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Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente

Microbiología Ambiental-358010A_224

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA
ESCUELA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO
AMBIENTE

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
100411_304

PREINFORME

PRESENTADO POR: YORMAN LEAL FERNANDEZ

CODIGO: 83235914

TUTORA DE LABORATORIO: LEIDY JOHANA DIAZ SANCHES

TUTOR VIRTUAL: JORGE ALEJANDRO RODRIGUEZ

GRUPO: 358010_46

NEIVA, SEPTIEMBRE, 2015

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INTRODUCIÓN

Con el desarrollo de esta práctica vamos a reconocer cada una de las instalaciones de un
laboratorio, las normas de seguridad que debemos tener en cuenta una vez estemos dentro de él,
los elementos de protección personal y los códigos de seguridad que debemos seguir una vez
hayamos ingresado a sus instalaciones. Además uno de los objetivos de la UNAD al implementar
estos procesos de aprendizaje es lograr que nosotros como estudiantes tengamos unas bases
sólidas referentes a todo lo que tiene que ver con procedimientos fisicoquímicos, de ahí la
necesidad de reconocer las diferentes clases de microorganismos y los beneficios que estos
pueden brindar al medio ambiente y a los seres humanos. Por otra parte vamos a adquirir un
conocimiento general sobre el cultivo de estos seres microscópicos, los ambientes en los que
pueden sobrevivir cada una de las diferentes especies y la facilidad que tiene muchos de ellos para
adaptarse a cambios bruscos en el ambiente.

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 OBJETIVO GENERAL

Reconocer la importancia que tiene la fisicoquímica en el estudio del medio ambiente, sus
diferentes aplicaciones, beneficios y lograr un reconocimiento adecuado de los diferentes tipos de
microorganismos.

 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Identificar las normas de seguridad dentro de un laboratorio.

Reconocer cada uno de los elementos de protección personal que debemos utilizar una vez
estemos dentro del laboratorio.

Reconocer cada uno de los materiales de un laboratorio y los usos que le podemos dar.

Identificar los distintos métodos de siembra de los microorganismos.

Reconocer las técnicas de tinción y los procedimientos para realizarlas.

Manejo y reconocimiento de los microscopios y el uso que le podemos dar

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PRÁCTICA No. 1: RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES
DE
MICROBIOLOGIA

INTRODUCCION

En esta práctica nos dan a conocer las normas de seguridad a tener dentro del laboratorio, al igual
que los elementos de protección personal que debemos utilizar. También debemos diferenciar y
reconocer cada uno de los elementos a utilizar, las ventajas o desventajas de estos según su
composición ya sean de plástico o vidrio, también vamos a conocer los diferentes clases de
microscopios y cada una de sus partes.

Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 .Escuela de Ciencias Agrícolas.

la fabricación de material Ventajas y desventajas del uso de materiales de vidrio y de plástico. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 PRÁCTICA No. respectivamente Pasos enfocar imágenes en un microscopio compuesto Microscopio óptico de Uso materiales. que se campo y sus partes les da en el laboratorio . 1: RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES DE MICROBIOLOGIA Medidas para manejo Características debe correcto y cuidados del LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA reunir el vidrio para microscopio compuesto. Escuela de Ciencias Agrícolas.

0000c. en los laboratorios de microbiología. se identifica por estar rotulada con el nombre de “Pyrex” (pairex) 1. este tipo de cristal es muy vulnerable a los impactos mecánicos. Rta:  VIDRIO: VENTAJAS DEL USO DEL VIDRIO  Se caracteriza porque tiene resistencia química ( Frente a ácidos. exposiciones a elevadas temperaturas. cuya aleación le confiere una alta resistencia mecánica. respectivamente. El producto en ese estado líquido. y cuando acabe el tiempo de secado dejar enfriar el material. térmica y química. La cristalería fabricada con estos componentes. Etc. Explique brevemente las ventajas y desventajas del uso de materiales de vidrio y de plástico. se vierten diversos moldes de acuerdo a los objetos que se requieran producir. Escuela de Ciencias Agrícolas. ¿Qué características debe reunir el vidrio utilizado para la fabricación del material de cristalería para los laboratorios y por qué? Rta: El vidrio se fabrica mediante la fusión de arena sílice con sales de sosa o potasa a una temperatura de 1. quedando como un cuerpo sólido. Como se sabe. quimax) DESVENTAJAS DEL USO DEL VIDRIO  No lo podemos someter a cambios bruscos de temperatura (se provocan tensiones que pueden romper el cristal)  Hay que colocar la estufa de secado o esterilización en frio.  No se debe aplicar fuerza sobre llaves. tapones de vidrio  No se debe someter a variaciones bruscas de presión . debido a la propiedad de no cristalizarse cuando se enfría. ir calentándolo después. lo que no resulta apropiado para la fabricación de la cristalería de laboratorio la cual requiere del empleo de otros componentes como el borosilicato de sodio y el aluminio. los cuales ofrecen gran resistencia térmica ( vidrio pirex. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 1. frente a bases)  Estabilidad  Se caracteriza por su transparencia  La mayoría de los utilizados son vidrios borosilicados. generalmente transparente.

ácido nítrico y perclorato DESVENTAJAS  No se puede calentar por encima de los 70°C  Porosidad frente anhídrido carbónico del aire porque las disoluciones que permanecen almacenadas por largo tiempo en estos recipientes se carbonatan . van a tener distintas propiedades físicas y químicas. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224  PLASTICO Los materiales de plástico pueden ser de uso múltiple. varían notablemente según su composición  Más estabilidad frente a los ácidos excepto el ácido sulfúrico. los utensilios de plástico de laboratorio son monómeros orgánicos polímero la rizada. Escuela de Ciencias Agrícolas. VENTAJAS  Resistencia a la rotura  Tiene un peso bajo  Sus propiedades físicas y químicas. Hay gran variedades de plásticos.

Escuela de Ciencias Agrícolas. se le sugiere elaborar un cuadro). Miden con presión volúmenes variables de . Describa. ilustre y clasifique los siguientes materiales. NOMBRE DEL IMAGEN ESPECIFICACIONES DE USO MATERIAL Se utilizan esencialmente para colocar sobre su Portaobjetos superficie pequeñas fracciones o volúmenes de muestras. que serán sometidas o no a un proceso de coloración. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 2. con la finalidad de ser observadas a través del microscopio Son empleadas para cubrir las muestras o Cubreobjetos preparaciones que han sido colocadas previamente sobre las láminas portaobjetos para ser observadas al microscopio Se utiliza en los laboratorios de Microbiología Cajas de Petri principalmente para el cultivo de bacterias o microorganismo para aislarlos e identificarlos y así poder estudiarlos con mayor facilidad. indicando el uso que se les da en el laboratorio de microbiología (Sea breve.

. . Traspaso de líquidos en volúmenes pequeños Se Clasifica En Volumétrico El tubo de ensayo es un instrumento de laboratorio que se utiliza principalmente como Tubos de ensayo contenedor de líquidos y sólidos. terminales) Pipetas graduadas terminales: la última graduación termina en graduación inferior. Escuela de Ciencias Agrícolas. Traspaso de líquidos en volúmenes (terminales y no exactos. especialmente para pruebas y ensayos cualitativos. Se Clasifica En Volumétrico. -Matraces Aforados: Sirve para medir el volumen especifico. con poca perdida de evaporación.Matraces Fiolas: se utiliza para calentar líquidos. Los tubos de ensayo con tapón o falcón se utilizan para almacenar temporalmente sustancias o muestras (sólidos o líquidos). hacer Matraces (tipos) titulaciones y recristalizar un sólido. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 Pipetas graduadas líquidos. -Matraz De Succión o kitazato: se utiliza para filtraciones al vacío con bomba de succión. Se utilizan para toma de pequeños inóculos de Pipetas Pasteur cultivos. se utiliza para preparar soluciones.

cultivo -Asa Espatulada: para manipular colonias duras y tomar muestras -Asa de alambre grueso en “L”: para purificar colonias de hongos y procedimientos especiales Se emplea a diario para esterilizar los instrumentos de siembra de micrón o platino. inoculación (tipos) -Asa recta o en hilo: sirve para trasladar una sola colonia a medios de identificación.Probeta clase A : las de clase A son producidas con más cuidado. para uro. Mecheros (tipos) mediante su exposición directa a la llama. se usan mucho en validación de métodos analíticos 3. Mayormente son de plástico. se usan en laboratorios de control de calidad y en laboratorios de pruebas. Probetas 2. su precio es bajo respecto a las probetas clase A. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 Se Clasifica En Volumétrico 1. Probeta clase B: Son para uso escolar y académico. pare mediciones en las que no se requiere tanta precisión. Se empela para medir determinados volúmenes de líquidos o soluciones en los casos en que no se necesite mucha exactitud.001ml. Escuela de Ciencias Agrícolas. Se clasifica en Volumétrico Se utiliza para evidenciar la producción de gas Tubos de Durham de una bacteria al fermentar determinados azucares -Asa en argolla o anillos. que los calentarán al rojo vivo en pocos segundos. . o subcultivos -Asa de planillo en anillo: calibrada para tomar 0. no calibrada: sirve para la Asas de siembra por estrías o inoculaciones en general. -Mechero Bunsen. Para flamear la boca de los tubos de ensayo y otras cristalerías estériles. .

hongos. para Estufas realizar cultivos de bacterias. Escuela de Ciencias Agrícolas. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 -Mechero Teclu -Mechero Mecker se utilizan a una temperatura de 37°C. a una Bacteriológicas temperatura igual a la del cuerpo humano Sirve para la esterilización por el calor seco Horno Pasteur Funciona por las presiones que se dará a una Autoclave mayor temperatura logrando su esterilización como por ejemplo las conservas Recipientes que se usan para conseguir una Jarra de atmósfera libre de oxígeno para el cultivo de Anaerobiosis microorganismos anaerobios .

Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza . Esto Mac Farland lo hace empleando una fotocelda colocada en un ángulo de 90° con respecto a una fuente luminosa. Ilustre un microscopio óptico de campo claro con los nombres de todas las partes . Escuela de Ciencias Agrícolas. centrífuga lo que permite la separación de los Centrífuga distintos componentes de la muestra mediante la precipitación en el fondo del tubo de las partículas en suspensión Nefelómetro de Medir partículas suspendidas en un líquido. Membranas Se usa para que las bacterias no pueden pasar a Millipore través de los agujeros pequeños Cuenta colonias Es un instrumento utilizado para contar colonias de bacterias o de otros microorganismos que crecen en una placa de agar 4.

 Asegurarse de que el portaobjeto está bien seco cuando va a ser colocado sobre la platina  Al enfocar sobre todo con los objetivos de mayor aumento.  Mover siempre suave y lentamente cualquier elemento del microscopio. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 5. sujetándolo por el brazo con una mano y por el pie con la palma de la otra  Una vez colocado el microscopio en n su sitio. Escuela de Ciencias Agrícolas. enfocamos alejando el objetivo. ya debería estar en esas condiciones. Rta: MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO  Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. hay que evitar que el extremo del objeto choque con la preparación. a no ser que vayan a ser sustituidos.  Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias. no debe moverse hasta que finalice la práctica. NORMAS BASICAS PARA EL CUIDADO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO  Para trasporta el microscopio se debe utilizar siempre las dos manos. en cuyo caso la operación debe realizarse lo más rápidamente posible. sin utilizar ningún disolvente. Para ello acercaremos el objetivo a la preparación mirando lateralmente y luego. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior. mirando ya a través del ocular. . cuando se vaya a cambiar de observador se debe mover él y no el microscopio. para evitar la entrada de polvo. Enliste detalladamente todas las medidas que se requiere tomar en cuenta para el manejo correcto y cuidados del microscopio compuesto.  Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas. Si se enuncian dichas lentes se limpiarán con un paño suave de algodón.  Nunca poner los dedos en lentes del ocular ni del objeto.  No sacar de su sitio el ocular ni los objetivos.

Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 6. Escuela de Ciencias Agrícolas. limpiar el objetivo con un tejido suave( papel seda. girar el revolver al objeto adecuado  Si se utiliza el objeto de inmersión (100x) colocar sobre la preparación una gota de aceite de inmersión y baja el tubo del microscopio hasta que la lente del objetivo toque a la gota. Rta: ENFOQUE DE IMÁGENES EN UN MICROSCOPIO COMPUESTO  Colocar el portaobjetos sobre la platina del microscopio  Utilizar el objeto de menor aumento  Deslizar el tubo del microscopio por medio del tornillo macrométrico. es la distancia entre dos entidades estructurales de un objeto en la cual todavía se pueden observar como estructuras separadas en la imagen amplificada. 7. Enliste detalladamente todos los pasos que se requiere seguir para enfocar imágenes en un microscopio compuesto. Defina los siguientes términos en microscopía: Límite De Resolución: El límite de resolución de un microscopio se define como la distancia mínima a partir de la cual ya no es posible distinguir la separación entre dos puntos. es decir. no debe bajarse el tubo del microscopio mientras se está observando. Formula: LR = λC/NA Dónde: λ: Longitud de onda de la luz en (??) C: Constante de proporcionalidad NA: Abertura numérica  Poder De Resolución: La resolución se define como el espacio de máxima aproximación entre dos puntos en el que aún se pueden observar claramente como dos entidades independientes. observando lateralmente hasta que el objetivo quede cerca del portaobjetos  Observar a través de los oculares subiendo lentamente el tubo del microscopio hasta observar la preparación enfocada. porque puede llegar a chocar el objetivo con el portaobjetos y ocasionar desperfectos  Afinar la imagen moviendo lentamente el tornillo micrométrico  Si se desea mayor aumento. 0. observa y ajusta cuidadosamente después de su uso.61? ?? = ? ??? ? .

Escuela de Ciencias Agrícolas. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 0.61: Constantes ? : Longitud de onda de la luz usada ? : Índice de refracción del medio ??? ? : seno del ángulo ?  Poder De Amplificación: Es la capacidad de un microscopio para aumentar la imagen. La amplificación de un microscopio es el producto de número de aumento del objetivo por los del ocular. Aumento útil: X1000 a x2000 Altura de la iamgen Aumento Lateral: Altura del objeto .

000 veces. que posteriormente serán recogidos por un dispositivo situado a los lados del objeto en cuestión.  Cuando sólo se pretende estudiar las estructuras externas de una muestra. A medida que haz de electrones barre la muestra. Escuela de Ciencias Agrícolas. TIPOS DE MICROSCOPIO ELECTRONICOS: Microscopio Electrónico De Transmisión (MET cortes muy finos. se presentan la imagen de esta en el monitor. Una parte de los electrones son absorbidos o rebotan por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del objeto en cuestión. después de aplicar una tinción negativa. También se puede usar el MEB. el cual está provisto de una fuente luminosa. no son necesarios cortes ultra finos. Las muestras no deben ser mayores de un par de miles de angstroms (1 angstrom es igual a 0. y la función de las lentes la realizan electromagnetos. MICROSCOPIO OPTICO: Se usa para aumentar el tamaño de la imagen aparente de los objetos. operándose en todo momento a alto vacío. una lente condensadora de luz que la dirige hacia el objeto a observar y dos juegos de lentes que ayudan a la amplificación de la imagen.0000000001 metros) se ha de colocar una placa fotográfica detrás del objeto para registrar la imagen aumentada.  Todos los microscopios electrónicos tienen cámaras incorporadas que permiten fotografiar las muestras denominándose microfotografías electrónicas. DIFERENCIAS Y VENTAGAS:  Para el estudio de las estructuras internas de las células es esencial un microscopio MET. Cada punto leído de la muestra corresponde a un pixel. Microscopio electrónico de barrido (MEB): En este no es necesario que el espécimen se encuentre en capas de observarlo. El microscopio óptico normal que se usa para observar bacterias y otros organismos celulares es un microscopio compuesto. diferencias y ventajas que usted considera más importantes entre estos y el microscopio óptico cuando se trabaja en un laboratorio de microbiología. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 8. El MEB explora la superficie de la imagen punto por punto. . Los MEB pueden llegar a ampliar una imagen una 200. mayor será el brillo del pixel en el monitor.  En el MET se utilizan electrones en lugar de rayos de luz. lo cual permite observar los detalles estructurales de los microorganismos. Cabe de destacar que este tipo de microscopios pueden aumentar un objeto hasta un millón de veces. Estos pueden provocar la aparición de electrones secundarios. y recorre la muestra con un haz muy concentrado de electrones. pudiéndose realizar la observación directa en MET. de forma de cuantos más electrones haya.

sobre todo si requiere su conservación. ya que como todo organismo para crecer y multiplicarse requiere de nutrientes y si están por mucho tiempo se acaba estos elementos por lo que es necesario hacer este proceso.  ASA REDONDA: Sirve para la siembra por estrías e inoculaciones. MATERIALES Y MÉTODOS MATERIALES EQUIPOS Vidriería Membranas Millipore Portaobjetos Cuenta colonias Cubreobjetos Nefelómetro de Mac Farland Pipetas graduadas Estufas bacteriológicas Pipetas Pasteur Baño bacteriológico Tubos de ensayo Horno Pasteur Matraces Autoclave Probetas Jarra de anaerobiosis Tubos de Durham Centrífuga Asas de inoculación Nefelómetro de Mac Farland Mecheros Jarra de anaerobiosis RESULTADOS ESPERADOS  Reconocer el material a trabajar en el laboratorio de microbiologí  Definir cada término y las características que debemos conocer como las de los equipos a utilizar. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 9. o sub- cultivo. ¿Cuál es la utilidad del asa recta y redonda?  ASA RECTA: Sirve para trasladar una sola colonia a medios de identificación. Escuela de Ciencias Agrícolas. ¿Qué se entiende por resiembra o pase bacteriano? Rta: Resiembra se le llama al proceso donde se pasa una colonia de alguna bacteria que haya crecido en algún medio a otra caja de Petri que contenga ya sea lo mismo que el medio en el que creció anteriormente. esto se hace para continuar su reproducción con nuevos elementos que le sirven para su crecimiento. . 10.

Escuela de Ciencias Agrícolas. En la segunda parte estudiamos los distintos tipos de medios de cultivos. en la primera parte se estudia la inoculación para la recuperación. además de los materiales y procedimientos para llevar a cabo estos procesos. tanto solidos como líquidos para llevar a cabo la siembra de microorganismos. mantenimiento o aislamiento de los microorganismos y en la segunda parte. . Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 PRACTICA N°2: MÉTODOS DE SIEMBRA INTRODUCCIÓN El desarrollo de esta práctica de divide en 2 partes A y B.

Escuela de Ciencias Agrícolas. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 MENTEFACTO Medios de MÉTODOS DE SIEMBRA cultivo Aislamiento de microorganismos Recuperación Mantenimiento Tenerse cuidado con las técnicas de siembra microbiana para evitar en lo posible la contaminación .

1% estéril caldo nutritivo Agar nutritivo semisólido . Escuela de Ciencias Agrícolas. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 MATERIALES Y MÉTODOS MATERIALES EQUIPOS Muestra contaminada con microorganismos Agar nutritivo en caja de Petri Incubadora Asa redonda Gradilla Mechero Incubadora mechero Vinipel Marcador de vidrio REACTIVOA A UTILIZAR REACTIVO FÓRMULA CONCENTRACIÓN Agua peptonada H2O 0.

 Coger parte de la muestra y colocarla en el tubo de ensayo que contiene el agua peptonada. Terminado la siembra. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 PROCEDIMIENTO  Desinfectar el área de trabajo.  Finalizado el tiempo de incubación tomar el asa redonda y esterilizarla por calor hasta que está esté roja. HOMOGENIZAR  Dejar 20 – 30 minutos en incubación los tubos.  Abrir el tubo con la muestra y tomar una asada.  Cerrar el tubo y colocarlo en la gradilla. en un círculo de papel (8 cm) para ponerlo debajo de la caja de Petri. dejar enfriar cerca al mechero. Teniendo cuidado de que el asa no toque nada y de no pasarla por encima del mechero. prender el mechero y preparar el material de trabajo. marcar las cajas en el borde de la base de la caja y envolverla en papel Vinipel . pero siempre estar cerca de este  Abrir la caja de Petri y seguir el esquema para el aislamiento.Escuela de Ciencias Agrícolas.  Realizar un diagrama de aislamiento de colonias.

pueden ser utilizados a nivel de industria MATERIALES Cajas de Petri con agar PDA Agujas de disección.  El día 4 para ver los resultados esperamos que haya crecido hongo y no se halla contaminado. Escuela de Ciencias Agrícolas. Hongos de cualquier género con crecimiento no mayor a 15 días antes de la práctica ( en caja de Petri) PROCEDIMIENTO  Tome con la aguja de disección o asa un cuadro de la colonia fúngica de no más de 5 mm de diámetro. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 Los hongos son microorganismos eucarióticos con condiciones de crecimiento especiales e interés ambiental. incubar a 25°. intente tomar de los extremos de la colonia. jeringas de insulina o asa recta. cuidadosamente coloque el cuadro en la caja de Petri con agar PDA en el centro de la misma. TABLA DE DATOS MEDIOS DE CULTIVO Caldo Nutritivo Agar Nutritivo Semisólido RESULTADOS ESPERADOS  Tener una buena precaución al ahora de manejar la técnica para que la muestra no se nos contamine. .

como se realiza la coloración de los microorganismos. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 PRACTICA N°3 TECNICAS DE TINCIÓN INTRODUCCIÓN En esta práctica se van a estudiar las las técnicas de tinción. . además se va a profundizar en la técnica de la tinción de Gram. Escuela de Ciencias Agrícolas. vamos a reconocer los reactivos utilizados para dich proceso y todos los materiales de laboratorio a utilizar.

. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 MENTEFACTO TECNICAS DE TINCION Seque fijación de Coloración simple Agua destilada color Cubrir la Enfriar lamina suspensión Observar en el microscopio . Escuela de Ciencias Agrícolas.

Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 MATERIALES Y METODOS MATERIALES EQUIPOS Láminas Alcohol cetona Laminillas Fucsina básica o safranina Agua destilada estéril Tinta china Asas bacteriológicas redonda y asa recta Microscopio óptico Microscopio Mechero Colonias aisladas de bacterias para observación de bacterias Azul de metileno Guantes de látex Cristal violeta Lugol REACTIVOA A UTILIZAR Azul metileno Fucsina básica o Sanabria Cristal violeta Tinta china Lugol Alcohol cetona . Escuela de Ciencias Agrícolas.

por 25 segundos. Lavar Inmediatamente con agua. así: -Cristal violeta: 1 minuto -Azul de metileno: 5 minutos -Fucsina: 1 minuto  Terminado el tiempo de coloración según el colorante empleado. por 30 segundos. colocar una gota del agua destilada estéril (trabajo con muestra sólida) o una gota del cultivo bacteriano (trabajo con muestra liquida) sobre la misma y con ayuda del asa redonda estéril extender la gota de suspensión a un área no superior a dos centímetros cuadrados. eliminar el colorante lavando con agua suavemente. el cual se deja por 1 minuto sobre el frotis  Realizar la decoloración con la mezcla alcohol-acetona.  Dejar que la preparación se seque al aire.  Cubrir la suspensión con algún colorante dado por el profesor. Lavar con agua. Escuela de Ciencias Agrícolas. Lavar con agua el colorante.  El segundo colorante es el Lugol.  Colocar la preparación sobre una rejilla encima del vertedero.  Dejar secar y colocar la preparación en la platina del microscopio y observar con el objetivo de menor aumento inicialmente hasta llegar al objetivo de 100X. pasando tres veces seguidas a través de la llama del mechero  Dejar enfriar la lámina. fucsina o safranina.  Finalmente adicionar el colorante de contraste. Resultados esperados  Conocer las reacciones observadas con la aplicación de las tinciones de GRAM  Observar los diferentes microorganismos por medio de las muchas tinciones. . Coloración compuesta  Realizar un frotis de la muestra seleccionada  Colocar en la rejilla para coloración y cubrir el frotis con cristal violeta esperando que transcurra 1 minuto. Lo anterior se conoce como la realización de un frotis y se hace para coloraciones donde la muestra debe ser fijada y luego si iniciar las coloraciones respectivas. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 PROCEDIMIENTO Coloración simple  En una lámina portaobjetos limpia.  Escurrir el exceso de agua. dejar secar y montar al microscopio para hacer las observaciones respectivas. Fijar con calor.

igualmente los ambientes que le facilitan las condiciones para formar colonias También vamos a reconocer los distintos reactivos que se utilizan para estos procesos. . los beneficios que le proporcionan al medio ambiente. Escuela de Ciencias Agrícolas. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 PRACTICA N°4: OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE HONGOS INTRODUCCIÓN El propósito de esta actividad es identificar los diferentes grupos de hongos. la forma de reproducción. que métodos de cultivo podemos utilizar.

. Colocar luego una laminilla encima de esta preparación y esperar 3 minutos. micológica previamente estéril parte del hongo y re suspenderlo en la gota del colorante. Escuela de Ciencias Agrícolas. OBSERVACION MICROSCOPICA Finalizado este tiempo montar al microscópico y observar en 10X Luego tomar con el asa y 40X. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 MENTEFACTO Colocar en el centro de la lámina portaobjeto una gota de azul de lactofenol.

 Colocar luego una laminilla encima de esta preparación y esperar 3 minutos. Finalizado este tiempo montar al microscopio y observar en 10X y 40X. luego tomar con el asa micológica previamente estéril parte del hongo y resuspenderlo en la gota del colorante. Escuela de Ciencias Agrícolas. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 MATERIALES Y METODOS MATERIALES Cultivo de hongos Azul de lactofenol Láminas portaobjetos Microscopio Laminillas PROCEDIMIENTO  Colocar en el centro de la lámina portaobjeto una gota de azul de lactofenol. DIBUJAR LAS SIGUIENTES CARACTERÍSTICAS EN EL CUADRO QUE CORRESPOND Hifa septada Hifa Cenocítica Conidios Artrocionidios .

Escuela de Ciencias Agrícolas. el pH. . las condiciones ambientales que le ayudan a las bacterias a regular su crecimiento y los medios químicos con los que se acelerar o reducir el crecimiento de estas. y la acción de la luz ultravioleta en dichos procesos. como identificar la influencia de la temperatura. la acción de la presión osmótica. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 PRACTICA N°5: CONTROL DEL CRECIMIENTO BACTERIANO INTRODUCCIÓN La realización de esta práctica nos permite identificar los medios por los cuales se puede controlar el crecimiento de las bacterias.

y con el asa redonda cajas en dos vidrio y con el asa cuadrantes con el redonda marcador de vidrio y con el asa redonda Sembrar por estrías en un Luego tomar 0. Gram positivó. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 MENTEFACTO CRECIMIENTO BACTERIANO .ACCION DE LA ACCION DE LA ACCION DE LA ACCION DEL PH TEMPERATURA PRESION LUZ OSMOTICA ULTRAVIOLETA Suspender una colonia del Dividir la base de las Dividir la base de las microorganismo en el caldo cajas en dos cuadrantes cajas en dos cuadrantes nutritivo y dejarlo por media con el marcador de vidrio Dividir la base de las con el marcador de hora. la otra parte de la caja la luz ultravioleta por 5 o 10 minutos .1 mL del Sembrar por estrías en un cuadrante el medio y sembrarlo sobre el cuadrante el microorganismo microorganismo Gram- medio sólido del agar Gram-negativo y en el otro el negativo y en el otro el nutritivo. Escuela de Ciencias Agrícolas. Sembrar por estrías en un cuadrante el Llevar las dos cajas de Petri e microorganismo Seguidamente tapar la incubarlas a 37oC Realizar este procedimiento Gram-negativo y en el mitad de la caja con papel con todos los medios de otro el Gram positivó. de aluminio y coloca sobre diferentes pH. Gram positivó.

Seguidamente tapar la mitad de la caja con papel de aluminio y colocar sobre la otra parte de la caja la luz ultravioleta por 5 y/o 10 minutos. Escuela de Ciencias Agrícolas. . tapar la caja y llevar a incubar.1 mL del medio y sembrarlo sobre el medio sólido del agar nutritivo. ACCION DEL PH: Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estrías en un cuadrante el microorganismo Gram-negativo y en el otro el Gram positivó. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 MATERIALES Y EQUIPOS MATERIALES EQUIPOS Pipetas estériles de 1 y 2 mL Estufa Vaso de precipitado de 500 mL Incubadora CULTIVOS Cultivo de un microorganismo Gram . Realizar este procedimiento con todos los medios de diferentes pH. con diferentes pH’s. Llevar las dos cajas de Petri e incubarlas a 37oC. ACCIÓN DE LA PRESIÓN OSMÓTICA: Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estrías en un cuadrante el microorganismo Gram-negativo y en el otro el Gram positivó. ACCIÓN DE LA LUZ ULTRAVIOLETA: Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estrías en un cuadrante el microorganismo Gram-negativo y en el otro el Gram positivó. PROCEDIMIENTO ACCIÓN DE LA TEMPERATURA: Suspender una colonia del microorganismo seleccionado en el caldo nutritivo y dejarlo por media hora para un desarrollo de los microorganismos en el medio de cultivo. Cultivo de un microorganismo Gram - positivo negativo. Caldo nutritivo Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri con diferentes concentraciones de NaCl. Llevar el caldo nutritivo donde se inoculo el microorganismo a la estufa y ponerlo a ebullición por el tiempo dado por el profesor y sembrar como al inicio. Luego tomar 0.

También vamos a identificar los diferentes reactivos que se utilizan para identificar estos procesos. Escuela de Ciencias Agrícolas. y nos permite reconocer las condiciones microbiológicas del suelo. INTRODUCCIÓN El recuento de unidades formadoras de colonias es un parámetro que sirve para estimar la flora total pero sin identificar el tipo de organismo. un alimento y el agua entre otros. . Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 PRACTICA N° 6: RECUENTO DE UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS-UFC.

Escuela de Ciencias Agrícolas. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 Hacer diluciones de la muestra líquida de RECUENTRO DE Sembrar en profundidad por Siempre se Se deben Sacar de la duplicado 1 mL informan dos contar las incubadora y de cada una de números cajas cuyo realizar el enteros y el número de colonias esté Una vez solidificado Adicionar de 15 el agar. inóculo con el adicionar una medio. se – 20 mL del vierten las agar nutritivo a Mezclar Dejar inmediatamente el solidificar. con capa sellante de movimientos 5 mL sobre la circulares de la placa .

1% 50 mL de agar nutritivo previamente preparado y atemperado a 45 . se vierten las placas e introducen en la incubadora (35°C durante 72 horas)  Sacar de la incubadora y realizar el recuento . adicionar una capa sellante de 5 mL sobre la caja y dejar solidificar nuevamente. Debe evitarse que el medio impregne la tapa. con movimientos circulares de la placa a favor y en contra de las manecillas del reloj.  Una vez solidificado el agar.  Dejar solidificar. Escuela de Ciencias Agrícolas.1% Contador de colonias estériles 4 Pipetas de 1 mL o una pipeta automática (100 – Balanza 1000 μL) 1 frasco de dilución con 90 mL de agua peptonada al 0.48°C Marcador de vidrio PROCEDIMIENTO  Hacer diluciones de la muestra líquida de acuerdo al tipo de producto. como en ángulo recto.  Si es una muestra contaminada deben realizarse diluciones altas  En muestras procesadas se hacen diluciones bajas  Sembrar en profundidad por duplicado 1 mL de cada una de las diluciones seleccionadas  Adicionar de 15 – 20 mL del agar nutritivo a la temperatura adecuada  Mezclar inmediatamente el inóculo con el medio. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 MATERIALES Y EQUIPOS MATERIALES EQUIPOS 2 cajas de Petri estériles Incubadora a 35°C 4 tubos de ensayo con agua peptonada al 0.

etc. y aunque no es posible identificarlos a simple vista ellos son parte fundamental en la naturaleza y ayudan a conservar el planeta.jjj . Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224  Lectura: se deben contar las cajas cuyo número de colonias esté comprendido entre 30 y 300 UFC.  Siempre se informan dos números enteros y el resto en exponente PRACTICA N° 7: APLICACIONES DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL INTRODUCCIÓN La microbiología ambiental tiene un sin número de aplicaciones en nuestro planeta. Escuela de Ciencias Agrícolas. suelos. dependiendo del tipo de alimento de partida. Es conveniente ir marcando las colonias para evitar volver a contarlas. Todo esto debido a la facilidad que tienen los microorganismos para transformar la materia. residuales. El número contado se multiplica por el factor de dilución y los resultados se expresarán en unidades formadoras de colonia (UFC) por mL o g. Hallar la media. pues se utiliza para tratar aguas potables.

Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 Diagnostica e implementa nuevas alternativas para el desarrollo agrícola APLICACIONES DE MICROBIOLOGIA Ámbito de la control de calidad en ingeniería ambiental y abonos orgánicos y la industria. suelos por número más probable (NMP) .Escuela de Ciencias Agrícolas.

coli reactivo de kovacs Incubadora pipetas de vidrio de 1 ml muestra de abono orgánico (los estudiantes deberán llevar la muestra. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 MATERIALES Y EQUIPOS MATERIALES EQUIPOS frascos con solución salina 0.85% o agua peptonada al 0.1% 15 tubos tapa rosca con 9 ml de caldo de cultivo lbt (lauryl tryptose Lámpara U.V broth) 15 campanas durham para observar producción de gas (dentro de los tubos de lbt) 15 tubos trapa rosca con 9 ml de caldo de cultivo lmx (fluorocult) para cultivo de e.1% (90 ml) tubos tapa rosca con 9 ml de solución salina o agua peptonada al 0. lombricompost. Escuela de Ciencias Agrícolas. humus etc) REACTIVOS A UTILIZAR REACTIVO FÓRMULA CONCENTRACIÓN solución salina SSN 90 ml . puede ser abono orgánico comercial.

DETECCIÓN DE PSEUDOMONAS EN SUELOS: MATERIALES Frascos con 90 ml de solución salina al 0. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 PROCEDIMIENTO  Pesar 10 gramos de la muestra. obteniéndose una combinación de 310.1% Tubos tapa rosca para diluciones con 9 ml de solución salina al 0.  Incubar a 37° por 24 horas  Realizar la lectura. 5 tubos marcados como 10-2. Recuerden que por cada dilución deben inocular 5 tubos de medio. para el caso de coliformes fecales (LBT) se presenta turbidez y presencia de gas en las campanas durham.85% o agua peptonada al 0.  A partir de las diluciones sembrar 1 ml de cada dilución en los tubos con los dos medios. en la dilución 10-3 0 tubos positivos. Escuela de Ciencias Agrícolas.  Realizar diluciones seriadas hasta 10-3. 5 tubos marcados como 10-3. la cual se realiza contando el número de tubos positivos.85% o agua peptonada al 0. Lámpara de luz UV .  Marcar los tubos de LBT y LMX en 3 series de 5.1% Cajas de Petri con agar King b o cetrimide Rastrillos de vidrio Pipetas de vidrio de 1 ml Suelo procedente del algún sitio de derrame de petróleo o que estpé impactado por derivados del petróleo (suelos de cultivos donde se ha fumigado) o cualquier suelo. es decir 5 tubos marcados como 10-1. mezclarla con los 90 ml de solución salina o agua peptonada. con ese número se dirigen a la tabla de Numero más probable según la EPA-1680 2006. en la dilución 10-2 1 tubo positivo. sino se presentan los dos fenómenos se tomarán como negativos)  Por ejemplo en la dilución 10-1 se presentaron 3 tubos positivos.

45 micrometros para filtacion.  Posterior a la incubación con ayuda de la lámpara observar las colonias con fluorescencia o pigmentación azul verdosa. incubar a 30 grados por 4 días. por ejemplo. realizar el recuento de la dilución que contenga entre 30 y 300 colonias. Escuela de Ciencias Agrícolas. 10-4. agitar bien y realizar diluciones seriadas hasta 10-6. 106 en superficie por duplicado.1 ml de las diluciones 102. ese valor se multiplica por el factor de dilución.  Sembrar 0.  Realizar los cálculos de la siguiente manera. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 PROCEDIMIENTO  Pesar 10 g de la muestra y mezclarlos con los 90 ml de solución diluyente. proceder a hacer siembra masiva con los rastrillos cuidando que no se rompa el agar. en la dilución 10-6 se contaron 48 colonias. es un número constante)=48x108UFC/g (UFC hace referencia a unidades formadoras de colonia) INDICADORES DE CONTAMINACION DE AGUAS POTABLES MATERIALES Equipo de filtración por membrana (equipo millipore de plástico) Membrana de nitrocelulosa de 0. Jeringa (para hacer vacío) Cajas de Petri con agar Cromocult para coliformes . por el factor de corrección así:  48(número de colonias contadas x106(factor de dilución) x10(factor de corrección.

la parte de la cuadrícula debe ir mirando hacia arriba.  Colocar la muestra en la parte superior de la campana de filtración y con la ayuda de la jeringa realizar el vacío para permitir el paso del agua de un lado al otro. coli y coliformes totales (consultar la coloración en este medio. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 PROCEDIMIENTO  Tomar 100 ml de agua de la llave. coli. se encuentra por internet) .  Incubar por 24 horas a 37° c y observar el número de colonias con las características típicas de E. agitar muy bien. la cual se inoculará con una asada de cultivo de E. Escuela de Ciencias Agrícolas.  Con unas pinzas estériles retirar la membrana y colocarla sobre el agar cromocult.

bing.google.bing. Escuela de Ciencias Agrícolas.com/search?q=artroconidios&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0CAcQ_AUoAWo VChMIu6vUy-SpyAIVwaoeCh1WMwob&biw=1366&bih=634 .com/images/search?q=conidios&go=Enviar+consulta&qs=ds&form=QBIR https://www.bing.com/images/search?q=hifa+septada&FORM=HDRSC2 http://www. Pecuarias y del Medio Ambiente Microbiología Ambiental-358010A_224 BIBLIOGRAFIA Guía práctica de laboratorio de microbilogía ambiental.com/images/search?q=hifa+Cenocitica&FORM=HDRSC2 http://www. 358010 unad http://www.