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DEGRADACIN ENZIMTICA EN AGUA

1. Introduccin

Es el uso de diversos organismos (fundamentalmente bacterias, hongos y diversos


vegetales) para la reduccin de la contaminacin del aire o de los sistemas acuticos o
terrestres.

Se utiliza la biorremediacin para el tratamiento de aguas residuales, para descontaminar el


aire o el agua, tambin para limpieza de suelos que hayan recibido contaminantes.

La Biorremediacin actualmente utiliza distintos tipos de microorganismos, plantas y


enzimas para lograr la biorremediacin del medio contaminado, y aunque la
biorremediacin enzimtica es la menos utilizada en estos tiempos, tiene excelentes
ventajas que la hacen de gran ayuda.

Degradacin enzimtica

Este tipo de degradacin consiste en el empleo de enzimas en el sitio contaminado con el fin de degradar las sustancias
nocivas. Las enzimas son verdaderos aceleradores de las reacciones de degradacin, de naturaleza proteica, y se
obtienen en cantidades industriales a partir de microorganismos (bacterias y hongos) que las producen naturalmente,
o por microorganismos modificados genticamente que son comercializados por las empresas biotecnolgicas.

Enzimas

Las enzimas: son sustancias de naturaleza proteica que se destacan por catalizar reacciones bioqumicas.

Las enzimas no son consumidas por las reacciones que ellas catalizan, por lo que a medida que ellas consumen los
sustratos contaminantes pueden seguir actuando.

CARACTERSTICAS DE LAS ENZIMAS

El xito de la tecnologa enzimtica se debe a las propias caractersticas que contienen las enzimas:

Son catalizadores biolgicos, es decir, protenas producidas por los seres vivos que aceleran las reacciones
qumicas y no se consumen durante el proceso.

Son altamente eficaces y especfica, ya que poseen gran poder cataltico y un elevado rendimiento, no forman
subproductos indeseados y tienen la capacidad de reconocer a su sustrato, incluso entre sus ismeros.

Funcionan en condiciones suaves, a presin atmosfrica, temperatura ambiente y pH neutro.

Actan tanto dentro como fuera de las clulas que las producen,, por lo que pueden utilizarse in vitro para
fines analticos, sanitarios o industriales.

Estn sometidas a regulacin, por lo que los procesos enzimticos se pueden controlar fcilmente.

MTODOS DE EXTRACCIN DE ENZIMAS

Las enzimas son producidas por un gran nmero de microorganismos y plantas.


Antes de querer extraer una enzima de alguna fuente se debe tomar en cuenta para que se va a utilizar esta enzima y
de qu fuente es las que ms sirve para el fin deseado.

Cada enzima necesitara de un determinado mtodo de obtencin para esto se tiene que realizar varias pruebas a base
de ensayo y error para determinar que mtodo es el que mejor se adapte a lo que estamos buscando es decir que
mtodo es el que permite que la enzima conserve las propiedades usadas.

Algunas de las operaciones ms comunes que se realizan para obtener una enzima son las siguientes:

Centrifugacin: esta operacin consiste en la separacin de dos componentes en la que alguno es un slido
que se sedimenta muy lentamente debido a que el componente lquido es demasiado denso y esto lo dificulta.
Dilisis: se usa para separar las partculas de un coloide del medio de dispersin, el coloide se hace pasar por
varias membranas semipermeables por donde pueden pasar los iones pero no los coloides
Espectroscopia de absorcin electrnica: este mtodo mide la longitud de onda de absorcin para determinar
la concentracin de enzimas

Inmovilizacin enzimtica

Como la obtencin de las enzimas puede ser cara y a veces difcil, para evitar prdidas innecesarias del material
enzimtico se recurre a la inmovilizacin de las enzimas en soportes slidos que permitan su reutilizacin en los
procesos industriales.

La inmovilizacin consiste en fijar o atrapar la enzima en un material insoluble (gel, membrana, perlas de vidrio, etc.)
de forma que no pierda la actividad y permita su recuperacin.

La inmovilizacin puede realizarse por mtodos fsicos, como la adsorcin de la enzima sobre un soporte insoluble, la
retencin o atrapado de la enzima en un gel poroso (slice, etc.) o el confinamiento de la enzima en una membrana
que permita el paso del sustrato y evite la prdida de la enzima, o qumicos, mediante la formacin de enlaces
covalentes.

Clasificacin de las enzimas

Clases de enzima Tipo de reaccin catalizada Tipos de enzimas representativas

Oxidorreductoras Transferencia de electrones, iones hidruro o Deshidrogenadas, Oxidasas, Reductasas,


tomos de hidrogeno Peroxidadas
Transferasas Transferencia de grupo orgnicos funcionales Metitranferasas, Aciltranaferasas,
Aminotranferasas, Fosfotranferasas
Hidrolasas Hidrlisis (reacciones de rotura de enlaces con Esterasas, Peptidasas, Fosfatasas,
incorporacin de agua) Glucosidasas

Liasas Adicin de grupos o dobles enlaces o formacin Descarboxidasas, Aldolasas,


de dobles enlaces por eliminacin de grupos. Desaminasas, Sintasas
Rotura de enlaces sin incorporacin de agua.

Isomerasas Transferencia de grupos dentro de las molculas Isomerasas, Racemasas, Epimerasas,


para formar ismeros (reorganizaciones Mutasas
moleculares)
Ligasas Formacin de enlaces en reaccin de Ligasas, Sintetasas; Carboxilasas
condensacin acopiadas a la rotura del ATP u otra
fuente energtica
Mtodo Enzimtico

El mtodo enzimtico correspondiente a uno de los tratamientos biolgicos, se usa para mejorar el efluente (descarga/
vertido de agua) por suministro de enzimas ya sea por uso directo (donde se vierte una fuente biolgica ya sea clula
o tejido las cuales producen alguna encima).

Enzimas degradadoras de contaminantes orgnicos

Cada tipo de enzima slo puede ser capaz de degradar contaminantes especficos, catalizar reacciones qumicas y slo
con sustancias seleccionadas. Por lo tanto, ciertas enzimas pueden tratar solo ciertos tipos de contaminantes
orgnicos. Sustratos tales como fenoles, clorofenoles, fenoles metilados, bifenoles, anilinas, benzidines y otros
heterocclicos compuestos aromticos que se encuentran bajo condiciones diluidas y son menos sensibles a
perturbaciones operacionales tambin pueden ser tratados por enzimas.

Algunas enzimas catalizadoras son las siguientes:

Horseradish peroxidase (HRP)


Chloroperoxidase (CPO)
Manganese peroxidase (MnP)
Lignin peroxidase (Lip)
Tyrosinase
Laccase

En el tratamiento de aguas textiles residuales contaminadas con compuestos orgnicos como fenoles, fenoles
clorados, compuestos aromticos y ciertos colorantes se utilizan principalmente las enzimas peroxidasas y las
lacasas.

ENZIMAS MEJORA EN LA CALIDAD DEL AGUA Y EL SUELO EN ACUICULTURA

En la acuicultura los impactos ambientales como el deterioro de la calidad del agua y los fondos de los estanques en
malas condiciones se estn convirtiendo en problemas desafiantes y omnipresentes. Este artculo destaca las medidas
que se deben tomar para mejorar la calidad del agua y el suelo de los estanques acucolas y por ende el entorno
inmediato de los peces y camarones. Mejores condiciones de cra conllevara a una mejora del rendimiento general
de sus peces y camarones

Los sistemas de cultivos intensivos en estanques traen como resultado altas concentraciones de cargas orgnicas que
provocan el deterioro de la calidad del agua y de los fondos de los estanques donde se acumulan compuestos txicos
como el amoniaco, nitritos y sulfuros de hidrgeno. Esto cambia la composicin bacteriana en el agua y el suelo del
estanque aumentando la presencia de bacterias patgenas que contribuyen en gran medida a la aparicin de
enfermedades en los peces y camarones.
APLICACIN DIRECTA DE ENZIMAS

Una forma de mejorar la calidad del agua y el suelo en la acuicultura es a travs de la aplicacin directa de enzimas y
microorganismos beneficiosos en los estanques. Este tipo de aplicacin biotecnolgica es conocida como
biorremediacin y no es ms que un enfoque ecolgico que implica la manipulacin de los microorganismos en los
estanques con el objetivo de reducir las bacterias patgenas, aumentar la mineralizacin de la materia orgnica y
eliminar los compuestos de desecho a travs de enzimas especficas.

En el proceso de biorremediacin las enzimas juegan el papel de catalizadores que aceleran las reacciones bioqumicas
en el agua y suelo del estanque. Cuando se les aade al agua del estanque o se propaga en el fondo, las enzimas son
capaces de degradar los principales constituyentes orgnicos que se encuentra normalmente en los estanques de
peces y camarones.

Cada enzima tiene su modo de accin y es muy especfica en la reaccin qumica que cataliza. Por ejemplo la proteasa
hidroliza las protenas insolubles y la amilasa a los polisacridos como el almidn; la celulasa cataliza la descomposicin
de la celulosa (la pared celular ms importante en las plantas); la -Glucosidasa est implicada en la catlisis de la
hidrlisis y la biodegradacin de varios SS-glucsidos presentes en los residuos vegetales; por ltimo la lipasa trabaja
sobre los lpidos o grasas (Tabla 1)

Tabla 1. Una amplia gama de enzimas utilizados como agentes de biorremediacin en acuicultura

Las enzimas tambin se producen naturalmente y son excretadas por algunos microbios. Estas enzimas extracelulares
como la celulasa, la proteasa y la amilasa se producen durante la fermentacin aerbica de la materia orgnica y son
producidas por microorganismos como por ejemplo las especies de Bacillus . Los bacilos se encuentran normalmente
en los sedimentos de los estanques aunque tambin se le puede aadir al agua del estanque con fines de
biorremediacin. Algunos Bacillussp tambin son capaces de degradar compuestos nitrogenados y su gran variedad
de enzimas excretadas (extracelulares) ayudan a acelerar la degradacin de materia orgnica y compuestos txicos
como el amonaco.

Algunas enzimas especficas pueden estar activas en una amplia gama de condiciones ambientales, mientras que otros
microorganismos poseen una estrecha gama de condiciones ambientales para proliferar (pH, oxgeno, disponibilidad,
etc). Ciertas enzimas son capaces de actuar en varios entornos y permanecen activas inculso cuando las condiciones
ambientales cambian drsticamente, fundamentalmente si estn inmovilizadas en un soporte

RESULTADOS PROMETEDORES

Para la mejora de las condiciones acuticas ambientales bajo condiciones de cultivo intensivas, la aplicacin
combinada de enzimas y bacterias beneficiosas es una herramienta de manejo muy efectiva y prometedora. Las
enzimas juegan un papel importante como agentes de control biolgico en el cultivo en estanques, fundamentalmente
en la calidad del agua, el suelo y por supuesto en el rendimiento de los peces y camarones de cultivo.

Los estudios han confirmado que en los estanques donde se utilizan cepas de bacterias y enzimas existen mejores
condiciones de suelo (amarillo) y se experimenta un aumente del rendimiento de los camarones. Por otro lado, en los
estanques donde no se le aplica el tratamiento se observa una acumulacin de materia orgnica muerta (suelo negro)

La adicin de enzimas especficas como las proteasas, amilasas, celulasas, xilanasas y/o bacterias productoras de
enzimas como el Bacillus sp., promueve la pre-digestin de ciertos nutrientes complejos y facilita liberacin de
nutrientes altamente digeribles. Todo ello ayuda a reducir el lodo y la acumulacin de materia orgnica, as como las
condiciones anaerbicas en el fondo de los estanques, mejorando las condiciones de cra de los camarones y peces
Autor: Elisabeth Mayer MSc, BIOMIN, Austria

Ventajas

Es de fcil aplicacin ya que se comercializa en polvo y se agrega directamente a las aguas a tratar.

Acta en un amplio rango de temperatura y pH, siendo las condiciones ambientales las ptimas para su
utilizacin.

Se puede aplicar en plantas de tratamiento de lodos activados, reactores biolgicos, cmaras de decantacin
y en fosas spticas catalizando las reacciones de degradacin.

Elimina tambin los malos olores producidos por la descomposicin de la materia orgnica.

Entrega una solucin sencilla para depurar la materia orgnica presente en las aguas, separar slidos suspendidos,
tratar sobrecargas y disminuir tiempos de entrada en rgimen de los sistemas de tratamiento o reanudar un sistema
que haya sido detenido.

Conclusiones

Las enzimas que tiene mutiles usos en la actualidad han mostrado ser una buen opcin en el tratamiento de agua por
su capacidad cataltica y degradable de los contaminantes orgnicos y a diferencia del carbn activado son amigables
con el medio ambiente.

La obtencin de estas enzimas no es fcil ya que son producidas solo por microorganismos especficos, por lo cual
buscan nuevas fuentes de estas enzimas

Por otra parte este mtodo es costoso debido a que se encuentra en fase de desarrollo sin embargo actualmente se
tiene un gran inters en este tipo de tratamiento de aguas por mtodos enzimticos.

DEGRADACIN ENZIMTICA DE SUELOS

Introduccin

La calidad de los suelos se mide a travs de distintos indicadores que evalan su funcionamiento.

Para medir la calidad, se considera qu tan adecuadas son sus propiedades fsicas y qumicas para permitir el
intercambio de gases, la retencin de humedad y de nutrientes, la penetracin de races, entre otros.

Por su parte, para medir la salud del suelo se toma en cuenta la eficiencia de procesos como los ciclos de nutrientes y
los flujos de energa.

En este contexto, uno de los indicadores que se ha utilizado es la magnitud de la actividad de diferentes enzimas
involucradas en los procesos antes mencionados

Este tipo de degradacin consiste en el empleo de enzimas en el sitio contaminado con el fin de degradar las sustancias
nocivas. Estas enzimas se obtienen en cantidades industriales por bacterias que las producen naturalmente, o por
bacterias modificadas genticamente que son comercializadas por las empresas biotecnolgicas.

Existen grupos de enzimas que hidrolizan (rompen) polmeros complejos para luego terminar de degradarlos con el
uso de microorganismos. Un ejemplo lo constituyen las enzimas lipasas (que degradan lpidos) que se usan junto a
cultivos bacterianos para eliminar grasas y aceites.

Otras enzimas como las celulosas, proteinasas y amilasas, son utilizadas en tratamientos en donde los
microorganismos no pueden desarrollarse debido a la alta toxicidad de los contaminantes.
DEGRADACIN ENZIMTICA

Consiste en el empleo de enzimas en el sitio contaminado con el fin de degradar las sustancias nocivas. Estas enzimas
se obtienen a partir bacterias o microorganismos que las producen naturalmente, o por bacterias modificadas
genticamente. Las enzimas ms utilizadas son celulasas, proteasas, amilasas y peroxidasas.

Son capaces de hidrolizar complejos y macromolculas y los productos de degradacin que se obtienen, constituyen
substancias nutritivas para los microorganismos.

ENZIMAS

Son sustancias de naturaleza proteica que se destacan por catalizar reacciones bioqumicas. Estas sustancias actan
sobre distintos sustratos (protenas, grasas, hidratos de carbono, etc.) convirtindolos en diferentes molculas
inocuas.

Una de las ventajas de las enzimas es que las reacciones mediadas por stas poseen tasas de velocidad
significativamente mayores que las reacciones en las cuales no se encuentran estos catalizadores.

Las enzimas no son consumidas por las reacciones que ellas catalizan, por lo que a medida que ellas consumen los
sustratos contaminantes pueden seguir actuando.

Las enzimas son molculas que se encargan de acelerar reacciones qumicas o hacer posibles aquellas reacciones que
de otra manera no se produciran. Dicho de otro modo, son catalizadores biolgicos que, al reducir la energa de
activacin necesaria para las reacciones, transforman las sustancias involucradas en el metabolismo celular
(incluyendo el anabolismo o reacciones de construccin, y el catabolismo o reacciones de destruccin). La velocidad
de la reaccin catalizada por una enzima depende:

pH
fuerza inica
Temperatura
presencia o ausencia de inhibidores

UREASA

Es una exoenzima que cataliza la reaccin de hidrlisis de la urea, el principal producto celular nitrogenado de
la degradacin de las protenas y los cidos nucleicos, el cual es ms fcil de eliminar que otras formas de
nitrgeno (como el amoniaco) porque es soluble en agua y menos txico

Los estudios realizados indicaron que existe sensibilidad a la contaminacin por hidrocarburos y efluentes de
taninos al determinar un ndice de actividad del suelo con la inclusin de varias enzimas, como ureasas,
fosfomonoestereasas y -glucosidasa, as como la biomasa microbiana y el contenido de nitrgeno total.

Esta tcnica es til para evaluar suelos contaminados con hidrocarburos, como disel y petrleo y tambin
para medir la actividad enzimtica en el ciclo del nitrgeno en suelos agrcolas y naturales.

Ejemplo:

Se puede utilizar material gentico de bacterias resistentes a metales para insertarlo en el genoma de una
planta que, adquirira esta nueva caracterstica.

Un grupo de investigacin utiliz un gen llamado merA, que codifica para la enzima reductasa del ion
mercrico, altamente txico, que cataliza su reduccin hasta la forma voltil y poco txica de mercurio
elemental, gaseoso en condiciones de temperatura no muy elevadas.

Liriodendro tulipifera (lamo amarillo). Especie de clima templado-frio.

El gen se expres adecuadamente en ese material vegetal, de modo que las plntulas regeneradas germinaron
y crecieron vigorosamente en los medios de cultivo, que contenan niveles de iones mercurio que son
normalmente txicos, siendo capaces de captarlo en su forma inica y de reducirlo en el interior de la planta,
tras lo cual era liberado en la forma gaseosa no txica.

En el futuro sera posible realizar plantaciones arbreas transgnicas que, mediante este proceso de
fitovolatilizacin, sean capaces de descontaminar terrenos con altos niveles de contaminantes.

Se estn perfeccionando nuevos mtodos de biotecnologa para el tratamiento del agua, que eliminarn los
compuestos que contengan fsforo, nitrgeno y azufre.

Fitovolatizacin: Las plantas captan y modifican metales pesados o compuestos orgnicos y los liberan a la
atmsfera con la transpiracin.

Biorremediacin de suelos contaminados con combustibles (Mary Lopretti, Fabiana Rey, M. Piaggio)

La biorremediacin de suelos ha sido en los ltimos aos una de las aplicaciones de los procesos de la biotecnologa
industrial que se ha desarrollado en busca de soluciones naturales y eficientes al problema de la contaminacin.

Ventaja

Las enzimas no son consumidas por las reacciones, por lo que degradaran por largo tiempo.

Se determin la actividad de enzimas lacasa y peroxidasa.

La actividad lacasa se determin por espectrometra usando 0.5mM de ABTS como sustrato en 0,1M de buffer acetato
de sodio pH5 y 1 ml de extracto obtenido por extraccin salina.

La determinacin de actividad Mn peroxidasa se realiz con 0.01% de rojo fenol como sustrato en buffer succinato de
sodio 0.1M en presencia de 1 ml de extracto enzimtico, MnSO4 0.1M y H2O2 0.1M.

Las actividad de stas enzimas permiti obtener molculas ms pequeas producto de la degradacin de los derivados
de petrleo presentes en los sustratos. La evaluacin se realiz por espectrometra UV a longitudes de onda entre 250
y 310 nm donde se detectan molculas aromticas sustituidas.

De los resultados obtenidos podemos ver que desde el punto de vista fisicoqumico, las condiciones se mantuvieron
iguales durante todo el ensayo de 4 meses, excepto el pH que baj levemente.

En el caso de los ensayos con nafta tanto en el blanco como en el inducido aparecen actividades Mn peroxidasa y
Lacasa, siendo aproximadamente el doble en los ensayos de induccin.