You are on page 1of 8

Fibronektin (FN) adalah komponen utama dari matriks ekstraselular dan darah plasma, dan

merupakan ligan spesifik untuk beberapa reseptor adhesi integrin. Fibronektin memainkan peran
penting tidak hanya dalam adhesi sel dan penyembuhan luka, tetapi juga dalam embriogenesis dan
hematopoiesis. Fibronektin diproduksi berlebihan dalam keadaan penyakit kardiovaskular seperti
aterosklerosis dan infark miokard. Namun kadar Fibronektin menurun pada pasien koagulasi
intravascular diseminata (DIC) dan konsentrasi rendah ini berkorelasi dengan prognosis buruk.

Perakitan Matriks Ekstraseluler Fibronektin

Latar Belakang
Matriks ekstraselular (ECM) dikenal sebagai komponen penting struktural organisme. ECM adalah
jaringan dinamis, cadangan sebagai faktor pertumbuhan dan cairan, dan organizer penting jaringan,
microenvironments seluler, dan stem sel. Ini menunjukkan spesifisitas jaringan dan penyesuaian
akan mengalami perubahan sesuai perubahan usia, perkembangan, dan penyakit. Meski begitu
perakitan protein ECM disekresikan ke dalam jaringan yang kompleks masih belum sepenuhnya
dipahami. Mengapa perakitan ECM perlu dipahami? Berkuranganya perakitan EM akan
menyebabkan berhentinya embriogenesis. Namuan Perakitan tak terkendali akan memstimulan
jaringan parut, tumorigenesis, dan penyakit fibrosis. Namun jika tertunda perakitan dapat
menyebabkan kecacatan lahir, luka kronis, dan malformasi skeletal. Menggunakan mikroskop
elektron scanning (EM), terlihat bahwa ECM memiliki dua bentuk struktural utama dalam jaringan
(Alberts et al. 2008). Matriks interstitial atau stroma terdiri dari fibril benang yang membentuk
jaringan berserat dan berpori sel sekitarnya, sedangkan membran basal (basal lamina) memiliki
struktur seperti lembaran yang berfungsi sebagai platform untuk sel dan batas antara kompartemen
jaringan. Meskipun sangat berbeda secara struktural, matriks interstitial dan membran basement
dirakit dari sejenis protein (kolagen, proteoglikan, glikoprotein perekat sel). Selain itu, langkah-
langkah awal perakitan cukup mirip untuk kedua jenis matriks (Mao & Schwarzbauer 2005a,
Wierzbicka-Patynowski & Schwarzbauer 2003, Yurchenco & Patton 2009):
Pengolahan dan sekresi protein ECM, pengikat pada reseptor permukaan sel, protein ECM
akan bergabung dengan sendirinya dan pertumbuhan fibril. Memahami mekanisme pembentukan
matriks dalam interstitium dapat menjelaskan proses perakitan membran basal dan sebaliknya. FN
adalah glikoprotein ECM di mana-mana yang dirangkai menjadi sebuah matriks fibrillar
di semua jaringan dan seluruh semua tahap kehidupan. perakitan adalah proses yang
diperantarai sel (McDonald 1988) dan sangat penting bagi kehidupan (George et al.
1993). FN fibril berbentuk linear dan bercabang dan menghubungkan sel tetangga, dimana fibril
saling berhubungan mulai dari lebih dari 25 nm ke sekitar 5 indiameter nm (Chen et al. 1978), yang
kira-kira ukuran molekul FN sendiri di ~3 nm(Engel et al. 1981, Erickson & Carrell 1983, Leahy et
al. 1996). Fibril tipis mendominasi fibroblast awal, dan sebagai matriks matang, fibril ini berkumpul
bersama-sama ke dalam bundel urat saraf tebal (Chen et al. 1978, Singer 1979). Bagaimana
mekanisme dan interaksi yang mengubah molekul FN ke fibril, jaringan, dan bundel?
Sudah lebih dari 20 tahun sejak terakhir Tahunan artikel Ulasan di ECM perakitan
(McDonald 1988). Sejak itu, jumlah informasi tentang ECM organisasi dan sel-ECM
interaksi telah tumbuh secara signifikan dengan identifikasi reseptor ECM protein,
komponen ECM baru, transduksi sinyal hilir ECM, dan sifat mekanik dari ECM (lihat,
misalnya, Aszódi et al . 2006, Bershadsky et al. 2003, Hynes 1990, Schwartz et al.
1995). Informasi ini telah menyebabkan wawasan baru ke dalam proses FN matriks

termasuk perakitan dan kolagen / gelatin domain mengikat. reseptor permukaan sel. dan sistein dimer antarmolekul di terminal C. heparin. dan III mengulangi unit (Gambar 1). . 1996. Domian Pengiktan N-terminal (I1- 5). Fragmen 70kDa memanjang dari I1 melalui I9. FN memiliki domain untuk berinteraksi dengan protein lain ECM. Mao & Schwarzbauer 2005a). II. FN dikodekan oleh ~ 8-kb mRNA menghasilkan subunit FN yang berbagai ukuran 230-270 kDa tergantung pada splicing alternatif (Hynes 1990). dan molekul lain FN (Hynes 1990. Jenis III modul tujuh terdampar struktur β-barel yang kurang disulfida (Leahy et al. FN adalah protein modular terdiri dari jenis I. The III1-2 domain (merah dengan garis-garis) memiliki dua tapak Pengikatan FN yang berpartisipasi dalam perubahan konformasi yang mempromosikan proses perakitan. Modul tersebut akan disusun dalam situs mengikat untuk kolagen / gelatin. Setiap subunit FN terdiri dari tiga jenis Pengulangan: tipe I (segi enam). integrin. Hal ini juga digambarkan dalam diagram dari subunit FN (Gambar 1). Potts & Campbell 1994). EIIIA. Dua ikatan disulfida terbentuk dalam setiap tipe I dan modul tipe II untuk menstabilkan struktur dilipat. 1981). Domain yang diperlukan sat akan memulai perakitan (red) termasuk domain sel-binding (situs RGD di III10 + sinergi situs di III9). Selain itu ada domain tambahan. Domain yang mengikat heparin dan syndecans. glycosaminoglycans (GAGs). FN. Gambar 1.Pengaturan Domain Fibronektin Domain dan Aktivitas Pengikatan Banyak protein ECM protein berupa protein modular dan protein multidomain. Ilustrasi dari elektron Microscopy memperlihatkan dua subunit dari FN melengkung (Engel et al. Kombinasi dari domain memungkinkan FNS untuk mengikat secara bersamaan untuk sel dan molekul dalam matriks sekitarnya.perakitan dan bagaimana FN matriks mempengaruhi perakitan protein ECM lainnya . dan molekul ekstraseluler lainnya (Gambar 1). Diagram dari subunit fibronektin (FN). tipe II (persegi) dan tipe III (silinder). Tapak pengikatan FN lainnya berada dalam domain III4-5 dan di III12-14 / hepII.

2003. Konversi ini adalah proses ireversibel yang menstabilkan interaksi FN dalam fibril matriks untuk menghasilkan jaringan fibril yang matang. tampaknya bahwa ini ekson alternatif tidak diperlukan untuk perakitan matriks tetapi dapat mempengaruhi tingkat matriks. rekombinan FN diketahui mengandung EIIIA dan EIIIB agak lebih efisien ketika dimasukkan ke dalam matriks fibroblast (Guan et al. Fungsi region V adalah pada proses sekresi FN (Schwarzbauer et al. aktivitas pengikatan sel yang melokalisasi FN ke permukaan sel. Dari hasil ini. Tan et al. 1990. Seperti divisualisasikan dengan mikroskop fluoresensi. Tapak pengikatan yang terlibat dalam perakitan telah diidentifikasi menggunakan ini tes mikroskopis dan pengujian biokimia dikombinasikan yang mengabungkan blocking reagent (antibodi atau peptida). Bentuk dimer FN 500 kDa akan terbentuk melalui sepasang ikatan disulfida antiparalel di terminal C. Kegiatan tersebut memainkan peran penting dalam perakitan termasuk dimerisasi subunit FN. 1989. . Gambar 1). dan aktivitas FN mengikat yang mengaitkan FN dimer ke fibril.EIIIB. dan wilayah variabel (V) akan ditampilkan dalam warna putih. FN matriks adalah sel penghubung jaringan diantara sel-sel yang berdekatan (Gambar 2). 1989) dan pengikatan integrin (Guan & Hynes 1990. 2002 ). Fukuda et al. dan tes protein pengikat.dan tapak pengiktan FN. 2004). Namun. Standar pengujian untuk menunjukkan perakitan matriks FN matriks konversi dari deoksikolat deterjen (DOC) larutan ke DOC tidak larut awalnya didefinisikan oleh McKeown- Longo & Mosher (1983). Wayner et al. The genetranscript FN tunggal mengkodekan 12 isoform pada hewan pengerat dan sapi dan 20 isoform pada manusia. Muro et al. FN ada dalam beberapa bentuk isoform yang dihasilkan oleh sistem splicing alternatif. Domain Diperlukan Dalam Perakitan Matriks Fibronektin. Splicing alternatif terjadi dengan mengabaikan ekson pada EIIIA / EDA dan EIIIB / EDB dan oleh ekson pada subdivisi wilayah V / IIICS (Schwarzbauer 1991a. Dalam percobaan kultur sel. FN mutan kekurangan situs tertentu atau domain. setiap dimer FN memiliki beberapa integrin.

. hal ini menunjukkan bahwa struktur dimer terlibat dalam penggabungan matriks tanpa adanya pengikatan sel. Protein dimer rekombinan yang mengandung tapak pengikatan FN tetapi tidak memiliki tapak pengikatan sel yang efisien juga dirakit kedalam FN panjang sedangkan monomer tidak (Ichihara-Tanaka et al. sel HT1080 ditumbuhkan pada coverslip kaca selama 20 jam dalam medium dilengkapi dengan 0. Kegiatan ini merupakan sebagian masihmisterius serta diperkuat dengan proteolisis (Langenbach & Sottile 1999). Sottile & Wiley 1994). FN memiliki protein endegon aktivitas isomerase disulfida yang terletak dekat ikatan disulfida terminal C(Langenbach & Sottile 1999). 1990. RGD-integrin khusus termasuk α5β1 dapat mengikat FN yang tidak memiliki situs sinergi . Sel diwarnai dengan antibodi anti-FN monoklonal (IC3) diikuti oleh fluorescein-ditandai antimouse imunoglobulin G kambing Gambar menunjukkan FN fibril (hijau) sekitar sel (biru). Gambar 2. McDonald et al. Menariknya. jadi mungkin memiliki peran ekstraseluler dalam menstabilkan Interaksi FN melalui pertukaran disulfida selama matriks renovasi. Hynes 1990). Sel yang memediasi perakitan matriks FN melalui pengikatan integrin kepada domain pengikatan sel RGD (Arg-Gly-Asp. 1992. α5β1 integrin akan berikatan dengan urutan RGD di III10 (Ruoslahti & Obrink 1996) dan tapak sinergi di III9 (Aota et al 1994. Reseptor utama perakitan matrik FN. Gambar 1).1 pM deksametason dan 25 mg/ ml FN plasma tikus seperti yang dijelaskan dalam Brenner et al. di mana ia mungkin penting dalam membentuk struktur dimer antiparalel di retikulum endoplasma. (2000). Struktur dimer FN dimediasi oleh sepasang ikatan disulfida pada terminal C masing-masing subunit (Gambar 1. matriks fibrillar Fibronektin (FN) dikelingi sel-sel. Ikatan kovalen ini memainkan peran penting dalam multimerization dari dimer ke fibril. 1987). blokade antibodi interaksi integrin-domain pengikatan sel atau antibodi anti-FN akan mencegah pembentukan fibril (Fogerty et al.

(kotak merah) menunjukkan interaksi antara subunit tunggal dimer FN. 1997). (d) Akhirnya. pembentukan matriks fibrillar larut stabil. Integrin menambatkan FN dimer untuk memulai interaksi FN-FN yang dimediasi oleh domain perakitan N-terminal. biru) direkrut untuk domain integrin sitoplasma dan terhubung ke sitoskeleton aktin (hijau). Namun. Perubahan konformasi mengekspos tapak pengiktan FN untuk mempromosikan interaksi lebih lanjut FN. (a) A FN dimer kompak akn mengikat integrin (abu-abu). visualisasi mikroskopik. Model Perakitan Matriks fibronektin Menggunakan tes kunci dari DOC tidak larut. diikuti oleh (ii) pengabungan lateral antara fibril yang mungkin melibatkan tapak pengiktan FN mdi III1-2. Konversi integrin-terinduksi FN padat untuk pemanjangan fibril ditunjukan dalam empat langkah. (abu-a u) X mewakili interaksi antara fibril . 1995. (c) clustering integrin dan tapak pengikatan FN mempromosikan interaksi FN-FN dan perubahan lkonfirmasi FNi. McKeown-Longo & Mosher (1983.(Danen et al. (b) protein intraseluler (pink. N menunjukkan terminal N subunit FN. dan tes pengikatan protein. yang menginduksi perubahan konformasi FN. langkah-langkah dasar dari perakitan matriks FN telah diketahui (Gambar 3). Fibril terbentuk melalui asosiasi (i) pengabungan ujung ke ujung dari dimer FN yang dimediasi oleh N-terminal domain perakitan . koneksi sitoskeletal meningkatkan kontraktilitas sel (panah). Langkah-langkah utama dalamperakitan matriks fibronectin (FN). subunit FN berupa dimer tunggal ditunjukkan dalam dua warna oranye. III4-5. Sechler et al. Gambar 3. 1996). asosiasi antara fibril. dan matriks tidak larut . dan III12-14. kuning. akan men-blokade perakitan matriks FN. 1985) menunjukkan bahwa fragmen terminal-N 70 kDa mengikat sel-sel dan ketika ditambahkan secara berlebihan. baik RGD dan tapak sinergi yang diperlukan untuk memulai pembentukan fibril (Sechler et al.

Interkasi FN dengan integrin αv telah ditunjukkan untuk mengkompensasi ketiadaan RGD atau α5 integrin (Takahashi et al. Dengan demikian. sebuah sifat yang sangat penting dalam cairan tubuh seperti darah. Diameter fibril FN tipis mendekati ukuran tipe/modul IIIl (Dzamba & Peters 1991. Sottile et al. atau MAb L8 untuk FN melekat pada permukaan karet ditingkatkan olehperegangan Oleh karena itu. Mereka juga menunjukkan bahwa pengikatanFN. kontraktilitas dan peregangan mempengaruhi ketersediaan tapak pengikatan FN III 1 melalui efek pada FN konformasi. yang megindikasikan bahwa aksesibilitas epitop ini tergantung pada efek kontraktil sel pada matriks (Zhong et al. Penemuan kunci lain dalam pengikatan FN adalah identifikasi fragmen modul III 1 (III1-C) yang dapat menginduksi agregasi FN kedalam kompleks yang menyerupai runtuh fibril. juga dikenal sebagai anastellin. dan pengukuran lainnya (Hynes 1990). Yang & Hynes 1996). 1999). Yang & Hynes 1996). 1999) dan tingkat matriks FN dikurangi dengan blokade Rho dan kehilangan kontraktilitas (Zhong et al 1998). Cluster ini memberikan konsentrasi tinggi FN di permukaan sel. Mengikat asam lysophosphatidic (LPA) atau sphingosine-1- fosfat (S-1-P) untuk reseptor akan mengaktifkan Rho (Anliker & Chun 2004). FN dalam larutan tidak membentuk fibril bahkan pada konsentrasi yang sangat tinggi. Sebuah wawasan penting dalam perubahan konformasi FN berasal dari studi tentang efek stimulasi Rho GTPase di perakitan FN. 1996. Interaksi Fibronektin-fibronektin FN mengikat menginduksi clustering integrin. 2007. 2007. EM. 1981. Penggabungan protein rekombinan dalam fibril harus terjadi terutama melalui interaksi FN- FN. 2000). Fragmen III 1-C ini. Menariknya hal ini juga disebut superfibronectin yang mampu meningkatkan aktivitas adehesi sel . yang membawa reseptor bersama-sama untuk mengikat FNS (Gambar 3). yang menunjukkan bahwa FN kompak dalam larutan diperpanjang selama polimerisasi urat saraf. Hasil ini menunjukkan bahwa. 1991). (Takahashi et al. tidak semua FNS dalam matriks harus langsung berinteraksi dengan integrin. beberapa FN matriks dapat dirakit dengan tidak adanya interaksi integrin RGD-α5β1. 1994). Rho-GTP kemudian merangsang Rho kinase untuk meningkatkan kontraktilitas sel dengan menginduksi interaksi aktin- myosin dan aktin (Hall 2005). Engel et al.Sekresi Fibronektin Dimer dan Pengikatan integrin FN dalam larutan akan membentuk konformasi padat. yang menunjukkan bahwa mengganggu interaksi ini dalam proses memperpanjang dimer FN kompak. yang mungkin penting untuk mempromosikan interaksi FN-FN. 1987). FN mengikat α5β1 melalui RGD dan tapak sinergi. Daerah ini tumpang tindih dengan tapak pengikatan FN. yang mengikat ke wilayah I9-III 1 dari FN (Chernousov et al. fragmen 70 kDa. meliputi dua-pertiga C-terminal modul III 1 dan memiliki aktivitas pengikatan FN (Morla & Ruoslahti 1992). Perlakuan FN dengan fragmen ini akan membentuk agregat yang dapat ditarik ke dalam struktur mirip fibrillar (Morla et al. 2008). FN Larut memperlihatkan pengikatan yang selektif mterhadap reseptor permukaan sel dan berinteraksi dengan α5β1 tapi tidak dengan integrin RGD (Huveneers et al. Zhang et al 1994. Inhibisi Rho dalam sel dengan matriks menyebabkan berkurang pengikatan MAb L8. 1996). Wawasan mekanistik peran kontraktilitas datang dari studi dengan antibodi monoklonal (MAb) L8 (Chernousov et al. dalam jaringan. yag keduanya dibutuhkan untuk pembentukan fibril FN (Sechler et al. Aktivasi Rho juga merangsang penggabungan FN ke dalam matriks (Yoneda et al 2007. Interaksi intramolekul antara III2-3 dan III12-14 mempertahankan bentuk kompak FN (Johnson et al. seperti yang terdeteksi oleh sedimentasi. di mana pembentukan FN fibril dapat memberi efek yang mengancam jiwa. 1998). Leahy et al.

2007). yang membentuk amiloid-seperti fibril (Litvinovich et al. Selama pertumbuhan fibril. Pematangan Fibril dan Konversi menjadi tidak larut Eeksperimen menggunakan anti-FN MAb untuk analisis immuno-EM diidentifikasi daerah 84nm antara epitop. kekakuan. dan bentuk. 1998). Polimerisasi FN terus menerus diperlukan matriks untuk menstabilkan permukaan sel (Sottile & Hocking 2002. Konversi ini segera setelah dimulainya perakitan tersebut (McKeown-Longo & Mosher 1983). Nampaknya pertukaran β-untai antara molekul FN berkontribusi untuk merubah DOC tidak larut. Interaksi FN muncul awalnya tergantung on tapak pengikatan N-terminal FN untuk menghasilkan fibril tipis dengan pengabungan ujung. Sehingga memberikan kesimpulan bahwa DOC tidak larut timbul dari ikatan noncovalent. yang memprediksi tumpang tindih 20-nm dari terminal-N dan menunjukkan bahwa awalnya fibril terbentuk melalui pengabungan ujung ke ujung dari setiap dimer (Dzamba & Peters 1991. Hanya baru-baru interaksi anastellin dengan FN telah diselidiki secara menyeluruh. juga mungkin terlibat dalam pengantian (Turnover). FN fibril juga dipisahkan ketika terdapat tenaga terhadap sel-sel yang melekat (Engler et al. 2009).dan kemungkinan menyebabkan agregat membawa beberapa domain pengikatan sel menjadi lebih dekat. Anastellin menginduksi agregasi FN atau fragmen FN yang mengandung III1-2 atau III1-3 dan meningkatkan sensitivitas proteolitik FN. Jika polimerisasi FN dihambat atau ekspresi FN dihilang. tiga anastellins mengikat dalam III1-3. dan satu mengikat di III11 (Ohashi & Erickson 2005). Peregangan oleh kontraktilitas sel dapat menyebabkan perpanjangan progresif dengan terlebih dahulu berlangsung pada konfirmasi bentuk kompak dan kemudian meluruskan odul zigzag. matriks FN yang ada akan berkurang. Ohashi et al. Beberapa tapak pengikatan FN mengikat diperlukan sehingga interaksi simultan melibatkan Turnover Matrix Fibronektin Perakitan matriks FN adalah proses yang dinamis dan berkesinambungan. Caveolin-1 . atau tipe Modul III dalam susunan zigzag di fibril tersebut (Erickson 2002). Percobaan menunjukkan bahwa matriks FN akan hilang ketika sel-sel yang telah dicabut dari FN (Sottile & Hocking 2002). Tapi bagaimana FN fibril menjadi tidak larut? Selama bertahun-tahun.berkurang. Interaksi ini dapat dikaitkan dengan interaksi yang membentuk tipe III modul kedalam amiloid-seperti fibril (Litvinovich et al. Ia mengikat dengan stoikiometri dari 4: 1. III9. Konformasi β telah ditunjukkan pada modul tipe III modul individu. Namun tour de force dari analisis fragmentasi gagal mengidentifikasi fragmen disulfida-terikat tersebut. Ketidaklarutan merupakan sifat penting dari ECM dan penyedian jaringan dengan stabilitas. ini kondisi steady state mapan dimana antara polimerisasi FN dan pengantian (Turnover). 2009). interaksi protein-protein (Chen & Mosher 1996).ujung dimer FN(Dzamba & Peters 1991). Kombinasi beberapa tapak pengikatan FN dan interaksi noncovalent FN-FN di fibril multimeric dapat menyebabkan lastisitas fibril. FNS mungkin sebagiannya berkonformasi kompak. yang kemudian mencegah prose pelipatan kembali dan akan terpapar ke daerah hidrofobik dalam modul β-helai untuk berinteraksi untuk membentuk FN agregat. fibril tipis Awal kemudian tumbuh panjang dan ketebalan sebagai matriks matang. Pembukaan pelipatan atau “bernapas“ modul tipe III akan diikuti dengan pengikatan anastellin. 1998). Wierzbicka-Patynowski et al. Gambar 3). sehingga menunjukkan akan mempengaruhi konformasi FN (Ohashi & Erickson 2005. pertukaran disulfida diasumsikan sebagai penyebab. Integrin α5β1 yang melakukan perakitan matriks. FN matriks dikonversi ke bentuk DOC larut. FN memiliki aktivitas protein isomerase disulfida dan FN memiliki banyak ikatan disulfida antar rantai.

Sottile & Hocking 2002. semua langkah yang mekanis mirip dengan tahap awal FN matriks perakitan. (Yurchenco & Patton 2009). Beberapa protein mengasosiasikan langsung dengan fibril FN. dan tenascin-C (Chung & Erickson 1997. koneksi ke sitoskeleton aktin. laten TGF-β mengikat protein (LTBP). 2005. Dengan demikian. 2009. Kadler et al. atau meningkat proteolisis) akan meningkatkan integrin-FN endositosis. . Dallas et al.mengatur endositosis α5β1. fibulin. Sottile & Chandler 2005). 2008. Twal et al. sumber berkurang dari FN. pemahaman kita tentang pergantian menunjukkan bahwa peristiwa yang polimerisasi lambat FN ke fibril (seperti integrin dikurangi atau aktivitas integrin. Sabatier et al. Inisiasi perakitan membran basement tidak melibatkan FN melainkan bergantung pada interaksi laminin-integrin. fibrilin. Protein ECM bergantung pada FN yang digabungkan ke dalam matriks dapat berupa kolagen. 2001). dan integrin β1 terlibat dalam endositosis dari FN larut (Shi & Sottile 2008. dan pembentukan multimers laminin. sedangkan yang lain muncul untuk menggunakan FN matriks sebagai perancah saat deposisi.