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Os leos essenciais e oportunidades para mitigar as emisses de metano

entrico de ruminantes
Chaouki Benchaar a,, Henry Greatheadb
a Agriculture and Agri-Food Canada, Dairy and Swine Research and Development Centre, P.O.
Box 90, STN-Lennoxville, Sherbrooke, Quebec, Canada J1M 1Z3
b University of Leeds, Faculty of Biological Sciences, Leeds, United Kingdom

Resumo- A actividade antimicrobiana bem documentado de leos essenciais levou


interesse em se estes compostos bioactivos podem ser usadas para inibir selectivamente
a metanognese do rmen. Um nmero de estudos avaliaram recentemente a capacidade
de leos essenciais para reduzir produo de CH4 entrico. A maioria dos estudos tm
sido in vitro e curto prazo. Essencial leos derivados de tomilho, organo, canela, alho,
rabanete cavalo, ruibarbo e frangula diminuram a produo de CH4 in vitro de uma
forma dependente da dose. No entanto, a inibio CH4 de produo ocorreu com doses
elevadas (isto ,> 300 mg / L de fluido de cultura) e foi, em muitos casos, associadas a
uma diminuio nas concentraes de cidos gordos volteis totais e alimentos digesto.
Alguns leos essenciais, tais como o alho, canela, ruibarbo e frangula, podem exercer
um efeito direto sobre methanogens. A evidncia in vivo para a actividade
antimicrobiana dos leos essenciais tem sido equvocos a data, provavelmente por causa
da capacidade de micrbios do rmen para adaptar e degradar estes metablitos
secundrios. Alm disso, muitas das concentraes de essencial leos que tm afectadas
favoravelmente rmen fermentao in vitro so demasiado elevadas para utilizao in
vivo como eles provavelmente teria efeitos deletrios sobre a eficincia da fermentao
ruminal, palatabilidade e, eventualmente, causar toxicidade. Com base nos resultados
disponveis, parece que alguns essencial leos (por exemplo, alho e seus derivados e
canela) reduzir a produo de CH4 in vitro. Contudo, existe uma necessidade de
investigao in vivo para determinar se estes compostos podem ser utilizados com
sucesso para inibir a metanognese do rmen. O desafio continua para identificar
essencial leos que inibem selectivamente a metanognese do rmen a taxas de
alimentao prticos, com durao
efeitos e sem deprimir a digesto de alimentos e produtividade animal. Este artigo faz
parte da edio especial intitulada: Gases de Efeito Estufa na Agricultura Animal -
Encontrar um equilbrio entre alimentos e Emisses, Visitante Editado por T.A.
McAllister, Seo de Clientes editores; K. A. Beauchemin, X. Hao, S. McGinn e editor
para Alimentao Animal Cincia e Tecnologia,P. H. Robinson.
1 Introduao

H interessantes reduo das emisses de CH4 provenientes


ruminants.Methane domstica um gs de efeito estufa (GEE) e tem potencial de
aquecimento global 25 vezes maior do que o CO2. De acordo com um relatrio da FAO
(Steinfeld et al., 2006), conta gado para ~37% das emisses de CH4 antropognicas
globais com a maior parte dela proveniente da fermentao entrica em ruminantes, que
produzido como resultado da fermentao microbiana dos alimentos no rmen e , em
menor grau, no intestino grosso. CH4 entrico uma perda de energia produtiva,
tipicamente, entre 2 e 12% do consumo de energia bruta em ruminantes, dependendo do
nvel de ingesto de alimentos e composio da dieta (Johnson e Johnson, 1995; Boadi
et al., 2004). Portanto, a reduo das emisses de CH4 entricos de ruminantes
benfico do ponto de vista nutricional (ou seja, a melhoria da eficincia alimentar e
produtividade animal) e ambiental (por exemplo, reduo da contribuio do sector
agrcola para as emisses totais de GEE). Consequentemente, vrias estratgias
dietticas tm sido sugeridos para reduzir as emisses de CH4 entricos de ruminantes
(McAllister et al., 1996,. Boadi et ai, 2004;. Beauchemin et ai, 2009). Os ionforos, tais
como monensina foram extensivamente investigados quanto sua capacidade de reduzir
a produo de CH4 em ruminantes e a sua eficcia foi demonstrada, embora os seus
efeitos inibitrios no sempre persistir (Beauchemin et ai., 2008, 2009).
Na Amrica do Norte, os ionforos so usados em produtos lcteos e bovinos
de corte dietas para melhorar a eficincia de leite e carne.
No entanto, a utilizao de ionforos na produo de gado no permitido na
Europa aps a proibio de promotores de crescimento em janeiro de 2006 (JOUE,
2003). Embora esta proibio est actualmente limitada UE, h aumento da presso do
pblico em outras partes do mundo, incluindo Amrica do Norte, de proibir ou restringir
o uso de antimicrobianos na produo animal alimentos para fins no teraputicos. Por
exemplo, um recente relatrio da Comisso Pew sobre industrial Farm Produo Animal
nos Estados Unidos (PCIFAP, 2008) recomenda que limita a utilizao de agentes
antimicrobianos na produo de alimentos de origem animal, a fim de reduzir o risco de
resistncia antimicrobiana aos antibiticos utilizados para o tratamento de infeces em
seres humanos. Consequentemente, a investigao tem sido muito intenso,
particularmente na Europa, para desenvolver alternativas aos antibiticos promotores de
crescimento na produo animal. Plantar metabolitos secundrios, devido sua
actividade antimicrobiana bem documentada, so vistos como alternativas potenciais.
As plantas produzem uma disposio de diversos metabolitos secundrios que,
quando extrados e concentrados, pode exercer actividades antimicrobianas contra uma
ampla variedade de microorganismos incluindo bactrias, fungos e vrus (Chao et al,
2000; Greathead., 2003; Burt, 2004). Vrios estudos, a maioria dos jovens in vitro, tm
sido publicados sobre os efeitos de leos essenciais e seus componentes na fermentao
microbiana no rmen com um foco sobre o metabolismo do N e concentrao de cidos
graxos volteis (AGV) (Calsamiglia et al., 2007; Benchaar et al., 2008b). No entanto, s
recentemente foi avaliado o potencial de leos essenciais e os seus constituintes para
inibir seletivamente rmen methanogenesis. Ao longo dos ltimos 5 anos, tem havido
um aumento do corpo de conhecimento nesta rea. Esta avaliao tem como objetivo
fornecer uma avaliao crtica do potencial do vegetais derivados de leos essenciais
para inibir rmen methanogenesis. Uma srie de estudos tm sido publicados
recentemente sobre a capacidade de ervas, especiarias e plantas para reduzir a produo
de CH4 rmen (Bodas et al, 2008;. Garca-Gonzlez et al, 2008a, b;.. Patra et al, 2010),
mas sem identificao dos metablitos secundrios responsveis. Para efeitos de nossa
reviso, apenas os dados a partir de estudos que tm investigado especificamente
impactos dos leos essenciais sobre methanogenesis so discutidos.

2. OS LEOS ESSENCIAIS
Definio

Os leos essenciais so misturas complexas de metabolitos secundrios


volteis lipoflicos. Tradicionalmente, extrada de plantas pela gua e destilao de
vapor fervente, mtodos incluem extraco com solvente, a extraco de CO2
supercrtico, e a extraco de expresso (isto , um mtodo de extraco de leos
essenciais a partir de plantas). Eles so planta especfica e so responsveis pelo sabor
caracterstico de uma planta e fragrncia. Pode haver uma grande variao no
rendimento de leo essencial e composio entre as plantas da mesma espcie, e no
prazo de diferentes partes da mesma planta (Cosentino et ai, 1999;. Burt, 2004). Por
exemplo, Martinez et al. (2006) relataram que a composio do leo essencial extrado
de timo de variar dependendo da espcie. A fraco voltil ofthe leos essenciais
extrados a partir de Thymus zygis ssp. Gracillis continha concentraes mais elevadas
de timol, e uma menor concentrao de carvacrol, do que o leo extrado do timo hym
Malis Lange (Fig. 1). Delaquis et ai. (2002) relataram que o leo essencial obtido de
sementes de coentro (Coriandrum sativum L.) tinha uma composio diferente da do
essencial leo de coentro, o qual foi obtido a partir de folhas imaturos da mesma planta.
Somente terpenos foram detectados em leo de coentro enquanto o leo de coentro
continham uma mistura heterognea de componentes adicionais que incluem lcoois,
aldedos, e alcanos terpenos. Linalol foi o composto mais abundantes em ambos os
leos, embora a concentrao era mais elevada em coentro que em coentro (70,0 contra
25,6%). A composio de leos essenciais a partir de uma determinada espcie de planta
pode variar entre a colheita estaes e geogrfica locations.Vokou et al. (1993)
observaram que as concentraes Ofthe principais leos essenciais (isto , carvacrol,
timol, terpineno e p-cimeno) de organo (Origanum vulgare ssp. hirtum) variou entre as
reas geogrficas na Grcia a partir do qual a planta foi colhida (Tabela 1). Enquanto se
acreditou uma vez que os metablitos secundrios, e leos, assim, essenciais, no tinha
funo na planta, agora geralmente aceite que eles fornecem a planta com a proteo
das agresses abiticos e biticos, bem como ser atraentes para os organismos que
polinizam e dispersam sementes (Wink e Schimmer, 1999). Uma hiptese alternativa
que eles so um reservatrio metablito para momentos em que metabolitos primrios
esto em excesso (Gottlieb, 1990). Embora esta hiptese pode explicar a variabilidade
na composio de metabolitos secundrios entre as plantas dentro das espcies, que no
explica as alteraes induzidas pelo stress em concentraes em plantas (McNaughton
et ai, 1985;. Marriott, 2000).

2.2 . Qumica e sntese de via metablica

Os leos essenciais so geralmente composto de terpeno e metablitos


secundrios fenilpropeno. Geralmente, os compostos de uma classe dominar. Por
exemplo cravo (Syzygium aromaticum) leo essencial composta principalmente de
fenilpropenos (Dewick, 2002), enquanto que o organo (Oreganum vulgare) composto
principalmente de terpenos (Vokou et al., 1993). O isoprenes (C5) difosfato isopentenil
e dimetilalil difosfato so os blocos de construo bsicos de terpenos (Fig. 2). Em
plantas, eles so sintetizados usando o ciclo de cido ctrico intermdio acetil-CoA (via
do mevalonato), e a glicolticas intermedirios glyceraldehydes 3-fosfato e piruvato (via
deoxyxylulose) como precursores (figura 3;. Dewick, 2002). A condensao de difosfato
de isopentenil e dimetilalil difosfato de produzir o monoterpene (C10) geranila
difosfato, a partir dos quais o difosfato de linalilo e difosfato de nerilo so formados por
reaces de isomerizao. Desses trs monoterpenos, uma srie de monoterpenos
cclicos lineares e so formadas (por exemplo, limoneno, timol, carvacrol, linalol,
carvona, acetato de geranilo). Os sesquiterpenos maiores e menos volteis (C15) so
formados por adio de difosfato de isopentenilo em difosfato de geranilo, que produz
farnesil difosfato, o precursor de outros sesquiterpenos incluindo zingerberine e
artemisinina.
Os fenilpropenos so sintetizados pela via do chiquimato (Fig. 3), que usado
por plantas e microrganismos (Sangwan et al., 2001) para sintetizar aminocidos
aromticos fenilalanina e tirosina. A desaminao dos rendimentos de fenilalanina cido
cinmico, a unidade de construo bsico fenilpropil (isto , 6C anel aromtico com
uma cadeia 3C ligados; Fig. 2) que, mediante hidroxilao, os rendimentos de cido 4-
cumrico. Isto pensado para ser a via mais comum pelo qual o cido 4-cumrico
sintetizar nhou (Dewick, 2002), mas tambm pode ser formado a partir de desaminao
de tirosina. A partir de cido 4-cumrico, por meio de uma srie de reaces, os
fenilpropenos so sintetizados (por exemplo, cinamaldedo, eugenol, anetol, e
miristicina safrol; Fig. 3).
Embora os terpenos e fenilpropenos dominar a composio de leos essenciais,
que so notthe nicos tipos de compostos em leos essenciais. Por exemplo, o leo
essencial de alho contm uma gama de compostos de organo-enxofre (por exemplo,
sulfureto de dialilo (DAS), dissulfeto dialil (DADS), diallyl trisulphide (DATS), vinil-
dithiins e adjoenes) que se originam de dipeptdeos de armazenamento cistena glutamil
(Corzo-Martnez et al., 2007). Estes dipptidos so hidrolisados e oxidados nos
sulfxidos de cistena; alina, isoalliin e methiin (Jones et al., 2004). Alliin o principal
sulfxido de cistena no alho. Aps o processamento (isto , de corte e esmagamento)
dos sulfxidos de cistena so rapidamente clivado pela enzima para produzir alinase
thiosulphinates (por exemplo, alicina), piruvato e amonaco (Amagase et al., 2001). Os
thiosulphinates so instveis e rapidamente se decompem para sulfuretos, que so
abundantes em leo essencial de alho.

2.3 . Mecanismos de ao ( propriedades antimicrobianas)

Muitos dos metabolitos secundrios dos componentes em leos essenciais, e,


portanto, sendo os prprios leos essenciais, exibir actividade antimicrobiana. A
sensibilidade de micrbios para leos essenciais varia, e esta propriedade que do
interesse de nutricionistas de ruminantes, uma vez que se presta aos pedidos de
mudanas na fermentao ruminal por meio de seleo a favor ou contra grupos
especficos de microrganismos.
O que determina a actividade antimicrobiana de um metabolito secundrio
pouco clara, mas a presena de oxignio e S na estrutura qumica pareceria ser
importante. Hidrocarbonetos (por exemplo, p-cimeno,-terpineno e R (+) - limoneno)
tm actividade antimicrobiana varivel (... Oh et al, 1967; Cosentino et ai, 1999;
Dorman e Deans, 2000; Cristani et ai, 2007) . No entanto, metabolitos secundrios que
contm oxignio, tais como fenis, e S, como em sulfuretos (Ross et ai, 2001;..
CorzoMartnez et ai, 2007) tendem a apresentar uma forte actividade antimicrobiana. O
grupo hidroxilo se acredita ser fundamental para interromper o transporte de ies
atravs da membrana normais citoplasmtico (Ultee et al., 2002) e na inactivao de
enzimas microbianas (Burt, 2004).
Hidrofobia parece ser crucial para a atividade antimicrobiana. Isso significa
que os leos essenciais ir preferencialmente particionar a partir de uma fase aquosa na
bicamada lipdica da membrana citoplasmtica onde se acumulam . a partir de dentro
da bicamada lipdica que se acredita leos essenciais para orquestrar um ou mais dos
seus efeitos antimicrobianos , alterando a permeabilidade da membrana e assim
perturbar os processos de transporte de ies e de interagir com as protenas da
membrana , e / ou outros componentes citoplasmticos . Esta resposta mediada leo
essencial obtido quer a partir de dentro da membrana citoplasmtica ou por difuso
para dentro do citoplasma . Como leos essenciais so misturas de muitos metabolitos
secundrios , provvel que haja um certo nmero de mecanismos de aco ( Fig . 4 ).
A actividade antimicrobiana de timol e carvacrol, monoterpenos fenlicos,
encontrado em concentraes elevadas em leo essencial de orgo, bem
documentada (Helander et al, 1998;.. Ultee et ai, 1999, 2000a, b). Eles, e leo essencial
de orgo, tm mostrado aumentar a fluidez e a permeabilidade da membrana
citoplasmtica que conduz perda do contedo das clulas e lise celular (Trombetta et
ai, 2005;.. Di Pasqua et ai, 2007; Paparella et ai,. 2008;. Xu et al, 2008). Possivelmente
em resposta a um aumento da fluidez da membrana citoplasmtica causada por timol e
carvacrol, um aumento da proporo de saturado: insaturado membrana cidos gordos
foi relatada em bactrias expostas a estes monoterpenos fenlicos (di Pasqua et al.,
2006, 2007). Ambos timl e carvacrol tm sido relatados para dissipar H + e K +, ies
de gradientes, e, assim, a fora motriz de protes, levando a depleo da concentrao
de ATP intracelular como um resultado de qualquer inibio da sntese de ATP ou
aumentar as taxas de hidrlise de ATP (Lambert et al., 2001). Um mecanismo de
transferncia de protes foi proposto por Ultee et ai. (2002) em que o grupo hidroxilo
desses monoterpenos fenlicos atua como um transportador de protes trans membrana
(Fig. 4), um mecanismo de ao no desiguais para ionforo antibiticos.
O mecanismo de aco antimicrobiana da fenilpropeno eugenol, um importante
componente de leo essencial de cravo, tem sido sugerido para ser atravs da inibio
da actividade da enzima glicoltica, resultando na incapacidade do microorganismo para
utilizar glicose intracelular (Gill e Holley, 2004). efeitos de membrana tambm tm sido
relatados, a proporo de gorduras saturadas de cidos gordos gordos insaturados
aumentada nas membranas citoplasmticas de bactrias eugenol tratada (di Pasqua et
al., 2006), e que haja uma fuga de K de eugenol tratada bactrias (Walsh et ai ., 2003).
Gill e Holley (2004) descontar esses efeitos como responsvel pelos efeitos bactericidas
de eugenol, como eles no foram capazes de detectar alteraes nas concentraes de
ATP extracelular em bactrias expostas a eugenol. A actividade antimicrobiana do
cinamaldedo fenilpropeno, um importante componente de leo de canela, sugere-se a
surgem de ruptura da membrana citoplasmtica (Ouwehand et al., 2010). Isto resulta na
depleo de ATP celular e importao glicose prejudicada (Gill e Holley, 2004) e
inactivao de enzimas bacterianas (Burt, 2004; Gill e Holley, 2004). Helander et al.
(1998) no foram capazes de detectar qualquer evidncia.
A actividade antimicrobiana de leo essencial de alho parece estar associada
com alicina e sulfuretos de dialilo . No caso de a actividade mais tarde , antimicrobiana
aumenta com o nmero de tomos de enxofre por isso , enquanto DAS tem muito pouca
actividade , o sulfetos allicos poli ( DATS ) tm uma grande quantidade ( Mnchberg et
al., 2007 ) . A fraco S - alilo ( S -CH2- CH - CH2 ) alicina foi de mostrado para
interagir com grupos de protenas e aminocidos contendo sulfidrilo ( -SH ) ( Fujisawa
et ai . , 2009) , que provvel para interromper a funo das clulas . Enquanto o
mesmo mecanismo de aco frequentemente associada com os sulfuretos de dialilo,
uma srie de outros mecanismos tm sido propostos , que so descritos por Mnchberg
et ai . (2007).
Atividade antimicrobiana de leos essenciais tende a ser seletivo contra
bactrias Gram-positivas. Por exemplo, h evidncias que sugerem que as bactrias
Gram-positivas podem ser mais sensveis ao orgos leo essencial e seus constituintes
fenis do que as bactrias Gram-negativas (Cosentino et ai, 1999;.. Lambert et al, 2001).
Smith-Palmer et ai. (1998), Trombetta et ai. (2005) e Fujisawa et ai. (2009) reportaram
observaes semelhantes a outros leos essenciais. A membrana externa de bactrias
Gram negativo bactrias altamente carregada e pensado para actuar como uma
barreira para os leos essenciais. Tem sido sugerido que os leos essenciais activa
contra bactrias Gram negativas contm metablitos secundrios que so pequenas o
suficiente para passar atravs de protenas porina em a membrana externa e assim capaz
de acessar a membrana citoplasmtica (Nikaido, 1994; Dorman e Deans, 2000). No caso
de alicina, protena da membrana exterior de bactrias gram-negativas tem sido sugerida
para se ligar poro de S-alil, desactivando-o antes que ele atinja a membrana
citoplasmtica e citoplasma (Fujisawa et ai., 2009).

3-Efeitos de leos essenciais sobre a produo de CH4

O timol , um monoterpeno fenlico [ ( 5 - metil - 2- ( 1 - metiletil ) fenol ) ]


um dos principais compostos de tomilho ( Thymus vulgaris ) e organo ( Origanum
vulgar ) leos essenciais . O timol foi demonstrado ter um amplo espectro de actividade
contra uma variedade de bactrias Gram negativas e Gram positivas ( Dorman e Deans ,
2000; Lambert et al , 2001; . Walsh et al., 2003 ) . Diversos estudos tm investigado os
efeitos de timol ou leos essenciais com alto teor de timol sobre a fermentao ruminal (
Castillejos et al , 2006, 2008 ; . Martnez et al , 2006; . . Benchaar et al , 2007a) , mas
apenas alguns tm especificamente determinou a sua efeitos sobre a metanognese do
rmen ( Tabela 2 ).
Evans e Martin (2000) examinaram os efeitos de concentraes crescentes de
timol (50, 100, 200, e 400 mg / L de fluido de cultura) na fermentao in vitro como 24
h incubaes cultura descontnua de d-glicose por bactrias ruminais mistos (Tabela 2 ).
a concentrao de metano no foi afectada quando timol foi fornecido em 50, 100, e 200
mg / L de fluido de cultura. No entanto, a 400 mg / L, timol aumentou o pH do meio,
diminuiu drasticamente (-94%) concentrao de CH4, juntamente com concentraes de
acetato e propionato de etilo (-44 e -78%, respectivamente). Um pH mais elevado e uma
reduo das concentraes de AGV so uma indicao de uma inibio geral da
fermentao microbiana no rmen, e estas alteraes no seria nutricionalmente
benfico para o hospedeiro animal, se os mesmos efeitos foram expressos in vivo.
Macheboeuf et ai. (2008) avaliada em culturas em lote (16 h de incubao),
efeitos de tomilho (T. vulgaris, 470 g / kg de timol, 200 g / kg de terpineno e 200 g / kg
de p-cimeno) sobre a fermentao no rmen. Um mnimo de 300 mg / L de timol
fornecida como , ou por meio de leo de tomilho, foi necessria para inibir a produo
de CH4 com uma diminuio concomitante na produo total de AGV, acetato e
propionato de produo (Tabela 2). Mais recentemente, Benchaar e Chiquette (no
publicado) observou-se uma reduo de 32% na concentrao de CH4 quando timol foi
fornecido in vitro em uma cultura de 24 h de incubao de lote de 300 mg / L de fluido
de cultura (Tabela 2), que ocorreu com a diminuio das concentraes de AGV totais,
acetato e propionato.
Interessantemente, no estudo de Macheboeuf et ai. (2008), a extenso da
reduo da produo de CH4 era mais pronunciada com o leo de tomilho (fornecendo
300 mg / L de timol) do que quando foi fornecida timol sozinho em incubaes
mesma concentrao (-62 contra 32%, respectivamente), quais sugere que outros
constituintes do leo essencial de tomilho contribuiu para a sua atividade
antimicrobiana. O leo essencial de timo utilizado no estudo de Macheboeuf et ai.
(2008) tambm continha 200 g / kg de p-cimeno e 200 g / kg de terpineno. O
monoterpenos p-cimeno [1-metil-4- (1-metil-etil) -benzeno] e-terpineno [1-metil-4- (1-
metiletil) -1,4-ciclo-hexadieno] so os precursores de timol [5- metil-2- (1-metiletil)
fenol], e carvacrol [2-metil-5- (1-metiletil) fenol], no timo e espcies Origanum
(Cosentino et ai, 1999;. Jerkovic et ai, 2001;.. Ultee et ai, 2002). Em comparao com
os monoterpenos fenlicos, p-cimeno e terpineno parecem ter actividade antimicrobiana
limitada, nomeadamente sozinho (Cosentino et ai, 1999;. Dorman e Deans, 2000; Ultee
et al., 2000a), possvel devido falta de um grupo hidroxilo. No entanto, em um estudo
estes dois monoterpenos no-fenlicos exibiram actividade antibacteriana contra a
bactria Gram positiva Staphylococcus aureus e a bactria Gram negativa Escherichia
coli (Cristani et al., 2007). A atividade antimicrobiana de p-cimeno foi tambm
demonstrada contra bactrias ruminais. Num estudo de 6 h em cultura in vitro de lote,
Chaves et al. (2008b) observaram que a p-cimeno a 20 mg / l reduziu a actividade
metanognica de bactrias ruminais (mol de CH4 / g N bacteriano / min), e
concentrao de CH4 nos gases de fermentao, sem alterar o perfil de AGV ou da
concentrao de AGV (Tabela 2), talvez sugerindo que este composto actua atravs de
pelo metanognios inibio directa.
Para alm do timol e p - cimeno , leo essencial extrado de Thymus tambm
contm carvacrol ( Cosentino et ai , 1999; . . Martnez et ai , 2006) . Os efeitos
sinrgicos ter ocorrido contra Bacillus cereus in vitro quando p - cimeno foi combinado
com o carvacrol fenlico ( Ultee et al . , 2000b ) . Ultee et ai . (2002 ) sugeriram que a
actividade antimicrobiana de p cimeno devido sua acumulao na membrana do
plasma , fazendo com que a membrana para expandir e permitir a fuga de ies . Cristani
et ai . (2007 ) sugeriram que monoterpenos no- fenlicos, tais como p- cimeno e
terpineno , so capazes de se difundir atravs da membrana plasmtica para o
citoplasma bacteriano . Isto apoia evidncias indicando que eles potenciar efeitos
antimicrobianos do monoterpenos fenlicos , facilitando o seu transporte atravs da
membrana plasmtica ( Ultee et al. , 2002).
3.2. Carvacrol

Carvacrol [2-metil-5- (1-metiletil) fenol] um composto fenlico encontrado


principalmente na fraco de leo essencial Origanum e Thymus. Como para o timol, a
elevada actividade antimicrobiana de carvacrol foi atribuda presena de um grupo
hidroxilo fenlico na estrutura (Dorman e Deans, 2000; Ultee et ai, 2002;. Burt, 2004).
Macheboeuf et ai. (2008) observaram uma reduo linear na produo de CH4
quando carvacrol foi fornecida a 225 (-13%), 300 (-32%), 450 (-85%) e 750 (-98%)
mg / L de cultura em lote (Tabela 2). No mesmo estudo, a produo de CH4 no foi
afetada por adio de O. vulgare leo (890 g / kg de carvacrol e 50 g / kg de timol) em
concentraes de 150 e 300 mg / L, enquanto que a 450 e 750 mg / L de CH4 foi
acentuadamente inibida (-63 e -97%, respectivamente). A 450 mg / L de timol mais
carvacrol, o essencial leo de O. vulgare foi menos inibitria que o seu principal
componente carvacrol (-63 contra 85%), sugerindo que os componentes menores em
Origanum leo essencial agiu de forma antagnica com carvacrol. Benchaar e Chiquette
(no publicado) confirmaram a antimethanogenic efeito de carvacrol, quando foi
utilizado a 225, 250, 300, e 350 mg / L in vitro (Tabela 2).
Nos estudos de Macheboeuf et ai. (2008) e Benchaar e Chiquette (no
publicado), a inibio da metanognese com organo e seu principal componente
carvacrol ocorreu concomitantemente com uma reduo de acetato, propionato e AGV
totais concentraes. No rmen, bactrias Gram-positivas so geralmente de etilo e
bactrias produtoras de butirato, enquanto Gram bactrias negativas so geralmente
produzir propionato de etilo (Stewart, 1991). Portanto, os resultados sugerem que rmen
Gram positiva e as bactrias Gram negativas foram sensveis ao leo de organo e
carvacrol, que concorda com as concluses de Sivropoulou et al. (1996) e Lambert et ai.
(2001), que demonstrou que tanto ofthese leos essenciais inibida vrias estirpes de
bactrias Gram-positivas e as bactrias patognicas Gram-negativas.
Macheboeuf et ai. (2008) avaliaram o quimiotipo de timol O. vulgare (210 g /
kg de carvacrol, e 350 g / kg de timol) para a sua efeitos sobre a fermentao no rmen
e produo de CH4 (Tabela 2). A 134 mg / l (fornecendo 75 mg / L de timol e carvacrol)
ele no apresentam actividade antimicrobiana, e no teve nenhum efeito sobre o CH4,
total de AGV, acetato ou propionato de produo. A 268 mg / L, proporcionando 150 mg
/ L de timol e carvacrol, a produo de CH4 era inalterado, embora a produo de AGV
e propionato de diminuio (-18 e -50%, respectivamente). Quando o leo essencial foi
fornecido para fornecer 300 mg / L de timol e carvacrol, produo de CH4 diminuio
(-60%), juntamente com a produo de AGV (-67%), acetato de (-54%) e propionato de
metilo (-73%). No concentrao mais elevada de 450 mg / L de componentes activos, a
fermentao foi quase completamente inibida como evidenciado pela diminui em CH4
(-95%), de VFA total (-93%), acetato de (-91%) e propionato de metilo (-99%).
Os resultados de Macheboeuf et al. (2008) mostraram que a 300 mg / L de
componentes activos, o efeito do antimethanogenic leo essencial de chemotype timol
de O. vulgare foi maior (-60%) do que seus principais componentes carvacrol e timol (-
32%)
Foram includos individualmente na mesma concentrao in vitro. Isto sugere
que os efeitos dessas duas molculas no rmen fermentao microbiana aditivo, o qual
foi suportado quando foi demonstrado que a concentrao inibitria mnima de leo de
orgo essencial e seus dois componentes principais, timol e carvacrol, contra S. aureus
e Pseudomonas aeruginosa foi inferior como uma mistura em comparao com qualquer
um dos compostos sozinho (Lambert et al., 2001).

3.3. Eugenol

Eugenol (4-alilo-2-metoxifenol) um monoterpeno fenlico presente em


quantidades elevadas em broto dente (S. aromaticum) e folha de canela (Cinnamomum
cassia) leos essenciais. Eugenol foi mostrado ter actividade antimicrobiana contra
bactrias Gram bactrias gram-negativas e positivas (Dorman e Deans, 2000;. Walsh et
ai, 2003).
Patra et ai. (2010) investigaram a gua, metanol e etanol extractos de gema de
cravo em ebulio para os seus efeitos sobre a produo de CH4 in vitro utilizando 24
culturas h lote. A produo de metano (ml / kg de MS) no foi afetada pela gua extrato
de cravo, enquanto adio de metanol e de etanol extractos desta especiaria (a 2,5 ml / g
de substrato) inibiu a produo de CH4 (ml g MS /) por 35 e 83%, respectivamente, mas
a digestibilidade de alimentos para animais foi tambm reduzida. No entanto, este efeito
inibitrio no pode ser atribuda somente a fraco de leo essencial da planta, porque
S. aromaticum tambm contm elevada concentrao de taninos (Patra et ai., 2010), um
fator que pode explicar a maior eficcia do solvente contra extraces aquosas.
Chaves et al. (2008b) efeitos investigados de leo de folha de canela
(contendo 760 g / kg eugenol) em produtos finais de fermentao e methanogenesis in
vitro (Tabela 2). Quando fornecido a 250 mg / L, leo de folha de canela reduziu a
produo de CH4 sem afectar negativamente a produo total de AGV, embora no
alterar as propores relativas de cidos volteis produzidos. Ele no afectou a
proporo molar de etilo, mas diminuiu propionato e butirato aumentada.
Interessantemente, no estudo de Chaves et al. (2008b), monensina no diminuiu a
produo de CH4 na mesma medida como o leo essencial de folha de canela (isto ,
contra -57 -70%, respectivamente). Resultados de Chaves et al. (2008b) sugerem que o
leo de canela no exerceu seus efeitos antimicrobianos atravs o mesmo mecanismo
como monensina, mas sim que a inibio da produo de CH4 por este leo essencial
era devido directo inibio da metangenos rmen.
Benchaar e Chiquette (no publicado) efeitos do eugenol sobre a fermentao
microbiana ruminal e produo de CH4 estudada usando incubaes em cultura in vitro
de lote ao longo de 24 h (Tabela 2). A 300 mg / L, este composto no exerceu qualquer
efeito sobre ou VFA concentraes de CH4. A falta de alterao na concentrao total de
AGV seria visto como desejvel, mesmo que foi acompanhado por um declnio na
produo de CH4. Com efeito, a 400 e 500 mg / L, o eugenol diminuio da produo
de CH4 por -30 e -35%, respectivamente, sem alterar as concentraes de AGV
Benchaar e Chiquette (no publicado), assim, corroborando resultados de Chaves et al. (
2008b ) que , em doses de 400-500 mg / L , o efeito inibitrio do eugenol parece visar
metangenos , em vez de outra bactrias ruminais . No entanto , quando o eugenol foi
fornecido em doses mais elevadas de 600 , 700 , 800 e 900 mg / L, a reduo em CH4 a
produo foi acompanhada por uma forte reduo da produo total de AGV (at -88
% ) e a digesto de alimentos foi inibida ( Benchaar e Chiquette , no publicado) .
Tomados em conjunto , os resultados dos estudos de Chaves et al . ( 2008b) e Benchaar
e Chiquette (no publicado) indicam que o intervalo entre os efeitos benficos e
prejudiciais do eugenol sobre microbiana no rmen ecossistema estreito , o que limita
o uso potencial deste composto leo essencial em situaes de alimentao prticas para
mitigar emisses entricas CH4 de ruminantes.

3.4 . cinamaldedo
Cinamaldedo (3-Fenil-2-propenal de fenol), um no-fenilpropeno fenlico,
um componente importante de casca de canela (C. cassia) leo essencial. Tanto as
bactrias Gram-positivas e Gram-negativas tm sido relatados para ser sensvel ao leo
de canela e cinamaldedo (Ouattara et ai, 1997;. Helander et al, 1998;. Smith-Palmer et
al., 1998). Cinamaldedo foi mostrado para exibir actividade antimicrobiana equivalente
do timol e carvacrol fenlicos (Helander et al., 1998). No entanto, ao contrrio timol e
carvacrol, que no tem um grupo hidroxilo ou cido para actuar como um veculo de
protes para romper a membrana exterior ou esgotar o pool de ATP intracelular
(Helander et al., 1998). Alternativamente, as propriedades antimicrobianas de
cinamaldedo so pensado para ocorrer atravs da ligao do seu grupo carbonila e
inativao de enzimas microbianas (Burt, 2004).
Para o nosso conhecimento, apenas um estudo investigou efeitos do leo de
casca de canela e seu principal componente cinnamaldehyde em methanogenesis
ruminal. Macheboeuf et ai. (2008) demonstraram in vitro (Tabela 2) que o fornecimento
de 132 mg / L de cinamaldedo no teve nenhum efeito sobre o CH4, total de AGV,
acetato ou propionato de produo. A 264 mg / L, cinamaldedo diminuiu ligeiramente
CH4 produo, at 13%, sem alterar a VFA, a produo de acetato ou propionato,
sugerindo que, nesta dose, inibiu rmen methanogenesis agindo diretamente contra
methanogens rmen. Na 396 mg / L, cinamaldedo diminuio da produo de CH4
19%, bem como a produo ofVFA (-13%), acetato (-7%) e propionato de metilo (-
22%). A 661 mg / L, quase completamente inibida produo de CH4 (-94%) e
dramaticamente reduzida AGV (-60%), acetato de (-55%) e propionato de metilo (-
92%) concentraes. Tal alteraes indicam que, em doses elevadas, a actividade
antimicrobiana de cinamaldedo suficiente para inibir completamente quase
metabolismo microbiano.
Quando casca de canela leo essencial (Cinnamomum verum, contendo 790
g / kg cinnamaldehyde) foi avaliada sob a mesmas condies experimentais, no mesmo
estudo, a concentrao mnima necessria para inibir a metanognese do rmen foi de
500 mg / l (fornecendo 396 mg / L de cinamaldedo), que reduziu a produo de CH4 de
26% (Macheboeuf et al., 2008). Esta diminuio era mais do que 19% quando foi
includa cinamaldedo sozinhos com a mesma concentrao in vitro. Estes resultados
discordam daqueles de Busquet et al. (2006), que verificaram que cinamaldedo inibida
na produo de CH4 vitro para uma maior grau do que o leo de canela contendo 590
g / kg cinnamaldehyde. Macheboeuf et ai. (2008) sugeriram que, embora cinamaldedo
o principal componente ativo do leo de casca de canela, outros componentes
presentes em baixas concentraes pode interagir com cinnamaldehyde. Com efeito, a
fraco de leo essencial de casca de leo de canela foi relatado para conter igualmente
at 80 g / kg de eugenol (Davidson e Naidu, 2000). Sinergismo entre cinamaldedo e
eugenol tem sido relatada (Burt, 2004), o que pode explicar a atividade
antimethanogenic mais pronunciado do leo essencial de casca de canela contra
cinnamaldehyde.

3.5 . leo de alho e de seus constituintes

Intacta alho inteiro contm vrios compostos contendo enxofre com os


principais cistenas ser glutamil-Sallyl e sulfxidos Sallyll cistena (por exemplo, alina).
Estes compostos so convertidos em tioteres sulphinates, tais como alicina, atravs
reaes enzimticas quando o alho cru esmagado ou cortado (Fenwick e Hanley, 1985;
Amagase et al, 2001;. Amagase, 2006). Durante a extraco de leo por destilao a
vapor, alicina degrada para formar uma variedade de compostos organosulfurados
solveis em gordura, incluindo dialil trissulfureto, dissulfureto de dialilo, e o sulfureto
de dialilo (Block, 1985; Lawson, 1996). Estes compostos contendo S tem actividade
contra uma ampla gama de bactrias Gram negativas e Gram positivas, e os seus efeitos
contra bactrias patognicas so bem documentados (Reuter et ai, 1996;.. Ross et ai,
2001). Contudo, o potencial de leo de alho e seus derivados para inibir seletivamente
rmen methanogenesis s recentemente foi explorado.
Busquet et al. (2005b) foram os efeitos de relatrio firstto de leo essencial de
alho e dois dos seus compostos (isto , dissulfureto de dialilo e alil-mercaptano) sobre a
produo de CH4 (Tabela 2). Quando adicionado a 300 mg / L em 17 horas em
fermentaes de culturas de diluio in vitro, alilo mercaptano diminuio da produo
de CH4 de 19,5%, e a concentrao de AGV, sem alterar a digestibilidade. Ao mesmo
concentrao, alho e dissulfeto dialil reduziu a produo de CH4 por -74 e
-69%, respectivamente, mas digestibilidade da MS e concentrao de AGV tambm
estavam deprimidos. Isso dissulfureto de dialilo reduzida produo de CH4 na mesma
medida como o leo fraco de alho pode indicar que este composto contendo S
responsvel pela maior parte da actividade antimethanogenic de leo de alho. Efeitos de
leo essencial de alho em metanognese do rmen foi acompanhada por uma
diminuio na proporo de acetato, propionato e butirato enquanto que aumentou.
Altas concentraes de butirato, como resultado da incluso de leo de alho no as
incubaes in vitro pode indicar que ele altera fermentao ruminai de forma diferente
do que a monensina, que tende a diminuir o acetato: propionato e butirato relao de
concentrao (Calsamiglia et al., 2007).
O efeito inibitrio do leo essencial de alho na produo in vitro de CH4 foi
confirmada por Chaves et al. (2008b), que relataram que a 100 e 250 mg / L, a
diminuio da produo de CH4 por 69 e 72%, respectivamente, com nenhum efeito
adverso sobre VFA concentrao (Tabela 2). Curiosamente, em Busquet et ai. (2005b) e
Chaves et al. (2008b) o efeito inibidor da monensina na produo de CH4 foi menos
pronunciada do que quer os leos essenciais de alho ou o seu componente activo,
dissulfureto de dialilo. colectivamente, Estes resultados sugerem que, ao contrrio de
monensina, que inibe especificamente a bactrias gram-positivas do rmen, a
antimethanogenic efeito de alho e seus principais componentes podem ser o resultado da
inibio directa da metangenos rmen.
Busquet et al., (2005a, b) a hiptese thatthe efeito inibidor de leo de alho e
seus compostos contendo enxofre pode ser mediada atravs da inibio da enzima
coenzima 3-hidroxi-3-metilglutaril-A redutase (HMG-CoA redutase ou HMGR), uma
enzima que tem um papel importante na sntese de teres de isoprenides, o principal
componente das membranas celulares Archaea. Vrios estudos tm mostrado que
compostos organosulfurados negativo sobre a actividade da HMG-CoA, a enzima
limitante da velocidade na a biossntese do colesterol (Gebhardt, 1993; Gebhardt e
Beck, 1996). R
Resultados contraditrios tm sido relatados sobre os efeitos de alicina em
methanogenesis rmen. Busquet et ai. (2005b) relataram que alicina (3, 30, 300 e 3000
mg / L) teve nenhum efeito sobre as concentraes de AGV, acetato ou propionato,
sugerindo que rmen methanogenesis no foi inibida, embora o CH4 no foi medido
directamente. Usando uma tcnica de simulao de rmen, Hart et ai. (2006)
observaram que a adio de uma fonte comercial de alicina (Neem Biotech Ltd.,
Cardiff, UK) em concentraes de 2 e 20 mg / L no afecta a produo de AGV, acetato
ou propionato. No entanto, a 20 mg / L, a produo de CH4 era quase totalmente inibida
(isto , -94%). No mesmo estudo, a anlise por PCR em tempo real sugeriu um efeito
direto de alicina em diminuir ADN methanogen (isto , nmeros de metanognio), sem
qualquer efeito sobre o ADN bacteriano total. Portanto, parece que pode ter alicina um
efeito selectivo sobre as populaes microbianas no rmen (Hart et al., 2008). No
entanto, estas observaes no foram confirmadas por Kamel e col. (2008), que relatou
que a produo de CH4 no foi afectada pela adio de alicina a 0,5, 5 e 10 mg / L em
24 horas em incubaes in vitro, o que foi consistente com a ausncia de efeito sobre a
concentrao de AGV e as propores molares de etilo e propionato de etilo (Tabela 2).
Dada a extenso para a qual a produo de CH4 foi reduzido (isto , -94%) no estudo de
Hart et ai. (2006), pode-se esperar que a alicina, tambm, poderia ter resultado na
inibio da metanognese ruminal em Kamel et al. (2008), mesmo se a dosagem foi
inferior (10 contra 20 mg / L).
possvel que os micrbios do rmen so capazes de adaptar-se e degradar
alguns S contendo componentes de leo de alho (Hart et ai., 2008). Com efeito, Ohene-
Adjei et al. (2008) observaram que a alimentao de cordeiros com leo essencial de
alho em 200 mg / kg MS ingerida no afetar nmero de cpias do total de 16S rRNA
Archaea, mas o aumento da diversidade de bactrias metanognicas incluindo
Methanosphaera stadtmanae, metano brevibacter smithii, e alguns grupos incultos. O
aumento da diversidade de methanogens pode ser um reflexo da capacidade de
micrbios do rmen para se adaptar a esses compostos. Utilizando um sistema de
cultura in vitro de lote ao longo de 24 h, Busquet et ai. (2005b) observaram que, a altas
concentraes de 300 mg / L, de dialilo dissulfureto exibiram actividades
antimicrobianas por diminuio da concentrao de AGV e proporo molar de etilo,
mas aumentou a proporo molar de propionato, que deve resultar em menor produo
de CH4. No entanto, estes efeitos no foram observados por Busquet et ai. (2005b),
quando a mesma composto foi avaliada na mesma concentrao em um sistema de
cultura contnua de 8 d incubao, sugerindo possvel adaptao e / ou degradao de
dissulfureto de dialilo por micrbios do rmen. A adaptao de micrbios do rmen
para leos essenciais pode resultar de mudanas nas populaes e / ou mudanas nas
espcies microbianas individuais microbianos (Benchaar et al., 2008b).
3.6 . leo essencial de rbano

A pesquisa extensiva tem sido conduzida na sia, particularmente no Japo,


para avaliar o potencial de o leo essencial de rbano para manipular fermentao
microbiana rmen e diminuir a produo de CH4 ruminal. Rbano (Armoracia
rusticana) uma planta perene da famlia Brassicaceae. O principal componente de leo
essencial de rbano o isotiocianato de alilo, um composto no-fenlicos contendo
enxofre, que tem sido demonstrado que possuem actividade antimicrobiana (Tajkarimi
et al., 2010).
Mohammed et ai. (2004) examinaram os efeitos de nveis crescentes (170, 850,
1700 mg / l) de -ciclodextrina encapsulado leo essencial de raiz forte sobre
fermentao microbiana ruminal em 6 culturas h lote (Tabela 2), e observou que a
produo de CH4 diminuiu linearmente com o aumento dos nveis de leo essencial.
Estas alteraes foram acompanhadas por uma mudana em propores de AGV no
sentido de mais propionato e menos acetato, com acmulo de H2 e um aumento na
concentrao de AGV. Quanto maior VFA concentrao algo surpreendente, uma vez
que no consistente com a atividade antimicrobiana do leo essencial de rbano. O
aumento da concentrao de H2 uma indicao de um possvel efeito directo do leo
essencial de rbano em metanogenos. Se tais acumulao de H2 ocorre in vivo, a
atividade de fermentao seria deprimido e alimentar desempenho digesto e animal
prejudicados (Beauchemin et al., 2009).
No mesmo estudo , Mohammed et al. ( 2004) observaram que a uma taxa
elevada a incluso de 20 g / kg de peso seco da dieta , encapsulado leo essencial de
raiz forte diminuio da produo de CH4 de 19% em novilhos sem afetar a
digestibilidade da dieta , mas o consumo de MS estava deprimido em 10% ( Tabela 2 ) .
A suplementao com leo de rbano aumento da proporo molar de propionato com
um declinar em etilo e os nmeros de metangenos , mas sem efeito sobre o nmero
total de protozorios , bactrias viveis totais , sulfato de reduo de bactrias, bactrias
celulolticas ou acetogens . No entanto , o leo essencial de rbano diminuiu o nmero
de methanogens in vivo confirmam que a atividade antimethanogenic de leo essencial
de rbano modulada principalmente atravs do inibio direta da methanogens.

3.7 . leo de menta


leos essenciais de espcies de Mentha e vrios dos seus
componentes (mentol, menthone, p-cimeno, limoneno, linalol, pineno,
pineno e 1,8-cineol) foram pensado para possuir atividade
antimicrobiana contra bactrias Gram positivas e Gram bactrias
negativas (Marotti et al, 1994;.. Imai et al, 2001).
Resultados contraditrios tm sido relatados sobre os efeitos
do leo de hortel-pimenta sobre microbialfermentation rmen e
rmen methanogenesis. Tatsuoka et ai. (2008) observaram nenhuma
atividade antimethanogenic de ciclodextrina (ou) complexo petrolfero
-peppermint (83, 167 e 250 mg / L de fluido de cultura) na produo
in vitro de lote de fermentao de cultura, o que foi consistente com a
falta de efeito do presente leo essencial na concentrao total de
AGV e as propores molares de acetato e propionato de etilo (Tabela
2).
Agarwal et ai. (2009) avaliaram os efeitos de leo de hortel
pimenta essencial (0,33, 1,0 e 2,0 ml / L de fluido de cultura) no
rmen methanogenesis usando um 24 h no sistema de cultura in vitro
de lote (Tabela 2). A produo de metano (ml / g de MS digestvel)
diminuiu linearmente com nveis crescentes de leo de hortel-
pimenta, mas a digestibilidade da dieta tambm estava deprimido em
todos os nveis enquanto o total VFA concentrao foi pressionado
somente nos dois nveis de incluso mais altos. A reduo na
produo de CH4 foi acompanhada pela uma diminuio no nmero e
actividade dos protozorios (isto , holotrichs e spirotrichs).
Resultados semelhantes foram observados por Ando et al. (2003),
que relataram uma diminuio no nmero total de protozorios,
incluindo Entodinum, Isotrica e Diplodium no lquido ruminal de
bovinos suplementados com 200 g / d (54 g / kg MS ingerida) de
hortel secas ao sol. Cerca de 25% dos methanogens ruminais so
associado com protozorios (Newbold et al., 1995) e, por conseguinte,
uma parte do efeito anti metanognica de hortel-pimenta essencial
leo pode ser devido a uma actividade antiprotozoria.
No estudo realizado por Agarwal et ai. (2009), o nmero de
metangenos aumento no nvel mais baixo (0,33 ml / L) de hortel-
pimenta suplementao de leo, o que contradiz a reduo na
produo de CH4. No entanto, em doses mais elevadas de 1,0 e 2,0
ml / L, leo de hortel nmero reduzido de methanogens, que
concorda com a produo de CH4 reduzido. O padro de VFA
produo no era tpico do que quando a produo de CH4 inibida
(isto , um acetato propionato ratio). Na verdade, em o nvel mais
baixo de leo de hortel-pimenta, o acetato: propionato proporo
permaneceu inalterado, enquanto, em concentraes mais elevadas,
isto aumentada. Esta uma indicao de que o excesso de H2
resultante da inibio da actividade de metanognio e / ou nmeros
no estava dirigida para pias H2 alternativos, tais como propionato.
Resultados de Agarwal et ai. (2009) sugerem que o antimethanogenic
actividade de leo de hortel-pimenta principalmente devido ao seu
efeito directo sobre a actividade e / ou nmero de methanogens e
protozorios. Contudo, cuidados devem ser tomados para garantir
que a obteno de supresso de CH4 utilizando leo de hortel no
atravs de uma reduo geral actividade de fermentao, tal como
observado por Agarwal et ai. (2009).

3.8 . leos essenciais de ruibarbo e frangula

Garca-Gonzlez et al. (2008b) realizou um estudo para examinar 158 plantas,


ervas e especiarias para o seu potencial para reduzir CH4 produo in vitro. Das fontes
de plantas examinadas, para alm de lmpadas de alho (Allium sativum), rizomas e
razes de ruibarbo (Rheum officinale) e casca de frangula (Frangula alnus) tinham
propriedades antimethanogenic. Quando ruibarbo e plantas frangula Foram includos em
incubaes in vitro a 135 mg / g de MS ou 1400 mg / L de fluido de cultura, a produo
de CH4 em mmol / g de DM diminuiu 75 e 45% em relao ao controle. Esta alterao
foi acompanhada por um acetato propionato rcio (-40 e -29%), e reduo na produo
total de AGV (-15 e -13%) e digestibilidade da MS (-4 e -5%), para ruibarbo e frangula,
respectivamente.
Em uma resposta dose subsequente de 24 horas do estudo in vitro (Garcia-
Gonzalez et al., 2008a), ambas as plantas causadas mudanas similares em fermentao
ruminal, resultando em uma reduo linear na produo de CH4 e no acetato:
propionato razo quando adicionado em 500, 950, 1400 e 1850 / L fluido de cultura mg
de MS da planta. A produo de butirato tambm aumentou em todas as dosagens. Na
maior doses (isto , 1400 e 1850 mg / L), ruibarbo e frangula afectada adversamente
degradao de substrato tal como reflectido pelo total reduzido A produo de AGV,
uma resposta que no ocorreu com doses inferiores de 500 e 950 mg / L.
Curiosamente, no mesmo estudo, os efeitos do ruibarbo e frangula em CH4 e
acetato: propionato proporo foram semelhantes para aqueles com monensina em 5 M.
No entanto, enquanto a monensina diminuiu a produo de butirato, os aditivos planta
aumentou produo de butirato (Garca-Gonzlez et al., 2008a). Outra diferena
relatada entre os aditivos de plantas e monensina oftreatment foi o efeito na recuperao
de H2 estimado estequiometricamente. Com efeito, H2 recuperao diminuiu em todas
as doses de ruibarbo e frangula enquanto ele no foi afetada pela monensina.
Com base nestas observaes, Garca-Gonzlez et al. (2008a) a hiptese de
thatthe compostos ativos das plantas de ruibarbo e frangula reduzir a produo
de CH4 principalmente ser directamente inhibitingmethanogen actividade e / ou
nmeros. Vale ressaltar que Garca-Gonzlez et al. (2008a) no identificou os
metablitos secundrios responsveis pela atividade antimethanogenic de plantas de
ruibarbo e frangula. Apesar de outros metabolitos secundrios, tais como taninos,
oxlico cidos e alcalides esto em plantas de ruibarbo e frangula, derivados de
antraquinona so os principais compostos secundrios e podem ser responsveis pela
maior parte da actividade antimethanogenic destas plantas. Garca-Lpez et al. (1996)
relataram que, in vitro, 9,10-antraquinona diminuio da produo de CH4 e o acetato:
propionato proporo, mas resultou na acumulao de H2, sugerindo um efeito
inibitrio direto deste componente importante do ruibarbo e frangula leos essenciais
sobre a atividade methanogen e / ou nmeros.

3.9 As misturas de leos essenciais e / ou compostos de leos essenciais


Efeitos aditivos, antagonistas e sinrgicos ter ocorrido entre os componentes de
leos essenciais (Burt, 2004), sugerindo que as combinaes de leos essenciais de
composio diferente, ou combinaes especficas de metabolitos secundrios de leo
essencial, pode resultar no aditivo e / ou efeitos sinergticos que pode aumentar a
eficincia da fermentao microbiana rmen. Como consequncia, um certo nmero de
produtos comerciais, combinando diferentes leos essenciais e / ou compostos de leos
essenciais so actualmente disponvel no mercado, mas limitada est disponvel a
pesquisa sobre o potencial de produtos comerciais para inibir especificamente produo
de CH4 em ruminantes (Benchaar et al., 2008b, 2009). A avaliao dos efeitos de uma
mistura comercial de leos essenciais (Crina Ruminantes; Akzo Nobel Surface
Chemistry Ltd., St. Albans, Hertfordshire, Reino Unido) que consiste em timol,
eugenol, vanilina e limoneno, McIntosh et al. (2003) observaram que a inibio in vitro
do crescimento do methanogen M. smithii ocorreu apenas depois de 1000 mg / L de
produto foi includo. Num estudo in vivo, Beauchemin e McGinn (2006) observou
nenhuma mudana na produo de CH4, embora digestibilidade do alimento diminuiu
7% em gado de corte foram suplementados 1 g / d deste mesmo produto (Mesa 2).
Assumindo um volume de rmen de 30 L, a concentrao mxima no rmen de leos
essenciais (isto , imediatamente conseguida aps a alimentao) no estudo de
Beauchemin e McGinn (2006) seria ~33 mg / L, o que 33 vezes menor do que a
utilizada No estudo in vitro de McIntosh et al. (2003). Comparao entre estes estudos
sugerem que o cuidado deve ser tomado em extrapolao dos dados in vitro para as
condies in vivo. Com efeito, muitas das concentraes de leos essenciais que no
obtiveram respostas de fermentao favorveis in vitro so demasiado elevada para
aplicao in vivo (Beauchemin et ai., 2009).

4. Desafio e direes futuras

A actividade antimicrobiana dos leos essenciais contra uma variedade de


microorganismos foi demonstrada em vrios estudos . leos essenciais e os seus
componentes tm sido mostrados para inibir o crescimento de bactrias patognicas ,
tais como E. coli O157 : H7 , Salmonella spp . e S. aureus . A atividade antimicrobiana
bem documentados de leos essenciais levou os investigadores a examinar o seu
potencial para modificar as populaes microbianas ruminais , a fim de aumentar a
eficincia da fermentao do rmen e melhorar a utilizao de nutrientes. O
ressurgimento do interesse no uso de leos essenciais em nutrio de ruminantes e de
produo tem aumentou , particularmente na Europa aps a proibio do uso de
antibiticos promotores do crescimento, incluindo ionforos , na pecuria Produo.
Nos ltimos anos, o nmero de artigos de pesquisa publicados sobre os efeitos
de leos essenciais e seus componentes no rmen fermentao microbiana aumentou
( veja avaliaes de Calsamiglia et al, 2007 ; . . Benchaar et al , 2008b , 2009). A maior
parte desta pesquisa de curto prazo e tem usado in vitro systems.As estes compostos
so relativamente novos suplementos na alimentao dos animais ( Wallace , 2004) , os
seus efeitos sobre o rmen de fermentao microbiana e efeitos nutricionais gerais so
desconhecidos . Alm disso , o gama de leos essenciais disponveis extensa ( >
3000 ; Van de Braak e Leijten , 1999) e por isso os pesquisadores tm se baseou
fortemente em em modelos in vitro de lote e tcnicas de cultura contnua para investigar
os efeitos de leos essenciais e os seus principais constituintes na fermentao ruminal
e, consequentemente , tentar prever os efeitos in vivo.
Devido importncia de produo de CH4 entrico na nutrio de ruminantes
e a produo ( isto , perda de energia e a contribuio GEE para emisses ) , um
nmero de estudos investigaram o potencial de leos essenciais e componentes de leo
essencial para inibir selectivamente a metanognese do rmen . Com base nos
resultados at data ( ver Tabela 2 ) , verifica-se que os compostos fenlicos (Isto ,
timol , eugenol, carvacrol ) ou leos essenciais com altas concentraes desses
compostos fenlicos , leo de canela e seu principal cinamaldedo componente , leo
essencial de alho e seus derivados , em particular, dissulfureto de dialilo , e outros leos
essenciais ( Isto , rbano , ruibarbo , frangula leos essenciais ) pode ser eficaz , pelo
menos in vitro , na diminuio da produo de CH4 . Contudo, o uso de leos essenciais
na alimentao dos ruminantes para reduzir as emisses de CH4 entricos pode ser
limitada por vrios motivos.
(1) A partir de publicada em estudos in vitro, parece que altas concentraes de
leos essenciais ( isto , > 300 mg / L de fluido de cultura ) so necessria para inibir a
metanognese do rmen . Estes nveis so demasiado alta para ser alcanada in vivo e
so impraticveis no termos de alimentao devido aos efeitos potencialmente
prejudiciais sobre a eficincia da fermentao ruminal e palatabilidade, possvel
problemas de toxicidade ( Benchaar et al . , 2008b , 2009) , e o custo elevado.
( 2 ) Devido elevada dosagem necessria para reduzir a produo de CH4 , e
devido ao amplo espectro de actividade do essencial leos , os efeitos benficos da
inibio da CH4 so muitas vezes contrabalanada por uma inibio global da produo
total de AGV e alimentar digesto que, naturalmente , no desejvel devido s
consequncias negativas sobre a produtividade do animal.
(3) populaes microbianas exibem uma notvel capacidade de adaptto e / ou
degradar uma ampla variedade de metabolitos secundrios de plantas tais como
saponinas e taninos (Newbold et ai, 1997;.. Makkar et al, 1995; Makkar, 2003) e o
mesmo parece ser verdade para leos essenciais, em especial nas taxas de dosagem
"baixos" in vitro. Com efeito, os micrbios do rmen adaptado para leos essenciais
quando eles foram administrados em doses baixas '' (Cardoso et ai, 2004: 0,22 mg / L;
Busquet et ai, 2005c:.. 2,2 mg / L), mas em maior doses (Busquet et ai, 2005a: 300 mg /
L; Fraser et ai, 2007:.. 500 mg / L) efeitos de leos essenciais parece estar sustentada ao
longo do tempo (por exemplo, 9 d de cultura contnua). No entanto, estes nveis so
muito elevados e impraticveis para a alimentao de animais, devido a efeitos
potencialmente negativos sobre a eficincia da fermentao no rmen. McIntosh et al.
(2003) mostraram que bactrias espcies tais como P. e P. ruminicola bryantii adaptado
e eram capazes de crescer em concentraes maiores de leos essenciais. O diversidade
de metangenos foi mostrada para aumentar quando os animais foram alimentados com
leos essenciais (Ohene-Adjei et al., 2008), que uma evidncia adicional para suportar
a capacidade de micrbios do rmen para se adaptar aos leos essenciais. Esta resposta
adaptativa pode explicar por que, at data, as respostas in vitro (isto , a exposio de
curto prazo) no so to marcado como in vivo (i.e., a exposio a longo prazo). Na
verdade, uma srie de estudos in vivo no relataram nenhum efeito sobre o consumo de
rao, as concentraes totais de AGV e padro de VFA (isto , acetato: propionato
rcio) quando os leos essenciais e / ou os seus componentes principais como os
compostos individuais e / ou misturas foram alimentados com a vacas leiteiras
(Benchaar et ai, 2006b, 2007b, 2008a;. Yang et ai, 2007;.. Spanghero et ai, 2009;.
Santos et al, 2010), carne bovina (Beauchemin e McGinn, 2006; Benchaar et al, 2006a;.
Yang et al, 2010a, b, c), e ovinos (Newbold. et al., 2004; . Chaves et ai, 2008a, C;
Malecky et al., 2009). Embora as emisses de CH4 entricas no foram quantificados
nestes estudos, a falta de efeitos de leos essenciais sobre o consumo ea fermentao
ruminal caractersticas sugerem que, sob Nessas condies, no h mudanas na
metanognese ruminal ocorreu. A adaptao de micrbios do rmen para leos
essenciais representa um grande desafio para a utilizao destes compostos para mitigar
as emisses de CH4 entricos de ruminantes.
(4) Apesar do aumento do interesse no uso de leos essenciais para manipular
fermentao ruminal , pouca investigao foi concluda para determinar o destino de
leos essenciais e seus compostos no tracto gastro - intestinal dos animais ,
especialmente
ruminantes. Existem indicaes de que alguns leos essenciais, tais como terpenos,
podem ser degradados no gastro-intestinais trato. Cluff et ai. (1982) relataram que 80%
das monoterpenides contidos em artemsia (Artemsia tridentata L.) desapareceu a
partir do rmen de veados selvagens. White et al. (1982) observou um grau semelhante
de desaparecimento (isto , 77%) de monoterpenides sagebrush do estmago de
coelhos pigmeus. Mais recentemente, Malecky et ai. (2009) relataram alta taxas de
desaparecimento da terpenos linalol, p-cimeno e - e pineno do rmen de caprinos
leiteiros. Diferente mecanismos foram propostos para explicar o desaparecimento de
terpenos do leo essencial a partir do tracto digestivo. Estes incluem, bioconverso pela
microflora do rmen (Welch e Pederson, 1981;. Schlichtherle-Cerny et al, 2004), para
transferir a fase gasosa do rmen, devido volatilidade dos terpenos que resultou a sua
perda durante a eructao (Cluff et ai, 1982;. Branco Et al., 1982) e a absoro atravs
da parede do rmen para o sistema sanguneo e excreo na urina (Michiels et al., 2008;
Malecky et al., 2009). A degradao e / ou converso de terpenos no interior do tracto
gastrointestinal pode explicar a discrepncia nos resultados de in vitro e in vivo
(Benchaar et al., 2008b, 2009). No entanto, dada a diversidade de essencial leos em
termos de estrutura qumica, itis possvel que diferenas existin taxas em que as
populaes microbianas degradar estes metablitos secundrios. Por exemplo,
Broudiscou et ai. (2007) investigaram o grau de desaparecimento da 10 monoterpenos
limoneno, -myrcene, -ocimene, pineno, sabineno,-terpineno e timol, e os sesquiterpenos
canfeno, -cariofileno e -copaene quando estes compostos foram adicionados a uma alta
dose de 2000 mg / L em uma 24 h in vitro fermentao cultura descontnua. Os
resultados revelaram que o timol, canfeno, -cariofileno e (-) - limoneno eram mal
degradada, enquanto -copaene, mirceno, -ocimene, pineno e sabinene foram altamente
degradada. Contudo, embora fornecidos em concentraes elevadas, a maioria dos
terpenos investigados no inibiu a actividade microbiana. Michiels et ai. (2008)
relataram que o timol, carvacrol, eugenol e cinamaldedo eram principalmente, e quase
completamente, absorvida a partir do estmago e do intestino delgado proximal em
leites aps a administrao oral. degradao substancial de timol, carvacrol,
cinamaldedo e eugenol ocorreu no ceco (Michiels et al., 2008), e degradao e
absoro tambm podem ocorrer no rmen. Com base nestas consideraes,
necessria mais investigao para determinar a medida em que os leos essenciais
podem ser degradados e / ou metabolizada no tracto digestivo dos ruminantes
(5) H pouca informao disponvel sobre a transferncia de metablitos
secundrios de plantas, tais como leos essenciais em produtos de origem animal (por
exemplo, carne e leite) e sua eventual toxicidade para os seres humanos. H evidncias
de que os leos essenciais pode ser absorvido a partir de diferentes partes do tracto
digestivo dos animais, de modo que o potencial de resduos em produtos de origem
animal no pode ser excluda. De fato estudos de Viallon et al. (2000) e Tornamb et ai.
(2006) demonstraram a transferncia de terpenos em plantas forrageiras ao leite de
pastagem vacas, e que estes leos essenciais podem modificar as propriedades
organolpticas dos produtos lcteos. extratos de plantas so percebidos como seguros
porque so produzidos naturalmente. No entanto leos essenciais evoluiu para proteger
plantas contra herbvoros, patgenos e estressores abiticos (Greathead, 2003). Assim,
eles podem ser txicos para os animais se consumido em doses elevadas. Pouco se sabe
sobre os mecanismos de toxicidade, e as doses txicas, para os animais e no h uma
necessidade de pesquisar a tolerncia toxicidade dos animais de derivados de plantas,
leos essenciais. Apesar de vrios leos essenciais so considerados como seguros
(GRAS) pela FDA dos Estados Unidos, uma pesquisa mostrou que estes compostos
podem ser txicos. Por exemplo, um nmero de componentes de leo essencial (por
exemplo, o carvacrol, cinamaldedo, eugenol, timol) foram registados pela Comisso
Europeia para o uso como aromatizantes em gneros alimentcios. No entanto essencial
compostos de petrleo, como o estragol e metil eugenol foram excludos da lista em
2001 devido s propriedades genotxicos (Burt, 2004). O S contendo compostos em
alho e cebola foram mostrados para ser responsveis pelos efeitos haemotoxic em
bovinos de corte (Rae, 1999) e cavalos (Pearson et al., 2005). A citotoxicidade de
compostos organo-enxofre de alho Demonstrou como danos celulares (Amagase, 2006).
Utilizao de leos essenciais como aditivos alimentares na produo de gado tambm
deve ser seguro para o pessoal de fabrico de alimentao animal e trabalhadores
agrcolas. Na verdade, estes compostos tm sido relatados ser potencialmente irritantes
e causar dermatite alrgica (Burt, 2004), sugerindo que o cuidado deve ser tomado por
usurios no manuseio de tais aditivos alimentares
(6) Foi alegado que, ao contrrio de antibiticos convencionais, no possvel
para os microrganismos de desenvolver resistncia de extractos de plantas, tais como
antimicrobianos leos essenciais. As razes incluem os leos essenciais que so
misturas complexas de compostos qumicos, muitos dos quais possuem actividade
antimicrobiana, com diferentes modos de aco que torna impossvel para os
microrganismos para estabelecer mecanismos de resistncia (Briskin, 2000) e que o
modo de ao de extratos de plantas contra microrganismos estrutural, em vez de no
nvel do ADN (Mellor, 2000). Estas alegaes podem ser contestadas porque a
resistncia microbiana no limitada a um nico modo de aco e tambm no
dependente do modo de aco sendo atthe nvel de DNA. Teoricamente, allthatis
necessria para a criao de bactrias resistentes para que as bactrias aleatoriamente
adquirir um gentipo que confere uma vantagem de sobrevivncia na presena do
composto (s) com propriedades antimicrobianas de interesse, seja ele um antibitico ou
um leo essencial. Criao de populaes bacterianas resistentes facilitada por
permuta de genes, em particular, os responsveis por resistncia, que so transportados
em plasmdeos, entre as bactrias da mesma e espcies relacionados por um processo de
conjugao ou de acoplamento bacteriana. At agora, tem havido pouca pesquisa para
investigar resistncia bacteriana s ervas e especiarias com propriedades antibacterianas.
No entanto, Brul e Coote (1999) esta avaliao tema e Nelson (2000) relataram que S.
aureus desenvolveu resistncia a rvore do ch (Melaleuca alternifolia) de leo
essencial. Mais pesquisas so necessrias para determinar a capacidade das bactrias
ruminais de desenvolver resistncia a leos essenciais

5. Concluses

Com base nas consideraes descritas nesta anlise , verifica-se que o potencial
de leos essenciais para inibir selectivamente rmen methanogenesis foi demonstrada in
vitro principalmente quando estes metabolitos secundrios foram utilizados em nveis
de dosagem elevados . Na aplicao in vivo dos aditivos essenciais para a alimentao
animal base de leo pode ser limitada pela adaptao de micrbios do rmen para
estes compostos e a capacidade da microflora do rmen para degradar e / ou metabolizar
estes metabolitos secundrios . toxicidade para os animais , utilizadores e
consumidores , palatabilidade e efeitos sobre a qualidade organolptica dos produtos de
origem animal requerem mais investigao para garantir que os compostos podem ser
utilizados com segurana na produo de gado para aumentar a produtividade animal e
reduzir impactos ambientais da produo animal.