PRE INFORME DE PRACTICAS DE LABORATORIO

Presentado por:

ADRIANA ESPERANZA TRUJILLO MARTINEZ

CODIGO: 37551212

Tutor virtual:

GOLDA MEYER TORRES VARGAS

UNIVERSIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA (UNAD)

16 de marzo de 2013
2. DESARROLLO DE LAS PRCTICAS

No. 1: METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE

AMINOACIDOS Y PROTEINAS
OBJETIVOS

Que el estudiante reconozca los aminocidos como unidades estructurales

de las protenas.

Que el estudiante analice, mediante reacciones cualitativas coloreadas la

presencia de aminocidos y enlaces peptdicos en las muestras.
Que el estudiante establezca la relacin entre la estructura y la funcin de las
protenas y prdida de esta al variar su PH y solubilidad (precipitacin y
desnaturalizacin).

1. Captulo 1 y 2 de la unidad 1: Biomolculas del mdulo del curso,

enfatizando en:
a. Clasificacin de aminocidos:
Definicin. Los aminocidos son las unidades fundamentales de las protenas;
la funcin biolgica de una protena depende de su composicin y conformacin
de tales unidades.
Consta de un grupo amino, un grupo carboxilo, un tomo de hidrogeno y un
grupo distinto R. En el organismo tambin se les encuentra en forma individual
participando en el metabolismo, por ejemplo a pH fisiolgico (7.4), el triptfano
est implicado en el crecimiento y en la produccin hormonal. Si por alguna
razn, es modificado el pH de 7.4 a 5.9, este aminocido llegar a estar en la
forma de in Zwitterion, en este estado, el balance de cargas elctricas es igual
a cero.

Aminocidos no polares o hidrofobicos: En estos aminocidos la

cadena lateral, aliftica o aromtica, no tiene grupos que interacten
fcilmente con solventes acuosos y de ah el nombre de hidrofobicos.
A este grupo pertenecen: La alanina (Ala), Vallina (Val), Leucina (Leu),
Isoleucina (Ile) , prolina (Pro), fenilamina (Phe), triptfano (Trp), metionina (Met).

Aminocidos polares no cargados: A diferencia de los anteriores, estos

AA se solubilizan con mayor facilidad en solventes acuosos y su grupo R
no posee cagas positivas o negativas a PH fisiolgico, es decir, PH
cercanos a 6,5 y 7,0.
A este grupo pertenecen: Glicina (Gli), Serina (Ser), Treonina (Thr), cistena
(CySH), cistina (CySSCy), tirosina (Tyr), Asparagina (Asn), glutamina (Gln),
hidroxi-prolina (OH-Pro).

Aminocidos cidos: Se caracterizan porque su grupo R-(COOH) est

cargado negativamente a PH fisiolgico. Los AA con su respectivo pk a
son:
Asprtico (Asp), glutmico (Glu).
En consecuencia pierden su carga nicamente a PH bastante cido y en su
forma libre o como constituyentes de las protenas estn cargados
negativamente.

Aminocidos bsicos: En ellos, el grupo R (generalmente -NH) est

cargado positivamente a PH fisiolgico.
A este grupo pertenecen: Histidina (His), Lisina (Lys), Arginina (Arg).
b. Enlace peptdico: Es un enlace covalente entre el grupo amino (NH 2) de un
aminocido y el grupo carboxilo (COOH) de otro aminocido. Los pptidos y las
protenas estn formados por la unin de aminocidos mediante enlaces
peptdicos. El enlace peptdico implica la prdida de una molcula de agua y la
formacin de un enlace covalente CO-NH. Es, en realidad, un enlace amida
sustituido.
c. Niveles de estructuracin: Se considera que cuando un pptido sobrepasa
los 40-50 AA tenemos una cadena polipeptdica que llamamos protena. Estos
polmeros poseen un considerable grado de complejidad que se expresa en
todas las protenas en por lo menos tres niveles de estructura y en algunas
hasta cuatro.

Estructura primaria: Esta definida por la composicin en AA y su

secuencia en la protena. La determinacin de la composicin de una
protenas se logra sometiendo la protena a una hidrlisis drstica con
cidos o bases (generalmente HCL 6N y Ba(OH) 2 4N) y analizando
cuantitativamente la mezcla AA libres que resultan.
La primera protena a la que se le determino su estructura primaria fue la
Insulina.

Estructura secundaria: Es el ordenamiento espacial de las cadenas

polipeptdicas resultante de interacciones por puentes de hidrogeno
formados nicamente entre los tomos que intervienen en el enlace
peptdico.
En las protenas fibrosas que tienen un papel estructural, este problema se
resuelve mediante la adopcin de uno de los siguientes tipos de estructura:

Grupo I: Estructura de la hoja plegada, se caracteriza por tener una

unidad de repeticin de 6.5 a 7.0 , con formacin de puentes de
 hidrogeno intermoleculares entre al menos dos cadenas o segmentos de
cadenas que pueden ser paralelas (van al mismo sentido) o anti paralelas
(van en sentido opuesto). La protena ms importante de este grupo es la
Fibroina de la seda, constituida bsicamente por Gly 45%, Ala 26% y Ser
12% con una secuencia repetitiva.

Grupo II: Estructura en -hlice, posee una unidad de repeticin de 5.1 a

5.4 , y los puentes de hidrogeno son exclusivamente intramoleculares, el
ordenamiento espacial de las cadenas polipeptdicas resultante de las
interacciones por puentes de hidrogeno formados nicamente entre los
tomos de hidrogeno del nitrgeno y el oxgeno del carbono carbonlico
que conforman el enlace peptdico. A este grupo pertenece la -queratina,
que es el constituyente ms importante de fibras como el cabello y lana y
de tejidos de proteccin como la piel, plumas, cuernos, uas, etc.

Grupo III: Estructura de triple hlice, posee una unidad de repeticin de

2.8 , y los puentes de hidrogeno se forman entre tres cadenas
polipeptdicas que se enrollan entre s, de manera helicoidal. El mejor
ejemplo es el colgeno, protena que constituye un 30% de las protenas
del cuerpo humano y est presente en tejido conjuntivo, piel, huesos,
tendones.

Estructura terciaria: Consiste en la distribucin espacial de todos los

grupos de la protena, es decir, su conformacin tridimensional.

Puentes de hidrogeno intramoleculares o intermoleculares, cuando la

protena tiene ms de una cadena polipeptdica, que se forman entre
cadenas laterales, o entre cadenas laterales y atamos del enlace
peptdico.

Enlaces salinos o ionices que resultan de la atraccin electrosttica entre

grupos R con cargas opuestas

Uniones hidrofobicas provenientes de las interacciones entre cadenas

laterales de AA no polares, que tienden a asociarse entre s excluyendo el
agua.

Enlaces covalentes entre grupos R de CySH (enlaces disulfuro), Lys y

Glu o Asp (enlace amida).
Caractersticas estructurales comunes:

La protena es una molcula compacta cuya forma se asemeja en

muchos casos a una esfera con cavidades protuberancias.

Los aminocidos polares y los cargados estn generalmente situados en

el exterior, en ntimo contacto con el medio acuoso circundante.
 Los aminocidos hidrofobicos se ubican preferencialmente en regiones
internas donde se encuentran pocas molculas de agua iones.

Los segmentos de -hlice que se presentan estn interrumpidos por Pro

o por OH-Pro.

En una protena dada proveniente de diferentes especies, la

conformacin es similar.

Estructura cuaternaria: Esta dada por la asociacin reversible de varias

cadenas polipeptdicas (monmeros) iguales o diferentes. Este tipo de
estructura solo la poseen algunas protenas. Un buen ejemplo de este
tipo de protenas es la hemoglobina (Hb) que se encuentra presente en
los glbulos rojos y tiene como funcin el transporte de oxgeno a los
tejidos.
d.Solubilidad de protenas: desnaturalizacin por calor y PH extremos.
Precipitacin por metales pesados, precipitacin acidica.

Desnaturalizacin por calor: es un cambio estructural de las protenas o

cidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su
ptimo funcionamiento y a veces tambin cambian sus propiedades
fsico-qumicas.

PH extremos: Los iones H+ y OH- del agua provocan efectos parecidos,

pero adems de afectar a la envoltura acuosa de las protenas tambin
afectan a las cargas elctricas de los grupos cidosy bsicas de las
cadenas laterales de los aminocidos. Esta alteracin de la carga
superficial de las protenas elimina las interacciones electrostticas que
estabilizan la estructura terciaria y a menudo provoca su precipitacin. La
solubilidad de una protena es mnima en su punto isoelctrico, ya que su
carga neta es cero y desaparece cualquier fuerza de repulsin
electrosttica que pudiera dificultar la formacin de agregados.

Precipitaciones por metales pesados: Los metales pesados tienen el

efecto de precipitar protenas de sus soluciones creando enlaces (cross-
linkings) entre los grupos amino libres y los grupos carboxilo libres.
2. Pruebas cualitativas: enfatizar en las reacciones qumicas que tienen
lugar y el principio del mtodo:

Reaccin de la ninhidrina: La ninhidrina es un qumico que reacciona

con los aminocidos hallados en la transpiracin y forma un producto
azul-violeta que es conocido como prpura de Ruhemann. Es un polvo
que necesita ser disuelto en un solvente y luego puede aplicarse sobre el
papel. La coloracin producida por la ninhidrina es independiente de la
coloracin original del aminocido. Esta prueba es positiva tanto para
protenas como para aminocidos. en aquellos casos donde no da
 positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no
hay protenas, pero si hay aminocidos libres.

Reaccin Xantoproteica: es un mtodo que se puede utilizar para

determinar la cantidad de protena soluble en una solucin, empleando
cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas
protenas con aminocidos portadores de grupos aromticos,
especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se
neutraliza con un lcali, se torna color amarillo oscuro
Segn las guas qumicas es una reaccin cualitativa, ms no cuantitativa. Por
ende determina la presencia o no de protenas. Para cuantificar se usa otra
reaccin, como la de Biuret, y se hace un anlisis espectro fotomtrico.

Reaccin de milln: Se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg)

en una parte de cido ntrico (HNO3). De esta forma, la presencia de
cantidades relativamente altas de mercurio conduce a la formacin de
Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en medio fuertemente cido
reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloracin roja
caracterstica. Al finalizar la reaccin, durante la cual se desprende gran
cantidad de xidos de nitrgeno, el reactivo se puede diluir con dos veces
su volumen en agua y deber ser decantada algunas horas despus la
solucin clara sobrenadante. Se deben tomar precauciones para la
correcta eliminacin de los residuos de mercurio.

Prueba de Pauly: Una reaccin colorimtrica para la identificacin de

compuestos imidazol que implica una reaccin con
diazobenzenesulphonate

Prueba de Nitroprusiato: es el compuesto inorgnico con

la frmula Na 2 [Fe (CN) 5 NO] 2H 2 O. Esta sal de color rojo, que es a
menudo abreviado SNP, es un potente vasodilatador. La sal de sodio se
disuelve en agua y en menor medida en etanol para dar soluciones que
contengan el di amonio Fe (CN) NO.

Reaccin de Sakaguchi: guanidinas en una solucin alcalina de

desarrollar un color rojo intenso cuando son tratados con -naftol y el
hipoclorito de sodio, una prueba cualitativa de forma gratuita arginina, o
en una protena. es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos
cortos y otros compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en
sustancias de composicin desconocida.

Prueba de biuret: Est hecho de hidrxido potsico (KOH) y sulfato

cprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC 4O64H2O). El
reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira
a rosa cuando se combina con polipptidos de cadena corta. El Hidrxido
de Potasio no participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalino
necesario para que tenga lugar. Se usa normalmente en el ensayo de
 Biuret, un mtodo colorimtrico que permite determinar la concentracin
de protenas de una muestra mediante espectroscopio ultravioleta-visible
a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu 2+).
MATERIALES Y/O REACTIVOS
Material de vidrio

Tubos de ensayo

Gradillas

Esptulas

Pipetas 1,5 y 10 ml

Mallas de asbesto

Papel filtro

Embudos

Agitador de vidrio

Erlenmeyer 100 y250 ml

Vasos de precipitado 250 y 500 ml

Probeta 100ml

Pinzas para tubos en madera

Vidrios reloj grandes

Mortero con mango

Soporte para embudos

Pinzas para tubos de ensayo metlicas

Vasos de precipitado de 1000 y 600 ml plstico.

Material biolgico y otros

Alimento de origen vegetal o animal: concentrados, protena crnica,

hgado, huevo, etc.

Tapabocas

Libros de bioqumica
 Marcador de vidrio

Cinta para rotular

Cuaderno de laboratorio

Bata blanca

Reactivos

Reactivo del milln

Agua destilada, solucin de CuSO4 1%

Solucin de NaOH 30% y 40%, solucin saturada de NaCl

HNO3 concentrado, cristales de sacarosa

HCl concentrado, cido tricloracetico 10%

Solucin cidopcrico saturada, etanol 95%

Solucin de (NH4SO4) al 50%, acetona

Solucin de acetato de plomo 0.5%

Reactivo de Sakaguchi, cido actico glacial

HSO4 concentrado, cido actico al 30%

Aminocidos: glicina, tirosina, triptfano, aminocidos, azufrados, leucina.

Ninhidrina (2g/l) preprese en fresco, hidrxido de amonio

cido sulfanilico (10g/l en solucin de HCl 1 mol/l)

Nitrito de sodio, carbonato de sodio.

Acetato de plomo, nitrato de mercurio

Nitro prusiano de sodio (20 g/l), preprese fresco

Alfa-Naftol, agua de bromo

cido fosfrico, Molibdato de sodio

Tungsteno de sodio, sulfato de cobre, nitrato de sodio

Equipos
 Estufas (5)

PH metro (1)

Centrifuga

Balanza analtica

Termmetro 120C

Mecheros

Espectrofotmetro

Seguridad Industrial
Sulfato de cobre: No combustible en caso de incendio se desprende humo o
gases txicos e irritantes. Produce tos, dolor de garganta, enrojecimiento, dolor
abdominal, sensacin de quemazn, nauseas, diarrea, shock o colapsos,
vomito.
Hidrxido de sodio: No combustible, el contacto con la humedad o el agua
puede generar suficiente calor puede producir el inicio de sustancias
combustibles.
cido Ntrico: No combustible, pero facilita la combustin de otras sustancias.
En caso de incendio se desprende humos o gases txicos e irritantes.
Acetato de Plomo: Tos, enrojecimiento, dolor de garganta
cido clorhdrico: Corrosivo, sensacin de quemazn, tos, dificultad
respiratoria, jadeo, dolor de garganta.
Etanol: Altamente inflamable, las mezclas vapor / aire son explosivas.
Acetona: Altamente inflamable, las mezclas vapor/aire son explosivas
cido sulfrico: No combustible, muchas reacciones pueden producir incendio
o explosin, desprende humos.
cido actico: Inflamable, el calentamiento intenso puede producir aumento de
la presin con riesgo de estallido.
Hidrxido de amoniaco: No combustible, sensacin de quemazn, tos,
dificultad respiratoria,, jadeo, dolor de garganta.
cido sulfanilico: Combustible, labios o uas azulados, piel azuladas, tos,
vrtigo, dolor de cabeza, dificultad respiratoria, dolor de garganta.
Nitrato de sodio: Peligro de fuego en contacto con otros combustibles, toxico
por ingestin, muy toxico para los organismos acuticos.
Nitrato de mercurio: Por inhalacin causa irritacin en las vas respiratorias,
causa dolor de garganta, tos, dificultad para respirar, en contacto con la piel
puede producir irritacin.
cido fosfrico: Es muy corrosivo y puede producir quemaduras
PROCEDIMIENTO DE LA PRACTICA
PRUEBAS CUALITATIVAS

Obtencin de extractos

Solucin clara de huevo, haga un orificio en un extremo del huevo, vierta

la clara en un vaso precipitado, dejando dentro la yema, agregue a la
clara 100 ml de agua destilada y agite con el fin de disolverla.
MARCHA DE LA PRACTICA

1. Extracto PRUEBA DE BIURET 2. NaOH al 30%,

problema 2ml.

3. Mezclar y aadir gota a gota sulfato cprico al 1%, agitado despus de cada
adicin, hasta aparecer color violeta, azul o amarillo. El color violeta indica la reaccin
positiva.

REACTIVO DE MILLON

REACTIVO DEL MILLON

Extracto problema 2ml. Reactivo del milln 0.5 ml.

REACTIVO XANTOPROTEICO

3. Mezclar, calentar al bao mara y observar, adicionar

solucin de NaOH al 40% lentamente sin agitar y observar.

PRUEBA DE LIEBERMAN

1. Extracto PRUEBA DE 2. Cristales de

problema LIEBERMAN sacarosa una pizca
2 ml.
 3. HCl concentrado 5ml.

4. Calentar a ebullicin por 5 a 7 minutos.

GRUPA SH

1. Extracto GRUPOS SH 2. Hidrxido de sodio

problema al 40% (NaOH), 1 ml.
2ml.

3. Acetato de plomo al 0.5%, 1 ml.

Mezclar bien, calentar en llama por 4 min.

Mezclando continuamente y observar.

REACCCION DE SAKAGUCHI

1. Extracto REACCION DE 2. Reactivo

problem SAKAGUCHI Sakaguchi 0.5 ml.
a 2 ml.

3. Mezclar bien y observar.

REACCION DEL ACIDO GLIOXILICO

1. Extracto REACCION DEL ACIDO 2. cido
problema 2 GLIOXILICO actico glacial
ml. 2 ml.

3. HSO4 concentrado, dejar caer lentamente por las paredes del tubo inclinado, hasta que
forme dos capas, observe el cambio de color en la Interface, si se forma un anillo violeta en
la Interface de los dos lquidos, la reaccin se considera positiva.
 REACCION DE NINHIDRINA

REACCION DE LA NINHIDRINA

Extracto problema, ajustar pH a 7.0, 1 ml. Solucin de ninhidrina, hervir a bao mara por 2
min. Observar coloracin.

PRUEBA DE PAULY

1. cido PRUEBA DE PAULY 2. Extracto

sulfanili problema 2 ml.
co 1 ml.

3. Enfriar en hielo

4. Agregar solucin NaNO2 y enfriar por 3 min.

5. Adicionar Na2CO3, anotar colores formados

PRUEBA DE NITRIPRUSIATO

1. Solucin 2. Mezclar con el

de PRUEBA DE extracto
Nitroprusia NITROPRUSIANO problema 2 ml.
to de
sodio 0.5

3. Adicionar Hidrxido de
amonio, reposar por 5 minutos.
0.5 ml.

PRECIPITACION DE PROTEINAS

PRECIPITACION
Extracto problema ACIDICA
2 ml. cido actico al 30%,
0.5 ml. Agite, observe formacin precipitado
(enturbiamiento). Solucin saturada de cloruro de
Extracto problema 2 sodio (NaCl). Mezclar y calentar por 1 minuto. Extracto problema
ml. Presenta enturbiamiento +o- intenso, se observa 2ml.
grumos en las paredes. Observe el tubo en fondo cido tricloroacetico
Acido pcrico
oscuro al 10% , 2ml.
saturado 1 ml.

Agite y observe Agite y observe

formacin precipitado formacin
SOLVENTES ORGANICOS

SOLVENTES ORGANICOS

Extracto problema 2 ml.

Extracto problema 2ml.
Etanol al 95% 2 ml.
Acetona 2 ml.
Observe formacin del
Observe formacin de precipitado
precipitado (enturbiamiento)
(enturbiamiento)

SULFATO DE AMONIO

1. Extracto problema SULFATO DE 2. Solucin de sulfato de

2 ml. AMONIO amonio al 50%, 2 ml.

3. Mezclar, dejar en reposo 10 min. Observe si forma precipitado.

Centrifugar a 3000 r.p.m. por 10 min., observar. La reaccin positiva se
manifiesta por formar precipitado, dependiendo de la concentracin de
albumina presente en la muestra.

DESNATURALIZACION POR CALOR

DESNATURALIZACION POR CALOR

 1. Extracto problema 2 ml.

2. Caliente agua durante 10 min. Asegurndose que la

temperatura interna llegue a 95 - 100 CC. Observe formacin
de precipitado (enturbiamiento).

METALES PESADOS

1. Extracto METALES PESADOS 2. Gotas del metal, 5

problema 2ml. gotas

Calentar suavemente a bao

mara si no observa reaccin
inmediata.

.PRACTICA 2
FRACCIONAMIENTO DE PROTENAS EN SENMILLAS DE LEGUMINOSAS Y
CEREALES POR SULUBILIDAD

OBJETIVO

Que el estudiante compruebe la teora con la prctica en relacin al

comportamiento segn la solubilidad de protenas.

Que el estudiante obtenga las fracciones de albmina, globulinas,

prolaminas y glutelinas a partir de tejidos biolgicos.

Que el estudiante calcule mediante espectrofotometra, la concentracin

de protenas en cada una de las fracciones anteriores.

FUNDAMENTOS TEORICOS
Las protenas: Las protenas pueden formar soluciones estables debido a las
cargas de hidratacin de las molculas de protena y a las cargas elctricas que
ellas poseen.
La solubilidad de las protenas es la resultante de dos fuerzas que se oponen, la
atraccin de molculas de solvente por las molculas de protenas promueve su
mantencin en solucin, en cambio la traccin de molculas de protenas entre
s tiende a evitar su disolucin, es decir las protenas tienden a ser solubles
cuando tienen una carga neta (a valores de pH por encima o por debajo de sus
puntos isoelctricos. En cambio s se mezclan macromolculas cargadas
positiva y negativamente, la atraccin electrosttica hace que tiendan a
asociarse unas con otras.
El estudio de los factores que afectan la solubilidad de las protenas, ha
permitido idear gran cantidad de mtodos para precipitar estas sustancias de
sus soluciones. Estos mtodos tienen su principal aplicacin en la
desproteinizacin de los diversos fluidos biolgicos (sangre, orina, lquido
cefalorraqudeo, etc.) en los cuales se hace necesaria su interferencia en la
determinacin de otras sustancias presentes en estos medios.
Clasificacin de Osborne de las protenas, por el criterio de solubilidad
La clasificacin comnmente usada no se basa en aspectos estructurales de
stas sino
Principalmente en su solubilidad frente a diferentes solventes.
Desafortunadamente entre los grupos clasificados no existe un lmite fijo, pero
de todas maneras permite el fraccionamiento de las protenas provenientes de
una misma fuente. Segn Osborne, las protenas vegetales pueden clasificarse
segn su solubilidad en: albminas, globulinas y glutelinas. Las albminas
corresponden al grupo de protenas que son solubles en agua destilada y en
soluciones salinas diluidas.
Las globulinas son insolubles (globulinas) o muy ligeramente solubles en agua
destilada pero son solubles en soluciones salinas diluidas. Con base en las
propiedades de solubilidad no es posible distinguir entre albminas y
seudoglobulina.
Si se aplican los conceptos de precipitacin por salado, se observa que las
globulinas precipitan en soluciones de sulfato de amonio del 50% de saturacin,
mientras que las albminas lo hacen a concentraciones mayores del 75% de
saturacin. Estas precipitaciones son mejores si se hacen a pH cercanos a sus
puntos isoelctricos.
Las prolaminas son insolubles en agua pero se disuelven en soluciones acuosas
de alcoholes de bajo peso molecular, en concentraciones entre el 50 y el 90%.
Las glutelinas son insolubles en los solventes anteriores pero se solubilizan en
soluciones diluidas de cido o base.

MATERIALES Y/O REACTIVOS

 Vaso de precipitado de 50 ml

Mortero con mango

Esptula

Vidrio de reloj

Vaso de precipitado de 600 , 250, 500 ml

Vaso de precipitado de plstico de 1000 , 600 ml

Agitador de vidrio

Pipeta de Pasteur

Probeta de 100 ml

Embudo y soporte

Erlenmeyer de 250 y 50 ml

Tubo de ensayo

Gradillas

Pipetas de 1 , 5, 10 ml

Pinzas para tubo de ensayo

Harinas de diferentes cereales y leguminosas

Reactivos de folin

Sulfato de cobre

Tartrato sdico de potasio

Carbonato de sodio

Hidrxido de sodio

Cloruro de sodio

etanol

reactivo de biuret
 PROCEDIMIENTO
Pasar 2 gramos de la
muestra en un tubo de
ensayo agregar 1 ml de
agua agitar manualmente
durante 10 minutos vaciar la
solucin en un baln aforado
de 250 ml agregar de nuevo
10 ml de agua y repetir el
proceso.
Despus de repetir el
proceso verter en el mismo
baln aforado y completar
la solucin con agua.
PRACTICA DOS
Mtodo de Biuret:
Sobre cada uno de los extractos que
contienen las diferentes fracciones cada
grupo procedera la determinacin de
protenas, aplicando el mtodo de Biuret.
La curva de calibracin se har utilizando
como patrn una solucin de albmina de
huevo de
Concentracin conocida.
Para las muestras de soya, arveja y frjol, de
las fracciones de albminas y glutelinas
deber
Tomarse para cada una y por aparte, una
alcuota de 0,5 ml y llevarse a un volumen de
5 ml (dilucin n 1 a 10) con agua
Volver a realizar el proceso pero
agregndole cloruro de sodio y
llevarlo a un baln
 .

Mtodo de Folin- lowry: Para hallar la

concentracin del
Preparacin de los reactivos: patrn en mg/ml,
1. Solucin alcalina de carbonato de sodio debe realizar el
(Na2CO3 20 g/l en NaOH 0.1 mol/l).Se respectivo anlisis
debe preparar primero el NaOH al 0.1 M y de la
luego el carbonato se debe disolver en Concentracin de
este, preparar 200 ml. la solucin patrn:
0.25 mg/ml y el
2. Solucin de sulfato de cobre tartrato-
volumen que se
sdico potsico: Preparar una solucin de
toma de la
sulfato decobre SO4Cu en tartrato
solucin
sdicoPRACTICA
potsico 10 NO.
g/l) preparar de
3: ENSAYOS ENZIMTICOS CUALITATIVOS
Patrn.
esta solucin 300 ml.
5. Con los valores
3. El da de la prctica se debe
Objetivos
preparar la solucin salina: mezclar

Que el estudiante entienda el papel de las enzimas como catalizadores

de los diferentes procesos bioqumicos y su importancia en los diferentes
procesos metablicos.

Que el estudiante analice mediante reacciones cualitativas la actividad

enzimtica de la sacarosa y alfa-amilasa.

Que el estudiante establezca relaciones entre la estructura y la funcin de

las enzimas y prdida de esta al variar al variar su temperatura ptima de
trabajo.
El estudiante como parte de su autogestin en el desarrollo de su aprendizaje
autnomo, se servir investigar antes de la prctica y a manera de pre informe
los siguientes temas, enfatizando en la reacciones qumicas que tienen lugar y el
principio del mtodo:
Solubilidad y precipitacin de las protenas.

La solubilidad de una protena est influenciada por los siguientes factores: (a)
su composicin en aminocidos (una protena rica en aminocidos polares es en
general ms soluble que una rica en aminocidos hidrofbicos); (b) su estructura
tridimensional (las protenas fibrosas son en general menos solubles que las
globulares); (c) el entorno de la propia protena.
MATERIALES Y/O REACTIVOS
Material de vidrio

Vaso precipitado de 50 ml

Mortero con mango

Esptula

Vidrio reloj

Vaso precipitado de 600ml, 250 ml, 500 ml,

Vaso de precipitado plstico de 1000 ml, 600 ml

Agitador de vidrio

Pipeta Pasteur

Probeta de 100 ml.

Embudos y soporte

Erlenmeyer 250 ml, 50 ml,

Tubos de ensayos

Gradillas

Pipetas 1, 5, 10 ml.

Pinzas para tubos de ensayo

Pinzas de madera para tubos de ensayo

Material biolgico

Levadura granulada comercial (no sirve pulverizada)

Solucin saliva

Reactivos

Acetona 300 ml

Agua destilada
 Solucin de sacarosa al 5%, 100 ml.

Reactivo de Fehling

Hielo

100 ml. TCA al 10%

200 ml Solucin de almidn 2%

100 ml de KCL al 1.0%

100 ml de solucin de lugol

50 ml solucin acido tartrico al 1%

50 ml de solucin de NaOH al 0.1 N

50 ml de solucin de NaOH al 0.5 N

50 ml de cido clorhdrico al 10%

100 ml de solucin glucosa al 5%

Reactivo de selliwanoff

150 ml de cido tartrico al 1%

150 ml de NaOH 0.1 M

Solucin de HCl al 5% solucin de NaOH al 5%

Hielo y agua caliente

Equipos

Estufa a 38C

Balanzas (5)

Estufas (4)

Mallas (4)

Termmetros (4)

Bao termosttico a 38C previamente

 Papel filtro (5 para cada grupo)

PH metro (2)

PROCEDIMIENTO
Experimento No. 1
SACAROSA

LA SACARASA Extraccin de la enzima

Tome 17 gr de levadura granulada en Vierta el filtrado en vaso precipitado y agregue 50

un mortero y tritrela, reducida a polvo,
psela a un vaso precipitado con 100
ml de agua destilada y agite 10 min.
Filtre en papel filtro en embudo.
ml de acetona, mezcle y djela 10 min. Decante
parte del lquido cuidando de no perder el
precipitado esta enzima su crasa, coloque en hielo
para evitar desnaturalizacin, marque como
solucin de enzima.

ACTIVIDADD ENZIMATICA

ACTIVIDAD
1. Solucin ENZIMATICA
de 2. Agua
enzima 3 Enzima hervida destilada 3 ml
ml

3. Disuelva el precipitado y lleve a ebullicin a

95C por 10 min a bao mara
 4. Deje enfriar, adicionar sacarosa
en solucin fresca 2 ml.

5. Colocar el tubo a 38C durante 30 min. Realizar

prueba de Fehling

PRUEBA DE FILHLING

1. En un tubo PRUEBA DE FEHLING

2. En un tubo
colocar solucin de
colocar solucin B
A. Fehling 1ml
de Fehling 1ml

3. Agua destilada 3ml

4. Solucin enzima
hervida

5. Colocar el tubo en una solucin de agua hirviendo

por 5 a 10 min. Observar

SELIWANOFF

1. Enzima SELIWANOFF 2. Reactivo de

hervida 5ml. selliwanoff 5 ml.
 3. Caliente a bao mara Y Observar

ACTIVIDAD ENZIMATICA

ACTIVIDAD ENZIMATICA 2. Agua

1. Solucin de
destilada
enzima 3ml. Enzima cruda
3ml

3. Adicionar sacarosa.

4. Realizar prueba de Fehling

5. Colocar en tubo a 38C durante 30 min.

PRUEBA DE FEHLING

2. En un tubo
1. En un tubo PRUEBA DE FEHLING coloque solucin B
coloque solucin de Fehling 1ml
A de Fehling 1ml

3. Agua
destilada 3 ml

4. Repita la prueba de Fehling usando solucin de

enzima cruda glucosa al 5%. Observar

5. Solucin enzima hervida 3ml, coloque el tubo en solucin

de agua hirviendo por 5-10 min. Observar

SELIWANOF
2. Reactivo de
1. Enzima SELIWANOFF selliwanoff 1ml.
cruda 3ml caliente a bao
mara, observe
 3. Repetir procedimiento pero
colocar fructuosa al 5%

4. Observar los dos tubos si hay formacin color rojo indicativo

cetosas, fructosa proviene de la hidrlisis de la sacarosa

2. Experimento No. 2:
-amilasa

- amilasa
Obtencin de la enzima

1. Recolectar muestra de saliva para obtener 2. Adicione a la saliva 10 ml de agua

solucin de enzima, enjuague con agua de destilada y mezcle, filtre y rotule el
bolsa y proceda a recoger en un beaker de Erlenmeyer como Solucin de Enzima -
50 ml aprox. 10 ml de saliva amilasa, incube a 37 - 38C.

Experimento No. 3:
Degradacin enzimtica de polisacridos

1. Colocar 30 ml solucin almidn, 2 gotas

saliva en tres tubos de ensayo, marcados, A,
B, C.
Determinar el pH en cada tubo, utilice pH
metro.
Agregue al tubo A 1.0ml de HCl al 5%, al B
1.0ml de NaOH 5%, C 1.0ml de agua
Prepara bao mara a 37C, colocar los tres
tubos de ensayo durante 10 min.
2. Retirar los tubos de ensayo del
bao mara, aadir 5 gotas de lugol
a cada uno, registrar cambios.
En otros tres tubos de ensayo
marcados D, E,F, adicione 3ml de
lugol y 2 gotas de saliva.
Durante 10 min colocar tubo D en
hielo, tubo E bao mara 37C, tubo
F agua hirviendo. Retirar y agregar 5
gotas de lugol a cada uno.
PRACTICA 4
ESTUDIO CINETICO DE LA UREASA
OBJETIVO

Que el estudiante entienda el papel de las enzimas como catalizadores

de los diferentes procesos bioqumicos y su importancia en los diferentes
procesos metablicos.

Que el estudiante evale la capacidad enzimtica de la ureasa frente a

cambios de pH, concentracin de enzima y temperatura
MATERIALES Y/O REACTIVO

100 gr de habas verdes

100 gr de frijol verde

100 gr de habichuela verde

100 gr de frijol de soya

Hoja de papel milimetrado, regla, borrador y lpiz

Buffer de fosfato

Solucin de urea al 0.05 M

Solucin de cloruro de mercurio al 1%

Indicador de tashiro

Solucin de cido clorhdrico al 0.1 N

Solucin de cloruro de sodio al 1%

Solucin de fenol
 Hidrxido de sodio

Vidrio de reloj

Vaso de precipitado

Baln aforado

Agitador de vidrio

Tubo de ensayo

Pipeta probeta

Bureta

Pinzas

Soporte

PROCEDIMIENTO

Para la extraccin Transferir la

sobrenadara a un baln Para el mtodo 1 se
de ureasa pesar
aforado; lo que quedo preparan 5 tubos de
5 gr de la
en el Erlenmeyer se ensayo pro cada serie; los
muestra pasarla a
realiza el anterior primero 5 tubos servirn
un Erlenmeyer y
procedimiento. Reunir como blanco y los otros 5
agregarle 10 ml
las dos soluciones en el tubos se utilizaran para
de cloruro de
baln aforado y tomar el pH.
sodio y agitarlo
por 15 minutos completar con 25ml de
cloruro de sodio y
Para extraer la
dejarlo en hielo
enzima se pesa 0,5gr
de materia vegetal se
Se le agrega a cada
coloca en un mortero
tubo los indicadores
con 20 ml de cido
Se colocan doce tubos y se despus se incuban al
clorhdrico y se
marcar se les adiciona los terminar este proceso
macera se realiza la
indicadores (ureasa, HCL, se le adiciona a cada
extraccin por 15
entre otros) se mezclan bien tubo tres gotas de
minutos y despus se
y se coloca en un bao a tashiro y se titula con
realiza los pasos que
temperaturas entre 50 o cido clorhdrico
se hicieron en el
68C primer mtodo
Para el mtodo 3
este se har en dos
sesiones para la
primera se har lo
Se coloca la solucin en 5
que se realiz en el Para la segunda sesin se har
tubos se mezclan bien y
primer mtodo o el proceso de ser pesara 5 gr de
se colocan en un bao
sea que se repetir urea y se coloca en un
despus se deja enfriar y
el anterior mtodo Erlenmeyer se le adiciona NaCl
se colocan la solucin de
y luego se pasa a un baln
cada tubo en un
aforado se repite el proceso con
Erlenmeyer se titula con
lo quedo y se completa con 20
HCl y se compara con las
ml de NaCl
otras titulaciones

PRACTICA No. 5: DETERMINACION DE VITAMINA C

OBJETIVO

Que el estudiante reconozca presencia de vitamina C en diferentes

muestras de alimentos.

Que el estudiante cuantifique el contenido de Vitamina C en las muestras

analizadas y comparar su valor con datos tericos.

Que el estudiante establezca la importancia biolgica de la vitamina C en

los procesos metablicos.

MATERIALES Y /O REACTIVOS
Material de vidrio

Gradilla

Tubos de ensayo

Pipetas de 5 y 10 ml

Tapones de caucho
 Probetas de 100ml

Material biolgico

Jugo de naranja, limn, tomate, zanahoria y durazno

Tabletas de vitamina C

Reactivos

Solucin de almidn al 5%

Lugol

2-Nitroanilina 0,16% en actico-HCl

Nitrito de sodio 0,08% en agua

Etanol 96%

Acido oxlico 0,15% y solucin de vitamina c recin preparada al 0,2

mg/ml.
Equipos

Termmetros

Papel indicador

Espectrofotmetro

Mecheros

Mallas

PROCEDIMIENTO
FORMA CUALITATIVA

1. Disolver 0,5 3. Identifique 5 tubos con A, B, C, D, E

2. En tubo de ensayo adicionar 2.0 ml
gr. de almidn
de solucin almidn y 1.0 ml de lugol.
en 10.0 ml de
Adicione tableta de vitamina C,
agua
registre lo observado, la decoloracin
de la mezcla es indicacin de la
vitamina c, tenga en cuenta este
resultado.
coloque en cada uno 1.0 ml de solucin
de almidn y 1.0 ml de lugol. Aada gotas
de naranja al tubo A, gotas de limn tubo
B, 1,0 ml de jugo de tomate tubo C, 1.0
ml de zanahoria tubo D y de durazno al
tubo E Tape los tubos con tapn de
caucho y agite, registre sus
observaciones.
 FORMA CUANTITATIVA

Frutas ctricas tomar 1 ml de jugo Para otras frutas se pesa y macera lo

pesarlo y agregar 4ml de cido
oxlico al 0.15% se mezcla y se filtra
determinacin colorimtrica
P
mejor posible con 4ml de solucin de cido
oxlico al 0,15%. Filtrar y completar con
solucin de oxlico hasta un volumen final
de 5 ml.

PRACTICA 6
AISLAMIENTO DEL ARN EN LA LEVADURA
OBJETIVO

Que el estudiante aprenda a extraer el ARN de los dems componentes

Celulares a partir de la levadura.

Que el estudiante analice , los reactivos con los cuales se separa el ARN

De los dems componentes celulares

Que el estudiante analice la composicin qumica del ARN

MATERIALES Y/O REACTIVOS

gradilla Levadura seca.

 Solucin de fenol termmetros

Tubos de ensayo

Acetato de potasio

Centrifuga

Pipetas de 5 y 10ml

Tapones de caucho

Etanol absoluto

Probetas de 100 ml

Vasos de precipitado de 250,600 ml.

PROCEDIMIENTO
Agite mecnicamente la suspensin
Deje reposar por 15 durante 30 min a T ambiente. Luego
Colocar 30 gr Min. A esta temperatura y Centrifugue
de levadura agregue 160 ml de En fro a 3000 g durante 15 min, para
en120 ml de solucin concentrada de romper la emulsin
agua a 37 c fenol

Con una pipeta Pasteur remueva Agregue Enfre la solucin

cuidadosamente la capa superior Acetato de potasio al en hielo por 1
acuosa y Centrifugue a 10000 sobrenadante hasta hora. Recoja el
g durante 5 min en una centrifuga obtener una precipitado por
refrigerada paraseparar la concentracin final de
centrifugacin en
protenadesnaturalizada. 20g/L y precipite el
ARN aadiendo 2
frio a 2000 g por
5 min.
volmenes de etanol.
Lave el ARN con una mezcla El contenido de ARN en la
de etanol-agua (3:1) , luego levadura es de aproximadamente
con etanol y finalmente con 4% de su
ter; Peso seco.
Deje secar al aire y pese.

PRACTICA No. 7
AISLAMIENTO Y DETERMINACION DE ACIDOS NUCLEICOS

OBJETIVOS

Reconocer la presencia de ARN y ADN en los tejidos biolgicos

Analizar, mediante reacciones cualitativas coloreadas de ADN y ARN en

tejidos biolgicos.

Establecer relaciones entre la estructura y la funcin de ARN y ADN en

los procesos metablicos.

MATERIALES Y/O RECTIVOS

Materiales de vidrio

Balanza, esptula, vasos de precipitado de 600 y 250 ml

Probeta de 100 ml, pipeta de 25 y 10 ml, agitadores de vidrio

Tubos de ensayo, tubos falcn de 15 ml

Tampn + detergente: NaCl 0,14 M, acetato magnsico mM, KCl 5mM,

dodecil sulfato sdico (SDS) al 1%

Material biolgico

Levadura seca
 Hgado de ternera

Cebolla cabezona fresca

Detergente lavavajillas, sal, zumo de pia o papaya

Reactivos

Solucin de fenol

Acetato de potasio

Etanol absoluto

ter etlico, alcohol de 96 muy frio

Fenol / cloroformo/ isoamilico (25:24:1)

Acetato sdico 3M pH 5,2

Tampn tris- EDTA: tris 10 mM, EDTA 1 mM, pH 7,5

Equipos

Balanza analtica

Termmetros

Centrifuga

Espectrofotmetro

Batidora 1. Agregar acetato de potasio al

sobrenadante hasta obtener una
concentracin final de 20 g/l y precipite
el ARN aadiendo 2 volmenes de
1.PROCEDIMIENTO
Suspenda 30 gr de levadura seca en etanol.
120ml de agua a 37C
ISLAMIENTO DEL ARN EN LEVADURA 2. Enfri la solucin en hielo por 1 hora.

2. Deje reposar por 15 min a esta 3. Recoja el precipitado por centrifugacin

temperatura y agregar 160ml de
AISLAMIENTO ARN EN LEVADURAen frio a 2000 g por 5 min.
solucin
DEL
concentrada de fenol.
3. Agitar mecnicamente durante 30 min a 4. Lave el ARN con una mezcla de etanol-
T ambiente. Luego centrifugue en frio a agua; luego con etanol y finalmente con
3000 gr durante 15 min. ter; deje secar al aire y pese.
5. El contenido de ARN en la levadura es
4. Con una pipeta Pasteur remueva la capa de aproximadamente el 4% de su peso
acuosa, centrifugue a 1000 gr durante 5
seco
min en centrifuga refrigerada para
separar la protena desnaturalizada
 AISLAMIENTO Y DETERMINACION DE ACIDOS NUCLEICOS

1. En tubo de vidrio de fondo redondo 1. Centrifugar a 3500 rpm durante 5 min y

AISLAMIENTO Y DETERMINACION DE ACIDOS NUCLEICOS
tomar 0,1-0,2 gr de hgado, pesarlo y separar con cuidado la fase acuosa.
anotar su peso hmedo. 2. Aadir 1/10 de volumen, de fase acuosa
2. Desmenuzarlo con una varilla de vidrio recuperada, de acetato sdico 3M pH 5,2
y aadirle 10 veces el peso hmedo y mezclar.
de tampn salino + detergente. 3. Aadir gota a gota 2.5 volmenes de fase
3. Transferirlo a un tubo falcn de 15 ml. acuosa de etanol absoluto.
Aadir el mismo volumen de 4. Al aadir el etanol el DNA precipita en
fenol/cloroformo/alcohol isoamilico que forma de ovillo si no aparece incubar 5 min
se halla aadido de tampn salino con en hielo. Centrifugar a 3500 rpm, 5 min y
detergente. re suspender el precipitado de cido
4. Agitar vigorosamente nucleico en 2 ml de tampn tris/EDTA pH
7.5.
 EXTRACCION DEL ADN DE UNA CEBOLLA

1. En vaso agua agregue 3 cucharaditas de detergente lavavajillas y una de

sal aadir agua destilada llenar vaso.

2. Mezcle solucin con cebolla y licua a velocidad Max. 30 seg, filtrar liquido
con filtro de caf. Llenar hasta un vaso cristal con disolucin filtrada.
3. Aada 3 cucharaditas de caf, zumo pia o papaya y mezcle.

4. Aade un volumen de alcohol frio equivalente al del filtrado, haciendo

resbalar por las paredes del vaso para formar una capa sobre el filtrado.

5. Deja reposar de 2 a 3 min para formar zona turbia entre las dos.

PRACTICA No. 8: PROPIEDADES FISICO QUIMICAS DE LOS

CARBOHIDRATOS.
OBJETIVOS

Que los estudiantes reconozcan los monosacridos como unidades

estructurales de polisacridos, como la celulosa, almidn y glucgeno y
su importancia en los diferentes procesos metablicos.

Que el estudiante analice mediante reacciones cualitativas coloreadas la

presencia de monosacridos y la presencia del enlace glucocsidico en
las muestras.

Que el estudiante establezca relaciones entre la estructura y la funcin de

los monosacridos y polisacridos y prdida de esta al variar sus
 propiedades fsicas qumicas.

MATERIALES Y/O REACTIVOS

Material de vidrio

Tubos de ensayo

Vasos de precipitado de 250 y 600 ml

Pipetas de 10 ml

Material biolgico

Trozo de pan

Papa

Reactivos

Solucin de glucosa

Solucin de fructuosa

Solucin de almidn

Solucin de yodo o reactivo de lugol

Solucin diluida de HCl

Alcohol etlico, reactivo de Tollens, reactivo de Fehling A y B

Equipos

Mecheros de gas

Estufas

Termmetros

PROCEDIMIENTO
SOLUBILIDAD
1. Se toma 0.5 gr de azcar en SOLUBILIDAD 2. Repetir los dos pasos anteriores
cada tubo de ensayo, con otros tubos de ensayo pero con
rotulados. alcohol etlico.

3.ada 2 ml de agua a cada tubo de ensayo

agitar 1 min y dejar en reposo 30 segundos.

4. Construya un cuadro donde cualifique cuantitativamente el

grado de solubilidad de las diferentes muestras.

PRUEBA CON LOS REACTIVOS DE TOLLENS Y FEHLING

PRUEBA CON LOS REACTIVOS DE TOLLENS Y FEHLING

1. Realice montaje a bao

mara y caliente a 60.
2. Prepare soluciones de
cada azcar al 10%.
Tome 0.1 ml de cada
solucin y llvela a
diferentes tubos de
ensayo, rotulados.
1. Verifique T en bao mara a
60C, coloque dentro un vaso de
precipitado los diferentes tubos y
llvelos al bao mara por 5 min.
2. Repita los pasos 2 y 4 pero
utilice 0.5 ml del reactivo A de
Fehling y 0.5 ml del reactivo B.

3. Tome 2.0 ml de solucin

POLISACARIDO
sacarosa y agregue 3 o 4 gotas de
3. Adicione 1.0 ml del solucin diluida de HCl Agite y
reactivo de Tollens a
caliente suavemente por 1 min.

1. Prepare solucin concentrada de almidn en agua, caliente

hasta formar engrudo deje en reposo hasta enfriar, aada 2
gotas de solucin de yodo o reactivo de lugol.

2. Repita esta prueba utilizando reactivo de lugol en una

PRACTICA No. 9: HIDRLISIS DE POLISACARIDOS, METODO DEL
REACTIVO 3,5 - DINITROSALICILATO

OBJETIVO

Que los estudiantes comparen tres mtodos de hidrlisis de

polisacridos, determinando la cantidad de azcar reductor formado
mediante la reaccin de la glucosa con 3,5-dinitrosalicilat de sodio.

Que los estudiantes reconozcan los productos de hidrlisis de

Polisacridos.

Que los estudiantes cuantifiquen la concentracin de glucosa residual

como producto de las hidrlisis cida, enzimtica por el Mtodo 3,5-
dinitrosalicilato de sodio del almidn y celulosa.

MATERIALES Y/O REACTIVOS

Materiales de vidrio

Tubos de ensayo

Vasos de precipitado de 1000, 600, 50 ml

Pipetas de 10 ml, probetas de 100 ml, agitadores de vidrio

Material biolgico

Saliva

200 g de maicena

Reactivos

Solucin de almidn soluble ( 6mg/ml) en buffer fosfato de sodio 0.02 M

PH 6.9
 NaOH 4N, HCl 4N. NaOH 20%

Reactive 3,5-dinitro salicilato de sodio: (disolver 5 g de cido 3,5-dinitro

saliclico en 100 ml de NaOH 2N, calentar. Por separado, adicionar 150 g
de tartrato de sodio y potasio a 250 ml de agua calentar. Mezclar las dos
soluciones y completar a 500ml)

Buffer fosfato de sodio 0.02 M PH 6.9 en NaCl 0.005 M.

Reactivo de Lucas. (134 g de ZnCl2 en 89 de HCl concentrado).

Equipos

Espectrofotmetro

Balanza

Centrifuga

Procedimiento
HIDRLISIS ACIDA

HIDRLISIS ACIDA

PASO 1.Rotular 8 tubos de ensayo agregando en orden los siguientes reactivos:

PASO 2. Solucin de almidona, agua destilada, NaOH 2.4 N, HCl 4N
PAS 3. Colocar los tubos a baos Mara a ebullicin. Finalizado tiempo sacar los tubos y
detener la hidrolisis agregando NaOH 2.4N y reactivo 3,5-dinitrosalicilato.
PAS 4. Introducir los tubos a bao de ebullicin durante 5 min, enfriar y agregar 7 ml de
agua destilada. Agitar y medir transmitancia a 540 nm.
HIDROLISIS ENZIMATICA

HIDRLISIS ENZIMATICA

PASO 1.Recoger 2 ml de saliva en un vaso de precipitado, diluir5l tomando 0.3 ml de

saliva y 19.7 ml de buffer de fosfato de sodio PH 6.9 en NaCl 0.0005 M.
PAS 2. Rotular 8 tubos de ensayo agregando los siguientes reactivos: solucin
almidn, agua destilada, saliva diluida. Adicione la saliva a 2 tubos y agregar el reactivo
3,5-dinitrosalicilato, agitar todos los tubos y dejar a T ambiente.
PASO 3.Luego de terminar la incubacin agregar reactivo 3,5-dinitrosalicilato, colocar
todos los tubos en bao a ebullicin durante 5 min, enfri y agregue 8 ml de agua
destilada.

HIDROLISIS ACIDA DE LA ELULOSA EN PRESENCIA DE ZnCl 2

HIDROLISIS ACIDA DE LA ELULOSA EN PRESENCIA

DE ZnCl2

PASO 1. Colocar en una capsula un trozo de algodn o papel filtro, agregar 3

ml de reactivo Lucas y calentar durante 3 min agitndolo.
PAS 2. Dejar enfriar y neutralizar con NaOH al 20% si se forma precipitado
centrifugue a 2500 rpm durante 10 min y luego pasar 0,5 ml del sobrenadante a
un tubo.
PRACTICA 10

MATERIALES Y/O REACTIVOS

Vasos de precipitado 200 ml 100 g

hgado fresco de cerdo

Solucin de KOH 30% 50 ml

Balanza analtica (1)

Vasos de precipitado de1000 ml (vidrio y plstico)

Solucin de tricloroacetico TCA10%.

Incubadora

Erlenmeyer 250 ml 50 ml

Solucin saturada deNa2SO4

Centrifuga y tubos

Pipetas de 5 y 10 ml

amortiguadora:

tampn

fosfato sdico 0,02 M;

NaCl 0,005 M pH

Estufas (1)

Agitadores de vidrio

Reactivo de Fehling A y B. Mallas

micro pipetas

Reactivo de tollens.

Probetas 100 ml
 10 ml de tolueno

Vidrio reloj

Reactivo de Benedict

Esptulas

cido actico glacial

Tubos de ensayo

hielo

gradillas

Sacarosa

Pinzas para tubos de ensayo

Lactosa

Tollens

Fehling A y B.

Se calienta en un bao de agua

Pese un Erlenmeyer de 50
ml.Se ponen 3 ml de la
PROCEDIMIENTO
solucin de hidrxido
potsico al 30% en un
Erlenmeyer de 50ml.
Se pesan 8 g de tejido
(aproximadamente) y se
introducen en el Erlenmeyer.
Sepesa este conjunto.
hirviendo, agitando con cuidado para
acelerar el
Proceso, durante 20 minutos (o
hasta su digestin). Se enfra el tubo
una vez
Acabada la digestin.
Una vez enfriado el tubo de se
aaden 0,2 ml de la solucin
saturada de Na2SO4
y se mezclan fuertemente. Reposar
5 minutos.
Procedimiento
Segunda
Centrifugacin:
Se centrifuga de nuevo.
Se aade el sobrenadante a
un tubo de ensayo largo, alque
previamente se han aadido
10 mL de etanol al
95%,desechando el
sedimento de la
centrifugacin. Se deja
Reposar 5 minutos para que
se produzca la precipitacin
delglucgeno.
Tercera
Centrifugacin:
Se traslada la solucin al
tubo de centrfuga
previamentePesado, y se
centrifuga durante 5
minutos Una vez acabada
la centrifugacin se tira el
sobrenadante.
El sedimento obtenido
representa el glucgeno
Prcticamente exento de
sustancias contaminantes.
Secaren la estufa a 35C
hasta su utilizacin.
Adicin de la
Alfa amilasa
Tome cuatro tubos de ensayo y
encada uno agregue
Primera
Centrifugacin:
Se pesan los tubos de
centrifuga.Se pasa la
solucin a tubos de Se precipita el
centrfuga se centrifuga glucgeno que
3000rpm durante 5 est en solucin
minutos. Se desecha el por adicin de 7 m
sobrenadante Se de etanol al 95%.
Aaden 5 ml de la Se agita y deja en
solucin de TCA al 10% al fro en un bao de
tubo y sedisuelve
hielo durante 5
totalmente el sedimento
agitando fuertemente. minutos.
Cantidad de Solucin de
Glucgeno Glucgeno
Se pesa en la balanza De acuerdo a la cantidad
el tubo con el de glucgeno obtenido
glucgeno desecado, hacer lasiguiente relacin:8
Obtenido en la parte mg de glucgeno por 0.5 ml
anterior, y se anota el de solucin tampn fosfato
resultado.( 0,02 M pH 7,0 que
Determinar la cantidad contenga NaCl 0,005 M,
de glucgeno obtenido). De esta manera queda
preparado el glucgeno
para lassiguientes
determinaciones.
Recoleccin
De la alfa Hidrolisis
Amilasa enzimtica del
Recoja 20 ml de alfa glucgeno por la
amilasa salival enzima
Fresca. alfamailasa
Sobre el
Glucgeno
De solucin de glucgeno 1
ml
Solucin de saliva 3
mlIncubar a 37 C por 45
minutosAL cabo del tiempo
adicionar a cacaTubo TCA
(cido tricloroactico `para
Parar la reaccin)
1 ml.Realice las pruebas
respectivas paraDeterminar
los productos de la
Hidrlisis del almidn.
Reactivo de tollens 2ml
Prueba de
FEHLING
Solucin A de Fehling 1
mlSolucin B de Fehling 1
mlAgua destilada 1 ml
Solucin de glucgeno +
enzima 2 mlColocar el tubo
en una solucin deagua
hirviendo por 5- 10 minutos
Prueba de
TOLLENS
Solucin de glucgeno +
enzima 2 mlAgite los tubos y
djelo un bao deagua a 35
C, durante 5 minutosUn
espejo de plata o un
precipitadonegro es prueba
positiva indica lapresencia de
glucosa proveniente de la
Hidrlisis del glucgeno.

REALICE TODAS LAS

Extraccin de
Las enzimas intestinales.
Utilice intestino delgado
(duodeno) de residuo recin
sacrificada (no sirve intestinos de
ms de unda, y estos deben
EXTRACC
refrigerasen (no congelar) en
ION DE elMenor tiempo posible. En caso
LAS de que el Laboratorio no se
ENZIMAS realice inmediatamente se
INTESTIN sacrifique el animal, extraer la
ALES primera porcin delIntestino
delgado (duodeno) y mantngalo
en el
Refrigerador a un tiempo no
mayor de 12 horas a laprctica.
AccinEnzimtica
Solucin de sacarosa recin
preparadaAl 5%5 mlA cada tubo
adicionar enzima cruda 5
mlIncubar a 38C por una
hora.Repetir:Solucin de lactosa y
maltosa recinPreparada al 5%5
mlA cada tubo adicionar enzima
cruda 2 ml
OPERACIONES BAJO
BANO DE HIELO.
Utilice de 10 a 15 cm de duodeno.
Crtelo a lolargo con unas tijeras
provistas de buen corte, laveel intestino
preferiblemente con agua
destilada,crtelo en pedazos
pequeitos y en un mortero,
Tritrelo, en bao de hielo
Recoja el molido en un vaso de
precipitado enbao de hielo y agregue
50 ml de agua destilada y2 gotas de
tolueno. Agite bien. Es aconsejable que
Trabaje hasta aqu lo ms rpido
posible. Agitar.Durante unos 15
minutos y filtre a travs de unatela
limpia, sobre un bao de hielo. En el
lquido,que debe salir claro, estn las
enzimas.
 ACCION
DE LAS
SOLUCION DE
DISACAR
ENZIMA
IDASAS
Mantenga en hielo el tubo de
enzima cruda.

PRUEBA DE
BENEDICT
Reactivo de Benedict
2mSolucin enzimtica 2.0 ml
Bao mara por 5 minutosRepita
el procedimiento para la
siguientesolucin
problema.Repita la experiencia
sobre solucionesde sacarosa y
lactosa.
PRUEBA DEBARFOED
Reactivo de BARFOED 2m, Solucin enzimtica
2.0 ml, Bao mara por 5 minutos
Repita el procedimiento para la siguienteSolucin
problema.Para que sea positivo para
Monosacridos, la coloracin una vezen el bao
mara no debe durar ms de5 minutos. Despus
de los 5 min seconsideran disacridos.

Prueba de PRUEBA DE
Tollens FEHLING
Realice la prueba de Fehling a las
Realice la prueba de tollens a lassoluciones Soluciones enzimticas con los
enzimticas con lossiguientes sustratos: siguientes sustratos: lactosa, sacarosa
lactosa, sacarosa y ymaltosa. De igual forma realice
Maltosa. De igual forma realice patronespara patronespara glucosa, sacarosa,
glucosa, sacarosa, lactosa y lactosa y maltosa.
Maltosa.

PRCTICA 11
RECONOCIMIENTO CUALITATIVO DE LIPIDOS
OBJETIVO

Que el estudiante reconozca los diferentes tipos de lpidos que se

encuentran en los tejidos biolgicos.
Que el estudiante analice los resultados obtenidos en las reacciones
cualitativas, la presencia de algunos de los tipos de lpidos como
fosfolpido, cidos grasos, colesterol y glucolipido en cada una de las
muestras.
Que el estudiante establezca relaciones entre la estructura y La funcin
de las los lpidos y su participacin en los diferentes procesos
metablicos.

MATERIALES Y/O REACTIVOS

Probeta de 100 ml

3 huevos

180 ml de etanol

Estufa y malla

Agitador de vidrio

20 gramos de cerebro fresco de res.

200 ml de ter

centrifuga

Vaso de precipitado de 600 ml

50 ml de KOH 1.5N

Perlas de vidrio

Vaso de precipitado de 1000 ml

50 ml de acetona

Varilla para reflujo

Vaso de precipitado de 600 ml plstico

 50 ml de HNO3

Corchos con orificios

Vaso de precipitado de 1000 ml plstico

Solucin de molibdato de amonio

Microcoscopio (1)

Vaso de precipitado de 50 ml

50 ml de acetona

Plancha de calentamiento

esptula

20 ml de etanol

Papel filtro

Erlenmeyer de 250 ml

20 ml de ter

mechero

Pipetas de 10 ml

Soporte universal y pinzas.

10 ml de acetona

Pinzas para la varilla

refrigerante

10 ml de HNO3

Pinzas para crisol

Solucin de molibdato de amonio

Crisol o cpsula mediana y pequea.

30 ml de acetona

Pinzas de madera

10 ml de HCl
 Embudos

50 ml de NaOH al 30 %

Reactivo Ay B de Fehling

PROCEDIMIENTO

Preparar una solucin de alcohol Lave el residuo con 20 ml de la

ter as: 40 ml de alcohol y 20 ml
de ter. Un huevo, hacer un orifico
en uno de los extremos y a travs
Procedimient
de l deje salir la clara.
o #1:
Luego transfiera la yema a un vaso
reconocimie
de precipitado que contenga una
nto de
mezcla de 40 ml de etanol
colesterol y
y 20 ml de ter, disuelva bien la
fosfolpido a
yema, agitando durante 10
partir de la
minutos, filtre a travs de papel
yema de
filtro y recoja el filtrado en un vaso
Huevo
de precipitado seco.
Prepare una solucin de mezcla de
etanol- ter (2:1), tome 14 ml de
etanol y mezcle con 7 ml de
ter.
mezcla de etanol- ter (2:1).
Evapore a sequedad el filtrado
anterior sobre una plancha de
calentamiento o a bao mara,
cuidando de no dejar quemar el
residuo. Disuelva el residuo en 5
ml de ter y virtalo poco apoco
y agitando en un vaso de
precipitado que contenga 20 ml
de acetona. Se debe formar un
precipitado que generalmente
es fosfolpido. Centrifugue y
recoja el sobrenadante en un
vaso de precipitado de 50 ml. El
precipitado debe recogerlo
guardarlo para la prueba de
fosfolpido

5 ml de alcohol y pasar la solucin

a un tubo de centrifuga y
Enfriar y aadir 20 ml de Reconocimiento de
centrifugar durante 5 minutos.
ter, agita r durante 10 colesterol
Pasar el lquido sobrenadante a
minutos y centrifugar. El Evapore el lquido
otro tubo de centrifuga y aadir
precipitado es jabn, anterior a bao
agua gota a gota hasta que
descartar. Guardar el mara, hasta que se
seforma bastante precipitado.
Sobrenadante que forme una pasta
Dejar en reposo durante 15
contiene colesterol. Agregue 15 ml de
minutos y centrifugar nuevamente
Tome el sobrenadante, Solucin de KOH al
y
evaprelo en un bao de 1.5 N, agite bien y
Decantar el lquido sobrenadante,
vapor, lejos de la llama, transfiera a un
guardar y marcar como
cuando ya quede Erlenmeyer de 250
sobrenadante de colesterol.
Slo el residuo, adicionar ml y deposite en l
Recogerel precipitado.
Perlas de vidrio y
caliente la mezcla a
reflujo durante 20
minutos.
 Reconocimiento de
Fosfoglicridos o
fosfolpido
Utilice el resto del
precipitado. Paselo a un
crisol y caliente sobre un
mechero hasta
Convertirlo
completamente en
cenizas. Disolver el
residuo en 5 ml de agua
destilada y 5 gotas de
HNO3 concentrado,
filtren y agregue al
filtrado 1 ml de solucin
de Molibdato de amonio.
Observe la coloracin y
la formacin de
precipitado.
Procedimiento #2:
extraccin de lpidos del
cerebro
Pese 4 gramos de cerebro
fresco de res. Reprtalos en
dos tubos de centrifuga,
macrelos con ayuda de un
agitador suavemente contra
las paredes del tubo. Agregue
5 ml de acetona, mezcle
Durante 10 minutos,
centrifugue a 3000 rpm por
dos minutos. Decante la
acetona en un Erlenmeyer de
50 ml y colquele el nombre
de extracto I.
Con el residuo, agregue 10
ml de acetona, vuelva a
centrifugar y el sobrenadante
colquelo en elvaso de
extracto I
Coloque el residuo de los
tubos a bao mara por 10
minutos y agrguele 5 ml de
ter, mezcle,centrifugue a
3000 rpm por 1 minuto,
decante el ter en otro vaso
de 50 ml marcado
comoextracto II.
Al residuo adicinele 5 ml de
ter y vuelva a centrifugar y
el lquido depostelo en el
vaso del
Extracto II. Repita
nuevamente la operacin.

Al residuo que queda, agregu 5 ml

de ter, mezcle bien, y centrifugue,
decante el lquido en el
Vaso del precipitado extracto II. Al
residuo adicione, 3 ml de etanol
caliente, mezcle y centrifugue y
decante el etanol en el vaso
De extracto III.
Evapore los extractos II y III, hasta
sequedad. (en bao mara), Tome el
extracto II, adicione 4 ml de etanol
caliente y realice las pruebas para
fosfolpido.
Separacin de los
Extienda en los tubos el residuo
lpidos del extracto II
y squelo a bao mara, una
Evapore a bao mara
vez secos adicione 5 ml de
el extracto II. Agregue
etanol al 97% caliente, mezcle
al residuo 5 ml de
bien, centrifugue a 3000 rpm a
acetona, mezcle bien
2 minutos, decante el etanol en
y
un tercer
Centrifugue por 2 min.
Vaso de 50 ml y marcado como
Decante el lquido en
extracto III. Repita una vez ms
el vaso de extracto I. el procedimiento desde la
adicin de los 5 ml de etanol
caliente.
Prueba para fosfolpido:
Coloque el extracto en una cpsula
de porcelana, evapore el etanol,
contine calentando hasta que el
residuo quede completamente en
cenizas, adicione 5 gotas de HNO3,
y 5 ml de agua destilada, disuelva
bien las cenizas y filtre, al filtrado
adicione 5 ml de Molibdato de
amonio ,
Observe la coloracin y formacin
de precipitados.
Prueba para glucolipido y esfingolipidos
Disuelva el extracto III, en 3 ml de etanol,
calentando para disolverla, agregue 4 ml de agua
y realice: Agregue 1 ml de HCL concentrado, agite
bien, caliente a bao de agua hirviendo por 15
minutos. Deje enfriar y adicinele gota a gota
NaOH al 30% hasta alcalinizar (con tiras de papel
Indicador de pH), realice la prueba de Fehling.

PRACTICA 12
REMPLAZADA POR LA PRACTICA 6
PRACTICA 6 AISLAMIENTO DEL ARN EN LA LEVADURA

OBJETIVO

Que el estudiante aprenda a extraer el ARN de los dems componentes

Celulares a partir de la levadura.

Que el estudiante analice , los reactivos con los cuales se separa el ARN
De los dems componentes celulares

Que el estudiante analice la composicin qumica del ARN

MATERIALES Y/O REACTIVOS

 gradilla Levadura seca.

Solucin de fenol termmetros

Tubos de ensayo

Acetato de potasio

Centrifuga

Pipetas de 5 y 10ml

Tapones de caucho

Etanol absoluto

Probetas de 100 ml

Vasos de precipitado de 250,600 ml.

PROCEDIMIENTO
AISLAMIENTO DEL ARN EN LA LEVADURA

Agite mecnicamente la
Deje reposar por 15 suspensin durante 30 min
Colocar 30 gr Min a esta temperatura y a T ambiente. Luego
de levadura agregue 160 ml de Centrifugue
en120 ml de solucin concentrada de En fro a 3000 g durante 15
agua a 37 c fenol min, para romper la
emulsin

Con una pipeta Pasteur Agregue Enfre la solucin

remueva Acetato de potasio en hielo por 1
cuidadosamente la al sobrenadante hora. Recoja el
capa superior acuosa y hasta obtener una precipitado por
Centrifugue a 10000 concentracin final centrifugacin en
g durante 5 min en una de 20g/L y precipite
frio a 2000 g por
centrifuga refrigerada el
ARN aadiendo 2 5 min.
paraseparar la
protenadesnaturalizada volmenes de
. etanol.
Lave el ARN con una mezcla
de etanol-agua (3:1) , luego
con etanol y finalmente con
ter;
Deje secar al aire y pese.
El contenido de ARN en la levadura es
de aproximadamente 4% de su
Peso seco.
 BIBLIOGRAFIA

Garca, Jerez Alberto (2011). Modulo Bioqumica, UNAD. Acreditador.

Pato Pino, 2008. Bioqumica II, Alfa, Buenos Aires

Principios de Qumica. Editorial Mdica Panamericana.

Pacheco, D. (2001). Bioqumica Estructural y Aplicada a la Medicina.

Instituto Politcnico Nacional.

Flores, J. (2002). Reacciones de Identificacin de Carbohidratos. [Gua de

Estudio]. Caracas: UPEL.

Wades, L. G. (2004). Qumica Orgnica (4 ed.). Madrid: Pearson

Prentice Hall