e deleo (b) de bases.

Leses espontneas

Alm dos erros de replicao do DNA, leses espontneas,


resultantes de depurinao, desaminao e danos oxidativos, tambm
podem ocorrer.

Depurinao

A depurinao consiste em perda de uma purina devido quebra


da ligao entre a base e a desoxirribose, gerando stios apurnicos,
conhecidos como stios AP. Esta ausncia de base na fita molde durante
a replicao resulta em incorporao de qualquer uma das quatro bases,
o que pode originar uma mutao, que se ratificar no segundo ciclo de
replicao, caso o erro no seja reparado. Observe na Figura 13.9.a a perda
da guanina e a conseqente gerao de um stio AP. J na Figura 13.9.b,
voc encontra um esquema de como a mutao pode se estabelecer no
DNA, a partir de stio apurnico. A incorporao de T resulta em transio
(GA), enquanto a incorporao de A ou G resulta em transverso (G
T ou GC), aps o segundo ciclo da replicao. importante voc saber
que uma nica clula perde mais de 10.000 purinas por dia, sendo que a
maioria dos stios apurnicos devidamente reparada.

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

Figura 13.9: Depurinao perda espontnea de purinas presentes no DNA. A perda de purina gera um stio
apurnico stio AP (a). Na ausncia de uma base na fita molde, qualquer base pode ser incorporada durante a
replicao do DNA, podendo gerar uma mutao (b).

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MDULO 2
Desaminao

13
AULA
A desaminao caracteriza-se pela perda do grupamento amino
(NH2) de uma das bases nitrogenadas. A desaminao da citosina, por
exemplo, gera uracila, conforme esquematizado na Figura 13.10.a, o que
resulta, nos ciclos subseqentes de replicao, em converso do par CG
para o par T=A. Alm disso, algumas bases se encontram metiladas, ou
seja, adicionadas de um grupamento metil (CH3), sendo que o estado
de metilao de um gene consiste em um importante mecanismo de
controle de expresso gnica. A desaminao de 5-metilcitosina produz
timina, conforme a Figura 13.10.b, resultando na transio CT e na
substituio do par CG pelo par T=A. Como a presena de timina no
reconhecida pela maioria dos sistemas de reparo, este mecanismo
uma causa comum de mutao.

Figura 13.10: Desaminao perda do grupamento amino das bases. A perda do grupamento amino da cito-
sina (a) e da 5-metilcitosina (b) resulta em uracila e timina, respectivamente. Essa mudana de base favorece a
formao de um par de bases diferente do original, o que caracteriza uma mutao.

CEDERJ 89

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

Danos oxidativos
RADICAIS LIVRES
tomos ou molculas Os danos oxidativos podem ocorrer espontaneamente devido
quimicamente reativas,
devido existncia de ao de RADICAIS LIVRES, tais como superxido (O2), perxido de hidrognio
pelo menos um eltron
desemparelhado, que (H2O2) e radical hidroxila (OH), que so gerados durante o metabolismo
apresentam tempo de aerbico normal. Estas espcies reativas de oxignio podem causar danos
vida pequeno.
Na busca de uma con- no DNA, ou at mesmo nos precursores do DNA (dGTP), resultando
figurao mais estvel,
os radicais livres em mutao. Dois dos produtos formados esto representados na Figura
podem causar danos
13.11. O 8-oxo-7-hidrodesoxiguanosina (8-oxodG), por exemplo, pareia
s macromolculas no
interior das clulas. Os freqentemente com A, estando associado a altos nveis da transverso
radicais livres podem
ser produzidos em GT. J a timidina glicol bloqueia a replicao.
processos normais ou
patolgicos e esto
Os danos oxidativos ocorrem naturalmente, mas sua freqncia
associados a danos aumentada por radiao ionizante, conforme voc ver mais adiante
teciduais em diver-
sas circunstncias, nesta aula.
incluindo: exposio
radiao, danos por a b
poluentes ambientais
e envelhecimento.
As substncias anti-
oxidantes, como a
vitamina C, diminuem
os nveis de radicais
livres em nosso
organismo, evitando,
assim, que eles causem
algum dano. Para
maiores informaes
sobre radicais livres e
sua importncia, visite
a pgina da Virtual
Free Radical School, Figura 13.11: Produtos de danos oxidativos do DNA decorrentes da ao de esp-
cujo endereo cies reativas de oxignio. a) Timidina glicol, que bloqueia a replicao do DNA. b)
http:// 8-Oxo-7-hidrodesoxiguanosina (8-oxodG), que promove a transverso GT.
ww.medicine.uiowa.edu/
FRRB/VirtualSchool/
Virtual.html.

COMO OCORREM AS MUTAES INDUZIDAS?

As mutaes induzidas ocorrem pela ao de agentes mutagnicos


qumicos e fsicos. Dentre os agentes mutagnicos qumicos mais
conhecidos, destacam-se os anlogos de base, os compostos que reagem
com o DNA, como o cido nitroso e os agentes alquilantes, e os agentes
intercalantes. Como exemplos de mutgenos fsicos, podemos citar os
raios ultra-violeta (raios UV), um tipo de radiao no-ionizante, e dois
tipos de radiao ionizante, os raios e os raios X.
Como ser que cada um desses agentes atua? Vamos discutir um
pouquinho sobre cada um deles separadamente.

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MDULO 2
Agentes mutagnicos qumicos

13
AULA
Anlogos de base

Pelo nome voc j deve entender como so os compostos desse


grupo. De fato, a ao mutagnica de um anlogo de base resulta de sua
incorporao no DNA no lugar de uma base regular. Se esse composto
tautomeriza ou se permite dois modos de pareamento atravs de pontes de
hidrognio, ele mutagnico. Como exemplo, podemos citar o 5-bromo
uracila (5-BU), um anlogo de timina. Observe sua frmula estrutural
na Figura 13.12.a. O carter mutagnico do 5-BU se deve mudana do
equilbrio ceto-enol causado pelo tomo de bromo, conforme pode ser
visto na Figura 13.12.b. A forma enol existe por mais tempo em 5-BU
do que em T, e pareia com G. Portanto, sua presena gera a transio
AG e a mudana do par T=A para o par CG. Como nos casos j
discutidos anteriormente, so necessrios dois ciclos de replicao para
gerar um novo par de bases.

Figura 13.12: Possveis pareamentos entre 5-bromo uracila (5-BU) e as bases nitrogenadas comuns. A presena
da forma comum do 5-bromo uracila (5-BU), um anlogo de timina, pareia com adenina (a), enquanto a forma
ceto de 5-BU permite o pareamento com guanina (b), o que caracteriza uma mutao.

Um outro exemplo a 2-amino purina (2-AP) (Figura 13.13.a),


um anlogo de adenina. Alm de parear com T, a forma protonada de
2-AP pode formar uma ponte de hidrognio com C (Figura 13.13.b).
Esta possibilidade de pareamento causa uma mudana do par A=T para
o par GC.

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

Figura 13.13: Possveis pareamentos entre 2-amino purina (2-AP) e as bases nitrogenadas comuns. Enquanto
2-amino purina (2-AP) pareia com timina (a), a forma protonada de 2-AP permite o pareamento com citosina
(b), o que em ciclos subseqentes de replicao gera uma mutao, caso o erro no seja reparado.

!
Exemplos de anlogos de base so algumas drogas antivirais e antitumorais. O AZT (azidotimidina),
um anlogo de timina, amplamente usado no tratamento de pacientes portadores de HIV.

Compostos que reagem com o DNA

Vrios compostos qumicos que reagem com o DNA so


conhecidos, destacando-se o cido nitroso, a hidroxilamina e o etil
metano sulfonato, um agente alquilante.

cido nitroso O cido nitroso (HNO2) causa desaminao


oxidativa convertendo o grupamento amino (NH2) das bases
nitrogenadas ao grupamento carbonila (C=O). Tal qual
ocorre na desaminao espontnea, que voc j estudou
anteriormente (volte Figura 13.10), a desaminao por
cido nitroso promove a converso de C em U, que pareia
com A, em vez de parear com G. A base A desaminada gera
a base hipoxantina, que pareia com C. J a desaminao
de G resulta em xantina, que pareia tambm com C, no
causando, portanto, mutao.

!
O cido nitroso formado a partir de precursores orgnicos, tais como as nitrosaminas, e de sais de
nitrito e nitrato, que so comumente empregados como conservantes de alimentos processados para
prevenir o crescimento de bactrias txicas. Na quantidade utilizada para este fim, estes compostos
no parecem aumentar o risco de cncer, conferindo um risco muito menor para a sade do que no
caso dos alimentos estragados pelo no uso de conservantes.

92 CEDERJ

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MDULO 2
Hidroxilamina A ao da hidroxilamina (NH OH)

13
2

resulta em adio de uma hidroxila citosina, que, dessa

AULA
forma, passa a parear com A mudando o par CG para
o par T=A.
Etil metano sulfonato O composto etil metano sulfonato
(EMS) um agente alquilante, ou seja, adiciona um
grupamento alquila a uma base nitrogenada. O EMS
capaz de adicionar o grupamento etila a muitas posies
das quatro bases, mas seu poder mutagnico est mais
relacionado adio da etila ao oxignio na posio 6 da
guanina. A O-6-etilguanina formada pareia, ento, com
timina (Figura 13.14), podendo resultar na transio GC
A=T nos ciclos seguintes de replicao. J a ao de
EMS sobre a timina resulta em formao de O-4-etiltimina,
que, ao parear com guanina, pode determinar a converso
de T para C.

A adio de um grupo alquila tambm pode ocorrer no N7 do


anel purnico, formando um nitrognio quaternrio nessa posio. Este
grupo quaternrio estimula a ionizao do anel e, na forma ionizada, a
guanina alquilada pareia com T em lugar de C, resultando na transio
do par GC para o par A=T. J a adenina alquilada apresenta uma ligao
N-glicosdica facilmente hidrolizvel, produzindo um stio apurnico,
tal qual foi visto na Figura 13.9.a. Tal stio pode ser reparado, mas se a
replicao precede o reparo, qualquer base pode ser inserida, tal como
ocorre na gerao espontnea de stios apurnicos que voc j estudou.
Como na Figura 13.9.b, aps a segunda replicao, o par original A=T
pode ser regenerado ou convertido aos pares GC, T=A ou CG.

CEDERJ 93

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

Figura 13.14: Ao do etil metano sulfonato (EMS). A ao do EMS sobre a guanina gera O-6-etil guanina que,
ao parear com timina, promove a converso do par GC em A=T (a). A timina, sob ao do EMS, convertida
em O-4-etil timina, que pareia com guanina, resultando na mudana do par T=A em CG (b).

Substncias intercalantes

As substncias intercalantes, tais como acridina laranja (corante)


e proflavina (anti-sptico de uso veterinrio) (Figura 13.15), inserem-se
entre dois pares de bases, num processo chamado intercalao. Estes
compostos so molculas planares, constitudas de trs anis, cujas
dimenses so muito similares s de um par purina-pirimidina. Quando
um DNA contendo acridinas intercaladas, por exemplo, se replica, bases
adicionais aparecem na seqncia. Normalmente, ocorre adio de uma
base, embora ocasionalmente possa ocorrer tambm a adio de duas
bases. A deleo de bases tambm possvel.

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MDULO 2
13
AULA
a

Figura 13.15: Substncias intercalantes e seu modo de ao. (a) Frmula estrutural de duas substncias inter-
calantes: proflavina e acridina laranja. (b) A presena de uma substncia intercalante na molcula de DNA causa
um estiramento da dupla-hlice, o que faz com que, durante a replicao, a DNA polimerase promova a adio
ou deleo de pares de bases.

!
O benzopireno, encontrado na fumaa de cigarro, e aflatoxinas, produzidas pelo fungo
Aspergillus flavus, que cresce em amendoim e em diversos tipos de gros, so exemplos de agentes
mutagnicos.

Agentes mutagnicos fsicos

Radiao no-ionizante raios ultravioleta

Os raios ultravioleta constituem um exemplo de radiao no-


ionizante, sendo considerado um mutagnico potente por sua capacidade
de causar dmeros de timina e outros dmeros de pirimidina. Na
Figura 13.16.a, voc pode observar os dois tipos de dmero: o dmero
ciclobutano-timina, formado pela ligao de dois resduos adjacentes
de timina ligados por anis de ciclobutano envolvendo os carbonos 5 e
6 da timina, e o fotoproduto 6-4, um outro tipo de leso causada pelos

CEDERJ 95

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

raios UV. As duas leses de DNA promovem distoro da dupla-hlice,


interferindo no pareamento normal das bases. A presena do dmero
ciclobutano-timina bloqueia a transcrio e a replicao, sendo a forma
mais letal quando no reparada.
O fotoproduto 6-4 a forma mais mutagnica. Um possvel
mecanismo de surgimento de mutao est esquematizado na Figura
13.16.b. Durante a replicao de uma molcula de DNA apresentando
dmero de timina, ambas as fitas so usadas como moldes para sntese
de novas fitas. A presena do dmero na fita molde pode direcionar a
incorporao de uma base errada na fita nova, de tal forma que, no
segundo ciclo de replicao, uma mutao ser produzida. Embora os
dmeros de pirimidinas possam eventualmente ser corrigidos, a mutao
no detectada pelo sistema de reparo de DNA. O efeito mutagnico
dos raios UV parece estar relacionado aos mecanismos de reparo desses
danos, como ser visto mais adiante nesta aula.

96 CEDERJ

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MDULO 2
13
AULA
a

Figura 13.16: Ao de raios ultravioleta sobre o DNA. (a) A incidncia de raios UV sobre uma molcula de DNA,
que apresenta dois resduos adjacentes de timina, pode resultar em formao de dmero de timina (ciclobutano)
ou em 6-4 fotoproduto. (b) Um possvel mecanismo para o surgimento de uma mutao induzida por raios UV.

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

!
A recomendao de no se tomar banho de sol entre 10h e 14h devida maior quantidade de
raios UV neste perodo do dia. O bronzeamento solar excessivo pode causar a formao de dmeros
de pirimidina nas clulas epiteliais, podendo resultar em cncer de pele.

Radiaes ionizantes (raios X e raios )

Dentre as radiaes ionizantes, destacam-se os raios X e os raios , que


se caracterizam pelo alto poder de penetrao, sendo capazes de ionizar gua
e outras molculas. Os radicais livres formados, por exemplo, o radical
hidroxila OH, so muito reativos e reagem com o DNA, promovendo
quebra de fita simples, quebras do suporte acar-fosfato ou quebra
do anel imidazol das purinas. Estas leses geram stios apurnicos ou
apirimidnicos, o que pode resultar em deleo de nucleotdeos.

DISTRIBUIO ESPACIAL DAS MUTAES hot spots

A distribuio espacial das mutaes na molcula de DNA no


ao acaso, e certos stios so alterados com maior freqncia. As regies
nas quais as mutaes esto concentradas so conhecidas como hot spots.
Estes stios no so idnticos para os diferentes agentes mutagnicos.
A presena dessas regies em um DNA alterado muitas vezes contribui
para identificar o tipo de agente mutagnico associado alterao.

REPARO DO DNA

Antes de iniciarmos este tpico, importante que voc pense a


respeito da fidelidade do processo de replicao do DNA. Para a clula,
interessante que seu DNA seja replicado de forma perfeita ou sejam
introduzidos erros de seqncia de bases? Pensou na forma perfeita? Ser
que um errozinho vantajoso? Vamos discutir sobre isso!!
Parece bvio que, se a cada ciclo de replicao fossem introduzidos
erros de seqncias de bases na molcula de DNA, a freqncia de
doenas genticas seria muito maior do que a observada. Alm disso,
como definiramos uma espcie, j que dificilmente ela seria preservada?
Em contrapartida, uma replicao perfeita, sem erros, no permitiria
a criao de novas espcies e, muito menos, a seleo de organismos
mais bem adaptados a certas condies ambientais, com um prejuzo
inestimvel ao processo evolutivo.

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MDULO 2
importante que voc saiba que a taxa de erro durante a

13
replicao do DNA no pequena. Entretanto, os sistemas de reparo

AULA
de DNA reduzem esta taxa de erro, sendo responsveis por manter o
equilbrio entre preservar a sade, preservar as espcies e possibilitar
a evoluo. Por exemplo, a subunidade da DNA polimerase III de
Escherichia coli introduz, aproximadamente, uma base incorreta a cada
104 pares de bases formados durante a replicao in vitro. Contudo, a taxa
estimada de mutao em clulas bacterianas muito menor, correspondendo
a um erro a cada 109 nucleotdeos incorporados durante a sntese de DNA.
Esta reduo da taxa de mutao se deve, principalmente, funo
revisora das DNA polimerases de E. coli. Na DNA polimerase III, esta
funo exibida pela subunidade (epsilon), de forma que, quando uma
base errada incorporada durante a sntese de DNA, a polimerase faz
uma pausa, transfere a extremidade 3 da cadeia crescente para o stio
da exonuclease no qual a base malpareada removida. A extremidade
3 , ento, transferida de volta para o stio da polimerase, onde esta
regio copiada corretamente. A funo revisora uma propriedade de
quase todas as DNA polimerases de bactria e das polimerases (delta) e
(epsilon) de clulas animais, indicando que esta funo indispensvel
para reduzir o excesso de erro em todas as clulas.
Alm dos sistemas de reparo que discutiremos nesta aula,
as clulas tambm desenvolveram sistemas enzimticos capazes de
neutralizar compostos com potencial de causar danos ao DNA. Como
exemplo, podemos citar um sistema que previne contra danos oxidativos
e que envolve a ao da enzima superxido dismutase sobre radicais
superxidos, convertendo-os a perxido de hidrognio, que , ento,
convertido gua pela ao da enzima catalase.
Voc j viu, na primeira parte desta aula, que os danos observados
nas molculas de DNA podem ser decorrentes no apenas de substituio
de bases durante a replicao, como tambm da troca de bases resultante da
instabilidade qumica, inerente s prprias bases ou s ligaes N-glicosdicas
e s alteraes resultantes da ao de agentes qumicos ou fsicos.
Agora, vamos discutir um pouco sobre os principais sistemas de
reparo conhecidos, lembrando que grande parte desse conhecimento foi
adquirida a partir de estudos com bactria. Muitos desses sistemas de reparo
tambm existem em eucarioto. Entretanto, o complexo enzimtico envolvido
e os detalhes do processo ainda no foram inteiramente esclarecidos.

CEDERJ 99

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

Nos prximos pargrafos, voc estudar o reparo de mau


pareamento de bases, os reparos de exciso de base e de nucleotdeo
e dois tipos de reparo direto, nos quais participam DNA fotoliases e
alquiltransferases.

Reparo de mau pareamento de bases mismatch repair

O sistema de reparo de mau pareamento, existente em clulas


de bactria e de eucariotos, responsvel pela correo tanto de mau
pareamento de uma nica base, exceto CC, quanto de pequenas inseres
e delees. Quando um mau pareamento, ou seja, um par de bases no
usual detectado, a base incorreta removida e substituda pela base
correta. O grande desafio deste mecanismo de reparo discriminar entre
as fitas de DNA normal e mutada, de forma a reparar a fita mutada tendo
a normal como referncia. Em bactria, como voc ver mais adiante,
a fita nova reconhecida por no ser metilada.
Apenas para reforar sua importncia, vale lembrar que a correo
de erros pelo sistema de reparo de mau pareamento na bactria E. coli
aumenta de 102 a 103 a fidelidade da replicao. Para voc entender o
que ocorre em organismos procariticos, leia os pargrafos seguintes
acompanhando a Figura 13.17.
Este sistema de reparo atua logo aps a replicao quando a fita
recm-sintetizada ainda no sofreu metilao. O que ser metilao?
No DNA de E. coli, resduos de adenina nas seqncias GATC so
metilados, ou seja, recebem um grupamento metila (CH3), na posio
6. Voc j sabe que as DNA polimerases incorporam adenina, e no metil
adenina, no DNA, de forma que os resduos de adenina estaro apenas
na fita recm-sintetizada. Como a metilao desta fita ocorre alguns
minutos aps a replicao pela ao da enzima Dam metil transferase
(ou Dam metilase), o DNA replicado se apresenta, por um perodo de
tempo, hemi-metilado, ou seja, a fita original metilada, enquanto a
fita recm-sintetizada no-metilada, o que faz com que o sistema de
reparo seja capaz de discriminar entre as duas fitas. Esse reconhecimento
fundamental para que a base incorporada erroneamente na fita recm-
sintetizada (no-metilada) seja removida e que a base correta seja, ento,
incorporada de acordo com a seqncia da fita original (metilada).

100 C E D E R J

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MDULO 2
Em bactria, este processo engloba a participao de trs protenas.

13
A protena MutH, que se liga especificamente seqncia GATC de

AULA
molculas hemimetiladas, capaz de distinguir a fita original metilada da
fita recm-sintetizada e, portanto, no-metilada. A protena MutS, que
reconhece o mau pareamento de bases, forma um complexo com uma
terceira protena, MutL. O DNA atravessa esse complexo, que se move
nas duas direes ao longo da molcula de DNA. Quando o complexo
encontra uma protena MutH ligada seqncia hemimetilada GATC, a
atividade endonuclease latente da MutH ativada, ocorrendo a clivagem
especfica da fita no metilada. Aps esta inciso, o segmento da fita
recm-sintetizada contendo a base incorporada erroneamente retirado
pela ao de uma exonuclease. Este segmento , ento, devidamente
substitudo pela seqncia correta em uma etapa em que se observa a
participao de vrias enzimas, incluindo a DNA polimerase III e a ligase.
Lembra do papel dessas enzimas na replicao?

CEDERJ 101

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

a b

Figura 13.17: Metilao do DNA e reparo de mau pareamento de bases. (a) Etapas envolvidas na metilao do
DNA. Note, durante este processo, a existncia de DNAs hemi-metilados, importantes para o reconhecimento
da fita a ser reparada. (b) Etapas envolvidas no reparo de mau pareamento de bases. A explicao da figura
encontra-se no texto.

102 C E D E R J

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MDULO 2
Reparo por exciso de base BER (base-excision repair)

13
AULA
O reparo por exciso de base reconhece qualquer leso que crie
uma distoro significativa na dupla-hlice do DNA, tais como as geradas
pela desaminao de citosina e adenina. Nesse caso, a base alterada
removida por clivagem da ligao N-glicosdica pelas enzimas conhecidas
como DNA glicosilases, gerando um stio AP, j citado anteriormente.
A uracil glicosilase, por exemplo, especfica para a remoo de
uracila que resulta da desaminao de citosina. Esta glicosilase no
remove resduos de uracila do RNA nem resduos de timina do DNA.
Outras glicosilases so capazes de remover hipoxantina, resultante da
desaminao de adenina, e bases alquiladas. Alm disso, lembre que
os stios AP tambm podem ser gerados pela hidrlise espontnea das
ligaes N-glicosdicas do DNA.
O fato que, independentemente dos eventos que antecedem sua
formao, o stio AP reparado por um processo enzimtico que consiste
em quatro etapas:

inciso ao reconhecer a distoro da dupla-hlice, uma


AP endonuclease corta a ligao fosfodister do suporte de
acar-fosfato prxima ao stio AP;
exciso o segmento de DNA removido pela atividade
53 exonuclease da DNA polimerase I;
sntese o grupamento 3-OH reconhecido pela
DNA polimerase I, que sintetiza um novo segmento de,
aproximadamente, 20 nucleotdeos, substituindo, assim,
a seqncia incorreta pela correta;
ligao aps a participao da DNA polimerase I, a
ligao fosfodister refeita, ou seja, a fita corrigida
selada, pela ao da DNA ligase.
Confira se voc entendeu tudo direitinho observando a
Figura 13.18.

CEDERJ 103

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

Figura 13.18: Reparo por exciso de base BER. (a) A DNA glicosilase reconhece uma base danificada e cliva a
ligao N-glicosdica formada entre esta base e a desoxirribose. (b) Uma AP endonuclease cliva a ligao fos-
fodister prxima ao stio AP. (c) A DNA polimerase I inicia a sntese de um novo segmento de DNA, concomi-
tantemente a sua atividade 53 exonuclease remove a poro da fita danificada. (d) A fita devidamente
selada pela ao da DNA ligase.

104 C E D E R J

Aula_13.indd 104 1/11/2006, 11:20:12 AM


MDULO 2
Reparo por exciso de nucleotdeo NER (nucleotide-excision repair)

13
AULA
O reparo por exciso de nucleotdeos reconhece grandes distores
da dupla-hlice do DNA. Neste sistema de reparo, uma enzima hidrolisa
duas ligaes fosfodister, uma em cada lado da leso. Em E. coli, em
particular, o complexo enzimtico que participa desse processo
denominado excinuclease ABC, sendo constitudo por trs subunidades,
UvrA, UvrB e UvrC. Inicialmente, o complexo formado por duas UvrA
e uma UvrB (A2B) se ligam ao stio da leso. O dmero UvrA (A2) se
dissocia e UvrB e UvrC efetuam as incises que flanqueiam a leso. Em
E. coli e em outros procariotos, o sistema enzimtico hidrolisa a quinta
ligao fosfodister no terminal 3 e a oitava no terminal 5, gerando
um fragmento de 12 a 13 nucleotdeos (dependendo se a leso envolve
uma ou duas bases). Em seres humanos e outros eucariotos, a enzima
hidrolisa a sexta ligao fosfodister no terminal 3 e a vigsima segunda
no terminal 5, produzindo um fragmento de 27 a 29 nucleotdeos. Aps
a dupla inciso e liberao do oligonucleotdeo excisado, o espao gerado
preenchido pela DNA polimerase I em E. coli e DNA polimerase em
humanos. A fita , ento, selada pela DNA ligase. Releia este pargrafo
acompanhando a Figura 13.19.

Figura 13.19: Reparo por exciso de nucleotdeo NER. (a) Um complexo enzimtico denominado excinuclease
cliva duas ligaes fosfodister especficas que flanqueiam a leso no DNA. (b) O fragmento de DNA resultante,
com 13 ou 29 nucleotdeos, respectivamente, em E. coli ou no ser humano, removido pela DNA helicase. (c) O
espao vazio preenchido pela DNA polimerase. (d) A fita reparada selada pela DNA ligase.

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

Reparo direto papel das fotoliases e das alquiltransferases

Vrios tipos de sistemas de reparo atuam sem remoo de base


ou nucleotdeo. Um deles o da fotorreativao direta de dmeros
de ciclobutano-pirimidina, uma reao promovida por enzimas
fotorreativadoras, as chamadas DNA fotoliases.
Voc j viu que os dmeros de pirimidina resultam de uma reao
induzida por luz ultravioleta. As fotoliases tambm usam energia derivada
de luz absorvida para reverter o dano causado. Repare na Figura 13.20.
A diferena que a clivagem dos dmeros de timina a monmeros de
timina catalisada pela enzima ativada pela luz visvel (300-600 nm).
As fotoliases geralmente contm dois cofatores que atuam como
compostos que absorvem luz, os chamados cromforos.

Figura 13.20: Fotorreativao papel das DNA fotoliases.


O fotodmero de timina , primeiramente, reconhecido
pela fotoliase, que se liga a ele. Em presena de luz visvel,
a fotoliase capaz de promover a quebra do dmero, con-
vertendo-o aos monmeros originais.

Um outro exemplo a ser citado o reparo da O-6-metilguanina,


que se forma em presena de agentes alquilantes. O reparo direto
feito pela O-6-metilguanina-DNA metiltransferase, uma protena que
catalisa a transferncia de um grupo metila de O-6-metilguanina para
um dos seus resduos de cistena. Esta enzima se comporta de maneira
peculiar, uma vez que a transferncia de um nico grupamento metila
suficiente para inativ-la. O consumo de uma molcula protica para
reparar uma leso corrobora a importncia de se manter a integridade
do DNA celular. A protena metilada, no entanto, no degradada, e
atua como um ativador transcricional, aumentando a expresso de seu
prprio gene e dos genes de outras enzimas de reparo.

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MDULO 2
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AULA
Figura 13.21: Reparo direto papel das alquiltransferases. O grupamento metila transferido para uma metil-
transferase que se torna inativa.

CONSIDERAES FINAIS
Considerando tudo o que vimos nesta aula, vamos pensar juntos
sobre o destino de um dano no DNA. Um erro na molcula de DNA
pode ser tolerado, ou simplesmente ignorado, pode ser reparado, pode
causar a morte da clula ou determinar que a clula se programe para
morrer, atravs de um processo conhecido como apoptose, ou pode ser
fixado, resultando em uma mutao.
As mutaes se apresentam com grande utilidade no s na
natureza, representando uma das causas da variabilidade gentica que
permitem a seleo natural e, portanto, a evoluo das espcies, como
tambm no campo da pesquisa. Nesta rea, os genes mutantes so
utilizados como sondas, uma vez que ajudam a desvendar os mistrios
pertinentes a uma funo biolgica. Assim, no estudo detalhado da
funo de um gene, importante que se obtenha o maior nmero
possvel de mutantes.
Muitos polimorfismos so responsveis pela variabilidade
observada entre os seres humanos. Talvez voc j tenha estudado sobre
isso em Gentica, mas vale a pena repetir. Em geral, o termo mutao
usado para indicar uma mudana gentica encontrada numa freqncia
baixa. Uma mutao passa a ser chamada polimorfismo quando sua
freqncia se torna maior que 0,01 (1%), ou seja, o termo polimorfismo
empregado quando se observam duas ou mais formas de um gene sem
que nenhuma delas represente mais que 99% na populao estudada.
Diferentemente da mutao, o termo polimorfismo indica um variante
normal de um gene. Esta normalidade controversa, pois alguns alelos,

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

que inicialmente se mostram como variantes normais, podem contribuir


para o desenvolvimento de certas doenas, incluindo o cncer, de maneira
bastante sutil.
Com o seqenciamento do genoma humano, foram identificados
diversos polimorfismos de um nico nucleotdeo, conhecidos por SNPs
(Single Nucleotide Polymorphisms), a cada 1.000 a 2.000 bases. Com
estes dados, pode-se concluir que 93% dos genes contm pelo menos um
SNP. Atualmente se acredita que o estudo de SNPs possa contribuir para
o entendimento da diversidade fenotpica e da predisposio a doenas
de maior complexidade.
Inmeras doenas esto associadas a mutaes em genes que
desempenham papis fundamentais nos processos celulares, podendo
ser herdadas. Quando essas mutaes se localizam em genes do sistema
de reparo, os portadores dessas alteraes apresentam uma predisposio
ao cncer, o que de alguma forma contribui para a correlao mutagnese-
carcinognese. Como exemplos dessas doenas, podemos citar: cncer
de colon no-polipose hereditrio, por deficincia no reparo mismatch,
e anemia de Fanconi, Xeroderma pigmentosum e Tricotiodistrofia, por
deficincia no reparo por exciso.

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RESUMO

AULA
Quanto s mutaes, voc estudou nesta aula que elas podem ocorrer em tecidos
somticos e germinativos de forma espontnea ou induzida. Existem regies,
chamadas hotspots, preferencialmente mutadas no genoma dos diferentes
organismos.
Quanto ao aspecto molecular, uma mutao pode ser definida como transio,
quando h substituio de uma purina por outra ou de uma pirimidina por outra,
ou transverso, quando ocorre troca de uma purina por uma pirimidina ou vice-
versa. Alm disso, mutaes em um gene podem ou no causar alteraes na
protena codificada por este gene.
As mutaes espontneas podem ser decorrentes de erros de replicao do DNA,
originados principalmente pelos pareamentos no usuais das formas tautomricas
raras das bases nitrogenadas, ou de leses espontneas, incluindo depurinao,
desaminao e danos oxidativos.
As mutaes induzidas podem ser causadas por agentes qumicos e fsicos. Dentre os
mutagnicos qumicos, destacam-se os anlogos de bases, compostos que reagem
diretamente com o DNA e os agentes alquilantes. As radiaes ionizantes (raios-
UV) e no-ionizantes (raios e os raios X) so importantes por causarem danos
no DNA.
A maioria das leses reparada pela clula. Entretanto, a maneira com que os
sistemas de reparo atuam depende do tipo do dano ou erro. Alm disso, diferentes
organismos variam em sua capacidade de reparar DNA. Quando ocorre falha no
sistema de reparo, um nmero muito menor de leses corrigido, acarretando
um aumento no nmero de mutaes no genoma.

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Biologia Molecular | Mutao e reparo do DNA

EXERCCIOS

1. Uma mutao que ocorre em uma clula somtica de um indivduo pode ser
herdada por sua prole? Explique.

2. Diferencie transio e transverso. No esquea de citar exemplos.

3. Quantos pares de bases teriam de ser deletados em um evento mutacional


para eliminar um nico aminocido de uma protena, sem alterao do restante
da cadeia polipeptdica?

4. Descreva a ao do 5-bromo uracila (5-BU) na produo de mutantes.

5. Aps a exposio de uma suspenso de clulas bacterianas luz ultravioleta,


duas alquotas foram plaqueadas em meio slido sendo que uma delas foi incubada
em ausncia de luz e outra em presena de luz. O nmero de mutantes na placa
mantida no escuro foi infinitamente menor do que o obtido na placa incubada
em presena de luz. Como se explica esse fato?

AUTO-AVALIAO

Como comentado anteriormente, esta aula envolve um nmero muito grande


de informaes. Portanto, optamos por exerccios que permitam voc avaliar se
o assunto foi devidamente assimilado. Caso voc no tenha conseguido resolver
algum deles, refaa a leitura da aula, insista um pouco mais nas figuras, pois temos
certeza de que elas podem ajudar bastante. Se as dvidas persistirem, v at o
plo discutir com os tutores. Certamente, eles sabero como lhe ajudar.

FIQUE ATENTO!

Na prxima aula, estudaremos recombinao e mais alguns sistemas de reparo.


At l!

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