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TECNICAS DE ADN

Las tcnicas utilizadas por la ingeniera gentica son varias, y cada una
atiende un aspecto de la tarea de preparacin y solucin de los problemas
especficos de esta tecnologa, sin embargo muchas de ellas ha tenido xito
en otros campos tecno cientficos.

LA GEL-ELECTROFORESIS

El problema de encontrar, separar y analizar los fragmentos de ADN


correspondiente a un gen especfico se logr resolver sobre la base de los
estudios de Linus Pauling que demostraron que las molculas migran a
distintas velocidades hacia los polos magnticos: se colocan porciones de
ADN sobre un gel de agarosa2 y se les permite que migren hacia los polos
del campo magntico. La senda seguida por el ADN y las manchas formadas
se tornan visibles en una pelcula de rayos X como el cdigo de bandas de
un producto en el supermercado.

Esta tcnica permite tratar con bajas concentraciones de ADN, de hasta 100
nanogramos3 y su objetivo es mediante un mtodo bioqumico, basado en
reacciones enzimticas poder analizar de forma rpida la variabilidad
gentica que se puede encontrar en una poblacin determinada. La prctica
de la electroforesis de enzimas en gel aplica la afirmacin terica de que el
producto de un gen, ser una protena que tendr actividad enzimtica.

El mtodo consiste en obtener las enzimas del material que se desea


conocer empaparlas en papel secante, e introducir estos papeles en el gel.
Posteriormente habr que someterlo a la electroforesis para lograr la
migracin de las protenas que ser diferencial dependiendo de la carga
elctrica de la protena.

ADN RECOMBINANTE

Tcnicas de ADN recombinante: la manipulacin gentica A partir de los


aos 70 se desarrollaron las herramientas de la biologa molecular o la
ingeniera gentica o lo que se ha llamado tcnicas del ADN recombinante.
Y esto ocurri, en comparacin con lo que fue el resto de la historia de la
ciencia, de forma muy rpida entre los aos 70 y 80. En estas primeras
etapas se estaba trabajando sobre la posibilidad de manipular los genes, es
decir:

A) tenerlos aislados,

B) amplificarlos, en el sentido de tener muchas copias de la misma


secuencia,

C) conocer la secuencia exacta, es decir el orden de las bases de esos genes

D) una vez aislado poderlo expresar fuera de su localizacin natural, lo cual


tendr una enormidad de otras aplicaciones.

Toda esta manipulacin gentica est simplemente basada en unas pocas


propiedades del ADN que han permitido avanzar muchsimo en las tcnicas.
Recordemos: el hecho de que el ADN sea una doble cadena, y las cadenas
sean complementarias y que la complementariedad de bases sea un
requisito suficiente para que dos cadenas que estaban en simple hebra se
encuentren y se vuelvan a reconstituir es la base de la mayor parte de la
manipulacin. Dos simples cadenas de ADN reconstituyen una doble cadena
unida por puentes de hidrgeno basado simplemente en la
complementariedad de bases, en el hecho de que si en una de las hebras
hay una serie de nucletidos con las bases GCAT cualquier otra hebra que
tenga CGTA, es decir complementaria, va a poder unirse y reconstituir una
doble cadena en determinadas condiciones de temperatura y de pH dadas.
Esta es una de las caractersticas bsicas. A esto se agrega el hecho de que
el ADN tiene la informacin en el orden de las bases y que el cdigo por el
cual esa informacin es trascripta y traducida a una protena es
prcticamente universal: ese tramo de ADN si es que codifica para algo
puede producir esa protena en diversas condiciones.

Esta tcnica permite aislar un gen de un organismo, para su posterior


manipulacin e insercin en otro diferente. De esta manera podemos hacer
que un organismo animal, vegetal, bacteria, hongo, o un virus, produzcan
una protena que le sea totalmente extraa.

Se emplea normalmente para la produccin de protenas en gran escala, ya


que podemos hacer que una bacteria produzca una protena humana y
lograr una superproduccin.

De una manera muy simple podemos decir que "cortamos" un gen humano
y se lo "pegamos" al ADN de una bacteria; si por ejemplo es el gen que
regula la fabricacin de insulina, lo que haramos al ponrselo a una
bacteria es "obligar" a sta a que fabrique la insulina.

Como las bacterias se multiplican muy rpidamente y pueden expresar


grandes cantidades de protenas, es posible lograr una sobreproduccin de
la protena deseada. A esto justamente se dedica la biotecnologa, es decir a
la utilizacin de organismos vivos o de sus productos con fines prcticos.

El desarrollo de la tecnologa del ADN recombinante fue posible gracias a


varias lneas de investigacin:

El conocimiento de las enzimas de restriccin


La replicacin y reparacin de ADN
La replicacin de virus y plsmidos
La sntesis qumica de secuencias de nucletidos.

TCNICA DE LA PCR

La reaccin en cadena de la polimerasa Tambin en los aos 80 apareci


otra tcnica revolucionaria que permite tener mucha cantidad de un
fragmento de ADN de inters: es la tcnica de PCR, o reaccin en cadena
de la polimerasa. Es una tcnica muy rpida, que por otra parte puede
funcionar partiendo de trazas de ADN. Por ello se utiliza mucho en el rea
forense y de identificacin humana, as como en gentica de poblaciones,
en casos en los que se tiene muy poquito ADN. Esta tcnica aprovecha las
caractersticas de la replicacin del ADN, es decir que a partir de un
pequeo cebador la polimerasa puede proseguir una cadena. El requisito
como se ve en la figura es poder disear dos cebadores adecuados. Por la
posicin de estos cebadores, al cabo de una serie de rondas de replicacin,
(hablamos de una reaccin en cadena), tenemos grandes cantidades de un
solo trozo, el tramo que va desde uno de los cebadores al otro. Esta tcnica,
en la que el ADN tiene que ser desnaturalizado por calor para iniciar cada
nuevo ciclo se torn muy fcil cuando hizo uso de una polimerasa que
resiste el calor (aislada de una bacteria de aguas termales). Esta tcnica se
utiliza ya rutinariamente para muchos diagnsticos.

Tambin existen mtodos para amplificar una determinada secuencia o


fragmento de ADN. La ms conocida es la tcnica de la reaccin en cadena
de la polimerasa PCR. As se consigue multiplicar un determinado fragmento
de ADN millones de veces para poder tener una cantidad suficiente para
estudiarlo. Sin esta tcnica seran imposibles los estudios de ADN para el
reconocimiento de la paternidad o en caso de delito, pues la cantidad de
ADN presente en las clulas es tan pequea, del orden de pico gramos, que
se necesitara una gran cantidad de material celular para tener una
cantidad apreciable de ADN. Por su lado, para la amplificacin del gen, los
biotecnologos cuentan con dos procedimientos que son hoy en da los ms
usados: El logrado por E.M. Southern en 1975, comienza con la separacin
del ADN digerido por enzimas de restriccin6, los fragmentos resultantes se
separan por tamao mediante la gel-electroforesis y luego se transfieren a
un filtro. El ADN adherido se desnaturaliza (sometiendo las doble cadenas
de ADN a alta temperatura lo que rompe los puentes hidrogenados que las
mantienen unidas) y se hibrida (o deja que se ligue) exponindolo a sondas
radiativas7, lo que permitir detectar por rayos X los fragmentos de inters
para su purificacin y duplicacin en procedimientos de estudios o
manipulacin.

En 1988 estuvo disponible un nuevo mtodo la reaccin en cadena de la


polimerasa (PCR), ideada en 1983 por Kary Mullis. ste permite
mecnicamente, la amplificacin de genes en grandes cantidades a partir
de muy poco ADN. El sistema implica la adicin de un cebador corto (un
oligonucletido) en cada extremo de la secuencia elegida de ADN,
separando las dos cadenas de la doble hlice por calentamiento y
exponindolas a un ADN polimerasa que reconoce a los cebadores
dispuestos a cierta distancia entre s en lados opuestos de la cadena y
duplica el nmero de cadenas de ADN en la muestra. Esta enzima es
obtenido a partir de una purificacin de una bacteria que prospera en las
elevadas temperaturas de las aguas termales y que no se desnaturaliza por
temperatura cuando el ADN seleccionado lo es. De este modo en la PCR,
ambas cadenas de ADN se copian simultneamente y si el procedimiento se
repite unas veinte veces, se obtendrn un milln de copias a partir de un
solo fragmento original.

Todo esto ha servido para el desarrollo de la ingeniera gentica, ya que


aparte de conocer los aspectos moleculares ms ntimos de la actividad
biolgica, se han encontrado numerosas aplicaciones en distintos campos
de la industria, la medicina, la farmacologa, la agricultura, la ganadera,
etc.

VECTORES

Cuando se pretende que las factoras biotecnolgicas (o una clula)


produzca un material especfico, debe drsele la orden especfica, esto es
proveerle de los genes necesarios. Para ello se debe agregar a su ADN
natural un complemento gnico (previamente determinado y aislado), lo
que es posible por medio de un vector o transportador.

Estos vectores permiten obtener mltiples copias de un trozo especfico de


ADN, lo que proporciona una gran cantidad de material fiable con el que
trabajar. El proceso de transformacin de una porcin de ADN en un vector
se denomina clonacin.
BIOCHIPS

Los ltimos avances en biologa molecular, especialmente en gentica y


genmica, ha llevado a la aparicin de numerosas tcnicas experimentales.
Entre estas herramientas destacan los biochips, que permiten conocer
mutaciones genticas en los pacientes. De este modo, la comunidad
cientfica dispondr del material adecuado para afrontar el reto que se le
plantea tras haberse completado la primera fase del Proyecto Genoma:
estudiar la funcin de los genes, las diferencias genticas individuales y su
incidencia en el desarrollo de las enfermedades.

Estos biochips son dispositivos miniaturizados en los que se pueden


depositar decenas de miles de sondas de material gentico conocido en
posiciones predeterminadas, constituyendo una matriz. En los estudios, se
ponen en contacto los biochips con material gentico marcado, obtenido de
una muestra de un paciente o experimento. En ese momento, generan un
patrn de seales particular cuya lectura se realiza con un escner y
posteriormente se interpretan con un ordenador.

APLICACIONES DE LA INGENIERA GENTICA

La aplicacin de las tcnicas utilizadas por la Ingeniera Gentica ha


permitido elevar la calidad de vida del ser humano. Los organismos
transgnicos han pasado a ocupar una posicin central en la biotecnologa
moderna, porque permiten hacer modificaciones muy especficas del
genoma que vale la pena analizar con detalle, debido a sus importantes
aplicaciones presentes y futuras.

Obtencin de protenas de inters mdico y econmico


Antibiticos
Enzimas
Hormonas: insulina, hormona del crecimiento, eritropoyetina10
Vacunas
Protenas sanguneas: seroalbmina11, factores de coagulacin

Mejora gentica de vegetales y animales para obtener una


mayor produccin y mejor calidad nutricional

Con el mejoramiento gentico de los vegetales, se espera conseguir:

Mayor adaptacin a diversos ambientes.


Mejores caractersticas agronmicas (resistencia, desgrane, buena
cobertura, etc.).
Resistencia a plagas y enfermedades.
Resistencia a la sequa, temperaturas bajas o altas, etc.
Para incrementar la calidad de los productos se persigue:
Alto valor nutritivo (protenas y vitaminas).
Mayor coloracin, sabor y/o tamao de los frutos.
Resistencia al transporte y almacenamiento.
Reduccin de la cantidad de ciertas sustancias indeseables en los
productos, etc.

Secuenciacin de ADN

Secuenciar ADN es analizar la composicin de un fragmento de ADN para


saber qu genes tiene y qu producen esos genes; esto es lo que se est
haciendo en el Proyecto Genoma Humano.

Terapias gnicas

LA INGENIERA GENTICA Y LA TERAPIA DE ENFERMEDADES HUMANAS Hay


en los humanos numerosas enfermedades de carcter hereditario o
relacionado con alteraciones genticas. En la mayora de los casos ni
siquiera se han identificado los genes responsables y en muy pocos casos se
dispone del mecanismo para incorporar el gen correcto a las clulas del
individuo afectado. No obstante existen varias lneas de investigacin que
se basan en:

- Transferir un gen humano normal a una bacteria, obteniendo de ella


la sustancia necesaria para luego inocularla en el enfermo.
- Transferir un gen correcto a las clulas de una persona: terapia de
clulas somticas.
- En el futuro, si el gen se hiciera llegar a un vulo, un espermatozoide
o el zigoto, todas las clulas del individuo tendran el gen normal:
Terapia de clulas germinales (no es legal).

Todas estas terapias estn sometidas a cambios muy rpidos. Veamos


algunos ejemplos en los que ya en la actualidad se emplean estas tcnicas o
estn en fase de ensayo o investigacin.

1) Sustancias humanas producidas por bacterias

En la actualidad, una de las tcnicas de ingeniera gentica ms empleada


consiste en la produccin de sustancias humanas por bacterias a las que se
les ha introducido el gen correspondiente. Entre las sustancias que ya se
obtienen mediante esta tcnica estn:

- La insulina.- Es una hormona formada por dos pptidos. El pptido


A (21 aminocido) y el pptido B (30 aminocidos). Los genes que
codifican ambos pptidos se aslan de clulas humanas y se
introducen en estirpes bacterianas diferentes. Cada clon sintetiza uno
de los polipptidos. stos se aslan, se purifican, se activan los grupos
-SH para que se unan los dos pptidos y obtenemos insulina humana.

- La hormona del crecimiento.- Es un polipptido de 191


aminocidos. Se utiliza una tcnica similar al ejemplo anterior.

- El interfern.- Es una protena de peso molecular entre 16.000 y


20.000, con una cadena glucosdica. En la actualidad se ha
conseguido aislar el ADN responsable del interfern en leucocitos y
linfoblastos infectados. El problema es que se obtiene una produccin
baja a causa de la inestabilidad de la molcula.

- El factor VIII de la coagulacin.

2) La ingeniera gentica en humanos

La teraputica ha procurado incidir en la historia natural de las


enfermedades desde un punto de vista sintomtico, fisiopatolgico y
etiolgico, siendo probablemente esta ltima aproximacin la ms efectiva y
la ms deseada. En una gran cantidad de enfermedades que poseen un
factor gentico involucrado, la etiologa est en la presencia de uno o varios
genes daados o mal funcionantes 1. Los genes estn hechos de ADN y se
encuentran en el ncleo de la clula a un nivel de resolucin molecular.
stos controlan el medio interno de la clula, las interacciones con otras
clulas y con el medio ambiente en general por medio de protenas que son
transcritas en respuesta a estmulos. Mnimas alteraciones en su estructura,
a veces tan pequeas como una mutacin o cambio en uno slo de los
nucletidos (molculas que forman el ADN) que los constituyen, pueden
producir graves daos metablicos o estructurales. Un tipo de terapia que
tratara de corregir estos problemas tendra que identificar cul es el gen
afectado causante de la patologa y realizar algn tipo de microciruga
molecular para corregir el defecto, no slo en una, sino que en los millones
de clulas que constituyen un individuo, o a lo sumo en el rgano o sistema
en que se expresa este gen. Todas estas consideraciones hacan
prcticamente imposible hasta hace poco un abordaje de estas patologas a
ese nivel.
Con el advenimiento del proyecto Genoma Humano, se espera secuenciar
los 50.000 a 100.000 genes que se ha estimado que existe. Hasta ahora
slo se han secuenciado aproximadamente un 20% de los mismos. Sin
embargo, los que ya se tienen se encuentran disponibles en bibliotecas de
genes fabricadas a partir de tcnicas de la ingeniera gentica y se pueden
obtener inclusive por medio de catlogos comerciales. Estas mismas
tcnicas de ingeniera gentica, que incluyen entre sus herramientas a las
enzimas de restriccin (enzimas que pueden cortar el ADN a modo de micro
tijeras), estn siendo utilizadas para realizar la reparacin de defectos
genticos por medio de la sustitucin de los genes daados o ausentes por
genes normales. La terapia gnica (TG) es el conjunto de procedimientos
que permiten la introduccin de genes sanos o normales dentro de las
clulas de un organismo, mediante las llamadas Tecnologas de
Transferencia de Genes3.
Esta aproximacin es completamente revolucionaria en la teraputica, ya
que hasta hace relativamente poco tiempo el material gentico de los seres
humanos era inaccesible a algn tipo de correccin o tratamiento.
Compaas farmacuticas y centros de investigacin de Europa, Estados
Unidos y Japn ya han apostado a esta nueva posibilidad. De hecho, a
principios de los 90 se inclua a grandes compaas como Sandoz, Ciba
Geigy y Rhone Poulenc Rorer. En 1992, el mercado correspondiente fue
estimado en 1,2 billones de dlares. Estimaciones ms recientes 4 alcanzan
los 45 billones de dlares para el ao 20154.

Tipos de terapia gnica


Existen, en teora, dos tipos de TG: la Terapia Gnica de Clulas Somticas y
la Terapia Gnica de Clulas Germinales 5, aunque slo la primera est
siendo desarrollada actualmente.
La TG somtica busca introducir los genes a las clulas somticas (esto es,
todas las clulas del organismo que no son gametos o sus precursores), y
as eliminar las consecuencias clnicas de una enfermedad gentica
heredada o adquirida. Las generaciones futuras no son afectadas porque el
gen insertado no pasa a ellas.
La TG germinal slo existe como posibilidad, pues no se cuenta con la
tecnologa necesaria para llevarla a cabo. Adems ha sido proscrita por la
comunidad cientfica y por organismos internacionales por sus implicaciones
ticas, las cuales discutiremos ms adelante. La TG germinal tratara las
clulas del embrin temprano, los vulos, los espermatozoides o sus
precursores. Cualquier gen introducido en estas clulas estara presente no
slo en el individuo, sino que sera transmitido a su descendencia.

Aspectos que debe procurar la Tecnologa de Transferencia de


Genes (TTG)

Cmo hacer que el gen deseado llegue hasta el ncleo de las clulas de un
organismo vivo y se exprese en el momento y lugar precisos? sta es la
pregunta clave de la TG, y toda la futura perfeccin que pueda alcanzar
depende casi por completo de la resolucin de este problema. La TTG debe:
1.- Suministrar una transferencia gnica eficiente y precisa.
2.- Garantizar una expresin gnica persistente y bien regulada.
3.- Procurar una adecuada localizacin subcelular y un procesamiento
adecuado del producto gnico.
Como hemos dicho, un gen es un fragmento de ADN. Los genes normales
que se utilizan para reemplazar los genes defectuosos se pueden obtener a
partir de bibliotecas de genes en las cuales se encuentran almacenados,
como ya hemos dicho. Estos genes pueden ser llevados a la clula por
medio de los llamados vehculos o "vectores", denominados as por su
similitud con los agentes biolgicos que transmiten enfermedades. El
trmino vector anteriormente se utilizaba slo para designar a los plsmidos
o a los virus modificados que se utilizaban como vehculos que
transportaban el gen deseado a una clula. El mismo ha pasado a ser un
trmino genrico que involucra los diversos medios, ya sean biolgicos,
qumicos o fsicos, por medio de los cuales se puede hacer llegar el gen a la
clula, y as se emplea en diversos textos y publicaciones aunque algunos
prefieren reservar el trmino vector para los vehculos biolgicos
propiamente dichos. Es por eso que hablamos de mtodos de transferencia
o vectores virales y no virales, los cuales pueden cumplir su cometido tanto
en clulas extradas del paciente que se va a tratar, modificadas in vitro y
luego reimplantadas (tcnicas ex vivo), o directamente en el paciente
(tcnicas in vivo).
Los vectores virales se basan en el principio de que los virus son fragmentos
de ADN o ARN encapsulados que ingresan a las clulas y dirigen la
maquinaria celular para sus propsitos de reproduccin. Estos virus estn
formados por varios genes y pueden ser modificados por ingeniera
gentica, extrayndoseles aquellos que les confieren sus caractersticas
dainas e intercambindose por el o los genes deseados, sin que pierdan la
capacidad de encapsularse, pero s la de autor reproducirse en el individuo.
Se cultivan y se purifican en medios celulares especiales hasta que se
verifica su inocuidad10. En el fondo, los vectores virales son virus
modificados con los cuales literalmente se infecta al individuo. Estos virus
irn a una gran cantidad de clulas del organismo, depositando su material
gentico en el ncleo, el cual posteriormente se expresar como protenas.
Los principales vectores virales son los retrovirus y los adenovirus. Fueron
los primeros en ser utilizados porque se conoca bastante bien su
constitucin y su comportamiento. Sin embargo, cada tipo de virus podra
constituirse, con las modificaciones pertinentes, en un vector viral, y hay
muchos otros que estn siendo utilizados en los protocolos de
experimentacin.
Los mtodos de transferencia no virales fueron desarrollados como
alternativa debido a ciertos inconvenientes que presentan los vectores
virales (ver adelante). Entre los principales encontramos los liposomas y el
DNA desnudo, entre otros. Los liposomas son microesferas compuestas por
una membrana lipdica que rodea un medio acuoso interno. Hay dos tipos:
los liposomas catinicos, que estn cargados positivamente y que
interactan con el ADN (de carga negativa) para formar un complejo
estable. Este complejo puede entrar a las clulas luego de su administracin
endovenosa. Entre los ms usados est la lipofectina. Por otro lado, los
liposomas con carga negativa no forman complejos con el ADN, sino que lo
atrapan, formando una cpsula alrededor. Entre sus ventajas est que
pueden llevar grandes fragmentos de ADN, potencialmente tan largos como
el tamao de un cromosoma, a diferencia de los vectores virales, que slo
pueden llevar un ADN de longitud ms bien pequea.
El ADN desnudo consiste en inyectar directamente plsmidos de ADN, es
decir, constructos de ADN confeccionados por ingeniera gentica, los cuales
se ha visto presentan cierto grado de expresin en los diversos tejidos luego
de su administracin.

Aplicaciones de la terapia gnica


La TG involucra la manipulacin gentica del organismo humano, y por lo
tanto podra ser utilizada, en principio, en cualquier enfermedad que haya
surgido por la modificacin de un factor gentico, ya sea de tipo heredado,
como las enfermedades monognicas con patrn de herencia mendeliano
(vg deficiencia en adenosn deaminasa [ADA], hipercolesterolemia familiar,
fibrosis qustica, hemofilia A), como las enfermedades con herencia
multifactorial (en las que hay una influencia de los genes y el ambiente,
como en la hipertensin, la diabetes y la enfermedad coronaria) o de tipo
adquirido (cncer, SIDA, artritis). Tambin podra utilizarse en el
mejoramiento de los procesos de curacin y regeneracin tisular, y en el
tratamiento de enfermedades neurolgicas degenerativas como la
enfermedad de Parkinson y de Alzheimer.
Aunque esta lista a primera vista parece excesiva, lo cual podra hacer
parecer a la terapia gnica como sospechosa panacea, en cada uno de los
grupos que hemos mencionado hay numerosos experimentos en animales
(fase preclnica) y estudios clnicos que arrojan resultados prometedores,
anunciando as una verdadera era de la teraputica. La mayora de los
protocolos clnicos son de fase I. stos consisten en determinar cul es la
mxima dosis de un nuevo medicamento tolerada por los pacientes 15.
El primer protocolo clnico aprobado por la FDA para el uso de la TG fue el
utilizado en el tratamiento de la deficiencia en adenosn deaminasa (ADA) 16,
la que provoca un trastorno de la inmunidad, en 1990. En estos pacientes
no se ha podido retirar el tratamiento enzimtico exgeno necesario para su
supervivencia, sino slo disminuirlo a la mitad 17, y se ha detectado la
persistencia en la expresin del gen an despus de cuatro aos de iniciado
el protocolo18. Aunque no se haya logrado la completa curacin de los
pacientes (que consistira en retirar todo el aporte enzimtico exgeno)
este constituye un hecho indito en la historia teraputica.
Con respecto a la terapia gnica de otras enfermedades monognicas
tenemos que en protocolos de tratamiento para la fibrosis qustica,
utilizando adenovirus administrados al tracto respiratorio en forma de
aerosol, ha habido tambin mejora parcial de los pacientes, presentndose
la respuesta inmune del husped y una baja eficiencia de los vectores como
el principal impedimento en estos tipos de terapia 19.
En casos de hemofilia B ha habido correccin completa en perros durante 5
meses20, y de la hemofilia A tambin en animales de experimentacin
durante 2 semanas, tiempo que dura la expresin de los genes transducidos
que posteriormente se apagan21.
Un paciente de 29 aos con hipercolesterolemia familiar, sin receptores
funcionantes para lipoprotenas de baja densidad (LDL), fue tratado con
transfusin en la vena cava inferior de hepatocitos modificados por medio
de vectores ex vivo. En este caso la hipercolesterolemia fue parcialmente
corregida durante los 18 meses siguientes, con una disminucin de la
relacin LDL/HDL, la cual descendi de 10 a 5. Adems, no hubo progresin
de su enfermedad coronaria durante ese lapso.
En las enfermedades genticas con herencia multifactorial, las interacciones
entre genes y ambiente son muy complejas, como lo demuestra el caso de
la hipertensin arterial, lo que podra dificultar an ms los esfuerzos para
desarrollar una TG efectiva. Sin embargo, varios experimentos demuestran
que sera posible incidir en uno o varios puntos del mecanismo
fisiopatolgico de estas enfermedades complejas. En la enfermedad
coronaria, por ejemplo, luego de un infarto agudo al miocardio tratado con
angioplastia puede haber un 30 a 40% de reestenosis, condicionada por la
proliferacin de la ntima de los vasos sanguneos y la migracin de
plaquetas. Se ha visto que el xido ntrico disminuye la proliferacin de la
ntima, pero por aterosclerosis o por efectos mecnicos se pierden las
clulas endoteliales que poseen sintetasa del xido ntrico. Ahora bien, se
ha visto que en modelos de ratas con injurias a la cartida en las cuales se
transfecta este gen, disminuye la proliferacin de la ntima luego de un
incremento en la produccin de xido ntrico.
Asimismo, en experimentos de diabetes en ratones ob/ob deficientes en
leptina y que exhiben obesidad y DMNID, al ser infectados con adenovirus
modificados con el gen normal presentan disminucin de la ingesta y en el
peso, as como de la glicemia, mientras dura la expresin.

Terapia gnica en el tratamiento del cncer


Tradicionalmente las aproximaciones al tratamiento del cncer involucraban
la destruccin de las clulas cancerosas con agentes quimioteraputicos,
radiacin o ciruga. La TG es una cuarta estrategia que en algunos casos ha
logrado disminuciones en el tamao de los tumores slidos que alcanzan
entre un 50% y un 100% Ms de la mitad de los estudios clnicos para la TG
estn dirigidos al cncer, en casi todos los sistemas.

Los principales mtodos que utiliza la TG del cncer son:


1. Aumento de la respuesta inmune celular antitumoral (terapia
inmunognica). Est basada en la habilidad del sistema inmune para montar
un ataque contra el cncer. Consiste en "educar" a las clulas del sistema
inmune que han sido removidas del paciente, para que "adopten"
caractersticas que les permitan destruir a las clulas cancerosas del
paciente cuando le son posteriormente reinyectadas.
2. Introduccin de genes activadores de drogas dentro de las clulas
tumorales o terapia de genes suicidas. Consiste en la introduccin selectiva
de genes que codifican para la susceptibilidad a drogas que de otra manera
no seran txicas. Esto lleva a la produccin de enzimas (como por ejemplo
la HSV-tk [Herpex simplex virus timidina kinasa]) que convierten prodrogas
(vg ganciclovir, 5-fluorocitocina) en metabolitos citotxicos que destruyen a
las clulas tumorales en proliferacin.
3. Normalizacin del ciclo celular. Consiste en la inactivacin de oncogenes
mutados, como el ras, o en la reexpresin de antioncogenes o genes
supresores de tumor inactivos como el p53.
4. Manipulacin de las clulas de la mdula sea. Es utilizada
principalmente en la terapia gnica de desrdenes hematolgicos, y
consiste en transferir a las clulas progenitoras hematopoyticas genes de
quimioproteccin (genes de multirresistencia a drogas, los cuales permiten
administrar dosis ms altas de quimioterpicos) o de quimiosensibilizacin,
entre otros.
5. Incremento del efecto circundante o "bystander effect". Este efecto se ha
observado en la terapia de genes suicidas, en que, aunque slo se infectan
con los vectores 1 de 10 clulas, las clulas tumorales que no son infectadas
tambin mueren. Se piensa que por procesos de comunicacin intercelular
(gap junctions), las clulas con la informacin letal transmitiran seales a
sus vecinas que desencadenan el fenmeno de apoptosis o muerte celular
programada. Se estn investigando en detalle los mecanismos por medio de
los cuales se produce este efecto, y la manera de incrementarlo.
6. Uso de ribozimas y tecnologa antisentido o "antisense". Las ribozimas
son ARN con actividad cataltica que actuaran incrementando la
degradacin del ARN recin traducido, disminuyendo protenas especficas
no deseadas, factor que a veces se asocia a alteraciones tumorales. La
tecnologa antisentido se refiere a oligonucletidos de ARN que no tienen
actividad cataltica, sino que son complementarios a una secuencia gnica.
Estos oligonucletidos podran actuar por diferentes mecanismos:
a. Bloqueo del procesamiento (splicing) del ARN. El ARN que ha sido
transcrito del DNA, antes de ser traducido a protena muchas veces debe
sufrir modificaciones para originar un RNA maduro. Bloqueando este
procesamiento podemos impedir que se produzca una protena nociva.
b.Impedimento del transporte del complejo RNA-antisense al citoplasma.
c. Bloqueo del inicio de la traduccin.

Hay numerosos protocolos de aplicacin de estas tcnicas a la prctica


clnica. Entre ellos tenemos un estudio clnico fase I de un grupo de
pacientes con melanoma maligno, en el cual se modificaron clulas del
melanoma con gen interfern-gamma, inactivadas y criopreservadas para
utilizarse en forma de vacuna. Se administraron dosis crecientes de clulas
una vez cada dos semanas a 13 pacientes para observar su respuesta
inmune y los beneficios de la misma. Ocho de ellos presentaron algn tipo
de respuesta inmune. En 2 pacientes que lograron una respuesta inmune
significativa hubo regresin tumoral, y otros 2, con menor respuesta,
presentaron resolucin transitoria de ndulos.

Terapia gnica en el tratamiento del SIDA


El HIV, causante de esta enfermedad, trastorna el dogma central de la
biologa debido a la transcripcin reversa de su RNA genmico y su
integracin al azar del ADN viral producido en el ADN del husped, haciendo
al provirus un rasgo heredable de la clula, que se mantiene mientras sta
exista. Esto, aunado al hecho de la excepcional plasticidad gentica del HIV,
proporciona un gran reto para la terapia gnica, siendo, despes del cncer,
el tpico que agrupa el mayor nmero de ensayos.
Objetivos:
1.Detener la replicacin del HIV dentro de las clulas infectadas.
2.Impedir que el virus infecte a las clulas sanas.
Varias de las estrategias que se han utilizado involucran la manipulacin de
los monocitos y de las clulas CD4 o linfocitos T ayudadores, que son los
ms afectados por el virus. Como vectores se han utilizado frecuentemente
los virus del HIV modificados que tienen un trofismo natural por las clulas
CD4, pero que no se multiplican en ellas.
Estrategias:
1. Produccin de vacunas anti HIV por medio de la introduccin de
molculas del virus para entrenar al sistema inmune a que reconozca los
virus y los elimine. Esto tendra que ser realizado antes de que el paciente
cayera en el estado de inmunosupresin.
2. La utilizacin de anticuerpos que actan intracelularmente y que impiden
el ensamblaje de las partculas virales.
3. La terapia con genes suicidas, similar a la utilizada en la terapia del
cncer (ver arriba).
4. La introduccin de genes que produzcan ribozimas que degraden el RNA
viral.
5. La introduccin de genes con mutaciones dominantes negativas, es decir,
genes que produzcan protenas similares a las virales, pero defectuosas, de
manera que al involucrarse en la estructura y en las reacciones malogren el
mecanismo viral de producir dao.

Limitaciones tcnicas que confronta actualmente la terapia


gnica
Quedan an muchos detalles tcnicos que perfeccionar en la TG, esto en
parte debido a nuestro desconocimiento del genoma y de sus mecanismos
de regulacin. Faltan por secuenciar la mayora de los genes y tambin
determinar cmo estos genes interactan entre s. Este conocimiento es
crtico si se desea intervenir apropiadamente en este microambiente. Uno
de los principales problemas de la tcnica que resta por superar es el del
perfeccionamiento de los mtodos de distribucin de los genes teraputicos
a las clulas. A menudo, los genes introducidos en los pacientes no alcanzan
a las clulas apropiadas. Recordemos que los vectores virales son derivados
de los virus que se encuentran en la naturaleza, y por lo tanto muchos de
ellos infectan a las clulas del cuerpo de manera inespecfica. Esto puede
ser un serio impedimento si se desea que el gen se exprese en una
determinada proporcin en un determinado rgano o tejido especfico. En
muchos casos la transfeccin tiene una eficiencia muy baja, que no es la
suficiente para alcanzar el objetivo teraputico (obtener una determinada
cantidad del producto gnico deseado).
Al mismo tiempo, los virus presentan la dificultad de que depositan su carga
de ADN al azar dentro del ADN, lo cual puede ser nocivo si interfiere con un
gen que est funcionando normalmente, pues podra provocar la activacin
de oncogenes, con la consiguiente transformacin cancerosa de la clula.
Habra que determinar tambin cunto puede tolerar la clula que se le
aumente su cantidad de ADN (el cual se va incrementando cuando se
introducen los nuevos genes) para que, a pesar de este aumento, pueda
seguir funcionando normalmente.
Otro problema que se ha detectado es que muchas veces los genes
introducidos funcionan pobremente o se apagan despus de un tiempo. Esto
se ha relacionado con la respuesta inmulgica que desencadenan los
vectores virales, que hara que el sistema inmune eliminara las clulas que
stos han "infectado"con el gen normal.
Un aspecto importante sobre el cual son muy estrictos los organismos
responsables de dar las autorizaciones para los estudios clnicos es el de
garantizar la inocuidad de los virus utilizados. Este cuidado es
absolutamente comprensible y necesario, tomndose en cuenta que los
virus utilizados provienen muchas veces de virus patgenos. Buscar los
mejores mtodos para garantizar esta inocuidad es objeto de activa
investigacin.
Una dificultad que tambin se ha planteado son los costos de los protocolos
clnicos, pues hasta ahora stos son demasiado elevados para emplearlos
como procedimientos de rutina34. Se espera que, como ha ocurrido con otras
reas de la tecnologa, estos costos bajen al masificarse los productos.
Varias de las dificultades que hemos mencionado implican que es necesario
un mejor conocimiento sobre la regulacin de la expresin gnica, y sobre
cmo garantizar la estabilidad de los genes introducidos. Los cromosomas
artificiales, los cuales han sido recientemente desarrollados y que se
encuentran en una fase de experimentacin preliminar, constituirn, en la
medida en que puedan ser perfeccionados, como lo sealan sus propios
creadores, una alternativa a esta ltima dificultad ya que pueden mantener
una muy buena estabilidad durante sucesivas divisiones celulares.

Limitaciones ticas de la TG
stas estn relacionadas en gran parte con la posibilidad del desarrollo de la
terapia de clulas germinales, la cual ha originado grandes controversias, ya
que al transmitirse los cambios efectuados en ellas a las siguientes
generaciones se afecta el patrimonio gentico de la especie humana, y un
error de juicio y/o tecnolgico pudiera tener muy malas e imprevisibles
consecuencias. Por este motivo, este tipo de terapia ha sido totalmente
proscrita por diferentes organismos internacionales (OMS, UNESCO y
Consejo de Europa, entre otros).
Como ante toda novedad, la terapia gnica tiene partidarios entusiastas
que, tal vez de una manera poco realista, ven en ella poco menos que el
control de las enfermedades, y, por otro lado, grandes detractores. En todo
caso, si se llegan a superar todos las dificultades tcnicas, la TG puede
redefinir la prctica de la medicina el prximo siglo, considerando sobre
todo que desde hace slo unos 8 aos es que se tienen los primeros
protocolos. Aunque hasta la fecha no se haya curado por completo a ningn
paciente con este tipo de terapia, las perspectivas son atrayentes y vale la
pena seguir explorndola como posibilidad, pero dentro de lmites ticos.
Concebida en un principio para tratar enfermedades metablicas raras, en
la actualidad se espera que la terapia gnica pueda incidir en la cura de
enfermedades como el cncer, la enfermedad coronaria y otras que hemos
mencionado. No se puede dudar que es un nuevo y largo camino a recorrer,
que seguramente traer muchas satisfacciones a la prctica de la medicina,
probablemente en un futuro no muy lejano.

OTROS

* La Talasemia.- Grupo de enfermedades relacionadas con la presencia de


hemoglobina distinta de la normal.
- Tratamiento: retirar clulas de la mdula sea del enfermo, introducir en
ellas el gen correcto mediante un virus, volverlas al torrente circulatorio.

- Dificultades: La seleccin de las clulas que producen hemoglobina entre


todas las clulas de la mdula, es difcil.

- Los genes introducidos se expresan poco.

- Las alteraciones en su manifestacin son peligrosas.

* La carencia de la enzima Adenosin Desaminasa (ADA).- Fallo en los


leucocitos.

Enfermedad de los nios burbuja o inmunodeficiencia combinada grave


(SCID).

- Tratamiento: semejante al de la Talasemia.

Cncer: melanoma, rin, ovario, colon, leucemia, pulmn, hgado,


prstata...
Fibrosis qustica
Hipercolesterolemia
Hemofilia
Artritis reumtica
Diabetes
SIDA

Ingeniera gentica. Biotecnologa


En trminos generales biotecnologa es el uso de organismos vivos o
de compuestos obtenidos de organismos vivos, para obtener
productos de valor para el hombre.
La ingeniera gentica es un conjunto de manipulaciones que
permiten combinar genes de distinta procedencia, amplificarlos y
transferirlos de una clula a otra.
Se denomina ADN recombinante al que se ha formado al intercalar
un segmento de ADN extrao en un ADN receptor. Por ejemplo: la
integracin de un ADN vrico en un ADN celular.
Tecnologa del ADN recombinante

Permite aislar y manipular un fragmento de ADN de un organismo


para introducirlo en otro
Destacamos las siguientes tcnicas:
1. fragmentacin del ADN u obtencin de fragmentos de ADN
2. Unin de fragmentos de ADN, con la obtencin del ADN
recombinante
3. Insercin de genes en clulas mediante vectores y seleccin de
transformantes con ADN clonado
4. Secuenciacin del ADN (genmica y protemica)
5. La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR): con la que se
consigue aumentar el nmero de copias de un fragmento
determinado de ADN, por lo tanto, con una mnima cantidad de
muestra de ADN, se puede conseguir toda la que se necesite para un
determinado estudio (Repasar)
6. Transgnesis Se ha abierto un campo que ofrece la posibilidad de
utilizar plantas y animales transgnicos (han incorporado genes
ajenos) as como microorganismos modificados genticamente para
producir frmacos u otros productos de utilidad para el hombre, entre
los que se pueden citar: la insulina humana, la hormona del
crecimiento, interferones, la obtencin de nuevas vacunas o
la donacin de animales. Una puerta abierta que no debe hacer
olvidar el impacto perjudicial que un uso inadecuado podra provocar
en el ser humano y en el propio planeta.

Un experimento de Ingeniera gentica consistira en

1. Se corta por separado el ADN del organismo a estudiar y el ADN


del vector con la misma restrictasa, de modo que se generan
extremos compatibles entre s (mutuamente cohesivos).
2. Se juntan ambos ADNs y se les aade ADN-ligasa: de esta forma,
las uniones entre ADN pasajero y ADN del vector se sellan
covalentemente, generndose molculas hbridas (quimricas o
recombinantes).
3. Ahora hay que introducir las molculas generadas en el organismo
husped. En el caso de bacterias se recurre a una tcnica sencilla
denominada transformacin, que permite la entrada del ADN a travs
de las envueltas del microorganismo
4. Finalmente, hay que localizar las bacterias que han captado y han
establecido establemente las molculas hbridas. A menudo este es el
paso ms laborioso, pero el hecho de que el vector posea uno o varios
genes de resistencia favorece al menos la eliminacin de las bacterias
que no han recibido ADN del vector: basta aadir al medio de cultivo
el antibitico para el que el vector confiere resistencia. Para localizar
los transformantes recombinantes, muchos vectores incorporan un
gen marcador que produce alguna sustancia coloreada. Si insertamos
el gen a aislar dentro de ese marcador, lo rompemos, por lo que las
colonias bacterianas no producirn la sustancia coloreada, sino que
permanecen incoloras o blancas.
5. El resultado del experimento es la obtencin de al menos una
colonia (clon) de bacterias que portan la combinacin buscada de
vector con el inserto de ADN pasajero. Se dice entonces que hemos
donado (=aislado) dicho ADN
Iremos viendo cada una de las etapas por separado y al mismo
tiempo posibles utilidades de algunas tcnicas.

Obtencin de fragmentos de ADN


a) Enzimas de restriccin (Tijeras moleculares)
b) Obtencin de fragmentos de ADN por retro transcriptasas
c) ADN sintetizado artificialmente.

a) Obtencin de fragmentos de ADN por enzimas de restriccin


(Tijeras moleculares)

Los enzimas de restriccin son endonucleasas que producen, al


reconocer secuencias especficas de nucletidos de un ADN, un
corte del ADN en fragmentos ms pequeos y manejables
Los enzimas de restriccin llamados de tipo II reconocen secuencias
de "ADN capica" o poliandrmicas, en el sentido de que la
lectura en la direccin 5.... 3' de una de las hebras es idntica a la
complementaria leda en la direccin 3... 5 Algunas fragmentan el
ADN en cortes quebrados, originando terminales cohesivos o
pegajosos porque pueden unirse a otros fragmentos de ADN que
hayan sido cortados con el mismo enzima de restriccin.
Endonucleasa: Escinde enlaces difosfoster (fosfodiesterasa)
internos de una cadena polinucletida
Exonucleasa: escinden el enlace fosfato del nucletido terminal por
lo que generan una Cadena polinucletida acortada en un
nucletido Los enzimas de restriccin son un mecanismo de defensa
de las bacterias frente a la invasin de bacterifagos. La bacteria
produce un enzima que degrada el ADN intruso, mientras elADN
propio est protegido (las dianas de restriccin estn metiladas, lo
que impide la accin del enzima en el ADN propio).
A partir de fragmentos de ADN se puede llegar a obtener genotecas
o bibliotecas genmicas. Para hacer una genoteca el ADN a
estudiar se divide en fragmentos utilizando enzimas de restriccin.
Los virus son a menudo utilizados como vehculo de transporte de los
fragmentos obtenidos, insertando en el genoma del virus los
fragmentos del ADN del organismo de inters.

Aplicaciones:

Fragmentacin de los genomas


Elaboracin de mapas de restriccin
Polimorfismos de fragmentos de restriccin y diagnstico de
enfermedades
Huella gentica individual

Fragmentacin de los genomas


Los fragmentos obtenidos, llamados fragmentos de restriccin, se
pueden separar por tamaos (es decir segn el nmero de pares de
nudetidos que llevan) mediante la tcnica de electroforesis. En una
electroforesis el ADN fragmentado se coloca en el extremo de un gel
de agarosa o poliacrilamida. Al pasar una corriente elctrica a travs
del gel, cada molcula se desplaza hacia el polo (+) a una velocidad
que depende del logaritmo de su peso molecular. Se producen una
serie de bandas, cada una de ellas es un fragmento de un tamao
concreto
Elaboracin de mapas de restriccin:

Comparando los tamaos de los fragmentos de restriccin formados a


partir de una regin gnica determinada tras el tratamiento con
varias restrictasas, permite la elaboracin de un mapa de esa regin
que muestra la localizacin de cada punto de corte en relacin a los
vecinos.

Polimorfismos de fragmentos de restriccin: Diagnstico de


enfermedades

Existen variaciones entre los genomas de dos individuos que son


detectables a nivel de enzimas de restriccin, estas variaciones son
comunes en intrones con ganancia o prdida de material gentico, sin
que ello produzca un cambio en el ADN o en la protena que el gen
codifica.

Estas variaciones se denominan polimorfismos del tamao de


fragmentos de restriccin (PTF)

Cuando los dos alelos de un individuo difieren en el tamao de un


intrn para un gen dado, el tratamiento con enzimas de restriccin de
su ADN revelar esta diferencia, al aparecer fragmentos de distinto
tamao.
En ocasiones muy contadas una mutacin que origina una
determinada patologa, elimina o crea una diana de restriccin para
algn enzima. Un caso conocido es la anemia falciforme. La
enfermedad est asociada a un cambio por sustitucin de A por T,
este cambio elimina una diana para un enzima de restriccin
concreto. Aparece un fragmento de 1,4 Kb en vez de 1,2 Kb.

Huella gentica individual

Existen en el genoma humano regiones hipervariables constituidas


por secuencias de 10 40 nucletidos internamente repetidas. Dos
individuos sin parentesco tienen fragmentos de distinto tamao al
cortar una regin hipervariable con un enzima de restriccin que no
reconozca dianas dentro de la regin repetida. El patrn de restriccin
observado en un individuo al ser tratado su ADN con un enzima de
restriccin y posteriormente transferido el ADN a nailon e hibridado
con una sonda radioactiva se denomina huella gentica o en lenguaje
coloquial cdigo de barras individual
a) anlisis de los fragmentos de restriccin para identificar los
alelos paternos (P) y maternos (M) de los cuatro
Hijos de un matrimonio. Una muestra de ADNs de los implicados
se trata con una enzima de restriccin que no corte dentro de la
regin hipervariable. Se corren las muestras en un gel de
azarosa, se desnaturaliza el ADN y se transfiere a nailon. La
identificacin se hace por hibridacin con la sonda unilocus
tratada radiactivamente. El primer hijo (H1) es el resultado de
una relacin anterior al matrimonio actual y no muestra
homologa con los alelos paternos.
b) Determinacin de la paternidad entre dos posible padres P1 y
P2 de un nio N . El P2 queda identificado.

b) Obtencin de fragmentos de ADN por reverso


transcriptasas

Dado que en los procariontes no hay proceso de maduracin del


ARNm, si se desea intercalar un gen eucaritico en una bacteria, no
se puede introducir un segmento de ADN con intrones y exones, sino
que se ha de utilizar una enzima de origen vrico, denominada
transcriptasa inversa o retrotranscriptasa, para producir ADN a
partir de una hebra de ARNm ya maduro (molcula en la que ya
no hay intrones).
Posteriormente se ha de duplicar para que se forme ADN de doble
hlice, llamado ADN complementario (ADNc), y finalmente
introducirlo en un vector (un virus o un plsmido) para que lo
transporte al interior de la bacteria.
Con este mecanismo se pueden obtener genotecas o bibliotecas
genmicas.

c) ADN sintetizado artificialmente

ADN sintetizado artificialmente segn el orden deducido de la


secuencia de aminocidos de la protena que se desea fabricar. Esto
permite- introducir mutaciones y elaborar nuevas enzimas (enzimas
de diseo). Se est trabajando en hacer enzimas capaces de
catabolizar el insecticida DOT o el petrleo y as, mediante ingeniera
gentica, obtener bacterias que permitan es la recuperacin de
ambientes contaminados por dichas sustancias.

2: Unin de fragmentos de ADN con formacin de ADN


recombinante
Se consigue cortando con el mismo enzima de restriccin, tanto el
ADN que se desea insertar como el ADN del vector y soldarlos
mediante el enzima ADN ligasa
3. Insercin de genes en clulas mediante vectores y
seleccin de transformantes con ADN clonado

a) Plsmidos
b) Virus bacterifagos
c) Csmidos
d) Virus animales para la donacin en eucariotas, y levaduras
e) Plsmido Ti de la bacteria Agrobacterium tumefaciens

a) Plsmido:
Es un fragmento circular de ADN bicatenario independiente del
cromosoma bacteriano con capacidad de
replicacin autnoma utilizando los enzimas bacterianos. Si quedan
libres en el medio extracelular, pueden penetrar en el interior de
otras bacterias mediante el proceso llamado transformacin (este
proceso se puede facilitar aadiendo cloruro de calcio que
permeabiliza al ADN las membranas de las bacterias)
Son de pequeo tamao (3kb) Llevan marcadores que permiten la
seleccin de los transformantes. Los ms comunes son genes que
confieren resistencia a antibiticos como: ampicilina, tetraciclina,
cloranfenicol y neomicina.
Ponemos como ejemplo un plsmido que contiene un sitio para el
enzima de restriccin llamado BamH1, que se localiza dentro del gen
para la resistencia a la tetraciclina y otro lugar para la enzima de
restriccin Pstl que est dentro del gen de resistencia a la ampicilina.
Si se inserta un fragmento de ADN forneo en uno de estos sitios, la
resistencia para el antibitico se pierde, fenmeno conocido como
inactivacin por insercin. Esta inactivacin por insercin se usa para
detectar la presencia del ADN donado dentro del plsmido.
Si el plsmido es digerido por BamH1 y se liga a un ADN forneo
digerido por el mismo enzima de restriccin y se introduce en
bacterias, aquellas bacterias que siendo resistentes a la ampicilina
son sensibles a la tetraciclina, son las que contienen el plsmido con
el ADN donado
El paso del plsmido al interior de una bacteria se llama
transformacin.

b)

Utilizacin de virus bacterifagos


La modificacin del ADN de una bacteria por el ADN de un virus se
llama transduccin.
El ms utilizado es el fago lambda () que tiene un genoma de slo 49
Kb
Los vectores tienen la ventaja de que el ADN extrao se empaqueta
con el ADN del fago, "in vitro", formndose un ADN recombinante que
penetra en la bacteria por la inyeccin que produce el propio virus,
posteriormente en el interior de la bacteria el ADN forneo se integra
al cromosoma bacteriano.
La recombinacin tiene lugar en el interior de la bacteria, la infeccin
por el fago es muy eficiente.
El siguiente paso es poner a las bacterias en un medio de cultivo
apropiado para que se multipliquen. A la vez que se reproducen las
bacterias lo hace tambin el gen que se ha integrado en el
cromosoma bacteriano, el resultado es que se obtiene un clon de
clulas que llevan todos esos genes de inters.
Se pueden formar diferentes clones con genes de inters para el
hombre. Este conjunto de clones se denomina biblioteca genmica.

c) Plsmido Ti de la bacteria Agrobacterium tumefaciens


Las clulas vegetales pueden someterse a tratamientos que
modifiquen su patrimonio gentico. Las tcnicas se clasifican en
directas e indirectas.
Entre las tcnicas indirectas cabe destacar la transformacin de
clulas mediada por Agrobacterium tumefaciens.
Esta bacteria puede considerarse como el primer ingeniero gentico,
por su particular biologa.
Esta bacteria, presente en el suelo, es patgena de muchas plantas a
las que produce un tumor conocido como "agalla de cuello". Penetra
en los tejidos vegetales causando una proliferacin celular. Durante el
contacto con las clulas vegetales la bacteria transfiere a las clulas
vegetales un plsmido llamado Ti (inductor de tumores). Este
plsmido se integra en el ADN del cromosoma de la clula vegetal.
Este plsmido transferido o T-ADN contiene los genes oncognicos
(onc) cuya expresin provoca una mayor produccin de hormonas de
crecimiento, estas son las que inducen las divisiones celulares que
dan origen a la formacin del tumor o agalla.
Este fenmeno natural es empleado para utilizar a la bacteria
Agrobacterium tumefaciens como vector de los genes que se desean
introducir en una clula vegetal, con lo que se transforma dicha
clula, la cual puede regenerar, por micropropagacin, una planta
entera que ser transgnica. De esta manera, la bacteria modifica la
informacin gentica de la planta, aadindole los genes onc.
Agrobacterium se comporta, de esta forma, como un Ingeniero
gentico natural.
Si en el plsmido Ti se eliminan artificialmente los genes onc y se
sustituyen por otros genes que interese donar, se habr obtenido un
sistema muy eficaz para introducir ADN en la planta, al mismo tiempo
que se habr evitado la aparicin de la enfermedad.
Entre las tcnicas directas, se pueden citar la electroporacin,
microinyeccin, liposomas y mtodos qumicos.
Otra de las herramientas que existen para la introduccin directa
de cidos nucleicos a clulas vegetales es la biobalstica. Dicha
tcnica representa un mtodo fsico de transformacin y consiste en
el bombardeo de tejidos con micropartculas cubiertas con DNA o con
cualquier otra biomolcula que se pretenda introducir a clulas
vegetales.

4: Secuenciacin del ADN (genmica y protemica)


La genmica es el estudio del genoma de los seres vivos. El mayor
xito ha sido la secuenciacin del genoma humano, con lo que se
espera poder tener una capacidad de diagnstico en individuos con
riesgo de ser portadores de un gen que genere una enfermedad o el
desarrollo de terapias gnicas. El genoma humano contiene entre 32-
39 mil genes que codifican para protenas (5%)
Alrededor del 50% del genoma est constituido por secuencias
repetidas de ADN. Los humanos comparten el 99,9% del genoma y la
distribucin de los genes en los cromosomas es irregular.La
protemica tiene como objetivo estudiar el conjunto de protenas
expresadas por un genoma, una clula o un tejido (PROTEnas de un
genOMA).

El proteoma de una clula vara segn el estado en el que se


encuentre la clula, si se encuentra en una situacin de estrs, bajo el
efecto de frmacos o de una hormona. As, en cada momento y en
cada tipo celular el perfil de protenas expresadas ser diferente. La
protemica es til para estudiar estas diferencias.
Existen tres ramas en la protemica que tratan de caracterizar el
proteoma estudiando distintos aspectos del mismo:
La protemica de expresin, buscar la relacin entre genoma y
proteoma
La protemica estructural se encarga de la caracterizacin de la
estructura tridimensional de las protenas
La protemica funcional se encarga de la localizacin y distribucin
subcelular de protenas y de las interacciones que se producen entre
las protenas y otras molculas con el fin de determinar su funcin.

Las aplicaciones de la protemica son mltiples, pero actualmente se


destacan las siguientes:
Identificacin de nuevos marcadores para el diagnstico de
enfermedades
Identificacin de nuevos frmacos.
Determinacin de mecanismos moleculares involucrados en la
patogenia de enfermedades.
Anlisis de rutas de transduccin de seales.

Transgnesis
La

transgnesis se puede definir como la introduccin de ADN extrao en


un genoma, de modo que se mantenga estable de forma hereditaria y
afecte a todas las clulas en los organismos multicelulares.
Generalmente, en animales, el ADN extrao, llamado transgn, se
introduce en zigotos, y los embriones que hayan integrado el ADN
extrao en su genoma, previamente a la primera divisin, producirn
un organismo transgnico; de modo que el transgn pasar a las
siguientes generaciones a travs de la lnea germinal (gametos).
Transgnico se refiere a una planta o a un animal en cuyas clulas se
ha introducido un fragmento de ADN exgeno, o sea un ADN que no
se encuentra normalmente en ese organismo
Entre las aplicaciones de los animales transgnicos se pueden
destacar:
La posibilidad de estudiar a nivel molecular el desarrollo embrionario
y su regulacin.
Manipular de forma especfica la expresin gnica in vivo.
Estudiar la funcin de genes especficos.
Poder utilizar a mamferos como biorreactores para la produccin de
protenas humanas.
La correccin de errores innatos de metabolismo mediante terapia
gnica.
La transgnesis puede efectuarse siguiendo dos estrategias distintas:

Transgnesis por micro inyeccin en zigoto

Desde que en 1982 se obtuviera un ratn transgnico, la produccin


de animales transgnicos es cada vez ms cotidiana, existiendo ya
animales transgnicos de las siguientes especies: ratn, rata, conejo,
cerdo, vaca, cabra y oveja. La tcnica se realiza, fundamentalmente
por microinyeccin y se realiza de la siguiente forma:
En la primera fase, se aslan un nmero grande de vulos
fertilizados. Se consigue sometiendo a las hembras a un tratamiento
hormonal para provocar superovuladn. La fertilizacin puede
hacerse in vitro o in vivo.
En la segunda fase, los zigotos obtenidos se manipulan uno a uno
y con una micropipeta a modo de aguja, se introduce una solucin
que contiene ADN.
En la tercera fase, estos vulos son reimplantados en hembras
que actuarn como nodrizas permitiendo la gestacin hasta trmino.
Por ltimo, tras el destete de los recin nacidos, stos se
chequean, para ver si ha ocurrido la incorporacin del transgn.

Transgnesis por manipulacin de clulas embrionarias.

Una estrategia ms poderosa para la transgnesis implica la


introduccin de ADN extrao en clulas embrionarias totipotentes
(clulas ES) o clulas embrionarias madres (clulas EM).
Estas clulas se toman del interior de la blstula en desarrollo y se
pasan a un medio donde se tratan con distintos productos con lo que
se conseguir que las clulas no se diferencien, y se mantiene su
estado embrionario transfectadas son reintroducidas en una blstula
y sta reimplantada en una hembra. Con esta tcnica los neonatos
son quimeras; pero mediante el cruce de stas se consiguen animales
transgnicos con aquellas quimeras que hayan incorporado el
transgn en su lnea germinal.
Cuando la integracin del transgn ocurre despus de la primera
divisin celular, el animal es quimrico, lo que quiere decir que las
clulas de su cuerpo tienen diferentes caractersticas, segn tengan o
no el transgn, as en la "ovecabra" quimera entre oveja y cabra, las
clulas de su piel, unas producan lana y otras pelo.

Transferencia mediante vectores virales

Los retrovirus son capaces de transportar la secuencia gnica que se


quiera insertar hasta el ncleo de las clulas receptoras. Sin embargo,
como con la microinyeccin, tambin aqu el gen se inserta al azar en
el genoma. Puesto que el ADN se localiza en distintos lugares en
clulas diferentes, los animales que nacen de esta forma suelen ser
mosaicos genticos o quimeras, no expresan completamente la
caracterstica que aporta el nuevo gen insertado porque no todas sus
clulas lo portan, por lo que hay que realizar mezclas y selecciones
hasta conseguir el animal completamente transgnico. La transmisin
del transgn slo es posible
si el retrovirus se integra en algunas de las clulas germinales.

CLONACIN DE ANIMALES

Clonar significa crear un ser vivo idntico a otro, a partir de una


clula del organismo original
La naturaleza produce de modo natural clones, sin mediacin humana
como es el caso de los gemelos monocigticos que comparten una
informacin gentica idntica
Clonacin: es la tecnologa para produccin de individuos
genticamente idnticos. Es un sistema de reproduccin en la que no
participan ovocitos y espermatozoides en la formulacin gentica,
sino que la carga gentica contenida en el ADN de los cromosomas es
provista por clulas somticas..
El principio de la clonacin est en la obtencin de organismos
idnticos genticamente, y por tanto morfolgica y fisiolgicamente,
como lo son dos gemelos univitelinos. Esto ha sido el sueo de
muchos ganaderos, que han deseado que todo su ganado tuviera las
cualidades de algn ejemplar especialmente bueno.
Se pueden utilizar dos mtodos para conseguir clones de animales:
Por DISGREGACIN DE CLULAS EMBRIONARIAS.
Se basa en el mismo principio por el que nacen gemelos de forma
natural. Se pueden separar las clulas de un embrin en diferentes
estados de desarrollo, desde el estado de 2 clulas hasta el estado de
mrula. Cada clula separada puede funcionar como un zigoto que
puede desarrollarse para dar un individuo completo.
Por TRANSFERENCIA NUCLEAR. Transferencia nuclear:
Transferencia de ncleos diploides a ovocitos, vulos o cigotos
enucleados: Ncleos transferidos procedentes de clulas
embrionarias no diferenciadas (paraclonacin)
Ncleos transferidos procedentes de clulas diferenciadas (adultas o
fetales).
Fue el mtodo utilizado para donar a la Oveja Dolly. Desde el punto de
vista de sus posibles aplicaciones, la importancia de utilizar como
donadores individuos adultos radica en su valor gentico probado.
Oveja Dolly
En 1.997, el Instituto Roslin, en Escocia, clon por primera vez
(despus de 277 intentos) en la historia a un mamfero a partir de una
clula diferenciada de otro. Dolly, es el primer mamfero de la historia
que se ha clonado de un adulto. Antes de Dolly, cientficos de
diversas partes del mundo haban logrado donar sapos, monos,
ovejas y vacas. Pero siempre haban utilizado clulas de embriones,
las cuales tienen la
capacidad de dividirse y dar origen a un nuevo ser. En la dcada de
los 70 se descubri, gracias a un experimento con sapos, que era
posible donar individuos completos a partir de clulas diferenciadas.
Clonacin:
De la ubre de la madre de Dolly, los cientficos sacaron una clula,
que contiene todo el material gentico (ADN) de la oveja adulta.
Despus, de otra oveja, a la que llamaremos oveja X, le extrajeron un
vulo, el cual servira de clula receptora. Al vulo se le sac el
ncleo, eliminando as el material gentico de la oveja donante. Se
extrajo el ncleo de la clula mamaria y, mediante impulsos
elctricos, se fusion al vulo sin ncleo de la oveja X donante. Con
los mismos impulsos se activ al vulo para que comenzara su
divisin, tal y como lo hacen los vulos fertilizados en un proceso
natural de reproduccin.
Al sexto da, ya se habr formado un embrin, el cual fue implantado
en el tero de una tercera oveja, la madre sustituta, que tras un
periodo normal de gestacin, dio a luz a Dolly: una oveja exactamente
igual a su madre gentica.
Cuanto ms diferenciadas estn las clulas donantes de material
gentico, ms difcil es
conseguir la reprogramacin de dicho material gentico para que
pueda iniciar la diferenciacin de la clula receptora. Actualmente es
posible obtener clones de clulas totalmente diferenciadas de un
animal adulto que actan como donantes de su material gentico,
como ocurri en el caso de la famosa oveja Dolly.
La oveja Dolly fue sacrificada a los 6 aos de edad al padecer una
grave infeccin pulmonar las ovejas pueden vivir entre once y doce
aos, las infecciones de pulmn son comunes en las ovejas de mayor
edad, especialmente las que viven en recintos cerrados
El ganado transgnico que se emplea para producir protenas
teraputicas, debe contener en el ADN extrao de sus clulas,
adems del gen codificante de la protena, una secuencia o
promotorque haga que se exprese dicho gen en unas determinadas
clulas solamente.
Por ejemplo, si se quiere que la protena se produzca junto con la
leche, el transgn se fusiona con una secuencia
reguladora de una protena de la leche, con lo que la protena slo se
formar en las clulas de glndulas mamarias. Esto es lo que se hizo
con la oveja Tracy en 1992, la primera oveja que produjo una protena
humana. Lo mismo se ha hecho para la famosa cerda Genie, que
fabrica en su leche la protena C humana que controla la coagulacin
sangunea y es necesaria para los hemoflicos.

TERAPIA GNICA.

Estrategia orientada a curar las deficiencias gentica, introduciendo


una o varias copias de genes normales para sustituir la funcin de
genes ausentes o mutantes en los cromosomas de las clulas de
enfermos, para as curar la enfermedad
La terapia gnica puede aplicarse aplicando dos estrategias:
Insertar una copia sana de un gen en las clulas del paciente para
compensar el efecto del gen defectuoso. No es necesario que se
integre en un determinado sitio del cromosoma, es suficiente que
sobreviva y se exprese, es decir que pueda producir la protena
necesaria que el gen defectuoso no hace.
Se puede considerar como el primer caso de terapia gnica (1990).
Se trataba de una nia que haba heredado un gen defectuoso de
cada progenitor y sufra una Inmunodeficiencia combinada grave
(SCID), al faltarle una enzima, la desaminasa de adenosin (ADA),
enzima necesaria para el correcto funcionamiento del sistema
inmune. Se haba convertido en lo que se denomina "nia burbuja"
con pocas posibilidades de supervivencia. Se le extrajeron leucocitos
y en ellos se insertaron copias normales del gen defectuoso y se
devolvieron los leucocitos tratados a la sangre de la paciente. La
experiencia fue un xito y en la actualidad
Ashanti desarrolla una vida completamente normal y nicamente
precisa espordicos tratamientos de recuerdo (terapia ex vivo)
Introducir un gen especialmente diseado, sera una segunda
estrategia, con la que se les dara una nueva propiedad a las clulas.
Por ejemplo, introducir en los linfocitos un gen que produzca un
inhibidor de la replicacin del virus del SIDA.

Ventajas y posibles e inconvenientes de los transgnicos


vegetales u organismos genticamente modificados (OGM)

En cuanto a las aplicaciones en agronoma y mejora vegetal en


sentido amplio, poseen tres ventajas esenciales:
Una gran versatilidad en la ingeniera, puesto que los genes que se
incorporan al organismo husped pueden provenir de cualquier
especie, incluyendo bacterias
Se puede introducir un solo gen en el organismo sin que esto
interfiera con el resto de los genes; de este modo, es ideal para
mejorar los caracteres monognicos, es decir, codificados por un slo
gen, como algunos tipos de resistencias a herbicidas.
El proceso de modificacin gentica demora mucho menos que las
tcnicas tradicionales de mejoramiento por cruzamiento; la diferencia
es de aos, en frutales, a meses.
Ventajas para los consumidores
Produccin de nuevos alimentos
Posibilidad de incorporar caractersticas nutricionales distintas en los
alimentos
Vacunas indiscriminadas comestibles, por ejemplo: tomates con la
vacuna de la hepatitis B
Ventajas para los agricultores
Aumento de la productividad y la calidad aparente de los cultivos
Resistencia a plagas y enfermedades conocidas; por ejemplo, por
inclusin de toxinas bacterianas, como las de Bacillus thuringiensis
especficas contra determinadas familias de insectos
Tolerancia a herbicidas, salinidad, sequas y temperaturas extremas.
Rapidez. El proceso de modificacin gentica demora mucho menos
que las tcnicas tradicionales de mejora
por cruzamiento, que requiere varias generaciones para eliminar
otros genes que se introdujeron en el mismo cruzamiento
Plantas como biorreactores. Las plantas crecen fcilmente y pueden
generar gran cantidad de biomasa en corto tiempo. Basndose en esa
caracterstica se est evaluando el uso de plantas transgnicas para
la produccin comercial de protenas y diversas sustancias qumicas.
Algunas variedades transgnicas han permitido una simplificacin
en el uso de productos qumicos, como en el caso del maz Bt, donde
el combate de plagas ya no requiere el uso de insecticidas qumicos.
Inconvenientes

Resistencia a los antibiticos. Para localizar las clulas en que se ha


incorporado y activado el gen introducido, un mtodo comn es la
introduccin de genes que determinan cierta resistencia a unos
antibiticos, de modo que al aadir el antibitico sobreviven solo las
clulas resistentes, con el gen de resistencia incorporado y activo, y
probablemente tambin con el gen que se desea introducir. Dicho
mtodo se utiliza con el fin de verificar que el gen de inters haya
sido efectivamente incorporado en el genoma del organismo
husped. Estos genes acompaantes son denominados marcadores, y
no son necesarios para el resultado final, solo simplifican el proceso
para lograrlo. Se teme que la inclusin de estos elementos en los
alimentos transgnicos podra hacer que la resistencia a los
antibiticos se transmitiera a las bacterias de la flora intestinal, y de
esta a organismos patgenos. No obstante, por orden de la FAO los
alimentos transgnicos comercializados deberan carecer de los
mencionados genes de resistencia.
Posibilidad de generacin de nuevas alergias
Contaminacin de variedades tradicionales
El polen de las especies transgnicas puede fecundar a cultivos
convencionales, obtenindose hbridos y transformando a estos
cultivos en transgnicos. Este fenmeno ya ocurre con las variedades
no transgnicas hoy en da.
Muerte de otros insectos o polinizadores.
Impacto ecolgico de los cultivos.
Prdida de la biodiversidad.

CLONACIN

- Concepto

Ingeniera Gentica:
Aislar y multiplicar en un tubo de ensayo un determinado gen.
Obtener uno o varios individuos a partir de una clula somtica
o de un ncleo de otro individuo. Los individuos clonados son
idnticos o casi idnticos al original.
- Tipos de clonacin

Particin (fisin) de embriones tempranos


Analoga con la gemelacin natural. Los individuos son muy
semejantes entre s, pero diferentes a sus padres.
Es preferible emplear la expresin gemelacin artificial, y no
debe considerarse como clonacin en sentido estricto.

Paraclonacin
Transferencia de ncleos procedentes de clulas fetales en
cultivo a vulos no fecundados enucleados y a veces, a
zigotos enucleados. El "progenitor" de los clones es el
embrin o feto.
Clonacin verdadera
Transferencia de ncleos de clulas de individuos ya nacidos
a vulos o zigotos enucleados.
Se originan individuos casi idnticos entre s (salvo
mutaciones somticas) y muy parecidos al donante (del que
se diferencian en mutaciones somticas y en el genoma
mitocondrial, que procede del vulo receptor).

Gemelacin artificial
Este tipo de clonacin consiste en tomar un embrin de
hasta 8 clulas y generar embriones idnticos
preimplantatorios (se podran generar hasta 8 embriones
idnticos, uno a partir de cada blastmera). Las blastmeras
biopsiadas del embrin original se introducen
individualmente o de dos en dos en una zona pelcida vaca
(puede proceder de otro animal, pues despus el embrin
sale de ella), o en una cubierta artificial (ZPA), y de cada uno
se generan embriones idnticos al original (clones).

Particin de un embrin, o separacin de en embriones


preimplantatorios (de 2-32 clulas)
Cada mitad o trozo del embrin se introduce en una zona de
otro vulo, o en una cubierta artificial (ZPA), y se implanta.

Clonacin teraputica
Crear un embrin clonado para producir clulas madre
embrionarias con el mismo ADN que la clula donante.

La oveja Dolly
La oveja Dolly (5 de julio de 1996-14 de febrero de 2003)
fue el primer mamfero clonado a partir de una clula
adulta. Sus creadores fueron los cientficos del Instituto
Roslin de Edimburgo (Escocia), Ian Wilmut, Keith
Campbell. Su nacimiento no fue anunciado hasta siete
meses despus, el 23 de febrero de 1997.

Nacimiento
Dolly fue en realidad una oveja resultado de una combinacin nuclear
desde una clula donante diferenciada a un vulo no fecundado y
anucleado (sin ncleo). La clula de la que vena Dolly era una ya
diferenciada o especializada, procedente de un tejido concreto,
la glndula mamaria, de un animal adulto (una oveja Fin Dorset de
seis aos), lo cual supona una novedad. Hasta ese momento se crea
que slo se podan obtener clones de una clula embrionaria, es
decir, no especializada. Cinco meses despus naca Dolly, que fue el
nico cordero resultante de 277 fusiones de vulos anucleados con
ncleos de clulas mamarias.
Vida
Dolly vivi siempre en el Instituto Roslin. All fue cruzada con un
macho Welsh Mountain para producir seis cras en total. De su primer
parto nace Bonnie, en abril de 1998. Al ao siguiente, Dolly produce
mellizos: Sally y Rosie, y en el siguiente parto trillizos: Lucy, Darcy y
Cotton. En el otoo de 2001, a los cinco aos, Dolly
desarrolla artritis comenzando a caminar dolorosamente, siendo
tratada exitosamente con pastillas antiinflamatorias.

Fallecimiento
El 14 de febrero de 2003, Dolly fue sacrificada debido a una
enfermedad progresiva pulmonar. Fue un animal de la raza Finn
Dorset, cuyos individuos tienen una expectativa de vida de cerca de
11 a 12 aos. Sin embargo, Dolly vivi solo seis aos y medio. La
necropsia mostr que tena una forma de cncer de pulmn
llamada Jaagsiekte, que es una enfermedad de ovejas causada por
el retrovirus JSRV. Los tcnicos de Roslin no han podido certificar que
haya conexin entre esa muerte prematura y el ser clon, pues otras
ovejas de la misma manada sufrieron y murieron de la misma
enfermedad. Tales enfermedades pulmonares son un particular
peligro en las estabulaciones internas, como fue la de Dolly por
razones de seguridad.
Sin embargo, algunos han especulado que era parapljica, debido a
sus pezuas torcidas. Haba un factor agravante al deceso de Dolly y
era que tena una edad gentica de seis aos, la misma edad de la
oveja de la cual fue clonada. Una base para esta idea fue el hallazgo
de sus telmeros cortos, que son generalmente el resultado del
proceso de envejecimiento. Sin embargo, el Roslin Institute ha
establecido que los controles intensivos de su salud no revelaron
anormalidad alguna en Dolly, que pudieran hacer pensar en
envejecimiento prematuro. Los restos disecados de la oveja Dolly
estn expuestos en el museo real de Escocia.

- Beneficios

Los investigadores tienen la esperanza de utilizar clulas madre


embrionarias, que tienen la capacidad nica de generar
prcticamente todos los tipos de clulas en un organismo, para
desarrollar tejidos sanos en el laboratorio que puedan usarse
para reemplazar tejidos lesionados o afectados. Adems, podra
ser posible aprender ms acerca de las causas moleculares de
las enfermedades al estudiar las estirpes de clulas madre
embrionarias de los embriones donados derivados de las clulas
de animales o seres humanos con distintas enfermedades. Por
ltimo, los tejidos diferenciados derivados de las clulas madre
embrionarias, son excelentes herramientas para evaluar nuevos
medicamentos teraputicos.

- La posibilidad de producir un rgano


- La clonacin de animales transgnicos
- La produccin de protenas humanas
- Permitir que una mujer estril pueda tener un hijo de ella
misma
- Mejora de la calidad de la ganadera
- Permitir conservar especies de animales en extincin

- Riesgos

Muchos investigadores piensan que vale la pena explorar el uso de las


clulas madre embrionarias como un camino para tratar las
enfermedades humanas. No obstante, a algunos expertos les
preocupan las impresionantes similitudes entre las clulas madre y
las clulas cancerosas. Ambos tipos de clulas tienen la capacidad de
proliferarse indefinidamente, y algunos estudios muestran que
despus de 60 ciclos de divisin celular, las clulas madre pueden
acumular mutaciones que pudieran terminar en cncer. Por lo tanto,
la relacin entre las clulas madre y las clulas cancerosas necesita
entenderse ms claramente si las clulas madre han de usarse para
tratar enfermedades humanas.
Al ser los individuos genticamente iguales, no hay variabilidad
respecto al individuo original
Se manipula la reproduccin humana
Destruccin de embriones
Defectos en los fetos
Necesidad de un gran nmero de intentos

- tica y moral

El Convenio de Oviedo de Biotica, firmado por 19 pases


europeos, prohbe la constitucin embriones con fines de
experimentacin, lo que obliga a definir si todo blastocito es o
no un embrin.

No es tico la clonacin humana con fines reproductivos ni


teraputicos ONU 2004.
La clonacin gnica es una tcnica cuidadosamente regulada que es
aceptada en gran medida hoy en da y utilizada rutinariamente en
muchos laboratorios en el mundo. No obstante, tanto la clonacin
reproductiva como teraputica plantean cuestiones ticas
importantes, especialmente en cuanto a su relacin con el posible uso
de estas tcnicas en los seres humanos.
La clonacin reproductiva presentara la posibilidad de crear a un ser
humano que sea genticamente idntico a otra persona que haya
existido anteriormente o que todava exista. Esto pudiera estar en
conflicto con antiguos valores sociales y religiosos acerca de la
dignidad humana, infringiendo posiblemente en los principios de
libertad, identidad y autonoma individual. Sin embargo, algunas
personas argumentan que la clonacin reproductiva podra ayudar a
parejas estriles a lograr su sueo de convertirse en padres. Otras
personas consideran la clonacin humana como una manera de evitar
el pasar un gen nocivo hereditario en una familia sin tener que hacer
pruebas de deteccin o seleccin embrionaria.
La clonacin teraputica, si bien ofrece la posibilidad de tratar a seres
humanos que padecen de una enfermedad o lesin, requerira la
destruccin de embriones humanos en el tubo de ensayo. Por
consiguiente, sus oponentes argumentan que el uso de esta tcnica
para obtener clulas madre embrionarias est mal,
independientemente de si estas clulas se usan o no para el beneficio
de personas enfermas o lesionadas.
- Nuevos avances

1996: El nacimiento de la oveja Dolly demuestra la viabilidad


de clonar un mamfero mediante la transferencia del ncleo
de una clula adulta.
1998: Se logran aislar y cultivar por primera vez clulas
madre de embriones y fetos humanos.
2001: Se realiza el primer intento por recuperar una especie
extinguida mediante la clonacin. Tambin se obtienen 41
nuclvulos humano (vulos cuyo ncleo ha sido sustituido
por el de una clula adulta) de los que solo uno alcanza el
estadio de desarrollo de seis clulas.
2002: Se consigue crear un rin funcional de vaca mediante
el desarrollo de clulas madre clonado.
2003: Un paciente de 43 aos recupera la visin mediante
un trasplante de las clulas madre humanas inyectadas en el
corazn infartado de ratones se transforman en msculo
cardaco y en vasos sanguneos.
2004: La revista Science publica la investigacin en la que se
consiguiera los primeros nuclvulos humanos que se
desarrollaaron hasta el estadio de blastocito, y de los que se
lograron obtener celular madre que se transformaron en
diferentes tejidos.

BIBLIOGRAFIA
http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-
98871998000700013

http://www.tirsoferrol.org/ciencias/pdf/a22_ingenieria%20genetica.pdf