I) Examen cytobactriologie des urines

Infection urinaire :
L'ECBU est surement un des examens les plus demands au cours
des consultations. L'examen cytobactriologique des urines,
appel galement cytologie urinaire ou ECBU, consiste recueillir
et analyser les urines de la premire miction du matin. Il repose
sur l'analyse cytologique et bactriologique de l'chantillon
d'urine recueillie. Il sert notamment dterminer la numration
des hmaties et des leucocytes, la prsence de cristaux et
de germes.

Chez la femme, l'infection urinaire se manifeste notamment par

des symptmes tels que des douleurs la miction, des brlures,
la prsence de sang dans les urines, une envie frquente d'uriner,
des frissons ou encore de la fivre. Les mmes symptmes se
retrouvent chez l'homme, ils sont parfois associs une douleur
dans les testicules, ainsi qu' un coulement de liquide par
l'urtre.

L'infection urinaire peut toucher plusieurs organes du systme

urinaire (vessie, rein, urtre, prostate). Pour des raisons
anatomiques, les femmes sont plus souvent touches par ces
infections qui prolifrent au niveau de la vessie .

Microbiologie des infections urinaires

Les bactries dorigine fcale, les entrobactries (La grande
majorit des bactries mises en cause sont les colibacilles ou
Escherichia coli, les klebsiella pneumonie ou les proteus mirabilis)
, sont les plus en cause. LE. coli est lagent pathogne principal
dans 80% des cas. Le Proteus et lEnterobacter, sont les
deuximes bactries rencontres.

Objectif :

LECBU permet :

Disoler, de dnombrer et didentifer les bactries

responsables de linfection
urinaire et de raliser un antibiogramme de la bactrie
responsable .

De dnombrer les leucocytes .

De rechercher la prsence de cylindres et de cristaux urinaires.

1) Matriels et mthode
Les matriels :
Bec bunsen .

Tubes essai .

Boites de ptri .

Pipette pasteur ou anse de platine .

Bandelettes urinaires pour mesurer le PH des urines .

Microscope optique .

Lame et lamelle .

Incubateur .

eau distille .

Pince .

les chantillons d'urine .

Des milieux de culture

Glose nutritive :

permettre une numration des bactries les plus frquemment

rencontres, les
entrobactries, les Pseudomonas , les Staphylocoques et
les entrocoques .
Glose Hektoen :

LagloseHektoenestunmilieud'isolementdesSalmonellesetdesShigelles,

bienquedenombreusesbactriesGramngatifpuissentsedveloppersurce

milieu.L'identificationd'entrobactriespathognesreposesurlanonutilisation

desglucidesprsentsdanslemilieu.

2) M t h o d e
LECBU seffectue en plusieurs tapes et en plusieurs jours .

Prlvement
Il peut tre ralis au laboratoire ou a domicile" Dans ce dernier
cas, le

prlvement doit tre apport sans dlai au laboratoire.

Pour viter une contamination trop importante au cours du recueil

de lurine, le

prlvement doit tre effectu dans des conditions prcises :

Se laver les mains.

Attendre minimum 3h aprs la miction prcdente ,ou prfrer

la 1 re urine du

matin .

Rejeter le premier jet durine .

Recueillir le milieu de 2et dans un facon strile a demander au

laboratoire .

A. Examen macroscopique de lurine

1.Couleur et trouble :

homogniser lurine ou par agitation mcanique et noter laspect

limpide ou trouble et la prsence dune ventuelle hmaturie.

2.Mesure du pH : Fait appel a des bandelettes revtues de deux

indicateurs

colors et dont le changement des couleurs allant de lorange au

bleu couvre

une gamme de PH de 5.0 a 8.5 .La ralisation de ce test

seffectue

galement sur urines fraiches .

B. Observation au microscope
Une goutte d'urine est examine directement au microscope afin
de
rechercher la prsence de globules blancs, de globules rouges et
de microbes .

Les cellules prsentes dans des urines

(cytologie) :
Les urines normales et striles comprennent :

des leucocytes en quantit infrieure 10 000/ml (ou 10/mm3) ;

des hmaties en quantit infrieure 1 000/ml (ou 1/mm3) ;

des cellules pithliales en petit nombre. La paroi interne de la

vessie est

tapisse de cellules protectrices appeles cellules pithliales .

ventuellement quelques cylindres hyalins et cristaux.

En cas d'infection urinaire, le taux d'hmaties et de leucocytes

dans les urines

augmente.
C. Les analyses bactriologiques d'urines
Transport :

Le plus rapidement possible au laboratoire (conservation

quelques heures + 4C)

N.B : Chaque prleveur possde une cl personnelle qui lui

permet de sidentifier

au niveau du poste de validation des prlvements o lurine est

enregistre .

Ralisation des analyses :

Le soir du troisime jour de stage le Mardi 22 dcembre 2016 ,
Nous avons

analys cinq chantillons d'urine .

Tout d'abord, commencer nettoyer la paillasse , Ensuite, nous

avons allum le

bec de bunsen (zone strile) .

Nous apportons 6 botes de Ptri numrot ( 969 ,970,971,972 ) ,

4 botes de Ptri

de milieu Glose nutritive ( En biologie, la glose nutritive ou glose

nutritive

ordinaire (GNO) ou encore glose ordinaire est

un milieu d'isolement non-slectif

) , et deux Autres botes de Ptri Contient milieu hektoen .

1.Nous commenons avec famber de anse de platine l'aide de
bec de bunsen .

2. au prs de la zone strile , en ouvrons le facon d'urine

partiellement et avec une anse de platine, prlever une
petite goutte de suspension bactrienne puis faire des
stries serres sur la moiti de la bote de Ptri . Ensuite
tourner d'un quart de tour la boite, recommencer les
stries. Ensuite tourner encore la boite d'un quart de tour
et refaire encore les stries. De cette manire toute la
boite doit avoir t ensemence... Pour conomiser, nous
pouvons diviser une bote de Ptri qui contient le milieu
hektoen en deux (50 % et 50 %) .
NB : attention ne pas brler la glose lorsque l'anse est
encore trs chaude...

3. Rpter le mme processus sur les chantillons restants sur

milieux glose nutritive et glose Hektoen , entre chaque deux
ensemencement on famber

l'anse de platine .
4. Une fois que la boite de Ptri a t referme et identifie, elle
est place dans un incubateur. Il s'agit d'une enceinte qui
maintient une temprature constante, optimale pour la croissance
bactrienne. La culture reste habituellement dans l'incubateur de
24 48 heures a 37 , un temps suffisant pour permettre la
croissance de toutes les bactries prsentes .

3.tude de la sensibilit aux

antibiotiques

Antibiogramme

Un antibiogramme est une technique de laboratoire visant

tester la sensibilit

d'une souche bactrienne vis--vis d'un ou

plusieurs antibiotiques supposs ou connus.
Il vrifier lactivit in vitro de lantibiotique choisi sur la bactrie
pathogne
laide des tests de sensibilit.
Cette antibiogramme est ralis sur une culture pure il vise
dterminer la

sensibilit aux antibiotiques dune bactrie permet de classer la

bactrie en trois

catgories cliniques : sensible (S), intermdiaire (I), rsistant (R)

par rapport chaque antibiotique test .

antibiogramme et impliquer seulement sur les cultures positives

( en cas de

infection ) , Au cours de nos analyses, nous n' trouve aucun

culture positif .

Les cultures 969,970,971,972 sont des cultures

ngative non infecte .

II) Examen cytobactriologie des pus

1) Matriels et mthode

Les matriels :
Bec bunsen .

Tubes essai .

Boites de ptri .

Pipette pasteur ou anse de platine .

Bandelettes urinaires pour mesurer le PH des urines .

Microscope optique .

Lame et lamelle .

Incubateur .

Eau distille .

Pince .

Les chantillons d'urine .

Des milieux de culture :

Glose nutritive :
permettre une numration des bactries les plus frquemment
rencontres, les entrobactries, les Pseudomonas , les
Staphylocoques et les entrocoques .

Glose Chapman :
La glose Chapman est le milieu slectif des bactries halophiles
et plus particulirement fermentant le mannitol. C'est un milieu
semi-synthtique.

Il est utilis pour l'isolement des Staphylococcus.

Dans les pays anglo-saxons, une variante de ce milieu est

appele MSA (mannitol-salt-agar = glose au mannitol et au sel).
dfinition:
Pus (exsudat) est un liquide pathogne, sreux et opaque constitu de globules

blancs altrs ou intacts et de bactries vivantes ou mortes, avec de cellule de tissu

voisine de la suppuration. En outre le pus est plus au moins pais et granuleux et

ainsi il est susceptible de former un abcs, qui est une collection de pus dans une

cavit noforme et repoussant progressivement les tissus en priphriques.

Les abcs se dveloppent dans nimporte quel endroit de lorganisme, et pouvant

tre

Superficiels: le plus frquent est le panaris (abcs au doigt), mais ils peuvent
se

rencontrer dans toute autre rgion du corps. Ils sont visibles et palpables.

Profonds: sur un organe interne (cerveau, foie, poumon, rein). Leur gravit est

fonction de leur localisation.

Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus est une coccobactrie Gram

positif , catalase positive appartenant la famille des

Staphylococcaceae . Il a

un diamtre denviron 0,5 1,5 m, est immobile, asporul et

facultativement

anarobique (sauf S. aureus anarobies); il est habituellement

dispos en

grappes. De nombreuses souches produisent des entrotoxines

staphylococciques, la toxine super antignique du syndrome de

choc toxique

(TSST-1) et des toxines exfoliatives. Staphylococcus aureus fait

partie de la fore

humaine et est surtout prsent dans le nez et sur la peau .

PIDMIOLOGIE :

Distribution dans le monde entier. Staphylococcus aureus est

lune des causes les plus frquentes dinfection de la peau, des

tissus mous et

dinfections nosocomiales .

2.Prparation du malade et modes de

prlvements du pus
A . Prparation du malade :

Cette prparation consiste viter au malade de prendre des

antibiotiques
avant tous prlvements du pus sinon sous fentre thrapeutique
de 72 heures.
B. les modes prlvements des pus :

Les prlvements sont diffrents selon que le pus collects provient dun abcs

ferm, sans relation avec le milieu extrieur ou dun abcs ouvert en

communication permanente ou temporaire avec lextrieur. Par consquent, les

prlvements doit obir de rglement stricts dasepsie en faisant en sorte que

en adoptant chaque type de prlvements une asepsie rigoureuse fin dviter

la contamination de ce dernier aux germes saprophytes ou commensal proche du

site infectieux. Il est prfrable ainsi de minimiser les prlvements par

couvillonnage qui seront plus facilement contamins, plus sensible la

dessiccation et non adapts la recherche de bactries anarobies. Leur seront

prfrs : les biopsies, les pices opratoires et les prlvements la seringue.

C. Prsentation du matriel de prlvement

Un tube et un couvillon striles. Le tube contient un milieu
liquide de transport

et de conservation qui permet de conserver les bactries pour

une dure de 48

heures et galement den inhiber la multiplication.

D. Prvention - prcautions
En cas de traitement antibiotique topique :
stopper le traitement 48 heures avant le prlvement pour viter
les faux ngatifs.
Avant le prlvement :

dbarrasser la plaie des souillures superficielles (ex : rsidus de

pansement avec

des compresses striles humidifies au NaCl 0,9% strile

lexception des plaies

traites au Nitrate dargent (utiliser de leau strile) ou sur ordre

mdical, raliser
un dbridement.

Lors du prlvement :

pratiquer une asepsie rigoureuse pour viter tout risque de

contamination et

humidifier lcouvillon avec du NaCl 0.9% strile ou de leau

distille strile pour

amliorer la qualit du prlvement et en faciliter lexcution.

En cas de chute du tube et de perte de liquide, utiliser le tube

dun autre set

couvillon pour dposer le prlvement. Si le prlvement a t

contamin,

recommencer, si possible, le prlvement .

La requte de laboratoire :
sassurer que tous les champs de la requte Labo sont
correctement remplis :

identit, matriel, site du frottis, date, heure, diagnostic,

renseignements

cliniques et antibiothrapie et en cas de prlvements multiples,

chaque

prlvement a une requte individuelle.

Matriel :
Solution hydro alcoolique pour les mains .

Paquet pansement si ncessaire .

NaCl 0,9 % et/ou eau distille .

Etiquette avec l'identit du patient .

Droulement du prlvement :
Se frictionner les mains avec la solution hydro-alcoolique .

Humidifier lcouvillon avec du NaCl 0,9 % strile ou de leau

distille strile .

Effectuer le frottis .

Ouvrir le tube, plonger lcouvillon dans le milieu liquide et

casser la tige de

lcouvillon qui est pr-coupe .

Sassurer que lextrmit de lcouvillon est bien immerge

dans le liquide .

Fixer ltiquette didentification sur le tube .

Vrifier ltanchit du tube .

Essuyer et dcontaminer toutes les souillures des surfaces

externes du tube

(penser au risque de contamination du personnel de transport

et de

laboratoire) .

Se frictionner les mains avec la solution hydro-alcoolique .

Effectuer lacheminement des tubes au laboratoire de
bactriologie ou

sassurer que cela se fasse rapidement .

Une fois que le prlvement a t effectu, l'couvillon est

plac dans son tui

de protection et identifi. Une tiquette, imprime avec le nom

du patient, le

numro d'identification et le numro affect cet chantillon,

est colle sur

l'tui.

Ds lors que l'chantillon a t recueilli et identifi, il est

transport au

laboratoire. Selon l'examen requis et le lieu o vous avez fait

votre

prlvement, il peut tre simplement transmis au laboratoire

ou envoy

travers le pays un laboratoire plus spcialis pour raliser un

examen

particulier.

transport et stockage :

Les prlvements de pus doivent arriver rapidement au laboratoire (<1 heures

temprature ambiante), pour tre ensemencer sans dlai afin dviter la
prolifration bactrienne de la flore commensale (multiplication dune bactrie
au dtriment dune autre).
Il sera trs souvent ncessaire de rechercher les bactries anarobies. Pour
prserver la viabilit de ces derniers, on utilise une Culture -Anarobie.Un bon
milieu de transport doit protger les bactries anarobies de loxygne de lair,
empcher la dessiccation du produit pathologie, et prserver la multiplication
ultrieure des bactries arobies ou anarobies.

fiche de renseignement et tiquetage du

prlvement

En pratique, avant tout examen cytobactriologique de pus, il faudra procder

linterrogatoire du malade et remplir une fiche de renseignement sur laquelle on

devra noter :

Nom, Prnom, Age, Service ;

Type de prlvement ;

Localisation du prlvement ;

Renseignement clinique ;

Notion dintervention chirurgicale, de morsure ;

ACTD : Immunodpression diabte, traitement immunosuppresseuretc

Fiche de renseignement
3.Traitement et analyses des prlvements
au laboratoire

Les prlvements sont enregistrs dans un registre de

laboratoire . Un numro dordre interne au laboratoire
leur est attribu (numro inscrit sur la fiche de
renseignements et sur le prlvement) .

Examen cytobacteriologie de pus

A. Examen macroscopique :

Il est difficile de faire une valuation macroscopique des prlvements de pus, un

technicien expriment doit valuer soigneusement la couleur, la consistance,
laspect et lodeur des prlvements de pus reus au niveau de laboratoire.Il a une
valeur dorientation:
La couleur : la couleur du pus va des jaune-vert, ainsi le couleur rouge brun est
ventuellement sanglant et gnralement dues un mlange de sang ou
lhmoglobine, la couleur bleu-vert labor par pyocyanique. on peut voquer des
anarobies devant un pus marron et ftide
La consistance : la consistance de pus peut tre all dun liquide trouble une
matire paisse et collante, le pus peut tre pais visqueux, lastique, mlanger ou
non de sang. Des grains peuvent tmoigner une Actinomycoses.
Lodeur : il peut tre inodore ou avoir une odeur fcalode ou ftide ou trs
putride, dans ce dernier cas, la prsence de bactrie anarobie.

B. Examen microscopique :

Examen direct ltat frais :

Une prparation est obtenue avec le dpt dune goutte de prlvement suppuratif
entre lame et lamelle, puis on observe au microscope dune part ( lobjectif
40), la prsence ventuelle de bactrie (coque, chainette, bacille), et de not la
prsence ou labsence de polynuclaires.

C. la culture :

a- Milieux disolement : ce sont des milieux de culture utiliss pour isoler

le ou les agents infectieux partir du prlvement.
Le choix de ces milieux est guid par la nature du prlvement et les germes
recherchs.

Ensemencement
Au laboratoire, le technicien va transfrer le contenu du
prlvement de pus de l'couvillon dans les boites de Ptri
(contenant une glose nutritive) et Glose Chapman Il est
utilis pour l'isolement des Staphylococcus .
qui va permettre la croissance bactrienne. Pour raliser
l'ensemencement, la surface de la glose est dlicatement
frotte avec l'couvillon.

Incubation de la Culture :

Une fois que la boite de Ptri a t referme et identifie, elle

est place dans un incubateur. Il s'agit d'une enceinte qui
maintient une temprature constante, optimale pour la
croissance bactrienne. La culture reste habituellement dans
l'incubateur de 24 48 heures, un temps suffisant pour
permettre la croissance de toutes les bactries prsentes .

Observation de la culture :

Une fois l'incubation termine, le technicien observera l' oeil

la culture. Certaines bactries ont une apparence
caractristique qui permet au technicien de l'identifier. Dans
certains cas, des tests supplmentaires peuvent tre
ncessaires pour permettre une identification. Les bactries ne
sont pas toutes pathognes et donc ne ncessitent pas toutes
de traitement
Ex : culture (976) .
4 .Antibiogramme
Si une bactrie pathogne a t identifie dans la culture de pus
ex (965) , le technicien ralisera un test supplmentaire utilisant
diffrents types d'antibiotiques pour voir quel sera le plus efficace
pour arrter l'infection. Ce test commence en ensemenant une
nouvelle boite de glose avec les bactries . Les antibiotiques, qui
ont t adsorbs sur des disques de papier blanc, sont placs sur
la glose. Si l'antibiotique arrte le dveloppement microbien, un
halo clair apparait autour du disque. Ceci indiquera au mdecin
quel antibiotique il peut prescrire pour soigner l'infection de pus .

La bactrie est sensible lantibiotique : il suffit dune faible

concentration de lantibiotique en question pour tuer les bactries
et la dose ncessaire est administrable chez lhomme.

La bactrie est rsistante lantibiotique : la dose ncessaire

pour tuer les bactries est beaucoup trop leve pour tre
supporte chez lhomme sans effets secondaires majeurs. Un tel
antibiotique ne peut donc tre utilis pour traiter linfection.

La bactrie est intermdiaire lantibiotique : la dose ncessaire

pour tuer les bactries est tantt administrable chez lhomme,
tantt dangereuse. Il faut donc considrer que la bactrie est
rsistante in vivo, c'est--dire dans lorganisme .
Lantibiogramme permet donc au mdecin de choisir le meilleur
traitement antibiotique individualis contre la souche bactrienne
responsable de linfection , dans notre cas cette souche des
bactries est sensible contre le antibiotique ( mthicilline ,
oxacilline ) .