Practica No.

Crecimiento de microorganismos gramnegativos en diferentes medios de

cultivo

Introduccin

La pared celular de las bacterias Gramnegativas est compuesta por una capa o
por muy pocas capas de peptidoglucano y una membrana externa. El
peptidoglucano est unido a lipoprotenas (lpidos unidos a protenas mediante
enlaces covalentes) de la membrana externa y se encuentra en el periplasma, una
sustancia gelatinosa localizada entre la membrana externa y la membrana
plasmtica. El periplasma contiene una concentracin elevada de enzimas
degradantes y protenas de transporte. La pared celular de las bacterias
Grannegativas no contiene cidos teicoicos y el hecho de que contenga una
escasa cantidad de peptidoglucano aumenta su susceptibilidad a la ruptura
mecnica.

Frecuentemente, en el laboratorio se requiere aislar un tipo de bacteria a partir de

una mezcla de diversos tipos. Para esto, se han diseado medios de cultivo que
favorecen el crecimiento de la bacteria de inters y que inhiben el resto. Esto
puede lograrse mediante el uso de sustancias inhibitorias como los antibiticos, o
cierta concentracin de algunas sales; o simplemente agregando una sustancia
que sea utilizada nicamente por el tipo de bacteria que se desea aislar. Un medio
de cultivo de este tipo se denomina medio selectivo.

Los medios diferenciales permiten distinguir diferencias metablicas de diversas

especies o gneros de bacterias o de ciertos grupos de las mismas. Para este fin,
se incorpora al medio de cultivo alguna sustancia que pueda ser metabolizada
slo por las bacterias que son de inters. Por ejemplo, muchas bacterias
fermentan azucares produciendo cido, mientras que otras no. Si se incorpora un
azcar, como la lactosa, en el medio y adems se agrega un indicador cido-base,
se podr saber si la bacteria la fermenta debido al cambio de color que ocurre al
acidificarse el medio de cultivo.

Medios selectivo-diferenciales: estos medios son muy tiles ya que adems de la

seleccin de un tipo de bacteria, se logra, a la vez, informacin sobre sus
caractersticas metablicas. Un medio selectivo-diferencial tpico es el agar
manitol-sal. Este medio incluye, en su formulacin, un 10% de NaCI, manitol y rojo
de fenol como indicador. La concentracin tan alta de sal seleccionan las bacterias
que toleran, y el carbohidrato, manitol, puede ser metabolizado por algunas
bacterias produciendo cido, el cual baja el pH, por lo que el indicador cambia de
color rojo original al amarillo.
Objetivo

Manejar los medios de cultivo adecuados para bacterias Gramnegativas e

interpretar los cambios bioqumicos presentados en ellos

Resultado

Agar Verde brillante

Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella
spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a partir de muestras clnicas, alimentos, y
otros materiales de importancia sanitaria. No se recomienda para el aislamiento
de Shigella spp. Es de un valor excepcional cuando se investiga un gran nmero
de muestras de heces o alimentos, por su alta capacidad de diferenciacin de
las colonias sospechosas.
Formula
Extracto de Levadura
Mezcla de peptonas
Cloruro de sodio
Lactosa
Sacarosa
Rojo de Fenol
Agar
Verde Brillante
Fuente de carbono La lactosa y la sacarosa.
Fuente de nitrgeno Extracto de levaduras y la mezcla de peptonas.
Indicador Rojo de fenol: vira al amarillo cuando hay produccin de
cido a partir de la fermentacin de azucares.
Amarillo pH= 6.9 y rojo pH =8.5.
Inhibidor Colorante verde brillante inhibe Gram positivas.

Agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato)

Medio selectivo diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de
patgenos entricos Gram negativos, especialmente del genero Shigella.
La degradacin de los carbohidratos presentes en el medio genera la
produccin de cido haciendo virar el indicador de rojo a amarillo. En este medio
se incorpora la xilosa porque es prcticamente fermentada por todas las
enterobacterias con excepcin de los microorganismos pertenecientes al gnero
Shigella.
Formula
Xilosa
L-Lisina
 Lactosa
Sacarosa
Cloruro de sodio
Extracto de Levadura
Rojo Fenol
Agar
Desoxicolato de Sodio
Tiosulfato de sodio
Citrato de Hierro y Amonio
Fuente de carbono La Xilosa, Lactosa y Sacarosa.
Fuente de nitrgeno Extracto de levadura.
Indicador Rojo fenol: vira al amarillo cuando hay produccin de
cido a partir de la fermentacin de azucares.
Amarillo pH= 6.9 y rojo pH =8.5.
El medio tambin tiene la capacidad de detectar la
produccin de H2S, a travs del sistema indicador
tiosufalto de sodio y citrato frrico amonio. Cuando el
microorganismo produce H2S se observan colonias con
el centro negro.
Inhibidor El desoxicolato de sodio es utilizado como un inhibidor
de los microorganismos Gram positivos.

Agar TCBS (agar tiosulfato citrato bilis sacarosa)

Es un medio selectivo de diferenciacin para el aislamiento y cultivo de Vibrio
cholerae y otras especies Vibrio a partir de muestras clnicas y de otras clases.
Formula:
Extracto de levadura
Peptona de proteosa No.3
Citrato de sodio
Tiosulfato de sodio
Bilis de buey
Sacarosa
Cloruro de sodio
Citrato frrico de amonio
Azul de bromotimol
Azul de timol
Agar
pH= 8.6 0.2
Fuente de carbono Sacarosa.
Fuente de nitrgeno Extracto de levadura y peptona de proteosa No.3
Indicador De pH: azul de timol (viraje pH 8.0 amarillo- y pH 9.6
azul-) y azul de bromotimol (viraje pH 6.1-amarillo- y
pH 7.7 azul-).
El tiosulfato de sodio es una fuente de azufre y acta
con el citrato frrico como indicador para detectar la
produccin de cido sulfhdrico
Inhibidor El citrato de sodio, el tiosulfato sdico y la bilis de
buey son agentes selectivos que proporcionan un pH
alcalino para inhibir los organismos Gram positivos y
suprimir los organismos coliformes.

Agar Mac Conkey

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil
desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las
especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable.
Colonias rosas= lactosa (+)
Colonias incoloras= lactosa (-)
Formula
Peptona de Gelatina
Peptona de Caseina
Peptona de Carne
Lactosa
Mezcla de sales biliares
Cloruro de sodio
Agar
Rojo Neutro
Cristal Violeta
Fuente de carbono Lactosa.
Fuente de nitrgeno Peptona de Gelatina, Peptona de Caseina y Peptona de
Carne.
Indicador Rojo neutro, cuyo mbito de viraje esta entre pH 8.0
(amarillo) y pH 6.8 (rojo).
Inhibidor Las sales biliares y cristal violeta inhiben a bacterias
Gram positivas y algunas Gram negativas que no
pertenecen a la familia Enterobacteriaceae.

Conclusin
Cuestionario

Bibliografa

Garca, M. P., Fernndez, . B. M. T., & Paredes, S. F. (1994). Microbiologa clnica

prctica. Cdiz: Servicio de Publicaciones. Universidad de Cdiz.

Rodrguez, C. E. (2005). Bacteriologa general: Principios y prcticas de

laboratorio. San Jos, Costa Rica: Editorial de la Universidad de Costa Rica.

Tortora, G., Funke, B. R., & Case, C. L. (2007). Introduccin a la microbiologa.

Buenos Aires: Mdica Panamericana.